BE531071A - - Google Patents

Description

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   La présente addition concerne, comme le brevet principal, la purification de la chlorotétracycline, substance antibiotique connue égale- ment sous la dénomination commerciale   "Auréomycine"   qui est, dans certains pays, une marque de fabrique de l'American Cyanamid Company. La chloroté- tracycline est un dérivé naphtacénique qu'on suppose être le diméthyl-amino-1 dioxo-4,6   chloro-10   méthyl-11 pentahydroxy-2,4a,5,7,11 octahydro-1,4,4a,6,
11,11a,12,12a naphtacène carboxamide-3 ou une forme tautomère et peut être obtenue par développement de Streptomyces Aureofaciens dans un milieu de fermentation convenable. En particulier, l'invention concerne un procédé pour séparer la chlorotétracycline des impuretés contenues dans le moût de fermentation. 



   Ainsi qu'il est connu, l'une des grosses difficultés rencontrées dans la production commerciale des antibiotiques, tels que la chlorotétra- cycline, par des procédés de fermentation, réside dans l'extraction de la substance active à partir du milieu de culture (moût de fermentation) dans lequel elle a près naissance. A cet égard il est connu d'alcaliniser le milieu de culture de façon à former un précipité, ou gâteau   (dû   à la pré- sence dans le milieu de culture d'ions solubles de métaux alcalino-terreux, par exemple calcium, baryum, strontium ou magnésium utilisés comme consti- tuants du milieu nutritif pour le champignon, de séparer ce précipité de la liqueur surnageante et d'extraire le précipité au moyen d'un solvant. 



   Dans le brevet principal on a décrit, pour effectuer une telle extraction, un nouveau procédé qui présente des avantages sur les modes opératoires antérieurement connus. Ce procédé comporte les stades suivants: acidification puis clarification du milieu de culture, traitement du milieu de culture au moyen d'un alcali pour former un précipité, séparation dudit précipité de la liqueur surnageante et extraction du précipité au moyen d'isopropanol acidifié. Le stade préliminaire d'acidification et de clarification est essentiel dans ce procédé et a, sur le procédé qui comporte l'alcalinisation directe du milieu de culture et le traitement du précipité résultant au moyen du solvant choisi, l'avantage d'une plus grande économie dans l'emploi du solvant et d'un plus grand degré de pureté dans l'extrait. 



   Selon la présente addition, l'extraction de la chlorotétracycline présente dans un milieu de culture liquide résultant de la croissance de Streptomyces Aureofaciens, est effectué en acidifiant tout d'abord, puis clarifiant ledit milieu de culture, ajoutant au milieu clarifié une quantité d'alcali suffisante pour amener le pH à une valeur comprise entre 6 et 10 d'où résulte un précipité, extrayant ce précipité au moyen de propanol normal acidifié, ou de butanol tertiaire acidifié, séparant l'insoluble de l'extrait alcoolique, ajoutant à l'extrait alcoolique clarifié un chlorure minéral (comme le chlorure de sodium) soluble dans l'eau, mais relativement insoluble dans le propanol normal ou le butanol tertiaire, en quantité suffisante pour former une phase aqueuse et une phase alcoolique,

   séparant la phase alcoolique et traitant celle-ci pour en séparer le chlorhydrate de chlorotétracycline. Le propanol normal et le butanol tertiaire sont particulièrement appropriés au traitement selon   l'addition.   Du fait de leur miscibilité à l'eau ils mouillent bien les solides pendant l'extraction initiale en l'absence de toute quantité substantielle de chlorure minéral ; après l'addition du chlorure à l'extrait alcoolique clarifié, néanmoins, l'eau qui se trouve dans l'extrait se sépare sous forme d'une couche aqueuse, qui contient la totalité des impuretés solubles dans l'eau, la chlorotétracycline restant dans la couche de solvant. Avec un seul solvant. par conséquent, on obtient le double avantage d'une extraction aqueuse et d'une extraction par solvant. 

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  La nature ci:6 l'acide employé dans le stade rlüt.2?c11r  d'acidification n'a vrais±LfJ,¯b] ement pas d'importance critique, nais, rour de.., raisons de commodité et ;'économie, en emploi de préférence des acides ;:ir'3'aU'?- tels que l'acide sulfurique, l'acide chicrhydrique ou l'acide phoR- -::.=-r:..:. Le:. quantit<:'; :.1; la concentration de l'acide doivent être telles o'j'cu obtient un rI i-nf 1 - à. 4 et, de préférence, inférieur à 2; le pH .jjli=.:-i ;-;t environ 1.5. Ce qui Yrëcède est valable également pour l'aciaii2..#l;io:# 1":. solvant .'¯a-¯xctiars. 



