BRPI0716518A2 - Vacina, método para prevenir ou tratar infecção, e, uso de uma vacina - Google Patents

Vacina, método para prevenir ou tratar infecção, e, uso de uma vacina Download PDF

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BRPI0716518A2
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antigen
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Herve De Hemptinne
Michel Duchene
Anne Mary
Marc Sonveaux
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Glaxosmithkline Biolog Sa
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Description

"VACINA, MÉTODO PARA PREVENIR OU TRATAR INFECÇÃO, E, USO DE UMA VACINA" CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção diz respeito ao campo de vacinas para proteger contra a pólio, e em particular às vacinas de combinação para proteger contra as doenças da pólio, difteria, tétano e coqueluche. FUNDAMENTOS
As vacinas de combinação (que fornecem proteção contra patógenos múltiplos) são muito desejáveis de modo a minimizar o número de imunizações requeridas para conferir proteção contra patógenos múltiplos, para baratear os custos de administração e para aumentar as taxas de aceitação e cobertura. O fenômeno bem documentado de competição antigênica (ou interferência) complica o desenvolvimento de vacinas de componente múltiplo. A interferência antigênica refere-se à observação de que administrar antígenos múltiplos freqüentemente resulta em uma resposta diminuída a certos antígenos em relação à resposta imune observada quando tais antígenos são administrados individualmente.
As vacinas de combinação são conhecidas que podem prevenir Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium difteriae e opcionalmente poliovírus inativados (IPV), e/ou vírus da Hepatite B e/ou infecção tipo B de Haemophilus (ver por exemplo a WO 93/24148, W097/00697 e W02000/030678).
Depois de muitos anos de pesquisa a dose padrão de vacinas da pólio aceitas como eficazes dentro da comunidade de vacina presentemente contém 40 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 1 (Mahoney), 8 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 2 (MEF-I) e 32 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 3 (Saukett) (por exemplo, Infanrix-IPV®). Os presentes inventores surpreendentemente descobriram que doses reduzidas de IPV podem manter um nível adequado ou melhorado de proteção contra a pólio. Tais vacinas carregam vantagens consideráveis incluindo a capacidade para fornecer mais doses de vacinas de IPV para os indivíduos em necessidade destes. SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Conseqüentemente, a presente invenção fornece várias vacinas de IPV de dose reduzida (que pode ter apenas componentes de IPV ou podem ter componentes de IPV combinados com outros antígenos).
Conseqüentemente, em um aspecto a presente invenção fornece uma vacina de IPV da invenção que compreende poliovírus inativados tipo 1 em uma dose maior do que 10 unidades de antígeno D e menos do que 20 unidades de antígeno D, por exemplo, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 unidades de antígeno D.
Em uma forma de realização, a presente invenção fornece uma vacina de IPV da invenção que compreende poliovírus inativados tipo 3 em uma dose de 8 a 20 unidades de antígeno D, por exemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 unidades de antígeno D.
Em uma outra forma de realização, a presente invenção fornece uma vacina de IPV da invenção que compreende poliovírus inativados tipo 2 em uma dose de 2 a 4 unidades de antígeno D, por exemplo, 2, 3 ou 4 unidades de antígeno D.
Em uma outra forma de realização, a presente invenção fornece uma vacina de IPV da invenção que compreende ainda toxóide da difteria e/ou toxóide do tétano e/ou uma vacina da coqueluche na forma de vacina Pw de célula inteira morta ou antígenos da coqueluche acelulares.
Em um outro aspecto, a presente invenção fornece uma vacina de IPV da invenção que é uma vacina de combinação de DTP-IPV isenta de tiomersal que compreende poliovírus inativados tipo 1 em uma dose entre 10 e 36 unidades de antígeno D.
Em uma outra forma de realização, a presente invenção fornece uma vacina de combinação de DTP-IPV isenta de tiomersal da invenção que compreende poliovírus inativados tipo 2 em uma dose de 2 a 7 unidades de antígeno D, por exemplo, 5, 6 ou 7 unidades de antígeno D.
Em uma outra forma de realização, a presente invenção fornece uma vacina de combinação de DTP-IPV isenta de tiomersal da invenção que compreende poliovírus inativados tipo 3 em uma dose de 8 a 29 unidades de antígeno D, por exemplo, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 ou 29 unidades de antígeno D.
Em uma outra forma de realização, as vacinas da presente invenção também pode compreender um ou mais antígenos selecionados do grupo que consiste de: antígeno de superfície da Hepatite B, antígeno(s) b de Haemophilus influenzae, antígeno(s) A de Neisseria meningitidis, antígeno(s) C de Neisseria meningitidis, antígeno(s) W de Neisseria meningitidis, antígeno(s) Y de Neisseria meningitidis, vesícula ou antígeno(s) B de Neisseria meningitidis, antígeno(s) da Hepatite A e antígeno(s) Salmonella typhi, em particular antígenos de sacarídeo capsular das ditas bactérias.
Métodos de fabricar as vacinas da invenção também são
fornecidos. DEFINIÇÕES
O termo "vacina" é opcionalmente substituível com o termo "composição imunogênica" e vice e versa. "unidades de antígeno D" (também aludido como "unidades
internacionais" ou IU): A forma antigênica D do poliovírus induz anticorpos neutralizadores protetores. As unidades de antígeno D aqui aludidas (por exemplo nas vacinas da invenção) são as unidades de antígeno D totais medidas de cada tipo de antígeno de IPV volumoso não absorvido antes da formulação da vacina final que são adicionadas em cada dose humana de vacina formulada (tipicamente 0,5 ml de volume final). Métodos confiáveis de medir unidades de antígeno D são bem conhecidos na técnica e são publicados, por exemplo, pela European Pharmacopoeia. Por exemplo, unidades de antígeno D podem ser medidas usando o teste de ELISA como descrito no Exemplo 1 ("quantificação de antígeno D pelo ELISA") abaixo. A European Pharmacopoeia fornece uma amostra de teste (European Pharmacopoeia Biological Reference Preparation - disponível de Ph. Eur. Secretariai, por exemplo, Code P 216 0000) para padronização de tais métodos entre os fabricantes (Pharmeuropa Special Issue, Bio 96-2). Assim o valor unitário do antígeno D é bem entendido na técnica.
