BRPI0616877A2 - copolìmero em bloco biocompatìvel, micela, particulado, compósito, composição farmacêutica, método para fabricar uma micela, particulado ou compósito, e, uso de um copolìmero em bloco biocompatìvel - Google Patents

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Ryoichi Katakai
Kazuhiro Kohama
Yoshiki Suzuki
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Abstract

COPOLìMERO EM BLOCO BIOCOMPATìVEL, MICELA, PARTICULADO, COMPóSITO, COMPOSIçãO FARMACêUTICA, MéTODO PARA FABRICAR UMA MICELA, PARTICULADO OU COMPóSITO, E, USO DE UM COPOLIMERO EM BLOCO BIOCOMPATIVEL. Descreve-se um copolímero em bloco biocompatível tendo um segmento hidrofóbico composto de um aminoácido e um ácido hidroxicarboxílico e um segmento hidrofihico composto de um óxido de polialquileno. Neste copolímero em bloco biocompatível, uma extremidade do segmento hidrofóbico, que não é ligada com o segmento hidrofihico, é composta de uma unidade de aminoácido.

Description

"COPOLÍMERO EM BLOCO BIOCOMPATÍVEL, MICELA,P ARTICULADO, COMPÓSITO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA,MÉTODO PARA FABRICAR UMA MICELA, PARTICULADO OUCOMPÓSITO, E, USO DE UM COPOLÍMERO EM BLOCOBIOCOMPATÍVEL"
CAMPO TÉCNICO
A presente invenção refere-se a um copolímero em blocobiocompatível tendo um segmento hidrofóbico composto de aminoácido eácido hidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico composto de óxido depolialquileno, uma micela, particulado ou compósito que é composto docopolímero em bloco biocompatível e uma droga, uso dos mesmos, umacomposição farmacêutica compreendendo os mesmos, e um método defabricação dos mesmos. Esta micela, particulado ou compósito permite asolubilização, dispersão, estabilização, liberação prolongada e distribuição aum sítio focai de uma droga.
FUNDAMENTOS DA TÉCNICA
Uma droga produz seu efeito quando alcança seu sítio ativo invivo. Existem vários fatores em que a droga não pode alcançar seu sítio ativo.Por exemplo, (1) a droga é dificilmente solúvel em um fluido corporal, (2) éinstável em condições fisiológicas como uma enzima, pH e outros, (3) nãopode passar através de uma barreira membranosa como endotélio ou mucosa,(4) causa uma reação imune indesejada, (5) desaparece ou é excretado dosangue rapidamente; e (6) é desprovido de capacidade de marcação para umsítio alvo.
Como resultados causados por estes, ocorrem os seguintesproblemas. Por exemplo, (1) é difícil preparar uma solução de injeção, (2) aadministração oral de um medicamento proteináceo é difícil, (3) a distribuiçãode uma droga em um tecido canceroso, tecido do cérebro ou nervo éinsatisfatória, (4) a absorção mucosal de uma droga hidrofílica é insatisfatória,(5) a biodisponibilidade de uma droga hidrofóbica é insatisfatória, (6) citocinadesaparece no sangue muito rapidamente, e (7) existe uma falta de capacidadede transferência a um sítio alvo.
Para resolver os problemas acima, várias abordagens forampropostas. Por exemplo, (1) a formação de uma forma ligada de um compostopolimérico hidrofílico e uma droga proteinácea, (2) a formação de uma formaligada de uma substância de transporte passiva e uma droga, (3) aencapsulação de uma droga hidrofílica em um lipossoma, (4) a encapsulaçãode uma droga em um particulado polimérico biodegradável nanométrico oumicrométrico, e (5) a formação de uma micela polimérica a partir de umasubstância polimérica anfifílica e uma droga. No entanto, uma soluçãouniversal para todos os problemas relacionados à distribuição de uma droganão foi encontrada ainda.
Um exemplo de polímero biodegradável é poliaminoácido emque as cadeias principais estão interconectadas por uma ligação amida. Noentanto, a ligação amida forma fortemente uma ligação hidrogênio entremoléculas ou na molécula para formar uma estrutura de ordem superiorestável. Assim, para decompor uma poliamida por degradação, a estrutura deordem superior suportada por esta forte ligação hidrogênio deve ser rompida,e revelou-se que a poliamida não pode ser completamente decomposta excetoum material racêmico tendo uma estrutura instável e um poliaminoácidoespecial tendo uma cadeia lateral polar ionizada (fazer referência a M. Asano,M. Yoshida, I. Kaetsu, K. Nakai, H. Yamanaka, H. Yuasa, K. Shiba, K.Susuki, M. Oya, Mikromol. Chem., (1983), 84: 1761).
Como um exemplo de um polímero para distribuir uma drogabiodegradável, cita-se um ácido poliidróxi obtido pela condensação de ésterde um ácido hidroxicarboxílico tendo um grupo hidroxila e um grupocarboxila na molécula. Uma vez que a ligação éster não tem nenhum átomode hidrogênio no ácido poliidróxi, torna-se claro que uma ligação hidrogênionão é produzida na ligação éster e que ácido poliidróxi é biodegradado maisfacilmente do que poliaminoácido. Além disso, um método para polimerizarum ácido hidroxicarboxílico, usando um ácido hidroxicarboxílico e água semum catalisador, foi desenvolvido. Quando um polímero obtido porpolicondensação de um oligômero sem a inclusão do resíduo de catalisador éusado em um sistema de distribuição de drogas, não há nenhumapossibilidade de induzir uma reação de corpo estranho como comparado comum polímero que é formado usando um catalisador de metal, e o polímeropode ser facilmente moldado devido à fraca interação entre moléculas. Assim,o polímero é um material preferido no sistema de distribuição de drogas. Oácido poliidróxi tem uma taxa de biodegradação mais alta à medida que seupeso molecular torna-se mais baixo. Particularmente, ácido poli-DL-láctico debaixo peso molecular é usado como um sistema de distribuição de drogaspreferido (M. Asano5 H, Fukuzaki, M. Yoshida, M. Kumakura, T. Mashimo,H. Yuasa, K. Imai, H. Yamanaka, K. Suzuki, J. Controlled Release (1989) 9:111, M. Asano, H. Fukuzaki, M. Yoshida, M. Kumakura, T. Mashimo, H.Yuasa, K. Imai, H. Yamanaka, Biomaterials, (1989) 10: 569, e T. Mashimo,H. Yuasa, K. Imai, H. Yamanaka, M. Asano, M. Yoshida, M. Kumakura, KitaKanto Igaku (North Kanto Medicai Science) 41, (1991) 311).
Entretanto, uma micela polimérica é basicamente umananopartícula que tem um segmento hidrofílico como o envoltório externo eum segmento hidrofóbico como o núcleo interno, e um grande número demicelas poliméricas foram descritas como veículos para a solubilização,estabilização, liberação e distribuição prolongadas de uma droga. Porexemplo, um veículo de droga que é um copolímero em bloco consistindo deum segmento hidrofílico como óxido de polialquileno e um segmentohidrofóbico como aspartato de polialquila (fazer referência a JP-A 06-107565,JP-A 06-206830, JP-A 06-206832, JP-A 11-100331, JP-A 2001-226294, JP-A2003-342167, JP-A 2004-010479, JP-A 2004-352972, JP-A 2005-029480, JP-B 2005-501831 e W003/000771), um particulado de um copolímero embloco consistindo de um segmento hidrofílico como poliaminoácidohidrofílico e um segmento hidrofóbico como polilactídeo (referir-se a JP-A11-269097), um copolímero em bloco compreendendo um segmentohidrofílico como polietileno glicol e um segmento carregado como poliaminaou ácido policarboxílico (fazer referência a JP-A 08-188541, JP-A 2001-146556, JP-A 2005-008614 e JP-B 2001-525357), um método para prepararuma micela polimérica contendo uma droga facilmente solúvel em água (fazerreferência a JP-A 11-335267, JP-A 2003-012505, JP-A 2003-026566, JP-A2003-026812, JP-A 2003-342168, JP-B 2003-532688 e W002/026241) foramdescritos.
No entanto, não há nenhuma descrição de um copolímero embloco biocompatível tendo um segmento hidrofóbico composto deaminoácido e ácido hidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico compostode óxido de polialquileno e a formação de uma micela, particulado ecompósito compreendendo o copolímero em todos os documentos acima.
Além disso, um copolímero depsipeptídeo obtido porpolimerização de 3-substituição-2,5-morfolinodiona e lactona cíclicaopticamente ativas, um dispositivo cirúrgico biologicamente absorventefabricado a partir de polidepsipeptídeo (referir-se a JP-A 7-188411) e umaamida de éster de polilactona biodegradável tendo uma unidade de poliamidaespecífica, uma unidade de poliéster específica e uma unidade de polilactonaespecífica (fazer referência a JP-A 11-35679) foram descritos como plásticosbiodegradáveis compreendendo aminoácido e ácido hidroxicarboxílico. Sabe-se que um polímero compreendendo depsipeptídeo e ácido polilácticoespecíficos tem excelente biodegradabilidade e pode melhorar a flexibilidadeenquanto retendo resistência (fazer referência a JP-A 2001-31762) e que ocopolímero biodegradável obtido por polimerização de anel de lactídeo e s-caprolactona tendo pelo menos um substituinte reativo selecionado dentre ogrupo consistindo de um grupo hidroxila, grupo amino e grupo carboxila temalta moldabilidade e funcionalidade à base de seu uso (fazer referência a JP-A2002-234934). Um dos inventores da presente invenção descreve um métodopara sintetizar depsipeptídeo e um produto sintético (fazer referência a JP-A2004-269462).
No entanto, não se encontra nenhuma descrição de umcopolímero em bloco biocompatível tendo um segmento hidrofóbicocomposto de aminoácido e ácido hidroxicarboxílico e um segmentohidrofílico composto de óxido de polialquileno e da formação de uma micela,particulado e compósito compreendendo o copolímero em todos osdocumentos de JP-A 7-188411, JP-A 11-35679, JP-A 2001-31762, JP-A2002-234934 e JP-A 2004-269462.
Além disso, um copolímero em bloco tridimensional é descritocomo um plástico biodegradável consistindo de um bloco composto deaminoácido e ácido hidroxicarboxílico e um bloco composto de polialquilenoglicol (fazer referência à publicação de W02005/003214).
No entanto, também não se encontra nenhuma descrição de umcopolímero em bloco biodegradável tendo um segmento hidrofóbicocomposto de aminoácido e ácido hidroxicarboxílico e um segmentohidrofílico composto de óxido de polialquileno e a formação de uma micela,particulado e compósito compreendendo o copolímero na publicação deW02005/003214.
DESCRJÇÃO DA INVENÇÃO
É um objeto de a presente invenção prover um copolímero embloco biocompatível que pode eliminar os seis fatores acima em que umadroga não pode alcançar seu sítio ativo e tem afinidade para uma droga.
É um outro objeto da presente invenção prover um copolímeroem bloco biocompatível tendo uma ligação éster que é facilmente rompida invivo e uma ligação amida que é dificilmente rompida, não mostrandonenhuma antigenicidade, cuja afinidade para uma droga pode ser ajustada porcontrole dos tipos, números e seqüências de aminoácidos e ácidoshidroxicarboxílicos.
É ainda um outro objeto da presente invenção prover umamicela, particulado ou compósito que compreende o copolímero em blocobiocompatível acima e uma droga e possibilita a solubilização, dispersão,estabilização, liberação e distribuição prolongadas da droga em um sítiorequerido in vivo.
É ainda um outro objeto da presente invenção prover ummétodo de fabricação de a micela, particulado ou compósito acima de modovantajoso.
Outros objetos e vantagens da presente invenção serãoevidentes a partir da seguinte descrição.
De acordo com presente invenção, primeiramente, os objetos evantagens acima da presente invenção são atingidos por um copolímero embloco biocompatível tendo um segmento hidrofóbico composto deaminoácido e ácido hidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico compostode óxido de polialquileno, em que o término não ligado ao segmentohidrofílico do segmento hidrofóbico é composto de uma unidade deaminoácido.
De acordo com a presente invenção, em segundo lugar, osobjetos e vantagens acima da presente invenção são atingidos por uma micelacompreendendo o copolímero em bloco biocompatível da presente invenção euma droga.
De acordo com a presente invenção, em terceiro lugar, osobjetos e vantagens acima da presente invenção são atingidos por umparticulado ou compósito (excluindo uma micela) compreendendo ocopolímero em bloco biocompatível da presente invenção e uma droga.
De acordo com a presente invenção, em quarto lugar, osobjetos e vantagens acima da presente invenção são atingidos por umacomposição farmacêutica compreendendo a micela, particulado ou compósitoda presente invenção.
De acordo com a presente invenção, em quinto lugar, osobjetos e vantagens acima da presente invenção são atingidos por um métodode fabricação de uma micela ou compósito compreendendo uma droga,compreendendo a etapa de misturar juntos um copolímero em blocobiocompatível tendo um segmento hidrofóbico composto de aminoácido eácido hidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico composto de óxido depolialquileno e uma droga em água.
De acordo com a presente invenção, finalmente, os objetos evantagens acima da presente invenção são atingidos por um método defabricação de uma micela, particulado ou compósito, compreendendo asetapas de preparar uma mistura de um copolímero em bloco biocompatíveltendo um segmento hidrofóbico composto de aminoácido e ácidohidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico composto de óxido depolialquileno, uma droga e um solvente, e remover o solvente da mistura.
