BRPI0615309B1 - Compostos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, composição e uso de um composto, tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou sal farmaceuticamente aceitável do tautômero do mesmo - Google Patents

Abstract

benzimidazóis substituídos como inibidores de cinase. a presente invenção refere-se a novos compostos benzimidazóis substituídos de fórmula (1), composições e métodos de inibição de atividade de cinase associada com tumorigênese em um indivíduo humano ou animal. em certas modalidades, os compostos e composições são eficazes para inibir a atividade de pelo menos uma serina/treonina cinase ou receptor tirosina cinase. os novos compostos e composições podem ser usados ou sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de um distúrbio mediado por serina/treonina cinase ou receptor tirosina cinase, tal como câncer.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

O presente pedido reivindica o benefício sob 35 U.S.C. 119(e) para os pedidos provisórios N° de Série U.S. 60/712.539 depositado em 30 de agosto de 2005, N° de Série U.S. 60/713.108 depositado em 30 de agosto de 2005, N° de Série U.S. N° 60/731.591 depositado em 27 de outubro de 2005 e N° de Série U.S. N° 60/774.684 depositado em 17 de fevereiro de 2006, cada um dos quais é aqui incorporado a título de referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a compostos benzimidazóis subs-tituídos, seus tautômeros, estereoisômeros, polimorfos, ésteres, metabólitos e pró-fármacos, aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, tautômeros, estereisômeros, polimorfos, ésteres, metabólitos e pró- fármacos, a composições de qualquer uma das modalidades acima mencionadas junto com veículos farmaceuticamente aceitáveis e a usos de qualquer uma das modalidades acima mencionadas, ou sozinhas ou em combinação com pelo menos um agente terapêutico adicional, na profilaxia ou tratamento de câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Cinases conhecidas estar associadas com tumorigênese incluem as Raf serina/treonina cinases e os receptores tirosina cinases (RTKs).

As Ras serina/treonina cinases são componentes essenciais do módulo de sinalização de Ras/Proteína Sinase Ativada por Mitógeno (MAPK) que controla um programa transcripcional complexo em resposta a estímulos celulares externos. Genes Raf codificam proteína cinases específicas de serina-treonina altamente conservadas que são conhecidas se ligar a onco-gene ras. Eles são parte de um curso de transdução de sinal acreditado consistir em receptores tirosina cinases, p21 ras, Raf proteínas cinases, Mek1 (ativador ERK ou MAPKK) cinases e ERK (MAPK) cinases, que por fim fosforilam fatores de transcrição. Neste curso Raf cinases são ativadas por Ras e fosforiladas e ativam duas isoformas de Proteína Cinase Ativada por Mitógeno (chamadas Mek1 e Mek2), que são treonina/tirosina cinases de especificidade dupla. Ambas isoformas Mek ativam Cinases Ativadas por Mitógeno 1 e 2 (MAPK, também chamadas Cinase Regulada por Ligante Extracelular 1 e 2 ou Erk1 e Erk2). As MAPKs fosforilam muitos substratos incluindo fatores de transcrição e ao fazerem isso ajustam seu programa transcripcional. Participação de Raf cinase no curso Ras/MAPK influencia e regula muitas funções celulares tal como proliferação, diferenciação, sobre-vivência, transformação oncogênica e apoptose celular.

Ambos o papel essencial e a posição de Raf em muitos cursos de sinalização foram demonstrados a partir de estudos usando mutantes de Raf inibidores desregulados e dominantes em células de mamífero bem como de estudos empregando técnicas bioquímicas e genéticas de organismos modelo. Em muitos casos, a ativação de Raf por receptores que estimulam fosforilação de tirosina celular é dependente da atividade de Ras, indicando que Ras funciona a montante de Raf. Quando da ativação, Raf-1 então fos- forila e ativa Mek1, resultando na propagação do sinal para efetores a jusante, tal como MAPK (proteína cinase ativada por mitógeno; Crews e outros, 1993, Cell 74:215). As Raf serina/treonina cinases são consideradas ser os efetores Ras primários envolvidos na proliferação de células animais (Avruch e outros, 1994, Trends Biochem. Sei. 19:279).

Raf cinase tem três isoformas distintas, Raf-1 (c-Raf), A-Raf e B- Raf, distinguidas pela sua habilidade em interagir com Ras, ativar curso de MAPK cinase, distribuição de tecido e localização subcelular (Marias e outros, Biochem. J. 351:289-305, 2000; Weber e outros, Oncogene 19:169- 176, 2000; Pritchard e outros, Mol. Cell Biol. 15:6430-6442, 1995). Mutação de ativação de um dos genes Ras pode ser vista em cerca de 20% de todos os tumores e o curso Ras/Raf/MEK/ERK é ativado em cerca de 30% de todos os tumores (Bos e outros, Cancer Res. 49:4682-4689, 1989; Hoshino e outros, Oncogene 18:813-822, 1999). Estudos recentes mostraram que mutação de B-Raf na marca de nascença na pele é uma etapa crítica no início de neoplasia melanocítica (Pollock e outros, Nature Genetics 25:1-2, 2002).

Ainda, a maioria dos estudos recentes descreve que a mutação de ativação no domínio cinase de B-Raf acontece em cerca de 66% dos melanomas, 12% de carcinoma de colo e 14% de câncer de fígado (Davies e outros, Nature 417:949-954, 2002; Yuen e outros, Cancer Research 62:6451-6455, 5 2002; Brose e outros, Cancer Research 62:6997-7000, 2002).

Melanoma, que continua a representar uma necessidade médica insatisfeita significante, é uma doença multigênica complexa com um prognóstico pobre, especialmente no estado metastático avançado. Mutações somáticas de ativação no proto-oncogene B-Raf foram recentemente encon- 10 tradas em uma variedade de males, e mais frequentemente em melanomas.

Aproximadamente 70% de melanomas expressam uma forma mutada e ati-vada de B-Raf (V600E), tornando-o um excelente alvo para desenvolvimento de fármaco. Ainda, outros 10-15% de melanoma expressam N-Ras mutante, demonstrando mais a importância do curso de MAPK no crescimento e so- 15 brevivência de células de melanoma.

Inibidores do curso de Ras/Raf/MEK/ERK no nível de Raf cina- ses podem ser potencialmente eficazes como agentes terapêuticos contra tumores com receptore tirosinas cinases super-expressos ou mutados, tiro- sina cinases intracelulares ativadas, tumores com Grb2 aberrantemente ex- 20 presso (uma proteína adaptadora que permite estimulação de Ras pelo fator de troca Sos) bem como tumores carregando mutações de ativação do próprio Raf. Nos primeiros testes clínicos inibidores de Raf-1 cinase que também inibem B-Raf mostraram promessa como agentes terapêuticos em terapia de câncer (Crump, Current Pharmaceutical Design 8:2243-2248, 2002;

Sebastien e outros, Current Pharmaceutical Design 8:2249-2253, 2002).

Rompimento de expressão de Raf em linhagens celulares através da aplicação de tecnologia de anti-sentido de RNA mostrou suprimir tu- morigenicidade mediada por ambas Ras e Raf (Kolch e outros, Nature 349:416-428, 1991; Monia e outros, Nature Medicine 2(6):668-675, 1996).

Foi também mostrado que a administração de anticorpos de desativação contra Raf cinase ou a co-expressão de Raf cinase negativa dominante ou MEK negativa dominante, o substrato de Raf cinase, leva à reversão de cé- lulas transformadas para o fenótipo de crescimento normal (vide Daum e outros, Trends Biochem. Sei. 1994, 19:474-80; Fridman e outros, J. Biol. Chem. 1994, 269:30105-8).

Vários inibidores de Raf cinase foram descritos como exibindo eficácia em inibição de proliferação celular em ensaios in vivo e/ou in vitro (vide, por exemplo, Patentes U.S. Nss 6.391.636, 6.358.932, 6.037.136, 5.717.100, 6.458.813, 6.204.467 e 6.268.391). Outras patentes e pedidos de patente sugerem o uso de inibidores de Raf cinase para tratamento de leu-cemia (vide, por exemplo, Patentes U.S. Nes 6.268.391 e 6.204.467 e Pedidos de Patente publicados U.S. Nss 20020137774; 20020082192; 20010016194; e 20010006975) ou para tratamento de câncer de mama (vide, por exemplo, Patentes U.S. N2s 6.358.932, 5.717.100, 6.458.813, 6.268.391 e 6.204.467 e Pedido de Patente U.S. Ns 20010014679).

Angiogênese também desempenha um papel importante no crescimento de células cancerosas. Sabe-se que uma vez que um ninho de células cancerosas atinge um certo tamanho, aproximadamente 1 a 2 mm de diâmetro, as células de câncer devem desenvolver um fornecimento de san-gue a fim de que o tumor cresça uma vez que difusão não será suficiente para fornecer as células de câncer com oxigênio e nutrientes suficientes. Então, inibição de angiogênese é esperada inibir o crescimento de células de câncer.

Receptores tirosina cinases (RTKs) são polipeptídios de trans- membrana que regulam crescimento e diferenciação de célula de desenvol-vimento, remodelagem e regeneração de tecidos adultos (Mustonen, T. e outros, J. Cell Biology 129: 895-898, 1995; van der Geer, P. e outros, Ann Rev. Cell Biol. 70:251-337, 1994). Ligantes de polipeptidio, conhecidos como fatores de crescimento ou citocinas, são conhecidos ativar RTKs. RTKs de sinalização envolvem ligação de ligante e uma mudança em conformação no domínio externo do receptor resultando em sua dimerização (Lymboussaki, A. "Vascular. Endothelial Growth Factors and their Receptors in Embryos, Adults, and in Tumors" Academic Dissertation, University of Helsinki, Mo- lecular/Cancer Biology Laboratory and Department of Pathology, Haartman Institute, 1999; Ullrich, A. e outros, Cell 51:203-212,1990). Ligação do ligan- te ao RTK resulta em transfosforilação de receptor em resíduos de tirosina específicos e subsequente ativação dos domínios catalíticos para a fosforila- ção de substratos citoplásmicos (Id).

Duas subfamílias de RTKs são específicas para o endotélio vas-cular. Essas incluem a subfamília de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e a subfamília de receptor Tie. RTKs de Classe V incluem VEG- FR1(FLT-1), VEGFR2 (KDR (humano), Flk-1 (camundongo)) e VEGFR3 (FLT-4) (Shibuya, M. e outros, Oncogene 5:519-525, 1990; Terman, B. e outros, Oncogene 6:1677-1683, 1991; Aprelikova, O. e outros, Cancer Res. 52:746-748, 1992). Membros da subfamília VEGF foram descritos como sendo capazes de induzir permeabilidade vascular e proliferação de célula endotelial e identificados ainda como um indutor principal de angiogênese e vasculogênese (Ferrara, N. e outros, Endocrinol. Rev. 18:4-25,1997).

VEGF é conhecido se ligar especificamente a RTKs incluindo FLT-1 e Flk-1 (DeVries, C. e outros, Science 255:989-991, 1992; Quinn, T. e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. 90:7533-1537, 1993). VEGF estimula a migração e proliferação de células endoteliais e induz angiogênese ambos in vitro e in vivo (Connolly, D. e outros, J. Biol. Chem. 264:20017-20024, 1989; Connolly, D. e outros, J. Clin. Invest. 84:1470-1478, 1989; Ferrara, N. e outros, Endocrinol. Rev. 18:4-25, 1997; Leung, D. e outros, Science 2461306-1309, 1989; Plouet, J. e outros, EMBO J 8:3801-3806,1989).

Estudos em vários sistemas de célula endotelial culturada esta-beleceram que VEGFR2 faz a mediação da maioria dos efeitos a jusante de VEGF em angiogênese (Wey S. e outros, Clinical Advances in Hematology and Oncology, 2:37-45, 2004). Proliferação de células endoteliais mediada por VEGFR2 é acreditada envolver ativação do curso de Ras/Raf/Mek/Erk (Veikkola T. e outros, Cancer Res 60:203-212, 2000). Expressão de VEG- FR2 foi observada em melanoma, câncer de mama, câncer de bexiga, câncer de pulmão, câncer da tireoide, câncer de próstata e câncer ovariano (vide Wey e outros, supra). Anticorpos monoclonais de neutralização para VEGFR2 (KDR) mostraram ser eficazes no bloqueio de angiogênese de tu- mor (vide Kim e outros, Nature 362:841, 1993; Rockwell e outros, Mol. Cell Differ. 3:315, 1995), Devido ao fato de que a angiogênese é conhecida ser critica para o crescimento de câncer e ser controlada por VEGF e VEGF- RTK, esforços substanciais foram feitos para desenvolver compostos que 5 inibam ou retardem angiogênese e inibam VEGF-RTK.

Receptor cinase de fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGFR) é outro tipo de RTK. Expressão de PDGF foi mostrada em vários tumores sólidos diferentes, de glioblastomas e osteossarcoma a carcinomas de próstata. Nesses vários tipos de tumor, o papel biológico de sinalização de PDGF pode variar de estimulação autócrina de crescimento de célula cancerosa a interações parácrinas mais sutis envolvendo estroma adjacente e angiogênese. PDGF interage com receptores tirosina cinases PDGFRa e PDGFRβ. Então, inibição da atividade de PDGFR cinase com moléculas pequenas é esperada interferir com crescimento e angiogênese de tumor. Os receptores cinases de fator de crescimento de fibroblasto (FGFRs) representam outro tipo de RTKs. Os fatores de crescimento de fibroblasto são uma família de fatores de crescimento de polipeptídio envolvida em uma variedade de atividades, incluindo mitogênese, angiogênse e cicatrização de ferida. Eles compreendem uma família de receptores de tiro- sina cinase relacionados, mas individualmente distintos, contendo um domí-nio extracelular ou com 2 ou 3 domínios do tipo imunoglobulina (lg), um domínio de transmembrana e um domínio de tirosina cinase citoplásmico. Os receptores de fator de crescimento de fibroblasto que foram identificados incluem FGFR1 (Ruta, M e outros, Oncogene 3:9-15, 1988); FGFR2 (Dion- ne, C. e outros, Cytogenet. Cell Genet. 60:34-36, 1992); FGFR3 (Keegan, K. e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. 88:1095-1099, 1991); e FGFR4 (Partanen, J. e outros, EMBOJ. 70:1347-1354, 1991).

O papel de receptores de fator de crescimento de fibroblasto, particularmente FGFR3, em câncer foi esclarecido. Desregulagem de onco- 30 genes através de translocação para o local de cadeia pesada de imunoglo-bulina (IgH) em 14q32 é um evento seminal na patogênese de tumores de célula β. Em mieloma múltiplo, translocações para o local IgH acontecem em a 60% de casos. Para a maioria das translocações, o cromossomo partner é desconhecido; para as outras, uma disposição diversa de partners cromossomais foi identificada, com 11q13, o único cromossomo que é fre- qüentemente envolvido. Bergsagel e outros identificaram fragmentos de re- combinação de troca ilegítimos (definidos como contendo seqüências de apenas 1 região de troca) como marcadores potenciais de eventos de trans- locação nas regiões de troca IgH em 15 de 21 linhagens de célula de mielo- ma, incluindo 7 de 8 linhagens cariotipadas que não tinham nenhuma trans- locação 14q32 detectável. Esses pontos de interrupção de translocação envolviam 6 locais de cromossomo: 4pl6.3; 6; 8q24.13; 1lq13.3; 16q23.1; e 21q22.1 (Bergsagel e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. 53:13931-13936, 1996). Chesi e outros (Nature Genet. 16:260-264 1997) verificaram translocação cariotipicamente silenciosa (4;14)(p16.3;q32.3) em 5 linhagens de células de mieloma e em pelo menos 3 de 10 tumores primários associados com mie- loma múltiplo exibir expressão e ativação aumentadas de mutação de FG- FR3. Os pontos de interrupção do cromossomo-4 foram agrupados em uma região de 70 kb centrométrica para FGFR3, que foi imaginado ser o oncogene desregulado. Duas linhagens e 1 tumor primário com esta translocação seletivamente expressaram um aielo de FGFR3 contendo mutações ativadas identificadas anteriormente em nanismo tanatofórico: tyr373 para cys, lys650 para glu e lys650 para met. Para K650E, a ativação constitutiva de FGFR3 na ausência de ligante foi provada através de experimentos de transfecção. Chesi e outros (1997) propuseram que após a translocação de t(4; 14), mutação somática durante progressão de tumor freqüentemente gera uma proteína FGFR3 que é ativa na ausência de ligante.

Rasmussen, T. e outros citaram uma freqüência de 3 a 24% para translocação de t(4;14) em mieloma múltiplo (Rasmussen, T. e outros, Br. J. Haematol. 117:626-628, 2002). A translocação foi observada em uma freqüência significantemente menor em pacientes com gamopatia monoclonal de significância indeterminada (MGUS), sugerindo um papel na transição de MGUS para mieloma múltiplo. A translocação de t(4;14) afeta 2 oncogenes potenciais: FGFR3 e domínio set de mieloma múltiplo (MMSET). Rasmussen e outros (2002) investigaram a frequência de desregulagem de FGFR3 e seu valor de prognóstico em mieloma múltiplo. Em 16 de 110 (14,5%) amostras de medula óssea de mieloma múltiplo, eles encontraram expressão de FG- FR3 desregulada.

Ainda, evidência adicional foi apresentada indicando um papel oncogênico para FGFR3 em carcinomas (Cappellen, D. e outros (Letter) Nature Genet. 23:18-20, 1999). Cappellen e outros encontraram expressão de um FGFR3 constitutivamente ativado em uma grande proporção de 2 cânceres epiteliais comuns, bexiga e cérvice. FGFR3 parecia ser o oncogene mais 10 freqüentemente mutado em câncer de bexiga, sendo mutado em mais de 30% de casos. FGFR3 parece mediar sinais opostos, agindo como um regulador negativo de crescimento em osso e como um oncogene em vários tipos de tumor. Todas as mutações somáticas missenses de FGFR3 identifi-cadas nesses cânceres foram idênticas às mutações de ativação germinal 15 que causam displasia tanatofórica (os autores notaram que em 2 mutações, esta ocorrência acontecia porque a isoforma de FGFR3b expressa em células epiteliais contém mais 2 amino ácidos do que a isoforma FGFR3 expressa em osso). Das alterações de FGFR3c em tumores epiteliais, a mutação S249C era a mais comum, afetando 5 de 9 cânceres de bexiga e 3 de 3 20 cânceres cervicais.

Evidência foi também apresentada indicando que FGFR3 ativado é direcionado para degradação lisossomal por ubiquitinação mediada por c-Cbl, e que mutações de ativação encontradas em pacientes com acondro- plasia e condrodisplasias relacionadas perturbam este processo, levando à 25 reciclagem de receptores ativados e amplificação de sinais de FGFR (Cho e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. 107:609-614, 2004). Cho e outros sugeriram que este mecanismo contribui para a patogênese molecular de acondropla- sia e representa um alvo potencial para intervenção terapêutica. O defeito de direcionamento lisossomal é aditivo a outros mecanismos propostos para 30 explicar a patogênese da acondroplasia.

Outros resultados indicam que FGFR2 e FGFR3 são fatores sig- nificantes na tumorigênese (Jang, J.H. e outros, "Mutations in fibroblast growth factor receptor 2 and fibroblast growth factor receptor 3 genes associated with human gastric and colorectal cancers" Cancer Res. 67(9):354 1- 3, 2001). Devido ao seu papel em mieloma múltiplo, câncer de bexiga e tu- morigênese, desenvolvimento de inibidores de receptores cinases de fator de crescimento de fibroblasto, particularmente inibidores de FGFR2 e FG- FR3, vai desempenhar um papel importante no tratamento de cânceres. c-Kit é outro receptor tirosina cinase pertencente à família de receptor PDGF e é normalmente expresso em células progenitoras hemato- poiéticas, mastócito e germe. Expressão de c-kit foi implicada em vários cânceres incluindo leucemia de mastócitos, tumores de célula germe, carcinoma de pulmão de célula pequena, tumores estromais gastrointestinais, leucemia mielógena aguda (AML), eritroleucemia, neuroblastoma, melanoma, carcinoma ovariano, carcinoma de mama (Heinrieh, M. C. e outros; J. Clin. One. 20, 6 1692-1703, 2002 (artigo de revisão); Smolich, B. D. e outros, Blood, 97, 5; 1413-1421).

Superexpressão de CSF-1R, o receptor para fator-1 de estimulação de colônia (CSF-1), foi implicada em vários carcinomas humanos, incluindo carcinomas da mama, ovário, endométrio, pulmão, rim, pâncreas e próstata (Sapi, E., Exp. Biol. Med 229:1- 11, 2004). CSF-1 R é um receptor de tirosina cinase que, quando ativado por seu ligante CSF-1, dispara cursos de transdução de sinal controlando proliferação e diferenciação celular. CSF- 1R é expresso na glândula mamária durante gravidez e lactação. Expressão de CSF-1 R anormal foi relacionada com 58% de todos os cânceres de mama, e com 85% de carcinoma de mama invasive (vide Sapi, supra).

Há uma necessidade contínua de compostos que inibam a proliferação de capilares, inibam o crescimento de tumores, tratam câncer, modulam parada de ciclo celular e/ou inibam moléculas tal como uma ou mais de Ras, Raf, B-Raf mutante, VEGFR2 (KDR, Flk-1), FGFR2/3, c-Kit, PDG- FRβ, CSF-1 R e formulações farmacêuticas e medicamentos que contenham tais compostos. Existe também a necessidade de métodos de administração de tais compostos, formulações farmacêuticas e medicamentos a pacientes ou indivíduos com necessidade.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Compostos benzimidazol novos substituídos são providos da fórmula (I):

R® (I) onde, cada R1 é independentemente selecionado de hidróxi, halo, C1-6 alquila, C-i-e alcóxi, (C1-6 alquil)suifanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, he- terocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-6 alquila ou halo(Ci.6 alquila); cada R3 é independentemente selecionado de halo, Cve alquila e C ve alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, heterocicloalquilcarbonila, carboxila, (C1-6 alcó- xi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 alquilaminocarbonila, carbonitrila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, CV6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi); a é 1, 2, 3,4 ou 5; b é 0,1,2 ou 3; e c é 1 ou 2; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabolite ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabolite ou pró- fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos da fórmula (II):

(II) onde, cada R1 é independentemente selecionado de C-I-Ô alquila, alcóxi, hidróxi, halo, (Ci^ alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R3é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, Ove alquila e C1-6 alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; b é 0,1, 2 ou 3; e c é 1 ou 2; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos da fórmula (III):

onde cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C-|.6 alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (Ci.6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C-i-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, Ci.6 alquila e (>.6 alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; e c é 1 ou 2; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

São também descritos compostos da fórmula (IV) que segue:

F(2 (IV) onde, cada R1 é independentemente selecionado de Ci.6 alquila, Ci-β alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (Ci.6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila;

R2 é C1-6 alquila ou halo(C1-6)alquila; cada R3é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e Ci -6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, Ci.6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (Ci.θ alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 al- quilaminocarbonila, carbonitrila, carbonitril(C1-6 alquila), cicloalquila, heteroci- cloalquila, heterocicloalquil(C1-6 alquila), heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, Cb6 alquila e C1-6 alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; e b é 0, 1,2 ou 3; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde cada R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluo refila, triflu- ormetóxi, trifluoretóxi, trifluormetilsulfanila, piperidinila, C1-6 alquilpiperidinila, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridinila e pirimidinila. Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde a é 1 ou 2, e pelo menos um R1 é halo(Ci. 6 alquila), tal como trifluormetila. Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I) e (IV), onde R2 é C1-6 alquila, tal como, por exemplo, metila ou etila. Em modalidades adicionais, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I), (II) e (IV), onde b é 0 e então R3 não está presente. Em modalidades alternativas, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde b é 1, e R3 é C1-6 alcóxi, tal como, por exemplo, metóxi. Em modalidades adicionais ainda, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(ll), onde c é 1 ou 2, e pelo menos um R4 é ha- lo(C1-6 alquila), tal como, por exemplo, trifluormetila.

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade de qualquer uma das modalidades de um composto ou sal farmaceuticamente aceitável de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade de qualquer uma das modalidades de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmulas (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de câncer.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê composições terapêuticas compreendendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmulas (I), (II), (III) ou (IV) em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de câncer, como são geralmente empregados em terapia de câncer.

Os compostos da invenção são úteis no tratamento de cânceres, incluindo carcinomas (por exemplo, dos pulmões, pâncreas, ovários, tireóide, bexiga ou colo), melanoma, distúrbios mielóides (por exemplo, leucemia mie- lóide, mieloma múltiplo e eritroleucemia), adenomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso) e sarcomas (por exemplo, osteossarcoma).

