BRPI0618871A2 - composto, composição farmacêutica, e, uso de composto - Google Patents

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIçãO FARMACêUTICA, E, USO DE COMPOSTO. A invenção refere-se aos novos derivados de tiofeno, à sua preparação e ao seu uso como compostos farmaceuticamente aceitáveis. Os citados compostos particularmente atuam como agentes imunossupressores.

Description

"COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DE COMPOSTO"

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se aos agonistas de receptor S1P1/EDG1 de Fórmula (I) e ao seu uso como ingredientes ativos na preparação de composições farmacêuticas. A invenção também se refere aos aspectos relacionados incluindo processos para a preparação dos compostos, composições farmacêuticas contendo um composto de Fórmula (I), ao seu uso como compostos melhoradores da função vascular e como agentes imunomoduladores, quer sozinhos quer em combinação com outros compostos ativos ou terapias. Um outro aspecto da invenção refere-se aos novos compostos de Fórmulas (II) e (III) que servem como intermediários para preparar compostos de Fórmula (I).

Fundamentos da invenção

O sistema imune de humano está planejado para defender o corpo contra substâncias e microorganismos estranhos que causam infecção ou doença. Mecanismos regulatórios complexos garantem que a resposta imune seja selecionada contra o organismo ou substância intruso(a) e não contra o hospedeiro. Em alguns casos, estes mecanismos de controle estão desregulados e respostas autoimunes podem se desenvolver. Uma conseqüência da resposta inflamatória desregulada é dano severo em órgão, célula, tecido ou articulação. Com tratamento corrente, o sistema imune inteiro é normalmente suprimido e a capacidade do corpo para reagir às infecções também é severamente comprometida. Drogas típicas nesta classe incluem azatioprina, clorambucil, ciclofosfamida, ciclosporina, ou metotrexato. Corticosteróides que reduzem inflamação e suprimem a resposta imune, podem causar efeitos colaterais quando usados em tratamento de longa duração. Drogas antiinflamatórias não-estereoidais (NSAIDs) podem reduzir a dor e a inflamação, contudo, exibem efeitos colaterais consideráveis. Tratamentos alternativos incluem agentes que ativam ou bloqueiam a sinalização de citocina.

Compostos oralmente ativos com propriedades imunomoduladoras, sem comprometerem as respostas imunes e com efeitos colaterais reduzidos melhorariam significativamente os tratamentos correntes de doença inflamatória descontrolada.

No campo de transplante de órgãos a resposta imune do hospedeiro tem que ser suprimida para prevenir a rejeição de órgão. Recipientes de transplante de órgão podem experimentar alguma rejeição até mesmo quando estiverem tomando drogas imunossupressoras. Rejeição ocorre mais freqüentemente nas primeiras poucas semanas após o transplante, mas episódios de rejeição também podem ocorrer meses ou até mesmo anos após o transplante. Combinações de até três ou quatro medicamentos são comumente usadas para dar a proteção máxima contra rejeição ao mesmo tempo minimizando os efeitos colaterais. Drogas padrão correntes usadas para tratar a rejeição de órgãos transplantados interferem com as rotas intracelulares discretas na ativação de células brancas do sangue de tipo-B ou de tipo-T. Exemplos de tais drogas são ciclosporina, daclizumab, basiliximab, everolimus, ou FK506, com interferência com sinalização ou liberação de citocina; azatioprina ou leflunomida, que inibem a síntese de nucleotídeo; ou 15-desoxispergualina, um inibidor da diferenciação de leucócito.

Os efeitos benéficos de terapias imunossupressoras amplas relacionam-se com seus efeitos; contudo, a imunossupressão generalizada que estas drogas produzem diminui a defesa do sistema imune contra infecção e malignidades. Ademais, drogas imunossupressoras padrão são muitas vezes usadas em dosagens altas e podem causar ou acelerar dano de órgão.

Descrição da invenção

A presente invenção proporciona novos compostos de Fórmula (I) que são agonistas para o receptor acoplado em proteína G, S1P1/EDG1, e possuem um efeito imunossupressor poderoso e de longa duração que é alcançado pela redução do número de linfócitos-B/-T em circulação como um resultado do agonismo de S1P1/EDG1, possivelmente em combinação com a melhoria observada da função de camada de célula endotelial associada com a ativação de S1P1/EDG1, torna tais compostos úteis para tratar doença inflamatória descontrolada e para melhorar a funcionalidade vascular.

Os compostos da presente invenção podem ser utilizados sozinhos ou em combinação com drogas padrão inibidoras de ativação de célula-T, para proporcionar uma nova terapia imunossupressora com uma propensão reduzida para infecções quando comparada com a terapia imunossupressora padrão. Ademais, os compostos da presente invenção podem ser usados em combinação com dosagens reduzidas de terapias imunossupressoras tradicionais, por um lado para proporcionar a atividade imunossupressora efetiva, enquanto que por outro lado para reduz o dano de órgão final associado com doses mais altas de drogas imunossupressoras padrão. A observação de função de camada de célula endotelial melhorada associada com ativação de SIPl/EDGl proporciona benefícios adicionais de compostos para melhorar a função vascular.

A seqüência de nucleotídeos e a seqüência de aminoácidos para o receptor S1P1/EDG1 de humano são conhecidas na arte e estão publicadas em e.g.: Hla, T., e Maciag, T. J. Biol Chem. 265 (1990), 9308- 9313; WO 91/15583 publicada aos 17 de outubro de 1991; WO 99/46277 publicada aos 16 de setembro de 1999. A potência e a eficácia dos compostos de Fórmula (I) são avaliadas usando um ensaio de GTPyS para determinar os valores de EC5O e pela medição dos linfócitos circulantes em rato após a administração oral, respectivamente (veja em Exemplos).

i) A invenção refere-se aos novos tiofenos de Fórmula (I), <formula>formula see original document page 5</formula>

Formula (I)

Na qual

R1 representa metila, trifluorometila, ou etila; R2 representa hidrogênio, C1-4-alquila, metoxila, ou halogênio; R3 representa hidrogênio, C1_4-alquila, C1-4-alcoxila, ou halogênio; R4 representa hidrogênio, C1-4-alquila, ou halogênio; R5 representa hidrogênio; R6 representa hidrogênio ou hidroxila; no caso de R6 representar hidroxila, R5 pode em adição representar hidroxila;

η representa 0;

m representa 0 ou 1; e

no caso de m representar 1, η pode em adição representar 1;

e sais bem como complexos de solvente de tais compostos.

Os termos gerais usados aqui acima e abaixo possuem, dentro desta descrição, os seguintes significados, a não ser que sejam indicados de outra maneira:

Onde a forma plural for usada para compostos, sais, composições farmacêuticas, doenças e semelhantes, esta é intencionada para também significar um composto único, um sal único ou semelhante.

Qualquer referência aqui acima ou abaixo a um composto de Fórmula (I), (II) ou (III) é para ser entendido como também se referindo aos enantiômeros, às misturas de enantiômeros tais como racematos, diastereômeros, misturas de diastereômeros, e misturas de enantiômeros e diastereômeros tais como racematos diastereoméricos, bem como sais (especialmente sais farmaceuticamente aceitáveis) e complexos de solvente (incluindo hidratos) de tais compostos, e formas morfológicas, conforme apropriado e expediente.

O termo C1-4-alquila, sozinho ou em combinação com outros grupos, significa grupos de cadeia ramificada preferivelmente linear com um a quatro átomos de carbono, preferivelmente um a três átomos de carbono. Exemplos de grupos C1-4-alquila são metila, etila, n-propila, iso-propila, n- butila, iso-butila, sec-butila, e terc-butila.

O termo C1-4-alcoxila significa um grupo R-O, no qual R é uma C1-4-alquila. Exemplos preferidos de grupos C1-4-alcoxila são metoxila, etoxila, propoxila, e iso-propoxila.

O termo halogênio significa fluoro, cloro, bromo ou iodo, preferivelmente fluoro ou cloro.

Sais são preferivelmente os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (I).

Grupos formadores de sal são grupos ou radicais possuindo propriedades básicas ou ácidas. Compostos possuindo pelo menos um grupo básico ou pelo menos um radical básico, por exemplo amino, um grupo amino secundário não formador de uma ligação peptídica ou um radical piridila, podem formar sais de adição de ácido, por exemplo com ácidos inorgânicos. Quando vários grupos básicos estão presentes sais de adição de mono- e poli- ácido podem ser formados.

Compostos possuindo grupos ácidos, tais como grupo carboxila ou um grupo fenólico, podem formar sais de metal ou de amônio, tais como sais de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso, por exemplo sais de sódio, potássio, magnésio ou cálcio, ou sais de amônio com amônia ou aminas orgânicas adequadas, tais como monoaminas terciárias, por exemplo trietil-amina ou tri-(2-hidróxi-etil)-amina, ou bases heterocíclicas, por exemplo N-etil-piperidina ou Ν,Ν'-dimetil-piperazina. Misturas de sais são possíveis.

Compostos possuindo ambos grupos ácido e básico formam sais internos.

Para os propósitos de isolamento ou de purificação, bem como no caso de compostos que são usados adicionalmente como intermediários, também é possível usar os sais farmaceuticamente inaceitáveis, e.g. os picratos. Apenas sais farmaceuticamente aceitáveis, não-tóxicos podem ser usados para propósitos terapêuticos, contudo, e aqueles sais são portanto preferidos.

