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Il NOUVEAUX DERIVES DE TETRACYCLINE ET LEUR PREPARATION"
La présente invention concerne des améliorations et des modifications au procédé de préparation de nouvelles aminotétracyclines selon le brevet principal.
On a décrit dans le brevet principal un procédé pour la préparation de dérivés de tétracycline contenant un groupe amino en position 7 et/ou en position 9 dans lesquels est l'un au moins desdits groupes amino est substitué par un ou deux radicaux de formule :
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dans laquelle R3 et R4 sont Identiques ou différents et re- présentent des atomes d'hydrogène, des groupe alkyle Inférieure aryle, aryle substitué, arylalkyle ou arylalkyle substitué, ledit procédé consistant :
a) à faire réagir une tétracycline ayant un groupe amino en position 7 et/ou en position 9 dans lequel le groupe amino peut être formé in situ, avec une ou deux moles par groupe amino d'un réactif pour l'introduction d'un reste alkyle, arylalkyle ou arylalkyle substitue, capable de former une liaison carbone-azote sur l'atome d'azote de l'amine; b) et, si nécessaire, séparément ou simultanément aveo l'étape a), à faire réagir le produitde .'étape a) avec l'hydrogène pour réduire une liaison insaturée carbone-azote ou pour rem- placer par l'hydrogène tout radical autre que l'hydrogène sur la portion alkyle du groupe alkyle, arylalkyle ou arylalkyle substitué;
à la condition que lorsqu'il y a un atome d'oxy" géne carbonyle sur le carbone lié à l'azote aminé, le produit de l'étape a) mis à réagir avec l'hydrogène, est seulement une
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7- et/ou 9-formylaminotëtraGyolinej et, c)lorsque l'on utilise deux moles de réactif alkylant ou arylalkylant par groupé amino, la seconde mole peut être in- troduite séparément ou- simultanément avec la formation de la liaison carbone/azote et/ou la réaction avec l'hydrogène.
On a trouvé selon la présente in- vention que lorsque l'on met en oeuvre le procédé du brevet principal en utilisant une 7-aminotétracycline, le produit peut
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être un mélange de 7-monoalkylamino- et de 7-dialkylamino- tétracyclines, et lorsque l'on utilise une 9-amino-tétracycline, le produit peut être un mélange de 9-mono-alkylamino- et 9- dialkylaminotétracyclines.
Ceci est illustré par les exemples A à G ci-dessous. En outre, si on utilise une aminotétracyoline de départ qui a été préparée de telle manière que l'on a abouti à un mélange d'une 7-aminotétraoyeline et d'une 9-aminotétra- cycline, le procédé du brevet principal mis en oeuvre *,avec ce mélange comme matière première , peut aboutir à un mélange cor- respondant de produits.
La présente invention concerne un pro- cédé amélioré pour la préparation d'aminotétracyalines N-subs- tituées dans lesquelles le groupe amino est en position 7 du noyau tétracycline; l'invention concerne en outre un moyen per- fectionné pour obtenir un composé préféré appartenant à la classe desdites 7-(aminosulbstitué)-tétracyclines, à savoir la 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline, sous une nou- velle forme cristallisée, stable.
Le mode de mise en oeuvre do.la pré- sente invention pour l'obtention de 7-(amino-substitué)-té- tracyolines concerne un nouveau procédé d'alkylation réductrice, pour la préparation de composés,de formule générale suivante ;
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dans laquelle R6 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle et R7 un groupe mono(alkyl inférieur)-amino ou di(alkyl infé- rieur-amino. Selon la présente invention, les composés répon- dant à ladite formule générale sont préparés en faisant réagir un composé de formule générale :
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dans laquelle R6 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, X un atome de brome, de ohlore ou de fluor, et R un groupe aryle.- avec un composé carbonylé de formule générale
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dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe allcyle inférieur et R2 un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle in- férieur, en présence d'un agent réducteur, Des groupes arylazo
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(R-N-N- dans la formule précédente) appropriés pour la mise en oeuvre du nouveau procédé selon la présente invention, peuvent
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être par exemple des groupes :
phénylazo, 2-sultophénylazo, 27 àiitrophénylazo, p-chlorophênylazo, -bomophénylazo, 2,5-di- chlorophénylazo, 2-naphtylazo, 1-naphtylazo, 2,4-dinitrophénylazo, 2-acétamidophénylazo, etc.
Il est bien entendu que le terme "alkyle infériaur" utilisé dans la présente desoription couvre tous les groupes alkyle ayant jusqu'à environ 6 atomes de carbone. Par conséquent, les aldéhydes et cétones utiles dans la mise en oeuvre du nouveau procédé d'alkylation réductrice selon l'invention comprennent par exemple formaldéhyde, acé- taldéhyde, propionaldéhyde, n-butyraldéhyde, iso-butyraldéhyde acétone, méthyléthylcétone, diéthylcétone, etc.
Des matières premières caractéristiques à utiliser dans le nouveau procédé selon l'invention comprennent :
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7-phénylazo-Ila-bromo-6-désoxytétracycline, 7-p-cyanophènylazo-ila-bromo-6-désoxytétracycline, 7--ehlorophênylazo-11a-bromo-6-désoxytétraayeline, 7;,phénylazo-21a-ehloro-6-désoxytétraeyeline, 7-2-sulfophénylazo-Ila-chloro-6-désoxytétracycline, ?-p-nitrophénylazo -ila-ehoro-6-désoxytétraoyeline, 7-±-bromophénYlazo-l1a-fluoro-6-désoxytétracyol1ne 7-(2,5-dichlorophénylazo)-1,la-fluoro-6-dôsoxytétracyolin<µ 7-(2-naphtylazo)-ila-fluoro-6-désoxytétracyaline, .Ù/µf' 7-(3-n1tro-4-méthylphénylazo)-11a-bromo-6-déméthyl-6- désoxytétracycline,
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7- 2-nitro-4-ohlorophnylazo -.1,-b oto='s. d:
et..-;.. désoxytétracycline, 7-(2-nitrophénylazc)-lla-bromo-6-déméthj?l-f-désoxy- ¯ tétracycline,
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7-phénylazo-1la..ch3oro-6-démétaahyl=-dsoxytdtxscycii.ns 7-E-sulfophénylazo-.la-chloro-6-démétiy3.-6-désoxy- tétracycline, 7-E-nitrophdnylazo-12a..ehloro-6-déméthy.-6.ddsoxy- tétracycline, 7-n-carboxyphénylazo-lia-fluoro-6-déméthyi-6-désoxy- tétracycline, 7-n-aoétamidophényiazo-ila-fiUoro-6-déméthyi-6-désoxy- tétracycline, 7-(2,4-dinitrophénylazo)-lla-fluoro-6-déméthyl-6-dé- soxytétracyclines,; et les analogues.