  1)Qns le trai tE':!1'.'.':ll";; du milieu clarifié au moyen d'un alcali, le vi u mll -;, izt amené <te préférence entre 7 et 9. Comme alcalis ccnve- 1- - on peut citer par e:.;àx.=1e la souae caustique, le carbonate de sodium 3-r; ::..;"3.r:r:(,niBq:169 On peut utiliser des températures d'extraction comprises entre 
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 . 2t 6Cc. Il est préférable d'opérer à température ordinaire, c'est à aire 1 .mie t5r,:! 8::-'. ture de l'ordre de 20 . A la température préférée, le butancl t0rti':.Í: {-: est un solide et e:ar e=1 conséquence employé sous forme de 'L31ange avec une petite quanTité d'eau, par exemple 10--' en poids, de façon " obtenir un milieu solvant sati5faisant. La quantité de solvant d'extractioK. peut varier dans d'assez larges limites, mais, de préférence, le poids '.'alcool choisi est approxinativenent celui du précipité à extraire. 



   Il est préférable d'isoler la chlorotétracycline sous forme de   son   chlorhydrate, et on a trouvé que ceci peut être réalisé avec   l'élimina-   tion simultanée d'une grande   quantité   d'eau et d'impuretés avant l'isolement final du chlorhydrate, en ajoutant l'extrait alcoolique un chlorure minéral soluble dans l'eau et relativement insoluble dans l'alcool d'ex-   traction.     Un   tel chlorure est par exemple le chlorure de sodium ou le chlo-   rure   d'ammonium.

   Par addition du   chlorure,   l'extrait se sépare en une pha-   @e   aqueuse et une phase alcoolique, cette dernière étant alors séparée, par exemple par décantation, puis, après concentration à un volume substan-   tiellement   plus faible. on laisse cristalliser le chlorhydrate de chlorotétracycline. De préférence, la cristallisation est effectuée en présence 
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 . ' thoxy 2 éthanol. Les exemples suivants montrent consent l'invention reut être 
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 mise en 'or.t.c:vû9 EXtFLE , ¯ 30 litres d'un milieu de culture contenant 960 unités de chlorot;ze:-4-,iacycline par cm3 sont acidifies à un TH de 1,5 au moyen d'acide sul- .:'urique à 25'.. On ajoute C, 5 g cle Supercel Xyflo et on fi7 tre la solution. 



  1:# pr4cicité c:st 1*vé l- plusieurs reprises avec 15 litres d'eau acidifiée 2 tm DR 2. Le filtra.! et les lavages sont réunis et on ajoute une solution w ::.O;. de soud<= caustique jusou's obtenir un pH compris entre 8 et 9. con -i;ute 250 g de Supercel Hyflo, filtre la solution et lave le précipité :..c 3 litres d'6a. 



  Le gâteau aLcaLin résultant est mis en suspension dans 1,5 litrie de prJfa=1ok normal et on ajouta h la suspension une quantité d'acide 'jlfurique à 25âa suffisante 'cur obtenir un pH de 1,5. Après agitation t filtration de la suspension, le précipité est lavé avec 1 litre we jàro- panol normal à 70%. A la solution obtenue, on ajoute, en agitant,   0,4 kg   .¯¯ chlorure de   sodium,-   On laisse reposer la solution et sépare par décantation les deux couches qui se sont formées. La couche aqueuse est extraite à nouveau avec 0,5 litre de proanol, puis on filtre les deux extraits propanoliques. 

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   Après addition de 0,3 litre d'éthoxyéthanol, le filtrat est ccncentré dans le vide à une température d'environ 35 , jusqu'à ce que le volume soit devenu environ 0,2 litre. Après cristallisation, la bouillie résultante est filtrée et lavée avec 20 cm3 d'éthoxyéthanol à 80% et 20 cm3 d'eau. Le produit brut obtenu est mis en suspension dans 50 cm3 d'eau, nuis filtré. L'opération est recommencée et le résidu est finalement lavé au moyen de 20 cm3 d'éthanol. Le produit est séché dans le vide (2 mm de prèssion) à 40 . On obtient ainsi 20 g de chlorhydrate de chlorotétracycline titant 980   -or   par milligramme. 



  EXEMPLE 2. -
En opérant comme dans l'exemple 1, mais en remplaçant le propanol par du butanol tertiaire à 90%, on obtient 18,5 g de chlorhydrate de chlorotétracycline titrant 970   #   par milligramme.

Claims (1)

1. RESUME.

   ------------ L'addition concerne un procédé de purification de la chlorotétracycline caractérisé par le remplacement, dans le procédé du brevet principal, de l'isopropanol par le propanol normal ou le butanol tertiaire.