O termo "dose" aqui é tipicamente uma administração da vacina da invenção, que é tipicamente uma injeção. Uma dose humana típica é de 0,5 ml. Naturalmente várias doses podem ser administradas em um programa de administração de vacina.
O termo "IPV" ou uma vacina que compreenda estes componentes aqui é intencionado a significar vírus da pólio inativado tipo 1 (por exemplo, Mahoney, como preferivelmente usado, ou Brunhilde como vendido pela Statens Serum Institut sob o nome de DiTeKiPol), tipo 2 (por exemplo, MEF-1), ou tipo 3 (por exemplo, Saukett), ou uma combinação de dois ou todos os três destes tipos. Um exemplo de uma vacina de IPV de dose completa (ou padrão) (40-8-32 unidades de antígeno D dos tipos 1, 2 e 3 do IPV respectivamente) para os propósitos desta invenção pode ser Poliorix® (GSK Biologicals S.A.). Assim, onde é aqui estabelecido que X % de uma dose padrão de IPV está presente em uma vacina da invenção são intencionadas unidades de antígeno D que eqüivalem a X % de 40, 8 e/ou 32 unidades de antígeno D dos tipos 1, 2 e/ou 3 de IPV respectivamente (como medidas em cada tipo de antígeno do IPV volumosa) são formulados dentro de cada dose da dita vacina. Os termos "lipopolissacarídeo" (LPS) e "lipooligossacarídeo" (LOS) são intercambiáveis.
O termo "sacarídeo" por todo este relatório descritivo pode indicar polissacarídeo ou oligossacarídeo e inclui ambos. O antígeno de sacarídeo capsular pode ser um polissacarídeo de tamanho natural ou pode ser estendido aos 'sacarídeos de um determinado tamanho' e Λoligossacarídeos' bacterianos (que naturalmente têm um número baixo de unidades de repetição, ou que são polissacarídeos reduzidos em tamanho para manuseabilidade, mas são ainda capazes de induzir uma resposta imune protetor em um hospedeiro) que são bem conhecidos na técnica da vacina (ver por exemplo a EP 497525).
O termo "ácido nucléico" aqui pode compreender ácido desoxirribonucléico (DNA) de filamento único ou duplo ou ácido ribonucléico (RNA) de filamento único ou duplo ou uma mistura destes.
Os termos "componente(s)" de um patógeno ou "componente(s) que proporcionam proteção para um tal patógeno" dentro das vacinas da invenção aqui são intencionados a significar um ou mais antígeno(s) deste patógeno.
O termos "em torno" ou "aproximadamente" aqui são intencionados a significar ± 10 % do valor estabelecido, mas devem estar de acordo com o contexto de uso. DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
Figura 1. Evolução da Potência Relativa (RP) de DTPwSF-HB-IPV "Método de produção 3" com a dose de IPV.
A potência da dose reduzida de IPV das formulações "Método de produção 3" foi examinada in vivo em comparação com a formulação de referência (formulação Poliorix e DTPaIPVHB). A RP de IPV foi medida em doses a 100 %, 50 %, 25 % e 12,5 % da dose de IPV padrão (40/8/32 unidades de antígeno D para os tipos 1/2/3). Figura 2. Evolução da Potência Relativa (RP) do fluxograma da formulação DTPwSF-HB-IPV.
A potência da dose reduzida de IPV tanto para a formulação do "Método de produção 3" quanto do "Método de produção 4" foi examinada in vivo em comparação com formulações de referência (formulação Poliorix e DTPaIPVHB). A RP foi medida tanto para o "Método de produção 3" quanto para o "Método de produção 4" a 25 % da dose de IPV padrão (40/8/32 unidades de antígeno D para os tipos 1/2/3) em comparação com um placebo com apenas 25 % de IPV. Figura 3. Potência Relativa dos tipos 1, 2 e 3 de IPV nos tempos de 0 e 8 meses.
A Potência Relativa de IPV foi medida [em relação à DTPaHBIPV (Pediarix) (Figura 3a) ou Poliorix (Figura 3b)] para determinar se o componente Hib tem um efeito sobre a potência do IPV e para avaliar a estabilidade de IPV com o tempo em doses diferentes de IPV. DESCRIÇÃO DETALHADA
A presente invenção fornece uma vacina (por exemplo, uma vacina de combinação) que compreende antígenos de poliovírus (IPV) e opcionalmente Corynebacterium difteriae (D), Clostridium tetani (T), Bordetella pertussis (P) ou Hepatite B. Os antígenos da invenção Componentes da vacina de IPV
As vacinas da invenção podem ser compreendidas de IPV tipo 1 ou IPV tipo 2 ou IPV tipo 3, ou IPV tipos 1 e 2, ou IPV tipos 1 e 3, ou IPV tipos 2 e 3, ou IPV tipos 1, 2 e 3.
Métodos de preparar poliovírus inativados (IPV) são bem conhecidos na técnica. Em uma forma de realização, o IPV deve compreender tipos 1, 2 e 3 como é comum na técnica da vacina e pode ser a vacina Salk da pólio que é inativada com formaldeído (ver por exemplo, Sutter et al., 2000, Pediatr. Clin. North Am. 47: 287; Zimmerman & Spann 1999, Am Fam Physician 59: 113; Salk et al., 1954, Official Monthly Publieation of the American Public Health Association 44(5): 563; Hennesen, 1981, Develop. Biol. Standard 47: 139; Budowsky, 1991, Adv. Vírus Res. 39: 255).