Los 7-arylazo-ila-halogéno-6-désoxy- tétracylines de départ pour le nouveau procédé de la présente invention peuvent être préparées en traitant une suspension
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aqueuse d'une Ila-halogéno-6-désoxytétracycline appropriée par une solution ou suspension aqueuse d'un sel d' aryldiazc'n1um à une température d'environ -10 à environ 50 C et dans une gamme de pH d'environ 4 à environ 10. Les conditions exactes qui sont les meilleures dans un cas donné dépendent en grande partie de la stabilité et de la réactivité du sel de diazonium utilisé, ainsi que du pH du mélange réactionnel.
Les sels d'aryl-diazonium appropriés pour l'utilisation dans le nouveau procédé d'alkylation réductrice selon la présente invention,
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sont essentiellement ceux qui contiennent un substituant atti- rant les électrons tels que :; nitro-cyanato, sulfo, cyano, car- boxy, thiocyanato ou halogéno liés au noyau aromatique en ortho ou para par rapport à la fonction diazonium. A titre d'exemple des arylamines correspondantes on peut citer : ani- line ; p-chloroniline; p-bromaniline, 2,5-dichloraniline; 2,5- dibromaniline; p-nitroaniline; o-nitro-aniline, 3-nitro-4- toluidine; 2-nitro-4-chloraniline; 2,4-dinitroaniline; p-naph- tylamine;a-naphtylamine; acide sulfanilique, benzidine et aoé- to-p-phénylène-diamine.
On pourra trouver des détails concernant la préparation des sels de diazonium dans des ouvrages de référence tels que "A.C.S. Monograph Series n 127, The Chemistry of Synthetic Dyes", Rheinhold Publishing Corp., New York (1955) pp, 96-109.
La, caractéristique essentielle du nouveau procédé d'alkylation réductrice selon l'invention ré- side dans la spécificité de la réaction de copulation; le composé 7-phénylazo étant formé exclusivement, plutôt qu'un mélange des composés 7- et 9-phénylazo.
D'autres moyens de synthèse, tels que la nitration de la 6-désoxytétracycline, comme décrit dans J.A.C.S. 82, 1253 (1960), par J.H. Bouthe et Coll., conduisent à un mélange des isomères 7- et 9-nitro, La proportion relative des isomères 7- et 9-nitro produits par nitration est variable et dépend dans une certaine mesure, mal connue, de la nature de la 6-désoxytétracycline utilisée comme substrat ; l'absence ou la présence d'un groupe méthyle
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en position 6 par exemple, influençant fortement la proportion des deux isomères produits.
Il est surprenant de voir qu'un mé- lange d'isomères semblable n'est pas formé lorsque l'on copule un sel de diazonium avec une 6-désoxy-tétracycline,
Les 11a-halogéno-6-désoxytétracyclines intermédiaires peuvent être facilement préparées par halogéna- tion dans la position . 11a des 6-désoxytétracylines corres- pondantes, par les méthodes générales décrites dans le brevet des E.U.A. n 2 984 686.
Des agents d'halogénation appropriés pour l'utilisation dans ce procédé comprennent le brome, le chlo- re, les N-chloro- et N-bromoamides d'acides alcanoïques infé- rieurs, par exemple N-chlro- et N-bromo-acétamides, les imides d'acide dicarboxylique, par exemple N-chloro et N-bromosucci- nimide; les N-alkanoyl inférieur-anilines, par exemple le N- chloroacétanilide; les 3-ohloro-, 3-bromo-, 3,5-dichloro et 3,5-dibromo-5,5-diméthylhydantoïnes; et les hypochlorites d'al- kyle inférieur. Pour l'introduction du fluor, on utilise le fluorure de perchloryle.
Le nouveau procédé d'alkylation ré- ductrice selon l'invention peut être mis en oeuvre par réduotion chimique ou catalytique utilisant des procédés qui sont bien connus des spécialistes. La réduction catalytique qui convient particulièrement pour l'alkylation réductrice de la tëtracy- cline de départ précédemment citée, peut être effectuée dans un solvant de la tétracycline de départ, en présence d'un com- posé carbonyle et d'un oatalyseur métallique et d'hydrogène
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gazeux à des pressions égales ou supérieures à la pression atmosphérique. Habituellement, l'alkylation réductrice est ef- fectuée commodément aveo des pressions d'hydrogène d'environ 1 à 4 atmosphères.
La température ne semble pas critique dans l'hydrogénation oatalytique, Des températures de 0 à 50 C et habituellement la température ambiante, sont préférées car elles donnent les meilleurs résultats. Le catalyseur métallique peut être un composé d'un métal oourant comme le chromite de nickel ou de ouivre, ou bien un composé d'un métal noble comme le pla- tine,le palladium ou le rhodium, finement divisé. Les cataly- seurs à base de métal noble sont avantageusement utilisés sur un support tel que l'alumine finement divisée, le charbon acti- vé, la terre de diatomées etc.; et sont couramment disponibles sous cette forme. L'hydrogénation est effectuée jusqu'à ce que la quantité désirée d'hydrogène gazeux soit absorbée et on ar- rête l'hydrogénation en ce point.
Les solvants choisis pour la réaotion catalytique doivent être inertes vis-à-vis de la réaction, c'est-à-dire qu'ils ne sont pas capables de réagir avec les matières de départ, le produit de réaction ou l'hy- drogène dans les conditions de réaction. On peut utiliser divers solvants à cet effet et les essais de laboratoire permettent de choisir un solvant approprié pour une tétracycline de départ particulière.
En général, l'alkylation réductrice cata- lytique peut être effectuée dans des solvants tels que l'eau, les alcools inférieurs, par exemple le méthanol et l'éthanol; les (alcoxy inférieurs)-alcanols inférieurs, par exemple le
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2-méthoxyéthanol, le 2-éthoxyéthanol, le tétrahydrofurane, le dioxane, le diméthylformamide, etc..,
On peut utiliser divers agents ré- duoteurs chimiques dans le procédé d'alkylation réductrice, comme indiqué dans le brevet principal,
De même, les produits sont obtenus à partir des mélanges réactionnels d'alkylation réductrice par des procédés standards, tels que ceux décrits dans le brevet principal.
