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Les produits du métabolisme rouges, cristallisés, anti- biotiquement actifs de certaines espèces de strepto- mycetes sont connus sous le nom d'Actinomycine's.
D'après:les recherches de Waksman, le streptomyces antibioticus fournit une Actinomycine A; Todd et ses collaborateurs sont parvenus à isoler des solutions
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de culture d'une autre espèce de streptomyces,
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uné Actinomycine à laquelle ils ont oormê le nom Actinomycine B; Brockmann. et ses collaborateurs ont trouvé comme produit du métabolisme de strejjtomyees chrysoiaallus une autre jictinomycine à laquelle ils .v.i4r donné d'abord le non. Actinochrysine, et ensuite le nom Actiriomycine C (voir , ce sujet le brevet allemand no.
912, Ola du 10 octobre 1949). Brockmann est parvenu à isoler à partir d'autres souches de streptomyces encore deux autres Actinomycines qui ont été désignées sous les noms Actinomycine J et Actinomycine X et qui sont apparemment très voisines -des Actinomycines du type A et 1;.
Bien que des Actinomycines se comportent à la manière de
EMI2.2
substances unitaires vis-à-vis des méthodes classiques de séparation, il est apparu dans l'analyse de partage qu'elles sont toutes constituées'de différents composants. On connaît actuellement toute une série de composants in- dividuels des diverses Actinomycines, lesquels sont iden- tifiés par des indices numériques. C'est ainsi, par exemple,
EMI2.3
que l'Acti2omycine C est constituée essentiellement par les composants C..,' C2J et C3, et les Actinomycines 1"- et L contiennent, elles aussi, outre le composant principal, encore d'autres composants secondaires.
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En dépit de la multitude des combinaisons théoriquement possibles, il est apparu, jusqu'ici, que la composition des différentes Actinomycines est très caractéristique en ce qui concerne leurs composants. Les Actinomycines du type A et B, ainsi que les Actinomycines J et X sont con- stituées essentiellement par un composant principal et en outre par des composants secondaires distincts et caractéristiques, tandis que l'Actinomycine C contient deux composants principaux, C2 et C,, un composant secondaire, C1, et en outre encore des quantités infiniment petites d'autres Actinomycines.
La composition des différentes Actinomycines dépend essen- tiellement de l'espèce de streptomycès-qui a servi à leur production. Les nombreuses souches examinées jusqu'ici peuvent être.divisées en trois groupes distincts, à savoir des souches produisant respectivement le type A et J, des souches formant respectivement le type B et X et finale- ment des souches formant le type 0 (voir à ce sujet H.
Brockmann, Angewandte Chemie, tome 66, 1 , 1954).
Par contre, la composition des Actinomycines n'a pas été influencée dans des proportions notables par la, solution nutritive ,- Dans les essais effectués jusqu',ici on n'était pas arrivé à déplacer essentiellement les composants nor- maux en modifiant la solution nutritive, et encore moins à provoquer la formation de nouveaux composants qui ne fussent pas normalement déjà présents dans le mélange.
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EMI4.1
Diaprés les travaux de 14. Pfennig, Archiv f-or Likrobiolo- gie, tome 18, 327., 1953), il est permis de supposer que le nombre.des différentes .etinomycires recentrées dans la nature n'est pas illimité et que seuls existent quelques types distincts de structure déterminée.
EMI4.2
Conforméme.et à la présente invention, on a trouvé que dans la production d'Actinomycines par culture de souches de fungi choisies dans le groupe des str6p'"'A.lYO' Les capables de former des Actinomycines, on peut influencer la forma- tion des différents composants en ajoutant aux milieux
EMI4.3
nutritifs de culture, des amino-acides individuels corlpre- nant plus de deux atomes de carbone, ou des composés susceptibles d'être convertis en amino-acides de ce typa dans les conditions ,de culture.
Il est fort probable que ces ami-
EMI4.4
no-acides sont incorporés dans la molécule de l'Actinomycine qui, d'après les connaissances actuelles, consiste en un chromophore et une chaîne latérale du type peptide, et que la composition de la chaîne peptide subit une modification lorsque des amino-acides individuels sont présenta en excès très net dans la solution nutritive.
EMI4.5
On avait déjà cultivé des agents générateurs d'ctir.or.r- cines sur des milieux nutritifs contenant dos 81i-i..:,-o-ac:ide.s.
Par exemple, on avait ajouté à la solution YL;.t:C'î L1 : i des.
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substances contenant de la protéine, telles que la farine de fèves 'de Soja et des extraits de levure, et on avait également employé le glycocolle en tant que source d'azote.
Cependant, toutes ces substances ajoutées dans le but d' améliorer la croissance de la souche de streptomyces n'ont pas influencé la composition des différents composants.
