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Procédé de préparation de nouveaux dérivés de la tétracycline.
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T , ",,"","""'O"""''-o ";"fo"'\,,"'n,......"''';'''''''''''' ......¯-,........,....."......... ,-. :1- -..........-......,.... -¯.....................v..... cc,-,ccrrc ............ préparation de nouveaux dérivés de la tétracycline et plus particulièrement de tétracyclines substituées pouvant être représentées par la formule générale suivante :
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dans laquelle R1 , R2 représentent H, N021 NH2, CN ou un halogène, à condition que R, et R ne soient pas @ ensemble H ou un halogène et que, quand R1 est un halogène, R ne soit pas l'hydrogène, et inversement, R représente H ou CH3 et R4 représente H ou OH.
Certains des nouveaux composés obtenus selon l'invention, par exemple les nitrotétracyclines sont préparées par réaction de la 6-déméthyl-6-désoxy-
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tétr--cycline, de la 6-désoxytétrcycline ou de la 5-hydroxy-6-désoxytétracycline avec le nitrate de potassium, de préférence en proportions molaires équi- valentes, et un acide minéral fort par exemple l'acide sulfurique, à une température de l'ordre d'environ -15 C à +15 C. On isole habituellement la nitrotétra- cycline résultante du mélange réactionnel sous forme du sulfate acide par précipitation par l'éther froid .
On peut obtenir la base libre en ajustant une solu- tion aqueuse du produit à un pH d'environ 4 à 6 par un alcali doux, à savoir par exemple le carbonate de sodium. On peut désigner le produit résultant par nitro-6-désoxytétracycline, nitro-6-déméthyl-6-
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désoxytétracycline ou nitro-.-hydroxy-6-désoxytétra- cycline, selon la matière de départ.
Quand on emploie comme matière de
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départ la 6-déméthyl-6-déso¯Lytétracycline, on a trouvé que le produit nitré résultant est un mélange que l'on peut séparer en deux composés distincts par cristallisation fractionnée. Par commodité, on dési- gnera ces derniers par "isomère A" et par "isomère B" de la nitro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline.
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On réalise l'isolement de la nitro--
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déméthyl-6-désoxytét='acycline-B du produit de nitra- tion brut par cristallisation fractionnée. On réalise une séparation grossière des composés organiques et minéraux sur le produit de nitration brut précipité à l'éther en utilisant l'éthanol comme sclvant. On sépare ensuite le produit organique en deux compo- sants en utilisant les différences de solubilité dans le méthanol des bases libres respectives. On isole la
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nitro-6-démthyl-6-désoxytétracycline-B sous forme d'un sulfate cristallisé dans la solution méthanolique et-on la purifie en formant la base libre, puis on recristall se la base libre de façon classique. Les deux composés diffèrent 1un de l'autre par leurs spectres et par leur activité.
La principale diffé- rence entre les spectres d'ultra-violat des isomères A et B de la nitro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline réside principalement dans la région de longueurs d'onde longues. Dans l'HCl 0,1 N, les maxima
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d'absorption de la nitro-6-démëthyl-6-désoxytétra- cycline-B sont à 350 m/u tandis que la nitro-6- dél1iéthyl-G-déso"ytétracycline-A absorbe à 360 m/u.
Dans NaB 407 0,1 DT, la nitro-6-dëméthyl-6-désoxy- tétracycline-B a un maximum d'absorption bien défini à 370 m/u tandis que la nitro-6-déméthyl-6-désoxy- tétracycline-A a un maximum d'absorption très large avec un léger sommet à 350 m .
Le spectre d'absorption d'infra-rouge de la nitro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline-B présente des bandes d'absorption nitro à 6,54 /u
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et à 7,46 /u, sensiblement - le,3 mêmes que celles de la nitro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline-A. Cepen-
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dant, la courbe complète d'inf'rz-r-uge de la nicr-- 6-déméthyl-6-déFoxytétracycline-H est par ailleurs différente de la courbe d'inf'ra-rou r de la nirrc- 6-déméthyl-G-ds0xytétracycline-.
On n'a pas encore démontré de façcn irréfutable la structure de la nitro-6-déméthyl-6- désoxytétracycline-A et de la nitro-6-déméthyl-n- désoxytétracycline-B mais on croit que les deux composés sont des isomères de position dans les- quels le groupe nitro est fixé sur le ncyau aroma- tique de la tétracycline en position ortho- par rapport au groupe hydroxyle dans un composé, et en position para- dans l'autre composé.