Les composés caractéristiques que l'on peut préparer par le nouveau procédé d'alkylation ré- ductrice selon la présente invention comprennent par exemple :
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7-méthylamïno-6-désoxy-6-déméthyltétracyclîne, 7-diéthylamino-6-désoxy-6-déméthyltétracycline, 7-îsopropylamino-6-désoxy-6-déméthyltétracycline, 7-diméthylamîno-6-désoxy-6-déméthyltétracycline, 7-méthyiamino-6-désoxytétracyoline, 7-diéthylamino-6-désoxytétracycline, 7-Isobutylamïno-6-désoxytétracybline, et 7-di-n-butylam1no-6-désoxytétracycl1n.
Les tétracyclines selon la présente invention sont biblogiquement actives et possèdent l'activité antibactérienne à large spectre des tétracyclines antérieure-
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ment connues. En particulier, la 7-diméthylamino-6-désoxy-6- déméthyltétracycline possède une activité orale et parentérale extraordinaire contre Staphylococcus aureus, souche de Smith,
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et le Stphylooocous aureus, souche Rose, responsables en particulier de certaines , infections chez les souris. Cette activité est traitée en détail dans le brevet principal.
Les tétracyclines selon¯l'invention sont des composés amphotères et par conséquent on peut facile- ment préparer leurs sels d'addition d'acide, c'est-à-dire des
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sels mono- et di-fonetionnels. Les acides préférés sont les acides pharmaoeutiquement acceptables,non toxiques, par exemple les acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique et l'acide sulfurique, et les analogues, bien qu'on puisse également utiliser des acides organiques tels que l'acide trichloracé- tique. Les sels d'addition d'acide peuvent être préparés en traitant les nouvelles tétracyclines avec environ 1 à 2 équi- valents de l'acide choisi dans un solvant approprié.
Cependant, selon un autre mode de mise en oeuvre, la présente invention prévoit une forme cris-
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tallisée stable de la 7-diméthylamino-6t-déméthyl-6-désoxyté- tracybline et plus particulièrement, le chlorhydrate de 7- diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracyoline dihydraté et un nouveau procédé pour sa préparation.
Ce procédé est particulièrement in- téressant pour transformer des formes amorphes de la 7-dimé- thylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline en une forme cris- talline. Le procédé est également utile pour améliorer la
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pureté de la 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-dééoxytétracycline.
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Il en résulte que le produit a un meilleur aspect, il convient mieux à une application thérapeutique et en outre le produit est plus stable. Le produit le plus purifié convient mieux pour les applications thérapeutiques parce que les matières étrangères qui peuvent être présentes dans certains cas pro- voquent des effets secondaires physiologiques indésirables.
La 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-dé- soxytétracycline est amphotère, car elle a à la fois des grou- pes acide et basique dans sa molécule et en conséquence, elle réagit parfois comme un acide et parfois comme une base. En outre, elle a certaines propriétés très spéciales, à cause d'une tendance à une polymérisation partielle ou des réarrangements, en particulier une 4-épimérisation qui inactive la 7-diméthyl-
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amino-6-déméth,1-6--désoxytétraoyallne à moins qu'elle soit soumise à un traitement particulièrement doux.
Bien que, comme on l'a indiqué ci-
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dessus, la 7-dlméthylamino-6-déméthtl-6-désoxytétracycline puisse être produite sous des formes thérapeutiques utiles, par les méthodes ordinaires de cristallisation dans des sol- vants organiques, on a trouvé que les rendements sont relati- vement médiocres, de sorte que ces procédés, si on les emploie commercialement, augmentent nettement le prix de revient de
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la 7-diméth,ylamino-6-d6méthyl-6-désoxytétracycline thérapeu- tiquement acceptable. En outre, une 4-épimérisation importante se produit quand on emploie ces méthodes. La chromatographie d'adsorption donne un produit satisfaisant, mais du point de vue commercial, la chromatographie d'adsorption est beaucoup
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plus incommode et coûteuse que le nouveau procédé de l'invention.
Un objet de la présente invention est de préparer la 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxyttra- cycline sous une forma thérapeutiquement active avec le rende- ment pratique le plus élevé et d'une manière aussi bon marché et efficace que possible. En outre, la présente invention a également pour objet de préparer le chlorhydrate de 7-diméthyl-
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arino-&déméthyl-6=désoxytétracyeline dihydraté avec les modi- fications les moins coûteuses et les moins gênantes du procédé préliminaire de purification.
Suivant le procédé de la présente invention il est possible de mettre en oeuvre les étapes pré- liminaires uans des conditions identiques et d'effectuer la transformation dans la forme finale désirée peu de temps avant l'isolement final de la substance purifiée, de sorte qu'une modification importante du procédé n'est pas nécessaire pour obtenir le chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6- désoxytétracycline dhydraté,
Selon la présente invention, on
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dissout la 7-diméthylamino-6-démdthyl-6-désoxytétracyclîne amorphe et/ou impure dans l'eau à une concentration comprise entre environ 5% en poids et la concentration de saturation.
Pour les meilleurs résultats, on préfère dissoudre la 7-di-
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méthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline dans l'eau à une à 'concentration d'environ 20%/environ 25% en poids. A ce point, on sépare les substances insolubles par filtration et la so- lution peut être ensuite clarifiée, si on le désire, par trai- tement par le charbon actir , la terre de diatomées, etc.
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Le pH de la solution clarifiée est ensuite ajusté à erviron 2 à 6 par l'acide chlorhydrique ou le gaz chlorhydrique, après quoi la oristallisation du chlorhydrate de 7-diméthylamino-6- déméthyl-6-désoxytétracycline dihadraté commence.,
On met en oeuvre tout le procédé à une température de la solution d'environ Ce à environ 80 C; mais on obtient de meilleurs résultats à 'une température de 20 à environ 30 C. Pour les meilleurs résultats, on préfère ajus- ter le pH de la solution clarifiée à environ 3,5-4,0.
Après la
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cristallisation du chlorhydrate de 7-diméthyl-amino-6-déméthyl- 6-désoxytétracyeline dihydraté, on obtient les meilleurs ré- sultats en faisant mûrir la suspension du sel dans la solution à une température d'environ 0 à environ 10 C pendant une pé- riode de temps d'environ 1 heure. Le produit, le chlorhydrate
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de 7-diméthylamino-6-déméthyi-6-désoxytétraeycline dihydraté, est ensuite récupéré de la suspension par tous moyens appro- priés tels que filtration ou centrifugation, et séché.
Il est tout à fait surprenant que le chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétra- oyoline dihydraté cristallise aussi facilement en solution aqueuse pour donner un produit de pureté et d'activité éle- vées, tandis que d'autres sels de la 7-diméthylamino-6-démé- thyl-6-désoxytétracycline tels que le sulfate, le phosphate, le maléate, le tartrate et les analogues ne sont pas satis- faisants en raison, soit d'une récupération avec un faible rendement, soit d'une perte d'activité due à la 4-épimérisa- tion.