On'a constate ce fait inattendu que par exemple par addi- tion de valine a la solution nutritive d'un agent généra- teur d'Actinomycine C, on arrive à supprimer substantielle- ment la formation du c'omposant principal C3 en faveur de la formation du composant C1 et à faire de la sorte d'un composant secondaire un composant principal. De plus, on a fait la constatation encore plus surprenante qu'il est même possible d'obtenir par voie de biosynthèse des Actinomy- cines nouvelles, inconnues jusqu'ici, comme on a pu l'ob- server, par exemple en ajoutant de l'isoleucine à la solu- tion nutritive d'un agent générateur d'Actinomycine,J. A côté de l'Actinomycine I, obtenue jusqu'ici comme composant principal, il se forme dans ce cas toute une série d'Actino- mycines nouvelles et typiques en quantité prépondérante par rapport l'Actinomycine I.
! Le nouveau procédé offre donc la possibilité de préparer à volonté des composants particulièrement désirables en tant que composants principaux, ou bien de produire aussi des Actinomycines nouvelles, inconnues jusqu'ici, qui peuver être supérieures aux Actinomycines connues.
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Comme amino-acides qui sont ajoutés conformément à l'in- vention aux solutions nutritives, entrent en ligne de compte non seulement ceux qui se rencontrent normalement dans lec chaînes latérales peptides des Actinomycines, comme par exemple la valine, l'isoleucine, la thréonine, la proline, la sarcosine et la N-méthylvaline, mais aussi ceux qui. jusqu'à ce jour, n'ont pas été rencontres en tant qu'élé- ments structuraux des Actinomycines, tels par exemple que la leucine, la sérine, l'arginine, la N-méthylalanine, ain- si que tous les autres amino-acides qui sous la forme lévogyre constituent normalement des éléments structuraux de chaînes peptides.
En règle générale, il suffit d'ajouter n seul amino-acide, mais on a trouvé que l'addition de Jeux ou plusieurs amino-acides permet d'obtenir des effets particuliers dans la composition des Actinomycines formées.
Il importe surtout que ces additions engendrent un excès unilatéral d'amino-acides individuels dans la solution nutritive et que de cette façon tous les amino-acides ne soient pas également accessibles aux streptomyces co-ne cela se fait dans l'addition de substances albumioides.
Au lieu des amino-acides eux-mêmes on peut aussi ajouter à la solution nutritive des composés susceptibles de se transformer en amino-acides dans les conditions de culture, comme'par exemple les céto- et oxy-acides qui correspondent
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aux amino-acides, ou des dérives des amino-acides comme par exemple leurs esters, amides ou sels, ou les alcools corres- pondant aux amino-acides. On peut aussi se servir droligo-. peptides pour influencer la formation des Actinomycines de manière qu'elle se poursuive dans une direction déterminée.
L'oligopeptide est probablement incorporée comme telle dans la chaîne peptide, sans être dissociée au préalable.
L'étendue de l'influence exercéepar les amino-acides est fonction de la concentration des substances ajoutées. Si la concentration des substances est relativement très faible, on n'observe pratiquement aucune influence ; contre, cette influence se manifeste déjà très nettement à des con- centràtions de 0,3 %, et elle devient très marquée lorsque la concentration des amino-acides dans la solution nutri- tive s'élève à 0,5 % et plus.
En règle générale, il y a avantage à ajouter les amino-acides individuels dans une concentration allant de 0,3 à 1 %, mais il peut Atre'par- fois utile d'employer d'autres concentrations suivant l' accessibilité et le prix de l'amino-acide à mettre'.en oeuvre D'unè façon générale, il se forme aussi par l'addition d' amino-acides individuels des mélanges de différentes Acti- nomycines, qui peuvent être séparés de la solution nutri- tive suivant des méthodes connues, par exemple par ex- traction au moyen d'acétate de butyle ou d'acétate d'éthyle,
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la composition des différents mélanges -d Actinomycines pouvant être déterminée à l'aide de la chromatographie de partage annulaire sur papier.
Les Actinomycines peuvent être séparées à l'aide de la chromatographie de partage, par exemple suivant le procédé décrit dans la demande de brevet déposée par la demanderesse le 15 juillet 1954 sous le no. 672,932, et isolées en tant que composants individuels purs.
Exemple 1: Une solution nutritive de la composition suivante :
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<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-valine <SEP> 5,8 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> - <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 1 <SEP> OU <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 40 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476 et secouée durant 5 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer.
La solution de culture ayant une valeur pH finale de 8,4 et une teneur en .ctinomycine de 24 mg par litre de solution de
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culture est extraite à trois reprises en agitant avec une petite quantité d'acétate d'thyle ou d'acétate de butyle et l'extrait rouge-clair est concentré sous pression ré- duite.
Le résidu rouge lavé avec une petite quantité de ligroine chaude fournit dans la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système à deux phases : 1 par- tie en volume de butanol, 4 parties en volume d'êther di-n- butylique, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crsotinate de sodium, trois anneaux présentant les valeurs Rc de 0,62,1,0 et 1,63 qui correspondent respec- tivement aux Actinomycines C1, C2 et C3. L'Actinomycine C1 se présente comme composant principal, l'Actinomycine C3 comme composant secondaire.
On arrive au. même résultat en utilisant une solution nutri- tive de la composition suivante
EMI9.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> .. <SEP> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 6,6 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> D,L-valine <SEP> 3,85 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2).