MELHOR MODO PARA REALIZAR A INVENÇÃO
O copolímero em bloco biocompatível da presente invençãotem um segmento hidrofóbico e um segmento hidrofílico. Neste texto, otermo "biocompatível" significa a propriedade de tornar-se compatível comum tecido vivo e não danificar um corpo vivo após ser administrado aointerior do corpo vivo. Por exemplo, mesmo quando ele é destrutivãmentemetabolizado ou não decomposto in vivo, é secretado para fora do corpo nofinal. Neste texto, o termo "biodegradável" significa a propriedade de serdestrutivamente metabolizado em um tecido vivo e não danificar um corpovivo após ser administrado ao interior do corpo vivo. Por exemplo, ele édestrutivamente metabolizado in vivo e excretado para foram do corpo nofinal. Neste texto, "segmento hidrofóbico" significa um polímerobiodegradável ou um derivado do mesmo que é dificilmente solúvel ouinsolúvel em água e é um segmento mais hidrofóbico do que hidrofílico dopolímero de alto peso molecular como o outro componente formando ocopolímero em bloco. Neste texto, o termo "segmento hidrofílico" significaum polímero de peso molecular elevado ou um derivado do mesmo que éhidrofílico para o segmento hidrofóbico do copolímero em bloco mesmoquando é dificilmente solúvel em água. Neste texto, o termo "micela"significa uma partícula tendo uma porção de núcleo interna e uma porção deenvoltório externo que diferem uma da outra na composição. Neste texto, otermo "particulado" significa partículas que têm um diâmetro de partículamédio de 300 μm ou menos, não têm porções de núcleo interno e deenvoltório externo bem definidas e contêm uma droga dispersa quaseuniformemente no copolímero em bloco. Neste texto, o termo "compósito"significa um compósito que não tem porções de núcleo interno e de envoltórioexterno bem definidas e é formado pela interação entre moléculas da droga oucristais da droga e o copolímero em bloco. Neste texto, o termo "ligando"significa todas as moléculas que se ligam especificamente a uma moléculaalvo específica para formar um compósito ligado e uma porção líder dirigida aum alvo.
O copolímero em bloco biocompatível da presente invençãoconsiste de um bloco biodegradável composto de aminoácido e ácidohidroxicarboxílico como um segmento hidrofóbico e um bloco biocompatívelde óxido de polialquileno como um segmento hidrofílico. Maisespecificamente, ele é um copolímero em bloco tendo o segmento hidrofílicocovalentemente ligado ao término do segmento hidrofóbico biodegradável.
Estes segmentos podem ser ligados juntos diretamente ou por um espaçadortendo um grupo de copulação. Este copolímero em bloco é, por exemplo, umcopolímero em bloco biocompatível representado pela seguinte fórmula (1):<formula>formula see original document page 10</formula>
em que R1 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila, grupoalquila substituído ou grupo de proteção para grupo amino, R2 é a cadeialateral de aminoácido natural ou grupo derivado do mesmo, R3 é um átomo dehidrogênio, grupo alquila ou grupo alquila substituído, R4 é um átomo dehidrogênio ou grupo metila, R5 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila,grupo alquila substituído, resíduo de ligando, resíduo de ligando tendo umgrupo de copulação, ou grupo representado por
<formula>formula see original document page 10</formula>
η é um inteiro de 1 a 20, k é um inteiro de 1 a 6, m é um inteirode 1 a 20, ρ é um inteiro de 1 a 20, q é um inteiro de 0 a 20, e r é um inteiro de2 a 870.
Segmento Hidrofóbico
O segmento hidrofóbico do copolímero em bloco usado napresente invenção é um composto compreendendo aminoácido e ácidohidroxil carboxílico como mostrado pela fórmula (1) acima. O aminoácido emuso não é particularmente limitado se for biodegradável ou biocompatível.Não somente L-a-aminoácido natural, mas também DL-a-aminoácido, D-a-aminoácido, aminoácido sintético e derivados nas cadeias laterais destesaminoácidos podem ser usados. Exemplos específicos de aminoácido incluemglicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano,serina, treonina, prolina, hidroxiprolina, cisteína, metionina, ácido glutâmico,ácido aspártico, lisina, arginina, histidina, hidroxilisina, 4-hidroxiprolina,homoprolina, norvalina, norleucina, α-t-butilglicina, ciclo-hexilglicina,asparagina, glutamina e β-ciclo-hexilalanina. Dentre estes, glicina, alanina,valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, ácido glutâmico,ácido aspártico, lisina e arginina são preferidos. Além disso, dentre estes,alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, ácido glutâmico, ácidoaspártico, lisina e arginina são particularmente preferidos. O ácidohidroxicarboxílico em uso não é particularmente limitado se forbiodegradável ou biocompatível. Não somente ácido a-hidroxicarboxílico,mas também outros ácidos hidroxicarboxílicos podem ser usados. Exemplosespecíficos de ácido hidroxicarboxílico incluem ácido glicólico, ácido láctico,ácido hidroxibutírico, ácido hidroxivalérico, ácido hidroxicapróico e ácidohidroxicáprico. Dentre estes, ácido glicólico e ácido láctico sãoparticularmente preferidos.
Depsipeptídeo
O segmento hidrofóbico do copolímero em bloco usado napresente invenção pode ser um composto depsipeptídeo compreendendo a-aminoácido e ácido α-hidroxicarboxílico. O α-aminoácido em uso não éparticularmente limitado se for biodegradável ou biocompatível. Não somenteL-a-aminoácido, mas também DL-a-aminoácido, D-a-aminoácido eaminoácido sintético podem ser usados. Exemplos específicos de a-aminoácido incluem α-aminoácidos e derivados nas cadeias laterais de a-aminoácidos dentre os aminoácidos acima. O ácido α-hidroxicarboxílico emuso não é particularmente limitado se for biodegradável ou biocompatível.
Dentre os ácidos hidroxicarboxílicos acima, ácido glicólico e ácido láctico,que são ácidos α-hidróxi carboxílicos, são particularmente preferidos.
Capacidade de hidrolisação de depsipeptídeo e possibilidade de evitarantigenicidade
Um depsipeptídeo tem uma ligação amida e uma ligação ésterna molécula. Sua porção da ligação amida forma uma ligação hidrogênioentre moléculas para formar uma forte ligação intermolecular como ele temum átomo de hidrogênio enquanto sua porção de ligação éster não podeformar uma ligação hidrogênio entre moléculas e é relativamente facilmentehidrolisável porque não tem um átomo de hidrogênio. Assim, umdepsipeptídeo tendo uma ligação éster na cadeia da ligação amida éprontamente decomposto in vivo e sua taxa de decomposição pode sercontrolada pelo tipo e número de aminoácidos e pelo tipo e número de ácidoshidroxicarboxílicos e a seqüência compreendendo os aminoácidos e ácidoshidroxicarboxílicos. Apesar da antigenicidade de um poliaminoácido serfreqüentemente controversa, considera-se que um peptídeo tendo 5 ou menosaminoácidos raramente mostra antigenicidade. E possível realizar um desenhomolecular de modo a assegurar que um depsipeptídeo não mostraantigenicidade. Os polidepsipeptídeos mostram propriedades físicas equímicas completamente diferentes de acordo com o tipo e comprimento daseqüência de aminoácidos e o tipo de ácidos hidroxicarboxílicos constituindocada polidepsipeptídeo. Uma seqüência de tetradepsipeptídeo tendo 3aminoácidos e um ácido hidroxicarboxílico difere completamente de umaseqüência de tridepsipeptídeo tendo dois aminoácidos e um ácidohidroxicarboxílico em solubilidade de solvente, a estabilidade de umaestrutura secundária e capacidade de formação de micela. Além disso,polidepsipeptídeos tendo propriedades diferentes podem ser sintetizadostrocando-se o tipo de aminoácidos e o tipo de ácidos hidroxicarboxílicos.
Um polidepsipeptídeo tendo 3 a 5 aminoácidos e 1 a 3 ácidoshidroxicarboxílicos ligados a estes é particularmente preferido.
Número de aminoácidos, número de ácidos dicarboxílicos e número derepetições de depsi's
O número (n) de aminoácidos constituindo o poliaminoácidodo segmento hidrofóbico do copolímero em bloco representado pela fórmula(1) é um inteiro de 1 a 20, preferivelmente de 1 a 10, mais preferivelmente de1 a 6. O número (q) de aminoácidos constituindo o poliaminoácido na partelateral ligada ao segmento hidrofílico do segmento hidrofóbico é um inteirode 0 a 20, preferivelmente de 0 a 10, mais preferivelmente de 0 a 6. O número(m) de hidróxi ácidos constituindo o ácido poliidróxi carboxílico do segmentohidrofóbico é um inteiro de 1 a 20, preferivelmente de 1 a 10, maispreferivelmente de 1 a 5. O número (p) de repetições da forma ligada deaminoácido - ácido hidroxicarboxílico é um inteiro de 1 a 20, preferivelmentede 1 a 10, mais preferivelmente de 1 a 5. O número (k) de grupos metileno egrupos metileno substituídos de ácido hidroxicarboxílico é um inteiro de 1 a 6.
Quando η, ρ ou q é um inteiro de 2 a 20, R2's podem ser iguaisou diferentes, quando m ou ρ é um inteiro de 2 a 20, R3's podem ser iguais oudiferentes, e quando r é 2 ou mais, R4tS podem ser iguais ou diferentes.R1 R2 e R3
O Ri terminal do segmento hidrofóbico do copolímero embloco representado pela fórmula (1) é um átomo de hidrogênio, grupo alquila,grupo alquila substituído ou grupo de proteção para grupo amino. Exemplosde grupo de proteção para grupo amino incluem grupo t-butoxicarbonila(Boc-), grupo benziloxicarbonila (Z-) e grupo 9-fluoroenilmetiloxicarbonila(Fmoc-). Ele não é particularmente limitado se for biocompatível, masparticularmente preferivelmente um grupo t-butoxicarbonila (Boc-).
R2 denota a cadeia lateral de aminoácido natural ou cadeialateral derivada (a ser referida como "grupo derivado" daqui por diante), istoé, a cadeia natural de aminoácido natural ou um de seus grupos derivados paraunidade de aminoácido independentemente. Exemplos de derivado deaminoácido tendo um grupo derivado incluem 5-derivado de ácido glutâmico,4-derivado de ácido aspártico e ε-derivado de lisina. Exemplos de 5-derivadode ácido glutâmico e 4-derivado de ácido aspártico incluem derivados tendoum grupo carboxila terminal na cadeia lateral protegida por um grupo deproteção, ésteres alquílicos como éster metílico e éster etílico, ésteres com ogrupo hidroxila de uma droga, amidas com o grupo amino de uma droga, eformas ligadas de droga tendo um espaçador. Exemplos de derivado de lisinaincluem derivados tendo um grupo amino terminal na cadeia lateral de lisinaprotegida por um grupo de proteção, amidas com o grupo carboxila de umadroga, e formas ligadas de droga tendo um espaçador. Além dos derivados dedroga, uma unidade de glutamato de 5-etila, unidade de aspartato de 4-etila eunidade de lisina tendo um grupo amino terminal protegido por um grupobenziloxicarbonila são preferivelmente usadas.
R3 denota uma cadeia lateral de um ácido hidroxicarboxílico,isto é, um átomo de hidrogênio, grupo alquila ou grupo alquila substituídopara cada ácido hidroxicarboxílico independentemente. O grupo alquila e ogrupo alquila substituído representados por R1 e R3 são cada umpreferivelmente um grupo alquila tendo 1 a 3 átomos de carbono ou um grupoalquila substituído por um substituinte. Exemplos de grupo alquila incluemgrupo metila, grupo etila, grupo propila e grupo isopropila. Exemplos desubstituinte incluem grupo metila, grupo etila e grupo propila.Segmento Hidrofílico e R4
O segmento hidrofílico de copolímero em bloco usado napresente invenção é composto de óxido de polialquileno, maisespecificamente polietileno glicol, copolímero em bloco de polietileno glicol/polipropileno glicol, ou polipropileno glicol. Polietileno glicol é maispreferido. Na fórmula (1), o número (r) de repetições de óxido de alquileno é2 a 870. Ele é preferivelmente 3 a 570, mais preferivelmente 3 a 250. R4 é um
átomo de hidrogênio ou grupo metila.R5
R5 na fórmula (1) acima é um átomo de hidrogênio, grupoalquila, grupo alquila substituído, resíduo de ligando, resíduo de ligandotendo um grupo de copulação ou grupo representado pela fórmula
Ri-[[-NHCH (R2) C0-]n-{-0[CH(R3)]kC0}m-]p-[NHCH (R2) CO-]q-(Ri, R2, R3, n, k, m, ρ e q são como definidos acima).Exemplos de ligando incluem lecitina, anticorpo, fragmentosde anticorpo (como fragmento de Fab), linfocina, citocina. proteínas dereceptores (como CD4, CD8, CD44, CD71, etc.), ácido nucleico, antígeno,hormônio, fatores de adesão (como VCAM-1, ICAM-1, PECAM-1, RGD,NGR, etc.), transferrina, ácido fólico, fatores de crescimento (como EGF,bFGF, VEGF, etc.) e os ligando-se especificamente a uma célula alvodesejada.
O copolímero em bloco da presente invenção pode serfabricado como a seguir, por exemplo.
(i) Um éster imida de aminoácido e ácido N-hidroxissuccínicotendo um grupo amino protegido são reagidos com grupos hidroxila emambos os términos de óxido de polialquileno que é um segmento hidrofílico,usando dimetil aminopiridina como um catalisador para obter óxido depolialquileno em que um aminoácido tendo grupos amino protegidos emambos os términos é ligado a éster. Os grupos protegidos amino do resíduo deaminoácido em ambos os términos são tratados com ácido clorídrico emdioxano a ser removido. Por este tratamento, óxido de polialquileno do qualos grupos de proteção foram removidos e cujos ambos os terminais eramóxido de polialquileno diaminoacilado ou monoaminoacilado em que um dosaminoácidos em ambos os terminais foi eliminado e um grupo hidroxila foiregenerado é obtido.
Um éster imida de aminoácido e ácido N-hidroxissuccínicotendo um grupo amino protegido é reagido com o grupo amino de umaminoácido terminal para obter óxido de polialquileno ligado a dipeptídeoprotegido. Um éster imida de um oligodepsipeptídeo e ácido N-hidroxissuccínico tendo um grupo aminoprotegido em um terminal e umácido hidroxicarboxílico no outro terminal é reagido com um grupo aminoformado removendo o grupo de proteção. Quando a reação deste éster deoligodepsipeptídeo protegido pelo grupo amino é repetida, um copolímero embloco tendo um segmento hidrofóbico de polidepsipeptídeo tendo umaseqüência arbitrária de aminoácidos e uma seqüência arbitrária de ácidoshidroxicarboxílicos e um segmento hidrofílico de óxido de polialquileno éobtido.