Les nitro-tétracyclines ainsi pré- parées peuvent être réduites soit chimiquement, soit catalytique.ment, pour former les amino-tétracyclines.
On peut conduire la réduction catalytique dans un solvant polaire tel que l'eau, un alcanol inférieur, par exemple le méthanol, l'éthanol, etc... un alcoxy
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inférieur-alcanol inférieur, par exemple le 2-tnéthoxy- éthanol, ou le 2-éthoxyéthanol ou un acide alcanoïque inférieur, par exemple l'acide acétique ou l'acide propionique en solution dans un acide minéral, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique et.en présence d'un métal noble catalyseur tel que du palladium, du rhodium, ou autre métal de la famille du platine, à l'état finement divisé.
On peut utiliser le métal pur ou sous forme d'un oxyde
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ou hydroxyde, et de préférence le catalyseur est en suspension dans un véhicule usuel tel que l'alumine finement divisée, le charbon de bois activé, la terre de diatomées. On peut conduire la réduction à des températures de l'ordre d'en- viron 10 à 40 et de référence a. la température ambiante qui est voisine de 25 et à des pressions d'hydrogène d'environ 1 à ) atmosphères.
On peut récupérer l'aminotétracycline ainsi préparée du mélange réactionnel par tout moyen désiré, par exemple par éliminstion du cata- lyseur et concentration de la solution. On évapore le produit à cec et on obtient l'aminotétracycline purifiée par précipitation dans le mélange éthanol.- acétate d'éthyle. On peut encore purifier le produit si on le désire par recristallisation dans l'alcool de façon classique.
On peut également réduire les nitr- tétracyclines en aminotétracyclines par un processus de réduction chimique dans lequel on met en contact la nitrotétracycline et un mélange producteur d'hydrogène, tel que du zinc métallique dans un milieu modérément acide tel que l'acide chlorhydrique, l'acide acétique etc... à une température d'environ 10 à 40 et pendant environ 15 minutes à 2 heures.
La concentration de la nitrotétracycline dans le milieu acide dépend de sa solubilité. Le sinc uti- lisé pour la réaction doit de préférence être sous une forme finement divisée, par exemple en poussière de zinc et on doit utiliser cette matière à raison
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d'environ 0,35 parties en poids de métal par partie en poids de la nitrotétracycline. Des proportions de métal supérieures à environ 5 parties en poids ne sont généralement pas nécessaires.
La solution ré- duite contient l'aminotétracycline désirée, que l'on peut récupérer de manière classique,
On peut ensuite convertir les amino- tétracyclines ainsi formées en les haloaminodésoxy- tétracyclines, par traitement par un agent halogénant tel qu'une N-haloamide, par exemple la N-b-omo- succinimide, la N-bromoacétamide, la N-bromo-phtal imide, la N-chlorosuccinimide ou la N-iodosuccini- mide, en présence d'un acide minéral concentré, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.
On conduit de préférence la réaction à (les tempé- ratures d'environ 0 à 20 jusqu'à achèvement de la réaction. Le produit résultant est une 6-désoxytétra- cycline ou une 6-déméthyl-6-désoxytétracycline di- substituées, selon la matière de départ utilisée.
Par exemple, on peut préparer l'amino-bromo-6- désoxytétracycline par réaction de l'amino-6-désoxy- tétracycline et de la N-bromo-sucoinimide dans les conditions spécifiées.
On peut également nitrer les amino- tétracyclines dans les conditions spécifiées ci- dessus pour former la nitrotétracycline mono-substi- tuée, en vue d'obtenir l'amino-nitro-6-désoxytétra- cycline. On peut également bromer les nitrotétra- cyclines en utilisant la N-bromo-succinimide par exemple, pour former une désoxytétracycline di.- substituée.
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Les nouveaux composés préparés selon l'invention sont des composés amphotères, et par suite on peut facilement en préparer les sels d'addition d'acide, c'est-à-dire les mono- et les di-sels (quand on utilise une aminotétracycline).
En général, les acides préférés sont les acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et ana- logues, bien qu'on puisse également utiliser des acides organiques tels que l'acide trichloracétique.