Em uma forma de realização o IPV não é absorvida (por exemplo, antes de misturar com outros componentes se presentes). Em uma outra forma de realização, o(s) componente(s) do IPV da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio (por exemplo, antes ou depois de misturar com outros componentes se presentes). Em uma outra forma de realização, o(s) componente(s) do IPV da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o(s) componente(s) do IPV pode(m) ser absorvido(s) em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Se absorvido, um ou mais componentes de IPV podem ser absorvidos separadamente ou juntos como uma mistura. O IPV pode ser estabilizada por um processo de secagem particular como descrito na W02004/039417.
O poliovírus pode ser cultivado em cultura de célula. A cultura de célula pode ser uma linhagem de célula VERO ou PMKC, que é uma linhagem de célula contínua derivada de rim de macaco. As células VERO podem ser convenientemente cultivadas em microcarregadores. A cultura das células VERO antes e durante a infecção viral pode envolver o uso de material derivado de bovino, tal como soro de bezerro e este material deve ser obtido de fontes que são isentas da encefalite espongiforme bovina (BSE). A cultura também pode envolver materiais tais como hidrolisado de lactalbumina. Depois do cultivo, virions podem ser purificados usando técnicas tais como ultrafiltração, diafiltração e cromatografia. Antes da administração ao pacientes, os vírus devem ser inativados e isto pode ser obtido pelo tratamento com formaldeído. Os vírus podem ser cultivados, purificados e inativados individualmente e depois combinados para dar uma mistura volumosa concentrada para o uso como vacina de IPV ou para adição ao antígeno da difteria e tétano absorvido e componentes da coqueluche para as vacinas que compreendem DTPw-IPV ou DTPa-IPV.
Os antígenos nas vacinas da invenção estarão presentes em "quantidades imunologicamente eficazes" isto é a administração desta quantidade a um indivíduo, em uma dose única ou como parte de uma série, é eficaz para o tratamento ou prevenção de doença. O tratamento de dosagem podem ser um programa de dose única ou um programa de dose múltipla (por exemplo, incluindo doses reforçadoras).
As doses padrão de vacinas da pólio no momento atual tendem a conter 40 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 1, 8 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 2 e 32 unidades de antígeno D de poliovírus inativados tipo 3 (por exemplo, Infanrix-IPV®).
Entretanto, os presentes inventores surpreendentemente descobriram que doses reduzidas de IPV podem ser usadas para se obter uma boa resposta imune. Em uma forma de realização, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender entre 10 e 36 unidades de antígeno D do IPV tipo 1 (por exemplo, 11 a 32, 12 a 28, 13 a 24, 14 a 20 ou 15 a 19 unidades de antígeno D). Em uma outra forma de realização, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender IPV tipo 1 em uma dose de 10 a 20 unidades de antígeno D ou uma dose maior do que 10 unidades de antígeno D e menor do que 20 unidades de antígeno D. Em uma outra forma de realização, uma dose de vacina da presente invenção pode compreender 26 a 49 %, 30 a 45 %, 33 a 40 %, 35 a 37 %, ou aproximada ou exatamente um terço de dose unitária de antígeno D 40 padrão de IPV tipo 1 (equivalente a aproximadamente 10,4 a 19,6, 12 a 18, 13,2 a 16, 14 a 14,8 ou 13,3 unidades de antígeno D). Em uma outra forma de realização, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 11 a 32 unidades de antígeno D, 12 a 28 unidades de antígeno D, 13 a 24 unidades de antígeno D ou 14 a 20 unidades de antígeno D de IPV tipo 1.
Alternativamente, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 10 a 19,5 unidades de antígeno D, 12 a 19 unidades de antígeno D, 14 a 18,5 unidades de antígeno D, ou 15 a 17 unidades de antígeno D; por exemplo em torno de ou exatamente 16 unidades de antígeno D de IPV tipo 1.
Em uma outra forma de realização, as vacinas da presente invenção podem compreender menos do que 4 unidades de antígeno D, 2 a 4 unidades de antígeno D (equivalente a 25 a 50 % de dose unitária de antígeno D 8 padrão) ou em torno de ou exatamente 3 unidades de antígeno D de IPV tipo 2 (equivalente a 37,5 % de dose unitária de antígeno D 8 padrão).
Em uma outra forma de realização, a vacina da presente invenção pode compreender aproximada ou exatamente um terço de dose unitária de antígeno D 8 padrão de IPV tipo 2 (equivalente a aproximadamente 2,7 unidades de antígeno D).
Em uma outra forma de realização, as vacinas da presente invenção pode compreender 2 a 7 unidades de antígeno D de IPV tipo 2. Em uma outra forma de realização, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 3 a 6 unidades de antígeno D, ou 4 a 5 unidades de antígeno D de IPV tipo 2.
Alternativamente, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 24,5 unidades de antígeno D, 2,5 a 4 unidades de antígeno D ou 3 a 3,5 unidades de antígeno D de IPV tipo 2.
Em uma outra forma de realização as vacinas da presente invenção podem compreender 8 a 20 unidades de antígeno D, mais do que 8 e menos do que 20 unidades de antígeno D, 9 a 19 unidades de antígeno D, 10 a 18 unidades de antígeno D, 11 a 17 unidades de antígeno D, 12 a 16 unidades de antígeno D, ou 13 a 15 unidades de antígeno D; por exemplo em torno de ou exatamente 14 unidades de antígeno D de IPV tipo 3 (equivalente a 25 a 62,5 %, 28,125 a 59,375 %, 31,25 a 46,875 % ou 43,75 % de dose unitária de antígeno D 32 padrão).