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos de inibição de pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica mediada por uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo, compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmulas (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para inibir o curso de sinalização de MAPK no indivíduo. As composições terapêuticas são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade de tais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinalização de MAPK anormal). Em uma modalidade, a invenção refere-se a métodos de inibição de

Raf cinase em um indivíduo compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo {1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzimidazol-2-il}-(4-trifluormeti!-fenil)-amina e o tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos de inibição de pelo menos um receptor de tirosina cinase selecionado do grupo consistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFR1, FGFR2, FG- FR3, c-Kit e CSF-1 R em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica mediada por pelo menos um VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FG- FR1, FGFR2, FGFR3, c-Kit e CSF-1 R compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para inibir o receptor de tirosina cinase no indivíduo. Os compostos terapêuticos são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade de tais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinalização de receptor de tirosina cinase anormal). Em uma modalidade, a invenção refere-se a métodos de inibição de uma tirosina cinase selecionados do grupo consistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFR1, FGFR2, FGFR3, c- Kit e CSF-1 R em um indivíduo, compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo {1 -metil-5-[2-(5- trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2il}-(4- trifluormetil-fenil)-amina ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfomo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

A invenção provê ainda composições, métodos de uso e métodos de fabricação conforme descrito na descrição detalhada da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os aspectos acima e muitas das vantagens acompanhantes da presente invenção serão melhor compreendidos através de referência à descrição detalhada que segue, quando tomada em conjunto com os desenhos acompanhantes, onde:

Figura 1 é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores melanoma humanos A375M em camundongos quando tratados com um composto da invenção, conforme descrito no Exemplo 78;

As Figuras 2A e 2B são lâminas PAGE mostrando a inibição de sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor de melanoma humano A375M em camundongos 4- (Figura 2A) e 24 horas (Figura 2B) após tratamento com um composto da invenção, conforme descrito no Exemplo 79;

A Figura 3 é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de câncer de colo humano HT29P em camundongos quando tratados com um composto da invenção, conforme descrito no E- xemplo 80;

As Figuras 4A, 4B e 4C são lâminas PAGE mostrando a inibição de sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor de câncer de cólon humano HT29P em camundongos 1 hora (Figura 4A), 4 horas (Figura 4B) e 24 horas (Figura 4C) após tratamento com um composto da invenção, conforme descrito no Exemplo 81;

A Figura 5 ilustra o curso de sinalização de MAPK incluindo Ras, Raf, MEK e ERK e o ponto proposto de inibição de sinalização a jusante de Raf cinase com o composto do Exemplo 1 conforme descrito nos Exemplos 82-86;

As Figuras 6A, 6B e 6C são lâminas PAGE mostrando a inibição de sinalização a jusante de Raf cinase em células A375M (Figura 6A), células SK-MEL2 (Figura 6B) e células CHL-1 (Figura 6C) após 4 horas de incubação em cultura com uma faixa de concentrações do composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 83;

A Figura 7A é um gráfico mostrando uma dose resposta na redução média em volume de tumor de tumores de melanoma humanos A375M (B-Raf V600E) em camundongos quando tratados com uma dose oral de 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, con- forme descrito no Exemplo 84;

A Figura 7B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinali-zação a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundongos 8 horas após o tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 84;

A Figura 7C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinali-zação a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundongos 24 horas após o tratamento de 14 horas com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 84;

A Figura 7D é uma lâmina PAGE mostrando a modulação de marcadores a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M 24 horas após o tratamento de 14 horas com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 84;

A Figura 8A é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de câncer de melanoma MEXF276 (B-Raf V600E) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 8B é uma lâmina mostrando a inibição de sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF276 em camundongos 4 horas após o 202 tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 8C é uma lâmina PAGE mostrando a modulação de marcadores a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF276 4 horas após o 20a tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 9A é um gráfico mostrando a inibição média de cresci-mento de tumor de tumores de câncer de melanoma MEXF1341 (N-Ras Q61K) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 9B é uma lâmina PAGE mostrando a sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF1341 em camundongos 4 horas após o 20s tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme des- crito no Exemplo 85;

A Figura 9C é uma lâmina mostrando a modulação de marcadores a jusante de Raf cinase em células de tumor MEXF1341 4 horas após o 20s tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 85;

A Figura 10A é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de carcinoma colorretais HCT-116 (K-Ras G13D) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 10B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 4 horas após o 3e tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 10C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 8 horas após o 3s tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 10D é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sina-lização a jusante de Raf cinase em células de tumor HCT-116 em camun-dongos 24 horas após o 3s tratamento com o composto do Exemplo 1, con-forme descrito no Exemplo 86;

A Figura 11 é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de carcinoma colorretais HT-29 (B-Raf V600E) em ca-mundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 12A é um gráfico mostrando a inibição média de cres-cimento de tumor de tumores de câncer de leucemia monocítica aguda MV4- 11 (FLT3 ITD) em camundongos quando tratados com o composto do E- xemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 12B é uma lâmina PAGE mostrando a sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor MV4-11 em camundongos 4 horas após o 3s tratamento com o composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 86;

A Figura 13 é um gráfico mostrando a inibição de angiogênese mediada por VEGF em um modelo de CHO-VEGF Matrigel após tratamento com 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, conforme descrito no Exemplo 88;

A Figura 14A é um gráfico mostrando a redução média em vo-lume de tumor de tumores de melanoma A375M em camundongos quando tratados com 100 g/kg do composto do Exemplo 1 com um regime de dosagem de q2d, q3d ou q4d conforme descrito no Exemplo 89;

A Figura 14B é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinalização a jusante a partir de Raf cinase em células de tumor A375M em camundongos 8 horas, 24 horas e 48 horas após o 5s tratamento com o composto do Exemplo 1 no regime de dosagem de q2d, conforme descrito no Exemplo 89;

A Figura 14C é uma lâmina PAGE mostrando a inibição de sinalização a jusante de Raf cinase em células de tumor A375M em camundongos 48 horas, 72 horas e 96 horas após o 3s tratamento com o composto do Exemplo 1 no regime de dosagem de q4d, conforme descrito no Exemplo 89; e

A Figura 15 é um gráfico mostrando a relação entre tratamento com células de tumor A375M com várias concentrações do composto do Exemplo 1, a concentração no soro do composto com o tempo e a concentração limiar para modulação direcionada, conforme descrito no Exemplo 90,

DESCRIÇÃO DETALHADA DA MODALIDADE PREFERIDA

De acordo com um aspecto da presente invenção, compostos benzimidazol substituídos são providos da fórmula (I);

onde, cada R1 é independentemente selecionado de hidróxi, halo, Cve alquila, C1-6 alcóxi, (Ci-β alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; R2 é C1-6alquila ou halo(C1-6 alquila); cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e 5 Ci. 6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, Ci^ alquila, C-i-6 alcóxi, halo, carboxila, (Ci.6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 al- quilaminocarbonila, carbonitrila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloal- quilcarbonila,fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo Ci.6)alquila, Cj.6alcóxi e halo(C1-6 alcóxi); aé1,2, 3,4 ou 5; béO, 1, 2ou3;e c é 1 ou 2; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substi tuídos são providos da fórmula (II):

onde, cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, 25 heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R3é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C-|.6 alqui- la, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (Ci.6alcóxi)carbonila. aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C-i-6 alquila e C1-6 alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; b é 0, 1,2 ou 3; e c é 1 ou 2; 10 ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco dele ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos da fórmula (III):

15 onde cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, alcóxi, hidróxi, halo, (C-i-6alquil)sulfanila, (C^s alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alqui- 20 la, Ove alcóxi, halo, carboxila, (Ci.6alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 25 alquila e C1-6 alcóxi; a é 1, 2, 3 ou 5; e c é 1 ou 2; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

São também descritos compostos da fórmula (IV) que segue:

(IV) onde, cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (Ci.6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; R2 é Cv6 alquila ou halo(Ci-ô)alquila; cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, Cv6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C-i-e al- quilaminocarbonila, carbonitrila, carbonitril(C1-6alquila), cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquil(C1-6 alquila), heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; onde R1, R2, R3e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila e alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; e bé 0,1,2 ou 3; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco.

Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(lV), onde cada R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluoretila, triflu- ormetóxi, trifluoretóxi, trifluormetilsulfanila, piperidinila, C1-6 alquilpiperidinila, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridinila e pirimidinila. Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde a é 1 ou 2, e pelo menos um R1 é halo(Ci- e alquila), tal como trifluormetila. Em outras modalidades, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I) e (IV), onde R2 é C-i-e alquila, tal como, por exemplo, metila ou etila. Em modalidades adicionais, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (I), (II) e (IV), onde b é 0 e então R3 não está presente. Em modalidades alternativas, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(IV), onde b é 1 e R3 é C1-6 alcóxi, tal como, por exemplo, metóxi. Em mo-dalidades adicionais ainda, novos compostos benzimidazol substituídos são providos de fórmulas (l)-(ll), onde c é 1 ou 2, e pelo menos um R4 é halo(C1-6 alquila), tal como, por exemplo, trifluormetila.

Em algumas modalidades, R1, R2, R3 e R4 podem ser opcional-mente substituídos com um a cinco substituintes independentemente sele-cionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi).

Em algumas modalidades, R1, R2, R3 e R4 podem ser opcional-mente substituídos com um a três substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, alquila, halo(C1-6 alquila), C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi).

Em algumas modalidades, R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em halo, C-i-β alcóxi, halo(C1-6 alquila), hidróxi, halo(C1-6 alcóxi), halo(Ci.6alquil)sulfonila, heteroarila, halo(C1-6 alquil)sulfanila, heterocicloalquila e (C1-6 alquil)heterocicloalquila. Em algumas modalidades, a é 1 e R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-cloro, 2- etila, 2-trifluormetila, 3-trifluormetila, 4-trifluormetila, 3-terc-butila, 4-terc- butila, 3-etila, 4-etila, 4-cloro-, 4-bromo, 4-trifluormetóxi, 4- trifluormetilsulfanila, 4-trifluormetilsulfonila e 4-(4-metilpiperazinila). Em ou- tras modalidades ainda, a é 2 e cada R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-flúor, 2-cloro-, 2-hidróxi, 2-metóxi, 3-metóxi, 5- metóxi, 4-cloro, 4-flúor, 3-trifluormetila, 4-trifluormetila, 5-trifluormetila, 5- piridinila, 5-piridinil-3-ila, 5-piridinil-4-ila, 3-tetraidrofuran-3-ila, 3-isopropila, 5- isopropila e 5-terc-butila.

Em algumas modalidades, R4 é selecionado do grupo consistindo em C1-6 alquila, hidróxi(C1-6 alquila), halo(C1-6 alquila), haloíC^s al- quil)sulfanila, (C1-6 alcóxi)carbonila, (C1-6 alquil)heterocicloalquila, carbonitri- la, fenila, halo(C1-6 alquil)fenila, (Ci.6 alquil heterocicloalquilcarbonila e hidró- xi(Ci.6alquilaminocarbonila). Em algumas tais modalidades, c é 1 e R4 é selecionado do grupo consistindo em trifluormetila, carbonitrila, fenila, trifluor- metilsulfanila, metoxicarbonila, 4-etilpiperazinila, 4-etilpiperazinil-l-carbonila ou 2-hidroxietilaminocarbonila. Em ainda outras modalidades, c é 2 e cada R4 é independentemente selecionado do grupo consistindo em metila, 3- trifluormetilfenila, 4-trifluormetilfenila, trifluormetila, etoxicarbonila, hidroxime- tila e fenila.

Em outras modalidades é provido um composto ou sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo onde o composto tem a fórmula:

ou um tautômero do composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero tendo a fórmula:

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade de um composto da fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ©ficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar o dito indivíduo uma quantidade de um composto de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de câncer.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratamento de distúrbios relacionados com Raf em um indivíduo humano ou animal com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar ao dito indivíduo uma quantidade de um composto de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para reduzir ou prevenir crescimento de tumor no indivíduo em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de câncer. Vários agentes antícâncer adequados a serem usados como terapêuticos de combinação são compreendidos para uso nos métodos da presente invenção. Na verdade, a presente invenção compreende, mas não é limitada a, administração de vários agentes anticâncer tal como: agentes que induzem apoptose; polinucleotídeos (por exemplo, ribozimas); polipeptídeos (por exemplo, enzimas); fármacos; miméticos biológicos; alcalóides; agentes de alquilação; antibióticos antitumor; antimetabólitos; hormônios; composto de platina; anticorpos monoclonais conjugados com fármacos anticâncer, toxinas e/ou radionuclídeos; modificadores de resposta biológicos (por exemplo, interferons [por exemplo, IFN-a, etc] e interleucinas [por exemplo, IL-2, etc], etc); agentes de imunoterapia adotivos; fatores de crescimento hematopoié- ticos; agentes que induzem diferenciação de célula de tumor (por exemplo, ácido-all-trans-retinóico, etc); reagentes de terapia de gene; reagentes de terapia anti-sentido e nucleotídeos; vacinas de tumor; inibidores de angiogênese e similar. Vários outros exemplos de compostos quimioterapêuticos e terapias anticâncer adequados para co-administração com os compostos descritos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) são conhecidos daquele versado na técnica.

Em modalidades preferidas, agentes anticâncer a serem usados em combinação com compostos da presente invenção compreendem agentes que induzem ou estimulam apoptose. Agentes que induzem apoptose incluem, mas não estão limitados a, radiação; inibidores de cinase (por e- xemplo, inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento Epidermal [EGFR], inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento Vascular [VGFR], inibidor de cinase de Receptor de Fator de Crescimento de Fibroblasto [FGFR], inibidor de cinase I de Receptor de Fator de Crescimento derivado de Plaqueta [PGFR] e inibidores de cinase Bcr-Abl tal como STI-571, Gleevec e Glivec]); moléculas de anti-sentido; anticorpos [por exemplo, Herceptin e Rituxan]; antiestrogênios [por exemplo, raloxifeno e tamoxifen]; anti- androgênios [por exemplo, flutamida, bicalutamida, finasterida, aminoglute- tamida, cetoconazol e corticosteróides]; inibidores de ciclooxigenase 2 (COX-2) [por exemplo, Celecoxib, meloxicam, NS-398 e fármacos antiinfla- matórios não-esteroidais (NSAIDs)]; e fármacos quimioterapêuticos para o câncer, por exemplo, irinotecan (Camptostar), CPT-11, fludarabina (Fludara), dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona, Mylotarg, VP-16, cisplati- na, 5-FU, Doxorrubicina, Taxotere ou taxol]; moléculas de sinalização celular; ceramidas e citocinas; e estaurosprina e similar.

Em outros aspectos, a presente invenção provê composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) junto com um veículo farmaceuticamente aceitável adequado para administração a um indivíduo humano ou animal, ou sozinho ou junto com outros agentes anticâncer.

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos de fabricação de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) conforme aqui descrito.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê compostos que são inibidores da enzima Raf cinase. Uma vez que a enzima é um efetor a jusante de p21ras, os presentes inibidores são úteis em composições farmacêuticas para uso humano ou veterinário onde inibição do curso de Raf cinase é indicado, por exemplo, no tratamento de tumores e/ou crescimento de célula cancerosa mediado por Raf cinase. Em particular, os compostos são úteis no tratamento de humano ou animal, por exemplo, câncer de murino, uma vez que a progressão desses cânceres é dependente da 5 cascata de transdução de sinal de proteína Ras e então é suscetível a tra-tamento através da interrupção da cascata através da inibição da atividade de Raf cinase. Deste modo, os compostos da invenção são úteis no tratamento de cânceres sólidos, tal como, por exemplo, carcinomas (por exemplo, dos pulmões, pâncreas, tireoide, bexiga ou cólon), distúrbios mielóides 10 (por exemplo, leucemia mielóide, mieloma múltiplo e eritroleucemia), adenomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso) ou sarcomas (por exemplo, osteossarcoma). "Inibidor de Raf" é usado aqui para se referir a um composto que exibe uma IC50 com relação à atividade de Raf cinase de não mais do que 15 cerca de 100 pM e mais tipicamente não mais do que cerca de 50 pM, con-forme medido no Raf/Mek Filtration Assay descrito em geral abaixo. Isoformas preferidas de Raf Cinase onde os compostos da presente invenção serão mostrados inibir incluem, A-Raf, B-Raf e C-Raf (Raf-1). "IC50" é aquela concentração de inibidor que reduz a atividade de uma enzima (por exemplo, 20 Raf cinase) para o nível médio-máximo. Compostos representativos da pre-sente invenção foram constatados exibir atividade inibidora contra Raf. Compostos da presente invenção exibem de preferência uma IC50 com relação a Raf de não mais do que cerca de 10 pM, com mais preferência, não mais do que cerca de 5 pM, com mais preferência ainda não mais do que 25 cerca de 1 pM e com mais preferência não mais do que cerca de 200 nM, conforme medido nos ensaios de Raf cinase descritos aqui.

Conforme aqui usado, a expressão "curso de transdução de sinal de MAPK" é uma abreviação que significa curso de transdução de sinal de proteína cinase ativada por mitógeno em um módulo que é formado das 30 moléculas de sinalização Ras-Raf-MEK1 -ERK.

"Alquila" refere-se a grupos hidrocarbila saturados que não contêm heteroátomos e inclui grupos alquila de cadeia reta tal como metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila e similar. Alquila também inclui isômeros de cadeia ramificada de grupos alquila de cadeia reta incluindo, mas não limitado a, os que seguem são providos a título de exemplo: -CH(CH3)2, -CH(CH3)(CH2CH3), -CH(CH2CH3)2, - C(CH3)3, -C(CH2CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), - CH2CH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)3I -CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)- CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2I -CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3), - CH2CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3)3I-CH2CH2C(CH2CH3)3, CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH(CH3)CH(CHS)2, CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3) e outros. Então grupos alquila in-cluem grupos alquila primários, grupos alquila secundários e grupo alquila terciários. A expressão "Ci.12 alquila" refere-se a grupos alquila tendo de a partir de um a doze átomos de carbono. A expressão "C1-6 alquila" refere-se a grupos alquila tendo de a partir de um a seis átomos de carbono.

"Alquenila" refere-se a grupos hidrocarbila retos ou ramificados tendo de a partir de 2 a 6 átomos de carbono e de preferência 2 a 4 átomos de carbono e tendo pelo menos 1 e de preferência de a partir de 1 a 2 sítios de instauração de vinila (>C=C<). Tais grupos são exemplificados, por e- xemplo, por vinila, alila e but-3-en-1 -ila. Incluídos neste termo estão isômeros cis e trans ou misturas desses isômeros.

"Alcóxi" refere-se a RO- onde R é um grupo alquila. A expressão "C1-6 alcóxi" conforme aqui usado refere-se a RO- onde R é um grupo C1-6 alquila. Exemplos representativos de grupos C1-6 alcóxi incluem metóxi, etó- xi, t-butóxi e similar.

"(Ci.6alcóxi)carbonila" refere-se a éster-C(=O)-OR onde R é Ci- e alquila. "Amidino" refere-se ao grupo -C(=NH)NH2. "Amidina" refere-se a um composto contendo tal grupo. "Aminocarbonila” refere-se aqui ao grupo -C(O)-NH2.

"C1.6 alquilaminocarbonila" refere-se ao grupo -C(O)-NRR' onde R é C1-6 alquila e R' é selecionado de hidrogênio e C1-6alquila. "Carbonila" refere-se ao grupo divalente -C(O)-. "Carboxila" refere-se a -C(=O)-OH. "Ciano", "carbonitrila" ou "nitrila" refere-se a -CN.

"Carbonitril(C1-6 alquila)" refere-se a C1-6 alquila substituída com -CN. "Cicloalquila" refere-se a um substituinte alquila mono- ou polici- clico. Grupos cicloalquila típicos têm de a partir de 3 a 8 átomos no anel carbono. Grupos cicloalquila representativos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila. "Halogênio" ou "halo" refere-se a grupos cloro, bromo, flúor e iodo.

"Halo(C1-6 alquila)" refere-se a um radical C1-6 alquila substituído com um ou mais átomos de halogênio, de preferência um a cinco átomos de halogênio. Um grupo halo(C1-6 alquila) mais preferido é trifluormetila. "Halo(C1-6 alquil)fenila" refere-se a um grupo fenila substituído com um grupo halo(C1-6 alquila). "Halo(C1-6 alcóxi)" refere-se a um radical alcóxi substituído com um ou mais átomos de halogênio, de preferência um a cinco átomos de halogênio. Um grupo halo(Ci.6 alcóxi) mais preferido é trifluormetóxi.

"Halo(C1-6 alquil)sulfonila" e "halo(C1-6 alquil)sulfanila" referem-se à substituição de grupos sulfonila e sulfanila com grupos halo(C1-6 alquila) onde sulfonila e sulfanila são conforme aqui definido. “Heteroarila" refere-se a um grupo aromático tendo de a partir de 1 a 4 heteroátomos como átomos no anel em um anel aromático com o restante dos átomos no anel sendo átomos de carbono. Heteroátomos adequados empregados em compostos da presente invenção são nitrogênio, oxigênio e enxofre, onde os átomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados. Grupos heteroarila exemplares têm 5 a 14 átomos no anel e incluem, por exemplo, benzimidazolila, benzotiazolila, benzoxazolila, dia- zapinila, furanila, pirazinila, pirazolila, piridila, piridazinila, pirimidinila, pirroli- la, oxazolila, isoxazolila, imidazolila, indolila, indazolila, quinolinila, isoquino- linila, quinazolinila, quinoxalinila, tiazolila, tienila e triazolila. "Heterocicloalquila" refere-se aqui a substituintes cicloalquila que têm de a partir de 1 a 5, e, mais tipicamente, de a partir de 1 a 2 heteroáto- mos na estrutura de anel. Heteroátomos adequados empregados em compostos da presente invenção são nitrogênio, oxigênio e enxofre, onde os á- tomos de nitrogênio e enxofre podem ser opcionalmente oxidados. Porções heterocicloalquila representativas incluem, por exemplo, morfolino, piperazi- nila, piperidinila e similar.

"(Ove alquil)heterocicloalquila" refere-se a um grupo heterocicloalquila substituído com um grupo C1-6 alquila. "Heterocicloalquil(C1-6 alquila)" refere-se a uma Ci.6 alquila substituída com heterocicloalquila. "Heterocicloalquilcarbonila" refere-se aqui ao grupo -C(O)-R10 onde R10 é heterocicloalquila. "(Cj-6 alquil)heterocicloalquilcarbonila" refere-se ao grupo -C(O)- R11 onde R11 é (C1-6 alquil)heterocicloalquila.

"Hidróxi" refere-se a -OH. "Hidróxi(C1-6 alquila)" refere-se a um grupo C1-6 alquila substituído com hidróxi. "Hidróxi(C1-6 alquilaminocarbonila)" refere-se a um grupo C1-6 alquilaminocarbonila substituído com hidróxi. "Imidato" ou "éster imidato" refere-se ao grupo -C(=NH)O- ou a um composto contendo tal grupo. Ésteres imidato incluem, por exemplo, os metil éster imidato -C(=NH)OCH3. "Nitro" refere-se a -NO2.

"Sulfonila" refere-se aqui ao grupo -SO2-. "Sulfanila" refere-se aqui ao grupo -S-. "Alquilsufonila" refere-se a uma sulfonila substituída da estrutura -SO2R12 onde R12 é alquila. "Alquil- sulfanila" refere-se a uma sulfanila substituída da estrutura -SR12 onde R12 é alquila. Grupos alquilsulfonila e alquilsulfanila em compostos da presente invenção incluem (C1-6 alquil)sulfonila e (C1-6 alquil)sulfanila. Deste modo, grupos típicos incluem, por exemplo, metilsulfonila e metilsulfanila (isto é, onde R12 é metila), etilsulfonila e etilsulfanila (isto é, onde R12 é etila), propil- sulfonila e propilsulfanila (isto é, onde R12 é propila e similar). "Grupo de proteção de hidróxi" refere-se a grupos de proteção para um grupo OH. O termo conforme aqui usado refere-se também à proteção do grupo OH de um COOH ácido. Grupos de proteção hidróxi adequados bem como condições adequadas para proteção e desproteção de grupos funcionais particulares são bem-conhecidos na técnica. Por exemplo, vários tais grupos de proteção são descritos em T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Terceira Edição, Wiley, Nova York, 1999. Tais grupos de proteção hidróxi incluem Cvβ alquil éteres, benzil éteres, p-metoxibenzil éteres, silil éteres e similar.

O termo "polimorfo" refere-se às formas de cristal diferentes de um composto. Polimorfos podem diferir um do outro em várias propriedades físicas tal como, por exemplo, diferenças em seus padrões de difração de raio X, padrões de espectroscopia de absorção infravermelha, pontos de fusão, estabilidade ou solubilidade. "Metabólito" refere-se a qualquer derivado produzido em um indivíduo após administração de um composto de origem. Os derivados podem ser produzidos a partir do composto de origem através de várias transformações bioquímicas no indivíduo tal como, por exemplo, oxidação, redução, hidrólise ou conjugação e incluem, por exemplo, óxidos e derivados desmetilados. Metabolites correspondendo a tais derivados podem ser também produzidos através de métodos in vitro ou através de métodos sintéticos. Em algumas modalidades o metabólito de um composto de Fórmulas (l)-(IV) é um óxido. Em alguns aspectos, o óxido é um N-óxido que é formado sinteticamente através de tratamento de um composto de Fórmulas (I)- (IV) com um agente de oxidação. Em alguns aspectos o agente de oxidação é um N-óxido ou um hidroperóxido de N-metilmorfolina tal como peróxido de hidrogênio. Em algumas modalidades, um composto de Fórmulas (l)-(IV) é conjugado com ácido glucurônico para formar um metabólito. Em outro aspecto, é provido um metabólito, tautômero ou estereisômero do mesmo tendo a estrutura:

"Opcionalmente substituído" ou "substituído" refere-se à substituição de um ou mais átomos de hidrogênio com um radical monovalente ou divalente.

Quando o substituinte substituído inclui um grupo de cadeia reta, a substituição pode acontecer ou dentro da cadeia (por exemplo, 2- hidroxiproplla, 2-aminobutila e similar) ou no terminal da cadeia (por exemplo, 2-hidroxietila, 3-cianopropila e similar). Substituintes substituídos podem ser disposições de cadeia reta, ramificada ou cíclicas de carbono ou heteroátomos covalentemente ligados.

É compreendido que as definições acima não pretendem incluir padrões de substituição inadmissíveis (por exemplo, metila substituída com cinco grupos flúor ou um átomo de halogênio substituído com outro átomo de halogênio). Tais padrões de substituições inadmissíveis são bem- conhecidos do versado na técnica.

Será também aparente àqueles versados na técnica que os compostos da invenção, incluindo os compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou seus estereoisômeros e polimorfos, bem como sais, ésteres, metabolites e pró-fármacos de qualquer um deles, podem ser submetidos à tauto- merização e podem então existir em várias formas tautoméricas onde um próton de um átomo de uma molécula muda para um outro átomo e as ligações químicas entre os átomos das moléculas são consequentemente rear- ranjadas. Vide, por exemplo, March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, Quarta Edição, John Wiley & Sons, páginas 69-74 (1992). Conforme aqui usado, o termo "tautômero" refere-se aos compostos produzidos pela mudança de próton, e deve ser compreendido que todas as formas tautoméricas, na medida em que elas possam existir, estão incluídas na invenção. Por exemplo, o tautômero de um composto de fórmula (la) abaixo que é um composto de Fórmula (I) onde c é 1, é um composto de fórmula (lb). Similarmente, o tautômero de um composto de

(IVe)

Os compostos da invenção, incluindo os compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou seus tautômeros e polimorfos, bem como os sais, ésteres, metabolites e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um deles, podem compreender átomos de carbono assimetricamente substi- 10 tu idos. Tais átomos de carbono assimetricamente substituídos podem resultar nos compostos da invenção existindo em enantiômeros, diastereômeros e outras formas estereisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, tal como em formas (R)- ou (S)-. Como resultado, todos tais possíveis isômeros, estereoisômeros individuais em suas formas 15 opticamente puras, suas misturas, misturas racêmicas ( ou "racematos"), misturas de diastereômeros, bem como diastereômeros simples dos com-postos da invenção estão incluídos na presente invenção. Os termos confi-guração "S" e "R“, conforme aqui usado, são conforme definido pela IUPAC 1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREO-CHEMISTRY, Pure Appt. Chem. 45:13-30 (1976). Os termos α e β são em-pregados para posições de anel de compostos cíclicos. O lado oc do plano de referência é aquele lado onde o substituinte preferido se encontra na posição numerada menor. Aqueles substituintes que se encontram no lado oposto do plano de referência são designados descritores β. Deve ser notado que este uso difere daquele para stereoparents cíclicos, onde "a" significa "abaixo do plano" e significa configuração absoluta. Os termos configuração α e β, con-forme aqui usado, são conforme definido pelo CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE- APPENDIX IV (1987) parágrafo 203.

Será também aparente àqueles versados na técnica que os compostos da invenção, incluindo os compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou seus estereoisômeros e tautômeros, bem como os sais, ésteres, metabolites e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um deles, podem existir em várias formas cristalinas (ou "polimorfos") tendo propriedades físicas dintinguíveis. Deve ser compreendido que todos os polimorfos dos compostos da invenção, incluindo seus metabólitos, pró- fármacos, estereoisômeros e tautômeros, bem como os sais farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um deles, na medida em que eles possam e- xistir, ou em forma isolada ou como suas misturas, estão incluídos na invenção.

Conforme aqui usado, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se ao ácido não-tóxico ou sais de metal alcalino-terroso do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV). Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV), ou reagindo separadamente as funções de base ou ácidas com um ácido ou base orgânico ou inorgânico adequado, respectivamente. Sais representativos incluem, mas não estão limitados a, o que segue: ace tato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bis- sulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropio- nato, dodecilsulfato, etanossulfonato, glucoeptanoato, glicerofosfato, hemis- sulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodrato, 2- hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, nicotinato, 2- naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinate, persulfato, 3- fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato e undecanoato. Também, os grupos contendo nitrogênio básico podem ser quaternizados com tais agentes como hale- tos de alquila inferior, tal como cloreto de metila, etila, propila e butila, brometos e iodetos; sulfatos de dialquila tal como sulfatos de dimetila, dietila, dibutila e diamila, haletos de cadeia longa tal como cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e estearila, haletos de fenil alquila tal como brometos de benzila e fenetila e outros. Produtos solúveis ou dispersáveis em água ou óleo são então obtidos.

Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico e ácidos orgânicos tal como ácido oxálico, ácido maléico, ácido metanossulfônico, ácido succínico e ácido cítrico. Sais de adição básicos podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação finais dos compostos de Fórmula (I) ou separadamente através de reação de porções de ácido carboxílico com uma base adequada tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion de metal farmaceuticamente aceitável ou com amónia, ou uma amina primária, secundária ou terciária orgânica. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a, cátions baseados nos metais alcalinos e alcalino-terrosos, tal como sais de sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio e similar, bem como cátions de amónio, amónio quaternário e amina não-tóxicos, incluindo, mas não limitado a, amónio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilami- na e similar. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem dietilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina e similar.

Sais e formulações dos compostos da invenção são também descritos nos pedidos provisórios intitulados "Formulations For Benzimidazole Pyridyl Ethers" (número de série US 60/832715; attorney docket number 5 PP028237.0001) depositado em 21 de julho de 2006 e "Salts of Benzimidazolyl Pyridyl Ethers and Formulations Thereof" (attorney docket number PP028258.0001) depositado em 30 de agosto de 2006 cada um dos quais é aqui incorporado a título de referência em sua totalidade.

Conforme aqui usado, o termo "éster farmaceuticamente aceitá- 10 vel" refere-se a ésteres que hidrolisam in vivo e incluem aqueles que quebram prontamente no corpo humano para deixar o composto de origem ou um sal do mesmo. Grupos éster adequados incluem, por exemplo, aqueles derivados de ácidos carboxílicos farmaceuticamente aceitáveis, particular-mente ácidos alcanóico, alquenóico, cicloalcanóico e alcanodióico, onde ca- 15 da porção alquila ou alquenila vantajosamente não tem mais do que 6 átomos de carbono. Exemplos de ésteres particulares incluem formiatos, acetatos, propionatos, butiratos, acrilatos e etilsuccinatos.

O termo "pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis" conforme aqui usado refere-se àqueles pró-fármacos dos compostos da presente in- 20 venção que são, dentro do escopo de julgamento médico seguro, adequados para uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem toxidez, irritação, resposta alérgica indevidas e similar, comensuráveis com uma razão de benefício/risco razoável e eficazes para seu uso pretendido, bem como as formas zwitteriônicas, onde possível, dos compostos da inven- 25 ção. O termo "pró-fármaco" refere-se a compostos que são rapidamente transformados in vivo para dar o composto de origem da fórmula acima, por exemplo, através de hidrólise em sangue. Uma discussão completa é provida em T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 do A.C.S. Symposium Series e em Edward B. Roche, ed., Bioreversible Car- 30 riers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos aqui incorporados a título de referência.

Será aparente àqueles versados na técnica que os compostos da invenção, incluindo os compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou seus tautômeros, pró-fármacos, estereoisômeros e polimorfos, bem como os sais, ésteres e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis deles, podem ser processados in vivo através de metabolismo em um corpo humano ou animal ou 5 célula para produzir metabólitos farmacologicamente ativos que retêm atividade como inibidores. Os metabólitos ativos de um composto da invenção podem ser identificados usando técnicas de rotina conhecidas no campo. Vide, por exemplo, Bertolini, G. e outros, J. Med. Chem. 40:2011- 2016 (1997); Shan, D. e outros, J. Pharm. Sei. 36(7):765-767; Bagshawe K., Drug 10 Dev. Res. 34:220-230 (1995); Bodor, N., Advances in Drug Res. 13:224-331 (1984); Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); e Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen e outros, eds., Harwood Academic Publishers, 1991). Deve ser compreendido que compostos químicos individuais que são meta- 15 bólitos ativos de um composto da invenção estão incluídos na invenção.

O termo "câncer" refere-se a doenças de câncer que podem ser beneficialmente tratadas pela inibição de uma cinase, particularmente Raf cinase, incluindo, por exemplo, cânceres sólidos, tal como carcinomas (por exemplo, dos pulmões, pâncreas, tireoide, ovário, bexiga, mama, próstata ou 20 cólon), melanomas, distúrbios mielóides (por exemplo, leucemia mielóide, mieloma múltiplo e eritroleucemia), adenomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso) e sarcomas (por exemplo, osteossarcoma).

Em modalidades representativas da invenção, os compostos da invenção incluem, por exemplo: {1 -Metil-5-[2-(5-trif luorm etil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina, (2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amína, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (3-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il- óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-ilJ-amina, (4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-pindin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(3- trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol-2-il)- amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(4- trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol-2-il)- amina,

Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4- carboxílico, (2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol, 2-{4-[1-Metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila, (3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4- il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetiisulfanil-fenil)-amina, (3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, [4-Flúor-3-(tetraidro-furan-3-il)-fenil]-{1 -metil-5-[2-{5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-fl)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Bromo-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Flúor-3-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzotmidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina, (2-Flúor-5-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluorrnetil-feníl)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-pindin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (5-terc-ButÍI-2-flúor-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-1H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-pindin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, 2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenÍlamino)-1 -metil-1 H- benzoimidazol-5-ilóxi]-pindin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila, (5-terc-Butil-2-cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-píridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-annina, (2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1-Metil-5-[2-(4-fenil-5-triíluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)’ piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-íerc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol- 2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-5-trifluormetlil-fenil)“{1-metil-5-[2-(5-tπfluormetil-1 H- imi- dazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina; (2-Flúor-5-trifluormetil-feníl)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H- 5 imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-ferc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, 10 {1 -Metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il)-amina, [4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-f enil]-{ 1 -metil-5-[2-(5-trif luormetil-1H- 15 imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina,

Metil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico, Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-cloro-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridÍn-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4- carboxílico, (2-Flúor-4-trifluormetil-fenil)-{1 •metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2«il)- piridin-4-il0xi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, 25 (2,5-Dimetóxi-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (3,5-Dimetóxi-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H- 30 benzo- imidazol-2-il}-(2-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il-óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Etil-piperazin-1-il)-(2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona, (2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1 H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-il)-3H-imidazol-4-carboxílico, {1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-im idazol-2-íl)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(2-flúor-5-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{6-metóxi-1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {6-Metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, (4-Etil-piperazin-1-il)-(2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)- 1H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona, {1 -Etil-5-[2-(5-trif luormetil-1 H-imidazol-2-il)-pirid in-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil- fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]- piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico, 2-{ 1 -Metil-5-[2-(5-trÍfluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo- imidazol-2-ilamino}-5-trifluormetil-fenol, e 3-{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-ilamino}-6-trifluormetil-fenol; ou um tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró- fármaco do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto, tautômero, estereoisômero, polimorfo, éster, metabólito ou pró-fármaco.

Em outros aspectos, a presente invenção refere-se aos processos para preparação dos compostos de Fórmula (I), (II), (III) ou (IV) e a intermediários sintéticos úteis em tais processos.

A presente invenção refere-se também aos processos para preparação dos compostos da invenção e a intermediários sintéticos úteis em tais processos, conforme descrito em detalhes abaixo.

Métodos sintéticos

O Esquema 1 ilustra a construção da porção éter de biarila central dos compostos da invenção. O composto 1.1 é reagido com o composto 1.2 onde um de L1 ou L2é halo e o outro de L1 ou L2 é OH para formar éter 1.3. O acoplamento pode ser realizado em um solvente orgânico tal como acetonitrila ou sulfóxido de dimetila na presença de uma base e pode ser também conduzido em temperaturas elevadas ou de refluxo. Bases adequadas incluem K2CO3, CaCO3, KOH, NaOH ou KFAI2O3 (Journal of Organic Chemistry, Vol. 63, Nθ 18, 1998 pgs. 6338-6343). O grupo Q no composto 1.1 pode ser NH2 ou um precursor amino tai como NO2 ou um grupo amino protegido que pode ser mais tarde convertido na amina através de respectivamente redução ou desproteção dos precursores amino. O grupo Z no composto 1.2 pode ser um grupo imidazol substituído com um ou dois grupos R4 ou um grupo funcional que pode ser usado para formar tal grupo imi- dazoíla. Grupos funcionais adequados incluem um aldeído ou qualquer precursor de aldeído tal como um éster ou carbonitrila que possa mais tarde ser convertido no aldeído. Os grupos éster e carbonitrila podem ser reduzidos no aldeído com um agente de redução tal como hidreto de diisobutilalumínio. Z pode ser também -CH2OR5, onde R5 é um grupo de proteção hidróxi. O aldeído pode ser não-mascarado em um estágio posterior através de desproteção do grupo R5 e oxidação do álcool resultante no aldeído. A conversão do aldeído em um grupo imidazoíla substituído é mostrada no Esquema 3. Outros métodos para formação do grupo imidazoíla substituído são mostrados no Esquema 6.

O Esquema 2 mostra um exemplo de uma síntese de certos éteres de biarila. É compreendido que para propósitos ilustrativos, o Esquema 2 emprega os padrões de substituição que seguem: Q é NO2, L1 é OH, l_2é Cl e Z é um t-butil éster. Um exemplo da síntese de aldeído 2.7 onde R2é metila e b é 0 é mostrado no Exemplo 1. Amina 2.1 pode ser convertida em alquil amina 2.2 através de vários métodos conhecidos. Em um aspecto, amina 2.1 é tratada com anidrido acético e ácido fórmico para formar a formamida correspondente que pode ser reduzida em alquil amina 2.2. Agentes de redução adequados incluem NaBH4 na presença de BF3(OCH2CH3)2. Alternativamente, alquil amina 2.2 pode ser sintetizada reagindo amina 2.1 com anidrido 5 trifluoracéitco, alquilação da amida correspondente com um agente de alqui- lação tal como haleto de alquila e remoção do grupo de proteção de trifluo- racetamida através de tratamento com base tal como NaOH.

Cloreto 2.5 pode ser preparado tratamento ácido picolínico 2.3 com cloreto de tionila em excesso para formar cloreto ácido 2.4 que é então exposto a di-t-butil dicarbonato e piridina para dar cloreto 2.5. Acoplamento de álcool da alquil amina 2.2 com cloreto 2.5 sob condições básicas dá éter 2.6 que pode ser convertido diretamente em aldeído 2.7 através de redução com hidreto de diisobutilalumínio ou em duas etapas através de redução de éster 2.6 no álcool seguido por oxidação para o aldeído.

O Esquema 3 ilustra a formação do anel imidazol. O Aldeído 2.7 pode ser reagido com composto 3.1 onde Xb é =0 ou =NHOH e R4p e R4q são independentemente H ou R4, onde R4 é conforme anteriormente definido, contanto que pelo menos um de R4p e R4q seja R4. A reação pode ser realizada em um solvente polar tal como uma mistura de acetato de etila/etanol e na presença de NH4OH para prover composto 3.2. O grupo nitro do composto 3.2 pode ser reduzido em amina 3.3 através de tratamento com um agen- te de redução tal como ditionita de sódio (Na2S2O4). Esquema 3:

O Esquema 4 ilustra formação do anel benzimidazol. Diamina 3.3 é reagida com tioisocianato 4.1 para prover tiouréia 4.2. Tratamento de 4.2 com um agente de dessulfurização dá um composto de Fórmula (I). O 10 termo "agente de dessulfurização" refere-se a agentes adequados para realizar fechamento de anel tal como FeCI3, iodeto de 2-cloro-1 -metilpiridínio (reagente Mukaiyama), cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio, POCI3 ou um haleto de alquila tal como iodeto de metila. Reagentes Mukaiyama modificados podem ser também usados (Journal of Organic Chemistry, Vol. 70, Ne 7, 15 2005 pgs. 2835-2838). Esquema 4:

Os compostos da invenção podem ser alternativamente sintetizados modificando a sequência das reações de acoplamento. O Esquema 5 ilustra acoplamento de 5.1 com 5.2 para formar a ligação éter e 0 acopla- mento de 5.3 com 3.1 para formar o anel imidazol como a penúltima etapa de formação do núcleo pentacíclico completamente acoplado. Para interme-diários 5.1 e 5.2, um de L3ou L4 é halo e o outro de L3 ou L4 é OH, Os inter-mediários podem ser preparados conforme mostrado nos esquemas anterio- 5 res empregando materiais de partida e/ou grupos de proteção adequados nas seqüências de reação apropriadas. Tais fatores estão dentro do versado na técnica. O aldeído 5.3, por exemplo, pode ser preparado através de redu-ção da carbonitrila correspondente, cuja síntese é mostrada no Exemplo 60, com hidreto de diisobutilalumínio. Reação de aldeído 5.3 de acordo com o Esquema 3 acima com cetona 3.1 dá compostos de Fórmula (I).

Os compostos da invenção tendo um grupo terminal triazol po-dem ser preparados conforme mostrado no Esquema 6, através de reação do composto 6.1 onde Z é uma carbonitrila com hidrazida 6.2. Um exemplo 15 da síntese de composto 6.3 é descrito no Exemplo 60.

Será compreendido que os intermediários imidazol usados nas reações de acoplamento podem ser preparados usando outras vias sintéticas. Um tal método é mostrado no Esquema 7. O Composto 1.3, onde Z é CN, é convertido em um composto onde Z é um grupo amidino.

Esta transformação pode ser realizada reagindo 1.3 com um al- cóxido, tal como metóxido, para converter a carbonitrila em um éster imidato que é em seguida reagido com um reagente de amónio tal como acetato de amónio ou benzoato de amónio para formar a amidina. Reação da amidina com composto (Va), onde Xa é um grupo de saída, provê o composto alquilado e ciclizado 7.2 ou um tautômero do mesmo. Aquecimento do composto 7.2 leva à eliminação de água (desidratação) e à formação de intermediário 7.3. Outras condições de desidratação incluem tratamento de 7.2 com ácidos orgânicos tal como ácido acético, ácido metanossulfônico, ácido canfor- sulfônico, ácido trifluormetanossulfônico e ácido trifluoracético, bem como com ácidos inorgânicos tal como ácido clorídrico e ácido sulfúrico. A formação de quatro reações de éster imidato, formação de amidina, aiquila- ção/ciclização e desidratação são tipicamente realizadas em uma sequência de uma panela. Esquema 7:

Os compostos da invenção são úteis in vitro ou in vivo em inibição do crescimento de células de câncer. Os compostos podem ser usados sozinhos ou em composições junto com um veículo ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem, por exemplo, agentes de processamento e modificadores e realçadores de aplicação de fármaco, tal como, por exemplo, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarídeos, amido, gelatina, celulose, metil celulose, carboximetilcelulose de sódio, dextrose, hidroxipropil-β-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de baixo derretimen- to, resinas de troca de ion e similar, bem como combinações de qualquer urn de dois ou mais dos mesmos. Outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences," 5 Mack Pub. Co., New Jersey (1991), incorporado aqui a título de referência.

Quantidades eficazes dos compostos da invenção geralmente incluem qualquer quantidade suficiente para detectavelmente inibir atividade de Raf através de qualquer um dos ensaios descritos aqui, através de outros ensaios de atividade de Raf cinase conhecidos dos ou prontamente determi- 10 nados por aqueles ordinariamente ordinário na técnica ou através de detecção de uma inibição ou alívio de sintomas de câncer.

A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais veículos para produzir uma forma de dosagem única vai variar dependendo do hospedeiro tratado e do modo de administração particular. 15 Será compreendido, no entanto, que o nível de dose específico para qualquer paciente particular vai depender de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, da idade, peso do corpo, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, taxa de excreção, combinação de fármaco e a severidade da doença particular 20 sofrendo terapia. A quantidade terapeuticamente eficaz para uma dada situ-ação pode ser prontamente determinada através de experimentação de rotina e está dentro do versado e julgamento do médico comum.

Para propósitos da presente invenção, uma dose terapeutica-mente eficaz vai geralmente ser uma dose diária total administrada a um 25 hospedeiro em doses únicas ou divididas que pode ser em quantidades, por exemplo, de a partir de 0,001 a 1000 mg/kg de peso do corpo diariamente e de a partir de 1,0 a 30 mg/kg de peso do corpo diariamente. Composições de unidade de dosagem podem conter tais quantidades de seus submúlti- plos para formar a dose diária.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados oralmente, parenteralmente, sublingualmente, através de aerossolização ou spray de inalação, retalmente ou topicamente em formulações de unidade de dosagem contendo veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos conforme desejado. Administração tópica pode também envolver o uso de administração transdermal tal como emplastros transder- mais ou dispositivos de ionoforese. O termo parenteral conforme aqui usado inclui injeções subcutâneas, injeção intravenosa, intramuscular, intracisternal ou técnicas de infusão.

Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleagionosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida usando agentes de dispersão ou umectantes e agentes de suspensão adequados. A preparação injetável estéril pode ser também uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente pa- renteralmente aceitável não-tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3- propanodiol. Dentre os veículos e solventes adequados que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotô- nica. Ainda, óleos fixos, estéreis, são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Ainda, ácidos graxos tal como ácido oléico encontram uso na preparação de injetáveis.

Supositórios para administração retal do fármaco podem ser preparados através da mistura do fármaco com excipientes não-irritantes adequados tal como manteiga de cacau e polietileno glicóis, que são sólidos em temperaturas comuns mas líquidos na temperatura retal e vão então derreter no reto e liberar o fármaco.

Formas de dosagem sólidas para administração oral podem incluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte tal como sacarose, lactose ou amido. Tais formas de dosagem podem também compreender, como é prática normal, substâncias adicionais outras que não diluentes inertes, por exemplo, agentes lubrificantes tal como estearato de magnésio. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem podem também compreender agentes de tampo- namento. Comprimidos e pílulas podem ser adicionalmente preparados com revestimentos entéricos.

Formas de dosagem líquidas para administração oral podem incluir emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamen- 5 te aceitáveis contendo diluentes inertes geralmente usados na técnica, tal como água. Tais composições podem também compreender adjuvantes, tal como agentes umectantes, agentes emulsificantes e de suspensão, ciclo- dextrinas e agentes adoçantes, flavorizantes e de perfume.

Os compostos da presente invenção podem ser também admi- 10 nistrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na técnica, lipossomas são geralmente derivados de fosfolipídeos ou outras substâncias lipídeo. Lipossomas são formados por cristais líquidos mono- ou multilamelares hidratados que são dispersos em um meio líquido. Qualquer líquido não- tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável capaz de formação de II- 15 possomas pode ser usado. As presentes composições em forma de lipos- soma podem conter, em adição a um composto da presente invenção, estabilizadores, conservantes, excipientes e similar. Os lipídeos preferidos são os fosfolipídeos e fosfatidil colinas (lecitinas), ambos naturais e sintéticos. Métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica. Vide, por e- 20 xemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N. W., p. 33 et seq. (1976).

Embora os compostos da invenção possam ser administrados como o único agente farmacêutico ativo, eles podem ser também usados em combinação com um ou mais outros agentes usados no tratamento de cân- 25 cer. Os compostos da presente invenção são também úteis em combinação com agentes terapêuticos e agentes anticâncer conhecidos, e combinações dos compostos aqui descritos com outros agentes anticâncer ou quimiotera- pêuticos estão dentro do escopo da invenção. Exemplos de tais agentes po-dem ser encontrados em Cancer Principles and Practice of Oncology, V. T. 30 Devita and S. Hellman (editores), 6a edição (15 de fevereiro, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Uma pessoa versada na técnica seria capaz de determinar quais combinações de agentes seriam úteis com base nas características particulares dos fármacos e o câncer envolvido. Tais a- gentes anticâncer incluem, mas não estão limitados a, o que segue: modula- dores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor de retinóide, agentes citotóxicos/citostáticos, agen- 5 tes antiproliferatives, inibidores de prenil-proteina transferase, inibidores de HMG-CoA redutase e outros inibidores de angiogênese, inibidores de proliferação celular e sinalização de sobrevivência, agentes de indução de apopto- se e agentes que interferem com checkpoints de ciclo celular. Os compostos da invenção são também úteis quando co-administrados com terapia de ra- 10 diação.

Deste modo, em uma modalidade da invenção, os compostos da invenção são também usados em combinação com agentes anticâncer co-nhecidos incluindo, por exemplo, moduladores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor de reti- 15 nóide, agentes citotóxicos, agentes antiproliterativos, inibidores de prenil- proteína transferase, inibidores de HMG-CoA redutase, inibidores de protease de HIV, inibidores de transcriptase reversa e outros inibidores de angiogênese.

Moduladores de receptor de estrogênio são compostos que in- 20 terferem com ou inibem a ligação de estrogênio ao receptor, sem importar o mecanismo. Exemplos de moduladores de receptor de estrogênio incluem, mas não estão limitados a, tamoxifen, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY117081, toremifeno, fulvestrant, 4^[7-(2,2-dimetil-1-oxopropóxi-4-metil- 2- [4-[2-(1 -piperidinil)etóxi]fenil]-2H-1 -benzopiran-3-il]-fenil-2,2-dimetil- propa- noato, 4,4'-diidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenil-hidrazona e SH646.

Moduladores de receptor de androgênio são compostos que interferem com ou inibem a ligação de androgênios a um receptor de andro-gênio. Exemplos representativos de moduladores de receptor de androgênio incluem finasterida e outros inibidores de 5a-redutase, nilutamida, flutamida, 30 bicalutamida, liarozol e acetato de abiraterona. Moduladores de receptor de retinóide são compostos que interferem ou inibem a ligação de retinóides a um receptor de retinóide. Exemplos de moduladores de receptor de retinóide incluem bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cis-retinóico, ácido 9-cis-retinóico, a-difluormetilornitina, LX23-7553, trans-N-(4'-hidroxifenil)retinamida e N4- carboxifenil retinamida.

Agentes citotóxicos e/ou citostáticos são compostos que causam morte celular ou inibem proliferação celular pricipalmente interferindo diretamente com o funcionamento da célula ou inibem ou interferem com mitose de célula, incluindo agentes de alquilação, fatores de necrose de tumor, ín- tercaladores, compostos ativáveis por hipoxia, inibidores de microtúbu- lo/agentes de estabilização de microtúbulo, inibidores de cinecinas mitóticas, inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica, antimetabólitos; modificadores de resposta biológica; agentes terapêuticos hormonaís/anti- hormonais, fatores de crescimento hematopoiéticos, agentes terapêuticos direcionados a anticorpo monoclonal, inibidores de topoisomerase, inibidores de proteasoma e inibidores de ubiquitina ligase. Exemplos de agentes citotó- xrcos incluem, mas não estão limitados a, sertenef, cachectin, ifosfamida, tasonermin, lonidamina, carboplatina, altretamina, prednimustina, dibromodulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatina, oxaliplatina, temozolomida, heptaplatina, estramustina, tosilato de improsulfan, trofosfamida, nimustina, cloreto de dibrospidio, pumitepa, lobaplatina, satraplatina, profiromicina, cis- platina, irofulven, dexifosfamida, cis-aminodicloro(2-metil- piridina)platina, benzilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloreto de (trans, trans, trans)- bis-mu- (hexano-l,6-diamino)-mu-[diamino-platina(ll)]bis[diamino(cloro)platina (II)], diarizidinilespermina, trióxido arsênico, 1-(11-dodecilamino-10- hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina, zorrubicina, idarrubicina, daunorrubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarrubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, an- tineoplaston, 3'-desamino-3'- morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina, annamicina, galarrubicina, elinafida, MEN 10755 e 4-desmetóxi-3-desamino- 3-aziridinil-4-metilsulfonil-daunorrubicina (vide WO 00/50032). Um exemplo representativo de composto ativável por hipoxia é tirapazamina. Inibidores de proteasoma incluem, mas não estão limitados a, lactacistina e bortezo- mib. Exemplos de inibidores de microtúbulo/agentes de estabilização de mi-crotúbulo incluem paclitaxel, sulfato de vindesina, 3',4’-didesidro-4'-desóxi-8'- norvincaleucoblastina, docetaxol, rizoxin, dolastatin, isetionato de mivobulin, auristatin, cemadotin, RPR109881, BMS 184476, vinflunina, criptoficina, 2,3,4,5,6-pentaflúor-N-(3-flúor-4-metoxifenil) benzeno sulfonamida, anidro- vinblastina, N,N-dimetil-1 -valil-1 -val il-N-metil-1 - valil-1 -prolil-1 -prolino-t- butilamida, TDX258, como epotilonas (vide, por exemplo, Patentes U.S. Nθs 6.284.781 e 6.288.237) e BMS188797. Exemplos representativos de inibidores de topoisomerase incluem topotecan, hicaptamina, irinotecan, rubitecan, 6-etoxipropionil-3',4'-0-exo-benzilideno-chartreusin, 9-metóxi-N,N-dimetil-5- nitropirazol[3,4,5-kl]acridino-2-(6H) propanamina, 1 -amino-9-etil-5-flúor-2,3- diidro- 9-hidróxi-4-metil-1H,12H-benzo[de]pirano[3',4':b,7]- indolizino[1,2b]quinolino-10,13(9H, 15H)diona, lurtotecan, 7-[2-(N- isopropilamino)etil]-(20S)camptotecin, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, etoposídeo fosfato, teniposieo, sobuzoxana, 2'-dimetilamino-2'- desóxi-etoposídeo, GL331 , N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidróxi-5,6- dimetil-6H- pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa, 9b)-9-[2-[N- [2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidróxi-3,5-dimetoxifenil]- 5,5a,6 8,8a,9-hexaidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-ona, 2,3- (metileno-dióxi)-5-metil-7-hidróxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridínio-6,9-bis [(2- amino- etil)amino]benzo[g]isoguinolina-5,10-diona, 5-(3-aminopropilamino)- 7,10-diidróxi-2- (2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazol[4,5, 1 '-de]acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)- etilamino]-7-metóxi-9-oxo-9H-tioxanten-4- ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridino-4-carboxamida, 6-[[2- (dimetilamino)etil]amino]-3- hidróxi- 7H-indeno [2,1l-c]quinoiin-7-ona e di- mesna. Exemplos de inibidores de cinesinas mitóticas, tai como cinesina mitótica humana KSP, são descritos nas Publicações PCT WO 01/30768 e WO 01/98278, WO 03/050.064 (19 de junho, 2003), WO 03/050.122 (19 de junho, 2003), WO 03/049.527 (19 de junho, 2003), WO 03/049.679 (19 de junho, 2003), WO 03/049.678 (19 de junho, 2003) e WO 03/39460 (15 de maio, 2003) Pedidos PCT pendentes Nss US03/06403 (depositado em 4 de março, 2003), US03/15861 (depositado em 19 de maio, 2003), US03/15810 (depositado em 19 de maio, 2003), US03/18482 (depositado em 12 de junho, 2003) e US03/18694 (depositado em 12 de junho, 2003). Em uma mo- dalidade inibidores de cinesinas mitóticas incluem, mas não estão limitados a, inibidores de KSP, inibidores de MKLP1, inibidores de CENP-E, inibidores de MCAK, inibidores de Kif14, inibidores de Mphosphl e inibidores de Rab6- KIFL.