On peut préparer ces sels d'addition d'acide en traitant le composé amphotère avec environ 2 équi- valents ou plus de l'acide choisi. De préférence, on met en suspension la tétracycline dans un solvant convenable pendant l'acidification.
Les aminotétracyclines formées, soit par réduction catalytique, soit par réduction chimique, comme décrit ci-dessus, peuvent être diazotées par réaction avec l'acide nitreu:: pour former le sel de diasonium. On peut ensuite rempla- cer le groupe diazonium, en utilisant des processus classique par l'hydrogène, un hydroxy, un alcoxy, un halogène (réaction de Sandmeyer) un groupe cyano etc... Si on le désire on peut copuler le sel de diazonium avec des phénols et des amines tertiaires en milieu faiblement acide, neutre ou alcalin, pour produire des composés azo fortement colorés.
Les nouvelles tétracyclines préparées selon l'invention sont biologiquement actives, et ont le large spectre d'activité anti-bactérienne des
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tétracyclines déjà connues. Le spectre anti- bactérien de certains de ces composas, représentant la quantité nécessaire pour inhiber la croissance de divers bactéries typiques, a été déterminée de
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1Q fannr, claZS4--",. ",a. 1Q +-o,...hi,....,,:.. no, n-i11,t-ir\n ¯.¯.y,......,....... 1-r -- """"""."''''''''---1,'''''''''' -...... ------.......", sur agar communément utilisé pour l'essai des nouveaux antibiotiques. Les concentrations inhibi- trices minimum, exprimées en gamma par ce, vis-à-vis de divers organismes d'essai sont reportés dans le tableau ci-dessous.
A titre comparatif, on y a égale- ment inclu l'activité anti-bactérienne (le la tétra- cycline contre les mêmes organismes.
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jTétra-<Nitro-6-dé-)Amlno-6-dë- Amino-6-dL 0 r g a n i s m e cy- méthyl-6- iméthyl-6-dé-methyl-6- line ldéOXYtétra1oxytétracy- déoxytétrr# ,eycline-B çline-n- cyellne-h yeobacterium r3nae 1 0,25 0,5 0,5
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<tb> vcobacterium
<tb>
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smegmatis ATCC 607 1 0,5 0,5 1 IStaphylococcus aureus 209P 2 0,5 z 2
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<tb> Sarcina <SEP> Lutea <SEP> 1001 <SEP> 2 <SEP> 0,5 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Bacillus <SEP> subtilis <SEP> ATCC <SEP> 6633 <SEP> 0,5 <SEP> 0,25 <SEP> 0,25 <SEP> 0,25
<tb>
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Streptococcus pyogènes C203 0,5 0,25 0,5 0,5 Streptococcus 1.:
N ne' 250 31 3'!- 62 Staphylococcus iureus NY 4 O @ 17 2 1 10 Bacillus Cereus iJo.5 0,25 0, 1-?5 0,5 CI Pseudomonas aeru,inos;;. 8 il 8 Proteus vulçaric 8427 >1 1 EGcherichla coli t:rcc 6)'( ti 4 15 Salmonella Kalltnarurr) z 4 scherichla coli ilu.22 4 ? 4
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<tb>
<tb>
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Les nouveau, composes de la tétracycline obtenus selon l'invention ont une stabilité ccnsidé- rablement plus élevée vis-à-vis des acides et des alcalis que la tétracycline parente. De plus, les aminotétracyclines sont beaucoup plus solubles que le composé parent.
L'invention sera décrite maintenant plus en détail en référence aux exemples particuliers suivants.
EXEMPLE 1.
Préparation du produit de nitration brut
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de la 6-déméthyl-6-désoxytétracycline.
A une solution de 900 mg (2 m moles) de chlorliydrate de 6-:léméthyl-6-déao.¯ytétracyelire (J.A.C.S. 80 - 5324, 1958) préparé par mise en contact u'une solution dans un solvant polaire de 6-déméthyltétracycline (J.A.C.S. 79, 4561 1957) avec de l'hydrogène en présence d'acide borique et d'un métal nble catalyseur jusqu'à ce qu'environ une mole d'hydrogène ait été absorbée par mole de 6-démé-
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"'-.-J"" -....... "'--.:1 -"",--...l.J.C:;; dans 5c vC d'H230 4 concentré à G", on ajoute 200 mg (2 m moles) de KNO3 On agite la solution réactionnelle brun clair à 0 pendant 20 minutes. On verse graduellement cette solution froide dans 1 litre d'éther diéthylique à 5 . L'addition est effectuée à une vitesse maintenant la température de l'éther entre 5 et 10 .