Em uma outra forma de realização, a vacina da presente invenção pode compreender aproximada ou exatamente um terço de dose unitária de antígeno D 32 padrão de IPV tipo 3 (equivalente a aproximadamente 10,7 unidades de antígeno D).
Em uma outra forma de realização, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 8 a 29 unidades de antígeno D, 9 a 26 unidades de antígeno D, 10 a 23 unidades de antígeno D, 11 a 20 unidades de antígeno D, 12 a 17 unidades de antígeno D, ou 13 a 14 unidades de antígeno D de IPV tipo 3.
Alternativamente, uma vacina de dose de IPV da presente invenção pode compreender 8 a 19,5 unidades de antígeno D, 9 a 19 unidades de antígeno D, 10 a 18,5 unidades de antígeno D, 11 a 18 unidades de antígeno D, 12 a 17,5 unidades de antígeno D, 13 a 17 unidades de antígeno D, ou 14 a 16 unidades de antígeno D; por exemplo em torno de ou exatamente 15 unidades de antígeno D. Componentes de vacina DTP
As vacinas DTP são vacinas bem conhecidas para prevenir ou tratar as doenças de difteria, tétano e B. pertussis. As vacinas da invenção podem compreender componente(s) da difteria, tétano e/ou coqueluche.
O antígeno da difteria é tipicamente um toxóide da difteria. A preparação de toxóides da difteria (DT) é bem documentada. Qualquer toxóide da difteria adequado pode ser usado. Por exemplo, DT pode ser produzido pela purificação da toxina a partir de uma cultura de Corynebacterium difteriae seguida pela destoxificação química, mas é alternativamente fabricada pela purificação de um recombinante ou análogo geneticamente destoxificado da toxina (por exemplo, CRM197 ou outros mutantes como descrito nas US 4.709.017, US 5.843.711, US 5.601.827 e US 5.917.017). Em uma forma de realização DT está presente em uma quantidade de 5 a 50, 7 a 30 Lf ou aproximada ou exatamente 7,5 Lf ou 25 Lf por dose de 0,5 ml. Em uma outra forma de realização DT está presente em uma dose baixa de menos do que 5 Lf ou 1 a 4 Lf ou aproximada ou exatamente 2 Lf por dose de 0,5 ml. Em uma forma de realização, o toxóide da difteria da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o toxóide da difteria da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o toxóide da difteria pode ser absorvido em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio.
O antígeno do tétano da invenção é tipicamente um toxóide do tétano. Os métodos de preparar toxóides do tétano (TT) são bem conhecidos na técnica. Em uma forma de realização TT é produzido pela purificação da toxina a partir de uma cultura de Clostridium tetani seguida pela destoxificação química, mas é alternativamente fabricada pela purificação de um recombinante ou análogo geneticamente destoxificado da toxina (por exemplo, como descrito na EP 209281). Qualquer toxóide do tétano adequado pode ser usado. 'Toxóide do tétano' pode abranger fragmentos imunogênicos da proteína de tamanho natural (por exemplo Fragmento C - ver a EP 478602). Em uma forma de realização TT está presente em uma quantidade de 2,5 a 30 Lf, 3 a 20 Lf, 5 a 15 Lf ou exata ou aproximadamente 10 Lf por dose de 0,5 ml. Em uma forma de realização, o toxóide do tétano da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o toxóide do tétano da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o toxóide do tétano podem ser absorvido em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. O componente da coqueluche da invenção pode ser acelular (Pa) onde antígenos da coqueluche purificados são usados ou célula integral (Pw) onde coqueluche de célula inteira morta é usada como o componente da coqueluche. Pw pode ser inativado por vários métodos conhecidos, incluindo métodos isentos de mercúrio. Tais métodos podem incluir a inativação por calor (por exemplo, 55 a 65° C ou 56 a 60° C, por 5 a 60 minutos ou por 10 a minutos, por exemplo, 60° C por 30 minutos), formaldeído (por exemplo, 0,1 % a 37°, 24 horas), glutaraldeído (por exemplo, 0,05 % na temperatura ambiente, 10 minutos), acetona-I (por exemplo, três tratamentos na temperatura ambiente) ou acetona-II (por exemplo, três tratamentos na temperatura ambiente e quatro tratamentos a 37° C) (ver por exemplo Gupta et al., 1987, J. Biol. Stand. 15: 87; Gupta et al., 1986, Vaccine, 4: 185). Métodos de preparar célula integral morta de Bordetella pertussis (Pw) adequada para esta invenção são divulgados na WO 93/24148, como o são métodos de formulação adequados para produzir vacinas de DT-TT-Pw- HepB. Tiomersal foi usado no passado na preparação de célula integral morta de Bordetella pertussis (ver abaixo). Entretanto, em uma forma de realização o mesmo não é usado no processo de formulação das vacinas da presente invenção.
Uma dose Pw de 5 a 50 IOU, 7 a 40 IOU, 9 a 35 IOU, 11 a 30 IOU, 13 a 25 IOU, 15 a 21 IOU ou em torno de ou exatamente 20 IOU é tipicamente usada.
As vacinas de Pa acelulares também são bem conhecidas e podem compreender 2 ou mais antígenos de: toxóide da coqueluche (PT), hemaglutinina filamentosa (FHA), pertactinaa (PRN), aglutinógenos 2 & 3. Em uma forma de realização, a vacina Pa compreende PT, FHA e PRN. Kits ou vacinas da invenção podem compreender PT destoxificado por um método bem conhecido de tratamento com formaldeído ou por meio de mutações (derivado de PT). As substituições de resíduos dentro da subunidade 51 da proteína foram descobertas resultar em uma proteína que retém as suas propriedades imunológicas e protetores do PT, mas com toxicidade reduzida ou nenhuma (EP 322533). As mutações de destoxificação debatidas nas reivindicações da EP322533 são exemplos dos mutantes de DT destoxificados da presente invenção. Tais mutantes podem ser usados em doses mais baixas do que 20 a 25 μg.
