<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention se rapporte à un procédé de fabri- cation de substances nouvelles exerçant un effet anti-enzymatique énergique, spécialement sur l'hyaluronidase, ces substances étant intéressantes, par exemple, pour prolonger et augmenter l'effet hormonal de l'hormone adrénocorticotropique, dite "ACTH", et de ses peptides à activité d'ACTH. Les substances nouvelles possè- dent d'ailleurs d'autres propriétés intéressantes.
Des recherches antérieures ont montré que la phosphoryla- tion de di et poly-hydroxy-flavones ou flavanones ou de di et
<Desc/Clms Page number 2>
poly-hydroxy-chalcones ou des dérivés dihydrogénés correspondants à ces di-hydroxy ou poly-hydroxy-f lavanones dans des conditions appropriées donnait des composés de poids moléculaire plus ou moins élevé se formant par suite d'une polymérisation avec con- densation. Quand on les. dissocie dans l'eau, dans laquelle ils sont solubles si la réaction est au moins neutre ou alcaline, ils forment des ions à forte charge négative. Ils se signalent en outre caractérisés par une action anti-enzymatique sur cer- tains enzymes, en particulier l'hyaluronidase.
Dans le brevet belge n 520.760 demandé le 17 juin 1953 au nom de la demanderesse pour "Procédé de préparation de subs- tances anti-enzymatiquestt, on a décrit la préparation de substan- ces anti-enzymatiques qui sont des produits de condensation poly- mères de l'acide phosphorique ou de l'acide thio-phosphorique avec un ou plusieurs composés aromatiques hydroxylés, lesquels ne font pas partie de la présente invention.
La présente invention permet d'obtenir des substances nouvelles possédant des effets anti-enzymatiques similaires à ceux des substances qui viennent d'être mentionnées, ces nou- velles substances étant des polymères de condensation provenant de matières premières plus simples et ayant en même temps la pro- priété de former avec l'ACTH et ses peptides actifs, des composée à effet d'ACTH prolongé et supérieur à celui des composés anté- rieurement connus, par exemple les composés produits par combi- naison de l'ACTE et des protamines.
D'autres avantages apparaîtront de ce qui suit.
Les substances produites conformément à l'invention se composent de radicaux d'acide phosphorique reliés entre eux par des radicaux organiques en des édifices moléculaires dans les- quels lesdits radicaux d'acide phosphorique sont liés par des liaisons P-0 avec un à trois radicaux binucléaires aromatiques
<Desc/Clms Page number 3>
constitués de deux noyaux benzéniques reliés par un pont carboné contenant au maximum trois atomes de carbone, tandis que dans ces radicaux aromatiques les atomes d'oxygène des liaisons P-0- sont en position para par rapport au pont,
le nombre des groupes hydroxyliques de l'acide phosphorique intervenant dans les liai- sons P-0- étant inférieur au nombre total des groupes hydroxyli- ques des radicaux d'acides phosphoriques et le poids moléculaire de la substance étant supérieur à 2000 mais insuffisamment grand pour rendre la substance insoluble dans les alcalis aqueux. La production des sels de ces substances entre également dans le cà- dre de l'invention.
Comme il ressort de l'exposé général de l'invention les matières premières destinées à la préparation des substances nou- velles contiennent deux noyaux benzéniques reliés entre eux par un pont carboné ne contenant p4s plus de trois atomes de carbone, chacun des noyaux benzéniques possédant un groupe hydroxylique en position para par rapport à ce pont.
Afin d'illustrer les possibilités de structure de ces substances nouvelles et pour des raisons de simplicité, on peut mentionner le produit obtenu par phosphorylation de l'hydroqui- none ou de la résorcine comme matière première, étant entendu qu'un tel produit n'entre pas dans la présente invention. Le pro' duit est formé principalement de chaînes du type
EMI3.1
Toutefois, dans ces chaînes, la troisième valence de l'atome de phosphore, qui aans la formule est occupée par des groupes hydroxyliques libres, lesquels sont dissociés en solu- tion, peut, dans certains cas, être liée à/une autre molécule
<Desc/Clms Page number 4>
d'hydroquinone ou de résorcine, de sorte que les chaînes sont ra- mifiées.