A expressão sais farmaceuticamente aceitáveis inclui sais com quer ácidos inorgânicos quer ácidos orgânicos como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfurico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido fosforoso, ácido nitroso, ácido cítrico, ácido fórmico, ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido lático, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido benzóico, ácido mandélico, ácido cinâmico, ácido palmóico, ácido esteárico, ácido glutâmico, ácido aspártico, ácido metano-sulfônico, ácido etano-sulfônico, ácido etano-dissulfônico, ácido p-tolueno-sulfônico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido trifluoro-acético, e semelhantes que são não- tóxicos para organismos vivos ou, no caso de composto de Fórmula (I) ser de natureza ácida, com uma base inorgânica como uma base de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso, e.g. hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio e semelhante. Para outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis, referência é feita a "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217.

Os compostos de Fórmula (I), (II) ou (III) podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos e podem ser preparados na forma de isômeros puros (preferidos) ou misturas de isômeros tais como misturas de diastereômeros, ou misturas de enantiômeros e diastereômeros tais como racematos diastereoméricos. A presente invenção inclui todas estas formas. Misturas podem ser separadas em uma maneira per se conhecida, e.g. por cromatografia em coluna, cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia líquida de desempenho alto (HPLC), ou cristalização.

ii) Uma modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade i), na qual R1 representa um grupo etila.

iii) Uma modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade i), na qual R1 representa um grupo metila.

iv) Uma modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade i), na qual R1 representa um grupo trifluorometila.

v) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a iv), na qual R2 representa um grupo metoxila, e R3 e R4 representam hidrogênio.

vi) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a iv), na qual R2 representa hidrogênio, e R3 e R4 representam C1-4-alquila.

vii) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade vi), na qual R3 e R4 representam um grupo metila.

viii) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade vi), na qual R3 e R4 representam um grupo etila.

ix) Uma modalidade particularmente preferida da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade vi), na qual R3 representa um grupo metila, e R4 representa um grupo etila. χ) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a iv), na qual R2 representa hidrogênio, R3 representa um grupo metoxila, e R4 representa um átomo de cloro.

xi) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a iv), na qual R2 representa hidrogênio, R3 representa um grupo metila, e R4 representa um átomo de cloro.

xii) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a xi), na qual R5 e R6 representa hidrogênio.

xiii) Outra modalidade particularmente preferida da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade xii), na qual η representa Oem representa 1.

xiv) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade xii), na qual η representa 1 e m representa 1.

xv) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a xi), na qual m representa 1, e R5 e R6 representam hidroxila.

xvi) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade xv), na qual η representa 0.

xvii) Outra modalidade particular da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com qualquer uma das modalidades i) a xi), na qual R5 representa hidrogênio, e R6 representar hidroxila.

xviii) Uma outra modalidade especial da invenção refere-se aos derivados de tiofeno de acordo com a modalidade i), na qual R1 representa trifluorometila, metila ou etila, R2, R5 e R6 representam hidrogênio, R3 e R4 representam C1-4-alquila, η representa 0, e m representa 1. xix) Compostos de tiofeno específicos de acordo com a Fórmula (I) são:

ácido 3-{4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propil]-2,6-dimetil-fenil}-propiônico;

ácido 3-{4-[3-(5,5-dimetil-3-trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propil]-2-etil-6-metil-fenil}-propiônico;

ácido 3 - { 2-etil-6-metil-4- [3 -oxo-3 -(3,5,5 -trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofen-1 -il)-propil]-fenil} -propiônico; e

ácido 3 - { 2-etil-4- [3 -(3 -etil-5,5 -dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propil]-6-metil-fenil}-propiônico.

xx) Um outro composto de tiofeno específico de acordo com a Fórmula (I) é ácido 3-{2,6-dimetil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-propil]-fenil}-propiônico.

xxi) Um outro aspecto da invenção refere-se aos tiofenos novos de Fórmula (II)

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Fórmula (II)

na qual R1, R2, R3, R45 R5, R6, nem são como definidos para a Fórmula (I) acima, e R7 representa hidrogênio, metila, etil, ou terc-butila;

e sais bem como complexos de solvente de tais compostos, xxii) Ainda outro aspecto da invenção refere-se aos novos tiofenos de Fórmula (III) <formula>formula see original document page 11</formula>

Fórmula (III)

na qual R1, R25 R3 e R4 são como definidos para a Fórmula (I) acima, e R representa hidrogênio, metila, etila, ou terc-butila;

e sais bem como complexos de solvente de tais compostos.

Os compostos de Fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser usados como medicamentos, e.g. na forma de composições farmacêuticas para administração enteral, parental ou tópica. Podem ser administrados, por exemplo, peroralmente, e.g. na forma de tabletes, tabletes revestidos, drágeas, cápsulas de gelatina mole e dura, soluções, emulsões ou suspensões, retalmente, e.g. na forma de supositórios, parenteralmente, e.g. na forma de ungüentos, cremes ou óleos.

A produção das composições farmacêuticas pode ser efetuada em uma maneira que será familiar para qualquer pessoa experiente na arte (veja por exemplo Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Preformulation and

Formulation, IHS Health Group, Englewood, CO, USA, 2001; Remington,

The Science and Practice of Pharmaey, 20 Edition, Philadelphia College of Pharmacy and Science) ao transformar os compostos de Fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis descritos, opcionalmente em combinação com outras substâncias terapeuticamente valiosas, em uma forma de administração galênica juntamente com materiais veículo líquidos ou sólidos farmaceuticamente aceitáveis, inertes, não-tóxicos e, se desejados, adjuvantes farmacêuticos usuais.

As composições farmacêuticas compreendendo um composto de Fórmula (I) são úteis para a prevenção e/ou o tratamento de doenças ou distúrbios associados com um sistema imune ativado.

Tais doenças ou distúrbios são selecionados do grupo consistindo de células, tecidos ou órgãos transplantados; doenças de hospedeiro-versus-enxerto ocasionadas por causa de transplante; síndromes autoimunes incluindo artrite reumatóide; lúpus eritematoso sistêmico; síndrome de antifosfolipídeo; tiroidite de Hashimoto; tiroidite linfocítica; esclerose múltipla; mistenia grave; diabetes de tipo I; uveíte; episclerite; esclerite; doença de Kawasaki, uveoretinite; uveite posterior; uveite associada com doença de Behcet; síndrome de uveomeningite; encefalomielite alérgica; vasculopatia de aloenxerto crônica; doenças autoimunes pós-infecciosas incluindo febre reumática e glomerulonefrite pós-infecciosa; doenças de pele inflamatórias e hiperproliferativas; psoríase; artrite psoriática; dermatite atópica; miopatia; miosite; osteomielite; dermatite de contato; dermatite eczematosa; dermatite seborréica; lichen planus; pênfigo; penfigóide bolhoso; epidermólise bolhosa; urticária; angioedema; vasculite; eritema; eosinofilia cutânea; acne; escleroderma; alopécia areata; queratoconjunctivite; conjunctivite vernal; queratite; queratite herpética; distrofia do epitélio da córnea; leucoma corneal; pênfigo ocular; úlcera de Mooren; queratite ulcerativa; esclerite; ofitalmopatia de Graves; síndrome de Vogt-Koyanagi- Harada; sarcoidose; alergias a pólen; doença obstrutiva reversível das vias aéreas; asma bronquial; asma alérgica; asma intrínseca; asma extrínseca; asma inveterada ou crônica; asma tardia e hiper-responsividade das vias aéreas; bronquiolite; bronquite; endometriose; orquite; úlceras gástricas; doenças intestinais isquêmicas; donenças intestinais inflamatórias; enterocolite necrosante; lesões intestinais associadas com queimadura térmica; doença celíaca; proctite; gastroenterite eosinofílica; mastocitose; doença de Crohn; colite ulcerativa; dano vascular causado por doenças isquêmicas e trombose; aterosclerose; coração adiposo; miocardite; infarto cardíaco; síndrome de aortite; caquexia devido à doença viral; trombose vascular; enxaqueca; rinite; eczema; nefrite intersticial; nefropatia induzida por IgA; síndrome de Goodpasture; síndrome urêmica-hemilítica; nefropatia diabética; glomerulosclerose; glomerulonefrite; nefrite tubulointersticial; cistite intersticial; miosite múltipla; síndrome Guillain-Barre; doença de Meniere;

polineurite; neurite múltipla; mielite; mononeurite; radiculopatia; hipertiroidismo; doença de Basedow; tirotoxicose; aplasia de célula vermelha pura; anemia aplásica; anemia hipoplásica; púrpura trombocitopênica idiopática; anemia hemolítica autoimune; trombocitopenia autoimune; agranulocitose; anemia perniciosa; anemia megaloblástica; aneritroplasia; osteoporose; pulmão fibróide; pneumonia intersticial idiopática; dermatomiosite; leucoderma vulgar; ictiose vulgar; sensibilidade fotoalérgica; linfoma de célula T cutânea; poliarterite nodosa; coréia de Huntington; coréia de Sydenham; miocardose; miocardite; escleroderma; granuloma de Wegener; síndrome de Sjogren; adipose; fascite eosinofílica; lesões de gingiva, periodôntio, osso alveolar, substância óssea dental; alopécia de padrão masculino ou alopécia senil; distrofia muscular; pioderma; síndrome de Sezary; hipofisite; insuficiência adrenal crônica; doença de Addison; lesão de reperfusão de isquemia de órgãos que ocorre sob preservação; choque de endotoxina; colite pseudomembranosa; colite causada por droga ou radiação; insuficiência renal aguda isquêmica; insuficiência renal crônica; câncer de pulmão; malignidade origem linfóide; leucemias linfocíticas agudas ou crônicas; linfoma; enfisema pulmona; catarata; siderose; retinite pigmentosa; degeneração macular senil; cicatriz vítrea; queima alcalina corneal; eritema de dermatite; dermatite ballous; dermatite de cimento; gengivite; periodontite; sepsia; pancreatite; doença de artéria periférica; carcinogênese; tumores de câncer sólidos; metástase de carcinoma; hipobaropatia; hepatite autoimune; cirrose biliar primária; colangite esclerosante; ressecção hepática parcial; necrose hepática aguda; cirrose; cirrose alcoólica; insuficiência hepática; insuficiência hepática fulminante; insuficiência hepática de início tardio; e insuficiência hepática "aguda-sobre-crônica".