(ii) Um halogeneto de ácido hidroxicarboxílico é obtido pelaação de halogênio e tionila halogenado sobre ácido hidroxicarboxílico, e umdepsipeptídeo é obtido reagindo este com aminoácido ou poliaminoácido napresença de um álcali. Quando o aminoácido tem outros grupos funcionaisalém dos dois grupos funcionais que são um grupo amino e um grupocarboxila, é preferido ligar os outros grupos funcionais a um grupo deproteção durante a fabricação de um polidepsipeptídeo. Então, este derivadode aminoácido é aquecido na presença de um álcali para fechar o anel doderivado, tornando assim possível obter um depsipeptídeo cíclico. Odepsipeptídeo cíclico e óxido de polialquileno, óxido de polialquilenomonossubstituído ou óxido de polialquileno tendo um grupo hidroxilaprotegido são reagidos uns com os outros na presença de um catalisador comooctilato estanhoso para obter um copolímero em bloco tendo um segmentohidrofóbico composto de aminoácido e ácido hidroxicarboxílico e umsegmento hidrofílico composto de óxido de polialquileno.
O segmento hidrofóbico composto de aminoácido e ácidohidroxicarboxílico pode ser sintetizado pelo método descrito por JP-A 2004-269462 que foi depositado por um dos inventores da presente invenção. Isto é,o grupo carboxila do aminoácido tendo um grupo amino protegido é reagidocom o grupo hidroxila de ácido hidroxicarboxílico tendo um grupo carboxilanão protegido na presença de um catalisador de composto aminopiridina parasintetizar um didepsipeptídeo. O grupo carboxila do didepsipeptídeo obtido étrocado em um derivado de imida, o grupo amino protegido dodidepsipeptídeo é desprotegido, e o grupo amino desprotegido dodidepsipeptídeo é reagido com o grupo carboxila do aminoácido tendo umgrupo amino protegido para sintetizar um oligodepsipeptídeo.
Uma reação para ligar o aminoácido protegido ouoligodepsipeptídeo protegido a óxido de polialquileno pode ser realizada emum solvente apropriado que dissolve os mesmos, por exemplo, clorofórmio,dicloroetano, tetraidrofurano, acetonitrila ou acetato de etila. Após a reação, oproduto é dissolvido em diclorometano ou clorofórmio e enxaguado com umasolução aquosa de hidrogeno carbonato de sódio ou solução aquosa de ácidocítrico para remover o subproduto, o solvente é destilado, e éter é adicionadopara precipitar o produto puro e isolar o mesmo. Se necessário, o éter éadicionado a uma solução de tetraidrofurano, acetonitrila ou acetato de etilado copolímero em bloco da presente invenção para re-precipitar o copolímeroem bloco por precipitação. Esta purificação por re-precipitação é efetiva parao copolímero em bloco compreendendo um polidepsipeptídeo como umsegmento hidrofóbico. Em um polímero de polipeptídeo- óxido depolialquileno, uma ligação hidrogênio baseada na ligação amida dopolipeptídeo é fortemente formada na molécula, entre as moléculas e entre amolécula e o solvente, e é difícil de encontrar uma combinação de umsolvente e um não solvente apropriado para re-precipitação.Micela e particulado
O copolímero em bloco da presente invenção pode ser usadonão somente para formar uma micela contendo uma droga, um particuladocontendo uma droga e um compósito contendo uma droga, mas também parafabricar uma vesícula como lipossoma. De acordo com a finalidade, a micela,particulado ou compósito pode estar contida em lipossoma.
O copolímero em bloco da presente invenção pode ser usadoem combinação com uma droga. Como a droga pode ser usada um compostofisiologicamente ativo como produto natural, produto sintético, produto semi-sintético, produto de fermentação, matéria biogênica ou produto deengenharia de gene. Compostos sintéticos fisiologicamente ativos, peptídeos,proteínas, hormônios, vitaminas, enzimas, co-enzimas, ácidos graxos,gorduras, genes e derivados dos mesmos também podem ser usados.A droga pode ser insolúvel em água, dificilmente solúvel emágua, solúvel em gordura ou solúvel em água. Exemplos de droga incluemdrogas antiinflamatórias (por exemplo, drogas não esteróides como ácidomefenâmico, bufexamax e felbinac, e drogas à base de esteróides comodexametazona, prednissolona e beclometazona), desfervecentes (comoacetaminofeno, alclofenac e bufexamac), drogas analgésicas (comoaminopiridina, acetaminofen, morfina e buprenorfina), droga antiartríticas/anti-reumáticos (como auranofin, azatioprina e metotrexato), drogas antigota(como alopurinol, probenecid e sulfinpirazona), reconstituinttes cardíacos(como oxifedrina e teobromo), drogas antiangina (como alprenolol, diltiazem,dinitrato de isosorbeto e nifedipina), drogas de bloqueio beta-adrenérgico(como cloridrato de propranolol, atenolol e carvedilol), drogas antagonistas decálcio (como nifedipina, nicardipina e diltiazem), drogas antiarrítmicas (comoguinidina, verapamil e timolol), diuréticos (como furosemida e arbutina), anti-hipertensivos (como timolol, captopril, nicardipina e prazosina), drogas paramelhorar os distúrbios da circulação periférica (como prostaglandinas),drogas antitrombogênicas (como argatoroban, ozagrel e ticlopidina), drogasanti-hiperlipêmicas (como drogas à base de estatina, drogas à base de fibrato,e probucol), drogas antiplaquetas (como protaciclina), drogas vasoconstritoras(como dopamina e norepinefrina), drogas para melhorar o metabolismo dacirculação cerebral (como cloridrato de tiaprida e sulpirina), drogas anticâncer(como doxorrubicina, actinomicina, metotrexato, citarabina, cisplatina,paclitaxel e tamoxifeno), drogas imunossupressoras (como azatioprina,hidrato de tacrolimus e ciclofosfamida), drogas antialérgicos (como azelastinae pentigetida), drogas anti-histamina (como clorfeniramina, clemastina edifenilhidramina), broncodilatadores (como albuterol, isoproterenol e brometode ipratrópio), drogas antiasmáticas (como tulobuterol e clenbuterol), drogasantitussígenas (como fosfato de codeína e dextrometorfano), expectorantes(como ambroxol e carbocisteína), drogas antiúlcera (como cetraxato,ranitidina e cimetidina), antidiarreicos (como ácido acetiltânico e difenoxin),antieméticos (como difenidol e escopolamina), antidiabéticos (comosubstâncias à base de biguanida, insulina, tolbutamida e clorpropamida),drogas hipnópticas/ sedativas (como nitrapezam, flurapezam e amobarbital),drogas antiansiedade (como diazepam e oxazolam), drogas antipsicópticas(como haloperidol, perfenazina e clorpromazina), antidepressivos (comodimetazano, imipramina e sulpirida), drogas antivertigem (comodimenidrinato, cloridrato de difenidol e mesilato de betahistina), drogasantiepilepsia (como carbamazepina, fenobarbital, 5-hidroxitriptofano), drogasrelaxantes musculares (como cloreto de tubocurarina, baclofen emetocarbamol), drogas antiparkinsonismo (como amantadina e carbidopa),droga de efeito autonômico (como betanecol e neostigmina), antibióticos(como substâncias à base de aminoglicosídeos, substâncias à base decefalosporina e substâncias à base de macrolídeos), drogas antibacterianas(como substâncias à base de quinolona, substâncias à base de sulfonamida esubstâncias à base de sulfona), drogas antifungicas (como substâncias à basede alilamina, substâncias à base de imidazol incluindo substâncias à base deeconazol e triazol incluindo fluconazol), antiviral (como aciclovir, citarabinae amantadina), antihelmínticos (como aminopirina, niclosamida e quinacrina),drogas hormonais (como somatostatina, gonadotropina e LHRH), drogasevitando osteoporose e melhorando o metabolismo do osso (como vitaminaD, calcitonina e bisfosfonato), drogas de vitaminas (como tocofenol evitamina B12), hemostáticos (como ácido tranexâmico), drogas de enzima(como pronase, lisozima e serrapeptase), vacinas (como vacina de influenza evacina de cólera), anestésicos, produtos diagnósticos, drogas de contraste,drogas de teste.
A droga pode ser tanto hidrofóbico como hidrofílico. Ocopolímero em bloco da presente invenção pode formar uma micela. Ocorreum caso em que o segmento hidrofóbico existe no núcleo interno da micela eo segmento hidrofílico existe no envoltório externo da micela. Inversamente,ocorre um caso em que o segmento hidrofílico do copolímero em bloco existeno núcleo interno da micela e o segmento hidrofóbico existe no envoltórioexterno da micela. Além disso, ocorre um caso em que ambos os segmentosexistem em um veículo aleatoriamente e as micelas não tem uma estrutura dedomínio. Prefere-se selecionar uma droga hidrofóbica quando o segmentohidrofóbico existe no núcleo interno da micela e selecionar uma drogahidrofílica quando o segmento hidrofílico existe no número interno da micela.
Quando ambos os segmentos existem no particulado aleatoriamente, podemser selecionados tanto uma droga hidrofílica como hidrofóbica.
Exemplos de drogas hidrofóbicas incluem drogasantiinflamatórias não esteróides (como indometacina e naproxen), drogasantiinflamatórias esteróides (como dexametazona, valerato de dexametazona,palmitato de dexametazona, triamcinolona acetonida, acetato deparametazona, acetato de halopredona, hidrocortisona, acetato defludrocortisona, butilacetato de predonisolona, betametazona e valerato debetametazona), drogas anticâncer (como paclitaxel, camptotecina, epotosida,vinblastina, fluorouracila, metotrexro, tegafur, tegafur uracila, mitomicina C,cisplatina, carboquona, dacarbazina, mercaptopurina, actinomicina D,cloridrato de doxorrubicina e citrato de tamoxifen), analgésicos antipiréticos(como ibuprofen e buprenorfína), drogas antiasma (como azelatina, cetotifene propionato de fluticasona), antidepressivos (como oxopertina e nefopam),drogas antigota (como allopurinol, clochicina, sulfinpirazona e probenecid),drogas do CNS (como aniracetam), anti-hipertensivos (como captopril,enalapril e cloridrato de manodipina), drogas antiplaquetas (comoprostaglandinas), drogas anti-hiperlipêmicas (como clofibrato e gamaorizanol), broncodilatadores (como teofilina, cloridrato de metoxifenamina ecloridrato de tulobuterol), drogas antialérgicas (como difumarato deemedastina, tranilast e terfenadina), drogas antienurese (como caproato degestoronona), drogas antivirais (como aciclovir e ribavirina) e corantesfluorescentes (como corantes fluorescentes à base de pireno e corantesfluorescentes à base de rodamina).
Um polipeptídeo solúvel em água é usado como a drogahidrofílica. Exemplos de polipeptídeo solúvel em água incluem citocina,fatores hematopoiéticos, fatores de crescimento e enzimas. Dentre estes,citocina é preferida, como exemplificado por linfocina (como interferon a,interferon β, interferon γ, interleucinas (IL-2 a IL-12) e monocinas(interleucina-1, fatores de necrose de tumor (TNF)).
Além disso, drogas como hormônios de liberação de hormônioluteinizante e derivados ou análogos, insulina e derivados ou análogos,somatostatina e derivados ou análogos, hormônios de crescimento, hormôniosde liberação de hormônio de crescimento, prolactina, eritropoietina,hormônios do córtex adrenal e derivados ou análogos, hormônios estimulantesde melanócitos, hormônios de liberação de hormônio da tiróide e derivados ouanálogos, hormônios estimulantes da tiróide, hormônios luteinizantes,hormônios estimulantes de folículos, vasopressina e derivados, oxitocina,calcitonina e derivados ou análogos, glucagon, gastrina, secretina,pancreozimina, colecistocinina, angiotensina, lactogênio placentário humano,gonadotropina coriônica humana, encefalina e derivados ou análogos,endorfina, ciotorfina, tuftsina, timopoietina, timosina, fatores humoraistímicos, fatores tímicos de soro e derivados dos mesmos, fatores de induçãode colônias (como CSF, GCS, GMCSF, MCSF, etc.), motilina, deinorfina,bombegina, neurotensina, caerulina, bradicinina, fatores natriuréticos atriais,fatores de crescimento dos nervos, fatores de crescimento celular (como EGF,TGF-β, PDGF, FGF ácido, FGF básico, etc.), fatores neurotróficos (comoNT-3, NT-4, CNTF, GDNF, BDNF, etc.), peptídeos tendo um efeitoantagonístico de endotelina e análogos dos mesmos podem ser usados,
A droga usada na presente invenção pode estar como tal comouma matéria de fato ou pode estar em uma forma farmacologicamentepermissível. Quando a droga tem um grupo básico como um grupo amino,exemplos do sal da droga incluem sais compreendendo um ácido inorgânico(por exemplo, ácido clorídrico, ácido sulfurico, ácido nítrico ou ácido bórico)e sais compreendendo um ácido orgânico (por exemplo, ácido carbônico,ácido bicarbônico, ácido succínico, ácido acético, ácido propiônico, ácidofumárico ou ácido trifluoroacético). Quando a droga tem um grupo ácidocomo grupo carboxila, exemplos do sal da droga incluem sais compreendendouma base inorgânica (por exemplo, um metal alcalino como sódio oupotássio, ou um metal alcalino terroso como cálcio ou magnésio) e saiscompreendendo uma base orgânica (por exemplo, uma amina orgânica comotrietilamina ou um aminoácido básico como arginina). A droga pode formarum composto complexo de metal como complexo de cobre ou complexo dezinco.
Para preparar uma micela contendo a droga compreendendo ocopolímero em bloco da presente invenção como um componenteconstituinte, métodos de agitação submersa de película fina, diluiçãosubmersa em solução e de diálise são empregados. Eles podem ser usadossozinhos ou em combinação.
(1) Método de agitação submersa de película fina
Pelo menos um tipo de copolímero em bloco tendo capacidadede formação de micela dentre os copolímeros em bloco da presente invençãoe uma droga são dissolvidos em um solvente, a solução resultante é colocadaem um frasco, e o solvente é removido para formar uma película fina. A águaé adicionada à película fina e agitada para formar uma micela. O solventeusado aqui não é particularmente limitado se pode dissolver o copolímero embloco e a droga. Exemplos de solvente incluem tetraidrofurano, dioxano,acetona, metil etil cetona, acetonitrila, dimetil sulfóxido, metanol, etanol,benzeno, tolueno, dimetil acetamida e dimetil formamida. Eles podem serusados sozinhos ou em combinação. Um outro solvente pode ser adicionadoao solvente acima como uma extensão de que o copolímero em bloco não éprecipitado. Aditivos podem ser adicionados em uma fase de água. Osaditivos incluem um agente de controle de pH (por exemplo, tampão defosfato, tampão de carbonato, tampão de acetato, ácido clorídrico diluído,hidróxido de sódio, etc.), tensoativo aniônico, tensoativo não iônico, genteemulsificante como derivado de óleo de rícino polioxietileno, polietilenoglicol, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico, carboximetil celulose,lecitina, gelatina ou ácido hialurônico, e açúcar como manitol. A temperaturada preparação é preferivelmente cerca de 0 a cerca de 80°C, maispreferivelmente cerca de 5 a cerca de 50°C. Além disso, força decisalhamento externa ou irradiação ultra-sônica pode ser aplicada nomomento da agitação submersa, ou o solvente residual pode ser removido porum evaporador sob pressão reduzida de acordo com um método comumenteusado. Exemplos de aparelho para aplicar força de cisalhamento externaincluem um agitador de turbina e homogenizador.