De plus, même le dichlorhydrate de 7-diméthylamino-6- déméthyl-6-désoxytétracycline n'est absolument pas satisfaisant
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car c'est un produit amorphe, Il est particulièrement inté- ressant que toutes les autres méthodes de cristallisation du
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chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracyclile à partir de solvants organiques par exemple, donnent des pro- duits amorphes, impurs ou qui, pour d'autres raisons, ne sont pas satisfaisants pour l'utilisation dans les formes d'admi- nistration.
Le nouveau prooédé de la présente invention, d'autre
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part, donne un chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-démôthyl-6- désoxytétraoyoline dihydraté de pureté élevée, de manière très facile et aveo peu ou pas de 4-épimérisation,
Le chlorhydrate de 7-diméthylamino..
6-déméthyl-6-désoxytétracycline dihydraté paut être déshydraté par étapes, d'abord en monohydrate et ensuite en sel anhydre, Cependant, ces deux formes sont hygroscopiques et se trans- forment à nouveau en dihydrate dans une atmosphère humide.
Les exemples A à G illustrent la préparation des (amino-substitués)-tétracyolines selon le pro- cédé déorit dans le brevet principale procédé dans lequel on obtient des mélanges de produits.
EXEMPLE A
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7wéthlamlno et -8iméth lamino-6-désoxv-6-dêméth¯yl.ttétracyline Une solution de 792,9 mg (1,5 milli- mole) de sulfatera 7-amino*-6-désoxy*-6-àôméthyltôtracycline dans 90 cm3 de méthyl-cellosolve, 1,5 cm3 de solution aqueuse à 40% de formaldéhyde et 300 mg d'un catalyseur à 10% de pal- ladium sur charbon, est hydrogénée à la température ambiante
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et à la pression atmosphérique. La fixation de 1 à 1,5 équi- valents d'hydrogène est complète au bout de 1 à 2 heures. Le catalyseur est séparé par filtration et la solution orangée est versée dans 1,5 litre d'éther sec.
Le précipité est séparé par filtration, bien lavé à l'éther sec, et séché; il pèse 391 mg. Le titrage par turbidimétrie donne 852 gammas par cm3.
83 mg de la matière sont chromatographiés sur de la terre de diatomées neutre utilisant un système de partage heptane-acé- tate d'éthyle-méthanol- eau dans le rapport de 45 : 55 15 : 6.
Le composé est sous forme de base libre, le pH de l'échantillon est de 5. Le produit est élue dans le second volume de retenue et pèse 15 mg;.il consiste en un mélange de 7-méthylamino et
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7-diméthyiamino-6-désoxi-6-déméthyltétraoµéline.
Analyse : Calculée pour C22507N3 : N : 9,45; N-CH 3(3) 10,:1.5.
Trouvée N : 9,71; N-CH3(3): 10,04.
Le titrage par turbidimétrie donne 219 gammas par cm3, R 0,65 (nitrométhane: benzène: pyridines pH 3,4 tampon-20 : 10 : 3 : 3.).
EXEMPLE B
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7-môthmlamino et -diméth lamino-&-désox -6-déméth 1-tétrae - cline
Une solution de 527 mg de sulfate
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de 7-amino-6-désoxy-6-déméthyltétraoyoline, 0,25 cm3 d'acide formique à 97% et 0,2 cm3 de solution à 37% de formaldéhyde, est chauffée au reflux pendant 2 heures. Le mélange est re- f roidi et repris dans 100 cm3 d'eau. La chromatographie sur
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papier révèle la présence de la 7-méthylamino-et 7-diméthyla-
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m1no..6-désoxy-6-<1mthYltétac#ol1né'êt de leurs 4-épitlères.
EXEMPLE CL 7-méth lamino-6-désox -6-déméth ltétrac eline Une solution de 278,7 mg de sulfate de 7-Ritro-6-='désoxy-6-démëthyltétracyoline dans '15 cm3 de mém thyl cellosolve à 03,ce (7% d'eau), 0,75 cm3 de solution aqueuse à 40% de formaldéhyde et 50 mg de catalyseur à 10% de pallae dium sur charbon, est hydrogénée à la température ambiante et à la pression atmosphérique. La fixation est complète (4 égui- valents) au bout de 2 heures. Après élimination du catalyseur
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par fîltration, la solution est versée dans 300 em3 d'éther rec. Le précipité est recueilli par filtration, bien lavé à l'éther sec et séché; il pèse 200 mg. Le produit est un mé-
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lange de 7-méthylamino- et 7-diméthyiamino-6-àésoxy-6-à±mé- thyltétracyclîne.
Le titrage par turbidimétrie donne 1ÓOO gammas par cm3.
EXEMPLE D
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9-méthvlamino et -diméth lamino-6-désox -6-déméth ltétrac eline Une solution de 233,5 mg de chlorhy- drate de 9-a;ino-6-désoxy-6-déméthyl-tétracyeline dans 8 cm3 d'acide chlorhydrique méthanolique 0,1 N, 15 cm3 de méthylcellosolve, 0,5 cm3 de solution aqueuse à 40% de formaldéhyde et 100 mg de catalyseur à 10% de palladium sur charbon, est hydrogénée à la température ambiante et à la pression atmos- phérique. La fixation de 1 à 1,5 équivalent d'hydrogène est complète en moins d'lune heure. Le catalyseur est séparé par
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filtration et la solution est versée dans 250 om d'éther sec.
Le précipité est bien lavé à l'éther sec et séché, Il pèse 171 mg. Le produit est un mélange de 9-méthylamino et de 9-
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diméthylamino-6-d6soxy-6-déméthyltétraoyoline, EXEMPLE E 9-méth lamino et -.diméth lamino-6-dCSOx -6dêméth î,étracvc- Une solution de 114,8 mg de 9-nitro- 6-désoxy-6-ddmdthyltétracycline dans 20 em3 de méthanol conte- nant 2,5 em3 d'acide chlorhydrique méthanolique 0,1 N.fj 0 om' de solution aqueuse à 40% de formaldéhyde et 50 mg de cataly- seur à 10% de palladium sur charbon, est hydrogénée à la tem-. pérature ambiante et à la pression atmosphérique. La fixation est complète (85% de la théorie) en une heure. Après filtra- tion du catalyseur, la solution est évaporée jusque siccité, Le produit obtenu pèse 1'5 mg.