Les matières premières utilisées de préférence dans le pré- sent procédé sont représentées par la formule générale
EMI4.1
dans laquelle X est un pont carboné contenant 1 à 3 atomes de car- bone et R1 et R représentent chacun de l'hydrogène ou un groupe méthylique.
Dans le pont carboné, les atomes d'hydrogène liés à un/des atomes de carbone ou à plusieurs peuvent être remplacés par un ou plusieurs groupes alcoyliques, alcoyléniques ou alcoylidéniques, le nombre d'atomes de carbone présent dans chacun de ces substituants étant de 1,2 où 3.
Des exemples de matières premières appropriées à la prépara tion de substance produites conformément à l'invention sont le 4.4'- dihydroxy-3-méthyl-diphénylméthane, le bis-(p-hydroxyphényl)-isopro- pyl-méthane, le bis-(p-hydroxy-phényl)-éthylidène-méthane, le bis- (4-hydroxy-3-méthyl-phényl)-éthyl-n-propyl-méthane, le 4.4'-dihydro-
EMI4.2
xy-alpha-isopropyl-stilbène, le IF.4t-dihydroxy-alpha-méthyl-bgta-n- propyl-stilbène, le 4.4'-dihydroxy-alpha-éthyl-bêta-propényl-stilbè-' ne, le 4.41-dihydroxy-alpha-2-diméthyl-bOta-éthyl-stilbène, le 4.4'J dihydroxy-alphaobêta-3.3'-tétraméthyl-stilbène, le p.p'-dihydroxy- diphényl-éthane, le 4.4t-dihydroxy-2-niéthyl-diphényl-alpha-méthyl- éthane, le tH.4'-dihydroxy-diphényl-alpha.alpha-diméthyl-éthane, le 4.4'-dihydroxy-alpha.Bta-bis-(n-propyl-diphényl)
-éthane, le 4.4'- dihydroxy-alpha-2-diméthyl-bgta-éthyl-diphényl-éthane, le IF.4t- dhydroxy-alpha-éthyl-béta-éthylidène-diphényléthane, le ly.4'-di- hydroxy-3.3'-diméthyl-gamma.delta-diphényl-béta.delta-hexadiène et le .1'-dihydroxy-alpha.bta-diéthyl-gamma-méthyl-diphényl-propane.
Certains de ces composés possèdent une action oestrogène et cytostatique.
Il est d'une importance notable, pour l'obtention d'un effet anti-enzymatique élevé, que le degré de polymérisation de ces substances nouvelles soit suffisamment élevé'. A cet égard la
<Desc/Clms Page number 5>
limi.te inférieure du poids moléculaire'est d'environ 2000 c'est- à-dire qutenviron six à huit radicaux organiques sont reliés entre eux de la manière mentionnée ci-dessus.
Dans le cas d'un poids moléculaire d'environ 2000, l'ef- fet anti-enzjmatique de ces substances nouvelles est énergique, comparativement à celui des mono et des di-phosphate monomères correspondants: Si l'on porte le poids moléculaire à des valeurs comprises entre 10.000 et 30.000, ce qu'on peut obtenir par exemple en augmentant la durée de la réaction de phosphorylation de la matière preniière,'on obtient des produits qui ne dialysent pas à travers une membrane de "Cellophane" et qui exercent une action anti-enzymatique beaucoup plus forte. Ces substance de poids moléculaire élevé sont particulièrement intéressantes con- formément à l'invention.