<Desc/Clms Page number 10>
le rendement dans les mêmes conditions de culture est de 23 mg d'Actinomycine par litre de solution de culture, la valeur pH finale au bout de 6 jours d'incubation, étant de 8. 4.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 employée dans des solutions nutritives exemptes de valine, par exemple de la composition :
EMI10.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 10 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) fournit un. mélange d'Actinomycines, dans lequel les Actino- mycines C3 et C2 figurent comme composants principaux et l'Actinomycine C1 comme composant secondaire.
Exemple 2 : Une solution nutritive de la composition suivante ':
EMI10.2
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-isoleucine <SEP> 6,5 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> ,carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2)
est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 477.. La solution de culture est secouée durant 5 jours à 30 C dans une fiole d''Erlenmeyer et traitée de lamanière décrite l'exemple 1. Le rendement est de 57 mg d'Actinomycine par litre de solution de culture, la valeur pH finale est de 8,3. Diaprés l'examen par la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système:
1 partie en volume de butanol, 4 parties en volume d'éther di-n-butylique, 5 parties en volume. drune solution aqueuse à 8 % de m-créso- tinate de sodium, le mélange- d'Actinomycines isolé consista en parties à peu près¯égales de cinq composants ayant les valeurs Rc2 de 0,62, 1,0, 1,63, 2,41 et 3,53, Par contre, la souche de streptomyces BoP 477, employée sur des 'solutions nutritives exemptes d'isoleucine, composées par exemple de
EMI11.2
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> @arine <SEP> de <SEP> fèves <SEP> de <SEP> soja <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 12>
EMI12.1
<tb> glycocolle <SEP> 2,
5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 100 <SEP> mg <SEP> . <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) forme suivant le chromatogramme de partage annulaire (système ci-dessus indiqué) un mélange d'Actinomycines constitué d'un composant principal ayant la valeur Rcde 0,62 et un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 1.
Les valeurs Rc2 sont une mesure qui indique la position de la zone respective dans le chromatogramme de partage annu- laire sur papier, par rapporta la zone du composant C2 pur Elles sont calculées en divisant la longueur du chemin parcouru par le composant considéré par la longueur du chemin parcouru par le composant C2.
Exemple 3 Une solution nutritive de la composition suivante , :
EMI12.2
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D <SEP> L-isoleucine <SEP> 6,5 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 13>
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<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> huile <SEP> de <SEP> lard <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
(pH 6,8 -7.2)
est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476 et brassée durant 5 jours à 28 C dans une cuve de fermenta- tion submergée, sous une aération intense.La solution de culture ayant une valeur pH finale de 8,9 est séparée du mycélium par une seule centrifugation et puis extraite à cinq, reprises en secouant avec des petites quantités d' acétate d'éthyle. Le mycélium séparé est également extrait par de l'acétate d'éthyle, jusqu'à, ce que l'extrait pré- sente une ..faible -coloration jaune. Les extraits sont réunis et le solvant est chasse sous pression réduite. Le résidu rouge est lavé à deux reprises avec une petite quantité de ligroine chaude.
Le rendement en Actinomycine est de 200 mg par litre de.solution.de'culture. Pour purifier davantage cotte substance, le mélange est 'dissous 'du benzine, puis filtré et adcorbé sur**. colonne d' oxyde d'aluminium. Le colorant rouge est élué avec une lange de benzène et d'acétate d'éthyle (rapport en volume 1) et recristallisé à partir d'acétate d'éthyle pur.
Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
avec le système â deux phases : 1 partie on vol8 du buta- nol, 4 parties en volume d'éther dim-butylique, 5 parties on volume d'une solution aqueuse à 8 );; d m-crésotinate de sodium, le mélanD d'Actinomycines ainsi obtenu est con- stitu en parties à peu près égales da trois composants ayant, les valeurs L c2 de 1 , 6, 2,4 et 3,5.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476, employée dans des conditions de culture submergées analogues sur le même milieu nutritif, mais en l'absence d'.isoleucine, fournit un mélange d'Actinomycines qui, dans la chromatographie de partage annulaire (système ci-dessus), est constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1 et 1,6.e.t d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,62..
En utilisant une solution nutritive de la composition suivante :
EMI14.2
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
EMI14.3
nitrate de''potassium 7 g
EMI14.4
<tb> D,L-isoleucine <SEP> 1,5 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
EMI14.5
c'ilorure de sodium 2 g SL11:L'c:te de magnésium # 1c mag carbonate de Lcz"ilSlU.L'1 1CO Rb sulfate ds fer bivalent 10 iag
<Desc/Clms Page number 15>
carbonate dé calcium 500 mg (pH = 6,8 - 7,2) on obtient avec la même souche de streptomyces, avec un rendement de.150 mg d'Actinomycine par litre de solution de culture, un mélange d'Actionmycines qui, en ce qui concerne les composants principaux, est identique avec'le mélange d'Actinomycines ci-dessus décrit.
I;iais suivant la chromato- graphie de partage annulaire, exécutée avec le système de partage : 4 parties en volume d'ther di-n-butylique; 1 partie en volume de butanol, 5 parties en volume d'une so- lution aqueuse à 8 % de m-crsotinate de sodium, il confiera . outre les composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,6, 2,4 et 3,7 encore deux composants secondaires ayant les valeurs Rc2 de o,62 et 1,0.