Le svlide jaune-clair qui a précipité immédiatement, se dépose graduellement dans la solution éthérique. On décante la plus grande partie de la solution et on filtre le solide, on le
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lave à l'éther froid (quatre fois 10 cc) et on le sèche sous vide à température ambiante pendant 4 heures. Poids de solide : 1,01 g.
On dissout 200 mg du produit de nitration ci-dessus dans 5 cc de H20 en agitant.
On ajuste la solution brun-clair (pH 1,3) à pH 5,0 avec Na2CH3 2N. Il précipite un solide jaune brunâtre. On laisse ce mélange sous agitation dans un bain de glace pendant une heure. On filtre le solide, en tant que base libre), on le lave à H2O (trois fois 5 cc) et on le sèche sous vide à 60 pendant 4 heures. Poids : 80 mg point de fusion avec carbonisation 197 .
Analyse : calculée pour C21H21N3O9.H2O (494,4) : C 50,9 ; H 5,08 ; N8,46; H20 7,26. Trouvé : C 50,63; H 4,84; N 8,79 ; H20 (perte au séchage),5,29.
Le spectre d'ultra-violet de ce prouuit est de caractère différent de celui de la 6-déméthyl-6-désoxytétracycline de départ. Dans l'acide chlorhydrique 0,1 N il y a une diminution de 5 m de la longueur d'onde courte d'absorption à 262 m/u tandis que dans la longueur d'onde longue d'absorption il y a une augmentation de 10 m/u à 355 m/u. Le spectre d'infra-rouge, qui est également différert de celui de la 6-déméthyl-6-désoxytétracy- cline, présente des bandes d'absorption de groupe nitro à 6,56 u et 7,45 /u .
EXEMPLE 2.
Séparation du produit de nitration brut en
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isomères A et B de la ni trJ-6-déméthyl..6-dé::;ox:.'.. tétracycline.
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On chauffe à ébullition au bain-marie une suspension de 11,78 g du produit de nitration
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précipité à l'éther de la 6-dds!cthyl-6-désoxytétra- cycline dans 500 cc d'éthanol absolu. On filtre immé- diatement la matière insoluble, on la lave à l'éthanol absolu chaud (deux fois 25 cc), puis à l'éther (trois fois 50 cc). On sèche le solide à l'air à température ambiante. Poids 3,70 g. On réunit le filtrat éthanoli- que trouble et les lavages à l'éthanol et on les évapore sous vide à sec , à 30. Poids 8,1 g.
On délaye le résidu solide de l'évapo- ration d'éthanol dans 300 ce de méthanol (pH dans l'eau 2 5) puis on ajoute de la triéthylamine jusqu'à ce qu'on atteigne un pH de 5,0 (dans H20); on filtre un solide cristallisé insoluble jaune foncé, on le lave au méthanol (2 fois 5 cc) et on le sèche sous vide à 60 pendant une heure pour obtenir 2,78 g de
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nitr-6-cléméthyl-6-désoartétracycline-a. On réunit le filtrat méthanolique et les lavages et on ajuste le pH à 1,8 avec HSO, 6 N. Après refroidissement de la solution dans un bain de glace, un solide cristal- lisé jaune clair (bouquets semblables à des aiguilles) commence à précipiter.
On agite le mélange dans un bain de glace pendant 2 heures, puis le solide est filtré, lavé à l'éther (5 fois 10 ce) et seché sous vide à 60 pendant une heure pour donner 1,8 g de
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nîtro-6-déméthyi-6-àéi-o>;ytétracyrciine-B.
EXEMPLE 3.
Préparation de la base libre nitro-6-déméthyl-
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^- 6-désoxytétr.cycline-B.