Inibidores de cinases envolvidas em progressão mitótica incluem, mas não estão limitados a, inibidores de aurora cinase, inibidores de cinases tipo Polo (PLK) (por exemplo, inibidores de PLK-1), inibidores de bub-1 e inibidores de bub-R1. Agentes antiproliferatives incluem oligonucleo- tídeos de RNA e DNA de anti-sentido tal como G3139, ODN698, RVAS- KRAS, GEM231 e INX3001 e antimetabólitos tal como enocitabina, carmo- fur, tegafur, pentostatin, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, oefosfato de citarabina, hidrato de sódio de fosteabina, raltitre- xed, paltitrexid, emitefur, tiazofurin, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nel- zarabina, 2'-desóxi-2'-metilidenocitidina, 2'-fluormetileno- 2'-desoxicitidina, N- [5-(2,3-diidro-benzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)uréia, N6- [4-desóxi-4- [N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-1 -glicero-B-1 -mano- heptopirano- sil] adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo- 4,6,7,8- tetraidro-3H-pirimidino[5i4-b][l,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-1 - glutâmico, aminopterina, 5-flurouracila, alanosina, éster do ácido 11-acetil-8- (carbamoiloximetil)-4-formil-6- metóxi-14-oxa-1,1-diazatetraciclo(7.4.1.0.0)- tetradeca-2,4,6-trien-9-il acético, swainsonina, lometrexol, dexrazoxana, me- tioninase, 2'-ciano-2‘-desóxi-N4-palmitoil-1-B- D-arabino furanosil citosina e 3-aminopiridino-2-carboxaldeído tiosemicarbazona. Exemplos de agentes terapêuticos direcionados a anticorpo monoclonal incluem aqueles agentes terapêuticos que têm agentes citotóxicos ou radioisótopos ligados a um anticorpo específico de célula de câncer ou monoclonal específico de célula direcionada. Exemplos incluem, por exemplo, Bexxar. Inibidores de HMG-CoA redutase são inibidores de 3-hÍdróxi-3-metilglutaril-CoA redutase. Compostos que têm atividade inibidora para HMG-CoA redutase podem ser prontamente identificados usando ensaios bem-conhecidos na técnica tal como aqueles descritos ou citados na Patente U.S. Ns 4.231.938 e WO 84/02131. Exemplos de inibidores de HMG-CoA redutase que podem ser usados incluem, mas não estão limitados a, lovastatina (MEVACOR®; vide Patentes U.S. Nss 4.231.938, 4.294.926 e 4.319.039), simvastatina (ZOCOR®; vide Patentes U.S. N2s 4.444.784, 4.820.850 e 4.916.239), pravastatina (PRAVACHOL®; vide Patentes U.S. Nss 4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 e 5.180.589), fluvastatina (LESCOL®; vide Patentes U.S. N2s 5.354.772, 4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 e 5.356.896) e ator- vastatina (LIPITOR®; vide Patentes U.S. N2s 5.273.995, 4.681.893, 5.489.691 e 5.342.952). As fórmulas estruturais desses inibidores de HMG- CoA redutase e adicionais que podem ser usados nos presentes métodos são descritas na página 81 de M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pp. 85-89 (5 de fevereiro, 1996) Patentes U.S. Nss 4.782.084 e 4.885.314. Em uma modalidade, o inibidor de HMG-CoA redutase é selecionado de lovastatina e simvastatina.

Inibidores de prenil-proteina transferase são compostos que inibem qualquer uma ou qualquer combinação das enzimas prenil-proteína transferase, incluindo farnesil-proteína transferase (FPTase), geranilgeranil- proteína transferase tipo I (GGPTase-l) e geranilgeranil-proteína transferase tipo-ll (GGPTase-ll, também chamada Rab GGPTase). Exemplos de compostos de inibição de prenil-proteína transferase incluem (±)-6-{amino(4- clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)- quinolinona, (-)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3- clorofenil)-1-metil-2(1 H)-quÍnolinona, (+)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1 H- imidazol-5-il) metil]-4-(3-clorofenil)-1 -metil-2(1 H)-quinolinona, 5(S)-n-butil-1 - (2,3-dimetilfenil)-4-[1 -(4-cianobenzil)-5-imnidazolilmetil-2-piperazinona, (S)-1 - (3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobenzil)-5-imidazolilmetil]-5-[2-(etanossulfonil)metil)- 2-piperazinona, 5(S)-n-butil-1-(2-metillfenil)-4-[1-(4-cianobenzil)-5- imidazolilmetil]-2-piperazinona, 1 -(3-clorof enil)-4-[ 1 -(4-cianobenzil)-2-metil-5- imidazolilmetil]-2-piperazinona, 1 -(2,2-difeniletil)-3-[N-(1 -(4-cianobenzil)-1 H- imidazol-5- iletil)carbamoil]piperidina, 4-{-[4-hidroximetil-4-(4-cloropiridin-2- i lm etil)-pipe ridino-1 -ilmetil]-2-nietilimidazol-1 -ilmetiljbenzonitri la, 4-{-5-[4- hidroximetil-4-(3-clorobenzil)-piperidino-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}- benzonitrila, 4-{3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)benzil]-3H-imidazol-4- ilmetiljbenzonitrila, 4-{3-[4-(5-cloro-2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5l-ilmetil]-3H- imidazol-4-il-metil}benzonitrila, 4-{3-[4-(2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H- imidazol-4-il-metil} benzonitrila, 4-[3-(2-oxo-1-fenil-1,2-diidropiridin-4-ilmetil)- 3H-midazol-4- ilmetil}benzonitrila, 18,19-ditdro-19-oxo-5H, 17H-6,10:12,16- dimeteno-1 H-imidazo[4,3-c][1,11 ,4]dioxaazaciclo-nonadecino-9-carbonitrila, (±)-19,20-d i id ro-19-oxo-5H-18,21 -etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H- benzo[d]imidazo[4,3-k]-[1 ,6,9,12]oxatriaza-ciclooctadecino-9-carbonitrila, 19,20-d i id ro-19-oxo-5H, 17H-18,2-etano-6,10:12,16-dimeteno-22H- imidazo[3,4-h][1,8,11,14]oxatriazacicloeicosino-9-carbonitrila e (+-)-19,20- diidro-3-metil-19-oxo-5H-18,21 -etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H- benzo[d]imidazo[4,3-k][l,6,9,12]oxa-triazaciclooctadecino-9-carbonitrila. Outros exemplos de inibidores de prenil-proteina transferase podem ser encontrados nas publicações e patentes: WO 96/30343. WO 97/18813, WO 97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO 95/32987, Pat. U.S. N9 5.420.245, U.S. Pat. Nδ 5.523.430, Pat.U.S. Ns 5.532.359, Pat. U.S. N9 5.510.510, Pat. U.S. Ns 5.589.485, Pat. U.S. Ns 5.602.098, Publicação de Patente Européia 0 618 221, Publicação de Pat-ente Européia 0 675 112, Publicação de Patente Européia 0 604 181, Publicação de Patente Européia 0 696 593, WO 94/19357, WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514, Pat. U.S. N9 5.661.152, WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO 95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO 96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO 96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, Pat. U.S. Ns 5.571.792, WO 96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO 96/30362, WO 96/30363, WO 96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050, WO 97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436 e Patent U.S. N9 5.532.359. Para um exemplo do papel de um inibidor de prenil-proteina transferase sobre angiogênese vide European J. of Cancer 55(9): 1394-1401 (1999).

Inibidores de angiogênese referem-se a compostos que inibem a formação de novos vasos sanguíneos, sem importar o mecanismo. Exemplos de inibidores de angiogênese incluem, mas não estão limitados a, inibidores de tirosina cinase, tal como inibidores de receptores de tirosina cinase Flt-1 (VEGFR1) e Flk-1/KDR (VEGFR2), inibidores de fatores de crescimento 5 derivados de epidermal, derivados de fibroblasto ou derivados de plaqueta, inibidores de MMP (metaloprotease de matriz), bloqueadores de integrina, interferon-alfa, interleucina-12, pentosan-polissulfato, inibidores de ciclooxi- genase, incluindo antiinflamatórios não-esteroidais (NSAIDs) tal como aspirina e ibuprofeno bem como inibidores de ciclooxigenase-2 seletivos tal como 10 celecoxib e rofecoxib (PNAS 59:7384 (1992); JNCI 69:475 (1982); Arch. O- phtalmol. 108:573 (1990); Anal Rec. (238):68 (1994); FEBS Letters 372:83 (1995); Clin. Orthop. 313:76 (1995); J. Mol. Endocrinol. 16:107 (1996); Jpn. J. Pharmacol. 75:105 (1997); Cancer Res. 57:1625 (1997); Cell 93:705 (1998); Inti. J. Mol. Med. 2:715 (1998); J. Biol. Chem. 274:9116 (1999)), anti- 15 inflamatórios esteroidais (tal como corticosteróides, mineralocorticóides, de- xametasona, prednisone, prednisolona, metilpred, betametasona), carboxi- amidotriazol, combretastatin A4, squalamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)- fumagillol, talidomida, angiostatina, troponin-1, antagonistas de angiotensina II (vide Fernandez e outros, J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)) e anti- 20 corpos para VEGF (vide, Nature Biotechnology, 17:963-968 (outubro, 1999); Kim e outros, Nature, 352:841-844 (1993); WO 00/44777; e WO 00/61186). Outros agentes terapêuticos que modulam ou inibem angiogênese e podem ser então usados em combinação com os compostos da presente invenção incluem agentes que modulam ou inibem o sistema de coagulação e fibrinó- 25 lise (vide revisão em Clin. Chem. La. Med. 35:679-692 (2000)). Exemplo de tais agentes que modulam ou inibem os cursos de coagulação e fibrinólise icluem, mas não estão limitados a, heparina (vide Thromb. Haemost. 80:10- 23 (1998)), heparinas e inibidores U de carboxipeptidase de baixo peso molecular (também conhecidos como inibidores de inibidor de fibrinólise ativável 30 por trombina ativa [TAFIa]) (vide Thrombosis Res. 101:329-354 (2001)). Inibidores de TAFIa foram descritos na Publicação PCT WO 03/013.526 U.S. Ne de Série 60/349.925 (depositada em 19 de janeiro, 2002). A invenção também compreende combinações dos compostos da invenção com NSAIDs que são inibidores de COX-2 seletivos (geralmente definidos como aqueles que possuem uma especificidade para inibição de COX-2 sobre COX-1 de pelo menos 100 vezes conforme medido através da razão de IC5o para COX-2 sobre IC50 para COX-1 avaliada através de ensaio de célula ou microssomal). Tais compostos incluem, mas não estão limitados a, aqueles descritos na Patente U.S. Ns 5.474.995 expedida em 12 de dezembro, 1995, Pat. U.S. N- 5.861.419, expedida em 19 de janeiro, 1999, Pat. U.S. N9 6.001.843, expedida em 14 de dezembro, 1999, Pat. U.S. N9 6.020.343, expedida em 1 de fevereiro, 2000, Pat U.S. Ns 5.409.944, expedida em 25 de abril, 1995, Pat. U.S. N9 5.436.265, expedida em 25 de julho, 1995, Pat. U.S. N9 5.536.752, expedida em 16 de julho, 1996, Pat U.S. N9 5.550.142, expedida em 27 de agosto, 1996, Pat. U.S. N9 5.604.260, expedida em 18 de fevereiro, 1997, Pat. U.S. N9 5.698.584, expedida em 16 de dezembro, 1997, Pat. U.S. N9 5.710.140, expedida em 20 de janeiro, 1998, WO 94/15932, publicado em 21 de julho, 1994, Pat. U.S. N9 5,344.991, expedida em 6 de junho, 1994, Pat. U.S. N9 5.134.142, expedida em 28 de julho, 1992, Pat.U.S. Nfi 5.380.738, expedida em 10 de janeiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.393.790, expedida em 20 de fevereiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.466.823, expedida em 14 de novembro, 1995, Pat. U.S. N9 5.633.272, expedida em 27 de maio, 1997 e Pat. U.S. N9 5.932.598, expedida em 3 de agosto, 1999, todos aqui incorporados a título de referência. Inibidores representativos de COX-2 que são úteis nos métodos da presente invenção incluem 3-fenil-4-(4- (metilsulfonil)fenil)-2-(5H)-furanona; e 5-cloro-3-(4-metilsulfonil)fenil-2-(2- metil-5-piridinil)piridina. Compostos que são descritos como inibidores específicos de COX-2 e são então úteis na presente invenção, e métodos de sua síntese, podem ser encontrados nas patentes, pedidos de patente e publicações que seguem, que são aqui incorporados a título de referência: WO 94/15932, publicado em 21 de julho, 1994, Pat. U.S. N9 5.344.991, expedida em 6 de junho, 1994, Pat. U.S. N9 5.134.142, expedida em 28 de julho, 1992, Pat. U.S. N9 5.380.738, expedida em 10 de janeiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.393.790, expedida em 20 de fevereiro, 1995, Pat. U.S. N9 5.466.823, ex pedida em 14 de novembro, 1995, Pat. U.S. Ne 5.633.272, expedida em 27 de maio, 1997, Pat. U.S. N2 5.932.598, expedida em 3 de agosto, 1999, Pat. U.S. Ns 5.474.995, expedida em 12 de dezembro, 1995, Pat. U.S. Ne 5.861.419, expedida em 19 de janeiro, 1999, Pat. U.S. Ne 6.001.843, expe- 5 dida em 14 de dezembro, 1999, Pat. U.S. NQ 6.020.343, expedida em 1 de fevereiro, 2000, Pat. U.S. Ne 5.409.944, expedida em 25 de abril, 1995, Pat. U.S. N- 5.436.265, expedida em 25 de julho, 1995, Pat. U.S. Ns 5.536.752, expedida em 16 de julho, 1996, Pat. U.S. Ne 5.550.142, expedida em 27 de agosto, 1996, Pat. U.S. Ns 5.604.260, expedida em 18 de fevereiro, 1997, Pat. U.S. Ns 5.698.584, expedida em 16 de dezembro, 1997 e Pat. U.S. Ne 5.710.140, expedida em 20 de janeiro, 1998. Outros exemplos de inibidores de angiogênese incluem, mas não estão limitados a, endostatina, ukrain, ranpirnase, IM862, 5-metóxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1 - oxaespiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil)carbamato, acetildinanalina, 5-amino-1 - [[3,5-dicloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]metil]-1 H-1,2,3-triazol-4-carboxamida, CM101, esqualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de ma- nopentaose sulfatado, 7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4:,2- pirrolcarbonilimino[N- metil-4 ,2-pirrol]-carbonilimino]-bis-(1,3-naftaleno dissul- fonato) e 3-[(2,4- dimetilpirrol-5-il)metileno]-2-indolinona (SU5416).

Agentes que interferem com os checkpoints de ciclo celular são compostos que inibem proteína cinases que transduzem sinais de checkpoint de ciclo celular, deste modo sensibilizando a célula de câncer para agentes de dano de DNA. Tais agentes incluem inibidores de ATR, ATM, os inibidores de chk1 e chk2 cinases e cdk e cdc cinases e são especificamente exemplificados por 7-hidroxiestaurosporina, flavopíridol, CYC202 (Cyclacel) e BMS-387032.

Inibidores de proliferação celular e curso de sinalização de sobrevivência são agentes farmacêuticos que inibem receptor de superfície de célula e cascatas de transdução de sinal a jusante desses receptores de su- perfície. Tais agentes incluem inibidores de EG FR (por exemplo, gefitinib e erlotinib), inibidores de ERB-2 (por exemplo, trastuzumab), inibidores de IG- FR, inibidores de receptores de citocina, inibidores de MET, inibidores de PI3K (por exemplo, LY294002), serina/treonina cinases (incluindo, mas não limitado a, inibidores de Akt tal como descrito nos WO 02/083064, WO 02/083139, WO 02/083140 e WO 02/083138), inibidores de Raf cinase (por exemplo, BAY-43-9006), inibidores de MEK (por exemplo, CI-1040 e PD- 5 098059) e inibidores de mTOR (por exemplo, Wyeth CCI-779). Tais agentes incluem compostos inibidores de molécula pequena e antagonistas de anti-corpo.

Agentes de indução de apoptose incluem ativadores de mem-bros da família de receptor TNF (incluindo os receptores TRAIL).

Em certas modalidades preferidas da invenção, agentes repre sentativos úteis em combinação com os compostos da invenção para o tratamento de câncer incluem, por exemplo, irinotecan, topotecan, gemcitabina, 5-fluoruracila, leucovorin carboplatina, cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclo- fosfamida, vinca alcalóides, imatinib (Gleevec), antraciclinas, rituximab, tras- 15 tuzumab, bem como outros agentes quimioterapêuticos para câncer.

Os compostos acima a serem empregados em combinação com os compostos da invenção serão usados em quantidades terapêuticas conforme indicado no Physicians' Desk Reference (PDR) 47ã Edição (1993), que é aqui incorporado a título de referência ou tais quantidades terapeuticamen- 20 te úteis como seria conhecido de uma pessoa versada na técnica.

Os compostos da invenção e os outros agentes anticâncer po-dem ser administrados na dosagem clínica máxima recomendada ou em doses menores. Os níveis de dosagem dos compostos ativos nas composições da invenção podem ser variados de modo a se obter uma resposta te- 25 rapêutica desejada dependendo da via de administração, severidade da doença e resposta do paciente. A composição pode ser administrada como composições separadas ou como uma forma de dosagem única contendo ambos agentes. Quando administrados como uma combinação, os agentes terapêuticos podem ser formulados como composições separadas, que são 30 dadas ao mesmo tempo ou momentos diferentes, ou os agentes terapêuticos podem ser dados como uma composição única.

Antiestrogênios, tal como tamoxifeno, inibem o crescimento de câncer de mama através da indução de parada do ciclo celular, que requer a ação do inibidor de ciclo celular p27Kip. Recentemente, foi mostrado que ativação do curso de Ras-Raf-MAP cinase altera o estado de proliferação de p27Kip de modo que sua atividade inibidora em parada do ciclo celular é 5 atenuada, deste modo contribuindo para resistência antiestrogênio (Donovan e outros, J Biol. Chem. 27(5:40888, 2001). Conforme relatado por Donovan e outros, inibição de sinalização de MARK através de tratamento com inibidor de MEK mudou o estado de fosforilação de p27 em linhagens de célula de câncer de mama refratárias a hormônio e ao fazer isso restaurou sensibili- 10 dade a hormônio. Deste modo, em um aspecto, qualquer uma das modalidades dos compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tau-tômero deles pode ser usada no tratamento de cânceres dependentes de hormônio, tal como cânceres de mama e próstata, para reverter resistência a 15 hormônio geralmente vista nesses cânceres com agentes anticâncer con-vencionais.

Em cânceres hematológicos, tal como leucemia mielógena crônica (CML), translocação cromossômica é responsável pela tirosina cinase BCR-AB1 constitutivamente ativada. Os pacientes afligidos são responsivos 20 a Gleevec, um inibidor de tirosina cinase de molécula pequena, como um resultado de inibição de atividade de Ab1 cinase. No entanto, muitos pacientes com doença em estágio avançado respondem a Gleevec inicialmente, mas então relapsam mais tarde devido a mutações que conferem resistência no domínio Ab1 cinase. Estudos in vitro demonstraram que BCV-Av1 em- 25 prega o curso de Raf cinase para elicitar seus efeitos. Ainda, inibição de mais de uma cinase em alguns cursos provê proteção adicional contra mutações que conferem resistência. Deste modo, em outro aspecto da invenção, qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceutica- 30 mente aceitável do tautômero deles é usada em combinação com pelo menos um agente adicional, tal como Gleevec, no tratamento de cânceres he-matológicos, tal como leucemia mielógena crônica (CML), para reverter ou prevenir resistência ao pelo menos um agente adicional.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos de inibição de pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica mediada por uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo, compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo pelo menos um composto de fórmula (I), (II), (111) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele eficaz para inibir a atividade da pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK no indivíduo.

As composições terapêuticas de acordo com este aspecto da invenção são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade de tais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinalização de MAPK anormal). Tipos de câncer mediados por sinalização de MAPK anormal incluem, por exemplo, melanoma, câncer papilar, câncer da tireoide, câncer ovariano, câncer de cólon, câncer pancreático, câncer de célula não-pequena (NSCLC, leucemia linfoblástica aguda (ALL) e leucemia mielóide aguda. Sinalização de MAPK anormal pode ser inibida através da administração de um composto que inibe formas do tipo selvagem ou mutante de Ras, Raf, MEK ou ERK.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de Ras (Ras do tipo selvagem ou mutante). O método inclui administração de uma quantidade eficaz de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de Raf (Raf do tipo selvagem ou mutante). O método inclui administração de uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de MEK. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de ERTK. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) ou um tautômero, sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável do tautômero dele a um indivíduo com necessidade.

Um composto exemplar para uso nos métodos deste aspecto da invenção, 1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H- benzoimidazol-2- il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, exibiu inibição potente do curso de sinalização de MAPK, conforme descrito abaixo nos Exemplos 82- 86 e 89-90 e mostrado nas Figuras 6-12B; 14A-C e 15. O composto é um inibidor potente de B-Raf, c-Raf, B-Raf mutante e Ras mutante em ensaios bioquímicos, conforme mostrado no Exemplo 82, demonstrando inibição de atividade B-Raf mutante (IC50 de 0,0053 pM), inibição de atividade de B-Raf (IC50 de 0,068 pM) e inibição de atividade de c-Raf (IC50 de 0,004 pM). Tratamento com 0 composto causou regressão de tumor em todos os três modelos de xenoenxerto de B-Raf mutante (A375M, MEXF276 e HT29) testados e inibição de crescimento de tumor em modelos de xenoenxerto direcionados por K-Ras e N-Ras conforme sumarizado abaixo na TABELA 7 e descrito nos Exemplos 84, 85 e 86.

Análise de modulação direcionada em células de tumor A375M, MEXF276 e HCT-116 após tratamento com {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H- benzoimidazol-2-il]-(4-trifluormetil-fenil)- amina indicou que fosforilação de MEK foi inibida de uma maneira dependente da dose e do tempo, conforme mostrado nas Figuras 7B, 8B e 10C. Ainda, tratamento de células de tumor A375M, MEXF276 e HCT-116 com o composto modulou marcadores a jusante de Raf, incluindo BIM, Cyclin D1, p27Kip e pAKT conforme mostrado nas Figuras 7D, 8C e 9C. Esses ensaios em modelos pré-clínicos indicam que {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)- amina mostrou uma inibição dependente da dose e tempo de ambas molé-culas de fosforilação e sinalização de direcionamento de MEK a jusante de Raf no curso de MAPK.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a métodos de inibição de pelo menos um receptor de tirosina cinase selecionado do grupo consistindo em VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI, FGFR2, FGFR3, c-Kit e CSF-IR em um indivíduo, ou tratamento de uma condição biológica mediada por pelo menos um de VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI, FGFR2, FGFR3, c-Kit e CSF-IR, compreendendo administrar uma composição terapêutica compreendendo pelo menos um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável dele de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) eficaz para inibir o receptor de tirosina cinase no indivíduo.

Os compostos terapêuticos de acordo com este aspecto da in-venção são úteis para tratamento de pacientes com uma necessidade de tais inibidores (por exemplo, aqueles sofrendo de câncer mediado por sinalização de receptor de tirosina cinase anormal). Cânceres mediados por sinalização de receptor de tirosina cinase anormal incluem, por exemplo, melanoma, câncer de mama, câncer de bexiga, câncer de pulmão, câncer de tireoide, câncer de próstata, câncer ovariano, leucemia de mastócito, tumores de célula germe, carcinoma de pulmão de célula pequena, tumores estremais gastrintestinais, leucemia mielógena aguda (AML), neuroblastoma e câncer pancreático.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de VEGFR-2. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduo com necessidade. O método pode ser útil para tratar um tumor sólido através da inibição de angiogênese.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição de PDGFR-β. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de

um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição 5 de c-Kit. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduo com necessidade.

Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibição 10 de CSF-1 R. O método inclui administração de uma quantidade eficaz de um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável dele, de qualquer uma das modalidades de compostos de fórmula (I), (II), (III) ou (IV) a um indivíduo com necessidade.

Um composto exemplar para uso nos métodos deste aspecto da 15 invenção, {1- Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2- il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, é um inibidor potente de re-ceptores de tirosina cinase VEGFR-2, PDGFR-β, pERK, bFGF, FGFRI, FG- FR2, FGFR3, c-Kit e CSF-IR em um ensaio bioquímico. Os compostos de-monstram inibição de atividade de VEGFR-2 (IC5o de 0,07 pM), inibição de 20 PDGFR-β (IC50 de 0,0032 μM), inibição de c-Kit (IC50 de 0,02 μM) e inibição de CSF-IR (IC50 de 0,20 pM), conforme descrito no Exemplo 87. Ainda, o composto induziu inibição de angiogênese em um modelo matrigel in vivo, conforme mostrado na Figura 13 e descrito no Exemplo 88.

A presente invenção será agora compreendida mais prontamen- 25 te através de referência aos exemplos que seguem, que são providos a título de ilustração e não pretendem ser limitantes da presente invenção.