Exemple 4 Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI15.1
<tb> , <SEP> eau.'de. <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-leucine <SEP> 6,5 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> parbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
.oa3!konate de magnésium 100 mg .
s,lf.tse de fer bivalent 10 mg
EMI16.2
(pilaf 6e8 -r 7,2) est inocule ave'c la souche de streptomyces BoP 476, (brassée,durant 6jours'a 28 0 dans uneuve de fermen- tation submergée, sous une aération intense, et puis sou- mise au tacitement décrit l'exemple Le rendement est
EMI16.3
de 65 mg dl'Actinomycine par litre de solution de culture.
Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système à deux phases : partie en volume de buta- nol, 4 parties en volume d'éther di-n-butylique, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines ainsi obtenu est con- stitué de quatre composants principaux ayant les valeurs
EMI16.4
jR de 1,0,' 1, &, 2, 4 et 3, 5, et de' quatre composants se- condaïresayant les valeurs R c2 de 0,62, 1,2, 1,9 et 2,8.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 fournit dans des conditions submergées analogues, mais en l'absence de
EMI16.5
leucine, fun mélange d'Actinomycines qui, suivant le chro- matogramme de partage annulaire (système ci-dessus indi- gué) , est constitué de deux composants principaux ayant les' râleurs î P2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire c2
EMI16.6
gant la valeur R C2 de 0,62.
<Desc/Clms Page number 17>
.Exemple 5 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI17.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D,L-norleucine <SEP> 6,5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> .de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1,
5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa-
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476 ot secouée durant 6 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer.
La solution de fermentation ayant une valeur pH finale de 7,0 est séparée' du mycélium par une seule centrifuation et la solution de culture limpide qui en résulte, ainsi qu le mycélium, sont extraits par de l'acétate 'd'éthyle ou par de l'acétate de butyle. Les extraits sont réunie et le dolvant est 'éliminé sous pression réduite. Le résidu roue est complètement extrait avec du benzène et adsorbé sur une
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colonne d'oxyde d'aluminium.
L'éluat obtenu avec un mélange de benzène et d'acétate d'éthyle (1 : 2) fournit, après concentration, avec un ren dement de 36 mg par litre de solu- tion de culture, un mélange d'Actinomycines qui, suivant la chromatographie de partage annulaire (système : 1 partie en volume de butanol, 4 parties en volume d'éther di-n-butyli- que-, 5 parties en volume d'une solution aqueuse. à 8 % de m- crésotinate de sodium), est constitué de trois composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,62, 1,0 et 1,63. Les trois composants correspondent aux composants du mélange d'Actinomycines C1, C2 et C3.
Dans des conditions' d'essai analogues, mais en l'absence de norleucine, la souche BoP 476 fournit également ces trois composants, mais dans ce cas le composant ayant la valeur Rc2 de 0,62 se manifeste seulement comme @ible composant secondaire. L'addition de norloucine a pour conséquence un déplacement du rapport des trois composants en faveur du composant ayant la' valeur Rc2 de 0,62.
Exemple 6: Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI18.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 19>
EMI19.1
<tb> 'sarcosine <SEP> 4,4 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1,
5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa-
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est. inoculée avec la souche de streptomyces BoP 509, secouée durant 6 jours à 30 C, et traitée de la manière décrite à l'exemple 5.
La valeur pH finale de la solution de culture est de 8,8, Le rendement en Actinomycine est de 100 mg par litre de solution de culture. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système:5 parties et volume d'acétate d'amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 10 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Acti- nomycines obtenu est constitué de deux composants principaux ayant' -le 3 valeurs Rc2 de 0,46 et 0,66, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2de 0,40.
@ Par contre, la souche BoP 509 employée dans- des conditions de culture analogues, en l'absence de sarcosine, fournit seulement un composant principal ayant la valeur Rc2 de 0,66 et un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 1 ,0.
<Desc/Clms Page number 20>
Exemple 7:
Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI20.1
<tb> eau.' <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> sarcosine <SEP> 4,4 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est Inoculée 'avec la souche de streptomyces BoP 476, secoua durant 7 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer et trai- tée de la manière décrite à l'exemple 1.
Suivant la chroma- tographie de partage annulaire, exécutée avec le système : 1 partie en volume de butanol, 4 parties en volume d'éther di-n-butylique, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crésotinate de sodium,- le mélange d'Actinomycin@ obtenu avec un rendement de 30 mg par litre de* solution gulture, est constitué en parties égales de-cinq composants principaux ayant les valeurs R de 0,6, 0,8, 1,0, 1,3 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc ? de 0,45
<Desc/Clms Page number 21>
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 employée en l'absence de sarcosine, fournit un mélange d'Actinomycines, dans lequel lescomposants ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6 se manifestent comme composants principaux, et les com- posants ayant la valeur Rc2 de 0,
6 comme composants secon- dairea
Exemple 8 : Une solution nutritive de la composition suivante. :
EMI21.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 2o <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 4,5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> N,N-diméthyldicétopipérazine <SEP> 9,0 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1,0 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2,
0 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> 0 <SEP> avant <SEP> la <SEP> strilisa-
<tb>
<tb> @tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7, 2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 509, secoua durant 6 j'ours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer et trai- tée dé la manière décrite à l'exemple 5.