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On agite 500 mg du sulfate de la nitro-
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r--ddméthyl-6-déso,-,ytétracycline dans 20 ,^. ;eat;. On filtre une petite quantité de solides insolubles à travers un adjuvant de filtration sur un entonnoir en verre Fritte. On ajuste le filtrat jaune limpide (pH 1,7) à pH 5,2 avec Na2Co3 2N. Il. précipite un solide jaune partiellement cristallisé. On chauffe le mélange à environ 80 sur un cône de vapeur, puis on le refroidit au bain de glace. Le solide apparaît encore très fin et reste suspendu en solution. On congelé alors la sus- pension dans un bain glace sèche-méthyl cellosolve.
Après maintien de la congélation pendant une heure encore, on laisse le mélange se réchauffera température ambiante. On lave le solide filtré à l'eau (deux fois 5 cc). On place le solide sous vide à température ambiante jusqu'au lendemain puis on le sèche à 60 pendant une heure. Poids 284 mg.
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EXEMPLE 4.
Recristallisation de la base libre nitrc-
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6-déméthvl-G-,-,ésox.,,-téurp-cicline-B. -- On chaufve ,7u 'z)-2in-,,narie un mélange -le 70 mg de la base libre (produitde l'exemple 3). On sépare par filtration à chaud ,,nE- petite quantité ..'un solide amorphe insoluble. Le filtrat.. qui est devenu trouble pendant la filtration, est réchauffe en une solution limpide; par refroidissement lent à la tempé- rature ambiante il précipite un solide cristallisé jaune (en bouquets analogues à des aiguilles). On filtre le solide,, on le lave avec 1 cc d'eau et on
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le sèche sous vide à Go 0 pen-lant une ;'-1fure.
Poids : 37,2 mg.
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On chauffe une, portion -le cette base
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libre ;3nns du tolupne dans un appa-reillaee d'extraction Soxhlet. Le bouilleur contient de l'hydrure de calcium et on soumet au reflux pendant 4 heures la solution
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toluénique jaune. On suit ce rocCGus en vue '..slimlnc:r toute l'eau Je cri:::;tal1ibdi0n du compose.
On obtient un solide jaune que l'on chauffe à 140 pendant 2 heures Nous vide puis que l'en analyse Immédiatement.
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Analyse : calculée pour CL1H"1Pd J 9 - 0,-2 moite toluène.
C 5G,2. H 4,70; N 8..34, 0 U>0,¯,.
Trouvée : C 55,94; H 5 47; N 8,68; 0 (direct). 29.73.
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;n::; HC1 C 1 N il .:1b::::orption :::x:i!:1um
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.'ultra.-violet est à 50 m % u . Dans Na?]j40 0.1 l'absorption maximum d'ultra-violet est à bzz70 1Tl/U. Le spectre u'ini'ra-rouge présente des oandes d'absorption de groupe nitro à 6,54 /u et 7,46
EXEMPLE 5.
Préparation du chlorhydrate de nitro-6-
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lémé thr1-G-âso:ytétraez; cline-B. une suspension de 250 mg de la base libre préparée à l'exemple 4 ans 25 cc de n-butanol on ajoute 7 gouttes .le HCl concentré. On filtre une petite quantité de solide insoluble et au filtrat jaune limpide on ajoute 7 autres gouttes d'HCl concentré. La solution que l'on refroiditdans un bain de glace se- trouble légèrement mais il ne précipite aucun solide.
Au chauffage à 30 , en grattant la paroi . il commence de précipiter un solide cristallisé jaune clair (en bou-
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Quets semblables à des îi;;u:; 11 es). Une rois que le
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mélange est resté au froid (4 ) toute la nuite, on filtre le solide, on le lave avec quelques gouttes de n-butanol et on le sèche sous vide à 1000 pendant 3 heures. Poids : 223 mg.
EXEMPLE 6.
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Préparation de l'amino-(,-déméthyl-6- .JésoxyrtétracN-Cbne-,4.
On met en suspension 51 mg de base nitro-6-Géméthyl-6-déso:ccétracycliae-A, préparée comme l'exemple 2, dans 5 cc d'éthanol absolu. A cette solu- tion on ajoute 3 gouttes d'acide chlorhydrique 6 N. Le solide se dissout graduellement. On ajoute 5 mg d'oxyde de platine à la solution jaune limpide. On secoue vigoureusemcnt le mélange sous atmosphère d'hydrogène pendant 10 mn, moment auquel un léger excès par rapport au volume théorique d'hydrogène a été absorbé. On filtre la solution et on lave le catalyseur 2 fois avec des volumes de 2 cc d'éthanol absolu. On réunit le filtrat et les lavages et on concentre la solution combinée à sec sous vide. On sèche le résidu solide jaune foncé sous vide à 60 pendant une heure.