Nos exemplos abaixo, bem como em todo 0 pedido, as abreviações que seguem têm os significados que seguem. Se não definidos, os termos têm seus significados geralmente aceitos. 30 APCI Espectroscopia de massa de ionização química de pressão at-mosférica aq. Aquoso atm Atmosfera cm Centímetro °C Graus Celsius DIPEA Diisopropiletilamina DMC Cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio DMSO Sulfóxido de dimetila eq. EtOAc Equivalente Acetato de Etila EtOH Etanol g ou gm h/hs Grama(s) Hora(s) HPLC Cromatografia Líquida de Alto desempenho IPA Álcool isopropílico L Litro LCAP Porcentagem de Área de Cromatografia Líquida LC/EM Espectroscopia de massa de cromatografia líquida M Molar MeCN Acetonitrila mL Mililitros NaOMe Metóxido de Sódio 1-PrOH 1-Propanol TEA Trietilamina TFAA Anidrido trifluoracético THF Tetraidrofurano

Cadeias laterais representativas para uso nos compostos dos exemplos que seguem podem ser geralmente preparadas de acordo com os procedimentos que seguem: Exemplo 1 Preparação de {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxfl- 1H-benzoimidazol-2-il)-(4-tπfluormetil-fenil)-amina

Um frasco de três gargalos de 500 mL foi equipado com um agitador mecânico e carregado com K2CO3(4,15 g, 30 mmols). O recipiente foi vedado, evacuado e seco à chama. O aparelho foi deixado resfriar para temperatura ambiente e purgado com argônío. Ao frasco de reação foi adicionado 4-amino-3-nitrofenol 1a (3,08 g, 20 mmols), 4-cloropiridina-2-carboxilato de terc-butila 1b (5,2 g, 24 mmols) e DMSO seco (30 mL). A mistura resultante foi agitada vigorosamente e aquecida para 100°C por -14 horas. A reação foi verdida em tampão de fosfato gelado (pH = 7) e o frasco de reação foi enxaguado bem com MTBE (metil terc butil éter) e água. A mistura bifási- ca combinada foi filtrada em Celite (chumaço de >2 cm). As camadas foram divididas e separadas e a fase aquosa foi extraída com MTBE (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (5 x 100 mL), secas (MgSCU) e evaporadas. O resíduo bruto foi adsorvido em SiO2 e puri-ficado através de cromatografia instantânea (4:1, 2:1,1:1 de hexanos-EtOAc (acetato de etila)) para dar 4,92 g (14,9 mmols, 74% de rendimento) de 1c como um sólido amarelo marrom. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) 6 8,58 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 7,90 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 7,56 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,17 (dd, J= 2,8, 8,8 Hz, 1H), 6,94 (dd, J= 2,8, 5,8, Hz, 1H), 6,91 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 6,15 (s amplo, 2 H), 1,62 (s, 9 H); 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 165,8, 164,0, 151,8, 151,5, 143,4, 143,2, 131,5, 129,8, 121,0, 118,0, 114,2, 113,1, 83,0, 28,4; p.f. 163-166 °C. Etapa 2

A uma solução de nitroanilina 1c (5,62 g, 17 mmols) em CH2CI2 (85 mL) a 0o C foi adicionado TFAA (2,4 mL, 3,6 g, 17 mmols). O banho de 5 resfriamento foi então removido e a reação mantida em temperatura ambiente por 2 horas. A reação foi resfriada para 0o C e TBACI (cloreto de tetrabuti- lamônio, 2,5 g, 8,5 mmols), Me2SC>4 (sulfato de dimetila 3,2 mL, 4,3 g, 34 mmols) e NaOH a 10% (34 mL) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada vigorosamente por 4 horas em temperatura ambiente. A reação foi 10 diluída com água e as camadas resultantes foram divididas e separadas. A fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 100 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 x 100 mL), secas (MgSO4) e evaporadas. O resíduo bruto foi adsorvido em sílica-gel e purificado através de cromatografia instantânea (4:1,2:1, 1:1, 1:2 de hexanos/EtOAc) para dar 15 4,5 g (13,0 mmols, 76%) de 1d como sólido amarelo-laranja. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 8,54 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,04 (d amplo, J= 4,7 Hz, 1H), 7,93 (d, J= 2,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,25 (dd ap, J= 2,8, 9,1 Hz, 1H), 6,91 (m, 2 H), 3,04 (d, J= 4,9 Hz, 3 H), 1,59 (s, 9 H); 13C RMN (75 MHz, CD- Cl3) δ 165,9, 164,1, 151,5, 144,7, 142,1, 130,4, 118,8, 115,5, 114,1, 112,9, 20 82,9, 30,4, 28,5; p.f. 187-189°G. Etapa 3

Um frasco de fundo redondo de três gargalos de 500 mL seco à chama purgado com N2 foi carregado com LAH (hidreto de alumínio lítio, 3,0 g, 75 mmols) e THF seco (240 mL). A suspensão resultante foi resfriada pa- 25 ra 0o C e t-butil éster 1 d (20,7 g, 60 mmols) foi lentamente adicionado en- quanto matnendo a temperatura de reação interna sob 5°C. A mistura de reação foi então agitada a 0o C por 2 horas seguido por agitação em tempe-ratura ambiente da noite para o dia. NaBH4 (2,27 g, 60 mmols) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais uma hora em temperatura ambi- 5 ente. Após a reação ser julgada completa, a mistura de reação foi tratada com adição em gotas sucessiva de água (3 mL), NaOH a 15% (3 mL) e água (9 mL). A mistura resultante foi filtrada em Celite e os sólidos restantes foram lavados com EtOAc e metanol. As porções orgânicas combinadas foram e- vaporadas e o resíduo bruto resultante foi adsorvido em SiO2 e purificado 10 através de cromatografia instantânea (97:3 CH2CI2-MeOH) para dar 7,63 g (27,7 mmols, 46%) de um sólido vermelho-laranja como 1e. 1H RMN (300 MHz, Coeis) δ 8,40 (d, J= 5,5 Hz 1H), 8,05 (s amplo, 1H), 7,96 (d, J= 2,75 Hz, 1H), 7,29 (d, J= 2,75 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,35 Hz, 1H), 6,75 (m, 2 H), 4,68 (s, 2 H), 3,07 (d, J= 5,23 Hz, 3 H). Etapa 4

Um frasco de fundo redondo de 100 mL foi carregado com álcool benzílico 1e (1,38 g, 5,0 mmols), MnO2 (6,52 g, 75 mmols) e CHCh (20 mL). A suspensão resultante foi agitada em temperatura ambiente (TA) por 2 dias. A mistura de reação foi filtrada em Celite e os sólidos restantes foram lava- 20 dos sucessivamente com CHCI3 e EtOH. As porções orgânicas combinadas foram evaporadas, adsorvidas em sílica-gel e purificadas através de cromatografia instantânea (98: 2 CH2CI2/MeOH) para dar 790 mg (2,89 mmols, 58%) de um sólido laranja como 1f. 1HNMR (300 MHz, CDCI3) δ 10,01 (s, 1H), 8,64 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 8,09 (s amplo, 1H), 7,96 (d, J= 2,75 Hz, 1H), 25 7,37 (d, J= 2,48 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 2,75 Hz, 1H), 7,08 (dd, J= 2,47, 5,5 Hz, 1H), 6,94 (d, J= 9,35 Hz, 1H), 3,08 (d, J= 5,23 Hz, 3 H). Etapa 5

Formação de anel imidazol (Baldwin, J. J.; Engelhardt, E. L; Hirschmann, R.; Lundell, G. F.; Ponticello, G. S. J. Med. Chem 1979, 22, 687): Composto 1g (Lancaster (Windham, NH), 25,75 mL, 136,5 mmols) foi 5 adicionado a uma solução de NaOAc (22,4 g, 273 mmols) em H2O (60 mL) e a solução resultante aquecida para 100°C por 40 minutos. Após esfriar para temperatura ambiente (temperatura ambiente), a solução de 1h foi adicionada a uma suspensão de 1f (25 g, 91 mmols) em NH4OH (150 mL) e metanol (450 mL). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente da noite 10 para o dia. TLC (cromatografia de camada fina, 95:5 CH2CI2/MeOH) mostrou consumo completo de 1f. O produto bruto foi concentrado em uma pasta fluida aquosa e dividido com Na2CO3 e CH2CI2 saturados. A fase aquosa foi extraída três vezes com CH2CI2 e os orgânicos combinados lavados com salmoura, então secos (MgSO4) e concentrados para dar 31,6 g de 1i (83 15 mmols) como um sólido laranja (91% de rendimento). Nenhuma purificação adicional foi requerida.

Outros intermediários para preparação de imidazóis substituídos podem ser preparados de uma maneira similar. Por exemplo, intermediário 1i2 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando diidrato de 3,3,3-triflúor-1 - 20 fenilpropano-1,2-diona ao invés de 1 h conforme mostrado abaixo (MeOH = metanol, TA = temperatura ambiente, o/n = da noite para o dia, min = minutos):

O intermediário 1 i3 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando 1 - fenil,1,2-propanodiona ao invés de 1h conforme mostrado abaixo:

O intermediário 1i4 foi sintetizado seguindo a etapa 5 usando 1- (3-trif luormetil-f e nil)-1,2-propanodiona ou 1 -(4-trif luormeti Ifenil)-1,2- propanodiona ao invés de 1 h conforme mostrado abaixo:

O intermediário 1 i5 foi sintetizado seguindo a etapa 5, acoplado com procedimentos na Patente U.S. Ns 5.374.615, usando (2Z)-4,4,4-triflúor- 2-(hidroxiimino)-3-oxobutanoato de etila feito de 4,4,4-triflúor-3-oxobutanoato de etila ao invés de 1 h conforme mostrado abaixo (NMA = N-metil acetami- 10 da):

Uma pasta fluida de nitroanilina 1i (45,76 g, 120 mmols) em MeOH (220 mL) e EtOAc (200 mL) foi espalhada com N2 por 20 minutos e então carregada com uma suspensão de Pd/C a 10% (12,77 g, 120 mmols) 5 em MeOH (60 mL). A reação foi purgada com H2 e mantida sob uma atmosfera de H2 por 2 dias. A reação foi filtrada em uma almofada de Celite e os sólidos coletados foram lavados sucessivamente com MeOH e EtOAc. Os filtrados orgânicos combinados foram evaporados, o sólido resultante foi a- zeotropado com CH2CI2 e então secos da noite para 0 dia sob vácuo para 10 dar 40,17 g (115 mmols) de 1j como um pó castanho (96% de rendimento). LC/EM m/z 336,1 (MH+), tfl= 1,81 min. Etapa 7

Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (23,37 g, 115 mmols) foi adicionado a uma solução em agitação de diamina 1j (40,17 g, 115 mmols) em MeOH (460 mL) em temperatura ambiente. A reação foi mantida em tempe-ratura ambiente por 16 horas. Após a reação ser julgada completa, uma solução de FeCI3 (20,52 g, 126,5 mmols) em MeOH (50 mL) foi adicionada à reação e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente da noite para 0 dia. A mistura de reação bruta foi adicionada a um funil de separação de 3 L contendo EtOAc (750 mL) e água (750 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (fase aquosa guardada). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução de Na2CO3 a- quosa, água e salmoura, então secas (MgSO4) e concentradas. A fase a- quosa guardada foi tornada básica (pH = 10) através da adição de solução de Na2CO3 aquosa saturada e a pasta fluida resultante foi adicionada a um funil separtório de 3L contendo EtOAc (500 mL). A mistura foi agitada e a emulsão resultante foi filtrada em papel filtro, e as camadas foram então separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 500 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, então secas (MgSO4), adicionadas a material previamente extraído e concentradas. O produto combinado foi triturado com CH2CI2 (500 mL), adsorvido em SiO2 e purificado através de cromatografia instantânea. Uma trituração final de material com CH2CI2 produziu {1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imÍdazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]- 1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina como um sólido branco, puro. LC/EM m/z519,1 (MH+); 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 8,44 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,75 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 7,61 (dd, J= 2,2, 8,5 Hz, 1H), 7,59 (d, J= 8,8 Hz, 2 H), 7,56 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 7,38 (d ap, J= 8,5 Hz, 1H), 7,23 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,96 (dd, J= 2,2, 8,5 Hz, 1H), 6,93 (dd, J= 2,5, 5,5 Hz, 1H), 3,76 (s, 3 H); LC/EM m/z= 519,0, tR = 2,57 min (MH+); Anál. calc. para C24H16F6N6O: C 55,6, H 3,11, N 16,21; Encontrado: C 55,81, H 3,43, N 16,42; p.f,: 217 - 220°C. Exemplo 2 Preparação de (2-Flúor-5 -piridin-3-il-fenil)-f1-metil-5-[2-(5-trifluormetíl- 1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1-1H-benzoimidazol-2-il}-amina

(2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 3-(4-flúor-3- isotiocianato-fenil)-piridina. LC/EM m/z546,1 (MH+), TR 1,82 min. Exemplo 3 Preparação de (2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il }-amina

(2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{ 1 -m etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-(4-flúor-3- isotiocianato-fenil)-piridina. LC/EM m/z 546,5 (MH+), TR 1,83 min, Exemplo 4 Preparação de (4-terc-Butil-fenil)-(1 -metil-5-r2-(5-trifluorometil-1 H-imidazol-2- il)- piridin-4-ilóxil-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina

(4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin- 4-jlóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il -amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-terc-butilfenilisotiocianato. LC/EM m/z425,4 (MH+), TR 2,56 min. Exemplo 5 Preparação de {1 -Metil-5-f2-(5-trif luormeti!-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi1- 1H- benzoimidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina

{1 -Metil-5-[2-(5-trif luormetil-1 H-imidazol-2-il)-pirÍdin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 3- (trífluormetil)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 519,4 (MH+), TR 2,36 min. Exemplo 6

Preparação de (3-Etil-fenil)-{1-metil-5-r2-(5-tπfluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina

(3-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[-2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando fenilisotiocianato de 3-etila. LC/EM m/z 479,4 (MH+), TR 2,32 min.Exemplo 7

Preparação de (4-Cloro-fenÍI)-(1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina

(4-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4- ilóxi]-l H-benzoimidazol-2-il -amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-clorofenilisotiocianato. LC/EM m/z 485,4 (MH+), TR 2,23 min.Exemplo 8

Preparação de (4-EtÍI-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piri- dín-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina

(4-Etil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il- óxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-etilfenilisotiocianato. LC/EM m/z 479,5 (MH+), Tr 2,31 min.Exemplo 9

Preparação de (4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)- {1-metíl-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H-benzoimidazol-2-il}-amina

(4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imi- dazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada con- 5 forme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-cloro-3-(triflúor- metil)fenilisotiocianato. LC/EM m/z553,4 (MH+), TR2.51 min.Exemplo 10

Preparação de (4-Flúor-3-trifluormetil-feníl)-f1 -metil-5-í2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ílóxil- 1H-benzoimidazol-2-il}-amina

(4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1 -m etil-5-[2-(5-trif luo rmetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4-flúor-3-(triflúor- me- til)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 537,4 (MH+), Rf 2,40 min. Exemplo 11 Preparação de {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxn- 1H- benzoÍmidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina

{1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina foi sintetizada conforme acima descrito na Etapa 7 do Exemplo 1 usando 4- (trifluormetóxi)fenilisotiocianato. LC/EM m/z 535,4 (MH+), TR2,24 min. Exemplo 12 Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-( 1 -metil-5-{2-[5-metil-4-(3- trifluormetil-fenil)-1-imidazol-2-ill-piridin-4-ilóxi)-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1 -metil-5-{2-[5-metil-4-(3- trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1 H-benzoimidazol-2-il)- amina foi sintetizada usando procedimentos similares conforme descrito a- cima no Exemplo 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)fenila. LC/EM m/z 627,5 (MH+), TR 2,79 min.Exemplo 13

Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-(2-[5-metil-4-(4- trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol-2-il)- amina

(2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1 -metil-5-{2-[5-metil-4-(4- trifluormetil-fenil)-1H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi)-1-benzoimidazol-2-il)-amina foi sintetizada usando procedimentos similares aos acima descrito no Exemplo 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)-fenila. LC/EM m/z 627,5 (MH+), TR2.79 min.Exemplo 14

Preparação de etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxil-piridin-2-il)-5-trifluormetil-1H-imidazol-4- carboxílico

Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4- carboxílico foi sintetizado usando procedimentos similares conforme descrito acima no Exemplo 1 usando isotiocianato de 2-flúor-5-(trifluormetil)fenila. LC/EM m/z 609,5 (MH+).

Exemplo 15 Preparação de (2-{4-f2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1 H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol

Hidreto de (sódio bis(2-metoxietóxi)alumínio Red-AI, 65% em tolueno, 0,1 mL) foi adicionado em gotas a uma solução de etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil- fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-ii}-5-trifluormetil-1 H-imidazol-4-carboxílico (0,0104 g, 0,017 mmol) em tolueno. A efervescência foi observada e após 20 minutos, a reação foi extinta com H2O, NaOH e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H2O, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada para dar 5,9 mg de (2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-ll}-5-trifluormetil-1H-imidazol-4-il)-metanol bruto que foi purificado mais através de RP HPLC (HPLC de fase reversa) para dar 1,1 mg do composto puro (98% de pureza). LC/EM m/z567,1 (MH+), TR 2,40 min. Exemplo 16

Preparação de 2-{4-f1 -MetÍI-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1 H-benzo-imidazol- 5-ilóxi]-piridin-2-il)-3H-imidazol-4-carbonitrila

Uma pasta fluida de {1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]- H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi preparada de acordo com 0 Exemplo 1 (1,83 g, 3,4 mmols) e NH4OH a 28% (23 mL) em MeOH (10 mL) foi vedado em um tubo e aquecido para 140°C por 3 horas. Após a reação ter sido julgada completa através de LC/EM, a mistura de reação bruta foi adicionada a um funil de separação e dividida com EtOAc

Exemplo 60 Preparação de (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-piridin-2-il-2H- [l,2 4]triazol-3-il)-piridin-4-ilóxil-1H-benzoimidazol-2-il)-amina

Preparação de 4-[2-(2-flúor-5-triflúor-fenilamino)-1-metil-1 H-benzoimidazol-5- ilóxil-piridina-2-carbonitrila

Etapa 1. Síntese de 4-(4-Amino-3-nitro-fenóxi)piridina-2-carbonitrila:

Carbonato de potássio (9 g) foi seco in vacuo com aquecimento, resfriado para a temperatura ambiente sob nitrogênio. 4-Amino-3-nitrofenol (3,4 g), 4-cloro-2-cianopiridina (3,0 g) e sulfóxido de dimetila (30 mL, anidro) foram adicionados. O sistema foi agitado sob nitrogênio conforme ele era aquecido para 103°C e mantido nesta temperatura por 1 hora. A reação foi então resfriada para TR, vertida em gelo/H2O (500 mL), o precipitado foi coletado, lavado (H2O), dissolvido (EtOAc), seco (Na2SO4), filtrado e esvaziada para um sólido. Este foi suspenso em (Et2O), coletado, seco ao ar 4,1 g (73,5%) e a segunda parte foi coletada (0,55 g, 10%). m/z = 257 (M+1).

Etapa 2. Síntese de N-[4-(2-Ciano-piridin-4-ilóxi)-2-nitro-fenil]-2,2,2- triflúor- N-metil-acetamida:

Carbonato de potássio (1,6 g) foi seco in vacuo com aquecimeto, resfriado para temperatura ambiente e suspenso em diclorometano (30 mL) com 4-(4-amino-3-nitro-fenóxi)piridina-2-carbonitrila (2,0 g) sob nitrogênio. Este foi resfriado para 0o C e anidrido trifluoracético (2,2 mL) foi adicionado, puro. O material de partida se transforma em solução rapidamente conforme a adição é feita. Após 10 minutos a 0o C, a mistura foi diluída com diclorome-tano, lavada (H2O, NaCI aquoso), seca (K2CO3), filtrada e esvaziada para uma espuma amarela. m/z=353 (M+1). Este produto foi usado sem purificação. lodometano (0,53 mL) foi adicionado a uma suspensão de carbonato de potássio (1,858 g) em dimetilformamida (DMF) (30 mL contendo composto 2, -7,8 mmols) sob nitrogênio. A suspensão foi agitada da noite para o dia em temperatura ambiente, então vertida em H2O (300 mL), extraída (Et2O, 3 x 150 mL), os extratos combinados foram lavados (H2O, NaCI aquoso), secos (carbonato de potássio), filtrados e esvaziados para dar um óleo laranja (7,4922 g). m/z = 367 (M+1). Etapa 3. Síntese de 4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila:

NaOH (1 mL, aquoso a 1N) foi adicionado em gotas a uma solução de N-[4-(2-ciano-piridin-4-ilóxi)-2-nitro-fenil]-2,2,2-triflúor-N-metil- acetamida (3, 440 mg) em etanol (6 mL) em temperatura ambiente. Após 40 minutos, a mistura foi diluída com H2O (20 mL) e resfriada para 0o C. Cristais laranja brilhantes foram coletados, lavados (H2O) e secos ao ar 311,1 mg (94%). m/z=271 (M+1). Etapa 4. Síntese de 4-[2-(2-flúor-5-triflúor-fenilamino)-1-metil-1 H- benzoimidazol-5-il0xH-piridina-2-carbonitrila:

Paládio sobre carbono (46 mg, 10% p/p) foi suspenso em MeOH (2 mL) sob nitrogênio. A suspensão resultante foi adicionada, sob nitrogênio, a uma suspensão de 4-(4- metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila (311 mg) em MeOH (3 mL) em temperatura ambiente. A atmosfera foi trocada com hidrogênio e o sistema agitado vigorosamente sob 1 atm de hidrogênio por 1 hora. A atmosfera foi então trocada por nitrogênio, a mistura foi filtrada (celite) e o filtrado foi usado sem purificação adicional na reação seguinte. m/z=242 (M+1). 2-Flúor-5-trifluormetilfenilisotiocianato (250 mg) foi adicionado a uma solução de composto 5 em MeOH (10 mL). A solução foi agitada em refluxo por 2 horas. Após a reação ser julgada completa, FeCI3 anidro (1,3 eq., 244 mg) foi adicionado à reação e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura de reação 5 bruta foi adicionada a um funil separador contendo EtOAc e água. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida com EtOAc. As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução de Na2CO3 aquosa satu-rada, água e salmoura, então secas (MgSO4) e concentradas. Este material foi cromatografado (gradiente 0-5% de MeOH em diclorometano em sílica- 10 gel) para isolar o composto desejado em 28% de rendimento a partir do composto 4. m/z=428 (M+1).

Etapa 5. (2-Flúor-5-trjfluormetil-fenil)-{1 -metil-5-[2-(5-piridin-2-il-2H- |1,214jtriazol-3-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoímidazol-2-il}-amina

Etapa 6 15 4-[2-(4-Flúor-fenilamino)-1 -metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]- piridina-2- carbonitrila foi solubilizado em EtOH (0,1 M) e NaOEt foi adicionado (1 eq., 0,5 M em EtOH) seguido por picolinil hidrazida (1 eq.) e a solução é aquecida em um microondas por 2000 segundos a 140°C. A mistura de reação é então concentrada e purificada através de HPLC de fase rever- 20 sa para dar o produto desejado. m/z=547 (M+1).

Exemplos 61-64 Os compostos mostrados na Tabela 2 que segue (Exemplos 61- 64) foram preparados seguindo o procedimento descrito para o Exemplo 60.

Exemplo 65 Preparação de N-(4-hidróxi-2-nitrofenil)-formamida

N-(4-hidróxi-2-nÍtrofenil)-formamida pode ser preparada de acor- 5 do com o procedimento que segue: 1. Preparar um frasco de reação de 5 gargalos, 3 L, equipado com uma sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, manta de aquecimento, condensador, agitador mecânico, funil de adição de 1L e uma entrada de nitrogênio. Jatear o reator com nitrogênio por 5 minutos. 10 2. Carregar anidrido acético (245 mL) no frasco. Agitar sob nitro gênio. 3. Carregar ácido fórmico (125 mL) em uma porção (um exoter- ma é observado devido à mistura e a reação entre anidrido acético e ácido fórmico). 4. Ajustar o ponto final da temperatura interna (IT) para 60°C e iniciar aquecimento. Após a IT atingir 60°C, agitar e manter por mais 2 horas. 5. Resfriar os conteúdos com um banho gelado. 6. Quando a IT atingir temperatura ambiente (cerca de 20°C), iniciar a adição de uma solução de 4-amino-3-nitrofenol (160 g) em 700 mL de THF (tetraidrofurano) anidro através do funil de adição de 1L em porções de modo que a IT não exceda 40°C. O produto começa a precipitar como um sólido amarelo. 7. Quando a adição é completada, substituir o banho gelado com uma manta de aquecimento. Ajustar o ponto final da IT em 60°C e iniciar o aquecimento. 8. Monitorar o progresso da reação através de HPLC. A reação normalmente leva menos do que 1 hora. 9. Quando o material de partida for <1 de % de área, adicionar 500 mL de água. Resfriar para temperatura ambiente com um banho gelado. 10. Coletar o produto através de filtragem a vácuo. Lavar a torta do filtro com 3 x 200 mL de água. Secar ao ar e secar mais em um forno a 50°C em vácuo de 68,6 cm de Hg (27 pol de Hg), com um vazamento de ar ou nitrogênio suave até um peso consistente ser atingido.

Exemplo 66 Preparação de 4-metilamino-3-nitrofenol

4-MetÍlamlno-3-nitrofenol pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue: 1. Preparar um frasco de reação de 3 gargalos, 500 mL, equipado com uma sonda de temperatura interna e uma entrada de nitrogênio. Ja- tear o reator com nitrogênio por 5 minutos. 2. Carregar N-(4-hidróxi-2-nitrofenil)-formamida (5 g) e THF anidro (100 mL) no reator. Agitar sob N2 para dar uma pasta fluida amarela. 3. Adicionar o dietil eterato de trifluoreto de boro (3,83 mL) através de seringa ientamente. 4. Agitar a mistura de reação por 30 minutos em temperatura ambiente. 5. Adicionar o boroidreto de sódio (1,04 g) em porções com um funil adicional. 6. Agitar a reação por uma hora e monitorar a reação através de HPLC de hora em hora em seguida (a reação tipicamente leva 3 horas). 7. Quando a amostra de HPLC mostra que o material de partida é menos do que 1,0% lentamente adicionar HCI a 1M (40 mL) através de uma seringa durante um período de 10 minutos. 8. Agitar por 60 minutos. 9. Adicionar NaOH a 1M conforme necessário através de uma seringa para trazer o pH para 7 ± 0,5. 10. Verter a mistura de reação em um frasco de fundo redondo de 500 mL e concentrar sob pressão reduzida (20 mm Hg, a 25°C) até cerca de 100 mL de líquido transparente serem removidos. 11. Adicionar água (100 mL) ao recipiente de reação. Esfriar para 0 ± 2°C com agitação. O produto precipita como um sólido vermelho. 12. Coletar o produto através de filtragem a vácuo através de um funil de frita grossa. Lavar a torta do filtro com água (2 x 20 mL). Secar ao ar e então secar em um forno a 50°C/27 Hg pol. Até que um peso constante seja atingido. Submeter as amostras à análise.

Exemplo 67 Preparação de cloreto de 4-cloropiridina-2-carbonila

Cloreto de 4-cioropiridina-2-carbonila pode ser preparado de a- cordo com o procedimento que segue: 1. Preparar um frasco de reação de 5 gargalos, 5L, equipado com uma sonda de temperatura interna (IT), um controlador de temperatura, manta de aquecimento, condensador, agitador mecânico, entrada de nitro-gênio, entrada de gás no alto do condensador que é conectada a uma armadilha de líquido de 2 gargalhos, 2L, que é por sua vez conectada a um lavador de 12L cheio com aproximadamente 6 litros de solução de NaOH a 8M e agitado com um agitador magnético. Jatear o reator com nitrogênio por 5 minutos e então desligar o fluxo de nitrogênio. 2. Carregar cloreto de tionila (1,18L) no reator, seguido por brometo de potássio (38,4 g) enquanto mantendo agitação moderada (cerca de 200 rpm). 3. Carregar ácido picolínico (397 g) no reator. 4. Ajustar o ponto final da IT a 80°C e iniciar aquecimento. 5. Tomar as amostras e monitorar o progresso da reação através de HPLC. A reação normalmente leva 14 horas para terminar. Aquecimento estendido vai resultar em mais descloração. 6. Quando a reação é considerada completa (menos do que 1% de ácido picolínico está presente na mistura de reação), parar aquecimento. Remover a manta de aquecimento. 7. Quando a IT estiver abaixo de 30°C, transferir o líquido para um frasco de reação de 3L. Enxaguar o reator de 5L com 700 mL de tolueno. Transferir os enxágues para o frasco de 3L. Remover SOCI2 e tolueno em excesso sob pressão reduzida. Repetir o processo com 2 x 700 mL de tolueno. Remover todo o solvente dando um sólido amarelo-laranja. Tolueno (400 mL) foi adicionado à mistura de reação. A mistura resultante foi levada para a próxima etapa.

Exemplo 68 Preparação de f-butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico Cl

t-Butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue: 1. Equipar um frasco de fundo redondo de 12 L (4 gargalos) com um agitador mecânico e um termômetro. 2. Carregar o reator com tolueno (1L), piridina (977,7 g) e di-t- butil dicarbonato (BOC)2O (855,5 g). 3. Resfriar o reator de modo que a temperatura interna seja 0o C. 4. Adicionar o cloreto de 4-cloropiridina-2-carbonila (686 g) ao reator em uma taxa tal de modo a manter a temperatura interna da reação abaixo de 5°C. 5. A reação foi deixada lentamente vir para a temperatura ambiente (~20°C) e agitada por 16 horas. 6. Quando a reação é considerada completa usando HPLC (material de partida <0,5% de área) a reação foi lavada com água (2x4 mL), então solução de HCI a 1M (2x2 L). 7. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover tolueno e piridina residual. 8. Tolueno (500 mL) foi adicionado, e então a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para se obter o produto desejado. Exemplo 69

Preparação de t-butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3-nitrofenóxi)- piridina- 2-carboxílico

t-Butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3-nitrofenóxi)-piridina-2- carboxílico pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue: 1. Equipar um frasco de fundo redondo de 3L com um agitador mecânico, termômetro e entrada de nitrogênio. 2. Carregar o reator com K2CO3 (123 g). 3. Trazer o recipiente de ração sob atmosfera inerte. 4. Carregar o reator com 4-metilamino-3-nitrofenol (100 g), í-butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico (127 g) e DMSO seco (1L). 5. Agitar a reação vigorosamente e aquecer para 100°C. 6. Quando a reação for considerada completa usando HPLC (<0,5% de área de f-butil éster do ácido 4-cloropiridina-2-carboxílico), verter a mistura de reação quente em 3L de água fria em agitação (em volume). 7. Isolar o composto desejado através de filtragem, como um sólido laranja a laranja-marrom. 8. Enxaguar o sólido isolado com água (2 x 200 mL) seguido por heptano (2 x 200 mL). 9. Secar material em forno a vácuo @ 45-50°C até peso constante ser atingido.