Le produit est un mélange de
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9-méthylamino et 9-diméthylamîno-6-ddsoxy-6-déméthyltétraoyellnes EXEMPLE y Z-éthvlamino et 1-diéthylamino-6-désoxy-6-déméthyltétracycline
Une solution de 396 mg de sulfate de 7-amino-6-désoxy-6-déméthyltétracycline dans 50 cm3 de méthyl-cellosolve, est hydrogénée à la température ambiante et à la pression atmosphérique, en utilisant 2 cm3 d'acétal- déhyde et 150 mg de catalyseur à 10% de palladium sur charbon.
La fixation s'arrête au bout de 3 heures, le catalyseur est séparé par filtration, et la solution est versée dans 750 cm3 d'éther sec. Le précipité est séparé par filtration, bien
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lavé à l'éther sec et séché; il pèse 64 mg. Le produit est un
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mélange de 7-éthylamino et de -diéthylamino..6..désoxy-6-dêmQ- thyltétracycline, EXEMPLE G
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7-éthl--amina et -diêth lamino-6-désox -6-déméth ltétrae aline Dans 30 cm3 de méthylcellosolve, on met en suspension 560 mg de sulfate de 7jhnitro-6-désoxy-6-dé- méthyltétracycline, 2,1 cm3 d'acide sulfurique 1 N, 1 cm3 d'a- oétaldéhyde et 100 mg de catalyseur à 10% de palladium sur charbon. Le mélange est secoué avec de l'hydrogène pendant 1,5 heure, et le catalyseur est ensuite séparé par filtration.
Le filtrat est versé dans 400 cm3 d'éther environ et un solide légèrement coloré précipite. Après filtration et séchage le produit pèse 182 mg. Le produit est un mélange de 7-éthylamino-
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et de 7-d!.éthylamino-6-désoxy-6-déméthyltétracycline,
Les exemples suivants illustrent la présente addition, sans toutefois en limiter la portée.
Exemble 1
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Prért1on de la l1a-chloro-6-déméthyl-6-désoxxtétraeycline
On évapore à siccité à la température ambiante et sous vide une solution de 4,0 g (9,68 millimoles) de 6-déméthyl-6-désoxytéracycline dans 280 ml de méthanol et 300 ml de benzène. On ajoute encore 100 ml de ber.,zène au résidu et on évapore à nouveau le mélange à siccité. Le solide résiduel est immédiatement dissous dans le même ballon dans 120 m1 de dioxane purifié. Ce dioxane est purifié de la manière
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suivante; on distille sur de l'hydrure de calcium frais du dioxane conservé sur hydrure de calcium.
On recueille la frac- tion ayant une gamme d'ébullition de 101 à 102 C. Cette subs. tance est exempte de peroxyde et sensiblement anhydre. A la solution de 6-déméthyl-6-désoxytétracycline dans le dioxane, on ajoute 1,416g (10,6 millimoles) de N-chlorosuccinimide dans 20 ml de dioxane. On agite le mélange pendant 1 minute au cours de laquelle le test à l'iodure de potassium pour la présence de chlore devient négatif. On débarrasse par filtra- tion la solution du solide formé. On dilue le filtrat avec 1 400 ml de Skellysolve C et on agite. On filtre le produit on le lave avec du Skellysolve C et on sèche à 35 C et sous 2,5 mm Hg pendant environ 10 heures pour donner 3,9g de la
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l1a-chloro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline avec un rendement de 90%.
Exemple 2
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Préparation de la 11a-chloro-6-désoxytétraccline
On dissout un total de 1,617g (3,8 millimoles) de 6-désoxytétracycline, séché comme décrit dans l'exemple 1, dans 50 ml de dioxane purifié. On ajoute une so- lution de 0,555g (4,18 millimoles) de N-chlorosuccinimide dis- sous dans 8 ml du dioxane. Le mélange obtenu est traité exactement comme décrit dans l'exemple 1 pour donner .,5g
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de la ila-chloro-6-désoxytét-racycline, avec un rendement de 86,5%.
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Exem le
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luoration de la 6-déméth 1-6-désox tétrao cline en position 1Âa
On obtient une solution de 4,15 g (0,01 mole) de 6-déméthyl-6-désoxytétraoycline dans 250 ml de méthanol et 40 ml d'eau lorsque l'on traite la bouillie par 15 ml d'une solution 0,787N de méthylate de sodium dans le méthanol (0,0118 mole). On refroidit la solution à 0 C dans un bain de glace et de sel, ce qui provoque la formation d'un lé- ger précipite fin. On fait barboter vigoureusement du fluorure de perchloryle dans le liquide agité, sous atmosphère d'azote, pendant 20 minutes, pendant ce temps le pH tomb.. à 7.
Une par- tie aliquote de mélange réactionnel présente un rapport des
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absorptions à 271 mu et 354 mau de 615 (dans l'acide O,IN), ce qui indique que la fluoration est sensiblement totale. On chasse l'excès de fluorure de perchloryle par l'azote et on évapore le mélange réactionnel sous vide en chauffant doucement jusqu'à environ 50 ml. On ajuste le pH de la solution relative- ment claire à 4,5, et il se forme un précipité abondant. Après mûrissage à la secoueuse pendant 2 heures, on filtre les matières solides et on lave successivement par 10 ml d'eau froide, par le méthanol froid et 6 fois par l'éther. Après séchage sous vide, on obtient 2,53g de substance brun clair.
Exemple 4
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Copulation de la l1a-chloro-6-déméthxl-6-désoxytétracycline avec le sel de diazonium¯de l'acide sulfanilique On met en suspension un total de 3,0 g (6,7 millimoles) de 11a-chloro-6siéméthyl-fi-désoxytétra-
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cycline dans 150 ml d'eau, On amène la suspension à pH 7,5 avec environ 3,5 ml de NaOH 0,5N. On agite la suspension elaire à 0-5 C pendant environ 30 minutes, Le sel de diazonium de l'acide sulfanilique est préparé de la manière suivante on prépare une solution de 0,39g (3,68 millimoles) de carbonate de sodium anhydre dans 27,5 ml d'eau. On ajoute 1,408 g(7,35 millimoles) d'acide sulfanilique monohydraté et on chauffe le mélange pour effectuer la dissolution.
On refroidit la solution à 0-5 C et on la mélange ensuite avec 0,555g (8,0 millimoles) de nitrite de sodium dissous dans 3 ml d'eau, On verse ce mélange dans 7,7 g de glace pilée contenant 1,5 ml (18,8 mil- limoles) d'HCl concentré et on maintient le mélange dans un bain de glace. Les cristaux blancs du sel de diazonium précis pitent de ce mélange. Le pH de la suspension de lia-chloro-6-
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déméthyl-6-désoxyt6tracycline est réajusté à 7,5 par NaOH 0,5N, On ajoute ensuite il ml de solution de Na2CO3 0,5N pour élever le pH à 8,5. On ajoute lentement la suspension du sel de dia- mnium tandis que le pH est maintenu à 7,5 par addition de Na2CO3, 0,5N. On obtient une solution totale et on l'agite pendant environ 2 heures à 0-5 C.