Doenças ou distúrbios preferidos a serem tratados e/ou prevenidos com os compostos de Fórmula (I) são selecionados do grupo consistindo de rejeição de órgãos transplantados tais como rim, fígado, coração, pulmão, pâncreas, córnea, e pele; doenças de hospedeiro versus enxerto ocasionadas por transplante de célula-tronco; síndromes autoimunes incluindo artrite reumatóide; esclerose múltipla, doenças intestinais inflamatórias tais como doença de Crohn e colite ulcerativa, psoríase, artrite psoriática, tiroidite tal como tiroidite de Hashimoto, uveoretinite; doenças atópicas tais como rinite, conjuntivite, dermatite; asma; diabetes de tipo I; doenças autoimunes pós-infecciosas incluindo febre reumática e glomerulonefrite pós-infecciosa; metástase de tumor e cânceres sólidos.

Doenças ou distúrbios preferidos a serem tratados e/ou prevenidos com os compostos de Fórmula (I) são selecionados do grupo consistindo de rejeição de órgãos transplantados tais como rim, fígado, coração e pulmão; doenças de hospedeiro versus enxerto ocasionadas por transplante de célula-tronco; síndromes autoimunes selecionadas de artrite reumatóide; esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, doença de Crohn e tiroidite de Hashimoto; e dermatite atópica.

A presente invenção também se refere a um método para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou de um distúrbio aqui mencionado compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade farmaceuticamente efetiva de um composto de Fórmula (I).

Ademais, compostos de Fórmula (I) também são úteis, em combinação com um ou mais agentes imunomoduladores, para a prevenção e/ou o tratamento de doenças e distúrbios aqui mencionados. De acordo com uma modalidade preferida da invenção, os citados agentes são selecionados do grupo consistindo de imunossupressores, corticosteróides, NSAID's, drogas citotóxicas, inibidores de molécula de adesão, citocinas, inibidores de citocinas, antagonistas de receptor de citocina e receptores de citocina recombinantes.

A presente invenção também se refere ao uso de um composto de Fórmula (I) para a preparação de uma composição farmacêutica, opcionalmente para uso em combinação com um ou mais agentes imunomoduladores, para a prevenção ou o tratamento de doenças e distúrbios aqui mencionados.

A presente invenção também se refere às pró-drugas de um composto de Fórmula (I) que se convertem in vivo no composto de Fórmula (I) como tal. Qualquer referência a um composto de Fórmula (I) é portanto para ser entendida como também se referindo às pró-drogas correspondentes do composto de Fórmula (I), como apropriado e expediente.

Os compostos de Fórmula (I) podem ser preparados pelos métodos dados abaixo, pelos métodos dados nos Exemplos ou por métodos análogos. Condições de reação ótimas podem variar com os solventes ou reagentes particulares usados, mas tais condições podem ser determinadas por uma pessoa experiente na arte por procedimentos de otimização rotineiros.

Compostos de Fórmula (I) da presente invenção podem ser preparados de acordo com a seqüência geral de reação descrita abaixo. Apenas umas poucas possibilidades de síntese dando os compostos de Fórmula (I) são descritas.

<formula>formula see original document page 15</formula>

Estrutura 1

Os compostos de Fórmula (I) podem ser preparados pela reação de um composto de Estrutura 1 com uma base tal como LiOH aq., NaOH aq., KOH aq., etc. ou um ácido tal como HCl aq., TFA, etc. na presença ou na ausência de solventes adicionais tais como THF3 dioxano, DMF, DMSO, DCM etc. Compostos de Estrutura 1 podem ser preparados pela hidrogenação de um composto de Fórmula (II), ou no caso de η representar 0, m representar 1 e R5 e R6 representarem hidrogênio, por hidrogenação de um composto de Fórmula (III) na presença de um catalisador tal como Pd/C, Pt/C etc. em um solvente tal como metanol, etanol, THF etc., ou suas misturas.

<formula>formula see original document page 16</formula>

Estrutura 2 Estrutura 3 Estrutura 4

Compostos de Fórmula (II) podem ser preparados pela condensação de um composto de Estrutura 2 com um composto de Estrutura 3 na presença de HCl em um solvente tal como etanol, isopropanol, etc., ou suas misturas, ou na presença de NaOH, LiOH, ou KOH em um solvente tal como metanol, etanol, isopropanol, ou suas misturas, em temperaturas preferivelmente entre O0C e 70°C. Similarmente, um composto de Fórmula (III) pode ser preparado pela condensação de um composto de Estrutura 2 com um composto de Estrutura 4.

<formula>formula see original document page 16</formula>

Estrutura 5 Estrutura 6

Um composto de Estrutura 2 pode ser preparado pela reação de um composto de Estrutura 5, na qual R é metila, etila ou trifluorometila, com MeLi em um solvente tal como dietil-éter, ou THF ou suas misturas em temperaturas entre -20°C e 35°C. Alternativamente, um composto de Estrutura 2 também pode ser preparado pela reação de um composto de Estrutura 6, na qual R é metila, etila ou trifluorometila, com brometo de metil- magnésio, cloreto de metil-magnésio, ou iodeto de metil-magnéio. A amida de Weinreb de Estrutura 6 pode ser preparada pela reação de um ácido de Estrutura 5 com cloridrato de Ν,Ο-dimetil-hidroxil-amina na presença de um reagente copulante tal como EDC, DCC, etc. (Lit. e.g. M. Mentzel, Η. M. R. Hoffmann, Journal fuer Praktische Chemie/Chemiker-Zeitung 339 (1997), 517-524; J. Singh, N. Satyamurthi, I. S. Aidhen, Journal fuer Praktische Chemie (Weinheim, Germany) 342 (2000), 340-347; V. K. Khlestkin, D. G. Mazhukin, Current Organic Chemistry 7 (2003), 967-993).

Os compostos de Estrutura 5 podem ser preparados pela reação de um composto de Estrutura 7 com uma base aq. tal como Na OH aq., LiOH aq., KOH aq., etc. ou um ácido tal como HCl aq., TFA, etc. em um solvente tal como água, etanol, metanol, THF, etc., ou suas misturas.

<formula>formula see original document page 17</formula>

Estrutura 7

Os compostos de Estrutura 7 são preparados pelo tratamento de um composto de Estrutura 8 com uma base não-aquosa tal como NaOMe, NaOEt, KO-terc-Bu, DBU, etc. em um solvente tal como metanol, etanol, THF, DMF, etc., ou suas misturas, preferivelmente em temperaturas elevadas. <formula>formula see original document page 18</formula>

Os compostos de Estrutura 8 são preparados pelo tratamento de um composto de Estrutura 9 com um éster de ácido 2-mercapto-acético na presença de uma base tal como NaH, NaOEt, NaOMe, terc-butóxido de K, etc. em THF, dioxano, DMF5 etanol, metanol, etc., ou suas misturas. Em adição, os compostos de Estrutura 5 também podem ser preparados em um procedimento de três etapas em um-pote partindo de um composto de Estrutura 9 seguindo a seqüência de reação acima.

<formula>formula see original document page 18</formula>

Os compostos de Estrutura 9 são preparados pela reação de um composto de Estrutura 10 com um agente de cloração tal como cloreto de oxalila em um solvente tal como DCM, CHC1"3, THF, etc. (Lit. e.g. R. E. Mewshaw, Richard E. Tetrahedron Lett. 30 (1989), 3753-3756; F. A. Lakhvich, T. S. Khlebnikova, A. A. Akhrem, Zhurnal Organicheskoi KhimiilS (1989), 2541-2549). <formula>formula see original document page 19</formula>

Estrutura 10 Estrutura 9

Os compostos de Estrutura 10, na qual R representa hidrogênio, metila ou etila, podem ser preparados pela acilação do composto de Estrutura 11 com um agente de acilação apropriado tal como formiato de etila ou de metila, acetato de etila ou de metila, propionato de etila ou de metila, cloro-formiato de etila ou de metila, cloreto de acetila, etc. na presença de uma base tal como terc-butilato de K, NaOMe, NaH, LDA, etc. em um solvente tal como THF, tolueno, EtOH etc. em temperaturas entre 0 e 60°C. (Lit. e.g. Ch. Kashima, S. Shibata, H. Yokoyama, T. Nishio, Journal of Heterocyclic Chemistry 40 (2003), 773-782; I. Yavari, Issa; M. Bayat, Tetrahedron 59 (2003), 2001-2005; J. P. Konopelski, J. Lin, P. J. Wenzel, H. Deng, G. I. Elliott, B. S. Gerstenberger, Organie Letters 4 (2002), 4121-4124; C Wiles, P. Watts, S. J. Haswell, E. Pombo-Villar, Tetrahedron Letters 43 (2002), 2945-2948; R. Faure, A. Frideling, J.-P. Galy, I. Alkorta, J. Elguero, Heteroeycles 57 (2002), 307-316; via imina: M. Hammadi, D. Villemin, Synthetic Communications 26 (1996), 2901-2904).