Em uma forma de realização PT é usado em uma quantidade de 2 a 50 5 a 40 μg, 10 a 30 μg ou exata ou aproximadamente 25 μg por dose de 0,5 ml. Em uma outra forma de realização PT é usado em uma quantidade exata ou aproximadamente de 2,5 ou 8 μg por dose de 0,5 ml.
Em uma forma de realização FHA é usado em uma quantidade de 2 a 50 μg, 5 a 40 μg, 10 a 30 μg ou exata ou aproximadamente 25 μg por dose de 0,5 ml. Em uma outra forma de realização FHA é usado em uma quantidade exata ou aproximadamente de 2,5 ou 8 μg por dose de 0,5 ml.
Em uma forma de realização PRN é usado em uma quantidade de 0,5 a 20 μg, 0,8 a 15 μg, 2 a 10 μg ou exata ou aproximadamente 8 μg por dose de 0,5 ml. Em uma outra forma de realização PRN é usado em uma quantidade de exatamente ou em torno 0,8 ou 2,5 μg por 0,5 ml.
Em uma forma de realização, o componente da coqueluche da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o componente da coqueluche da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o componente da coqueluche pode ser absorvido em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Por exemplo em uma forma de realização pelo menos PRN é absorvido em hidróxido de alumínio com PT/FHA absorvido em hidróxido de alumínio, fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos. Outros antígenos
As formulações de vacina da invenção, opcionalmente também compreendendo DTP (DTPw ou DTPa), podem compreender adicionalmente um ou mais antígenos selecionados do grupo que consiste de: antígeno de superfície da Hepatite B, antígeno(s) b de Haemophilus influenzae, antígeno(s) A de Neisseria meningitidis, antígeno(s) C de Neisseria meningitidis, antígeno(s) W-135 de Neisseria meningitidis, antígeno(s) Y de Neisseria meningitidis, vesícula B de Neisseria meningitidis ou antígeno(s) purificados, antígeno(s) da Hepatite A, antígeno(s) da Salmonella typhi e RTS.S. Tipicamente o sacarídeo capsular ou antígenos de LOS destes patógenos podem ser usados. Os antígenos tipicamente estarão presentes em uma concentração de pelo menos 1 μg/ml cada um, por exemplo 1 a 20 μg/ml, 2 a 15 μg/ml, 2,5 a 10 μg/ml, 3 a 8 μg/ml ou 4 a 6 μg/ml. No geral, a concentração de qualquer antígeno será suficiente para evocar uma resposta imune contra este antígeno. É preferido que a eficácia protetor de antígenos individuais não seja removida pela combinação dos mesmos, embora a imunogenicidade real (por exemplo, títulos de ELISA) possa ser reduzida.
O(s) antígeno(s) adicional(is) em uma forma de realização da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, os antígenos adicionais da invenção podem ser absorvidos em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização os antígenos adicionais podem ser absorvidos em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio ou podem ser não absorvidos.
Onde um sacarídeo capsular ou antígeno LOS são usados estes podem ser conjugados a uma proteína carregadora que compreenda epítopos auxiliares T de modo a realçar a imunogenicidade. A invenção também pode compreender "proteínas carregadoras" livres.
Como uma alternativa ao uso de antígenos de proteína nas composições da invenção, o ácido nucléico que codifica o antígeno pode ser usado. Os componentes de proteína das composições da invenção podem ser assim substituídos pelo ácido nucléico (por exemplo DNA, que pode estar na forma de um plasmídeo) que codifica a proteína. Similarmente, as composições da invenção podem compreender proteínas que imitam antígenos de sacarídeo por exemplo, mimótopos ou anticorpos anti- idiotípicos. Estes podem substituir componentes sacarídicos individuais ou podem suplementá-los. Antígeno da Hepatite B
A preparação de antígeno de superfície da Hepatite B (HBsAg) é bem documentada. Ver por exemplo, Hartford et ai., 1983, Develop. Biol. Standard 54: 125, Gregg et al., 1987, Biotechnology 5: 479, EP0226846, EP0299108. Este pode ser preparado como segue. Um método envolve purificar o antígeno na forma particulada a partir do plasma de portadores da hepatite B crônica, visto que quantidades grandes de HBsAg são sintetizadas no fígado e liberados na corrente sangüínea durante uma infecção pelo HBV. Um outro método envolve expressar a proteína pelos métodos de DNA recombinante. O HBsAg pode ser preparado pela expressão na levedura Saccharomyces cerevisiae, pichia, células de inseto (por exemplo, Hi5) ou células de mamífero. O HBsAg pode ser inserido em um plasmídeo e a sua expressão a partir do plasmídeo pode ser controlada por um promotor tal como o promotor "GAPDH" (a partir do gene da gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase). A levedura pode ser cultivada em um meio sintético. O HBsAg pode ser depois purificado por um processo que envolve as etapas tais como precipitação, cromatografia de troca iônica e ultrafiltração. Depois da purificação, HBsAg pode ser submetido à diálise (por exemplo, com cisteína). O HBsAg pode ser usado em uma forma particulada.