(2) Método de diluição submersa de solução
Pelo menos um tipo de copolímero em bloco tendo capacidadede formar micela dentre os copolímeros em bloco da presente invenção e umadroga são dissolvidos em um solvente, a solução resultante é adicionada águaaos poucos, sob agitação, e o solvente é removido em água para formar umamicela de polímero. O solvente usado aqui não é particularmente limitado sefor miscível com água. Exemplos de solvente incluem metanol, etanol,dimetil acetamida, dimetil formamida, dimetil sulfóxido, tetraidrofurano,dioxano, acetona, acetonitrila e soluções misturadas destes com água. Ossolventes podem ser usados sozinhos ou em combinação de dois ou mais.Dentre estes, uma combinação de tetraidrofurano, acetona e água é preferida.Porque um solvente apropriado para o copolímero em bloco muda pelacomposição do polímero como uma matéria de fato, é preferido selecionar osolvente de acordo com o polímero em uso. Os mesmos aditivos como os quesão adicionados à fase de água no método de agitação submersa de películafina também podem ser adicionados a uma fase de água. A temperatura depreparação é preferivelmente cerca de O a cerca de 80°C, maispreferivelmente cerca de 5 a cerca de 5O0C. Além disso, força decisalhamento externa ou irradiação ultra-sônica pode ser aplicada nomomento da agitação submersa, ou o solvente residual pode ser removido porum evaporador sob pressão reduzida de acordo com um método comumenteusado ou por um processo de areação. Exemplos de aparelhos para aplicar aforça de cisalhamento externa incluem um agitador de turbina ehomogenizador.
(3) Método de diálise
Pelo menos um tipo de copolímero em bloco tendo capacidadede formação de micela dentre os copolímeros em bloco da presente invençãoe uma droga são dissolvidos em um solvente, a solução resultante é colocadaem um tubo de diálise para ser dialisada em água, e o solvente removido paraformar uma micela. O solvente usado aqui não é particularmente limitado sepuder dissolver o copolímero em bloco e for miscível em água. Exemplos desolvente incluem metanol, etanol, dimetil acetamida, dimetil formamida,dimetil sulfóxido, tetraidrofurano, dioxano, acetona e acetonitrila. Eles podemser usados sozinhos ou em combinação de dois ou mais. Um outro solventepode ser adicionado ao solvente acima em tal extensão que o copolímero embloco e a droga não sejam precipitados. A relação do copolímero em blocopara o solvente não é particularmente limitada. Uma membrana de diálisetendo um tamanho de fracionamento de peso molecular apropriado pode serselecionada de acordo com o peso molecular do copolímero em bloco em uso.
Embora uma membrana celular seja freqüentemente usada, a presenteinvenção não está limitada à mesma. Os aditivos podem ser usados em umasolução de diálise. Os aditivos incluem um agente de controle de pH (porexemplo, tampão de fosfato, tampão de carbonato, tampão de acetato, ácidoclorídrico diluído, hidróxido de sódio, etc.), tensoativo aniônico, tensoativonão iônico, agente emulsificante como derivado de óleo de rícino depolietileno, polietileno glicol, polivinil pirrolidona, álcool polivinílico,carboximetil celulose, lecitina, gelatina ou ácido hialurônico, e açúcar comomanitol. Embora o tempo de diálise seja geralmente cerca de 5 minutos acerca de 24 horas cada vez, uma micela é preparada repetindo a operação detrocar o líquido de uma fase de água externa uma ou mais vezes. Atemperatura da preparação é preferivelmente cerca de 0 a cerca de 80°C, maispreferivelmente cerca de 5 a cerca de 50°C. A micela preparada assim podeser obtida em um estado transparente ou levemente turvo na membrana dediálise.
Na presente invenção, a constituição de uma micela que podeser formada a partir do copolímero em bloco tendo segmentos hidrofóbicos ehidrofílicos pode ser trocada pelo método de preparação. Quando a micela épreparada em uma grande quantidade de uma solução aquosa após ocopolímero em bloco ser dissolvido ou dispersado em um solvente orgânico,ela torna-se uma micela tipo O/W tendo um segmento hidrofóbico no núcleointerno e um segmento hidrofílico no envoltório externo. Quando a micela épreparada em uma grande quantidade a partir de um solvente orgânico após ocopolímero em bloco ser dissolvido ou dispersado em uma solução aquosa,ela torna-se uma micela do tipo W/O tendo um segmento hidrofílico nonúcleo interno e um segmento hidrofóbico no envoltório externo. Em geral, éobtida uma micela do tipo núcleo-envoltório tendo um segmento hidrofóbicono núcleo interno e um segmento hidrofílico no envoltório externo. Nestecaso, é considerado que os segmentos hidrofóbicos dos copolímeros em blocoreúnem-se e aglomeram-se juntos em uma densidade elevada para formar umnúcleo e que os segmentos hidrofílicos estendem-se para o exterior dasuperfície da partícula. Quando os terminais dos segmentos hidrofílicos sãoprotegidos ou modificados, a existência de aglomeração parcial de segmentoshidrofílicos é concebível. Estes métodos de preparação podem ser trocados deacordo com a finalidade. Por exemplo, para encapsular a droga, o método édeterminado pelas propriedades físicas como solubilidade em água ou em umsolvente orgânico e estabilidade da droga.
O diâmetro de partícula médio das micelas contendo a drogaou o aglomerado dos mesmos obtido pelo método acima é preferivelmente 1 a1.000 nm, mais preferivelmente 5 a 500 nm, particularmente preferivelmente5 a 300 nm quando são dispersadas em água. Os fatores para determinar osdiâmetros de partícula destas são uma composição do copolímero em bloco eo método de preparação da partícula. Uma vez que o diâmetro de partículapode ser trocado por ocasião do fim da aplicação, ele não está limitado à faixaacima. O diâmetro de partícula pode ser obtido por um processo conhecido,por exemplo, um método de medição de dispersão luminosa ou observaçãomicroscópica.
Em todos os métodos de preparação acima, após a formação deuma micela contendo droga, ela é secada por congelamento ou secada emvácuo enquanto é dispersada em água e pode ser armazenada como um póseco. Um aditivo pode ser adicionado para suprimir a aglomeração durante aoperação de secagem. Exemplos de aditivo incluem manitol, lactose, glicose,trealose, amidos, ácido hialurônico, sais de metal alcalino dos mesmos,polissacarídeos solúveis em água, polietileno glicol, proteínas como glicina,fibrina ou colágeno, cloreto de sódio, e sais inorgânicos como hidrogenofosfato de sódio. A quantidade do aditivo não é particularmente limitada se aaglomeração puder ser suprimida quando a micela é re-dispersada.
O copolímero em bloco da presente invenção em que umligando é ligado ao segmento hidrofílico tem capacidade de marcar o alvo invivo. Uma vez que a micela polimérica baseada na presente invenção pode serpreparada em condições relativamente brandas, ela é apropriada para amanutenção da atividade do ligando e a encapsulação da droga instável. Umavez que o diâmetro de partícula pode ser controlado trocando-seapropriadamente os pesos moleculares do segmento hidrofóbico e dosegmento hidrofílico, a permanência no sangue de uma preparação contendo adroga também pode ser controlada ajustando-se o diâmetro de partícula. Ocopolímero em bloco da presente invenção pode ser usado para asolubilização em água de um composto hidrofóbico como compreendido apartir do desempenho acima.
Uma vez que a micela polimérica é geralmente umapreparação tendo um segmento hidrofóbico como um núcleo, a droga a serencapsulada é preferivelmente hidrofóbico. No entanto, mesmo um compostosolúvel em água tendo uma porção hidrofóbica pode formar uma micela juntocom um copolímero em bloco na porção hidrofóbica. Um composto da drogaque pode reforçar a eficácia da droga dirigindo o mesmo a um órgãoespecífico (como rim, fígado, pulmão, pâncreas, cérebro, etc.) ou a um órgãoou sítio afetado (como sítio com câncer ou inflamado) ou estendendo suapermanência no sangue é preferido.
O copolímero em bloco da presente invenção possibilita que adroga seja encapsulada no núcleo interno composto do segmento hidrofóbicoda micela. O método para encapsular a droga da presente invenção possibilitaa preparação de uma micela polimérica tendo a droga e o segmentohidrofóbico como o núcleo e o segmento hidrofílico sobre a superfícieadicionando a droga a uma solução de polímero. Para aprisionar a drogaeficientemente, um solvente apropriado pode ser adicionado. Por exemplo, éconcebível que a droga seja encapsulada adicionando-se um solvente comoclorofórmio ou diclorometano de modo a estabilizar um ambiente hidrofóbicono copolímero em bloco. Além disso, também é concebível que o copolímeroem bloco seja usado para preparar uma micela polimérica e então a drogadissolvida em um solvente é adicionado à solução de micela polimérica paraimpregnar a porção de núcleo da micela polimérica com a droga. Neste caso,a eficiência de impregnação pode ser aumentada trocando-se apropriadamenteo pH da solução ou a concentração de sal. E ainda concebível que ocopolímero em bloco seja usado para preparar uma micela polimérica e adroga é adicionada e amassada com a solução de micela polimérica paraimpregnar a porção de núcleo da micela polimérica com a droga. A drogahidrofóbica a ser encapsulada é a mesma como acima. Diferente da micelapolimérica acima, uma micela polimérica tendo um segmento hidrofílico nonúcleo e um segmento hidrofóbico no envoltório também é preferida e obtidaencapsulando-se uma droga hidrofílica no núcleo da micela polimérica emostrando propriedades de liberação prolongada e estabilidade da droga. Adroga hidrofílica é o mesmo como acima. Esta micela polimérica pode seradministrada como será descrito a seguir.
Para preparar um particulado contendo a drogacompreendendo o copolímero em bloco da presente invenção como umcomponente constituinte, métodos de secagem submersa, de tratamento ultra-sônico e de secagem por congelamento são empregados. Eles podem serusados sozinhos ou em combinação.
(1) Método de secagem submersa
Pelo menos um tipo de copolímero em bloco tendo capacidadede formar particulado dentre os copolímeros em bloco da presente invenção euma droga são dissolvidos em um solvente, a solução resultante é adicionadaà água aos poucos sob agitação, e o solvente é removido ou difuso paraformar um particulado. O solvente usado aqui não é particularmente limitadose ele dissolver o copolímero em bloco e a droga. Exemplos de solventeincluem metanol, etanol, benzeno, tolueno, dimetil acetamida, dimetilformamida, dimetil sulfóxido, tetraidrofurano, dioxano, acetona, acetonitrila esoluções misturadas destes e água. Eles podem ser usados sozinhos ou emcombinação de dois ou mais. Os mesmos aditivos como os que sãoadicionados à fase de água no método de agitação submersa de película finatambém podem ser adicionados a uma fase de água. A quantidade de águapara um solvente orgânico pode ser selecionada arbitrariamente. Atemperatura da preparação é preferivelmente cerca de 80°C, maispreferivelmente cerca de 5 a cerca de 50°C. Além disso, força decisalhamento externa pode ser aplicada no momento da secagem submersa, ouo solvente pode ser removido por aeração ou um evaporador sob pressãoreduzida. Exemplos de aparelho para aplicar força de cisalhamento externaincluem um agitador de turbina e homogeneizador.
(2) Método de tratamento ultra-sônico
Pelo menos um tipo de copolímero em bloco tendo capacidadede formar particulados dos copolímeros em bloco da presente invenção e umadroga são dissolvidos em um solvente apropriado, e a solução resultante édispersada em uma grande quantidade de água. A irradiação ultra-sônica érealizada em IWa cerca de 200 W, preferivelmente IWa cerca de 10 Wdurante preferivelmente 1 segundo a cerca de 24 horas, mais preferivelmente1 minuto a cerca de 5 horas, embora estas condições não possam serdeterminadas incondicionalmente e mudadas de acordo com a forma eprodução do aparelho. A temperatura da preparação é cerca de 0 a cerca de80°C, preferivelmente cerca de 5 a cerca de 50 °C. Este método éfreqüentemente realizado em combinação com o método de secagemsubmersa acima.
O teor de copolímero em bloco no particulado da presenteinvenção é geralmente 10 a 100%/p, preferivelmente 3 a 100%/p com base noparticulado. Quando a droga está contido no particulado da presente invenção,o teor da droga no particulado da presente invenção é determinado pelaquantidade requerida para tratamento médico e não particularmente limitado.
O particulado da presente invenção pode ser misturado com um dispersante(tensoativo como polissorbato 80 ou óleo de rícino 60 curável porpolioxietileno; polissacarídeo como carboximetilcelulose, alginato de sódioou hialuronato de sódio; sulfato de protamina, polietileno glicol 400), agentede conservação (como paraoxibenzoato de metila ou paraoxibenzoato depropila), agente de tonicidade (como cloreto de sódio, manitol, sorbitol ouglicose), óleo e gordura (como óleo de gergelim ou óleo de milho), fosfatídeo(como lecitina), veículo como ácido lático, amido de milho, manitol oucelulose), aglutinante (como lactose, goma arábica, metil celulose,carboximetil celulose ou dextrina), e desintegrante (como carboximetilcelulose de cálcio).
Para preparar uma partícula compósita de drogacompreendendo o copolímero em bloco da presente invenção como umcomponente constituinte, por exemplo, um método de amassamento submersoé empregado. Um compósito de droga pode ser fabricado adicionando umadroga a uma solução aquosa do copolímero em bloco e amassar os mesmosjuntos. Um compósito de um cristal de droga de nano-ordem e do copolímeroem bloco pode ser formado realizando o amassamento eficientemente e oestado em suspensão da droga é mantido estavelmente.