Si l'on augmente davantage le temps de réaction, il se forme des produits d'un poids moléculaire encore plus élevé. Toutefois l'effet anti-enzymatique ne s'en trouve pas augmenté et le poids moléculaire ne doit pas atteindre une valeur telle que les produits ne soient plus solubles dans les alcali aqueux.
Dans les cas où les matières premières ont des effets oestrogènes ou cytostatiques, les substances nouvelles auxquelles ils donnent naissance manifestent des effets fortement prolongés et constituent des produits injectables utiles comme moyen d'ob- tenir ces effets chez l'homme et les animaux. Un certain effet oestrogène peut également être avantageux dans les préparations à activité d'ACTH.
Pour illustrer la prolongation de l'effet d'ACTH suscep- tible d'être obtenu on peut mentionner ce qui suit .
Par administration intramusculaire d'une dose convenable, par exemple de 20 unités internationales d'ACTH ordinaire, on constate que-le nombre de cellules .éosinophiles descend, en deux à quatre heures, jusqu'à une valeur minimum, par exemple à 36%
<Desc/Clms Page number 6>
de la valeur avant administration de l'ACTH. Toutefois, huit heures après l'injection, le nombre de cellules éosinophiles a généralement augmenté jusqu'à 50% de la valaur originale et dans les deux heures qui suivent, la quantité de cellules éosinophiles augmente notablement.
Si toutefois de l'ACTH combiné avec une des nouvelles substances est administré en quantité correspondant à 20 U.I. dtACTH, la teneur en cellules éosinophiles du sang diminue pendant les quatre premières heures comme dans le cas précédent mais leur.nombre continue à diminuer jusqu'à ce que, au bout de huit à quatorze heures, elle ait atteint une valeur qui, dans la plupart des cas, est inférieure à 10% de la valeur primitive.. Même vingt-qautre heures après l'administration, le nombre des cellules éosinophiles ne dépasse usuellement pas 50% de la valeur primitive. Corrélativement quand on utilise une subs. tance préparée selon l'invention, il est possible d'entreprendre des traitements cliniques satisfaisants à l'aide d'une seule in- jection par vingt-quatre ou quarante-huit heures.
D'après le nom- bre des cellules éosinophiles, les substances nouvelles préparées selon l'invention non seulement prolongent l'effet de l'ACTH mais encore l'augmentent.
Les propriétés anti-enzymatiques des substances produites conformément à l'invention dépendent principalement de leur poids moléculaire. Dans ce qui suit, ces propriétés seront caractérisées par le chiffre qui indique, pour une certaine concentration, le pourcentage de la substance en question inhibant le système enzy- matique acide hyaluronique-hyaluronidase.
Dans les exemples suivants on utilise, pour caractériser
EMI6.1
l'inhibition, le "pouvoir inhibiteur )1" calculé par la formule ( H - Hl , LOO pouvoir inhibiteur % = ###r;######## Sans laquelle pour une solution donnée d'hyaluronidase, H1 désigne le temps de réaction nécessaire pour réduire de moitié la viscosi-
<Desc/Clms Page number 7>
té d'une- solution donnée d'acide hyaluronique convenant comme substratmm et H2 le temps de réaction nécessaire pour réduire de moitié la viscosité quand l'hyaluronidase agit sur un mélange de la même solution d'acide hyaluronique et d'une substance à ac- tion antagoniste de l'hyaluronidase..
Dans le dessin, la courbe 1 montre la relation entre le temps de réaction et la viscosité quand on utilise de l'hyaluro- nidase du boeuf. On utilise 0,1 cm3 'de solution d'enzyme conte- nant 2 unités réductrices de viscosité (URV), défiles comme étant la proportion d'enzyme qui réduit de moitié la viscosité du substratum en question en dix minutes. Comme substratum, on uti- lise l'acide hyaluronique produit à partir des cordons ombilicaux d'après le procédé décrit par Jeanloz et Forchielly (Journ. of Biol. Chem. 186, 495 (1950). La solution contient 0,3 de cet acide hyaluronique dans un mélange tampon de Mc. Ilvaine de pH 7.