<formula>formula see original document page 19</formula> Estruturall EstruturalO

O composto de Estrutura 11 é preparado de acordo com os procedimentos conhecidos por uma pessoa experiente na arte (Lit. e.g. Μ. E. Flaugh, T. A. Crowell, D. S. Farlow, Journal of Organic Chemistry 45 (1980), 5399-5400; Α. Μ. Badger5 Μ. J. Dimartino, C Κ. Mirabelli, Ε. Ν. Cheeseman, J. W. Dorman, D. Η. Picker, D. Α. Schwartz, Eur. Pat. Appl. EP 310321 Α2 (1989); Ν. R. Natale, R. Ο. Hutchins, Organic Preparations e Procedures International 9 (1977), 103-108; L Μ. Riee, Β. S. Sheth, J. W. Wheeler, Journal of Heterocyclic Chemistry 10 (1973), 731-735).

Em adição, os compostos de Estrutura 5, na qual R representa um grupo metila ou etila, são preferivelmente preparados a partir de um composto de Estrutura 5 na qual R representa hidrogênio (Estrutura 12) pela reação do último composto com um excesso de uma base forte tal como n- BuLi, terc-BuLi, LDA, etc. em um solvente tal como THF, dietil-éter, etc. seguido pelo agente de alquilação apropriado (e.g. iodeto de metila, iodeto de etila, Lit. e.g. W.-D. Liu, C-C Chi, I.-F. Pai, A.-T. Wu, W.-S. Chung, Journal of Organie Chemistry 67 (2002), 9267-9275; D. W. Knight, A. P. Nott, Tetrahedron Letters 21 (1980), 5051-5054; R. Raap, Canadian Journal of Chemistry 49 (1971), 2155-2157).

Os compostos de Estrutura 2 na qual R1 representa um grupo trifluorometila são preferivelmente preparados pela seqüência descrita abaixo. Conseqüentemente, o composto de Estrutura 12 é transformado em sua amida de Weinreb de Estrutura 13, que é iodada sob tratamento com uma base forte tal como LDA seguido pela adição de iodo em um solvente tal como THF em temperatura baixa (e.g. -78°C). O composto iodado de Estrutura 14 é reagido com clorodifluoro-acetato de metila como descrito na literatura (e.g. D. E. Nichols, S. Frescas, D. Marona-Lewicka, X. Huang, B. L. Roth, G. A. Gudelksy, J. F. Nash, J. Med. Chem. 37 (1994), 4346-4351) para dar o composto trifluorometilado de Estrutura 15. Treatmento do compoto de Estrutura 15 com um reagente de Grignard metilado ou metil-lítio dá o composto de Estrutura 2 na qual R1 representa um grupo trifluorometila. <formula>formula see original document page 21</formula>

Os seguintes esquemas ilustram as rotas de síntese para preparar os compostos de Estrutura 3 e 4.

<formula>formula see original document page 21</formula>

(Lit. e.g. F. Orsini, F. Pelizzoni, Synthetic Comm. 17 (1987), 1389-1402) <formula>formula see original document page 22</formula>

470-472; para brometo ou iodeto em vez de triflato veja e.g. V. P. Baillargeon, J. K. Stille, J. Am. Chem. Soe. 108 (1986), 452-461; M. J. Gomez-Escalonilla, F. Langa, J.-M. Rueff, L Oswald, J. F. Nierengarten, Tetrahedron Lett. 43 (2002), 7507-7511; H. Aust, D. Ickenroth, H. Meier, J. Prakt. Chem. 341 (1999), 523-528; Y. Li, B. He, B. Qin, X. Feng, G, Zhang, J. Org. Chem. 69 (2004), 7910-7913).

<formula>formula see original document page 22</formula>

(Lit. e.g. G. Battistuzzi, S. Cacchi, G. Fabrizi, Org. Lett. 5 (2003), 777-780; Ν. J. Lawrence, S. Brown, Tetrahedron 58 (2002), 613-619; D. J. Wardrop, M. S. Burge, Chem. Comm. 2004, 1230-1231)

<formula>formula see original document page 23</formula>

(Lit. e.g. Y. Li, B. He, B. Qin, X. Feng, G, Zhang, J. Org. Chem. 69 (2004), 7910-7913, T. Azemi, M. Kitamura, K. Narasaka, Tetrahedron 60 (2004), 1339-1344; A. Krasovskiy, P. Knochel, Angew. Chem. Int. Ed. 43 (2004), 3333-3336; Τ. P. Zabawa, D. Kasi, S. R. Chemler, J.Am. Chem. Soe. 127(2005), 11250-11251).

<formula>formula see original document page 23</formula>

(Lit. e.g. W. P. Gallagher, R. E. Maleczka, J. Org. Chem. 68 (2003), 6775-6779, A.-Y. Peng, Y.-X. Ding, J. Am. Chem. Soe. 125 (2003), 15006-15007). <formula>formula see original document page 24</formula>

(Lit. e.g. R. A. Fernandes, M. S. Bodas, P. Kumar, Tetrahedron 58 (2002), 1223-1227; V. Ρ. Baillargeon, J. Κ. Stille, J. Am. Chem. Soe. 108 (1986), 452-461).

Uma rota alternativa para preparar os compostos de Estrutura 1 é dada no esquema abaixo. Os compostos de Estrutura 17 são obtidos pela condensação de um composto de Estrutura 2 com um composto de Estrutura 16 sob condições quer básicas quer ácidas mencionadas acima. Os compostos de Estrutura 16 quer estão comercialmente disponíveis quer são preparados seguindo metodologia padrão conhecida por uma pessoa experiente na arte.

Tratamento de um composto de Estrutura 17 com e.g. anidrido trifluorometano-sulfônico na presença de uma base tal como trietil-amina ou piridina dá os compostos de Estrutura 18. Reação de copulação do tipo Heck catalisada por Pd de um composto de Estrutura 18 com um composto de Estrutura 19 dá o correspondente composto de Estrutura 20 (Lit. e.g. G.

Battistuzzi, S. Cacchi, G. Fabrizi, Org. Lett. 5 (2003), 777-780). Dependendo das condições de reação aplicadas, a funcionalidade álcool presente no caso onde R6 representa um grupo hidroxila requer proteção temporária. A ligação dupla presente no composto de Estrutura 20 pode ser então adicionalmente elaborada para o motivo desejado na Estrutura 1. Estas etapas são análogas àquelas descritas para a preparação de compostos de Estrutura 3 e 4 acima e assim podem incluir simples hidrogenação para obter o derivado saturado ou hidroxilação usando e.g. ΚΜηθ4 ou uma quantidade catalítica de OsC>4 na presença de N-metil-morfolina-N-óxido (NMO) depois do que segue a remoção redutiva do álcool benzílico (Lit. e.g. N. J. Lawrence, S. Brown, Tetrahedron 58 (2002), 613-619; D. J. Wardrop, M. S. Burge, Chem. Comm. 2004, 1230-1231). A reação de copulação cruzada também pode ser realizada com um alquino em vez de um alqueno (copulação de Sonogashira, e.g. W. P. Gallagher, R. E. Maleczka, J. Org. Chem. 68 (2003), 6775-6779; A.-Y. Peng, Y.-X. Ding, J. Am. Chem. Soe. 125 (2003), 15006-15007). O tal derivado de fenil-acetileno produzido pode ser então hidrogenado em um modo seqüencial ou de uma etapa para o correspondente composto saturado.

<formula>formula see original document page 25</formula>

Exemplos

Os seguintes exemplos ilustram a invenção mas não limitam o escopo da mesma.

Todas as temperaturas são enunciadas em °C. Compostos são caracterizados por 1H-NMR (300 MHz) ou 13C-NMR (75 MHz) (Varian Oxford; deslocamentos químicos são dados em ppm em relação ao solvente usado; multiplicidades: s = singleto, d = dubleto, t = tripleto, ρ = pentupleto, hex = hexeto, hept = hepteto, m = multipleto, br = largo, constantes de acoplamento são dadas em Hz); por LC-MS (Finnigan Navigator com HP 1100 Binary Pump e DAD, coluna: 4,6 mm x50 mm, Zorbax SB-AQ, 5 μιη, 120 A, gradiente: acetonitrila 5-95% em água, 1 min, com ácido trifluoro- acético 0,04%, fluxo: 4.5 mL/min), tR é dado em min; por TLC (placas-TLC da Merck, Gel de Sílica 60 F254); ou por ponto de fusão. Compostos são purificados por HPLC preparativa (condições de não enunciadas de outro modo: coluna: X-terra RPl8, 50 mm xl9 mm, 5 μηι, gradiente: acetonitrila 10-95% em água contendo 0,5 % de ácido fórmico) ou por MPLC (bomba Labomatic MD-80-100, detector Linear UVIS-201, coluna: 350 mm xl8 mm, Labogel-RP-18-5s-100, gradiente: metanol 10% em água a metanol 100%). Abreviações (como aqui usadas):

aq. aquoso

kPa quilopascal

BSA albumina de soro bovino

Bu butila

cat. catalítico

cc cromatografia em coluna

d dia(s)

DBU 1,8-diazabicilo[5.4.0]undec-7-eno

DCC diciclo-hexil-carbodiimida

DCM diclorometano

DIBAL hidreto de diisobutil-alumínio

DIPEA diisopropil-etil-amina, base de Hünig, etil-diisopropil-

amina

DMF dimetil-formamida

DMSO dimetil-sulfóxido

EA acetato de etila EDC N-(3 -dimetil-amino-propil)-N'-etil-carbodiimida

Et etila

h hora(s)

HPLC cromatografia líquida de desempenho alto

HV condições de vácuo alto

i-Prop isopropila

LC-MS cromatografia líquida - espectrometria de massa

LDA lítio- diisopropil-amida

Me metila

min minuto(s)