Como aqui usada a expressão "antígeno de superfície da Hepatite B" ou "HBsAg" inclui qualquer antígeno de HBsAg ou fragmento deste que demonstra a antigenicidade de antígeno de superfície de HBV. Será entendido que além da seqüência de 226 aminoácidos do antígeno HBsAg S (ver Tiollais et al., 1985, Nature 317: 489 e referências nesta) o HBsAg como aqui descrito pode, se desejado, contém toda ou parte de uma seqüência pré-S como descrito nas referências acima e na EP0278940. Em particular, o HBsAg pode compreender um polipeptídeo que compreende uma seqüência de aminoácido que compreende os resíduos de 133 a 145 seguidos pelos resíduos de 175 a 400 da proteína L de HBsAg em relação à matriz de leitura aberta em um vírus da Hepatite B do sorotipo ad (este polipeptídeo é aludido como L*; ver a EP0414374). HBsAg dentro do escopo da invenção também pode incluir o polipeptídeo preSl-preS2 -S descrito na EPO198474 (Endotronics) ou análogos deste tais como aqueles descritos na EP0304578 (McCormick e Jones). HBsAg como aqui descrito pode também referir-se aos mutantes, por exemplo o "mutante de escape" descrito na WO 91/14703 ou EP0511855A1, especialmente HBsAg em que a substituição de aminoácido na posição 145 é para arginina de glicina.
O HBsAg pode estar na forma de partícula. As partículas podem compreender por exemplo a proteína S sozinha ou podem ser partículas compósitas, por exemplo L*, S) onde L* é como definido acima e S denota a proteína S de HBsAg. A dita partícula está vantajosamente na forma em que a mesma é expressada na levedura.
Em uma forma de realização, HBsAg é o antígeno usado na EngerixBTM (GlaxoSmithKline Biologicals S.A.), que é ainda descrito na W093/24148.
Em uma forma de realização, HBsAg está presente em uma quantidade de 5 a 20 μg, 8 a 15 μg ou aproximada ou exatamente 10 μg por dose de 0,5 ml.
O antígeno de superfície da Hepatite B pode ser absorvido em fosfato de alumínio, o que podem ser feito antes de misturar com os outros componentes (descritos na W093/24148). O componente da Hepatite B deve ser substancialmente isento de tiomersal (o método de preparação de HBsAg sem tiomersal foi anteriormente publicado na EP13 07473). Antígeno(s) b de Haemophilus influenzae
As vacinas que compreendem antígenos de Haemophilus influenzae tipo B foram descritas na W097/00697. As vacinas da invenção podem usar qualquer antígeno de Haemophilus influenzae tipo B adequado. O antígeno pode ser sacarídeo capsular (PRP) de Haemophilus influenzae tipo B conjugado a uma proteína carregadora (Hib). O sacarídeo é um polímero de ribose, ribitol e fosfato. O antígeno Hib pode ser opcionalmente absorvido em fosfato de alumínio como descrito na W097/00697 ou pode ser não absorvido como descrito na W002/00249 ou pode não ter passado por um processo específico de absorção.
Por um antígeno que é 'não absorvido em um sal adjuvante de alumínio' aqui é intencionado por exemplo que uma etapa de expressão ou absorção dedicada para o antígeno em sal adjuvante de alumínio fresco não está envolvido no processo de formular a composição.
Hib pode ser conjugada a qualquer carregador que possa fornecer pelo menos um epítopo auxiliar T (exemplos dos quais são descritos abaixo) e podem ser toxóide do tétano, toxóide da difteria, CRM-197 (mutante da toxina da difteria) ou Proteína D.
Hib pode ser liofilizada e pode ser reconstituída extemporaneamente (por exemplo, com diluente, que opcionalmente compreende outros componentes antigênicos das vacinas da invenção).
Em uma forma de realização, Hib está presente em uma quantidade de 5 a 20 μg, 8 a 15 μg ou aproximada ou exatamente 10 μg de sacarídeo por dose de 0,5 ml.
Em uma outra forma de realização, Hib está presente em uma dose baixa (por exemplo, 1 a 6 μg, 2 a 4 μg ou em torno de ou exatamente 2,5 μg de sacarídeo) como descrito na WO 02/00249. Antígenos tipos A, C, W ou Y de Neisseria meningitidis
As vacinas da invenção podem compreender ainda um sacarídeo capsular de uma bactéria selecionada do grupo que consiste de N. meningitidis tipo A (MenA, opcionalmente conjugado a uma proteína carregadora), N. meningitidis tipo C (MenC, opcionalmente conjugado a uma proteína carregadora), N. meningitidis tipo W-135 (MenW, opcionalmente conjugado a uma proteína carregadora) e N. meningitidis tipo Y (MenY, opcionalmente conjugado a uma proteína carregadora).
As vacinas da invenção podem compreender um ou mais antígenos das diferentes cepas de N. meningitidis, que podem ser usadas sozinhas ou em qualquer combinação de dois, três ou quatro componentes como detalhado abaixo:
MenA, MenC, MenW, MenY ou MenA + MenC, MenA + MenW, MenA + MenY, MenC + MenW, MenC + MenY, MenW + MenY ou MenA + MenC + MenW, MenA + MenC + MenY, MenA + MenW + MenY, MenC + MenW + MenY ou MenA + MenC + MenW + MenY.