La solution enzymatique est mélangée avec 3 cm3 de substratum et 0,9 cm3 de tampon.
La courbe 2 montre la relation entre le temps de la réac- tion et la viscosité pour un mélange similaire, quand Ion ajoute au mélange un composé préparé selon l'invention. Les proportions du mélange sont de 0,1 cm3 de l'enzyme, 0,7 cm3 de tampon et 0,2 cm3 d'une solution aqueuse neutre du produit, dont on doit déterminer l'effet enzymatique ainsi que 3 cm3 de substratum.
H1 et H2 sont déterminés par les points d'intersection avec la ligne horizontale A dont l'ordonnée est la moitié de la travers le viscosimètre somme des temps de passage à / de la solution tampon et du subs- tratum dilué au moyen de tampon dans la proportion de 3 : 1.
Les substances nouvelles sont produites par réaction d'un agent phosphorylant comme l'oxychlorure de phosphore avec une ou plusieurs des matières premières dans des conditions convenant pour la condensation, de préférence avec utilisation d'une amine
<Desc/Clms Page number 8>
tertiaire à titre d'agent de fixation d'acide chlorhydrique, les produits de condensation ainsi obtenus étant ensuite soumis à une hydrolyse. Cette hydrolyse a pour effet de provoquer la sé- paration des substituants, par exemple des atomes de chlore, qui, dans l'agent phosphorylant, sont liés au reste d'acide phos- phorique et n'ont pas été remplacés, au cours du processus de condensation, par des radicaux organiques.
Ces atomes d'halogène sont remplacés par des groupes hydroxyliques, avec formation de groupes d'acides phosphoriques libres, de sorte qu'une ou deux des valences du phosphore étant liées avec un groupe organique par un atome d'oxygène, alors que la ou les deux valences res- tantes sont liées à des groupes hydroxyliques. Les produits de- viennent ainsi plus fortement acides et susceptibles de former des sels, parmi lesquels les sels alcalins sont solubles.
Au cours de la phosphorylation, les matières premières peuvent convenablement être dissoutes dans un solvant ne réagis- sant pas avec l'agent phosphorylant. Suivant un mode d'exécution approprié de ce procédé, conduisant avec certitude à des produits possédant des propriétés anti-enzymatique marquées, on maintient des conditions appropriées à la condensation dans le milieu en- hydre en refroidissant au cours de la phosphorylation, en ajou- soit tant l'agent phosphorylant ou le milieu de condensation/avec len- teur en continu soit par portionset en laissant le mélange réactionnel reposer pendant quelque temps avant l'hydrolyse, ou par d'autres moyens similaires, jusqu'à ce qu'au moins le degré désiré de condensation soit obtenu, puis en interrompant la condensation.
Pour obtenir une condensation suffisante il est commode de ne pas utiliser un trop grand excès d'agent phosphorylant, dans lecas de l'oxychlorure de phosphore de préférence 0,7 à 1,1 molécule d'agent phosphorylant par molécule de matière première. Par consé- quent, il est.commode d'ajouter l'agent phosphorylant à une solu- tion de la matière première et non l'inverse car, dans ce dernier cas l'agent phosphorylant serait présent en trop grand excès au
<Desc/Clms Page number 9>
début de l'opération.
Des exemples de solvants cétoniques appropriés sont la méthyl-éthyl-cétone, la méthyl-n-propyl-cétone, la diéthyl-céto- ne, la 2-hexanone, la pinacoline et la di-n-propyl-cétone. Des exemples de solvants contenant du chlore sont le chloroforme, le chlorure d'éthylène et le chlorure d'éthylidène. Ces solvants, être et d'autres, peuvent/utilisés isolément ou en mélanges. Le sol- vant peut également être constitué par l'agent de condensation utilisé dans le procédé, par exemple une amine tertiaire ; à cet égard la pyridine, la picoline, la lutidine, la quinoléine et la diméthylaniline conviennent. Il peut toutefois, dans certains cas, être commode d'utiliser ces agents de condensation en mélan- ge avec des solvants inertes.