MPLC cromatografia líquida de pressão média

NMO N-metil-morfolina-N-óxido

NMP 1 -metil-2-pirrolidona

OAc acetato

OTMS trimetil-sililoxila

Ph fenila

prep. preparativa

p-TSOH ácido p-tolueno-sulfônico

rt temperatura ambiente

sat. saturado

SlP esfingosina 1-fosfato

TBTU tetrafluoroborato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,2,3,3-

tetrametil-urônio

Tf trifluorometano-sulfonila

TFA ácido trifluoro-acético

THF tetra-hidro-furano

TLC cromatografia em camada fina

TMSCN cianeto de trimetil-silila

tR tempo de retenção Núcleo Molecular A

a) Em uma solução de 4,4-dimetil-ciclo-hex-2-enona (50 g, 403 mmol) em EA (230 mL) uma suspensão de Pd/C (2.5 g, 10% Pd) em EA é adicionada. A suspensão é agitada na rt por 2 h sob 100 kPa de H2. O catalisador é filtrado e o solvente do filtrado é cuidadosamente evaporado para dar 4,4-dimetil-ciclo-hexanona (50 g) como um óleo incolor que lentamente cristaliza; 1H NMR (CDCI3): δ 2,34 (t, J = 6,4 Hz5 4H), 1,66 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 1,09 (s,6H).

b) Em uma solução gelada de Terc-butilato de K (24,5 g, 109 mmol, solução 50% em terc-butanol) em THF (700 mL), formiato de etila

(120 mL, 123 mmol) é lentamente adicionado. A mistura é agitada na rt por 30 min antes de uma solução de 4,4-dimetil-ciclo-hexanona (50 g, 396 mmol) em formiato de etila (50 mL) e THF (70 mL) ser adicionada durante um período de 20 min. Com adição completa, agitação é continuada a 15-20°C por 30 min. A suspensão laranja é derramada sobre uma solução aq. de ácido cítrico 10% (200 mL) e salmoura (200 mL) e extraída com EA (2x200 ml). Os extratos orgânicos são lavados com NaOH aq. 0,2 N e salmoura, secos sobre Na2SO4 e evaporados até a secura para dar 5,5-dimetil-2-oxo-ciclo- hexano-carbaldeído (52 g) como um óleo amarelo; LC-MS: tR = 0,89 min, [M+l+CH3CNl+= 196,15.

c) Em uma solução de 5,5-dimetil-2-oxo-ciclo-hexano- carbaldeído (51 g, 331 mmol) em clorofórmio (250 mL), cloreto de oxalila (40 mL, 465 mmol) é rapidamente adicionado. Após agitação por 3-4 min, gelo seguido por NaOH aq. 2 N (100 mL) é adicionado. A fase orgânica é separada e a fase aq. é extraída uma vez mais com clorofórmio. Os extratos orgânicos combinados são lavados com água e secos sobre Na2SO4. O solvente é removido em vácuo para dar 2-cloro-metileno-4,4-dimetil-ciclo- hexanona (50 g) como um óleo marrom; LC-MS: tR = 0,96 min.

d) Em uma parte (300 mL) de uma solução de sódio recém- preparada (21 g, 875 mmol) em etanol (500 mL), etil-éster de ácido mercapto- acético (50 mL) é adicionado. A solução resultante é adicionada durante um período de 10 min em uma solução de 2-cloro-metileno-4,4-dimetil-ciclo- hexanona (50 g, 290 mmol) em THF (170 mL). A mistura torna-se quente (50°C). Com adição completa, a parte restante da solução de sódio em etanol recém-preparada (200 mL) é adicionada na mistura reacional. A mistura é agitada na rt por 15 min antes de solução aq. de LiOH (300 mL) ser adicionada. A solução é refluxada por 3 h, então agitada na rt por 16 h. O THF e etanol são removidos sob pressão reduzida e a solução escura restante é extraída com heptano/EA 3:1 (2x200 mL). A fase aq. é acidulada pela adição de ácido cítrico (30 g) e HCl aq. 2 N (200 mL) e então extraída três vezes com EA. Os extratos orgânicos combinados são lavados três vezes com solução aq. sat. de NaHCOa, secos sobre Na2S04 e evaporados. O óleo marrom escuro resultante é dissolvido em acetonitrila a 60°C e cristalizado a 5°C Os cristais são coletados, lavados com acetonitrila e secos para dar ácido 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (31 g) como um pó ligeiramente verde; LC-MS: tR = 0,95 min, [M+1+CH3CN]+ = 252,18; 1H NMR (CDCl3): δ 7,15 (s, 1H), 3,05 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,47 (s, 2H), 1,58 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 0,97 (s, 6H).

Núcleo Molecular B

<formula>formula see original document page 29</formula>

1) Via Núcleo Molecular A A -78°C uma solução de ácido 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (5 g, 23,8 mmol) em THF é tratada com terc- butil-lítio (41 mL, 1,5 M em pentano). A mistura é agitada a -78°C por 15 min antes de iodeto de metila (17,1 g, 120 mmol) ser adicionado em gotas. Agitação é continuada a -78°C por 30 min. A mistura é aquecida para rt, diluída com água (400 mL), acidulada com solução aq. de ácido cítrico 10% e extraída três vezes com EA. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre MgSO4 e evaporados. O sólido restante é suspenso em heptano/dietil- éter, filtrado e seco sob HV para dar ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (4,01 g) como um pó bege; LC-MS: tR = 0,97 min; [M+l] = 225,13; 1H NMR (D6-DMSO): δ 12,49 (s br, 1H), 2,87 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,26 (s, 5H), 1,45 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 0,91 (s, 6H).

2) Rota direta partindo de 4,4-dimetil-ciclo-hexanona

a) Em uma suspensão de NaH (2,88 g, dispersão 60% em óleo mineral, 60 mmol) em tolueno (25 mL), EA (6,5 mL, 66 mmol) é adicionado. A mistura é agitada na rt por 5 min antes de uma solução de 4,4-dimetil-ciclo- hexanona (2,52 g, 20 mmol) em EA (6 mL) ser adicionada. A mistura é aquecida para 550C na qual inicia uma reação vigorosa. A suspensão branca a cinza torna-se laranja e fica transparente. A solução transparente é derramada em gelo/água e é extraída com EA. A fase aq. é acidulada para pH 4-5 e extraída uma vez mais com EA. Os extratos orgânicos combinados são secos sobre Na2SO4 e o solvente é removido em vácuo para dar 2-acetil-4,4-dimetil- ciclo-hexanona (2,00 g) como um óleo amarelo; 1H NMR (CDCl3): δ 2,35 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,12 (s, 2H), 2,10 (s, 1H), 1,48 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 0,98 (s, 6H).

b) A O°C, uma solução de 2-acetil-4,4-dimetil-ciclo-hexanona (5,00 g, 29,7 mmol) em clorofórmio (15 mL) é tratada com cloreto de oxalila (7,54 g, 59,4 mmol). A mistura é aquecida para 60°C e agitada por 15 min antes de ser derramada sobre água. A fase orgânica é separada, lavada com solução aq. sat. de NaHCO3 e salmoura, seca sobre MgSO4 e evaporada até a secura para dar 2-(1-cloro-etilideno)-4,4-dimetil-ciclo-hexanona bruta (3,2 g, contendo regio-isômero) como um óleo marrom, LC-MS: tR= 1,00 min.

c) Em uma mistura de NaOEt (10 mL de uma solução 2,5 M em etanol, 25 mmol) em THF (10 mL), etil-éster de ácido mercapto-acético (3,09 g, 25,7 mmol) seguido por uma solução da 2-(l-cloro-etilideno)-4,4- dimetil-ciclo-hexanona acima (3,2 g, 17,14 mmol) é adicionada. A solução resultante é agitada a 60°C por 45 min. A mistura é diluída com água e extraída com EA. O extrato orgânico é seco sobre Na2SO4, evaporado e purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano/tolueno e então heptano/EA para dar etil-éster de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[b]tiofeno-2-carboxílico (3,1 g) como um óleo marrom contendo o regio-isômero de etil-éster de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[b]tiofeno-2-carboxílico. Uma amostra analítica é purificada por HPLC prep. para dar etil-éster de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[b]tiofeno-2-carboxílico puro como um óleo incolor; LC-MS: tR = 1,13 min; [M+l] = 252,99; 1H NMR (CDCl3): δ 4,29 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,00 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,26 (s, 2H), 1,52 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,34 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 0,96 (s, 6H).

d) Em uma solução de etil-éster de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[b]tiofeno-2-carboxílico (3,0 g, 11,9 mmol) em etanol (100 mL), LiOH aq. 2 N (50 mL) é adicionado. A mistura reacional é agitada a 65°C por 2 h antes de o etanol ser removido em um rotavapor. A solução restante é extraída uma vez com heptano, acidulada com ácido cítrico para pH 2 e extraída três vezes com EA. Os extratos de EA são combinados, secos sobre Na2SO4, filtrados evaporados e secos para dar ácido 3,5,5-trimetil- 4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[b]tiofeno-2-carboxílico (1,6 g) como um sólido bege contendo o regio-isômero de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[b]tiofeno-2-carboxílico. LC-MS: tR = 0,98 min, [M+l] = 225,14. Núcleo Molecular C

<formula>formula see original document page 32</formula>

Em uma solução fria (-78°C) de ácido 5,5-dimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-1-carboxílico (960 mg, 4,57 mmol) em THF (19 mL), terc-butil-lítio (8 mL, solução 1,5 M em pentano) é adicionada. A mistura é agitada a -78°C por 10 min antes de iodeto de etila (3,80 g, 24,37 mmol) ser adicionado. A mistura reacional é agitada a -78°C por 3 h. Agua/metanol 1:1 (8 mL) seguido por solução aq. de ácido cítrico 10% são adicionados e a mistura é extraída com EA. Os extratos orgânicos combinados são lavados com salmoura, secos sobre Na2SCU e evaporados. O sólido restante é suspenso em acetonitrila (6 mL), aquecido para 60°C, esfriado para rt, filtrado e seco para dar ácido 3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofeno-1-carboxílico (640 mg) como sólido ligeiramente bege; LC- MS:tR =1,01 min, [M+l +CH3CN] = 280,10.