Exemplo 70 Preparação de 4-(4-(metilamino)-3 -nitrofenóxi)piridina-2-carbaldeído

4-(4-(metilamino)-3-nitrofenóxi)piridina-2-carbaldeído pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue: 1. Equipar um frasco de fundo redondo de 1000 mL com uma entrada de nitrogênio, agitador mecânico e termômetro. 2. Carregar o reator com t-butil éster do ácido 4-(4-metilamino-3- nitrofenóxi)-piridina-2-carboxílico (10 g) através de um funil para pó. 3. Adicionar 2-metil THF (100 mL) através de um funil para pó. 4. Resfriar o reator até uma temperatura interna de -25°C. 5. Adicionar o DIBAL (hidreto de diisobutilalumínio, 1,5M em tolueno; 72 mL) através de um funil adicional em taxa tal de modo a manter a temperatura interna sob -15°C. 6. Analisar a reação através de HPLC ou GC (cromatografia de gás), checando o desaparecimento de éster. 7. Agitar a reação a -20°C, monitorando de hora em hora. 8. Se a reação falhar em progredir após 2 horas, adicionar mais 0,5 equivalente de DIBAL (hidreto de diisobutilalumínio) e monitorar a reação. Continuar repetindo esta etapa até que todo o éster tenha sido consumido. 9. Uma vez a reação estando completa esfriar lentamente com MeOH (10 mL). 10. Adicionar o tartrato de sódio potássio (40 g) a 200 mL de á- gua e agitar para dissolver. 11. Adicionar a solução aquosa à mistura de reação e deixar a- quecer para temperatura ambiente. 12. Adicionar 2-metila THF (100 mL) ao recipiente de reação. 13. Aquecer a reação para 50°C por 1 hora com agitação. 14. Permitir que as fases separem. 15. Remover a camada aquosa inferior. 16. Filtrar a camada orgânica através de um chumaço de celite. 17. Enxaguar a celite com 2-metila THF (2 x 50 mL). 18. Adicionar a mistura de reação a um frasco de fundo redondo de 500 mL. 19. Concentrar a mistura de reação para ~50 mL através de destilação. 20. Resfriar a mistura de reação para 0o C com agitação. 21. Agitar a mistura de reação por 1 hora a 0o C. 22. Filtrar a mistura de reação através de um filtro de frita grossa. 23. Permitir que os sólidos sequem no filtro por 30 minutos a 1 hora. 24. Analisar os sólidos através de GC e RMN para determinar a % de álcool, transformar em pasta fluida em metanol a 30°C por 1 hora (5 mL de metanol por g de composto) se necessário para remover impureza do álcool.

Exemplo 71 Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi)-N-metil- 2-nitrobenzenamina

4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2- nitrobenzenamina pode ser preparada de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 2 L (3 gargalos) com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de temperatura e condensador. 2. Carregar o reator com água (590 mL) através de um funil para pó. 3. Começar a agitar a mistura e carregar o reator com acetato de sódio (240 g). 4. Enxaguar o frasco usado para a carga de acetato de sódio com água (30 mL). 5. Aquecer a reação para 50°C. 6. Adicionar 3,3-dibromo-1,1,1-trifluorpropan-2-ona (395 g) em porções a 50°C mantendo a temperatura interna da reação sob 100°C. 7. Aquecer a reação para uma temperatura interna de 100°C. 8. Após agitar a reação por 1 hora a 100°C, remover uma amostra para análise. 9. Manter agitando a reação a 100°C até que o material de partida seja <1,5%. 10. Uma vez a reação estando completa esfriar a mistura de reação para <65°C. 11. Enquanto a reação está esfriando, equipar um frasco de fundo redondo de 5L (revestido 4 gargalos) com uma sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, condensador de refluxo e agitador mecânico. 12. Carregar o reator de 5L com acetato de etila (500 mL) através de um funil para pó e começar a agitar. 13. Carregar o reator de 5L com 4-(4-(metilamino)-3- nitrofenóxi)pirídina-2-carbaldeído (200 g) através de funil para pó. 14. Enxaguar o funil para pó com acetato de etila (200 mL) no reator de 5 L. 15. Carregar o reator de 5 L com 95% de etanol (1,3L). 16. Transferir a mistura de reação de piruvaldeído do reator de 2L para o reator de 5L A temperatura da mistura neste ponto é ~35°C. 17. Lentamente adicionar NH4OH concentrado (1,3L) em por-ções monitorando a temperatura. A reação é exotérmica de modo que os primeiros 500 mL devem ser adicionados em porções mantendo a temperatura interna sob 50°C. O tempo de adição total é -25 minutos. Temperaturas elevadas fazem com que o produto final fique mais vermelho. 18. Aquecer o reator de 5L para 50°C. 19. Agitar a mistura de reação a 50°C. Solução neste ponto é geralmente de cor avermelhada-laranja. 20. Monitorar a reação de hora em hora até que a reação esteja completa. 21. Uma vez a reação tendo sido considerada completa, esfriar a mistura de reação para 0o C por 2 horas. 22. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro com frita grossa. 23. Enxaguar o reator com etanol frio (150 mL). Transferir o enxágue para o filtro. 24. Carregar o reator de 5 L com água (2L). 25. Agitar e esfriar o reator para 10°C. 26. Transferir a torta úmida do filtro para o reator de 5L. 27. Agitar a 10°C por 60 minutos. 28. Filtrar o produto através de um filtro de vidro com frita grossa. 29. Enxaguar o reator com água (250 mL). Transferir o enxágue para o filtro. 30. Secar a torta úmida no filtro por 1 hora. 31. Transferir o produto para um frasco de fundo redondo de 2L (gargalo simples) e secar com tombamento usando um evaporador giratório com uma temperatura de banho de 45°C até que um peso constante seja registrado.

Exemplo 72 Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1- metilbenzeno-1,2-diamina

4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1 - metilbenzeno-1,2-diamina pode ser preparado de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 2L (4 ga’rgalos) com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, purga de nitrogênio e condensador de refluxo. 2. Carregar o reator com EtOH (125 mli) através de um funil para pó. Começar a agitar rapidamente. 3. Carregar o reator com 4-(2-(5-(trífluormetil)-1H-imidazol-2- il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2-nitrobenzenamina (50 g) através de um funil para pó. 4. Aquecer a reação para 50°C. 5. Enquanto a reação está aquecendo, carregar um Erlenmeyer com água (75 mL) através de um funil para pó. Começar a agitar rapidamente. 6. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 3,0 eq. de carbonato de sódio (41,92 g) através de um funil para pó. 7. Agitar a mistura até que todos os sólidos sejam dissolvidos. 8. Assim que a suspensão atingir 50°C, transferir a mistura de carbonato de sódio do Erlenmeyer de 250 mL para a mistura de reação através de funil para pó. 9. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (75 mL) através de funil para pó. Começar a agitar rapidamente. 10. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 1,0 eq. de ditionita de sódio (22,95 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frasco de reação. 11. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvidos a maior parte. 12. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er- lenmeyer de 250 mL para a mistura de reação através de funil para pó. 13. Agitar a reação a 50°C por 30 minutos. 14. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (75 mL) através de funil para pó. Começar a agitar rapidamente. 15. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 1,0 eq. de ditionita de sódio (22,95 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frasco 10 de reação. 16. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvidos a maior parte. 17. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er-lenmeyer de 250 ml para a mistura de reação através de funil para pó. 18. Agitar a reação a 50°C por 30 minutos. 19. Carregar um Erlenmeyer de 250 mL com água (150 mL) a- través de funil para pó. 20. Carregar o Erlenmeyer de 250 mL com 2,0 eq. de ditionita de sódio (45,90 g) através de funil para pó um pouco antes da adição ao frasco 20 de reação. 21. Rapidamente agitar os sólidos até que eles sejam dissolvidos a maior parte. 22. Rapidamente transferir a mistura de ditionita de sódio do Er-lenmeyer de 250 mL para a mistura de reação através de um funil para pó. 23. Agitar a reação a 50°C por 60 minutos. 24. Uma amostra é obtida para verificar o término da reação. 25. Se a reação estiver > 98% completa, ir para a etapa 36. Se não continuar para a etapa 26. 26. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de ditionita 30 de sódio (22,95 g) através de funil para pó. 27. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 60 minutos. 28. Uma amostra é obtida para verificar o término da reação. 29. Se a reação estiver > 98% completa, ir para a etapa 36. Se não continuar para a etapa 30. 30. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de carbonato 5 de sódio (13,97 g) através de um funil para pó. 31. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 15 minutos. 32. Carregar o frasco de reação de 2L com 1,0 eq. de ditionita de sódio (22,95 g) através de funil para pó. 33. Rapidamente agitar a mistura de reação a 50°C por 60 minu tos. 34. Uma amostra é tomada para verificar o término da reação. 35. Quando a reação estiver £98% completa, ir para a etapa 36. 36. Uma vez a reação considerada estar completa, carregar o frasco de reação de 2L com água (125 mL) através de um funil para pó. 37. Resfriar a mistura de reação para 10°C e agitar por 1 hora. 38. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro com frita grossa. 39. Enxaguar o reator com água (50 mL). Transferir o enxágue 20 para o filtro. 40. Secar a torta úmida no filtro até que não pingue mais. 41. Carregar o frasco de reação de 2L com água (500 mL) através de um funil para pó. 42. Transferir a torta de volta para o frasco de reação através de 25 um funil para pó. 43. Agitar material em temperatura ambiente por 60 minutos. 44. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro de frita grossa. 45. Enxaguar o reator com água (25 mL). Transferir o enxágue para o filtro. 46. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora. 47. Transferir o produto para um frasco de fundo redondo de 2L (gargalo simples) e lentamente secar com tombamento usando um evapora- dor giratório com uma temperatura de banho de 50°C até que um peso constante seja registrado.

Exemplo 73 Preparação de {1 -Metil-5-r2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina HgC

{1 -Metil-5-[2-(5-trif luorm etil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina pode ser preparada de acordo com o procedimento que segue:

1. Equipar um frasco de fundo redondo de 4 gargalos, 2L, com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de tempe-ratura, purga de nitrogênio e condensador. 2. Carregar o reator com 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-imidazol-2- il)piridin-4- Ílóxi)-N1-metilbenzeno-1,2-diamína (200 g) através de um funil 15 para pó. 3. Carregar o reator com acetonitrila (1L) através de um funil para pó. 4. Começar a agitar a mistura em temperatura ambiente e sob uma atmosfera de nitrogênio. 5. Após 20 ± 5 min, carregar o reator com isotiocianato de 4- trifluormetilfenila (104 g) através de um funil para pó. 6. Uma amostra é tomada 30 minutos após adição do isotiocianato para verificar o término da reação. 7. Uma vez a reação estando completa, filtrar a mistura através de um filtro de frita grossa. 8. Enxaguar o reator com MeCN (200 mL). Transferir o enxágue para o filtro. 9. Lavar os sólidos removidos com MeCN (200 mL). 10. Transferir o filtrado para um frasco de fundo redondo de 4 gargalos, 3L, com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, con-trolador de temperatura, purga de nitrogênio e condensador. 11. Carregar o reator com N,N-diisopropiletilamina através de funil para pó. 12. Carregar o reator com cloreto de 2-cloro-1,3- dimetilimidazolínio através de funil para pó em quatro porções equivalentes a cada 10 minutos (tempo de adição total de 30 minutos). Após a adição final, permitir que a mistura de agitação agite mais 10 minutos. 13. Aquecer a reação para 50°C ± 5°C. 14. Uma amostra é tomada 30 minutos após aquecimento da mistura para verificar o término da reação. 15. Uma vez a reação estando completa, transferir a mistura de reação através de um filtro de cápsula de 0,2 μm em linha para um frasco de fundo redondo de 3L equipado como na etapa 10. 16. Adicionar a água através de funil para pó. 17. Aquecer a reação para 50°C ± 5°C. 18. Após aquecer para 2 horas, permitir que a mistura de reação esfrie para 20-25°C e agite mais 1 hora. 19. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro de frita média. 20. Enxaguar o reator com 2:1 de MeCN/água (300 mL). Transferir o enxágue para o filtro. 21. Lavar a torta de filtro com 2:1 de MeCN/água (300 mL). 22. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora. 23. Transferir o produto para um prato de secagem e secar o material em um forno a vácuo a 70 ± 5°C com um pequeno vazamento de nitrogênio até que a quantidade de MeCN residual (acetonitrila) seja menos do que 410 ppm. 24. Para recristalizar, produto é aquecido para refluxo em 15 vo-lumes (peso para volume) de EtOH em um reator equipado com um agitador mecânico, sonda de temperatura interna, controlador de temperatura, purga de nitrogênio e condensador, 25. A mistura é refluxada por 30 minutos quando um cabeçote de destilação substitui o condensador. 26. EtOH é destilado até que 4 volumes permaneçam. Aquecimento é parado e um volume de água é adicionado. 27. A mistura é deixada esfriar para 0-5°C. 28. Isolar o produto através de filtragem em um filtro de vidro de frita média. 29. Enxaguar o reator com 4:1 de EtOH/água (1 volume). Transferir o enxágue para o filtro. 30. Lavar a torta de filtro com água (1 volume). 31. Secar a torta úmida no filtro por cerca de 1 hora. 32. Transferir o produto para um prato de secagem e secar o material em um forno a vácuo a 50°C ± °C com um pequeno vazamento de nitrogênio até que peso constante seja atingido.

Exemplo 74 Preparação de [1-Metil-5-[2-(5 -trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (1 mmol) foi adicionado à mistura de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N1 - metilbenzeno-1,2- diamina (350 mg, 1 mmol) em 3 mL de acetonitrila. Após agitar por 20 minutos em temperatura ambiente, análise de HPLC mostrou conversão completa. Trietilamina (0,3 mL, 2,2 mmols) foi adicionada seguido por iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio (270 mg, 1,05 mmol). A mistura de reação foi aquecida para 50°C por 5 horas. O aquecimento foi parado e 1,5 mL de água foi adicionado. Após agitar a mistura por 2 horas, o sólido foi coletado através de filtragem e lavado com 2:1 de acetonitrila/água (3 x 1 mL) para dar 317 mg (61%) do composto do título.

Exemplo 74a Preparação de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)-N-metil-2- nitrobenzenamina

NaOMe (1,5 mL, 6,3 mmols, 25% em peso em MeOH) foi adicionado a uma mistura de 4-(4- (metilamino)-3-nitrofenóxi)piridina-2-carbonitrila (1,72 g, 6,3 mmols) em 1-PrOH (10 mL). A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura interna). Após aquecer por 1 hora, análise de HPLC indicou conversão completa de material de partida. NH4OAc (1,46 g, 18,9 mmols) foi adicionado e a mistura aquecida para 70°C. Após 1 hora a 70°C, a mistura foi aquecida para 85°C. Simultaneamente, 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,8 mL, 7,56 mmols) foi adicionada em porções de 4 x 0,2 mL a cada 30 minutos. A mistura foi aquecida a 85°C por 20 horas. A mistura foi então resfriada para temperatura ambiente e água (10 mL) foi adicionada. Após agitar por várias horas, a mistura foi resfriada em um banho de gelo/água. Após 1 hora no banho de gelo/água, o sólido foi coletado através de filtragem e lavado com 1:1 de 1-PrOH/água (2x7 mL). O sólido foi seco em um forno a vácuo a 50°C por cerca de 16 horas para dar 0,982 g (41%) do composto do título. Exemplo 74b Preparação de 4-cloro-2-(5-(trifluormetil)-1 H-imidazol-2-il)piridina

NaOMe (0,46 mL, 2 mmols, 25% em peso em MeOH) foi adicionado a uma mistura de 4-cloro-2-ciano-piridina (277 mg, 2 mmols) em 1PrOH (3 mL). A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura de Reação- Block). Após aquecer por 1 hora, análise HPLC indicou conversão completa de material de partida. A mistura foi aquecida para 70°C e NH4OAc (462 mg, 6 mmols) foi adicionado. Após 1 hora a 70°C, a mistura foi aquecida para 85°C. Simultaneamente, 3-bromo-1,1,1 -trifluoracetona (0,25 mL, 2,4 mmols) foi adicionada em porções de 4 x 0,063 mL a cada 30 minutos. A mistura foi aquecida a 85°C por cerca de 20 horas. O produto bruto era 72,4% (LCAP) através de análise de HPLC e foi confirmado através de análise de LC-EM. Exemplo 74c 4-Cloro-2-ciano-piridina

4-Cloro-2-piridinocarboxamida (93,9 g, 0,6 mol) e TEA (125 mL, 0,9 mol) em EtOAc (500 mL) foram resfriadas para 0,2°C através de uma unidade de esfriamento externa. TFAA (92 mL, 0,66 mmol) foi adicionado através de um funil de adição durante 40 minutos. A temperatura interna aumentou para 10°C durante a adição. A temperatura no término da adição era 0,0° C. Após adição, o esfriamento foi desligado. Após mais 30 minutos, análise HPLC mostrou 4,3% (LCAP) do material de partida. Mais 8,3 mL adi-cionais (0,06 mol) de TFAA foram adicionados. Após agitar a mistura de rea- ção por mais 20 minutos, análise de HPLC indicou conversão completa. K2CO3 aquoso a 10% (p/v, 500 mL) foi adicionado. A temperatura interna aumentou de 13,7 para 22,0° C. A mistura foi transferida para um funil de separação após agitação por 20 minutos. As camadas foram separadas e a camada aquosa extraída com EtOAc (150 mL). As camadas orgânicas com- binadas foram lavadas com ácido cítrico aquoso a 10% (p/v, 300 mL), secas (Na2SO4), filtradas e concentradas. O produto bruto foi seco em um forno a vácuo a 50°C por 16 horas para dar 72,85 g (87%) do composto do título: 1H RMN (400 MHz, CDCIg) δ 8,6 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5 (m, 1H); 13C RMN (100 MHz, CDCI3) δ 151,8, 145,3, 134,9, 128,7, 127,4, 116,1; HPLC >99% (LCAP).

Exemplo 74d 4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila

Uma mistura de 4-cloro-2-ciano-piridina (6,9 g, 0,05 mol), 4- metilamino-3- nitrofenol (8,4 g, 0,05 mol) e K2CO3 (10,4 g, 0,075 mol) em

DMSO (80 mL) foi aquecida para 60°C. Após 11,5 horas, análise de HPLC indicou conversão completa de ambos materiais de partida. Após esfriar para 20°C, água (240 mL) foi adicionada à mistura de reação. A temperatura aumentou para 40°C antes de diminuir para temperatura ambiente. O sólido foi coletado através de filtragem e lavado com água (2 x 40 mL). O sólido foi então transformado em pasta em heptano (40 mL). O sólido foi coletado e lavado com heptano (40 mL), O produto bruto foi seco em um forno a vácuo a 50°C por 16 horas para dar 10,33 g (76%) do composto do título. 1H RMN (400 MHz, DMSO-dθ) δ 8,5 (m, 1H), 8,2 (m, 1H), 7,9 (m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5 (m, 1H), 7,2 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 3,0 (s, 3 H); 13C RMN (100 MHz, DMSO- d6) δ 165,1, 152,9, 144,4, 140,6, 134,1, 130,4, 130,1, 117,9, 117,1, 117,0, 116,5, 114,9, 29,8; APCI EM [M + H]+ = 271 ; HPLC >99% (LCAP). Exemplo 74e 4-(4-Metilamino-3-amino-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila

4-(4-Metilamino-3-nitro-fenóxi)-piridina-2-carbonitrila (5,0 g, 0,019 mol) em EtOH (15 mL) foi aquecida para 40°C, Na2CO3 (4,7 g, 0,044 mol) foi adicionada seguido por H2O (8,4 mL), Na2S2O4 (3,3 g, 0,019 mol) foi adicionado seguido por H2O (10 mL). A temperatura aumentou para 44,5°C. Após esfriar para 36,7°C, Na2S2O4 (6,6 g, 0,038 mol) foi adicionado seguido por H2O (20 mL), A temperatura aumentou para 44,0° C. Análise de HPLC mostrou 4,1% (LCAP) do material de partida. Mais Na2S2O4 (3,3 g, 0,019 mol) foi adicionado. Após agitar mais 15 minutos, calor foi removido e H2O (12,5 mL) foi adicionada. A 25°C, mais Na2CO3 (1,3 g, 0,012 mol) foi adicionado e a mistura resfriada em um banho de gelo/água. Em menos de 5°C, a mistura foi deixada envelhecer por 30 minutos (temperatura final de 1,5°C). O sólido foi coletado através de filtragem e lavado com H2O (10 mL seguido por 5 mL). O sólido foi seco em um filtro por 30 minutos e então transferido para o frasco de reação e H2O (50 mL) adicionada. A mistura foi agitada por 45 minutos. O sólido foi então coletado através de filtragem e lavado com H2O (2x10 mL). O produto bruto foi seco em um forno a vácuo a 50°C por 16 horas para dar 3,50 g (76%) do composto do título: 1H RMN (400 MHz, DMSO-dβ) δ 8,5 (m, 1H), 7,5 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,4 (m, 1H), 6,3 (m, 2 H), 4,8 (s, 2 H), 4,7 (s, 1H), 2,7 (s, 3 H); APCI EM [M + H]+ = 241; HPLC >99% (LCAP).

Exemplo 74f 4-[1-Metil-2-(4-(trifluormetil)fenilamino)-1H-benzoimidazol-5-ilóxi'|-piridina-2- carbonitrila

Isotiocianato de 4-(trifluormetil)fenila (9,65 g, 0,0475 mol) foi adi cionado a uma solução de 4-(4-metilamino-3-amino-fenóxi)-piridina-2- carbonitrila (12,0 g, 0,05 mol) em MeCN (60 mL). Análise de HPLC indicou conversão completa da amina após 40 minutos. A mistura foi filtrada e os sólidos removidos lavados com MeCN (2 x 12 mL). DIPEA (17,5 mL, 0,1 mol) foi adicionado ao filtrado. Cloreto de 2-cloro-1,3-dimetilimidazólio (DMC) foi adicionado em porções de 4 x 2,11 g (8,44 g, 0,05 mmol) a cada 10 minutos. Após a adição final, a mistura foi deixada agitar mais 10 minutos quando análise de HPLC indicou conversão completa. A mistura foi então aquecida para 50°C (temperatura interna). Após 45 minutos a 50°C, análise de HPLC indicou conversão completa para o produto. A mistura foi deixada esfriar para temperatura ambiente e então H2O (45 mL) foi adicionada. A mistura de reação era inicialmente homogênea antes do composto começar a precipitar da mistura. Após agitar por 2 horas, o sólido foi coletado através de filtragem a lavado com 2:1 de MeCN/H2O (2 x 20 mL). O produto bruto foi seco em um forno a vácuo a 50°C por 16 horas para dar 16,10 g (78%) do composto do título. 1H RMN (400 MHz, DMSO-ctô) δ 9,5 (m, 1H), 8,5 (m, 1H), 8,0 (m, 2 H), 7,7 (m, 2 H), 7,6 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,9 (m, 1H), 3,7 (m, 3 H); APCI EM [M + H]+ = 410; HPLC >99% (LCAP).

Exemplo 74q (1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxil-1 H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina

NaOMe (0,23 mL, 1 mmol, 25% em peso em MeOH) foi adicionado a uma mistura do Exemplo 74 f (409 mg, 1 mmol) em MeOH (4 mL). Após 1 hora em temperatura ambiente análise HPLC indicou 46,2% (LCAP) do material de partida. A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura de Reação-Block). Após aquecer por 1 hora, análise HPLC indicou 4,1% (LCAP) do material de partida restante. NH4OAc (231 mg, 3 mmols) foi adicionado seguido por 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,13 mL, 1,2 mmol). A mistura foi aquecida a 50°C por cerca de 20 horas. Mais 3-bromo-1,1,1- trifluoracetona (0,06 mL, 0,58 mmol) foi adicionada e a mistura aquecida para 60°C. Após 24 horas a 60°C, a mistura foi deixada esfriar para temperatura ambiente. Água (4 mL) foi adicionada seguida por EtOAc (4 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4), filtradas e concentradas. O produto bruto foi dissolvido em IPA (4 mL). Ácido metanossulfônico (0,020 mL) foi adicionado a 1 mL de solução da solução de IPA. A mistura foi aquecida para 80°C da noite para o dia. A mistura foi então resfriada para temperatura ambiente e concentrada para dar o composto do título: APCI EM [M+H]+ = 519. Exemplo 74h {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina

NaOMe (0,23 mL, 1 mmol, 25% em peso em MeOH) foi adicionado a uma mistura do Exemplo 74f (409 mg, 1 mmol) em 1-PrOH (2 mL). A mistura foi aquecida para 50°C (temperatura de Reação-Block). Após aque- cer por 1 hora, análise de HPLC indicou conversão completa do material de partida. A mistura foi aquecida para 70°C e NH4OAc (231 mg, 3 mmols) foi adicionado. Após 1 hora a 70°C, a mistura foi aquecida para 85°C. Simulta-neamente, 3-bromo-1,1,1-trifluoracetona (0,13 mL, 1,3 mmol) foi adicionada em porções de 4 x 0,033 mL a cada 30 minutos. A mistura foi aquecida a 85°C por cerca de 20 horas. A mistura foi deixada esfriar para temperatura ambiente e água (2 mL) foi adicionada. Após agitar por várias horas, o sólido foi coletado através de filtragem e lavado com 1:1 de 1-PrOH/água (2x3 mL). O sólido foi seco em um forno a vácuo a 50°C por cerca de 16 horas para dar 0,11 g (21 %) do composto do título.

Exemplo 75 Preparação de {1-Metil-5 -[2-(5-trifluormetil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi'|- 1H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina Isotiocianato de 4-trifluormetilfenila (200 mg, 1 mmol) foi adicionado a uma mistura de 4-(2-(5-(trifluormetil)-1H-Ímidazol-2-il)piridin-4-ilóxi)- N1-metilbenzeno-1,2- diamina (350 mg, 1 mmol) em 3 L de acetonitrila. Após agitar por 20 minutos em temperatura ambiente, análise de HPLC mostrou conversão completa. Uma mistura de tiouréia (553 mg, 1 mmol) em POCI3 (3 mL) foi agitada em temperatura ambiente. Após 4 horas, a mistura foi aquecida para aproximadamente 50°C. Após aquecer por 2 horas, análise HPLC 33P-ATP: NEN Perkin Elmer N9 NEG 602 h Aparelho de filtragem: Millipore N9 MAVM 096 OR Placas de ensaio de 96 cavidades: Placas de propileno de fundo em U Falcon N9 35-1190 5 Placas de filtragem de 96 cavidades: Millipore Immobilon 1 N9 MAIP NOB Fluido de cintilação: Wallac OptiPhase "SuperMix" N9 1200-439 Condições de ensaio Raf aproximadamente 120 pM 10 Mek aproximadamente 60 nM 33P-ATP 100 nM Tempo de reação 45-60 minutos em temperatura ambiente Protocolo de ensaio * Raf e Mek foram combinadas em concentrações finais de 2X em tampão de ensaio (Tris a 50 mM, pH 7,5, MgCfe a 15 mM, EDTA a 0,1 mM e DTT a 1 mM) e dispensadas 15 μL por cavidade em placas de ensaio de polipropileno (placas de ensaio de 96 cavidades de polipropileno de fundo em U Falcon N9 35-1190). Os níveis de base são determinados em cavidades contendo Mek e DMSO sem Raf.

Às cavidades contendo Raf/Mek foram adicionados 3 μl de 10X de um composto de teste inibidor de raf cinase diluído em DMSO a 100%. A reação de atividade de raf cinase foi iniciada através da adição de 12 pL por cavidade de 2,5X 33P-ATP diluído em tampão de ensaio. Após 45-60 minutos, as reações foram paradas com a adição de 70 pL de reagente de para- da (EDTA a 30 mM). Placas de filtragem foram pré-umedecidas por 5 minu-tos com 70% de etanol e então enxaguadas através de filtragem com tampão de lavagem. Amostras (90 pL) das cavidades de reação foram então transferidas para as placas de filtragem. As placas de filtragem foram lavadas 6X com tampão de lavagem usando aparelho de filtragem Millipore. As placas foram secas e 100 pL por cavidade de fluido de cintilação (Wallac OptiPhase "Supermix" N9 120-439) foram adicionados. CPM é então determinado usando uma leitora Wallac Microbeta 1450.