A micela, particulado ou compósito contendo uma droga dapresente invenção podem ser formulados em várias formas adicionando-sevários aditivos medicinais e administrados como uma preparação injetável ouimplantável (por exemplo, administração intravenosa, subcutânea,intramuscular, intradérmica, intracavitária ou intersticial indireta), preparaçãotransmucosal (como mucosa da cavidade oral, nasal, supositório, vaginal oupulmonar), preparação transdérmica (como ungüento, creme ou gel) oupreparação oral (como comprimido, cápsula ou grânulo).
Para formular uma preparação injetável ou implantável damicela ou particulado contendo uma droga da presente invenção, umapreparação aquosa ou suspensão aquosa da micela ou particulado contendoum tensoativo (como polissorbato ou óleo de rícino de polioxietileno glicol),dispersante (como carboximetil celulose, alginato de sódio, polímerocarboxivinílico, polietileno glicol ou hialuronato de sódio), agente deconservação (como paraoxibenzoato de metila ou paraoxibenzoato depropila), agente de tonicidade (como cloreto de sódio, manitol, sorbitol,glicose, prolina) e tampão (como fosfato de sódio ou hidrogeno fosfato desódio), ou uma suspensão de óleo obtida dispersando a micela ou particuladojunto com óleo vegetal como óleo de gergelim ou óleo vegetal pode serpreparada. A preparação aquosa e a suspensão aquosa podem ser secadas porcongelamento para obter uma preparação secada por congelamento.
Para formular uma preparação asséptica da micela ouparticulado contendo uma droga da presente invenção, um métodocompreendendo filtração asséptica e etapas de carregamento assépticas, ummétodo empregando de esterilização gama, um método compreendendoadicionar um anti-séptico e um método compreendendo a esterilização detodas as etapas de fabricação são empregados, mas a presente invenção nãoestá limitada aos mesmos.
A micela ou particulado contendo uma droga da presenteinvenção pode ser usado como um medicamento seguro para mamíferos. Adose aplicada de micela ou particulado contendo uma droga da presenteinvenção, que difere de acordo com o tipo e teor da droga como a drogaprincipal, da forma de preparação, via de administração, doença alvo e animalalvo pode ser uma quantidade efetiva da droga. Um número de doses varia deuma ou várias por dia, uma por semana, uma de dois em dois meses, uma pormês ou uma de vários em vários meses, sendo apropriadamente selecionadade acordo com o tipo e teor da droga como a droga principal, a forma depreparação, via de administração, doença alvo ou animal alvo.
Como descrito acima, o copolímero em bloco da presenteinvenção pode formar uma micela, particulado ou compósito junto com umcomposto hidrofóbico. Uma micela do copolímero em bloco pode solubilizaro composto hidrofóbico e possibilita a administração intravenosa docomposto. O acúmulo em um sítio afetado de micela por um ligando épossível. Além disso, uma vez que o copolímero em bloco é biocompatível etem propriedades de liberação prolongada, pode-se esperar a manutenção daeficácia da droga. Pode-se esperar que a micela melhore a absorção oral.Pode-se esperar que o particulado libere a droga durante um longo tempocomo uma injeção hipodérmica, e o compósito torna possível preparar umananopartícula de uma droga dificilmente absorvível e pode-se esperar quemelhore a absorção oral. O copolímero em bloco da presente invenção podeprover várias propriedades características como seletividade trocando-se otipo e número de aminoácidos constituintes, o tipo e número de ácidoshidroxicarboxílicos, o esquema de seqüência ou o grupo modificador.Exemplos
Os seguintes exemplos são apresentados para o fim de aindailustrar a presente invenção, mas de modo algum devem ser consideradoscomo limitativos.
Exemplo de Referência 1
Síntese de aminoacil polietileno glicol
200 g (0,05 mol) de polietileno glicol tendo um peso molecularmédio de 4.000 (HO-PEG4000-OH) foram dissolvidos em 400 ml deacetonitrila. 55 g (0,15 mol) de éster t-butoxicarbonil-L-fenilalanina-N-hidroxissuccinimida (Boc-Phe-ONSu) e 2,65 g (0,015 mol) de 4-dimetilaminopiridina foram adicionados à solução resultante e agitados emtemperatura ambiente durante 2 dias. Após o término da reação, o solvente foidestilado sob pressão reduzida, e o resíduo dissolvido em 600 ml dediclorometano e enxaguado com uma solução aquosa a 10% de ácido cítrico,uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio e soluçãosalina saturada. A solução foi secada sobre sulfato de sódio anidro econcentrada, e éter foi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo. Oproduto bruto obtido foi dissolvido em acetonitrila, a solução resultante foifiltrada com um filtro de membrana de 450 nm, e o filtrado foi concentradosob pressão reduzida. Éter foi adicionado ao resíduo para recristalizar omesmo. O espectro de RMN do produto recristalizado mostrou que o mesmoera Boc-Phe-0-PEG4ooo-0-Phe-Boc em que Boc-Phe estava ligado a éster emambos os terminais de HO-PEG4000-OH. O rendimento foi 215 g (94%).
Quando 90 g (0,02 mol) de Boc-Phe-0-PEG4ooo-0-Phe-Boc foi tratado comHCl 4M em dioxano e o solvente destilado sob pressão reduzida, o resíduosólido foi obtido. Éter foi adicionado a este resíduo e o cristal obtido filtrado.
O espectro de RMN deste cristal mostrou que ele era H-Phe-O-PEG-OH. Orendimento deste cristal foi 77,8 g (93%).
Exemplo de referência 2
Introdução de t-butoxicarbonil-L-leucina em aminoacil polietileno glicol
38,9 g (0,01 mol) de cloridrato de polietileno glicol -1-fenilalaninato foram dissolvidos em 300 ml de um solvente misturado deacetonitrila (acn) e tetraidrofurano (thf) em uma relação em peso de 1:1, 1,15ml (0,0105mol) de n-metilmorfolina (nmm) foram adicionados à soluçãoresultante, e 4,92 g (0,015 mol) de éster de t-butoxicarbonil-l-leucina-n-hidroxissuccinimida (boc-leu-onsu) foram adicionados à solução e agitadosem temperatura ambiente durante uma noite, após o término da reação, asolução foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo dissolvido emdiclorometano, a solução resultante enxaguada com uma solução aquosa a10% de hidrogeno carbonato de sódio, uma solução aquosa saturada de ácidocítrico e água e secada sobre sulfato de sódio anidro, a solução obtida foiconcentrada sob pressão reduzida, e éter foi adicionado ao resíduo paracristalizar o mesmo.
O Boc-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foi dissolvido em THF e éterfoi adicionado para recristalizar o mesmo. O rendimento foi 41 g (94%).
Exemplo de referência 3Síntese de éster de t-butoxicarbonil-L-leucil-L-leucil-L-alanil-L-lactato-N-hidroxissucinimida (Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu)
45 g (0,5 mol) de ácido L-láctico foram dissolvidos em 500 mlde THF, e 0,5 ml (0,5 mol) de piridina foi adicionado. 143 g (0,5 mol) deBoc-L-alanina-ONSu foram adicionados em temperatura ambiente comagitação, e 6,1 g (0,05 mol) de 4-dimetilaminopiridina foram aindaadicionados. Eles foram agitados em temperatura ambiente durante 1,5 dias, eo solvente destilado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 500 mlde acetato de etila, e a solução resultante foi enxaguada com uma soluçãoaquosa saturada de ácido cítrico e água. A solução foi extraída com umasolução aquosa a 10% de hidrogeno carbonato de sódio 3 vezes, e os extratosobtidos foram combinados juntos e tornados ácidos com ácido cítrico. Asolução aquosa ácida foi extraída com 300 ml de acetato de etila três vezes. Asolução de extrato combinada foi enxaguada com água e secada sobre sulfatode sódio anidro. Quando o solvente foi destilado sob pressão reduzida ehexano foi adicionado ao óleo obtido, o óleo cristalizou. Ele foi cristalizadocom acetato de etila para obter ácido Boc-L-alanil-L-láctico puro (Boc-Ala-Lac-OH). O rendimento foi 91 g (7%). Este didepsipeptídeo foi extraído comácido clorídrico 4M em dioxano para remover o grupo protetor Boc. Ocloridrato de didepsipeptídeo foi dissolvido em 400 ml de THF, e 28 ml depiridina foram adicionados com agitação. 221 g (0,37 mol) de Boc-Leu-ONSuforam adicionados a esta solução, e 38,5 ml (0,35 mol) de NMM foramadicionados com agitação. Eles foram agitados em temperatura ambientedurante uma noite. Esta solução foi concentrada sob pressão reduzida, e oresíduo dissolvido em 500 ml de acetato de etila. Esta solução foi tratadacomo descrito acima para obter 115 g (88%) de Boc-Leu-Ala-Lac-OH. Ogrupo Boc deste tridepsipeptídeo foi removido, e o produto obtido reagidocom Boc-Leu-ONSu para obter 127 g (85%) de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-OH.Este tetradepsipeptídeo Boc foi dissolvido em 400 ml de THF, e 34,5 g (0,3mol) de N-hidroxissuccinimida (HOSu) foram adicionados. A soluçãoresultante foi resinada a -IO0C, e 55,4 g (0,27 mol) de diciclo-hexilcarbodiimida foram adicionados, agitados a -IO0C durante 3 horas e emtemperatura ambiente durante uma noite. A solução foi diluída com 500 ml deacetato de etila, o cristal de diciclohexil uréia foi filtrado, e o filtrado foiconcentrado sob pressão reduzida. Hexano foi adicionado ao resíduo paracristalizar o mesmo. O produto cristalizado foi recristalizado com acetato deetila para obter 138 g (90%) de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu.
Exemplo 1
Fabricação de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-O-PEG4000-OH
40 g (9,2 mmol) de Boc-Leu-Phe-O-PEG4000-OH foramtratados com ácido clorídrico 4M/ dioxano para remover o grupo protetorBoc. O cloridrato obtido foi dissolvido em ACN-THF (1:1), e 1 ml de NMMfoi adicionado. 8,1 g (13,9 mmol) de éster de t-butoxicarbonil-L-leucil-L-leucil-L-alanil-L-lactato-N-hidroxissuccinimida (Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu), que é um éster ativo de tetradepsipeptídeo N-protegido, foramadicionados a esta solução resultante e agitados em temperatura ambientedurante uma noite. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e oresíduo dissolvido em diclorometano, enxaguado com uma solução aquosa a10% de hidrogeno carbonato de sódio, uma solução saturada de ácido cítrico eágua, e secado sobre sulfato de sódio anidro. A solução foi concentrada sobpressão reduzida e éter foi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo. Ocristal obtido foi recristalizado com THF-éter para obter 41,8 g (96%) de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-O-PEG4OOO-OH.
Exemplo 2
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)2-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH
Quando o grupo de proteção Boc de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH do exemplo 1 foi removido por um tratamento comácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições comono exemplo 1, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)2-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtidoem um rendimento de 92%.
Exemplo 3
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OHQuando o grupo protetor Boc de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)2-Leu-Phe-O-PEG4OOO-OH do exemplo 2 foi removido por um tratamento comácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições como noexemplo 1, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido emum rendimento de 92%.
A rotação óptica específica deste produto foi [a]D = -13,1(c=l,0, CH3CN) e o espectro de RMN [picos múltiplos de 0,84 ppm (42H) àbase de dois CH3's de Leu; picos múltiplos de 1,2 a 1,7 ppm (48H) à base deP-CH3 de Ala e Lac, P-CH2 de Leu, yCH e 3 CH3's de Boc; pico único de 3,5ppm (360H) à base de CH2 de PEG; picos múltiplos de 4,2 a 4,9 ppm (14H) àbase de α-CH de aminoácido e ácido láctico; picos múltiplos de 7,2 ppm (5H)à base de hidrogênio de anel aromático de Phe; picos múltiplos de 7,6 a 8,5ppm (11H) à base de NH da ligação amida] mostraram que isto foi Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)3-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH.Exemplo 4
Fabricação de Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)4-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH
Quando o grupo protetor Boc de Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)3-Leu-Phe-0-PEG4ooo"OH do exemplo 3 foi removido por um tratamento comácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições como noexemplo 1, Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)4-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido emum rendimento de 95%.Exemplo 5Fabricação de Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH
Quando o grupo protetor Boc de Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)4-Leu-Phe-0-PEG4ooo"OH do exemplo 4 foi removido por um tratamento comácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições como noexemplo 1, Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido emum rendimento de 95%.
A rotação óptica específica deste produto foi [a ]d = - 13,7 (c= 1,0, CH3CN) e o espectro de RMN [picos múltiplos de 0,84 ppm (66H) àbase de dois CH3's de Leu; picos múltiplos de 1,2 a 1,7 ppm (72H) à base deP-CH3 de Ala e Lac5 β-0Η2 de Leu, yCH e 3 CH3's de Boc; pico único de 3,5ppm (360H) à base de CH2 de PEG; picos múltiplos de 4,2 a 4,9 ppm (22H) àbase de α-CH de aminoácido e ácido láctico; picos múltiplos de 7,2 ppm (5H)à base de hidrogênio de anel aromático de Phe; picos múltiplos de 7,6 a 8,5ppm (17H) à base de NH da ligação amida] mostraram que isto foi Boc-[Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4000-OH.
Exemplo 6
Fabricação de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-O-PEG600-O-Phe-Leu-Lac-Ala-Leu-Leu-Boc
Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-O-PEGôoo-O-Phe-Leu-Lac-Ala-Leu-Leu-Boc foi obtido em um rendimento de 96% usando polietilenoglicol tendo um peso molecular médio de 600 em lugar de polietileno glicoltendo um peso molecular médio de 4.000 no exemplo de referência 1 etratando o mesmo do mesmo modo como no exemplo de referência 2 eexemplo 1.
Exemplo 7
Fabricação de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-O-PEGi540-O-Phe-Leu-Lac-Ala-Leu-Leu-Boc
Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Phe-0-PEGi54o-0-Phe-Leu-Lac-Ala-Leu-Leu-Boc foi obtido em um rendimento de 95% usando polietilenoglicol tendo um peso molecular médio de 1.540 em lugar de polietileno glicoltendo um peso molecular médio de 4.000 no exemplo de referência 1 etratando o mesmo da mesma maneira como no exemplo de referência 2 eexemplo 1.