Le rendement en produit est de 40 mg.
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0,1 N HC1 215, 265, 348 zou, 0,1 N N NaOH 241 , 270 , Y('7 "n /U. max 41, 270, 5'tT u.
EXEMPLE 7.
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Préparation de l'amino-6-déméthrl-6- gésoxytétracyclinc-B¯ ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ On répète le processus de l'exemple
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précédentj sauf que l'sn emploie la base nitro-6- déméthyl-6-désoxytétracycline-B préparée a l'exemple 2
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au lieu de l'isomère A. Le temps nécessaire pour l'hydrogénation est d'environ 1 heure. On isole le produit comme à l'exemple 2 pour obtenir l'amino-6-
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ùéinéthyl-6-àésoxytétracycline-B biologiquement active.
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\ 0,1 N HCl 2'8 26"). j 5a 1'I1/u , \ max \ 0 ,1 N NaOH 241, 270, 385 m,a .
EXEMPLE 8.
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Préparation de la nitro-6-ciéso-r:-tracycline.
On suit le processus de 3'exemple 1, sauf que 932 mg (2 m-moles) de chlorhydrate de 6-désoxy- tétracycline (J.A.C.S. 80, 5324, 1958), préparé par mise en contact d'une solution de tétracycline dans un solvant pclaire avec de l'hydrogène en présence d'acide borique, et d'un métal noble catalyseur jusqu'à ce qu'environ 1 mole d'hydrogène ait absorbé par mole de tétracycline, sont dissous avec agitation dans 50 cc d'acide sulfurique concentré à 0 . A la solution réactionnelle brun fonce on ajoute peu à peu, en agitant, 200 mg ( 2 m-moles) de nitrate de potassium.
Après cette addition la couleur de la solution s'est
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éclaircie en je-une foncé. On poursuit l'Dgitation de la solution réactionnelle à 0 pendant environ 5 minettes, puis on la verse peu à peu dans un litre d'éther à 0 en agitant, à une vitesse maintenant la température entre 0 et 10 . Il précipite un solide jaune clair que l'on filtre, lave à l'éther, (4 fois 100 ce ) et sèche sous vide pendant 2 heures à température ambiante.
Poids : 850 mg.
On dissout 50C mg du produit de nitra- tion ci-dessus dans 10 cc d'eau. ±. la solution brun foncé
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on r'T..jCUltL' =o¯1f± i=,nent ,01 t \1Y\Ç. t"".,1, 11""" -1 AY'" ("1 nnnAnt-'YI&. de carbonate le sodium pour atteindra un pH Te 5 C.
Il précipite un solide jaune biréfringent, que l'on filtre, lave à l'eau (5 iois 2 cc) et sèche sous vide à 60 pendant 2 heures. Poids 260 mg. Point de fusion, avec carbonisation, 198 .
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anal;; se : calculée pour C22H2>N,C3.2.yG (50g,= ) .
C 51,9; H 5,34; N 8,25; H20 7,06.
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Trouvé : C 52,18; H 5 15 fez,29; -12 0 (perte au séchage) 4,41.
Le spectre d'ultra-viclet de ce
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composé, comparé à celui de la 6-::éso:{;rtétracyclir¯e dans HCl 0,1 N présente un déplacement dans les longueurs d'onde courtes de 269 m à 262 m et dans
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les longueurs d'ondes longues, de .;;45 m/u à 360 m/u.
Le soectre d'infra-rouge présente des bandes d'absorp- tion de groupes nitro à 6,55 /u et 7,43 .
EXEMPLE 9.
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Préparation du sulfate de litro-6-,iésoxj/- tétracycline.
On prépare une solution de 6-désoxy- tétraycline en ajoutant lentement 1,00 g (0,0021 mole)
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de chlorhydrate de 6- éso:;:rtétraúycline dans 40 cc d'acide sulfurique concentré, froid. On agit''' cette solution et on ajoute 216 mg (C,0021 mole) de nitrate de potassium sur une période de 5 mn, le ballon étant maintenu dans un bain de glace. On agite la solution pendant 10 mn et on ajoute 216 mg supplémentaires de nitrate de potassium comme ci-dessus. Aprs agita- tion pendant 25 autres minutes, on verse lentement la
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solution sur 400 g ,le glace en agitant. On extrait la solution aqueuse résultante par le n-butanol.