Exemplo 77 ENSAIO 2: Avaliação de Raf Biotinilado Avaliação de Raf In Vitro A atividade de várias isoformas de Raf serina/treonina cinases pode ser medida provendo ATP, substrato de MEK e ensaiando a transfe-rência de porção fosfato para o resíduo MEK. Isoformas recombinantes de Raf foram obtidas através de purificação a partir de células de inseto sf9 infectadas com um vetor de expressão de baculovírus recombinante de Raf humano. Mek inativa de cinase recombinante foi expressa em E. coli e marcada com Biotin pós-purificação. Para cada ensaio, compostos de teste foram serialmente diluídos em DMSO, então misturados com Raf (0,50 nM) e biotin-MEK inativa de cinase (50 nM) em tampão de reação mais ATP (1 μM). As reações foram subsequentemente incubadas por 2 horas em temperatura ambiente e paradas através da adição de EDTA a 0,5 M. A mistura de reação parada foi transferida para uma placa revestida com neutradavin (Pierce) e incubada por 1 hora. Produto fosforilado foi medido com o sistema de fluorescência resolvida no tempo DELFIA (Wallac), usando um anti-p-MEK de coelho (Cell Signaling) como o anticorpo primário e anticoelho marcado com európio como o anticorpo secundário. Fluorescência resolvida no tempo foi lida em um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA. A concentração de cada composto para 50% de inibição (IC50) foi calculada através de regressão não-linear usando software de análise de dados XL Fit.

Usando os procedimentos do Exemplo 76 ou 77, os compostos dos Exemplo 1 -64 foram mostrados ter uma atividade inibidora de raf cinase em uma IC5ode menos do que 5 μM.

Exemplo 78 Inibição de Crescimento de Tumor de Melanoma 3 x 106 células de melanoma humano A375 foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados pelo volume de tumor em quatro grupo de nove camundongos cada e tratamento com um composto da invenção foi iniciado. Os camundongos foram dosados por gavagem oral todo dia por 14 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL O volume do tumor foi medido duas vezes por semana usando calibradores digitais. O volume de tumor médio é mostrado na Figura 1.

Exemplo 79 Inibição de Sinalização de Raf Cinase em Células de Melanoma Como no Exemplo 78, 3 x 106 células de melanoma humano A375M foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós-implante), os camundongos foram aleatorizados por volume de tumor em quatro grupos e foram dosados através de gavagem oral todos os dias por 5 dias com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. Em 4 e 24 horas pós-dose, os camundongos foram eutanizados, os tumores coletados e congelados rapidamente. Os tumores congelados foram descongelados em gelo, pesados e então homogeneizados em tampão RIPA com comprimidos de coquetel de inibidor de protease livre de EDTA Mini, Roche Complete (2 comprimidos por 25 mL de tampão), fluoreto de fenilmetilsulfonila a 1 mM (PMSF) e 1X Sigma Phosphatase Inhibitor Cocktail II, usando o Roche Magna-lyser (ciclos de 2 x 1 minuto a 6500 rpm a 4°Ç). Para cada 100 mg de tecido de tumor, 1 mL de tampão de lise RIPA foi adicionado. Os homogenatos foram centrifugados a 14K RPM por 20 minutos em um microfuge a 4°C, seguido por homogeneização adicional usando Qiagen Qiashredders (9K RPM por 2 minutos a 4°C). A concentração de proteína foi determinada usando o ensaio de proteína Pierce BCA e então 20 μg de cada amostra foram carregados por cavidade em um Tris-Glicina SDS-gel de poliacrilamida a 4-20%. Seguindo PAGE, proteína foi transferida para membranas de nitrocelulose, bloqueada (5% de leite em pó desnatado em TBST) por 1 hora em temperatura ambien- te e então testada da noite para o dia a 4°C usando uma diluição 1:1000 (em tampão de bloqueio) de anticorpo antifosfo-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signaling N- 9101), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling Ns 9121), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling N9 5 9121), anticorpo anti-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signaling N. 9102) ou anticorpo anti-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling Nδ 9122). As membranas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada) com TBST em temperatura ambiente e um anticorpo de coelho anticabra marcado com HRP foi adicionado em uma diluição de 1:5000 em todos os blots (em tampão de 10 bloqueio) e incubado em temperatura ambiente por 1 hora. A membrana foi então lavada 5 vezes (5 minutos cada) com TBST e as membranas foram incubadas com Pierce Super-Signal por 4 minutos, seguido por exposição sobre película por faixa de exposições de tempo de 1 segundo a 20 minutos. Os resultados para as amostras pós-dose de 4 e 24 horas são mostrados 15 nas Figuras 2A e 2B, respectivamente.

Exemplo 80 Inibição de Crescimento de Tumor de Câncer de Cólon 2 x 106 de células de câncer de cólon humano HT29P foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas 20 Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 250 mm3 (14 dias pós- implante), os camundongos foram aleatorizados através de volume de tumor em quatro grupos de dez e tratamento com um composto da invenção foi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral todos os 25 dias por 14 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. O volume do tumor foi medido duas vezes por semana usando calibradores digitais. O volume de tumor médio é mostrado na Figura 3.

Exemplo 81 30 Inibição de Sinalização de Raf Cinase em Células de Câncer de Cólon 3 x 106 de células de câncer de cólon humano HT29P foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós- implante), os camundongos foram aleatorizados através de volume de tumor em quatro grupos de dez e tratamento com um composto da invenção foi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral todos os dias por 5 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 25 todos em um volume de 0,2 mL. Em 1,4 e 24 horas pós-dose, os camundongos foram eutanizados, os tumores coletados e congelados rapidamente. Os tumores congelados foram então tratados de acordo com o procedimento do Exemplo. 79. Os resultados para as amostras pós-dose de 1, 4 e 24 horas são mostrados nas Figuras 4A, 4B e 2C, respectivamente.

Exemplo 82 Inibição de Sinalização de Raf Cinase com o Composto do Exemplo 1 em um Ensaio Bioquímico In Vitro Ensaio de Raf In Vitro O efeito inibidor do Composto do Exemplo 1: 1-Metil-5-[2-(5- triflúor- metil- 1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]- 1 H-benzoimidazol-2-il } -(4- trifluormetil- fenil)-amina sobre B-Raf do tipo selvagem, c-Raf do tipo selvagem e B-Raf mutante (V600E) foi determinado usando o ensaio biotinilado que segue. A atividade de cinase das várias isoformas de Raf serina/treonina cinases foi medida provendo ATP, um substrato de MEK inativa de cinase recombinante e ensaiando a transferência de porção fosfato para o resíduo de MEK. MEK de comprimento completo recombinante com uma mutação no sítio de ligação de ATP K97R inativa (tornando sua cinase inativa) foi expressa em E. coli e marcada com Biotin pós-purificação. O cDNA de MEK foi subclonado com um tag N-terminal (his)e e expresso em E. coli e o substrato de MEK recombinante foi purificado a partir de lisato de E. coli através de cromatografia de afinidade de níquel seguido por troca de ânion. A preparação de substrato de MEK final foi biotinilada (Pierce EZ-Ling Sulfo- NHS-LC-Biotin) e concentrada para 11,25 μM. B-Raf recombinante, c-Raf e B-Raf mutante foram obtidos através de purificação de células de inseto sf9 infectadas com os vetores de expressão recombinante de Raf humanos correspondentes. As isoformas Raf recombinantes foram purificadas através de uma interação de anticorpo Glu ou através de Cromatografia de íon de Metal. Para cada ensaio, o composto do Exemplo 1 foi serialmente diluído em DMSO e então misturado com B-Raf, c-Raf ou B-Raf mutante (0,50 nM cada). O substrato de MEK-biotin inativa de cinase (50 nM) foi adi-cionado em tampão de reação mais ATP (1 pM). O tampão de reação continha Tris-HCi2 a 309 mM, pH 7,5, MgCI2 a 10 mM, DTT a 2 mM, EDTA a 4 10 mM, beta-glicerofosfato a 25 mM, MnCI2 a 5 mM e BSA/PBS a 0,01%. As reações foram subsequentemente incubadas por 2 horas em temperatura ambiente e paradas através da adição de EDTA a 0,5M. A mistura de reação parada foi transferida para uma placa revestida com neutradavin (Pierce) e incubada por 1 hora. Produto fosforilado foi medido com sistema de fluores- 15 cência resolvida no tempo DELFIA (Wallac), usando um anti-p-MEK de coelho (Cell Signaling) como o anticorpo primário e anticoelho marcado com európio como o anticorpo secundário. Fluorescência resolvida no tempo foi lida em um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA. A concentração do composto do Exemplo 1 para 50% de inibição (IC5o) foi calculada através de regressão 20 não-linear usando software de análise de dados XL Fit. Resultados:

O composto do Exemplo 1 exibiu inibição potente (IC5o < 0,1 pM) de atividade de B-Raf, c-Raf e B-Raf mutante (V600E) conforme mostrado abaixo na TABELA 3. TABELA 3: Potência In Vivo do Composto do Exemplo 1 contra atividade de Raf

Conforme mostrado acima na TABELA 3, o composto do Exem plo 1 mostra atividade inibidora potente contra Raf cinase isoforma B-Raf do tipo selvagem, isoforma c-Raf do tipo selvagem e B-Raf mutante (V600E). Conforme mostrado na Figura 5, Raf-cinases são consideradas ser os efeto- res Ras primários no curso de sinalização de MAPK (Ras/Raf/MEK/ERK). As Raf cinases são ativadas por Ras e fosforilam e ativam Mek1 e Mek2, que por sua vez ativam Cinases Ativadas por Mitógeno 1 e 2 (MAPK), no curso de MAPK. Raf cinases são conhecidas influenciar e regular proliferação, diferenciação, sobrevivência, transformação oncogênica e apoptose de célula. A isoforma B-Raf foi mostrada ser a forma mais ativa de Raf envolvida em sinalização e chave na propagação de sinalização de Ras.

Conforme mostrado abaixo na TABELA 4, o curso de sinalização de MAPK está implicado em muitos cânceres humanos. Mutações de Ras (ativada) são encontradas em 15% de todos os cânceres humanos. Mutações em ERK (hiper-ativada) são encontradas em 30% de todos os cânceres humanos. Mutações de oncogene associadas com câncer são comuns em vários membros deste curso, por exemplo, a B-Raf mutante (V600E) acontece em cerca de 70% de melanomas e cerca de 12% de carcinoma de cólon (Davies e outros, supra; Yuen e outros, supra e Brose e outros, supra). TABELA 4: Associação entre moléculas de Sinalização de Mutante no curso de MAPK e Resultado Clínico Pobre

Vide Sebolt-Leopole e Herrera, Nature Reviews Cancer (4):937 (2004).

Conforme indicado acima na TABELA 4, a forma mutante de B- Raf (V600E), que é ativada, é um alvo importante para tratamento de câncer porque sua expressão é um indicador de prognose pobre, ela é constitutivamente ativa e ela dirige vários tumores, incluindo melanoma, câncer da tire- óide papilar, câncer ovariano e câncer de cólon. Foi anteriormente demonstrado que inibidores de Raf cinase do tipo selvagem que também inibem B- Raf mutante mostraram promessa como agentes terapêuticos em terapia anticâncer. Por exemplo, foi mostrado que depleção de B-Raf mutante por 5 siRNA oferece sinalização de ERK e proliferação em linhagens de célula de melanoma (Dibb, N.J. e outros, Nature Reviews Cancer (4):718, 2004). Deste modo, é significante notar que B-Raf mutante é inibida ainda mais poten- tentemente com o composto do Exemplo 1 do que B-Raf do tipo selvagem, deste modo demonstrando a utilidade do composto para a inibição de Raf no 10 tratamento de doenças mediadas por Raf incluindo melanoma, câncer ovari-ano, câncer da tireóide papilar e câncer de cólon.

Exemplo 83 Inibição de Sinalização de B-Raf Cinase Mutante com o Composto do E- xemplo 1 em Ensaios Baseados em Célula 1. Inibição de Fosforilação de ERK Métodos: Duas linhagens de célula de melanoma, A375M (B-Raf mutante V600E) e SKMEL-28 (B-Raf mutante V600E) foram usadas para medir o e- feito inibidor do composto do Exemplo 1 em um ensaio baseado em célula. 20 Fosforilação de ERK foi analisada após tratamento com diluições seriais do composto do Exemplo 1: {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piri- din-4-ilóxi]- 1 H-benzoimidazol-2-il} -(4-trifluormetil-fenil)-amina em células SKMEL-28 e células A375M. Valores EC5o foram determinados ajustando os dados em uma curva de quatro parâmetros. Resultados:

Conforme mostrado abaixo na TABELA 5, o Composto do E- xemplo 1 inibe atividade de cinase de B-Raf mutante (V600E) em células SKMEL-28 e células A375M, conforme medido através da diminuição em fosfo-ERK. TABELA 5: Efeito inibidor de Composto do Exemplo 1 em Linhagens de Célula de Melanoma Expressando Raf-B Mutante.

2. Inibição de fosforilação de MEK Métodos:

Três linhagens de célula de melanoma, A375M (B-Raf mutante V600E), SKMEL-2 (Raf do tipo selvagem, N-Ras mutante) e CHL-1 (Raf do tipo selvagem, Ras do tipo selvagem) foram usadas para medir o efeito inibidor do composto do Exemplo 1 em um ensaio baseado em célula. As três linhagens celulares foram incubadas a 37°C em soro bovino fetal a 0,1% com concentrações de 0,1 pM, 0,5 pM, 1 pM, 5 pM e 10 pM do composto do Exemplo 1. Após 4 horas de incubação, fosforilação de MEK foi analisada através de análise Western blot. Resultados: Os resultados são mostrados nas Figuras 6A, 6B e 6C. Conforme mostrado na Figura 6A, o composto do Exemplo 1 é um inibidor potente de sinalização a jusante de Raf em células A375M (Figura 6A), células SK- MEL-2 (Figura 6B) e em células CHL-1 (Figura 6C) em uma faixa de concentração de a partir de 0,1 pM a 10 pM.

3. Inibição de Crescimento Celular Independentemente de Ancoragem

A fim de verificar que inibição de Raf se traduz em atividade an- tiproliferativa, o composto do Exemplo 1 foi testado contra uma variedade de linhagens celulares e isolates de tumor humano crescidos em ágar mole, conforme listado abaixo na TABELA 6.

Ensaio de Proliferação de Ágar Mole: Para cada linhagem de célula listada abaixo na TABELA 6, 500 células por 100 pl foram semeadas em placas Ultra Low Attachment Micro de fundo plano de 96 cavidades Corning (Corning Ns 3474). Agarose GTG seakem a 1% foi adicionada (50 pl/cavidade) para completar o meio, deixada solidificar e então 100 pl de meio completo foram adicionados a cada cavidade. Diluições seriais do composto do Exemplo 1: {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foram feitas em uma concentração final de DMSO a 5% em meio livre de soro, e 25 μl do 5 composto diluído foram adicionados a cada cavidade (concentração de DM

SO final de 0,5%). Uma cavidade de controle continha DMSO a 0,5% sem nenhum composto também incluído no ensaio. Após 7 dias de incubação das células com o composto, 25 μl de Alamar Blue (Trek Diagnostic Systems Ns 00-100) foram adicionados a cada cavidade e incubados a 37°C por 4 10 horas. As placas foram lidas com uma leitora de placa de fluorescência, exci-tação 530 nm, emissão 590 nm. Valores de EC50 foram determinados ajustando os dados em uma curva de quatro parâmetros.

O composto do Exemplo 1 foi também testado contra um painel de isolates de tumor humano cultivado em ágar mole (Oncotest, GmbH, 15 Freiburg, Alemanha). Os tumores foram isolados de pacientes e então pas-sados como pedaços de tumor em camundongos imunocomprometicos e ensaiados usando os métodos descritos acima.

Resultados: O composto do Exemplo 1 tem um efeito antiproliferative potente sobre linhagens celulares e isolatos de tumor humano expres- 20 sando B-Raf mutante, K-Ras mutante e N-Ras mutante, conforme mostrado abaixo na TABELA 6. TABELA 6: Ensaio de Proliferação em Ágar Mole: inibição com o Composto do Exemplo 1

A atividade inibidora do composto do Exemplo 1 sobre o painel amplo de linhagens de célula e isolates de tumor humano mostrado acima na TABELA 6 demonstra a atividade antiproliferativa potente do composto em células de tumor expressando B-Raf mutante. O composto mostrou atividade potente contra as células de melanoma de B-Raf mutante na faixa de <0,0098 a 0,07 μM. O composto mostrou um grau similar de inibição contra as linhagens de célula colorretal de B-Raf mutante na faixa de 0,026 μM a 0,13 μM. O composto também demonstrou atividade antiproliferativa potente nas duas células de tumor de carcinoma colorretal que expressam K-Ras mutante (0,07 μM a 0,016 μM), confirmando que inibição de B-Raf/c-Raf no contexto de uma mutação de K-Ras a montante leva a uma atividade anti- proliferativa.

Em consonância com os resultados das linhagens de célula descritos acima, o composto do Exemplo 1 nos isolatos de tumor humano demonstrou a inibição mais potente contra os melanomas de B-Raf mutante (EC5O = 0,055 μM e 0,20 pM), seguido pelo melanoma mutante N-Ras (EC50 = 0,57 pM). Um tumor pancreático e um tumor colorretal tinham uma EC50 na faixa de 1 pM. Os tumores restantes deram valores de EC50 maiores do que 1 pM. Os tumores humanos isolados de pacientes são acreditados apresentar um modelo mais preciso de doença do que as linhagens celulares, porque os tumores são isolados de pacientes e passados como pedaços de tumor em camundongos imunocomprometidos. Deste modo, eles não são selecionados para crescimento em plástico e eles mantêm um pouco da arquiteta de tumor primária.

É interessante notar que 0 composto do Exemplo 1 tem uma atividade inibidora na faixa de mais do que 1 pM sobre os isolatos de tumor de carcinoma de célula renal. Embora 0 genótipo não possa ser determinado nesses tumores particulares, sabe-se que tumores de carcinoma de célula renal não expressam tipicamente Ras mutante ou B-Raf mutante. Deste modo, o composto do Exemplo 1 parece inibir especificamente as moléculas de sinalização do curso de MAPK, em particular moléculas de Raf e Ras cinase. Exemplo 84

Tratamento com 0 Composto do Exemplo 1 Causa Regressão de Tumor no Modelo de Xenoenxerto de Melanoma Humano A375M (B-Raf V600E) Métodos: 3 x 10e células de melanoma humano A375M foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 150 mm3 (17 dias pós- implante), os camundongos foram aleatorizados por volume de tumor em quatro grupos de nove camundongos cada e tratamento com o composto do Exemplo 1 foi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral todos os dias por 14 dias ou com veículo sozinho ou com 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1, todos em um volume de 0,1 mL. O composto do Exemplo 1: {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol- 2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi formulado em PEG a 100%. O volume do tumor foi medido duas vezes por semana usando calibradores digitais. Análise Western Blot

Em 8 e 24 horas após a 14â dose, os camundongos foram euta- nizados e tumores foram coletados e congelados rapidamente. Os tumores congelados foram descongelados em gelo, pesados e então homogeneizados em tampão RIPA com comprimidos de coquetel de inibidor de protease livre de EDTA Mini, Roche Complete (2 comprimidos por 25 mL de tampão), fluoreto de fenilmetilsulfonila a 1 mM (PMSF) e 1X Sigma Phosphatase Inhibitor Cocktail II, usando o Roche Magna-lyser (ciclos de 2 x 1 minuto a 6500 rpm a 4°C). Para cada 100 mg de tecido de tumor, 1 mL de tampão de lise RIPA foi adicionado. Os homogenatos foram centrifugados a 14K RPM por 20 minutos em um microfuge a 4°C, seguido por homogeneização adicional usando Qiagen Qiashredders (9K RPM por 2 minutos a 4°C). A concentração de proteína foi determinada usando o ensaio de proteína Pierce BCA e então 20 μg de cada amostra foram carregados por cavidade em um Tris- Glicina SDS-gel de poliacrilamida a 4-20%. Seguindo PAGE, proteína foi transferida para membranas de nitrocelulose, bloqueada (5% de leite em pó desnatado em TBST) por 1 hora em temperatura ambiente e então testada da noite para o dia a 4°C usando uma diluição 1:1000 (em tampão de bloqueio) de anticorpo antifosfo-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signaling Ne 9101), anticorpo antifosfo-MEK policlonal de coelho (Cell Signaling Ns 9121), anticorpo anti-ERK1/2 policlonal de coelho (Cell Signalling N. 9102) ou anticorpo anti-MEK policlonal de coelho (Cell Signalling Nδ 9122). Análise da modulação de marcadores a jusante foi feita usando uma diluição 1:1000 de anticorpo anti-Bim (Chemicon, Ns AB17003), clone de anticorpo anti-Ciclina 5D4 (Upstate, Ne 05-263), anticorpo anti-p27Kip-1 (182-198) (Calbiochem, Ne 506127), anticorpo antifosfo-AKT (S473) (Cell Signaling, N- 9271), anticorpo antifosfo-Akt (T308) (Cell Signaling, Nδ 9275) e anticorpo antifosfo- total Akt (Cell Signaling Ne 9272).

As membranas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada) com TBST em temperatura ambiente e um anticorpo anticoelho de cabra marcado com HRP foi adicionado em diluição de 1:5000 em todos os blots 5 (em tampão de bloqueio) e incubadas em temperatura ambiente por 1 hora. As membranas foram então lavadas 5 vezes (5 minutos cada) com TBST, e as membranas foram incubadas com Pierce Super-Signal por 4 minutos, seguido por exposição sobre película por faixa de exposições de tempo de 1 segundo a 20 minutos. 10 Resultados:

A Figura 7A é um gráfico mostrando uma resposta de dose na redução média em volume de tumor de tumores de melanoma humano de A375M (B-Raf V600E) em camundongos tratados com uma dose oral de 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1. Conforme mos- 15 trado na Figura 7A, o composto do Exemplo 1 tem atividade antitumor potente em um perfil dependente da dose. Em uma dose oral de 100 mg/kg do composto, regressões de tumor foram observadas em 9/9 dos camundongos testados.

Os resultados da análise Western blot para 8 horas e 24 horas 20 pós-14â dose da dose de 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1 são mostrados na Figura 7B e na Figura 7C, respectivamente. Os dados de Western blot mostram que o composto inibe fosforilação de MEK na dose de 100 mg/kg (que induz regressão de tumor) e a inibição de MEK é sustentada mais de 24 horas após a última dose, conforme mostrado na Fi- 25 gura 7C.

Conforme mostrado na Figura 7D, análise de modulação de bi- omarcador a jusante em lisatos de tumor 24 horas pós a 14- dose mostrou um aumento em BIM (marcador de apoptose) e p27Kip (marcador de parada de ciclo de célula) e uma diminuição em Ciclina D (inibição de ciclo de célu- 30 la). Esses resultados confirmam que o composto do Exemplo 1 inibe sinali-zação de Raf no curso de MAPK.

Exemplo 85 Tratamento com o Composto do Exemplo 1 Inibe Crescimento de Tumor de Melanoma O composto do Exemplo 1 foi testado quanto à atividade inibido- ra em um modelo de melanoma de tumor MEXF276 (B-Raf mutante V600E) e B-Raf do tipo selvagem de modelo de tumor de melanoma MEXF1341, N- Ras mutante (Q61K).

Métodos: Células de tumor MEXF276 de melanoma humano se rialmente passadas (B-Raf mutante V600E) foram implantadas subcutanea- mente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 65 mm3, os camundongos foram aleatorizados por volume de tumor e tratamento com o composto do Exemplo 1 {1- Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi inicia- do. Devido ao fato do modelo MEXF276 ser conhecido ser um pouco caqué- tico, com alguma toxidez esperada nos camundongos de controle não- tratados, regimes de dose intermitentes foram usados a fim de prevenir perda de peso do corpo severa nos grupos tratados com fármaco, como segue. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com o regime de dosagem que segue do composto do Exemplo 1:10 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 14, 16 e 20; com 30 mg/kg nos dias 0, 2, 14, 16, e 20 e com 100 mg/kg nos dias 0, 2, 14, 16 e 20.

Para o modelo MEXF1341, células de tumor MEXF1341 de melanoma humano serialmente passadas foram implantadas subcutaneamente no flanco posterior de camundongos Nu/Nu fêmeas. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 78 mm3, os camundongos foram a- leatorizados por volume de tumor e tratamento com o composto do Exemplo 1 foi iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com o regime de dosagem que segue do composto do Exemplo 1: 10 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 10, 12, 18 e 20; 30 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6, 10,12,18 e 20; e 100 mg/kg nos dias 0, 2, 4, 6,10,12 e 20.

Em 4 horas pós-dose final, os camundongos dos modelos MEXF276 e MEXF1341 foram eutanizados e os tumores foram coletados e congelados rapidamente. Lisatos desses tumores foram subsequentemente analisados através de Western blot para modulação direcionada (pMEK) e modulação de marcadores a jusante (BIM, p27Kip e pAKT) conforme acima 5 descrito no Exemplo 84. Resultados:

A Figura 8A é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de câncer de melanoma de MEXF276 (B-Raf V600E) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1. 10 Os resultados mostrados na Figura 8A indicam que o composto do Exemplo 1 mostram inibição de crescimento de tumor significante em isolates de MEXF276 a 10 mg/kg e maior do que ou igual a 50% de regressão de tumor em 8/8 camundongos a 30 mg/kg e 100 mg/kg. Análise de fosforilação de pMEK (Figura 8B) e modulação de biomarcador a jusante em lisatos de tu- 15 mor (Figura 8C) confirmam que atividade de B-Raf mutante é inibida nos tumores de MEXF276, conforme mostrado pela diminuição em fosfo-MEK na Figura 8B. Conforme mostrado na Figura 8C, um aumento em BIM (marcador para apoptose) e p27Kip (parada de ciclo celular) e uma diminuição em fosfo-AKT (sinalização de curso de sobrevivência) foram observados, con- 20 firmando inibição de atividade de Raf cinase no curso de MAPK.

A Figura 9A é um gráfico mostrando a inibição média de crescimento de tumor de tumores de câncer de melanoma de MEXF1341 (N-Ras Q61K) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1. Os resultados mostrados na Figura 9A indicam que o composto do Exemplo 25 1 causou inibição de crescimento de tumor significante (até 70% de inibição) no modelo de tumor de melanoma de N-Ras mutante MEXF1341 (N-Ras Q61K) nas doses de 30 mg/kg e 100 mg/kg, mas não induziu regressão de tumor. Conforme mostrado na Figura 9B, análise de fosfo-MEK pós-20 dias após tratamento com 100 mg/kg do composto não mostrou uma diminuição 30 observável em fosfo-MEK, em contraste com os resultados obtidos com o modelo MEXF276 (B-Raf mutante). Ainda, embora houvesse alguma evidência de que moléculas de sinalização no curso de MAPK a jusante de Raf no modelo MEXF1341 fossem eficazes, o efeito foi menos expressivo do que observado no modelo MEXF276. Por exemplo, conforme mostrado na Figura 9C, os níveis de p27Kip (parada de ciclo celular) aumentaram nos grupos de 30 mg/kg e 100 mg/kg indicando parada de crescimento, e um ligeiro au- 5 mento no marcador apoptótico BIM foi observado. Deste modo, parece que o composto do Exemplo 1 tem atividade potente no modelo de xenoenxerto MEXF276 (B-Raf mutante), causando regressão de tumor, e atividade signi- ficante, mas menos potente, no modelo de xenoenxerto MEXF1341 (B-Raf do tipo selvagem, N-Ras mutante), causando inibição de crescimento de tu- 10 mor.