Núcleo Molecular D

<formula>formula see original document page 32</formula>

Em uma suspensão de ácido 3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (4,10 g, 18,28 mmol) em dietil-éter (300 mL), metil-lítio (23 mL, solução 1,6 M em dietil-éter) é lentamente adicionada na rt. A mistura reacional torna-se transparente, amarela e ligeiramente quente (26°C), e é agitada por 15 min antes de a reação ser interrompida com água. A camada orgânica é separada, lavada uma vez mais com água, seca sobre MgSO4 e evaporada. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano:EA 4:1 para dar 1-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1-il)-etanona (2,80 g) como um sólido cristalino amarelo pálido; LC-MS: tR = 1,06 min; [M+l] = 223,17; 1H NMR (CDCl3): δ 3,00 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 2H), 1,51 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 0,95 (s, 6H).

Núcleo Molecular E

Em uma solução de ácido 3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (2,10 g, 8,81 mmol) em dietil-éter (100 mL), uma solução de metil-lítio (11 mL, solução 1,6 M em dietil-éter) é adicionada na rt. A solução amarela pálida é agitada na rt por 15 min antes de outra porção de metil-lítio (2 mL) ser adicionada. Agitação é continuada por 15 min, uma porção adicional de metil-lítio (1 mL) é adicionada, e a mistura é de novo agitada por 15 min na rt. A reação é interrompida com água. A camada orgânica é separada, lavada uma vez mais com água, seca sobre MgSO4 e evaporada. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano:EA 7:3 para dar l-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- 15 benzo[c]tiofen-l-il)-etanona (1,65 g) como um sólido amarelo pálido; LC- MS: tR = 1,00 min; [M+l] = 237,15; 1H NMR (CDCl3): δ 3,03 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,73 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,31 (s, 2H), 1,55 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,28 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 0,97 (s, 6H).

Núcleo Molecular F

<formula>formula see original document page 33</formula>

a) Em uma solução de ácido 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (20 g, 95 mmol) em DMSO (150 mL) é adicionado cloridrato de Ν,Ο-dimetil-hidroxil-amina (12,06 g, 124 mmol) e DIPEA (65 mL, 380 mmol) seguido por TBTU (33,59 g, 105 mmol, dissolvido em DMF (70 mL)). A mistura reacional é agitada na rt por 2 h antes de ser derramada em água/gelo e extraída duas vezes com dietil-éter (2x100 mL). Os extratos orgânicos são lavados com solução aq. sat. de NaHCC>3, solução aq. de ácido cítrico 10% e salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados, evaporados e secos para dar metóxi-metil-amida de ácido 5,5- dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (23 g) como um óleo marrom; LC-MS: tR = 1,01 min, [M+l] = 254,14.

b) Em uma solução de diisopropil-amina (11,02 g, 109 mmol) em THF (400 mL) é adicionado n-butil-lítio (72,7 mL, 109 mmol, 1,5 M em pentano) a 0-5°C. A solução é esfriada para -78°C e uma solução de metóxi- metil-amida de ácido 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l- carboxílico (23 g, 91 mmol) em THF (100 mL) é adicionada. Com adição completa, a mistura é agitada por 20 min a -78°C antes de uma solução de iodo (30 g, 119 mmol) em THF (100 mL) ser adicionada. Agitação é continuada a -78°C por 30 min. A reação é interrompida pela adição lenta de uma mistura 1:1 de água/metanol (20 mL). A solução é diluída com água (400 mL) e extraída com dietil-éter (3x100 mL). Os extratos orgânicos combinados são lavados com solução aq. de ácido cítrico 10% e salmoura, secos sobre Na2SO4, filtrados e evaporados. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com DCM para dar metóxi-metil-amida de ácido 3-iodo- 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l -carboxílico (18 g) como um óleo acastanhado; LC-MS: tR = 1,09 min, [M+l] = 380,21.

c) Metóxi-metil-amida de ácido 3-iodo-5,5-dimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l -carboxílico (18 g, 47 mmol), CuI (14,5 g, 76 mmol) e KF (4,4 g, 76 mmol) são dissolvidos em DMF (80 mL). A solução é aquecida para 134°C e clorodifiuoro-acetato de metila (16,26 g, 113 mmol) é adicionado via bomba de seringa durante um período de 4 h. Evolução de gás é observada. Com adição completa, a mistura é esfriada e derramada em água/gelo. O precipitado que forma é coletado, suspenso em DCM (600 mL), e filtrado através de uma camada de celite. O filtrado é lavado com HCl aq. 0,5 N (250 mL), seguido por solução aq. sat. de NaHCO3, seco sobre Na2SO4, filtrado e evaporado para dar metóxi-metil-amida de ácido 5,5-dimetil-3- trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (14 g) como um óleo marrom; LC-MS: tR = 1,10 min, [M+1] = 322,20.

d) Uma solução de metóxi-metil-amida de ácido 5,5-dimetil-3- trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofeno-l-carboxílico (14 g, 44 mmol) em dietil-éter (400 mL) é tratada na rt com metil-lítio (80 mL, 1,6 M em dietil-éter). Com adição completa, a mistura é agitada na rt por 15 min antes de ser derramada sobre água/gelo e neutralizada com aq. HCl. A fase de éter é separada e a fase aq. é extraída duas vezes mais com dietil-éter (2x100 mL). Os extratos orgânicos são lavados com salmoura, secos sobre MgSO4, filtrados e evaporados. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano contendo 20-30% de DCM para dar l-(5,5- dimetil-3-trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-etanona (9,1 g) como um óleo amarelo; LC-MS: tR = 1,11 min; [M+1+CH3CN] - 318,34; 1H NMR(CDCl3): δ 3,04 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,57 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 2,53 (s, 3H), 1,58 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 0,99 (s, 6H).

Bloco de Construção A

<formula>formula see original document page 35</formula>

a) Em uma solução de 4-hidróxi-3,5-dimetil-benzaldeído (5,0 g, 33,3 mmol) em DCM (50 mL) e piridina (8 mL), anidrido trifluorometano- sulfônico (6 mL, 36,6 mmol) é lentamente adicionado a 0°C. Com adição completa, agitação é continuada por 2 h na rt. A mistura reacional é diluída com EA e lavada três vezes com água. A camada orgânica separada é seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano:EA 4:1 para dar 4-formil-2,6-dimetil- fenil-éster de ácido trifluorometano-sulfônico (5,3 g) como um sólido ligeiramente amarelo; LC-MS: tR = 1,04 min; 1H NMR (CDCl3): δ 9,97 (s, 1 H), 7,66 (s, 2H), 2,48 (s, 6H).

b) Em uma solução agitada de 4-formil-2,6-dimetil-fenil-éster de ácido trifluorometano-sulfônico (4,7 g, 16,7 mmol) em DMF seca (75 mL) sob argônio são seqüencialmente adicionados na rt trietil-amina (3,4 g, 33,3 mmol), acrilato de metila (14,3 g, 167 mmol), l,3-bis-(difenil-fosfino)- propano (378 mg, 0,92 mmol) e Pd(OAc)2 (187 mg, 0,83 mmol). A mistura é aquecida para 115°C e agitada por 5 h. A mistura é diluída com dietil-éter (350 mL) e lavada duas vezes com HCl aq. 1 N e uma vez com NaHCO3 aq. sa.. O extrato orgânico é seco sobre MgS04, filtrado e evaporado. O resíduo é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com heptano:EA 5:1 para dar metil-éster de ácido 3-(4-formil-2,6-dimetil-fenil)-acrílico (2,9 g) como um sólido ligeiramente amarelo; LC-MS: tR = 0,96 min.

c) Em uma solução de metil-éster de ácido 3-(4-formil-2,6- dimetil-fenil)-acrílico (2,9 g, 13,3 mmol) em metanol (70 mL), NaOH aq. 2 N (35 mL) é adicionado. A suspensão é agitada por 30 min na rt. Metanol é evaporado e solução aq. é extraída duas vezes com DCM. A camada aq. é acidulada com HCl aq. 2 N e extraída duas vezes com EA. Os extratos combinados de EA são secos sobre MgSO^ filtrados e evaporados. O produto bruto é recristalizado em EA para dar ácido 3-(4-formil-2,6-dimetil-fenil)- acrílico (2,2 g) como cristais amarelos pálidos; LC-MS: tR = 0,83 min; 1H NMR (D6-DMSO): δ 12,65 (s br, 1H), 9,92 (s, 1 H), 7,66 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,61 (s, 2H), 6,12 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,35 (s, 6H).

Bloco de Construção B

<formula>formula see original document page 36</formula>

a) Em uma solução de ácido 3-(4-formil-2,6-dimetil-fenil)- acrílico (2,2 g, 10,8 mmol) e DIPEA (2,0 mL, 11,9 mmol) em etanol (80 mL), Pd/C (200 mg, Pd 10%, umedecido com 50% água) é adicionado. A suspensão é vigorosamente agitada sob 100 kPa de H2 por 1 h. A mistura é filtrada sobre Celite e o filtrado é evaporado. O resíduo é derramado sobre HCl aq. 1 N/gelo e extraído com EA. O extrato orgânico é lavado uma vez com HCl aq. 1 N e uma vez com salmoura, seco sobre MgSC^, filtrado e evaporado para dar ácido 3-(4-hidróxi-metil-2,6-dimetil-fenil)-propiônico (2,2 g) como uma resina amarela pálida; LC-MS: tR = 0,71 min.

b) Em uma solução de ácido 3-(4-hidróxi-metil-2,6-dimetil- fenil)-propiônico (960 mg, 4,6 mmol) em ácido acético (20 mL), MnO2 (1440 mg, 16,6 mmol) é adicionado. A mistura é agitada na 80°C por 4,5 h antes de ser filtrado. O filtrado é evaporado e o produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com DCM contendo 8% de metanol para dar ácido 3-(4-formil-2,6-dimetil-fenil)-propiônico (800 mg) como um sólido bege; LC- MS: tR = 0,81 min; 1H NMR (D6-DMSO): δ 12,2 (s br, 1 H), 9,86 (s, 1 H), 7,52 (s, 2H), 2,93-2,85 (m, 2H), 2,38-2,30 (m, 8H).