Em uma forma de realização, o(s) componente(s) de Neisseria meningitidis da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o(s) componente(s) de Neisseria meningitidis da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o(s) componente(s) de Neisseria meningitidis da invenção pode(m) ser absorvido(s) em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Em uma forma de realização o(s) componente(s) de Neisseria meningitidis da invenção pode(m) ser não absorvido(s) em um adjuvante, por exemplo, um sal adjuvante de alumínio. Vesícula tipo B ou antígenofs) de Neisseria meningitidis
As vacinas da invenção também podem compreender um componente de MenB tal como uma vesícula ou bolha de membrana externa como descrito na W001/09350, W003/105890, W004/014417 ou W004/014418 ou um conjugado de antígeno de sacarídeo capsular de MenB (ou derivado deste) (por exemplo, ver a WO 96/40239) ou um LOS meningocócico livre ou conjugado LOS meningocócico L2 ou L3 ou L2 e L3 (como para a WO 2004/014417). Em uma forma de realização, o(s) componente(s) de MenB da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o(s) componente(s) MenB da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o(s) componente(s) de MenB pode(m) ser absorvido(s) em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Em uma forma de realização o(s) componente(s) de MenB pode(m) ser não absorvido em um adjuvante, por exemplo, um sal adjuvante de alumínio. Antígeno(s) de Salmonella typhi
As vacinas da invenção podem compreender ainda o sacarídeo Vi de Salmonella typhi, que podem ser o produto registrado Typherix®, descrito na EPl 107787 ou um conjugado deste (por exemplo, com uma proteína carregadora como descrito aqui). O processo de conjugação pode ser realizado como descrito na WO 2007/000343. Em uma forma de realização, o(s) sacarídeo(s) Vi da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o(s) sacarídeo(s) Vi da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o(s) sacarídeo(s) Vi pode(m) ser absorvido(s) em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Em uma forma de realização o(s) sacarídeo(s) Vi pode(m) ser não absorvido(s) em um adjuvante, por exemplo, um sal adjuvante de alumínio. Antígeno(s) da Hepatite A
O componente que proporciona proteção contra a Hepatite A pode ser uma vacina da Hepatite A atenuada morta, por exemplo o produto conhecido como Havrix® (Marca Registrada da GlaxoSmithKline Biologicals S.A.) que é uma vacina atenuada morta derivada da cepa HM-175 do vírus da Hepatite A (HAV) (ver a "Inactivated Candidate Vaccines for Hepatitis A" por F. E. Andre et al., 1980, Prog. Med. Virol. 37: 72 e a monografia do produto "Havrix" publicada pela SmithKline Beecham Biologicals 1991). Flehmig et al. (1990, Prog. Med Virol. 37: 56) revisaram os aspectos clínicos, virologia, imunologia e epidemiologia da Hepatite A e debateram métodos para o desenvolvimento de vacinas contra esta infecção viral comum. Como aqui usado a expressão "antígeno de HAV" refere-se a qualquer antígeno capaz de estimular o anticorpo neutralizador para o HAV em seres humanos. Em uma forma de realização o antígeno de HAV compreende partículas virais atenuadas inativadas ou em uma outra forma de realização o mesmo pode ser um capsídeo de HAV ou proteína viral de HAV, que podem ser convenientemente obtidos pela tecnologia de DNA recombinante. Em uma forma de realização, o componente da Hepatite A da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o componente da Hepatite A da invenção pode ser absorvido em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o componente da Hepatite A pode ser absorvido em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Antígeno(s) da Malária
As vacinas da invenção podem compreender ainda antígeno(s) da malária. O antígeno da malária pode ser RTS.S (proteína híbrida entre CS e HBsAg - descrito na US 6.306.625 e EP 0614465). Em uma forma de realização, RTS.S pode ser usado nas vacinas da invenção no lugar de HBsAg. Outros antígenos da malária também podem ser usados nas vacinas da invenção, incluindo a proteína CS, RTS, TRAP, proteína de 16 kD de B 2992, AMA-1, MSP1, opcionalmente incluindo CpG (W02006/029887, W098/05355, W001/00231).
Em uma forma de realização, o(s) antígeno(s) da malária da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio. Em uma outra forma de realização, o(s) antígeno(s) da malária da invenção pode(m) ser absorvido(s) em um sal de alumínio tal como fosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização o(s) antígeno(s) da malária pode(m) ser absorvido(s) em uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio. Em uma forma de realização o antígeno da malária é adjuvantado com uma emulsão de óleo em água e/ou derivado de lipídeo A (tal como MPL) e ou esterol (tal como colesterol) e/ou tocol (tal como a- tocoferol). Em uma outra forma de realização o antígeno(s) da malária pode(m) ser não absorvido(s) em um adjuvante, por exemplo, um sal adjuvante de alumínio. Conjugados
Os sacarídeos capsulares bacterianos conjugados da invenção podem compreender qualquer polipeptídeo, polipeptídeo ou proteína carregadores que compreendem pelo menos um epítopo auxiliar T. A(s) proteína(s) carregadora(s) usada(s) pode(m) ser selecionada(s) do grupo que consiste de: toxóide do tétano, toxóide da difteria, CRM197, toxina da difteria recombinante (como descrito em qualquer uma das US 4.709.017, WO 93/25210, WO 95/33481 ou WO 00/48638), pneumolisina (de modo opcional quimicamente destoxificado ou um mutante destoxificado) de S. pneumoniae (ver por exemplo, a WO 2004/081515 e referências nesta aludidas), OMPC de N. meningitidis (EP 0372501) e proteína D (PD) de H. influenzae (EP 594610). Outros carregadores podem incluir polipeptídeos sintéticos (EP 0378881; EP 0427347), proteínas de choque térmico (WO 93/17712; WO 94/03208), proteínas da coqueluche (WO 98/58668; EP 0471177), citocinas (WO 91/01146), linfocinas (WO 91/01146), hormônios (WO 91/01146), fatores de crescimento (WO 91/01146), proteínas artificiais que compreendem epítopos de célula T CD4+ humanos múltiplos de vários antígenos derivados de patógeno (Falugi et al., 2001, Eur. J. Immunol. 31: 3816), proteína de superfície pneumocócica PspA (WO 02/091998), proteínas de captação de ferro (WO 01/72337), toxina A ou B de C. difficile (WO 00/61761), PhtD pneumocócico (WO 00/37105), PhtDE pneumocócico (por exemplo, WO 01/98334 & WO 03/054007), PhtX, etc.