La réaction de phosphorylation dégageant de la chaleur, il convient généralement de refroidir assez fortement pour régler le cours de l'opération.
Il est généralement nécessaire de laisser le mélange réac' tionnel au repos pendant plus ou moins longtemps avant hydrolyse de manière que la condensation puisse atteindre le degré désiré dans le produit final. Très souvent, il est commode de maintenir le mélange réactionnel au repos à la température ambiante, soit environ 15 à 20 , pendant une demi-heure à vingt-quatre heures.
Cette période de repos peut être réduite par augmentation de la température et il semble généralement qu'il n'y ait pas 'incon- vénient à porter celle-ci à 50 environ au cours de cette période de repos.
On met ensuite fin à la réaction par dilution du mélange réactionnel à l'aide d'eau glacée, 'ce qui détruit en même temps l'excès d'agent phosphorylant.
Voici maintenant un certain nombre d'exemples de produc- tion de différentes substances selon l'invention. Les microgram- mes sont désignés par gan;ma dans les indications de pouvoir inhi- biteur.
<Desc/Clms Page number 10>
EXEMPLE 1
EMI10.1
On dissout 2,28 gr de l.lt-dihydroxy-diphényl-diméthyl- méthane dans. 30 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute, à -15 , une solution de 0,62 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre, goutte à goutte et en secouant. La durée d'ad- dition est de trois minutes. L'addition provoque une augmentation de chaleur insignifiante. Au bout de deux heures de séjour dans un bain réfrigérant, il précipite-une grande quantité de cris- taux de chlorure de.pyridinium. On maintient alors le mélange à 0 pendant quinze heures à la suite de quoi il devient visqueux.
On procède ensuite à l'hydrolyse au moyen de glace finement pi- lée ; on obtient une solution limpide et une masse visqueuse. On ajoute au mélange 75 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui forme un précipité dans la solution limpide; la masse visqueuse se so- lidifie et se désagrège pour donner une poudre. On sépare le pré- cipité par filtration et on le dissout dans une solution 5 N d'hy- de droxyde de sodium. Après l'avoir secoué à plusieurs reprises avec/ l'éther on ajoute un excès d'acide chlorhydrique à la solution aqueuse alcaline, ce qui donne un précipité blanc à grains fins qu'on sépare par filtration, qu'on lave à l'eau et qu'on sèche.
On en recueille 3,2 gr. C'est une poudre blanche à grains fins, insoluble dans une solution de bicarbonate de sodium et soluble dans une solution d'hydroxyde de sodium. Pouvoir inhibiteur (0,2 gamma/4 cm3) : 82%.
EXEMPLE 2
EMI10.2
On dissout 2,98 gr de bis-(1-hydroxY-3-méthyl-phényl)- éthyl-n-propyl-méthane dans 100 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une solution de 0,92 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 10 cm3 de pyridine anhydre. La durée de l'addition est de cinq minutes. Après un séjour d'une heure dans un bain réfrigérant et de vingt heures à la températu- re ambiante on hydrolyse la solution limpide au moyen de glace pilée et on l'évapore sous vide. On dissout le résidu dans 20 cm3 de solution normale d'hydroxyde de sodium et on ajoute la solution.
<Desc/Clms Page number 11>
ainsi obtenue, en agitant, à 25 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. La quantité recueillie après séchage est de 3,9 gr. Pouvoir inhibiteur (10 gamma/4 cm3) : 77%.