Bloco de Construção C

Ácido 3-(2-etil-4-formil-6-metil-fenil)-acrílico é preparado analogamente ao Bloco de Construção A; LC-MS: tR = 0,87 min; 1H NMR (CDCl3): δ 9,98 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,59 8s, 1H), 6,13 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 2,75 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,42 (s, 3H), 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Bloco de Construção D

Ácido 3-(2-etil-4-formil-6-metil-fenil)-propiônico é preparado analogamente ao Bloco de Construção B partindo de Bloco de Construção C; LC-MS: tR = 0,86 min; 1H NMR (CDC13): δ 9,93 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 3,11-3,04 (m, 2H), 2,75 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,56-2,50 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Intermediário 1

<formula>formula see original document page 38</formula>

Uma solução de 1-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1-il)-etanona (400 mg, 1,69 mmol), ácido 3-(4-formil-2,6- dimetil-fenil)-propiônico (419 mg, 2,03 mmol) e NaOH (1,7 g, 42,5 mmol) em metanol (17 mL) é agitada a 750C por 75 min antes de ser diluída com HCl aq. 1 N e extraída duas vezes com EA. Os extratos orgânicos são secos sobre MgSO^ filtrados e evaporados. O produto bruto é purificado por CC sobre gel de sílica eluindo com DCM contendo 6% de metanol para dar ácido 3-{4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-1 -il)-3-oxo- propenil]-2,6-dimetil-fenil}-propiônico (620 mg) como um sólido amarelo pálido; LC-MSitR= 1,17 min; [M+1] = 425,34; 1H NMR(CDC13): δ 7,68 (d, J = 15,8 Hz, 1 H), 7,28 (s, 2H), 7,27 (d, J = 15,8 Hz, 1 H)„3,18 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,06-2,98 (m, 2H), 2,78 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,54-2,48 (m, 2H), 2,39 (s, 6H), 2,34 (s, 2H), 1,58 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,32 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Intermediário 2A

<formula>formula see original document page 38</formula> Uma solução de l-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-l-il)-etanona (143 mg, 0,606 mmol) e ácido 3-(2-etil-4-formil- 6-metil-fenil)-propiônico (200 mg, 0,908 mmol) em etanol (15 mL) é tratada com HCl 5 N em isopropanol (3 mL). A mistura reacional marrom escura é agitada na rt por 3 h, então a 5O0C por 48 h antes de DIPEA (4 mL) ser adicionada. O solvente é removido em vácuo e o produto bruto é purificado por HPLC prep. (Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30 mm x75 mm, 10 μηι, acetonitrila/água (HCOOH 0,5%), acetonitrila 10% a 95%) para dar etil-éster de ácido 3- {2-etil-4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen- l-il)-3-oxo-propenil]-6-metil-fenil}-propiônico (157 mg) como um óleo amarelo; LC-MS: tR = 1,27 min, [M+l] = 467,43.

Intermediário 2B

<formula>formula see original document page 39</formula>

Uma solução de l-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo [c]tiofen-l-il)-etanona (200 mg, 0,846 mmol) e ácido 3-(2-etil-4-formil- 6-metil-fenil)-acrílico (203 mg, 0,931 mmol) em NaOH metanólico (8 mL, 10 g NaOH em 100 mL metanol) é agitada na rt por 3 h antes de ser cuidadosamente acidulada para pH 1 pela adição de HCl aq. 2 Ν. A mistura é extraída duas vezes com DCM e os extratos orgânicos são lavados com água e salmoura, secos sobre MgS04, filtrados e evaporados. O produto bruto é cristalizado em acetonitrila (40 mL) para dar ácido 3- {2-etil-4-[3-(3-etil-5,5- dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propenil]-6-metil- fenil}-acrílico (222 mg) como cristais amarelos. Do licor-mãe uma segunda colheita (29 mg) de produto pode ser obtida após purificação por HPLC prep. (Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30mm x7 5 mm, 10 μm, acetonitrila/água (HCOOH 0,5%), acetonitrila 20% a 95%); LC-MS: tR = 1,20 min, [M+l] = 437,31.

Intermediário 3

Ácido 3-{2-etil-6-metil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-propenil]-fenil}-acrílico é preparado a partir de l-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l -il)-etanona e ácido 3- (2-etil-4-formil-6-metil-fenil)-acrílico analogamente ao Intermediário 2B; LC-MS: tR = 1,17 min; [M+l] = 423,34; 1H NMR (CDCl3): δ 7,97 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 7,33 (s, 2H), 7,28 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 3,16 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,77 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,32 (s, 2H), 1,57 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,00 (s, 6H).

Intermediário 4

Etil-éster de ácido 3-{4-[3-(5,5-Dimetil-3-trifluorometil- 4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propenil]-2-etil-6-metil-fenil}- propiônico é preparado analogamente ao Intermediário 2A partindo de Núcleo Molecular F e Bloco de Construção D; LC-MS: tR = l,29min, [M+l] = 506,68. Intermediário 5

<formula>formula see original document page 41</formula>

Ácido 3-{2,6-dimetil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-propenil]-fenil}-acrílico (570 mg) é obtido pela condensação de Núcleo Molecular D (415 mg, 1,87 mmol) com Bloco de Construção B (381 mg, 1,87 mmol) analogamente ao Intermediário 2B; LC- MS: tR = 1,17 min, [M+l ] = 409,21. Exemplo 1

<formula>formula see original document page 41</formula>

Em uma solução de ácido 3-{4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propenil]-2,6-dimetil-fenil}-propiônico (610 mg, 1,44 mmol) e DIPEA (204 mg, 1,58 mmol) em etanol (30 mL) é adicionado Pd/C (300 mg, Pd 10%, umedecido com 50% água). A lama é agitada na rt por 18 h sob 101,325 kPa de H2. A mistura é filtrada e o filtrado é evaporado. O produto bruto é purificado por HPLC prep. (Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30 mm χ 7 5 mm, 10 μιη, acetonitrila/água (HCOOH 0,5%), acetonitrila 20% a 95%) para dar ácido 3-{4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7- tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propil]-2,6-dimetil-fenil}-propiônico (460 mg) como um liofilisado incolor; LC-MS: tR = 1,15 min; [M+l] = 427,40; 1H NMR (CDCl3): δ 6,91 (s, 2H), 3,10-2,90 (m, 8H), 2,73 (q, J = 7,6 Hz, 2Η), 2,53-2,46 (m, 2Η), 2,32 (s, 6Η), 2,30 (s, 2Η), 1,54 (t, J = 7,0 Hz, 2Η), 1,28 (t, J = 7,6 Hz, 3Η), 0,97 (s, 6Η).

Exemplo 2

<formula>formula see original document page 42</formula>

a) Em uma solução de etil-éster de ácido 3-{2-etil-4-[3-(3-etil- 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propenil]-6-metil- fenil}-propiônico (153 mg, 0,328 mmol) em etanol, Pd/C (80 mg, Pd 10%, umedecido com 50% de água) é adicionado e a lama resultante é agitada na rt por 72 h sob 100 kPa de H2. A mistura reacional é filtrada e o filtrado é evaporado. O produto bruto é purificado por HPLC prep. (Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30 mm x 7 5 mm, 10 μm, acetonitrila/água (HCOOH 0,5%), acetonitrila 20% a 95%) para dar etil-éster de ácido 3-{2-etil-4-[3-(3-etil-5,5- dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propil]-6-metil-fenil}- propiônico (95 mg) como um sólido amorfo; LC-MS: tR = 1,26 min,[M+l]= 469,40.

b) Uma solução de etil-éster de ácido 3-{2-etil-4-[3-(3-etil-5,5- dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propil]-6-metil-fenil}- propiônico (92 mg, 0,196 mmol) em etanol (2 mL) é tratada com NaOH aq. 2 N (2 mL). A solução é agitada na rt por 1 h antes de o solvente ser removido em vácuo. O resíduo é dissolvido em HCl aq. 2 N, e extraído com EA. O extrato orgânico é lavado com salmoura, seco sobre Na2SO4, filtrado e evaporado para dar ácido 3-{2-etil-4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propil]-6-metil-fenil}-propiônico como um sólido amorfo; LC-MS: tR = 1,16 min; [M+1] = 441,36; 1H NMR (CDCl3): δ 6,95 (s, 1Η), 6,93 (s, 1Η), 3,12-2,94 (m, 8Η), 2,74 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,66 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,56-2,48 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,32 (s, 2H), 1,56 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,29 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Exemplo 3

<formula>formula see original document page 43</formula>

Em uma solução de ácido 3-{2-etil-6-metil-4-[3-oxo-3-(3,5,5- trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[c]tiofen-l-il)-propenil]-fenil}-acrílico (Intermediário 3; 340 mg, 0,805 mmol) e DIPEA (182 mg, 1,41 mmol) em etanol, Pd/C (340 mg, Pd 10%, umedecido com 50% água) é adicionada e a lama resultante é agitada a 50°C por 72 h sob 1.000 kPa de H2. Outra porção de Pd/C é adicionada e agitação é continuada por 16 h a 50°C sob 1.000 kPa de H2. A mistura reacional é filtrada e o filtrado é evaporado. O produto bruto é purificado por HPLC prep. (Grom-Sil 120 ODS-4-HE, 30 mm χ 75 mm, 10 μηι, acetonitrila/água (HCOOH 0,5%), acetonitrila 20% a 95%) para dar ácido 3 - { 2-etil-6-metil-4- [3 -oxo-3 -(3,5,5 -trimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-l-il)-propil]-fenil}-propiônico (154 mg) como uma espuma incolor; LC-MS:tR= 1,15 min, [M+l] = 427,30.