On enlève ensuite le bain de glace et on acidifie la solution à 2,7 par HCl concentré.
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Le solide brun obtenu, la 11acloro-6-dméthyl-6-dsoxy-7-p- sUlfophénylazotétracyol1ne, est centrifugé, lavé à l'eau et séché à 3500 sous 2,5 mm pendant 16 heurés pour donner 2,831g . de l'acide libre, avec un rendement de 66%.
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Exemple 5
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Copulation de la Ila-chloro-6-désoxytétracycline avec le sel de diazonium de J'acide sulfanïligue
On met en suspension un total de 1,5g (3,34 millimoles) de lla-chloro-6-désoxytétracyoline dans 72 ml avec /d'eau. On ajuste la suspension à pH 7,5/environ 3,8 ml de NaOH,
0,5N. La majeure partie de la substance passe en solution après agitation, à 0-5 C pendant environ 20 minutes. On prépare une
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solution de 0,189g (1,75 millimcle) de Na2C03 dans 13,4 ml d'eau, A cette solution on ajoute 0,68g (3,54 millimoles) d'a- cide sulfanilique monohydraté et on chauffe le mélange pour effectuer la dissolution. On refroidit cette solution à 0-5 C et ensuite on la mélange avec 0,268 g de NaN02 (3,98 millimo- les) dissous dans 2 ml d'eau.
Ce mélange est versé dans 3,8g de glace pilée contenant 0,75 ml (8,2 millimoles) d'HCl concen- tré et maintenu dans un bain de glace. Les cristaux blancs du sel de diazonium précipitent de ce mélange. On réajuste le pH
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de la solution de lla-ohloro-6désoxytétraoycline à 7,7 par NaOH, 0,5!, On ajoute ensuite 5,5 ml de solution de Na2CO3 0,5N pour amener le pH à 8,5. On ajoute lentement la suspen- sion de sel de diazonium et on maintient le pH à 7,5 par Na2CO3 0 5N. On agite ce mélange pendant lh 1/2 à 0-5 C. On retire ensuite le bain de glace et on acidifie la solution à pH 1,5 par HCl concentré. Le solide est centrifugé, transvasé dans un entonnoir, lavé à l'eau et séché à 35 C sous 2,5 mm pendant
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16 heures.
Le produit séché, la lla-chloro-6-désoxy-7-p-sulfo- phénylazotétracycline pèse 0,937g.
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Exemple 6
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Copulation de la li,a..ohloro-6-désoxytétracycline avec le sel de diazonium de la -nltrniline ¯ ¯¯¯,¯¯¯¯
On prépare une suspension de 0,484g de p-nitraniline dans 22 ml d'eau et 0,76 ml d'HCl concentré.
On ajoute 1/2 g de glace pilée et on maintient le mélange à 0-5 C en utilisant un bain de glace. On ajoute ensuite à la suspension de p-nitraniline 0,27g de NaN02 dissous dans 5ml d'eau. La! majeure partie du solide passe en solution. Cette solution du composé de diazonium de la p'nitraniline est ajou-
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tée lentement à une solution de 1,5g de lla-chloro-6-désoxy- tétracycline, On agite la solution de oopulation à 0-5 C pen- dant environ 30 minutes. On retire le bain de glace et on amène le pH à 3,5 par HCl concentré. La solution est diluée avec un égal volume d'eau.
Le produit qui s'est formé, la lla-chloro-
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6-désoXY-7-p-nitrophénylazotétracycline, est centrifugée, trans- vasée dans un entonnoir, lavée à l'eau et séohéeà 350C sous 2,5 ml pendant 16 heures pour donner 1,68 g de produit, ren- dement 84,5%.
Exemple 7
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Copulation de la lla-fluore-6-déméthyl-6-désoxytétracyoline avec le sel de diazonium de l'acide sulfaniliaue
On prépare une bouillie d'acide sul- fanilique diazoté en dissolvant 0,48g (0,0025 mole) d'acide sulfanilique et 0,133g de carbonate de sodium anhydre dans 5 ml d'eau, par l'action de la chaleur. On refroidit la solution, on ajoute 0,19 g de nitrite de sodium et ensuite on verse la
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solution dans 2,5g de glace et 0,5g d'HCl concentré contenu dans un Bêcher placé dans un bain de glace.
Le sel de diazonium précipite et on l'ajoute goutte-à-goutte sous forme d'une bouillie) à 0-5 C à une solution froide de 0,66g (0,002 mole)
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de iia-riuoro-6-dêméthyi-6-déxoxytétracycline dans 15 ml de solution de carbonate de sodium 0,5N et 4 ml de NaOH, 0,5N.
On ferme le récipient et on l'agite dans un bain de glace pen- dant 2 heures à 0-2 C. On ajuste le pH à 2,7 et on agite le mélange pendant 15 minutes à la température ambiante. Les substances solides qui ont précipité après ajustage du pH sont séparées par filtration et lavées par une faible quantité d'eau puis un mélange 4:1 d'éther-méthanol, Après séchage, le produit pèse 1,08 g.
Exemple 8
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Alkylation réductrice de la lla-chloro-6-déméthyl-6-désoxy- 7-p-sulfophénylazotétracycline en 6-dém4thyl-6-désoxy-?-dimô- thylaminotétracycline
On met en suspension 2g de lla-chlo-
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ro-v-déméthyl-6-désoxY-7-p-sulfophénylazotétraoycline dans 40 ml de méthanol et 6 ml de H2SO4 2N. On ajoute ig de palladium à
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5% sur carbone(htide à 50 ) et 7 ml de formaldéhyde (37%).
On réduit le mélange dans un appareil à secousses de Parr pen- dant 2 heures à 26 C. La quantité totale d'hydrogène absorbée est de 6,9 kg. On filtre le catalyseur et on le lave avec 5ml de méthanol. On. ajoute lentement le filtrat dans un bêcher oontenant 800 ml d'acétone préalablement refroidi à -10 C. Le solide jaune clair précipité est filtré, lavé avec 2 portions
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de 5 ml d'acétone et séché à 35 C sous 2,5 mm pendant environ 16 heures pour donner 1,55g du produite avec un rendement de 79,5%.