On lave l'extrait organique à l'eau et on l'évapore sous vide jusqu'à formation d'un précipité. On recueille ce sulfate (0,75 g). R = 0,56 (n-butanol : pH 2 ; au phosphate).
EXEMPLE 10.
Préparation de l'amino-6-désoxytétracycline.
On agite une solution de 10 mg de sulfate de la nitro-6-désoxytétracycline, préparé comme à l'exemple 9 dans 5 ce d'eau et on ajoute un excès de couple zinc-cuivre. On maintient le pH entre 2 et 3 par addition d'acide chlorhydrique 1,0 N.
On agite le mélange pendant 15 minutes et on débarrasse la solution de l'excès de zinc par filtration pour obtenir l'amino-6-désoxytétracycline. @ 0,1 N HCl
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enr amno- - esoxv racyc / max 7, 263, 346 m u, ,'t. 0,1 N NaCH 244, 277, 37C m u m/u..' max m/u.
EXEMPLE 11.
Préparation du disulfate d'amino-6-désoxytétra- cycline. un 'iycrogène à température ambiante et pression atmosphérique une suspension de 645 mg de sulfate ,le nitro-6-désoxytétracycline dans 65 cc d'étha- nol avec 65 mg de dioxyde de platine et 3 gouttes d'acide sulfurique concentré. L'absorption d'hydrogène
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est de 3 moles par mole de nitro-6-désoxytétracycline.
On filtre le catalyseur de la solution que l'on évapore à petit volume. On ajoute un excès d'éther et on recueil- le le bisulfate d'amino-6-désoxytétracycline précipité (600 mg). Rf = 0,03 (n-butanol : pH 2, tampon au phosphate).
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EXEMPLE 12.
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Préparation du bisulfate G'amino-btomo-6- .16sox.vtétr,acycline.
A une solution de 100 mt; de bisulfate d'amino-6-désoxytétracycline dans 40 ce d'acide sulfurique concentré on ajoute, en agitant dans un bain de glace, 32 mg de 'T-bromo-succinimide. On agitez, la solution pendant 30 mn et on la verse lentement dans 100 cc d'éther anhydre froid, en agitant. On
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recueille le bisulfate J'a;nino-bromo-6-àéòx>rtétra- cycline résultant et on le lave à l'éther anhydre froid.
Poids 108 MF,, -:1 = 0,45 (n-butanol : pH 2- tampon ai phosphate).
EXEMPLE 13.
Préparation du bisulfate d'amino-nitro-
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6-cisoxIt trn-cycline.
A une solution froide de 100 mg de bisuJfate d'amino-6-désoxytétracycline dans 4 cc d'acide salfurique .concentré , on ajoute 16 mg de nitrate .le potassium, en agitant. On maintient le ballon dans un bain de glace et on agite la solution pendart 5 inutes. Au bout de ce temps on l'ajoute lentement, en agitant, à 100 ce d'éther anhydre @roi.
On recueille le solide, on le lave à l'éther et on le dissout dans du méthane? anhydre. On siltre cette solution, on l'évapore à petit volume et on ajoute un excès d'éther pour précipiter le bisulfate d'amino-
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nitro-6-ûésoxytétracycline. On recueille celui-ci et on le lave à l'éther. Poids 65 mg. R.=0.45 (n- butanol : pH 2, tampon au ohosphate).
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EXEMPLE 14.
Procuration du sulfate de bromo-nitro-6-
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iÓrethvl-6-dGoxvtétracycline(isomère A).
On dissout z20 rng (2 m-moles) de nitro-6- déméthyl-Ó-aésoxytétracycline (isomère A) dans 0 cc i'ü2,0 concentré à o'. ' la solution agitée froide. on ajoute 256 mu (2 m-moles) de :c T 1........w-..-.-,...-....' - . 1.. On agite le mélange réactionnel à 0 pendant 30 mn. On verse le mélange réactionnel brun foncé froid dans 1,1 litre d'éther agité (à 0') à une vitesse maintenant la température au-dessous de 5 . Il précipite un fin solide jaune clair que l'on filtre par succion et qu'on lave à l'éther (trois fois 50 ce). On sèche le solide souc vide à température ambiante pendant 2 heu- res. Poids 1,27 g.