Exemplo 86 Tratamento com o Composto do Exemplo 1 Inibe Crescimento de Tumor de Carcinoma Colorretal Humano

O composto do Exemplo 1 foi testado quanto à atividade inibido- 15 ra em um modelo de xenoenxerto de carcinoma colorretal HCT-116 (K-Ras mutante G13D), HT-29 (B-Raf V600E) e modelo de xenoenxerto de leucemia MV4-11 (FLT3 ITD).

Métodos: 5 x 106 células HCT-116 (K-Ras mutante G13D) de carcinoma colorretal humano foram implantadas subcutaneamente no flanco 20 traseiro de camundongos fêmea Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atigiu aproxima-damente 212 mm3 os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com os regime de dosagem que segue do com-posto do Exemplo 1:10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg através de gavagem oral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d) por um total de 28 dias. Camundongos satélite foram eutanizados e tumores foram coletados em 4 horas, 8 horas e 24 horas após a 3a dose. Lisatos desses tumores foram subseqüentemente analisados através de Western blot para modulação direcionada (pMEK) conforme acima descrito no Exemplo 84.

Um segundo modelo de carcinoma colorretal, HT-29 (B-Raf V600), foi testado como segue. 2 x 106 células HT-29 foram implantadas subcutaneamente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nu de 10- 12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumormédio atingiu aproximadamente 167 mm3 os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com o regime de dosagem que segue do composto do Exemplo 1:10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 5 mg/kg através de gavagem oral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d) por um total de 28 dias.

Um modelo de xenoenxerto de leucemia monolítica aguda, MV4- 11 (FLT3 ITD) foi testado como segue: 5 x 106 células MV4-11 foram implantadas subcutaneamente no flanco traseiro de camundongos fêmeas Nu/Nu 10 de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume do tumor médio atingiu aproximadamente 190 mm3 os camundongos foram dosados através de gavagem oral ou com veículo sozinho ou com o regime de dosagem que segue do composto do Exemplo 1:10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg através de gavagem oral no dia 1 e a cada 2 dias (q2d) 15 por um total de 16 dias. Camundongos satélite foram eutanizados e tumores coletados em 4 horas após a 3- dose. Lisatos desses tumores foram subse- qüentemente analisados através de Western blot para modulação direcionada (pMEK) conforme acima descrito no Exemplo 84.

Resultados: Os resultados para o estudo HCT-116 são mostrados nas Figu ras 10A-D. A Figura 10A é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de carcinoma colorretais HCT-116 (K-Ras G13D) em camundongos quando tratados com 100 mg/kg do composto do Exemplo 1. Conforme mostrado nas Figuras 10B-10D, análise de fosfo-MEK 4 horas (Figura 10B), 8 horas (Figura 10C) e 24 horas (Figura 10D) após a 3a dose mostrou uma diminuição observável em fosfo-MEK.

A Figura 11 é um gráfico mostrando a redução média em volume de tumor de tumores de carcinoma colorretal HT-29 (B-Raf V600E) em camundongos quando tratados com o composto do Exemplo 1, Conforme mos- 30 trado na Figura 11, regressão de tumor foi observada em 30 mg/kg e 100 mg/kg.

Os resultados para o estudo de MV4-11 são mostrados nas Fi- guras 12A-B. A Figura 12A é um gráfico mostrando a inibição média de crescimento de tumor de tumores de câncer de leucemia monocítica aguda MV4-11 em camundongos tratados com o composto do Exemplo 1. As células de tumor MV4-11 são direcionadas pelo receptor tirosina cinase mutante 5 (MV4;11, FLT3 ITD). Conforme mostrado, composto do Exemplo 1 causou inibição de crescimento de tumor significante no modelo MV-11, no entanto, não houve nenhuma evidência de regressão de tumor (Figura 12A), nem houve uma inibição observável de sinalização de MEK (Figura 12B). Embora não desejando ser limitado pela teoria, no modelo MV4-11 é provável que a 10 eficácia de inibição de crescimento de tumor seja um resultado da atividade angiogênica do composto, principalmente através da inibição de VEGFR-2, conforme descrito abaixo nos EXEMPLOS 87-88.

Um sumário dos dados obtidos a partir da avaliação da eficácia do composto do Exemplo 1 em modelos de xenoenxerto de melanoma, car- cinoma colorretal e leucemia descritos acima é provido abaixo na TABELA 7. TABELA 7: Sumário de Atividade do Composto do Exemplo 1 em Vários Modelos de Xenoenxerto

A partir dos dados sumarizados na TABELA 7, conforme mos trado nas Figuras 6-12, e conforme descrito nos Exemplo 82-86, o composto do Exemplo 1 é eficaz em cada modelo de xenoenxerto testado onde B-Raf 5 é mutado, causando regressão de tumores e modulação direcionada em to- dos os três modelos testados (A375M, MEXF276 e HT29).

Exemplo 87: Ensaios de Inibição de Tirosina Cinase 1. Ensaios Bioquímicos: A atividade de cinase de várias proteínas tirosina cinases foi medida provendo ATP e um peptídeo ou proteína apropriado contendo um resíduo de amino ácido tirosina para fosforilação, e ensaio quanto à transferência da porção fosfato para o resíduo tirosina. Proteínas recombinantes correspondendo aos domínios citoplásmicos de VEGFR2, PDGFRβ, CSF-1 R e c-Kit foram obtidas através de purificação a partir de células de inseto Sf9 infectadas com um vetor de expressão de baculovírus recombinante VEG- FR2-, PDGFRβ, CSF-1 R e c-Kit. Para cada ensaio, o composto do Exemplo 1 {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina foi serialmente diluído em DIVISO e então misturado com um tampão de reação de cinase apropriado mais ATP (a concentração de ATP usada estava na ou um pouco abaixo do respectivo valor Km). A proteína cinase e um substrato de peptídeo biotinila- do apropriado foram adicionados para dar um volume final de 50-100 mL. As reações foram incubadas por 1-3 horas em temperatura ambiente e então paradas através da adição de 25-50 pL de EDTA a 45 mM, Hepes a 50 mM, pH 7,5. A mistura de reação parada (75 μL) foi transferida para uma placa de microtitulação revestida com estreptavidina (Boehringer Mannheim) e incubada por 1 hora. Produto de peptídeo fosforilado foi medido com o sistema de fluorescência resolvida no tempo DELFIA (Wallac ou PE Bioscience), u- sando um anticorpo antifosfotirosina marcado com Európio PT66 com a modificação que o tampão de ensaio DELFIA foi suplementado com MgCI2 a 1 mM para a diluição do anticorpo. Fluorescência resolvida no tempo foi lida em um fluorômetro DELFIA 1232 ou uma leitora de sinal múltiplo PE Victor II. A concentração de cada composto para 50% de inibição (IC5o) foi calculada empregando regressão não-linear usando software de análise de dados XL Fit. VEGFR2 cinase (0,05 pg/mL) foi ensaiada em Hepes a 50 mM pH 7,0, MgCI2 a 0,2 mM, MnCI2 a 10 mM, NaF a 1 mM, ditiotreitol a 1 mM (DTT), 1 mg/mL de albumina de soro bovino (BSA), 1 a 30 μM de ATP e 0,25 μM de substrato de peptideo biotinilado "GGGGQDGKDYIVLPI" (SEQ IDNO:1).

Para o ensaio de PDGFR cinase, 120 μg/mL de enzima com as mesmas condições de tampão que acima foram usados exceto pelo carregamento de ATP e concentrações de substrato de peptídeo para 1,4 μM ATP e 0,25 μM de substrato de peptídeo biotinilado "GGGGQDGKDYIVLPI" (SEQ ID NO:1).

A atividade de cinase de CSF-1R foi ensaiada em tampão de ensaio (HEPES a 50 mM, pH 7,0, MgCI2 a 5 mM, MnCI2 a 10 mM, BSA a 0,1%, DTT a 1 mM, Tween a 0,01%, pH final 7,5), ATP a 1 μM e substrato de peptídeo biotinilado a 50 nM "EEEEAYGWLNF" (SEQ ID NO:2).

A atividade de cinase de c-Kit foi medida provendo ATP e a pro- 15 teína recombinante correspondendo ao domínio citoplásmico do receptor de c-Kit (obtido de Proquinase). A proteína c-Kit cinase (2 nM) e o substrato de peptídeo biotinilado (1 μM) "GGLFDDPSWNVQNL" (SEQ ID NO:3) foram adicionados em tampão de reação mais ATP (8 μM) para dar um volume final de 100 μL. O tampão de reação para c-Kit era HEPES a 50 mM, pH 7,5, 20 NaF a 1 mM, MgCl2 a 2 mM, MnCI2 a 10 mM e 1 mg/mL de BSA. A reação foi incubada por 2 horas em temperatura ambiente e parada através da adição de 50 μL de EDTA a 45 mM, HEPES a 50 mM, pH 7,5. A mistura de re-ação parada (75 μL) foi transferida para uma placa de microtitulação revestida com estreptavidina (Boehringer Manneheim) e incubada por 1 hora. Pro- 25 duto de peptídeo fosforilado foi medido com sistema de fluorescência resolvida no tempo DELFIA (Wallac ou PE Bioscience), usando um anticorpo anti- fosfotirosina marcado com Európio, PT66, com a modificação que o tampão de ensaio DELFIA foi suplementado com MgCI2 a 1 mM para a detecção de anticorpo. Valores de fluorescência resolvida no tempo foram determinados 30 em um fluorômetro Wallac 1232 DELFIA ou uma leitora de sinal múltiplo PE Victor II. A concentração do composto do Exemplo 1 para 50% de inibição (IC50) foi calculada empregando regressão não-linear usando software de análise de dados XL Fit. Resultados: Conforme mostrado abaixo na TABELA 8, o com posto do Exemplo 1 é um inibidor potente de VEGFR-2, c-Kit, PDGFR-β e CSF-1R. TABELA 8: Inibição de tirosina cinases com o composto do Exemplo 1

Ensaios baseados em célula foram também usados para medir a atividade do composto do Exemplo 1 contra as moléculas direcionadas mos-tradas na TABELA 8 como segue.

Modulação direcionada em células HMVEC após tratamento com o composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosforilação de VEGFR-2 mediada por VEGF com uma EC5o de 0,03 μM, conforme medido através de uma diminuição em fosfo-VEGFR através de Western blot (não mostrado).

Análise de inibição de c-Kit em células Mo7e após tratamento com composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosforilação de c-Kit com uma EC50 de 1,1 μM conforme medido através de uma diminuição em fosfo- c-Kit através de ELISA.

Análise de inibição de PDGFR-β em células MG63 após tratamento com composto do Exemplo 1 mostrou inibição de fosfo-PDGFR-β com uma EC5o de 0,7 μM conforme medido através de uma diminuição em fosfo-PDGFR-β através de ELISA, Exemplo 88

Inibição de Anqioqênese

Para investigar mais o efeito do composto do Exemplo 1 contra VEGFR-2, o composto foi avaliado em um modelo de angiogênese CHO- VEGF Matrigel.

Métodos: 110 camundongos Nu/Nu (n=10/grupo) foram aclimatados uma semana antes do início do estudo. No dia 1, 5 x 106 células

VEGF-CHO em 0,5 mL de Matrigel foram subcutaneamente injetadas no abdômen superior dos camundongos. No dia 1, os camundongos receberam doses orais ou de veículo, 10 mg/kg, 30 mg/kg ou 100 mg/kg do composto do Exemplo 1 em um programa de dosagem de qdx5. Após cinco dias o 5 chumaço de Matrigel foi removido do camundongo e a concentração de he-moglobina nele foi quantificada. Resultados:

A Figura 13 é um gráfico mostrando a inibição de angiogênese mediada por VEGF em um modelo de CHO-VEGF Matrigel após tratamento 10 com 10 mg/kg, 30 mg/kg e 100 mg/kg do composto do Exemplo 1. Conforme mostrado na Figura 13, a dosagem do composto durante 5 dias inibiu signifi- cantemente angiogênese mediada por VEGF. Exemplo 89 Efeitos de Programa de Dosagem Estudos de programa de dosagem do composto do Exemplo 1 foram feitos no modelo de xenoenxerto de melanoma humano A375M para avaliar a relação entre a inibição de B-Raf mutante, resposta de tumor e concentração de composto no plasma.

Relações de dose-resposta claras foram estabelecidas no mode- 20 lo A375M com o composto do Exemplo 1, conforme mostrado na Figura 7A. Os dados na Figura 7A indicam que o composto do Exemplo 1 induz regressão de tumor em 100 mg/kg quando dado diariamente, e regressão de tumor está associada com inibição sustentada de B-Raf mutante (conforme mostrado através da diminuição em fosfo-MEK na Figura 7B). No entanto, neste 25 programa de dosagem, o composto do Exemplo 1 não foi bem-tolerado em camundongos nos níveis de dose de 30 mg/kg e 100 mg/kg, uma vez que os camundongos perderam uma média de 10% de seu peso do corpo de partida por volta do dia 14. Deste modo, a dosagem mais eficaz de 100 mg/kg foi avaliada mais conforme descrito abaixo. Métodos:

Como no Exemplo 84, 3 x 106 células de melanoma humano A375M foram implantadas subcutaneamente no flanco direito de camundon- gos fêmeas Nu/Nu de 10-12 semanas de vida pesando aproximadamente 24 g. Quando o volume de tumor médio atingiu aproximadamente 200 mm3, os 4 camundongos foram aleatorizados por volume de tumor em quatro grupos de nove camundongos cada e tratamento com o composto do Exemplo 1 5 iniciado. Os camundongos foram dosados através de gavagem oral por 32 dias ou com veículo sozinho ou com o composto do Exemplo 1 no regime de dosagem que segue: 100 mg/kg em um programa q2d, q3d ou q4d durante 28 dias.

Neste estudo, grupos satélites de camundongos carregando tu- 10 mor foram dosados a fim de monitorar a modulação direcionada em tumores.

Tumores e plasma foram coletados dos camundongos em vários pontos de tempo seguindo 5 doses no grupo q2d e 3 doses no grupo q4d. Os tumores foram processados para análise Western blot de níveis de fosfo-MEK conforme descrito no Exemplo 84, e plasma foi isolado para medição dos níveis 15 de fármaco. Resultados:

A Figura 14A é um gráfico mostrando a redução média em vo-lume de tumor de tumores de melanoma de A375M em camundongos quando tratados com 100 mg/kg do composto do Exemplo 1 com regime de do- 20 sagem q2d, q3d ou q4d. Conforme mostrado na Figura 14A, o composto do Exemplo 1 dosado oralmente a 100 mg/kg em um programa de q2d, q3d ou q4d resultou em eficácia significante. A análise Western blot mostrada na Figura 14B indica que os tumores nos camundongos tratados com composto diminuíram os níveis de fosfo-MEK com relação aos controles tratados com 25 veículo até 48 horas pós-dose nas amostras q2d. Nas amostras q4d, por volta de 72 horas apenas um de três tumores tinha níveis menores de fosfo- MEK e por volta de 96 horas todos os tumores tratados com composto tinham níveis de fosfo-MEK comparáveis com tumores tratados com veículo. Esses resultados estão em consonância com os resultados obtidos no pro- 30 grama q2d, mostrado na Figura 7B.

Conforme mostrado na TABELA 9, os programas q3d e q4d foram melhor tolerados nos camundongos de teste, conforme medido pela perda de peso. TABELA 9: Estudo de dosagem de xenoenxerto A375M com 100 mq/mL do composto do Exemplo 1

dos de eficácia são considerados juntos, parece que o programa q2d ou q3d resulta na regressão de tumor mais eficaz com tolerância de hospedeiro máxima. Exemplo 90

Estudos de Concentração no Plasma Alvo

Conforme acima descrito no Exemplo 89, amostras de soro fo ram tomadas de camundongos tratados com o composto do Exemplo 1. As concentrações de fármaco foram determinadas a partir das amostras de soro, e os resultados são mostrados como gráficos de concentração de composto versus tempo na Figura 15. Uma concentração de fármaco limiar para modulação alvo pode ser estimada a partir da Figura 15 considerando os dados de modulação alvo mostrados na Figura 14A e na Figura 14B. Con-forme mostrado na Figura 14B, em todos os pontos de tempo até 48 horas pós-dose, os níveis de fosfo-MEK foram reduzidos em tumores tratados com composto com relação a tumores tratados com veículo, deste modo as con- centrações de fármaco correspondentes devem estar acima deste limiar. Concluindo, o limiar do composto é estimado estar entre cerca de 50.000 e 80.000 ng/mL, tal como aproximadamente 70.000 ng/mL (135 μM).

É interessante notar que a concentração no plasma alvo nos es- tudos de xenoenxerto de camundongo descritos acima é aproximadamente 1000 vezes maior do quea EC50 para modulação direcionada em células A375M (0,16 μM) in vitro (vide TABELA 5). Esta diferença pode ser amplamente explicada por ligação de proteína no plasma porque o composto do 5 Exemplo 1 é de mais de 99,9% de proteína ligada em plasma. Levando isto em consideração, uma estimativa aproximada de concentração de fármaco livre é aproximadamente 0,135 μM, que está próximo da EC50 in vitro de 0,16 pM determinada para modulação direcionada em células A375M.

A fim de explorar mais o efeito de ligação de proteína no plasma 10 sobre a atividade do composto do Exemplo 1, uma série de experimentos in vitro foi realizada onde 0 composto foi pré-incubado em 50% de soro de camundongo, rato, cachorro, macaco ou humano, e então aplicado a células A375M ou Mo7e. Os níveis de fosfo-MEK e fosfo-ERK foram medidos em células A375M (para ensaiar inibição de B-Raf mutante) seguindo incubação 15 da noite para o dia. Níveis de fosfo-c-Kit foram medidos em células Mo7e (para ensaiar quanto à inibição de c-Kit) seguindo 4 horas de incubação. Os resultados desses ensaios são sumarizados abaixo na TABELA 10. TABELA 10: Efeito de soro de várias espécies sobre a atividade do composto do Exemplo 1

Os dados na TABELA 10 podem ser usados para avaliar a liga ção relativa dos compostos do Exemplo 1 a proteínas do plasma de espécies diferentes e como uma base para um fator de correção para extrapolar a concentração no plasma direcionada determinada em camundongos para outras espécies. Por exemplo, com base nesses dados uma pessoa estima- ria que a concentração no plasma direcionada em rato é aproximadamente 5 136 vezes menor do que em camundongos, e a concentração no plasma alvo em seres humanos é aproximadamente 10 vezes menor do que em camundongo.

Embora a modalidade preferida da invenção tenha sido ilustrada e descrita, será compreendido que várias mudanças podem ser feitas sem se afastar do espírito e escopo da invenção.

Claims (36)

1. Composto caracterizado por ser de fórmula (I):

em que, cada R1 é independentemente selecionado de hidróxi, halo, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; R2 é C1-6 alquila ou halo(C1-6 alquila); cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, C1-6 al- quilaminocarbonila, carbonitrila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloal- quilcarbonila, fenila e heteroarila; em que R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila, halo(C1-6)alquila, C1-6 alcóxi e halo(C1-6 alcóxi); a é 1,2, 3, 4 ou 5; b é 0, 1, 2 ou 3; e c é 1 ou 2; ou éster do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto ou éster.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por cada R1 ser independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluoretila, trifluormetóxi, trifluoretóxi, piperidinila, C1-6 alquilpiperidinila, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridini- la e pirimidinila.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a ser 1 ou 2 e pelo menos um R1 ser halo(C1-6 alquila).

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por pelo menos um Ri ser trifluormetila.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R2 ser C1-6 alquila.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R2 ser metila ou etila.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por R2 ser metila.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por b ser 0 e R3 não estar presente.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por b ser 1 e R3 ser C1-6 alcóxi.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por R3 ser metóxi.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por c ser 1 ou 2 e pelo menos um R4 ser halo(C1-6 alquila).

12. Composto, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por pelo menos um R4 ser trifluormetila.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por apresentar a fórmula (II):

em que cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R3 é independentemente selecionado de halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; em que R1, R2, R3 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1-6 alquila e C1-6 alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; b é 0, 1, 2 ou 3; e c é 1 ou 2; ou éster do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto ou éster..

14. Composto caracterizado por ser de fórmula (III):

em que cada R1 é independentemente selecionado de C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, hidróxi, halo, (C1-6 alquil)sulfanila, (C1-6 alquil)sulfonila, cicloalquila, heterocicloalquila, fenila e heteroarila; cada R4 é independentemente selecionado de hidróxi, C1-6 alquila, C1-6 alcóxi, halo, carboxila, (C1-6 alcóxi)carbonila, aminocarbonila, carboni- trila, cicloalquila, heterocicloalquila, heterocicloalquilcarbonila, fenila e heteroarila; em que R1 e R4 podem ser opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente selecionados de hidróxi, halo, C1- 6alquila e C1-6alcóxi; a é 1,2, 3, 4 ou 5; e c é 1 ou 2; ou éster do mesmo ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto ou éster.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por cada R1 ser independentemente selecionado do grupo consistindo em hidróxi, cloro, flúor, bromo, metila, etila, propila, butila, metóxi, etóxi, propóxi, butóxi, trifluormetila, trifluoretila, trifluormetóxi, trifluoretóxi, piperidinila, C1-6 alquilpiperidinila, piperazinila, C1-6 alquilpiperazinila, tetraidrofuranila, piridini- la e pirimidinila.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por a ser 1 ou 2 e pelo menos um R1 ser halo(C1-6 alquila).

17. Composto, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por pelo menos um R1 ser trifluorometila.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por a ser 1.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por R1 ser trifluorometila.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por c ser 1 ou 2 e pelo menos um R4 ser halo(C1-6 alquila).

21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por pelo menos um R4 ser trifluorometila.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por c ser 1.

23. Composto caracterizado por ser selecionado do grupo consistindo em: {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina, (2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-il-óxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Cloro-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Flúor-3-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetóxi-fenil)-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(3- trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol-2-il)- amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-(1-metil-5-{2-[5-metil-4-(4- trifluormetil-fenil)-1 H-imidazol-2-il]-piridin-4-ilóxi}-1H-benzoimidazol-2-il)- amina, Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1 H-imidazol-4- carboxílico, (2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1-metil-1 H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1 H-imidazol-4-il)-metanol, 2-{4-[1-Metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)-1 H-benzoimidazol-5- ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila, (3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-fenil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina, (3-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, [4-Flúor-3-(tetraidro-furan-3-il)-fenil]-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil- 1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Bromo-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Flúor-3-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetilsulfanil-fenil)-amina, (2-Flúor-5-isopropil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-1 H-imidazol-2- il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-piridin-3-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, 2-{4-[2-(2-Flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1 -metil-1 H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carbonitrila, (2-Cloro-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (5-terc-Butil-2-cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-piridin-4-il-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil- 1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil- 1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1-Metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (3-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(4-fenil-5-trifluormetil-1 H-imidazol- 2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-5-trifluormetlil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina; (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-5-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-terc-Butil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(3-trifluormetil-fenil)-amina, (5-terc-Butil-2-flúor-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-metil-4-fenil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, [4-(4-Metil-piperazin-1 -il)-fenil]-{1 -metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, Metil éster do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico, Etil éster do ácido 2-{4-[2-(2-cloro-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-5-trifluormetil-1 H-imidazol-4- carboxílico, (2-Flúor-4-trifluormetil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H- imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2-Cloro-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (2,5-Dimetóxi-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, (3,5-Dimetóxi-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {1 -Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo- imidazol-2-il}-(2-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Etil-fenil)-{1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin- 4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-amina, (4-Etil-piperazin-1-il)-(2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil-fenilamino)-1- metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona, (2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[2-(2-flúor-5-trifluormetil- fenilamino)-1-metil-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4- carboxílico, {1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(2-flúor-5-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Flúor-5-trifluormetil-fenil)-{6-metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil- 1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-amina, {6-Metóxi-1-metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4- ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, (4-Etil-piperazin-1-il)-(2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil-fenilamino)- 1H- benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-il)-metanona, {1 -Etil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo-imidazol-2-il}-(4-trifluormetil-fenil)-amina, (2-Hidróxi-etil)-amida do ácido 2-{4-[1-metil-2-(4-trifluormetil- fenilamino)-1 H-benzoimidazol-5-ilóxi]-piridin-2-il}-3H-imidazol-4-carboxílico, 2-{1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzo- imidazol-2-ilamino}-5-trifluormetil-fenol, e 3-{1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H- benzoimidazol-2-ilamino}-6-trifluormetil-fenol; ou um, éster, metabólito ou pró-fármaco do mesmo ou um sal farmaceutica- mente aceitável do composto, .

24. Composto, de acordo com a reivindicação 23, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo caracterizado por o composto apresentar a fórmula:

25. Composição caracterizada por compreender um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável conforme definido na reivindicação 1 ou 24, junto com um veículo farmaceuticamente aceitável.

26. Uso de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável conforme definido na reivindicação 1 ou 24, caracterizado por ser na fabricação de uma composição para tratamento de um distúrbio de câncer em um indivíduo humano ou animal.

27. Uso, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por para o tratamento de câncer ser utilizado pelo menos um agente adicional selecionado a partir de irinotecan, topotecan, gemcitabina, 5-fluoruracila, leucovorin carboplatina, cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclofosfamida, vinca alcalóides, imatinib, antraciclinas, rituximab e trastuzumab.

28. Uso, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por o distúrbio de câncer ser melanoma.

29. Uso, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por o distúrbio de câncer ser câncer de mama ou câncer de próstata.

30. Uso de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável conforme definido na reivindicação 1 ou 24, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.

31. Uso de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido na reivindicação 1 ou 24, caracterizado por ser na fabricação de uma composição para tratamento de um distúrbio de câncer em um indivíduo humano ou animal, em que a dita composição inibe pelo menos uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo ou tratamento de uma condição biológica mediada por uma serina/treonina cinase no curso de sinalização de MAPK em um indivíduo.

32. Uso, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado por a condição biológica ser selecionada do grupo consistindo em melanoma, câncer da tireóide papilar, câncer ovariano, câncer de cólon, câncer pan- creático, câncer de pulmão e leucemia.

33. Uso, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado por a composição compreender {1-Metil-5-[2-(5-trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)- piridin-4-ilóxi]-1H-benzoimidazol-2-il}-(4-trifluormetilfenil)-amina ou um sal farmaceuticamente aceitável.

34. Uso de um composto, ou sal farmaceuticamente aceitável conforme definido na reivindicação 1 ou 24, caracterizado por ser na fabricação de uma composição para tratamento de um distúrbio de câncer, em que a dita composição inibe um receptor tirosina cinase em um indivíduo ou tratamento de uma condição biológica mediada pelo receptor tirosina cinase em um indivíduo, em que o receptor tirosina cinase é selecionado do grupo consistindo em VEGFR-2, FGFR-3, c-Kit, PDGFR- β e CSF-1R.

35. Uso, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato da condição biológica ser selecionada do grupo consistindo em leucemia de célula mastóide, eritroleucemia, tumores de célula germe, carcinoma pulmonar de célula pequena, tumores estromais gastrintestinais, leucemia mielógena aguda, neuroblastoma, melanoma, mieloma múltiplo, carcinoma ovariano e carcinoma de mama.

36. Uso, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato da composição para tratamento de câncer compreender {1-Metil-5-[2-(5- trifluormetil-1 H-imidazol-2-il)-piridin-4-ilóxi]-1 H-benzoimidazol-2-il}-(4- trifluormetilfenil)-amina ou um sal farmaceuticamente aceitável.

Images