Le rendement est de 34 mg d'Actinomycine par litre de solution de culture, la
<Desc/Clms Page number 22>
valeur pH finale de la solution de culture est de 7,2. suivant la' chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système: 5 parties en volume d'acétate d'amyle et parties en volume d'une solution aqueuse! 10 % de m-créso- tinate de sodium, le mélange d'Actinomycines obtenu est constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,46 et 0,66.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 509 utilisée en l'absence de N,N'-diméthyldicétopipérazine, forme un mé- ,langed'Actinomycines constitué d'un composant principal ayant la valeur c2 de 0,66, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 1.
Exemple 9 : Une solution nutritive de la composition suivante .
EMI22.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorhydrate <SEP> d'ester <SEP> éthylique <SEP> de <SEP> leucine <SEP> 7,9 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1,
2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 150 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<Desc/Clms Page number 23>
carbonate de calcium 1 g levure de boulanger (incubée durant 3 heures à 37 C avant la stérilisa- tion de la solution nutritive) 1 g est additionée, avant la stérilisation, de 0,4 ce de lessive de soude normale et puis stérilisée durant une heure et demie à 110 C. Après la stérilisation, la vale.ur pH est de 6,5.
La solution nutritive est inoculée avec la souche BoP 476 et secouée en tout durant 5 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer. Au cours des deux pre-. miers jours la valeur pH s'abaisse à 5,3, mais après 5 jours d'incubation elle atteint la valeur de 7,0. La solu- tion de culture est séparée par centrifugation du mycélium et les deux fractions sont épuisées à fond par extraction avec de l'acétate d'éthyle. Le rendement est de 90 mg d' Actinomycine par litre de solution de culture. Les extraits sont réunis et le solvant est chassé sous pression réduite.
Le résidu rouge est extrait à fond avec du benzène, filtré et adsorbé sur une colonne d'oxyde d'aluminium. L'éluat ob- tenu avec une solution de benzène et d'acétate d'éthyle (1 : 2) contient un mélange d'Actinomycines qui, suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système de.partage : 6 parties en volume d'éther di-n-buty- ligue,: 1 partie en volume de butanol et 7 parties en volume d'une solution aqueuse à 6 % de m-crésotinate de sodium, est constitué ue quatre composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0, 1,25, @,6 et 2,0, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,7.
<Desc/Clms Page number 24>
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée en l'absence du. chlorhydrate d'ester éthylique de leucine, sans sulfate de sodium, mais en présence d'une quantité un peu plus grande de chlorure de sodium, fournit un mé- lange d'Actinomycines qui, suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système : 6 parties en volume d'éther di-n-butylique, 1 partie en volume de butanol, 7 parties en volume d'une solution aqueuse à 6 % de m-crésotinate de sodium, est constitué de deux composant. principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un com- pos'ant secondaire ayant la valeur Rcde 0,7.
Exemple 10 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI24.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-leucine <SEP> 6,5 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire, <SEP> 1 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> d'e <SEP> sodium <SEP> 1,5 <SEP> g
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<Desc/Clms Page number 25>
EMI25.1
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
EMI25.2
z heures z,
57 C avant la stérilisa-
EMI25.3
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
EMI25.4
(pn = 6,8 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 509, se- couée durant 8 jours à 300 et traitée de la manière dé- crite à l'exemple 1. La valeur pH finale de la solution de culture est de 8,8. Le rendement en Actinomycine est
EMI25.5
de 30 mg par litre de solution de culture.
Suivant 1"exc.- men par la chromatographie de partage annulaire avec le système ;4 parties en volume d'êther di-n-butylique, 1 partie en volume de butanol et 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crêsotinate de sodium, le mé-
EMI25.6
lange- d'Actinomycines isolé est constitué de trois compo- sants principaux ayant les valeurs S C2 de 0,62, 1,0 et 1,5, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 2,2.
Par contre, la souche BoP 5o9 utilisée en l'absence de leu-
EMI25.7
cir -#,,.± orme un' mélange d'Actinomycines qui, dans le même chromatogramme de-partage annulaire, est constitué d'un composant principal ayant la valeur Rc 2 de 0,62, et d'un composant secondaire ayant la valeur So C2 de ,0. ilxesiple' 1 1 Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI25.8
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litr
<tb>
<Desc/Clms Page number 26>
EMI26.1
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorhydrate <SEP> de <SEP> D,L-lysine <SEP> 7,
3 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 5U <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 10 <SEP> mg <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 C <SEP> avant <SEP> la <SEP> sterilisa-
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive)
<tb>
est additionée, avant la stérilisation,
de 1 cc de lessive de soude normale, puis stérilisée durant une heure et demie à 110 C et inoculée avec la souche BoP 476 et secouée durant 5 jours à 30 C. La valeur pH finale de la solution de cul- ture est de 6,6 à 6,8. Le rendement en Actinomycine est de 40 mg par litre de solution de culture. Le mélange d'Actino- mycines pur est isolé de la manière décrite à l'exemple 3.
Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec':le système: 4 parties en volume d'éther di-n-butylique , 1 partie en volume de butanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crésotinate de .sodium, le mé- lange d'Actionmycines est constitué de deux composants prin- cipaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et de trois com- posants secondaires ayant les valeurs Rc 2 de 0,6, 1,3 et 2,C
<Desc/Clms Page number 27>
Par contre, la souche BoP 476 utilisée en l'absence de ly- sine, forme un mélange d'Actinomycines constitué de deux composants principaux ayant respectivement la valeur Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,
6 (composition déterminée par'la chromatographie de partage annulaire utilisant le système ci-dessus indiqué)
Exemple 12 : Une solution nutritve de la composition suivante :
EMI27.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 4 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D,L-leucylglycine <SEP> 9,
3 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure' <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa-
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 200 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8- 7,2) ;
est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 376 et secouée durant 7 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer.
La solution de culture présentant une valeur pH finale de
<Desc/Clms Page number 28>
7,5 - 7,8 et donnant un rendement de 70 mg d'Actinomycine par' litre de -solution, est traitée de la manière décrite à 1 exemple 5. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système : 6 parties en volume d'éther di-n butylique, 1 partie en volume de butanol, 7 parties en vo- lume d'une solution à 6 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomybines qui en résulte est constitué d'un composant secondaire ayant la valeur Rc de 0,7 et de quatre composants principaux.ayant les valeurs Rc2 de 1,0, 1,25, 1,6 et 2,0.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée en J'absence de 1eucylglycine, forme un mélange d'Actinomycines composé de deux composants principaux avec les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,7 (composition déterminée par la chromatographie de c2 partage'.annulaire utilisant le système ci-dessus).
'Exemple 13 : Une solution nutritive de la composition suivante t
EMI28.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-thréonine <SEP> 6 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 29>
EMI29.1
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium.
<SEP> 5o <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate'de <SEP> magnésium <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> Sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> 0 <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisation
<tb> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476, secoués durant 7 jours à 30 0 dans une fiole d'Erlenmeyer et puis traitée de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale de la solution de culture est de 8,3, le rendement en Actinomycine est de 70 mg par litre de solution de cul- ture.
Suivant l'examen par la chromatographie de partage annulaire exécutée avec le système : 4 parties en volume d'éther di-n-butylique, 1 partie en volume de butanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-cré- so.tinate de sodium, le mélange d'Actinomycines qui en ré- sulte est constitué d'un composant principal ayant la va- leur Rc2 de 1,6, et de deux composants secondaires ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 2,35. Le composant principal 1,6 correspond- à l'Actinomycine C3.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée en l'absence de thréonine, forne un mélange d'Actinomycines constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la
<Desc/Clms Page number 30>
valeur Rc2 de 0,6 (composition déterminée par la chromato-' graphie de partage annulaire utilisant le système di-dessus indiqué).
Exemple 14 che dolution nutritive de la composition suivante :
EMI30.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> d,L-norvaline <SEP> 8 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 15u <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 5U <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 5u <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 25 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 25 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476,
secouée durant 5 jours à 30 C et traitée de la manière décrite à l' exemple 5. Le rendement en Actinomycine estde 35 mg par litre de solution de culture. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système : 4 parties en volume d'éther di@n-butylique, 1 partie en volune de butanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 3 ; de
<Desc/Clms Page number 31>
m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines obtenu est constitué de six composants ayant les valeurs Rc2 de 0,6, 0,75, 0,8, 1,0, 1,2 et 1,6.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée dans la norvaline, forme un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,6 et deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6.
Exemple 15: Une solution nutritive de la composition suivante:
EMI31.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 4 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D,
L-mêthionine <SEP> 12 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 5o <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate''de'magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 25 <SEP> mg'
<tb>
levure de boulanger (incubée durant 3 heures à 37 C avant la stérilisation de la solution nutritive) 200 mg (pH = 6,8 - 7,2)
<Desc/Clms Page number 32>
est'inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476,
se- couée durant 5 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée ensuite de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale des solutions de culture est de 7,4. Le rendement en Actinomycine est de 63 mg par litre de solution de culture,. Suivant la chromatographie de partage annu- laire, exécutée avec le système de partage : parties en volume d'éther di-n-buytlique, 1 partie en volume de bu- tanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines est constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,6.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée en l'absence de mthionine, forme un mélange d'Actinomycines constitué.de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,6 (composition déterminée par la chroma- tographie de partage annulaire utilisant le système ci- dessus indiqué).
Exemple 16 : Une solution nutritive de la composition suivante
EMI32.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 33>
EMI33.1
<tb> . <SEP> formyl-D-leucine <SEP> 8 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisation <SEP>
de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476, secouée durant 4 jours à. 30 C et traitée de la manière décrite à l' exemple 5. La valeur pH finale de la solution de culture est de 7,4, le rendement en Actinomycine est de 65 mg par litre de solution de culture.
Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système de partage : 4 parties en volume d'êther di-n-butylique, 1 partie en volu me de butanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse 8 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines' obtenu est constitué de trois composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,u, 1,6 et 2,35, et de deux composants secondaires ayant les valeurs de 0,6 et 3,4.' Par contre, la souche de streptomyces BoP 476, utilisée sans la formyl-D-leucine, fouie un mélange d'Actinomycines
<Desc/Clms Page number 34>
constitué de' deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valuer Rc2 de 0,
6 (composition déterminée par la chromato- graphie de partage annulaire utilisant le même système à deux phases).
Exemple 17 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI34.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
EMI34.2
aoêtyl-DL#isoleucine 8,2 g
EMI34.3
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1,
2 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 20 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de- <SEP> sodium <SEP> 20 <SEP> mg
<tb>
EMI34.4
levure de boulanger (incubée durant* " 1
EMI34.5
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa- <SEP> 500
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tipn <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
est, avant la stérilisation, réglée au pH de 7 par addition de lessive de soude 2-normale, et la solution nutritive est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476 et secouée durant 4 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer.
La
<Desc/Clms Page number 35>
solution nutritive accuse alors une valeur pH de 7,2. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système à deux phases : 4 parties en volume d'éther di-n- butylique, 1 partie en volume de butanol, 5 parties en volume d'une ,solution aqueuse à 8 % de m-crsotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines obtenu avec un rendement en Actine- my.cine de 80 mg par litre de solution de culture est con- stitué de trois composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1,6, 2,4 et 3,5, et de deux composants secondaires ayant les valeurs de 0,6 et 1,0.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476 utilisée sans
EMI35.1
lacLty1 D,Z-.iolaue.ne, forme un mélange d'Actinomycines constitué de deux-composants principaux ayant les valeurs Rc de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la 2 valeur Rc2 de 0,6 (composition déterminée par la chromato- graphie de partage annulaire utilisant le mme système à deux phases).
... Exemple 18 : Une solution nutritive de la composition suivante
EMI35.2
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 4 <SEP> g
<tb>
<tb> D,L-thréonine <SEP> 4 <SEP> g
<tb>
<tb> D,
L-valine <SEP> 4 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 36>
EMI36.1
<tb> -chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 50 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 25 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 25 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 25U <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb>
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa# <SEP> 250
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 250 <SEP> mg
<tb>
(pH = 6,8 - 7, 2)
est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 476, secouée durant 6 jours à 30 C dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale de la solution nutritive est de 8,8, le rendement en Actinomycine est de 40 mg par litre de solution de culture. Suivant l'expériment par la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le 'système à deux phases : 4 parties en volume d'éther di-n-butylique, 1 partie en volume de butanol, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 8 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Acti- nomyc'ines isolé est constitué de trois composants princi- paux ayant les..valeurs Rc2 de 0,6, 1,0 et 1,6, ainsi que d'un .composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 2,25.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 476, utilisée dans la D,L-thréonine et D,L-valine, forme un mélange d' Actinomycines constitué de deux composants principaux ayant
<Desc/Clms Page number 37>
les' valeurs Rc2 de 1,0 et 1,6, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,6 (composition déterminée par la chromatographie de partage annulaire utilisant le même système à deux phases).
Exemple 19 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI37.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D,L-valine <SEP> ' <SEP> 6,5 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phsophate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate, <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate,
<SEP> de <SEP> calcium; <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ,..levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3. <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa- <SEP> 1
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la'solution <SEP> nutritive) <SEP> g
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est .inoculée avec la souche de streptomyces' BoP 458a,se- couée-durant 5 jours dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée de la'manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale de la solution de cultureest de 6,3, le rendement en Actinomy-
<Desc/Clms Page number 38>
cine est de 10U mg par litre de solution de culture.
Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système de partage : 5 parties en volume d'acétate d'amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 1U % de m-crê- sotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines ainsi obtenu est constitué d'un composant principal ayant la valeur Rc2 de 1,2, et de deux composants secondaires ayant les valeurs Rc2 de 0,66 et 2,0..
Par contre, la souche de streptomyces BoP 458a utilisée sans la D,L-valine, forme un mélange d'Actinomycines constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,66 et 1,2, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rcde 0,2 (composition,¯ déterminée par la chromatographie de par- tage annulaire utilisant le système de partage ci-dessus in- diqué) . Le mélange d'Actinomycines C partagé avec le système 5 parties en volume d'acétate d'amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 10 % de m-crésotinate de sodium, fournit deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 1 (Actinomycine C2), 1,55 (Actinomycine C3) et un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,
66 (Actinomycine C1). exemple 20@ Une solutionnutritive de la composition suivante
EMI38.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<Desc/Clms Page number 39>
EMI39.1
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb> D,
L-thrédnine <SEP> 7 <SEP> g
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de.potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 25 <SEP> mg
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisation <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 458a, se- couée durant 6 jours dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée de la manière décrite à l'exemple 5.
La valeur pH finale de la solution de culture est de 7,0, le rendement en Actinomy- cine est de 25 mg par litre de solution de culture. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système de partage : 5 parties en volume dracétate d'amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 10 % de m-cré- sotina'te de sodium, le mélange d'Actinomycines ainsi obtenu est constitué 'dé "deux composants principaux ayant les va- leurs Rc2 de 0,66 et 1,2, et de quatre composants secondaires ayant les valeurs Rc2 de 0,4, 1,0, 1,7 et 2,1.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 458a utilisée en l'absence de la D,L-thréonine, forme une mélange d'Actinomy-
<Desc/Clms Page number 40>
cines constitué de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,66 et 1,2, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,2 (composition déterminée par la chromatographie de partage annulaire utilisant le même système de partage).