Exemplo 4

<formula>formula see original document page 43</formula> Ácido 3-{4-[3-(5,5-dimetil-3-trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1 -il)-3 -oxo-propil] -2-etil-6-metil-fenil} -propiônico é preparado analogamente ao Exemplo 2 partindo de Intermediário 4; LC-MS: tR = 1,17 min, [M+l] - 481,36.

Exemplo 5

<formula>formula see original document page 44</formula>

Ácido 3-{2,6-dimetil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofen-1 -il)-propil]-fenil} -propiônico (430 mg) é obtido partindo de Intermediário 5 (548 mg, 1,34 mmol) analogamente ao Exemplo 3; LC-MS: tR = 1,13 min; [M+l] = 413,34; 1H NMR (CDCl3): δ 0,97 (s, 6 H), 1,53 (t, J= 6,7 Hz, 2 H), 2,28 (s, 2H), 2,32 (s, 6H), 2,33 (s, 3H), 2,45-2,54 (m, 2 H), 2,89-2,99 (m, 4 H), 2,99-3,10 (m, 4 H), 6,91 (s, 2 H).

Exemplo 6: Ensaio de GTPyS para determinar valores de EC50

Ensaios de ligação de GTPyS são realizados em placas de microtítulo de 96 cavidades (Nunc. 442587) em um volume final de 200 ^L, usando preparações em membrana de células CHO expressando receptor SlPl recombinante de humano. As condições de ensaio são Hepes 20 mM (Fluka, 54461), NaCl 100 mM (Fluka, 71378), MgCl2 5 mM (Fluka, 63064), BSA 0,1% (Calbiochem, 126609), GDP 1 μΜ (Sigma, G-7127), DMSO 2,5% (Fluka, 41644), 35S-GTPyS 50 pM (Amersham Biosciences, SJ1320). O pH é 7,4. Os compostos de teste são dissolvidos e diluídos em DMSO 100% e pré- incubados na temperatura ambiente por 30 min em 150 μL, de tampão de ensaio acima, na ausência de 35S-GTPyS. Após adição de 50 μL de 35S-GTPyS, o ensaio é incubado por 1 h na rt. O ensaio é terminado por transferência da mistura reacional para uma placa Multiscreen (Millipore5 MAHFC1H60) usando um coletor de células de Packard Biosciences, e as placas são lavadas com Na2HPO4/NaH2PO4 10 mM (70%/30%) gelado, secas, vedadas no fundo e, após adição de 25 μL. de MicroScint20 (Packard Biosciences, pedido de n. 6013621), vedadas sobre o topo. S-GTPyS ligado em membrana é medido com um TopCount de Packard Biosciences.

EC50 é a concentração de agonista induzindo 50% de ligação máxima específica de 35S-GTPyS. Ligação específica é determinada pela subtração de ligação não-específica da ligação máxima. Ligação máxima é a quantidade de cpm ligado na placa Multiscreen na presença de 10 μΜ de SIP. Ligação não-específica é a quantidade de ligação na ausência de um agonista no ensaio.

Tabela 1 mostra o valor de EC50 de um composto da presente invenção. O valor de EC5O foi determinado de acordo com o método descrito acima.

Tabela 1:

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Exemplo 7: Avaliação de Eficácia m vivo

A eficácia dos compostos de Fórmula (I) é avaliada pela medição dos linfócitos circulantes após administração oral de 3 a 30 mg/kg de um composto de

Fórmula (I) a ratos Wistar machos normotensivos. Os animais são alojados em condições de clima controlado com um ciclo de luz / escuro de 12 h, e possuem livre acesso à água potável e à ração de rato. Sangue é coletado antes e 3, 6 e 24 h após a administração de droga. Sangue inteiro é submetido à hematologia usando o sistema Advia Hematology (Bayer Diagnostics, Zurique, Suíça).

Todos os dados são apresentados como média ± SEM. Análises estatísticas são realizadas por análise de variância (ANOVA) usando Statistica (StatSoft) e o procedimento de Student-Newman-Keuls para comparações múltiplas. A hipótese nula é rejeitada quando ρ < 0,05.

Como um exemplo, Tabela 2 mostra o efeito sobre contagens de linfócito 6 h após a administração de 10 mg/kg de um composto da presente invenção ao ratos Wistar machos normotensivos em comparação com um grupo de animais tratados apenas com veículo.

Tabela 2:

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Claims (26)

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de tiofenos de fórmula (I), <formula>formula see original document page 47</formula> na qual R1 representa metila, trifluorometila, ou etila; R2 representa hidrogênio, C1-4-alquila, metoxila, ou halogênio; R3 representa hidrogênio, C1-4-alquila, C1-4-alcoxila, ou halogênio; R4 representa hidrogênio, C1-4-alquila, ou halogênio; R5 representa hidrogênio; R6 representa hidrogênio ou hidroxila; no caso de R6 representar hidroxila, R5 pode em adição representar hidroxila; n representa 0; m representa 0 ou 1; e no caso de m representar 1, n pode em adição representar 1; e sais bem como complexos de solvente de tais compostos.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 representa um grupo etila.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ,caracterizado pelo fato de que R1 representa um grupo metila.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 representa um grupo trifluorometila.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R representa um grupo metoxila, e R e R4 representam hidrogênio.

6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R2 representa hidrogênio, e R3 e R4 representam C1-4-alquila.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 representam um grupo metila.

8. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 representam um grupo etila.

9. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R3 representa um grupo metila, e R4 representa um grupo etila.

10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R2 representa hidrogênio, R3 representa um grupo metoxila, e R4 representa um átomo de cloro.

11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R2 representa hidrogênio, R3 representa um grupo metila, e R4 representa um átomo de cloro.

12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que R5 e R6 representam hidrogênio.

13. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n representa 0, e m representa 1

14. Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n representa 1, e m representa 1.

15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que m representa 1, e R5 e R6 representam hidroxila.

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que η representa 0.

17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -1 a 11, caracterizado pelo fato de que R5 representa hidrogênio, e R6 representar hidroxila.

18. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: ácido 3-{4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-1-il)-3-oxo-propil]-2,6-dimetil-fenil} -propiônico; ácido 3-{4-[3-(5,5-dimetil-3-trifluorometil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo[c]tiofen-l-il)-3-oxo-propil]-2-etil-6-metil-fenil}-propiônico; ácido 3- {2-etil-6-metil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo[c]tiofen-1 -il)-propil]-fenil} -propiônico; e ácido 3-{2-etil-4-[3-(3-etil-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetra-hidro- benzo [c]tiofen-1 -il)-3 -oxo-propil] -6-metil-fenil} -propiônico.

19. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser ácido 3-{2,6-dimetil-4-[3-oxo-3-(3,5,5-trimetil-4,5,6,7-tetra- hidro-benzo [c]tiofen-1 -il)-propil]-fenil} -propiônico.

20. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender o composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a -19 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

21. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -1 a 19, ou a composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, caracterizado(a) pelo fato de ser para uso como um medicamento.

22. Uso de composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de doenças ou distúrbios associados com um sistema imune ativado.

23. Uso de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de ser para a prevenção ou o tratamento de doenças ou distúrbios selecionados do grupo consistindo de rejeição de órgãos transplantados tais como rim, fígado, coração, pulmão, pâncreas, e pele; doenças de hospedeiro- versus-enxerto ocasionadas pelo transplante de célula-tronco; síndromes autoimunes incluindo artrite reumatóide, esclerose múltipla, doenças intestinais inflamatórias tais como doença de Crohn e colite ulcerativa, psoríase, artrite psoriática, tiroidite tal como tiroidite de Hashimoto, uveoretinite; doenças atópicas tais como rinite, conjuntivite, dermatite; asma; diabetes de tipo I; doenças autoimunes pós-infecciosas incluindo febre reumática e glomerulonefrite pós-infecciosa; metástase de tumor e cânceres sólidos.

24. Uso de composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de composição farmacêutica para uso em combinação com um ou mais agentes selecionados do grupo consistindo de imunossupressores, corticosteróides, NSAID1S, drogas citotóxicas, inibidores de molécula de adesão, citocinas, inibidores de citocina, antagonistas de receptor de citocina e receptores de citocina recombinantes, para a prevenção ou o tratamento de doenças ou distúrbios associados com um sistema imune ativado.

25. Composto, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de tiofenos de fórmula (II) <formula>formula see original document page 50</formula> fórmula (II) na qual R1, R2, R3, R4, R5, R6, nem são como definidos na reivindicação 1 para Fórmula (I), e R7 representa hidrogênio, metila, etila, ou terc-butila; e sais bem como complexos de solvente de tais compostos.

26. Composto, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de tiofenos de fórmula (III) <formula>formula see original document page 51</formula> fórmula (III) na qual R1, R2, R3, e R4 são como definidos na reivindicação 1 para Fórmula (I), e R7 representa hidrogênio, metila, etila, ou terc-butila; e sais bem como complexos de solvente de tais compostos.