Exemple 9
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Alkylation réductrice de la Ila-chloro-6-diméthyl-6-d6soxy-7-p- sulfophénylazotétraoyoline en 6-déméthyl-6-désoxY-7-dîmêthyl- aminot6tracMeline ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯<#<# , On met en suspension 19 de lla-chloro- 6-déméthyl-6-désoxy-7-p-sulfophériy.azotétracyeline dans 1 ml de méthanol et 3ml de H2S04, 2N, On ajoute 0,5g de oatalyseur à 5% de palladium sur oarbone (50% humide), Le mélange est réduit dans un appareil à seoousses de Parr à 27,5 C. La réduction est to- tale en 1 heure pendant laquelle 2,26 kg d'hydrogène ont été résorbés. Le catalyseur est ensuite filtré et lavé avec 1ml de méthanol. On ajoute au filtrat 0,5 g de catalyseur frais et 3,5 ml de formaldéhyde (à 37%).
On oontinue la réduotion pendant encore une heure pendant laquelle le mélange absorbe encore 2,44 kg d'hydrogène. Le oatalyseur est filtré avec 1 ml de mé- thanol. Le filtrat et la liqueur de lavage sont ajoutés lente- ment à 400 ml d'acétone préalablement refroidis à -10 C. Le précipité jaune très clair est filtré, lavé avec 3 ml d'acétone froid et séché à 35 C sous 2,5 mm pendant 16 heures, pour donner 0,76 g de produit avec un rendement de 76%.
Exemple 10
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Alkylation réductrice de la lla-chloro-6-désoxY-7-p-nitrophényl- azotétrae cline en 6-désox - -diméth laminotétrac cline On met en suspension 1 g de 1.1a-chloro- 6-désoxY-7-p-nitroph6nylazotétracycline dans 25 ml de méthanol
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et 3 ml de H2SO4, 2N, On ajoute ensuite 0,5g de catalyseur à 5% de palladium sur charbon (50% humide) et on suit le mode opératoire de l'exemple 9. La solution de 7-diméthylamino-6- désoxytétracycline est versée dans 500 ml d'acétone froid (à -10 C), Le produit est très soluble dans l'acétone.
On ajoute ensuite de l'éther et le précipité est séparé par fil- tration, lavé à l'éther et séché à 35 C sous 2,5 mm pendant 16 heures pour donner 0,512g de produit (rendement 48%).
Exemple 11 Méthylation réductrice de la 7-amino-6-désoxy-6-déméthylté-
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tracycline pour donner la 7-diméthylamino-6-désoxy-6-déméthyl- tùtracycline
Une solution de 792,9 mg (1,5 milli-
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mole) de sulfate de ?-amino-6-dêsoxy-6-déméthylt;étraeycline dans 90 ml de méthylcellosolve, 1,5 ml de solution aqueuse de formaldéhyde à 40% 1 et 300 mg de catalyseur à 10% de palla- dium sur charbon, est hydrogénée à la température ambiante sous la pression atmosphérique. L'absorption de 1,5 équivalents environ d'hydrogène est totale en 1 à 2 heures. Le catalyseur est séparé par filtration et la solution orange versée dans 1,5 1 d'éther anhydre. Le précipité est séparé par filtration,, bien lavé à l'éther anhydre et séché ; ilpèse 391 mg.
L'analyse turbidimébrique donne 852 gammas par ml. On effectué la chro- matographie de 83 mg de la substance sur de la terre de diato- mée neutre en utilisant un système heptane-acétate d'éthyle-mé- thanol-eau dans la proportion 45:55:15:6. On obtient le composé
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sous forme de base libre, le pH de l'échantillon est de 5,0.
Le produit est élué dans le second volume de retenue, et pèse 15 mg.
L'analyse turbidimétrique donne
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2 190 gammas par ml, Rr 0,65 (nitrométhane:benzène:pyridlne:tam- pon pH 3,4 - dans la proportion de 20:10:3:3).
Exem le 12 Méthylation réductrice de la 7-amino-6-désoxy-6-déméthyl-té-
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tracycline pour donner la 7-diméthylamino-6-désoxy-&-démëthyl- , tétracycline.
On chauffe au reflux pendant 2 heures une solution de.527 mg de sulfate de 7-amino-6-désoxy-6-démé- thyltétraoycline, 0,25 ml d'acide formique à 97% et 0,2 ml de solution de formaldéhyde à 37%. Le mélange refroidi est repris dans 100 ml d'eau. La chromatographie sur papier révèle la pré-
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sente de 7-diméthylamino-6-déxoxy-6-déméthyltétracycime et de son 4-épimère.
Exemple 13 Méthylation réductrice de la 7-nitro-6-désoxy-6-déméthyltétra-
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cycline pour donner la 7-diméthylamino-6-désoxy-6-déméthyité- tracycline.
Une solution de 278,7 mg de sulfate
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de 7-nitro-6-dësoxy-6-déméthyltétraeyeline dans 15 ml de mé- thylcellosolve à 93% (7% d'eau), 0,75 ml de solution aqueuse de formaldéhyde à 40% et 50 mg de catalyseur à 10% de palladium sur charbon, est hydrogénée à la température ambiante sous la pression atmosphérique. L'absorption est totale (4 équivalents) en 2 heures.
Après séparation du catalyseur par filtration, on
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verse la solution dans 300 ml d'éther anhydre, Le précipité est recueilli par filtration, bien lavé par l'éther anhydre et séohé; il pèse 200 mg, Exemple 14 Procédé préféré pour la préparation de chlorhydrate de 7-dimé-
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thmino-6-déméth1-6-désoxétracyc11ne dihYdraté
On met en suspension 7 g (15 milli- moles) de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline base dans 15 ml d'eau (pH 5,85) et on ajoute 15 ml (15 millimoles) d'HCl 1N. A pH 4,6, la solution est sensiblement claire, et à pH 4,4 la précipitation commence. Le pH final est de 3,3.
On sépare une substance semi-solide de couleur foncée, flottant à la surface du mélange réactionnel et on constate que cette dernière présente une teneur élevée (6,2%) en épimère. Le pro- duit est mûri pendant 1 heure à 0 C, ensuite recueilli par filtration et séché sous 0,003 ml à 25 C.
Rendement 5,62g (79%). Ce produit et la substance de départ donnent l'analyse suivante :
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<tb> Substance <SEP> de
<tb>
<tb> départ <SEP> Produit
<tb>
<tb> analyse <SEP> biologique <SEP> -------------- <SEP> 955 <SEP> #/mg.------ <SEP> 940 <SEP> #/mg.
<tb>
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épimère ----------------- 17'/mg.------- 8 */mg.
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<tb> isomère <SEP> ----- <SEP> 9- <SEP> ------- <SEP> trace <SEP> ---------- <SEP> 0
<tb>
Exemple 15 Préparation de chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl- 6-désoxytétracycline dihydraté cristallisé.