EXEMPLE.3
EMI11.1
On dissout 2,1l.. gr de p.pi-dihydroxy-diphényl-éthane dans
20 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en agitant, à -15 , une solution de 0,62 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre. La durée de l'addition est de trois minutes. L'addition provoque une élévation de température insignifiante. Au bout d'un séjour de quelques heures dans le bain réfrigérant il se forme un copieux précipité.de chlorure de pyridinium. On abandonne alors le mélange pendant quinze heures à 0 après quoi sa consistance est celle d'une gelée. On procède à l'hydrolyse à l'aide de glace finement pilée, ce qui donne une solution limpide. On ajoute à cette solution 75 cm3 d'acide chlo rhydrique 5 N.
On obtient ainsi un précipité à grains fins qu'on sépare par aspiration qu'on lave à l'eau et qu'on sèche dans un exsiccateur sur anhydride phosphorique. On obtient 2 gr d'une poudre presque blanche. Le produit est très peu soluble dans une solution de bicarbonate de sodium mais bien soluble dans une solu- tion d'hydroxyde de sodium. Pouvoir inhibiteur : (20 gamma/4 cm3) : 93%.
EXEMPLE 4
EMI11.2
On dissout 2,7 gr de 3 y-bis-(p-hydroxy-phényl)-hexane dans 120 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une solution de 0,92 cm3 d'oxychlorure de phos- phore dans 10 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition cinq minutes. Au bout d'une heure de séjour dans le bain refrigérant et vingt heures à la température ambiante, on hydrolyse la solu- tion limpide au moyen de glace pilée et on l'évapore sous vide.
On dissout le résidu dans 20 cm3 de solution normale d'hydroxyde
<Desc/Clms Page number 12>
de sodium et on ajoute la solution obtenue en agitant à 25 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. On recueille, après séchage, 3,3 gr de produit. Pouvoir inhibiteur (8 gamma/4 cm3);60%.
EXEMPLE 5
EMI12.1
On dissout 2,IF2 gr de 4'4'"'dihydroxy-2-méthyl-diphényl- alpha-méthyl-éthane dans 30 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 n, une solution de 0,92 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition : trois minutes. On abandonne le mélange pendant vingt heures à la température ambiante; il prend alors la forme d'une gelée. On procède ensuite à l'hydrolyse au moyen/de glace pilée et on chauffe à 85 pendant deux heures, ce qui donne une solution limpide. On l'évapore sous vide, en dissout le résidu dans 20 cm3 d'une solution normale d'hydroxyde de sodium et on ajoute la solution obtenue, en agitant, à 25 cm3 d'acide chlorhy- drique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. La quantité recueil- lie après séchage, est de 2,9 gr.
Pouvoir inhibiteur : (4 gamma/ 4 cm3) : 50%.
EXEMPLE 6
EMI12.2
On dissout 1,33 gr de 4.1.'-dihydroxy-gamma-delta-diphényl- bêta hexadiène dans 20 cm3 de pyridine anhydre. On refroidit la solution à -14 puis on ajoute goutte à goutte, en secouant, une solution de 0,31 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition trois minutes. L'addition provoque une élévation de température insignifiante. On laisse le mélange pendant encore trois heures dans le bain réfrigérant, puis pendant vingt heures à 0 . Le mélange a pris alors l'aspect d'une gelée. On l'hydrolyse au moyen de glace pilée, ce qui donne une solution limpide. On ajoute à cette solution 75 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N et on obtient, après séchage, 1,6 gr d'une poudre beige clair.
<Desc/Clms Page number 13>
Ce produit est très peu soluble dans une solution de bicarbonate mais très soluble dans l'hydroxyde de sodium. Pourvoir inhibiteur (2b gamma/4 cm3) : 95%.
EXEMPLE 7
On dissout, dans 60 cm3 de pyridine anhydre, 2,94 gr de
EMI13.1
l.4'-dihydroxy 3.3'diméthyl-gamm.a; delta-diphényl-bêta.delta- hexadiène, On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une @ solution de 1 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 10 cm3 de pyri- dine anhydre. Durée de l'addition : cinq minutes.