Exemplo 8
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG6ooo-OH
Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG6oooo-OH foi obtidoem um rendimento de 95% usando polietileno glicol tendo um peso molecularmédio de 6.000 em lugar de polietileno glicol tendo um peso molecular médiode 4.000 no exemplo de referência 1 e tratando o mesmo do mesmo modocomo no exemplo de referência 2 e exemplos 1 a 5.
Exemplo 9
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG2oooo-OH
Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG2oooo-OH foi obtidoem um rendimento de 97% usando polietileno glicol tendo um peso molecularmédio de 20.000 em lugar de polietileno glicol tendo um peso molecularmédio de 4.000 no exemplo de referência 1 e tratando o mesmo do mesmomodo como no exemplo de referência 2 e exemplos a 1 5.
Exemplo 10
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG^oo-OCH3
200 g (0,05 mol) de monometóxi polietileno glicol tendo umpeso molecular médio de 4,000 (HO-PEG4000-OCH3) foram dissolvidos em400 ml de acetonitrila, e 55 g (0,15 mol) de éster de t-butoxicarbonil-L-fenilalanina-N-hidroxissuccinimida (Boc-Phe-ONSu) e 2,65 g (0,015 mol) de4-dimetilaminopiridina foram adicionados a esta solução e reagidos emtemperatura ambiente durante 2 dias. Após o término da reação, o solvente foidestilado sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em 600 ml dediclorometano e enxaguado com uma solução aquosa a 105 de ácido cítrico,uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio e soluçãosalina saturada. A solução foi secada sobre sulfato de sódio anidro econcentrada, e éter foi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo. Oproduto bruto obtido foi dissolvido em acetonitrila, a solução resultante foifiltrada com um filtro de membrana de 450 nm, e o filtrado foi concentradosob pressão reduzida. Eter foi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo.
O espectro de RMN deste cristal mostrou que este foi Boc-Phe-0-PEG4ooo-OCH3 em que Boc-Phe era éster ligado ao terminal de HO-PEG4000-OCH3. Orendimento foi 200 g (94%). Quando 90 g (0,02 mol) de Boc-Phe-0-PEG400o-OCH3 foram tratados com HCl 4M e o solvente foi destilado sob pressãoreduzida, o resíduo sólido foi obtido. Éter foi adicionado ao resíduo, e ocristal obtido foi filtrado. O espectro de RMN mostrou que este cristal foiHCLH-Phe-O-PEG-OCH3. O rendimento foi 77,8 g (93%). Este produto foitratado do mesmo modo como no exemplo de referência 2 e exemplos 1 a 5para obter Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4Ooo-OCH3.
Exemplo 11
Fabricação de Boc-Leu-Leu-Ala-Hea-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH
38,9 g (0,01 mol) de cloridrato de L-fenilalaninato depolietileno glicol sintetizado no exemplo de referência 1 foram dissolvidos em300 ml de um solvente misturado de acetonitrila (ACN) e tetraidrofurano(THF) em uma relação em peso de 1:1, 1,15 (0,0105 mol) de NMM foramadicionados à solução resultante, e 4,3 g (0,015 mol) de éster t-butoxicarbonil-L-alanina-N-hidroxissuccinimida (Boc-Ala-ONSu) foramadicionados à solução resultante e agitados em temperatura ambiente duranteuma noite. Após o término da reação, a solução foi concentrada sob pressãoreduzida, o resíduo foi dissolvido em diclorometano, e a solução foienxaguada com uma solução aquosa a 10% de hidrogeno carbonato de sódio,uma solução aquosa saturada de ácido cítrico e água e secados sobre sulfatode sódio anidro. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e éter foiadicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo. O Boc-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH foi dissolvido em THF, e éter foi adicionado ao produto acima pararecristalizar o mesmo. O rendimento foi 39 g (90%). 43,2 g (10 mmol) deBoc-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH foram tratados com ácido clorídrico 4M/dioxano para remover o grupo protetor Boc. O cloridrato obtido foi dissolvidoem ACN-THF (1:1) e 1 ml de NMM foi adicionado. 8,55 g (15 mmol) deéster de t-butoxicarbonil-L-leucil-L-leucil-L-alanil-L-glicolato-N-hidroxissuccinimida (Boc-Leu-Leu-Ala-Hea-ONSu), que é um éster ativo detetradepsipeptídeo N-protegido, foram adicionados à solução resultante eagitados em temperatura ambiente durante uma noite. A solução foiconcentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido emdiclorometano, enxaguado com uma solução aquosa a 10% de hidrogenocarbonato de sódio, uma solução aquosa saturada de ácido cítrico e água, esecado sobre sulfato de sódio anidro. A solução foi concentrada sob pressãoreduzida e éter foi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo. O cristalobtido foi recristalizado com THF-éter para obter 42,1 (90%) de Boc-Leu-Leu-Ala-Hea-Ala-Phe-O-PEG4Ooo-OH.Exemplo 12
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-O-PEG4000"OH
Quando o grupo protetor Boc de Boc-Leu-Leu-Ala-Hea-Ala-Phe-PEG4ooo-OH do exemplo 11 foi removido por um tratamento com ácidoclorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Hea-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições como acima, Boc-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido em um rendimento de89%.
Exemplo 13
Fabricação de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-O-PEG4OOO-OH
Quando o grupo protetor Boc de Boc-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo"OH do exemplo 12 foi removido por um tratamento comácido clorídrico 4M- dioxano e o produto obtido foi reagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmas condições como acima.
Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-O-PEG4000-OH foiobtido em um rendimento de 90%.
Exemplo 14
Fabricação de (Leu-Leu-Ala-Lae)2-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH
Quando o grupo de proteção Boc de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH do exemplo 13 foi removido porum tratamento com ácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foireagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmascondições como acima, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)2-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido em um rendimento de 92%.
Exemplo 15
Fabricação de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-O-PEG4OOO-OH
Quando o grupo protetor Boc de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)2-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH do exemplo 14 foi removido porum tratamento com ácido clorídrico 4M/ dioxano e o produto obtido foireagido com Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-ONSu pela mesma operação, nas mesmascondições como acima, Boc-(Leu-Leu-AlaOLac)3-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH foi obtido em um rendimento de 91%. A rotação ópticaespecífica deste produto foi [a]D25 = -11,2 (c = 1,0, CH3CN) e o espectro deRMN [picos múltiplos de 0,84 ppm (60H) à base de dois CH3's de Leu; picosmúltiplos de 1,1 a 1,7 ppm (66H) à base de P-CH3 de Ala e Lac, P-CH2 deLeu, yCH e 3 CH3's de Boc; pico único de 3,5 ppm (360H) à base de CH2 dePEG; picos múltiplos de 4,2 a 4,9 ppm (24H) à base de aCH de aminoácido,ácido láctico e ácido glicólico; picos múltiplos de 7,2 ppm (5H) à base dehidrogênio de anel aromático de Phe; picos múltiplos de 7,6 a 8,5 ppm (17H)à base de NH da ligação amida) mostraram que isto foi Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH.
Exemplo 16
Fabricação de Boc- {Glu (OEt)-Ala-Ala-Lac}4-Ala-Phe-OPEG4ooo-OH
43 g (10 mmol) de HCl.H-Al-Phe-OPEG400O-OH foramdissolvidos em THF, e 1,1 ml de NMM e 8,6 g (15 mmol) de Boc-Glu (OEt)-Ala-Ala-Lac-ONSu foram adicionados e agitados em temperatura ambientedurante uma noite. Eles foram tratados de acordo com um método comumenteusado para obter 41,7 g (89%) de Boc-Glu (OEt)-Ala-Ala-Lac-Ala-Phe-OPEG4000-OH. A reação deste éster ativo de tetradepsipeptídeo Boc foirepetida 3 vezes para prolongar o comprimento da cadeia de depsipeptídeo demodo a obter Boc-{Glu (OEt)-Ala-Ala-Lac}4-Ala-Phe-O-PEG4000-OH nofinal.
Exemplo 17
Fabricação de Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-O-PEG4000-OH38,9 g (0,01 mol) de cloridrato de L-fenilalaninato depolietileno glicol foram dissolvidos em 300 ml de um solvente misturado deacetonitrila (ACN) e tetraidrofurano (THF) em uma relação em peso de 1:1,1,15 ml (0,0105 mol) de N-metilmorfolina foram adicionados à soluçãoresultante, e 10,4 g (0,015 mol) de éster de t-butoxicarbonil-L-fenilalanina-L-leucil-L-fenilalanil-L-lactato N-hidroxissuccinimida (Boc-Phe-Leu-Phe-Lac-ONSu) foram adicionados à solução resultante e agitados em temperaturaambiente durante uma noite. Após o término da reação, a solução foiconcentrada sob pressão reduzida, o resíduo dissolvido em diclorometano, e asolução enxaguada com uma solução aquosa a 10% de hidrogeno carbonatode sódio, uma solução aquosa saturada de ácido cítrico e água, e secada sobsulfato de sódio anidro. A solução foi concentrada sob pressão reduzida, e éterfoi adicionado ao resíduo para cristalizar o mesmo.
O Boc-Phe-Leu-Phe-Lac-Phe-0-PEG4ooo-OH obtido foidissolvido em THF, e éter foi adicionado para recristalizar o mesmo. Orendimento foi 45,4 g (96%). 47,3 g (10 mmol) de Boc-Phe-Leu-Phe-Lac-Phe-O-PEG4OOO-OH foram tratados com ácido clorídrico 4M/ dioxano pararemover o grupo protetor Boc. O cloridrato obtido foi dissolvido em ACN-THF (1:1), e 1,15 ml de NMM foram adicionados. 10,4 g de Boc-Phe-Leu-Phe-Lac-ONSu, que é um éster ativo de tetradepsipeptídeo N-protegido,foram adicionados à solução resultante e agitados em temperatura ambientedurante uma noite. A solução foi concentrada sob pressão reduzida, e oresíduo dissolvido em diclorometano, enxaguado com uma solução aquosa a10% de hidrogeno carbonato de sódio, uma solução aquosa saturada de ácidocítrico e água, e secado sob sulfato de sódio anidro. A solução foi concentradasob pressão reduzida, e éter foi adicionado ao resíduo para cristalizar omesmo. O cristal obtido foi recristalizado com THF-éter para obter 42,1(90%) de Boc-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-O-PEG=4000=-OH puro.
Este composto de depsipeptídeo-PEG foi tratado com HCl 4M/dioxano para remover o grupo Boc, e o cloridrato obtido foi reagido com Boc-Phe-Lac-ONSu de acordo com um método comumente usado para obter 38,7g (95%) de Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-0-PEG4ooo-OH. A rotaçãoóptica específica deste produto foi [oc]d = -12,2 (c = 1,0, CH3CN), e oespectro de RMN [picos múltiplos de 0,84 ppm (12H) à base de dois CH3's deLeu; picos múltiplos de 1,2 a 1,7 ppm (24H) à base de P-CH3 de Lac, PCH2de leu, yCH e 3 CH3's de Boc; pico único de 3,5 ppm (360H) à base de CH2de PEG; picos múltiplos de 4,2 a 4,9 ppm (IlH) à base de α-CH deaminoácido e ácido láctico; picos múltiplos de 7,2 ppm (3OH) à base dehidrogênio de anel aromático de Phe; picos múltiplos de 7,6 a 5 ppm (8H) àbase de NH da ligação amida) mostraram que este foi Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-0-PEG4ooo-OH.Exemplo 18Fabricação da micela
300 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e15 mg de palmitato de dexametasona (DMP) foram colocados em um frascocom formato de berinjela, de 100 ml, para serem dissolvidos em 20 ml deacetonitrila. O solvente foi destilado da solução a 5 O0C sob pressão reduzida.100 ml de água foram adicionados ao resíduo semelhante a película obtido, eo frasco foi agitado com as mãos para dissolver o resíduo em água. EmboraDMP fosse insolúvel em água, o resíduo semelhante a película foicompletamente dissolvido em água, a matéria insolúvel não separou no todo,e foi indicado que ela foi introduzida em uma micela. Isto mostrou que ocopolímero em bloco pode solubilizar um composto hidrofóbico dificilmentesolúvel.
Exemplo 19
Fabricação da micela e diâmetro de partícula da micela200 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-OPEG4ooo-OH e60 mg de DMP foram dissolvidos em acetonitrila e tratados de acordo comum método comumente usado, e 100 ml de solução salina fisiológica foramadicionados. Uma vez que a solução tornou-se levemente turva, ela foifiltrada com um filtro de membrana. 14 mg da matéria insolúvelpermaneceram no filtro. Assim, uma micela contendo 46 mg de DMP em 100ml de uma solução aquosa de solução salina fisiológica pode ser preparada. Odiâmetro desta micela foi 102,5 nm.Exemplo 20
Fabricação da micela
300 mg g de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-OPEG40OO-OH e 10,5 mg de aciclovir (AV) foram dissolvidos emacetonitrila. A solução foi concentrada sob pressão reduzida a 50°C, e 3 ml deágua foram adicionados ao resíduo. O resíduo formou uma micela e dissolveufacilmente.
Exemplo 21
Fabricação da micela
300 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-OPEG4ooo-OH e10,5 mg de aciclovir foram dissolvidos em acetonitrila. A solução foiconcentrada sob pressão reduzida a 5O0C, e 3 ml de água foram adicionadosao resíduo. O resíduo formou uma micela e dissolveu facilmente.
Exemplo 22
Evidência de formação da micela
Uma micela composta da mesma quantidade como no exemplo18 de Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-0-PEG4ooo-OH e a mesmaquantidade como no exemplo 18 de DMP foi preparada do mesmo modocomo no exemplo 18 e resfriada por congelamento. A amostra secada porcongelamento foi medida em D2O e dimetilsulfóxido-d6 (DMSO-d6) porRMN de próton 500 MHz. No espectro obtido medindo o solvente D2O5somente um pico derivado do próton de metileno de óxido de polietileno e umpico de próton derivado de água existente no sistema foram observados em3,8 ppm e 5,0 ppm, respectivamente. No espectro da mesma amostra medidaem DMSO-d6, todos os picos de próton derivados de Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-O-PEG4000-OH e DMP foram observados. Este fato éconsiderado como a seguir. Quando a amostra secada por congelamento foire-dissolvida em D2O, ela dissolveu enquanto mantendo uma micela, somenteo próton de metileno de óxido de polietileno existente externo à micela foiobservado e um segmento de depsipeptídeo e DMP que existiam internos àmicela não foram observados no espectro de RMN medido usando uma ondade rádio tendo energia fraca enquanto quando a mesma amostra secada porcongelamento foi dissolvida em DMSO-d6 a micela foi destruída, Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-O-PEG4Ooo-OH e DMP formaram um solução deDMSO em estados moleculares, e todos os prótons foram observados porRMN. Assim, pode ser afirmado que o espectro de RMN mostrou a formaçãode uma micela composta de Boc-Phe-Lac-(Phe-Leu-Phe-Lac)2-Phe-O-PEG4000-OH e DMP.