On met en suspension 500 mg (1,1
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millimole) de 7-diméthylamind-6-déméthyl-6-désoxytétracycllne
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base dans 1 à 2 ml de HCl 0,1N et on ajoute HCl 3N jusqu'à ce que le pH atteigne 2,6. Le précipité cristallisé qui s'est formé est mûri pendant 30 minutes à la température ambiante et ensuite pendant 15 minutes à 0 C, recueilli par filtration et séché. Rendement 280 mg (52%).
Exemple 16
Procédé de purification du chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-
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démé$rl-6-déscx tétrae nline dihydraté
On met en suspension environ 900mg du produit résiduel de la préparation du monochlorhydrate de 7- diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline dihydraté cris- tallisé, dans 3 ml d'eau et on ajuste le pH à 1,3 par HCl 1,0 N. On ajoute du "Darco" à la solution résultante et après 15 minutes, on filtre le mélange sur Celite n 512. Le filtrat est ajusté par NaOH à PH 3,7 et il se sépare alors un précipité cristallisé. Le mélange est refroidi dans un bain de glace et le précipité est recueilli, lavé à l'acétone et séché. Rende- ment 540 mg (60%).
Exemple 17 Hydratation du chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-
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dés ?xytétra.cyo 1 ine monohydraté
On mesure la vi@esse et le degré d'absorption d'eau à 24 C sur un échantillon de chlorhydrate
EMI30.3
de 7-diméthyiamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline contenant 3,8% d'eau (monohydrate). Pour un échantillon en couche mince, la teneur en humidité à l'équilibre est atteinte en 20 à 30 minutes.
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<tb> Humidité <SEP> relative <SEP> Teneur <SEP> en <SEP> H2O <SEP> à <SEP> l'équilibre
<tb> 15% <SEP> 7,48 <SEP> %
<tb>
<tb> 19% <SEP> 7,56 <SEP> % <SEP>
<tb>
<tb> 44% <SEP> 8,25 <SEP> % <SEP>
<tb>
Les teneurs en eau à l'èquilibre sont légèrement supérieures à la valeur théorique (6,98%) pour un dihydrate, L'absorption d'humidité est réversible.
L'échantillon en équilibre a une humidité relative de 44%, perd rapidement du poids à 20% d'humidité relative jusqu'à une teneur finale en hu- midité de 7,64%.
Exemple 18 Préparation du chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6- désoxytétracycline dihydraté cristallisé
A 45 ml d'eau, on ajoute 15 g de chlo- rhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline et on achève la dissolution par addition d'HCl concentré. La solution est traitée par du Darco et du Magnésol et filtrée.
Le pH du filtrat est élevé jusqu'à 4,0 par de la soude. Le précipité cristallisé est recueilli, lavé à 1!eau, et séché à 25 C et environ 8% d'humidité relative. Ce produit et la subs- tance de départ donnent l'analyse suivante :
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<tb> Substance <SEP> de
<tb>
<tb> départ¯¯¯ <SEP> Produit
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> épimère <SEP> ---------- <SEP> 21,5 <SEP> #/mg <SEP> ------- <SEP> 11,0 <SEP> /mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> isomère <SEP> 9- <SEP> ------- <SEP> 0 <SEP> --------------- <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> teneur <SEP> en <SEP> H2O <SEP> --------------------------------- <SEP> 6,85%
<tb>
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Exemple 19
EMI32.1
Préparation du sulfate de bis(7-diméthylamJno-6-déméthyl-6- désox tétrae eline ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯, Dans 2 ml d'eau,
on dissout 500 mg de disulfate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétracycline, La solution est traitée par quelques mg de magnésol et filtrée.
Le pH du filtrat est élevé à 3,9 par NaOH 5N. Le précipité cris- tallisé qui s'est formé est recueilli et séché (rendement 10,6mg).
L'élévation du pH à 6,5 provoque la précipitation d'un produit amorphe; ainsi ajuste-t-on le pH à 4,0 et la solution est con- centrée jusqu'à environ la moitié de son volume. Par mûrissage à 4 C, cette solution donne environ 6mg de produit cristallisé.
L'élévation du pH à 6,5 provoque la séparation de 36 mg de pro- duit amorphe, le rendement en sulfate de bis-(7-diméthylamino- 6-déméthyl-6-désoxytétracycline) est trop faible pour que ce procédé ait une application pratique quelconque.
Exemple 20 Préparation du maléate de 7-diméthylamino6-déméthyl-6-ùésoxy- tétracycline ¯¯¯¯¯
On dissout un mélange de 0,443 g
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(0,1. millimole) de -diméthylamino-6-déméthyl-6-désoxytétra- cycline base et 0,116 g (0,1 millimole) d'acide maléique dans l'eau et la solution est amenée à siocité dans un'évaporateur rotatif 40 C. On dissout une portion de 0,40 g du résidu solide dans 12 ml d'éthanol absolu au reflux et la solution est filtrée et maintenue à -10 C pendant une nuit. Le solide
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qui s'est formé a été recueilli par filtration, lavé à l'éther éthylique et séché à 25 C sous 0,002ml. Le produit (0,21 g) = 53%), se révèle être cristallisé sous le microscope polarisant.
- Le produit et la substance de départ donnent l'analyse sui- vante :
EMI33.1
<tb> Substance <SEP> de
<tb> départ <SEP> Produit
<tb> analyse <SEP> biologique <SEP> --------- <SEP> 1020 <SEP> #/mg <SEP> -------- <SEP> 978 <SEP> #/mg
<tb>
<tb> épimère <SEP> ------------ <SEP> 12,6 <SEP> #/mg <SEP> --------- <SEP> 160 <SEP> #/mg
<tb>
Exemple 21 Préparation du chlorhydrate de 7-diméthylaminq-6-déméthyl-6- désoxytétracycline
Dans 15 ml de chloroforme, on dissout
EMI33.2
500 mg de '-diméthylamino6-déméthyl-6-désoxytétracycline et on fait barboter du gaz chlorhydrique dans la solution. Il se forme un précipité jaune qui est recueilli par filtration, lavé au chloroforme et séché. Le produit est amorphe.
Exemple 22 Préparation du chlorhydrate de 7-diméthylamino-6-déméthyl-
EMI33.3
6-désoxytétracycline ¯
Dans 10 ml d'acétone, on dissout
500 mg de 7-diméthylamino-6-déméthyl-6désoxy-tétracycline et on ajoute à la solution une quantité stoechiométrigue d'acide .chlorhydrique concentré . Il se sépare un produit amorphe. L'ad- dition d'eau puis d'acétone entraîne la séparation d'un pro- duit cristallisé.