On abandonne le mélange pendant une heure dans le bain réfrigérant puis pendant vingt-quatre heures à la température finement ambiante. On l'hydrolyse alors à l'aide de glace/pilée, ce qui donne une solution limpide. On l'évapore sous vide'au quart de son volume. On dissout le résidu visqueux dans environ 40 cm3 de solution normale d'hydroxyde de sodium (pH 7). On dialyse la solution à l'aide d'eau courante pendant cinq jours puis on l'a- joute, en agitant, à 20 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un précipité. On le sépare par aspiration et on le lave à l'eau, puis on le sèche dans un exsiccateur à vide sur anhydre phosphorique. On en recuéille 3,5 gr. Pouvoir inhibiteur : (3 gamma/4 cm3) : 45%.
EXEMPLE 8
EMI13.2
On dissout 13,3 gr de 4.41-dihydroxy-alpha.Bgta-dièthyl- stilbène dans 300 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant à -15 , une solution de 5 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 35 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition, quinze minutes. On laisse le mélange pendant une heure dans le bain réfrigérant puis pendant vingt heures à la température am- biante. On l'hydrolyse alors au moyende 200 gr de glace finement pilée ; on obtient une solution limpide. On l'évapore sous vide au quart de son volume. On dissout le résidu visqueux dans environ
<Desc/Clms Page number 14>
200 cm3 de solution normale d'hydroxyde de sodium ( à pH 7).
On dialyse la solution à l'aide d'un courant d'eau pendant cinq jours et on l'ajoute alors, en agitant, à 60 cm3 d'acide chlorhy- drique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. On l'enlève par aspi ration et on le lave à'l'eau puis on le sèche dans un exsiccateur à vide, sur anhydride phosphorique. On recueille 16,1 gr d'une poudre blanche, qui se dissout facilement dans une solution d'hy- droxyde de sodium. Pouvoir inhibiteur : (4 gamma/4 cm3) : 51%.
EXEMPLE 9
EMI14.1
On dissout 2,68 gr de 4.4'"dihydroxy-alpha-méthyl-bêta- n-propyl=stilbène dans 30 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -10 , une solution de 0,92 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine. Durée de l'ad- dition, deux minutes. On laisse le mélange pendant vingt heures à la température ambiante; il prend alors l'aspect d'une gelée.
On procède ensuite à l'hydrolyse au moyen de glace pilée et on abandonne à la température ambiante pendant trois jours; on ob- tient¯une solution limpide.On ajoute à cette solution 150 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N. Après séchage on recueille 3,1 gr d'une poudre blanche. Pouvoir inhibiteur : (5 bamma/4cm3): 49%.
EXEMPLE 10
On dissout, dans 60 cm3 de pyridine anhydre, 2,54 gr de
EMI14.2
4 .IFt-dihydroxy-alpha-isopropyl-stilbène. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une solution de 1,2 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 10 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition : cinq minutes. Après un séjour d'une heure dans le bain réfrigé-, rant et de vingt heures à la température ambiante on hydrolyse la solution limpide au moyen de glace pilée et on évapore sous vide. On dissout le résidu dans 20 cm3 d'une solution normale d'hydroxyde de sodium et on ajoute la solution obtenue, en agi- tant, à 25 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un préci- -pité blanc. Après séchage on recuille 3 gr de produit.
Pouvoir inhibiteur : (4 gamma/4 cm3) : 60%.
<Desc/Clms Page number 15>
EXEMPLE 11
EMI15.1
On dissout 2,8 gr de 4.4t-dihydroxy-alpha-éthyl-bgta-pro- pényl-stilbène dans 60 cm3 de pyridine anhydre. On ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une solution de 0,83 cm3 d'oxychlo- rure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'ad- dition : trois minutes. Après une heure de séjour dans le bain de refroidissement et de cinq heures à la température ambiante on hydrolyse la solution limpide, à l'aide de glace pilée et on l'é- vapore sous vide. On dissout le résidu dans 20 cm3 de solution normale d'hydroxyde de sodium et on ajoute la solution, en agi- tant, à 25 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne-un préci- pité blanc. Après'séchage on recueille 3,4 gr de produit.