Exemplo 23
Evidência de falta de aglomeração e falta de destruição da micela porsecagem por congelamento
500 mg de Boc-(Leu-Leu-Ara-Lac)3(Leu-Leu-Ara-Hea)2-Ara-Phe-OPEG4Ooo-OH e 100 mg de DMP foram dissolvidos em acetonitrila, e osolvente foi destilado sob pressão reduzida. 50 ml de água foram adicionadosao resíduo e bem agitados. A solução resultante foi deixada permanecerdurante uma noite, e a matéria insolúvel foi filtrada com um filtro demembrana de 450 nm. O peso da matéria insolúvel foi 24 mg. O filtrado foidividido em dois, 250 mg (amostra 1) de PEG4ooo foram adicionados a um dosmesmos, 125 mg (amostra 2) de PEG4000 foram adicionados ao outro, e ambasas amostras foram secadas por congelamento. Os rendimentos das amostrasforam 477 mg e 413 mg. Quando 26,6 mg da amostra 1 foram coletados e 1ml de solução salina fisiológica foi adicionado à amostra 1 e levementeagitada com as mãos, uma solução homogênea transparente foi obtida em 15segundos. Por outro lado, quando 20,0 mg da amostra 2 foram coletados e omesmo tratamento foi realizado, após a solução resultante ser levementeagitada, ela tornou-se uma solução homogênea em 45 segundos. Os produtossecados por congelamento dissolveram em solução salina fisiológica muitorapidamente para prover soluções homogêneas transparentes. Os diâmetros departícula das amostras foram 105,5 e 101,6 nm.
Exemplo 24
Capacidade de liberação da droga encapsulada na micela
Uma solução de micela composta de 100 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)3-(Leu-Leu-Ala-Hea)2-Ala-Phe-OPEG4ooo-OH e 5 mg de DMPfoi preparada e dialisada com um tubo de celulose de diálise tendo um cortede peso molecular de cerca de 14.000 e um diâmetro de abertura de cerca de 5nm para medir o DMP liberado por um espectrofotômetro de ultravioleta.14% de DMP foram liberados após 24 horas e 33% de DMP foram liberadosapós 48 horas.
Exemplo 25
Capacidade de liberação da droga encapsulado na micela
Uma solução de micela composta de 100 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e 5 mg de DMP foi preparada edialisada com um tubo de celulose de diálise tendo um corte de pesomolecular de cerca de 14.000 e um diâmetro de abertura de cerca de 5 nmpara medir o DMP liberado por um espectrofotômetro de ultravioleta. 2% deDMP foram liberados após 24 horas e 4% de DMP foram liberados após 48horas.
Exemplo 26
Capacidade de liberação da droga encapsulado na micelaUma solução de micela composta de 100 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e 10 mg de DMP foi preparada edialisada com um tubo de celulose de diálise tendo um corte de pesomolecular de cerca de 14.000 e um diâmetro de abertura de cerca de 5 nmpara medir o DMP liberado por um espectrofotômetro de ultravioleta. 24% deDMP foram liberados após 24 horas.
Exemplo 27
Capacidade de liberação da droga encapsulado na micela
Uma solução de micela composta de 100 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e 5 mg de dexametasona foipreparada e dialisada com um tubo de celulose de diálise tendo um corte depeso molecular de cerca de 14.000 e um diâmetro de abertura de cerca de 5nm para medir o DMP liberado por um espectrofotômetro de ultravioleta.57% de DMP foram liberados após 10 horas e somente 3% de DMP foramliberados 10 após isso. Entende-se deste fato que a compatibilidade entre adroga e o copolímero em bloco da presente invenção difere grandemente paracada droga e que a formação de uma micela pode ser controlada construindo aestrutura polimérica do segmento hidrofóbico na micela para cada droga demodo que ela tornou-se compatível com as propriedades físicas da droga.
Entende-se também que a capacidade de liberação da droga encapsulado namicela pode ser controlada pela estrutura do copolímero em bloco da presenteinvenção e a quantidade de droga a ser encapsulada.
Exemplo 28
Síntese do condensado de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG^oo-OH eácido fólico
4,4 g (0,01 mol) de ácido fólico foram dissolvidos em 100 mlde ácido acético, 1,2 g (0,01 mol) de cloreto de tionila foram adicionados emgotas à solução resultante a O0C, e a solução obtida foi adicionada em gotas a300 ml de uma solução de THF contendo (0,005 mol) de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4000-OH e 4 ml de piridina e reagida em temperaturaambiente durante 3 horas. A solução obtida foi concentrada sob pressãoreduzida, dissolvida em acetato de etila, enxaguada com água e uma soluçãoaquosa de hidrogeno carbonato de sódio e secada sobre sulfato de sódioanidro. A solução obtida foi concentrada sob pressão reduzida, e éter foiadicionado à solução para precipitar o produto formado. O produto foi re-precipitado de THF para obter um condensado purificado de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e ácido fólico.
Exemplo 29
Fabricação do particulado
200 mg de Boc-Leu-Leu-Ala-Lac-Leu-Leu-Lys (Z)-Lac-Leu-Lac-Phe-O-PEG6OO-O-Phe-Lac-Leu-Lac-Lys (Z)-Leu-Leu-Lac-Ala-Leu-Leu-Boc e 10 mg de palmitato de dexametasona foram dissolvidos em 2 ml deacetonitrila-THF (1:1) e agitados com um agitador em uma velocidadeelevada, e água foi adicionada gradualmente para preparar 100 ml de umasolução. A solução obtida foi agitada durante 30 minutos. A solução tornou-seturva, e um particulado contendo a droga foi preparada.
Exemplo 30
Fabricação do compósito
10 mg de palmitato de dexametasona foram colocados em umalmofariz, 1 ml de uma solução aquosa obtida dissolvendo 100 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Ala-Phe-0-PEG4ooo-OH em 15 ml de água e submetendoa solução resultante a um tratamento ultra-sônico foi adicionado e amassadocom o palmitato de dexametasona por um pilão durante 1 minuto, deste modocristais de palmitato e dexametasona foram uniformemente dispersados emestado de micro-cristal, e a suspensão obtida foi totalmente estável emtemperatura ambiente. Quando 10 mg de palmitato de dexametasona foramcolocados em um almofariz de ágata e 1 ml de água foi adicionado eamassado com o palmitato de dexametasona por um pilão de ágata, opalmitato de dexametasona não tinha nenhuma afinidade para água,permaneceu como uma grande massa e não dispersou. Entende-se deste fatoque o copolímero em bloco da presente invenção pode formar um compósitoestável com micro-cristais da droga.
Exemplo 31
Manutenção do efeito farmacológico
Uma solução de injeção (solução salina fisiológica) contendouma micela composta de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG^oo-OHobtido do mesmo modo como no exemplo 18 e palmitato de dexametasona foipreparada e injetada em ratos SD do sexo masculino (5 semanas de idade, η =3 a 5), intravenosamente, para assegurar que a dose de dexametasona tornou-se 0,5 mg/kg. 7 dias após a administração da droga, 0,1 ml de uma solução decarragenano a 3% foi injetado nas patas direitos dos ratos subcutaneamentepara medir um aumento no volume de cada pata por edema após 4 horas.Como comparação, as mesmas doses como acima de uma solução de injeçãode micro-esfera de lipídio de palmitato de dexametasona (Rimetasona (marcaregistrada) de Mitsubishi Pharma Corporation), uma solução de injeção dedexametasona fosfato de sódio (Decadron (marca registrada) de BanyuPharmaceutical Co., Ltd.) e solução salina não contendo droga foramadministradas em vez da micela acima para medir o volume de cada pata nomesmo programa de tempo. O volume da pata aumentou em 19,9 ± 7,7% nocaso de solução salina fisiológica contendo nenhuma droga e 15,4 ± 3,5% nocaso de Rimetasona. No entanto, ele aumentou em 1,46 ± 1,46% no caso damicela acima e um efeito antiinflamatório (P < 0,01) significativo foiobservado quando comparado com solução salina fisiológica e Rimetasona.Na experiência usando a solução de injeção de dexametasona fosfato de sódio(Decadron (marca registrada) de Banyu Pharmaceutical Co., Ltd.), o efeitoantiinflamatório mais forte foi observado após 24 horas e um aumento novolume da pata foi significativamente suprimido, mas seu efeito foi perdidono 3° dia ou mais tarde. A manutenção do efeito farmacológico da micela dapresente invenção tornou-se evidente.Exemplo 32Fabricação da micela
6 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG40oo-OH e0,12 mg de prostaglandina I2 (PGI2) foram colocados em um frasco comformato de berinjela, de 100 ml, e dissolvidos em 30 ml de acetonitrila-THF-etanol (5:5:1). O solvente foi destilado desta solução sob pressão reduzida. 30ml de água destilada foram adicionados à película obtido para dissolver omesmo em água. A película dissolveu em água completamente. Então, oespectro de UV desta solução foi medido. Mesmo após 3 dias, o espectro deUV tendo um máximo de absorção em 195 nm não mudou. 3 mg de PEG4000foram adicionados a esta solução aquosa e secados por congelamento. Mesmoapós o produto secado por congelamento ser mantido em temperaturaambiente durante 24 horas, seu espectro de UV não mudou.Exemplo 33Fabricação da micela
50 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e5,0 mg de sódio beraprost, que é prostaciclina, foram colocados em um frascocom formato de berinjela, de 100 ml, e dissolvidos em 30 ml de acetonitrila-THF-etanol (5:5:1). O solvente foi destilado desta solução sob pressãoreduzida, 1 ml de um tampão de ácido acético (0,1 M) tendo um pH de 4,5 foiadicionado ao sólido obtido para dissolver o mesmo aplicando ondas ultra-sônicas. Embora um precipitado tenha sido produzido neste pH com sódioberaprost sozinho, o sólido dissolveu no tampão nesta pH completamente, oque indicou que ele foi introduzido em uma micela.Exemplo 34Fabricação da micela
2,2 mg de paclitaxel e 55 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4OOo-OH foram dissolvidos em 10 ml de acetonitrila, e o solventefoi destilado sob pressão reduzida.
Uma película transparente permanecendo em uma parede devidro foi dissolvida em 30 ml de água a 40°C. Embora o paclitaxel sejainsolúvel em água, a película dissolveu em água completamente e a matériainsolúvel não separou no todo, o que indicou que ele foi introduzido em umamicela. A solução homogênea transparente foi filtrada com um filtro demembrana, e 25 mg de PEG4000 foram adicionados ao filtrado para secar porcongelamento o mesmo. A amostra secada por congelamento foi medida emD2O e dimetil sulfóxido-d^ (DMSOd6) por RMN de próton em 50 MHz. Noespectro obtido medindo no solvente D2O, somente um pico derivado dopróton de metileno de óxido de polietileno e um pico de próton derivado deágua existente no sistema foram observados em 3,8 ppm e 5,0 ppm,respectivamente. No espectro da mesma amostra em DMSO-d6, todos ospicos de próton derivados de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4000-OH e paclitaxel foram observados. Estes fatos são considerados como aseguir. Quando a amostra secada por congelamento foi re-dissolvida em D2O5ela dissolveu enquanto mantendo uma micela, somente o próton de metilenode óxido de polietileno existente externo à micela foi observado e umsegmento de depsipeptídeo e paclitaxel que existiam internos à micela nãoforam observados no espectro de RMN medido usando uma onda de rádiotendo energia de pico, enquanto quando a mesma amostra secada porcongelamento foi dissolvida em DMSO-dô, a micela foi destruída, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e paclitaxel formaram uma solução deDMSO em estados moleculares, e todos os prótons foram observados porRMN. Assim, pode ser afirmado que o espectro de RMN mostrou que umamicela composta de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH epictaxel foi formada.
Exemplo 35
Fabricação da micela
20 mg de metotrexato e 200 mg de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4OOo-OH foram dissolvidos em 30 ml de THF-metanol (1:1), eo solvente foi destilado sob pressão reduzida. 50 ml de água foramadicionados à película transparente restante para dissolver a mesma. Emborametotrexato seja quase insolúvel em água, a película dissolveu completamenteem água e a matéria insolúvel não separou no todo, o que indicou que ela foiintroduzida em uma micela. A solução homogênea transparente foi filtradacom um filtro de membrana, e 100 mg de PEG4000 foram adicionados aofiltrado para secar o mesmo por congelamento. A amostra secada porcongelamento foi medida em D2O e dimetil sulfóxido-d6 (DMSO-d6) emRMN de próton em 500 MHZ. No espectro obtido medindo no solvente D2O,somente um pico derivado do próton de metileno de óxido de polietileno e umpico de próton derivado de água existente no sistema foram observados em3m8 ppm e 5,0 ppm, respectivamente. No espectro da mesma amostra medidoem DMSO-d6, todos os picos de próton derivados de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e metotrexto foram observados. Assim, podeser afirmado que este espectro de RMN mostrou que uma micela composta deBoc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH e metotrexato foi formado.
Exemplo 36
Síntese de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-D-Ala-0-PEG4ooo-OH
20 g (5 mmol) de HO-PEG4000-OH foram dissolvidos em 300ml de tetraidrofurano (THF), e 4,3 g (15 mmol) de t-butoxicarbonil-D-alanina-D-hidroxissuccinato (Boc-D-Ala-ONSu) e 0,19 g (1,5 mmol) de 4-dimetilaminopiridina foram adicionados à solução resultante e agitados emtemperatura ambiente durante 3 dias. A solução obtida foi concentrada sobpressão reduzida, o óleo obtido foi dissolvido em 400 ml de diclorometano, ea solução resultante foi enxaguada com uma solução aquosa a 10% de ácidocítrico, uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio esolução salina saturada e secada sobre sulfato de sódio anidro. Quando asolução foi concentrada sob pressão reduzida e éter foi adicionado ao óleoobtido, ela cristalizou. O cristal foi dissolvido em THF quente, e éter foiadicionado para recristalizar o mesmo. O rendimento foi 20 g (92%). Quando20 g (4,6 mmol) de Boc-D-Ala-O-PEG4000-O-Ala-Boc foram tratados comHCl 4 M em dioxano e o solvente foi destilado sob pressão reduzida, oresíduo sólido foi obtido. Éter foi adicionado ao resíduo, e o cristal obtido foifiltrado. O espectro de RMN mostrou que este cristal era HCl.H-D-Ala-O-PEG-OH. O rendimento foi 17,6 g (93%). O cristal obtido foi tratado domesmo modo como no exemplo de referência 2 e exemplos 1 a 4 parasintetizar Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-D-Ala-0-PEG4ooo-OH.