Exemple 21 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI40.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sarcosine <SEP> 4,
4 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 160 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> de <SEP> boulanger <SEP> (incubée <SEP> durant
<tb>
<tb>
<tb> ..- <SEP> 3 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 37 C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisa-
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> de <SEP> la <SEP> solution <SEP> nutritive) <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP458a,
secoua durant 8 jours dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale de la solution de culture est de 8,4, le rendement en Actinomy- cine ect de 25 mg par litre de solution de culture. Suivant
<Desc/Clms Page number 41>
la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système à deux phases : 5 parties en volume d'acétate d' amyle, 5 parties en volume d''une solution aqueuse à 10 %
EMI41.1
de m-crêsotinate' de sodium, le mélange deactinomycines ob- tenu est constitué de trois composants principaux ayant les
EMI41.2
valeurs Ro 2 de 0,55e 1,0 et 1,2, et de cinq composants se- condaires ayant les valeurs Rc2 de 0,2, 0,66, 1,55, 1,9 et 2,2.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 458a utilisée en l'absence de sarcosine, forme un mélange d*Actinomycines constitué de deux composants principaux ayant les valeurs R@ de 0,66 et 1,2, et d'un composant secondaire ayant la 2 valeur Rc2 de 0,2 (composition déterminée par là chromato- graphie de partage annulaire utilisant le même système de partage).
Exemple 22 : Une solution nutritive de la composition suivante :
EMI41.3
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
EMI41.4
D,L'-isoleucine .6-i 5 g
EMI41.5
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<Desc/Clms Page number 42>
EMI42.1
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb> levure-(incubée <SEP> durant <SEP> 3 <SEP> heures <SEP> à
<tb> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisation <SEP> de <SEP> la
<tb> solution <SEP> nutritive)
<SEP> 1 <SEP> g
<tb>
(pH = 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de strptomyces BoP 458a, se- couée durant 5 jours dans une fiole d'Erlenmeyer et trai- tée de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH fi- nale de la solution de culture est de 7,5. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée avec le système de partage : 5 parties en volume d'acétate d' amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse à 10 % de m-crésotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines ob- tenu avec un rendement en Actinomycine de 70 mg par litre de solution de culture, est constitué de huit composants ayant les valeurs Rc2 de 0,66, 1,0, 1,2, 1,55, 1,9, 2,7, 3,5 et 4,2.
Par contre, la souche de s'treptomyces BoP 458a, utilisée en l'absence de D,L-isoleucine, forme un mélange d'Acti- nomycines constitue de deux composants principaux ayant les valeurs Rc2de 0,66 et 1,2, et d'un composant secon-
2 daire ayantla valeur Rc2 de 0,2 (composition déterminée par la chromatographie de partage annulaire utilisant le même système de partage).
<Desc/Clms Page number 43>
Exemple 23 :
Une solution nutritive de la composition suivante :'
EMI43.1
<tb> eau <SEP> de <SEP> conduite <SEP> 1 <SEP> litre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glycérine <SEP> 20 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> 5 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> D,
L-leucine <SEP> 8 <SEP> g
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> phosphate <SEP> de <SEP> potassium <SEP> secondaire <SEP> 1 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 2 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> magnésium <SEP> 100 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sulfate <SEP> de <SEP> fer <SEP> bivalent <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 500 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> levure <SEP> (incubée <SEP> durant <SEP> 3 <SEP> heures
<tb>
<tb>
<tb> 37 <SEP> C <SEP> avant <SEP> la <SEP> stérilisation <SEP> de <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb> solution <SEP> nutritive)
<tb>
(pH'= 6,8 - 7,2) est inoculée avec la souche de streptomyces BoP 458a,
se- couée durant 5 jours dans une fiole d'Erlenmeyer et traitée de la manière décrite à l'exemple 5. La valeur pH finale de la solution de culture est de 6,8, le rendement en Actinomy- cine est de 22o mg par litre de solution de culture. Suivant la chromatographie de partage annulaire, exécutée- avec le système de partage : 5 parties en volume d'acétate d'amyle, 5 parties en volume d'une solution aqueuse. à 10 % de m-cré- sotinate de sodium, le mélange d'Actinomycines obtenu est constitué de quatre composants principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,66, 1,2,1,7, et 2,1, et de trois composants se-
<Desc/Clms Page number 44>
condaires ayant les valeurs Rc2 de 0,1, 2,4 et 2,7.
Par contre, la souche de streptomyces BoP 458a, utilisée en l'absence de D,L-leucine, forme un mélange d'ctinomycines constitué de deux composante principaux ayant les valeurs Rc2 de 0,66 et 1,2, et d'un composant secondaire ayant la valeur Rc2 de 0,2 (composition déterminée par la chromato- graphie de partage annulaire utilisant le même système de partage).