EXEMPLE 15.
Préparation du salfate de bromo-nitro-6-
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düméthyl-6-Jésoxytétracycline (isomère B).
On dissout 130 mg (0,3 ^:-mole ) de nitre-6-ùsméthl-&-désox:-tétrccline (isomère B) dans 3 cc d'H2SU concentré à 0". A la solution on ajoute 59,3 mg (0,3 m-mole) Je N-bromo-succinimide. On laisse la solution au froid (1 ) sous r.gitation pendant 45 :.minutes. On verse la solution r4a?tion;elle brun ronce froide dans 150 cc d'éther agité à 0 à une vitesse maintenant la température au-dessous de 5 . On filtre le solide jaune clair qui précipite on le lave à l'éther froid (3 fois 5 cc) et on le sèche sous vide à 60 pendant une heure. Poids . 170 :g.
<Desc/Clms Page number 20>
EXEMPLE 16.
Préparation du bisulfate de bromo-amino-6-
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àéméthiil-6-àéso,;Vtétracycline (isomére B
On dissout 92 mg d'amino-6-déméthyl-6- déoxytétracycline (isomère B) dans 3 cc d'H2SO4 concentré à 0 . A la solution brun foncé on ajoute 37,5mg de N-bromosuccinimide. On agite le mélange réactionnel à 0 pendant une heure, puis on le verse dans 150 cc d'éther agité à 0 à une vitesse mainte- nant la température au-dessous de 5 . Le solide bistre brunâtre qui précipite est filtré, lavé à l'éther froid, et séché sous vide à température ambiante pendant 3 heures. Poids 64 mg. Rf:0,73 (n-butanol : pH 2, tampon au phosphate).
EXEMPLE 17.
Préparation du sulfate de bromc-nitro-
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6-désoxytétracycline.¯¯¯¯¯¯¯¯¯ Une solution de 60,5 mg (0,1 m-mole) de sulfate de oromo-6-désoxytétracycline (préparée par bromuration de la 6-désoytétracycline dans l'acide sulfurique concentré au moyen d'un équivalent de N-bromosuccinimide) et 10,1 mg (0,1 m-mole) nitrate de potassium dars 2,0 ce d'acide sulfurique concentré est agitée à la température du bain de lce pendant 10 minutes. On verse lentement la solution dans 50,0 cc d'éther froid et il se dépose 45 mg de solide.
R = 0,81 (n-butanol : pH 2, tampon au phosphate).
EXEMPLE 18.
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Préparation du sulfate, de bro:t;o-nitro-6-déGo;.:y- 6-déméthrl-té tracVCli ¯
<Desc/Clms Page number 21>
Une solution de 59,1 mg (0,1 m-mole)
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de sulfate de bromc-6-déso;:y-6-déméthrltétracycline (préparée par bromuration de la 6-dcsoxy-6-d'3éthylté- tracycline dans l'acide sulfurique concentré par un équivalent de N-bromo-succinimide) et 10,1 mg (0,1 m- mole) de nitrate de potassium dans 2,0 cc d'acide sulfurique concentré est conservée au bain de ;;lace pendant 10 minutes. On ajoute lentement le mélange réactionnel à 100 cc d'éther froid. Le solide qui se sépare pèse 54 mg.
EXEMPLE 19.
Préparation du bisulfate d'amino-bromo-6-
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.àé s oxy-6 -démé thyl té tracYC 1 ir.e . a une solution de 20 mg de sulfate de bromo-nitre-6-âésoxy-6-.iéméthyltétracycline dans 3,0 ce d'eau on ajoute un excès de couple Zn/Cu. On agite le mélange à température ambiante pendant 15 mn, temps pendant lequel on maintient le pH de la solu- tion à 3 par addition d'acide sulfurique 0,1 N, si nécessaire. On filtre la solution et on sèche le filtrat par congélation. On triture le résidu avec du méthanol et on le filtre. On évapore le filtrat à sec sous pression réduite ce qui donne 6.0 mg de
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matière. R =-- 0,21 (n-butanol;Dii 2 tampon au phosphate).