Pouvoir
EMI15.2
inhibiteur (5 5 garrna/lem3 ) lr5ip EXEr,IPLE 12 On dissout 2,68 gr de l.lr.'-dihydroxy-alghbéta,..2t-té- traméthyl-stilbène dans 30 cm3 de pyridine anhydre.On'ajoute goutte à goutte en secouant, à -15 , une solution de 0,69 cm3 ¯d'oxychlorure de phosphore dans 5 cm3 de pyridine anhydre. Durée de l'addition : trois minutes. On abandonne le mélange à la tem- pérature ambiante pendant vingt heures au bout des/quelles le produit prend l'aspect d'une gelée. On l'hydrolyse alors au moyen de glace pilée et on chauffe à 85 pendant deux heures, ce qui donne une solution limpide.
On l'évapore sous vide, on dis- sout le résidu dans 20 cm3 de solution normale d'hydroxyde de sodium et on ajoute la solution obtenue, en agitant, à 25 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. On recueille après séchage 2,9 gr de produit. Pouvoir inhibiteur : (12 gamma/4 cm3) : 42%.
EXEMPLE 13
EMI15.3
On dissout 2,96 gr de i..l.'-dihydroxy-a1.pha.bêta-diéthyl-
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
gumma-méthyl-diphényl-.propane dans 60 cm3 de pyridine anhydre.
On ajoute en l'espace de dix minutes, à-15 , une solution de 1 anhydre cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 10 cm3 de pyridine/ On lais- se le mélange réactionnel dans le bain réfrigérant pendant qùa- rante-cinq minutes puis pendant soixante-dix heures à la tempéra- ture ambiante. On le verse dans 35 gr de glace finement pilée et on obtient une solution limpide. Après addition de 170 cm3 d'hy- droxyde de sodium 0,2 N on dialyse la solution à l'aide de trois fois vingt litres de solution de chlorure de sodium à 1%, en dix jours. On verse alors la solution dialysée dans 100 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N, ce qui donne un précipité blanc. On.sépare- ce précipité par filtration, on le lave à l'eau et on le sèche ' sous vide sur anhydride phosphorique.
On recueille 3,1 gr d'une poudre blanche qui se dissout facilement dans une solution d'hy- droxyde de sodium. Pourvoir inhibiteur (8 gamma/4 cm3) :50%.
EXEMPLE 14
EMI16.2
On dissout, 1,5 gr de 4*4'"dihydroxy-alpha.bëta-diéthyl- gamma-méthyl-diphényl-ppopane dans 25 cm3 de pyridine anhydre.
On ajoute en l'espace de huit minutes, à -15 , une solution de 0,46 cm3 d'oxychlorure de phosphore dans 10 cm3 de pyridine an- hydre. On laisse le mélange réactionnel dans le bain de refroidis sement pendant quarante-cinq minutes puis on le laisse reposer pendant soixante-dix heures à la température ambiante. Un le versé dans 20 gr de glace finement pilée ce qui donne une solution lim- pide.
Après addition de 80 cm3 d'hydroxyde de sodium 0,2 N on effectue une dialyse comme dans l'exemple 13. On verse la solu- tion dialysée dans 50 cm3 d'acide chlorhydrique 5 N; il se forme un précipité blanc qu'on sépare par filtration, qu'on lave à l'eau et qu'on sèche sous vide sur anhydride phosphorique. Un recueille 1,5 gr d'une poudre blanche qui se dissout facilement soluble
<Desc/Clms Page number 17>
dans une solution d'hydroxyde de sodium. Pouvoir inhibiteur (la gamma/4 cm3) : 50%.