Exemplo 37
Síntese de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Lyz (Z)-0-PEG4ooo-OH
20 g (5 mmol) de HO-PEG4000-OH foram dissolvidos em 300ml de tetraidrofurano (THF), e 7,2 g (15 mmol) de N-hidroxissuccinato de t-butoxicarbonil-benziloxicarbonil-L-lisina (Boc-Lys (Z) -ONSu) e 0,19 g (1,5mmol) de 4-dimetilaminopiridina foram adicionados à solução resultante eagitados em temperatura ambiente durante 3 dias. A solução obtida foiconcentrada sob pressão reduzida, o óleo obtido dissolvido em 400 ml dediclorometano, e a solução resultante foi enxaguada com uma solução aquosaa 10% de ácido cítrico, uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonatode sódio e solução salina saturada e secada sobre sulfato de sódio anidro.
Quando a solução foi concentrada sob pressão reduzida e éter foi adicionadoao óleo obtido, ela cristalizou. O cristal foi dissolvido em THF quente, e éterfoi adicionado para recristalizar o mesmo. O rendimento foi 21 g (89%).
Quando 18,9 g (4 mmol) de Boc-Lys (Z)-O-PEG400O-O-Lys (Z)-Boc foramtratados com HCl 4M em dioxano e o solvente foi destilado sob pressãoreduzida, o resíduo sólido foi obtido. Eter foi adicionado ao resíduo, e ocristal obtido foi filtrado. O espectro de RMN mostrou que este cristal foiHCl.H-Lys (Z)-O-PEG-OH. O rendimento foi 16,5 g (96%). O cristal obtidofoi tratado do mesmo modo como no exemplo de referência 2 e exemplos 1 a4 para sintetizar Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Lys (Z)-O-PEG4000-OH.
Exemplo 38
Síntese de (Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Asp (OEt)-O-PEG4000-OH
20 mg (5 mmol) de HO-PEG4000-OH foram dissolvidos em300 ml de tetraidrofurano (THF), e 5,4 g (15 mmol) de N-hidroxissuccinatode t-butoxicarbonil-etil-L-aspartato (Boc-Asp- (OEt)-ONSu) e 0,19 g (1,5mmol) de 4-dimetilaminopiridina foi adicionado à solução resultante eagitado em temperatura ambiente durante 3 dias. A solução obtida foiconcentrada sob pressão reduzida, o óleo obtido foi dissolvido em 400 ml dediclorometano, e a solução resultante foi enxaguada com uma solução a 10%de ácido cítrico, uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato desódio e solução salina saturada e secada sobre sulfato de sódio anidro.Quando a solução foi concentrada sob pressão reduzida e éter foi adicionadoao óleo obtido, ela cristalizou. O cristal foi dissolvido em THF5 e éter foiadicionado para recristalizar o mesmo. O rendimento foi 19 g (85%). Quando18 g (4,01 mmol) de Boc-Asp (OEt)-O-PEG4000-O-Asp (OEt)-Boc foramtratados com HCl 4M em dioxano e o solvente foi destilado sob pressãoreduzida, o resíduo sólido foi obtido. Éter foi adicionado ao resíduo, e ocristal obtido foi filtrado. O espectro de RMN mostrou que este cristal eraHCl. H-Asp (OEt)-O-PEG-OH. O rendimento foi 15,1 g (90%). O cristalobtido foi tratado do mesmo modo como no exemplo de referência 2 eexemplos 1 a 4 para sintetizar Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Asp (OEt)-O-PEG4000-OH.Exemplo 39
Teste de toxicidade pela administração intravenosa de dose única de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG^oo-OH em porquinhos-da-índia.15 Porquinhos-da-índia do sexo masculino, Hartley, que tinham
10 semanas de idade e pesavam 338 a 490 g foram usados. Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH (dose aplicada de 20 mg/kg) como umasubstância de teste, HO-PEG4000-OH (dose aplicada de 10 mg/kg) como umcontrole e solução salina fisiológica como um controle negativo foram20 usados. Estas substâncias foram dissolvidas em solução salina fisiológica emuma concentração predeterminada, submetidas a um tratamento ultra-sônico eesterilizadas por filtração com um filtro de membrana de 0,22 μηι. A soluçãosalina fisiológica também foi esterilizada por filtração com um filtro demembrana de 0,22 μηι. Solução salina fisiológica, HO-PEG4000-OH e Boc-25 (Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foram administrados nas veiasdas patas frontais de um grupo de 5 porquinhos-da-índia em uma dose de 1ml/kg, durante 1 minutos, e observados durante 24 horas. 1 mês após isto, ospesos dos porquinhos-da-índia foram medidos e as condições gerais dosporquinhos-da-índia foram observados uma vez por semana. Como umresultado, nenhum porquinho-da-índia morreu. Qualquer anormalidadeespecial nas condições gerais não foi vista nos porquinhos-da-índia. Nenhumamudança apreciável nos pesos foi observada. Entende-se disto que toxicidadepela administração intravenosa de dose única de Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH nos porquinhos-da-índia não foi observada.
Exemplo 40
Teste sobre a reação de anafilaxia sistêmica ativa (ASA) usando porquinhos-da-índia administrados com Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-
<formula>formula see original document page 56</formula>
Porquinhos-da-índia Hartley que tinham 7 semanas de idade e
pesavam 380 a 510 g foram usados. Para sensibilização dos animais, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-O-PEG4OOO-OH (dose aplicada de 10 mg/kg)como uma substância de teste, albumina ovo (dose aplicada d 10 mg/kg)como um controle positivo e solução salina fisiológica como um controlenegativo foram usados. Estas substâncias foram dissolvidas em solução salinafisiológica em uma concentração predeterminada, e a mesma quantidade deFCA (adjuvante completo de Freund) ou FI (adjuvante incompleto de Freund)foi adicionada para preparar uma emulsão w/o. A emulsão de FCA foiprimeiramente administrada e então a emulsão de FIA foi administrada sob apele da parte detrás da pata de cada porquinho-da-índia em uma dose de 2,5ml/kg na segunda e terceira semanas para sensibilização. Para uma reação deindução, Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH (dose aplicada de4,0 mg/kg) como uma substância de teste, albumina ovo (dose aplicada de 0,4mg/kg) como um controle positivo e solução salina fisiológica como umcontrole negativo foram usados. Estas substâncias foram dissolvidas emsolução salina fisiológica em uma concentração predeterminada. A soluçãoresultante foi administrada nas veias das patas frontais ou patas traseiras dosporquinhos-da-índia em uma dose de 1,0 ml/kg na quinta semana paraindução e observados durante 4 horas. Durante 1 mês após isto, os pesos dosporquinhos-da-índia foram medidos e as condições gerais dos porquinhos-da-índia foram observadas durante uma semana. Como para o número deanimais, 4 porquinhos-da-índia foram administrados com Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH, 3 porquinhos-da-índia foram administradoscom albumina ovo, e 3 porquinhos-da-índia foram administrados com soluçãosalina fisiológica. Como um resultado, os porquinhos-da-índia administradoscom Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH não mostraram umareação de anafilaxia. Qualquer anormalidade especial não foi observada nascondições gerais e pesos dos porquinhos-da-índia. Um sintoma de anafilaxiafoi observado em todos os porquinhos-da-índia como o controle positivo logoapós administração por indução. Entende-se disto que os porquinhos-da-índiaadministrados com Boc-(Leu-Leu-Ala-Lac)5-Leu-Phe-0-PEG4ooo-OH foramnegativos no teste de reação de anafilaxia sistêmica ativa (ASA) e nãoapresentaram antigenicidade.

Claims (22)

1. Copolímero em bloco biocompatível, caracterizado pelo fatode ter um segmento hidrofóbico composto de aminoácido e ácidohidroxicarboxílico e um segmento hidrofílico, composto de óxido depolialquileno, em que o terminal não ligado ao segmento hidrofílico dosegmento hidrofóbico é composto de uma unidade de aminoácido.
2. Copolímero em bloco biocompatível de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser representado pela seguintefórmula (1):<formula>formula see original document page 58</formula>em que R1 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila, grupoalquila substituído, ou grupo de proteção para grupo amino, R2 é a cadeialateral de aminoácido natural ou grupo derivado do mesmo, R3 é um átomo dehidrogênio, grupo alquila ou grupo alquila substituído, R4 é um átomo dehidrogênio ou grupo metila, R5 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila,grupo alquila substituído, resíduo de ligando, resíduo de ligando tendo umgrupo de copulação, ou grupo representado por<formula>formula see original document page 58</formula>η é um inteiro de 1 a 20, k é um inteiro de 1 a 6, m é um inteirode 1 a 20, ρ é um inteiro de 1 a 20, g é um inteiro de 0 a 20, e r é um inteiro de2 a 870.
3. Copolímero em bloco biocompatível de acordo com areivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o aminoácido é pelomenos um aminoácido selecionado dentre o grupo consistindo de alanina,valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, ácido glutâmico, ácido aspártico,lisina, arginina, e derivados nas cadeias laterais destes aminoácidos.
4. Copolímero em bloco biocompatível de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o ácidohidroxicarboxílico é pelo menos um ácido hidroxicarboxílico selecionadodentre o grupo consistindo de ácido glicólico, ácido láctico, ácidohidroxibutírico, ácido hidroxivalérico, ácido hidroxicapróico, e ácidohidroxicáprico.
5. Copolímero em bloco biocompatível de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o óxidode polialquileno do segmento hidrofílico é óxido de polietileno.
6. Copolímero em bloco biocompatível de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o pesomolecular médio número do óxido de polialquileno do segmento hidrofílico é-10.000 ou menor.
7. Copolímero em bloco biocompatível de acordo comqualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o óxidode polialquileno do segmento hidrofílico é um copolímero em bloco de poli(óxido de etileno / óxido de propileno).
8. Copolímero em bloco biocompatível de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o segmento hidrofóbico écomposto de um depsipeptídeo.
9. Copolímero em bloco biocompatível de acordo com areivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o ligando formando o resíduode ligando representado por R5 na fórmula (1) é lecitina, anticorpo, fragmentode anticorpo, hormônio, fator de adesão, transferrina ou ácido fólico.
10. Micela, caracterizada pelo fato de ter um núcleo internocompreendendo o segmento hidrofóbico do copolímero em blocobiocompatível como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, e umenvoltório externo compreendendo o segmento hidrofílico do copolímero embloco biocompatível.
11. Micela, caracterizada pelo fato de compreender ocopolímero em bloco biocompatível como definido em qualquer uma dasreivindicações 1 a 9, e uma droga, em que o núcleo interno da micelacompreende o segmento hidrofóbico e a droga e o envoltório externocompreende o segmento hidrofílico do copolímero em bloco biocompatível.
12. Particulado (excluindo uma micela), caracterizado pelofato de compreender o copolímero em bloco biocompatível como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 9 e uma droga.
13. Compósito (excluindo uma micela), caracterizado pelo fatode compreender o copolímero em bloco biocompatível como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 9 e uma droga.
14. Micela de acordo com a reivindicação 10 ou 11,caracterizada pelo fato de ter um diâmetro de partícula médio de 5 a 300 nm.
15. Micela, particulado ou compósito, de acordo com qualqueruma das reivindicações 11 a 14, caracterizados pelo fato de que a droga é umadroga antiinflamatória, defervescente, droga analgésica, droga antiartrítica/anti-reumática, droga antigota, restaurador cardíaco, droga antianginal, drogade bloqueio beta-adrenérgico, droga antagonista de cálcio, drogaantiarrítmica, diurético, anti-hipertensivo, droga para melhorar os distúrbiosde circulação periférica, droga antitrombogênica, droga anti-hiperlipêmica,droga anti-plaquetas, droga pressora, droga para melhorar o metabolismo decirculação cerebral, droga anti-câncer, droga imunossupressiva, drogaantialérgica, droga anti-histamina, broncodilatador, droga antiasmática, drogaantitussígena, expectorante, droga anti-úlcera, anti-diarrêico, anti-emético,anti-diabético, droga hipnótica/sedativa, droga anti-ansiedade, droga anti-psicótica, antidepressivo, droga anti-vertigem, droga anti-epiléptica, drogarelaxante muscular, droga anti-parkinsonismo, droga de efeito autonômico,antibiótico, droga anti-bacteriana, droga antifüngica, antiviral, anti-helmíntico, droga hormonal, droga evitando osteoporose e melhorando ometabolismo do osso, droga de vitamina, hemostático, droga de enzima,vacina, anestésico, produto diagnóstico, droga de contraste, droga de teste.
16. Micela, particulado ou compósito, de acordo com qualqueruma das reivindicações 11 a 14, caracterizados pelo fato de que a droga é umadroga hidrofóbica.
17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender a micela, particulado ou compósito como definida(o) emqualquer uma das reivindicações 11 a 14.
18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 17,caracterizada pelo fato de ser administrada como uma preparaçãoinjetável, oral, inalante, transdérmica, ou transmucosal.
19. Método para fabricar uma micela ou compósitocompreendendo uma droga, caracterizado pelo fato de que compreende aetapa de misturar um copolímero em bloco biocompatível tendo um segmentohidrofóbico composto de aminoácido e ácido hidroxicarboxílico e umsegmento hidrofílico composto de óxido de polialquileno com uma droga emágua.
20. Método para fabricar uma micela, particulado oucompósito, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de proveruma mistura de copolímero em bloco biocompatível tendo um segmentohidrofóbico composto de aminoácido e ácido hidroxicarboxílico e umsegmento hidrofílico composto de óxido de polialquileno, uma droga e umsolvente, e remover o solvente da mistura.
21. Uso de um copolímero em bloco biocompatível comodefinido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser em combinaçãocom uma droga em um corpo vivo.
22. Uso de um copolímero em bloco biocompatível comodefinido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser em combinaçãocom uma droga para a fabricação de uma micela, particulado ou compósito.
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