Os sacarídeos podem estar todos no mesmo carregador, particularmente todos os sacarídeos de um organismo particular, por exemplo sacarídeos de MenA, MenC, MenW e MenY podem estar todos conjugados a TT, DT ou CRM-197. Entretanto, devido ao efeito conhecido da supressão de carregador, pode ser vantajoso se em cada uma das composições da invenção os antígenos de sacarídeo neste contidos (antígenos 'n') são conjugados a mais do que um carregador. Assim (n-1) dos sacarídeos seriam carregados (separadamente) em um tipo de carregador e 1 em um carregador diferente ou (n-2) em um e 2 em dois carregadores diferentes, etc. Por exemplo, em uma vacina contendo 4 sacarídeos bacterianos conjugados, 1, 2 ou todos os quatro seriam conjugados em carregadores diferentes). A proteína D, entretanto, pode ser usada para vários (2, 3, 4 ou mais) sacarídeos em uma composição sem um efeito de supressão de carregador acentuado. Hib pode estar presente como um conjugado de TT, DT ou CRMl97 e MenA, MenC, MenY e MenW podem ser conjugados a TT, DT, CRM197 ou PD. Vi pode estar presente como um conjugado de TT, DT ou CRMl97. A Proteína D é um carregador útil visto que ela fornece um antígeno adicional que pode fornecer proteção contra H. influenzae. Em uma forma de realização, todos os sacarídeos são conjugados à mesma proteína carregadora.
Vi pode ser conjugada a uma proteína carregadora por exemplo por um método usando a química da condensação de carbodiimida (por exemplo, EDAC) (dado que a subunidade de repetição de Vi compreende grupos do ácido carboxílico). Isto pode ser obtido (i) por uma única reação da carbodiimida entre COOH de Vi e NH2 da proteína ou (ii) por uma reação dupla da carbodiimida que pode ocorrer entre COOH de Vi e NH2 de uma molécula ligadora homobifuncional e COOH da proteína e NH2 da molécula ligadora homobifuncional ou entre COOH de Vi e NH2 da molécula ligadora heterobifuncional e NH2 da proteína e COOH da molécula ligadora heterobifuncional.
A conjugação pode ser usada em conjunção com proteína(s) carregadora(s) livre(s). Em uma forma de realização, quando uma dada proteína carregadora está presente tanto na forma livre quanto na conjugada em uma composição da invenção, a forma não conjugada não é maior do que % da quantidade total da proteína carregadora na composição como um todo ou em uma outra forma de realização está presente em menos do que 2 % em peso.
O sacarídeo pode ser ligado à proteína carregadora por qualquer método conhecido (por exemplo, por Likhite, Patente U.S. 4.372.945 e por Armor et al., Patente U.S. 4.474.757), com qualquer ligador adequado onde necessário.
O sacarídeo tipicamente será ativado ou funcionalizado antes da conjugação. A ativação pode envolver, por exemplo, agentes de cianilação tais como CDAP (tetrafluoroborato de 1-cian-dimetilamino-piridínio) (WO 95/08348 & WO 96/29094). A reação de cianilação pode ser realizada sob condições relativamente branda, que evita a hidrólise dos sacarídeos sensíveis ao meio alcalino. Esta síntese permite a ligação direta a uma proteína carregadora. Outras técnicas adequadas usam carbodiimidas, hidrazidas, ésteres ativos, norbornano, ácido p-nitrobenzóico, N-hidroxissuccinimida, S- NHS, EDC ou TSTU.
As ligações por intermédio de um grupo ligador podem ser feitas usando qualquer procedimento conhecido, por exemplo, os procedimentos descritos na US 4.882.317 e US 4.695.624. Um tipo de ligação envolve a aminação redutiva do sacarídeo, que liga o grupo amino resultante com uma extremidade de um grupo ligador de ácido adípico (EP 0477508, Porro et al., 1985, Mol. Immunol. 22: 907, EP 0208375) e depois ligando uma proteína à outra extremidade do grupo ligador de ácido adípico. Outros ligadores incluem B-propionamido (WO 00/10599), nitrofenil-etilamina (Geyer et al., 1979, Med. Microbiol. Immunol. 165: 171), haletos de haloacila (US 4.057.685), ligações glicosídicas (US 4.673.574; US 4.761.283; US 4.808.700), ácido 6-aminocapróico (US 4.459.286), ADH (US 4.965.338), porções C4 a C12 (US 4.663.160), etc. Como uma alternativa ao uso de um ligador, a ligação direta pode ser usada. As ligações diretas à proteína podem compreender a oxidação do sacarídeo seguida pela aminação redutiva com a proteína, como descrito, por exemplo na US 4.761.283 e US 4.356.170 ou uma reação de CDAP direta.
Depois da conjugação, os sacarídeos livres e conjugados podem ser separados. Existem muitos métodos adequados para esta separação, incluindo a cromatografia hidrofóbica, ultrafiltração tangencial, diafiltração, etc (ver também Lei et al., 2000, Dev Biol. (Basel), 103: 259; WO 00/38711; US 6.146.902). Em uma forma de realização, se uma vacina compreende um dado sacarídeo tanto na forma livre quanto na conjugada, a forma não conjugada não é maior do que 20 % em peso da quantidade total deste sacarídeo na composição como um todo (por exemplo, 15 %, 10 %, 5 %, 2 %, 1 %).
Uma quantidade de sacarídeo que é capaz de conferir proteção a um hospedeiro (uma quantidade eficaz) pode ser determinada pela pessoa habilitada. Em uma forma de realização, cada dose compreenderá de 0,1 a 100 μg de sacarídeo, em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 0,1 a 50 μg, em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 0,1 a 10 μg, já em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 1 a 5 μg. Adjuvantes
As vacinas da invenção podem incluir um excipiente farmaceuticamente aceitável tal como um adjuvante adequado. Os adjuvantes adequados incluem um sal de alumínio tal como hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio, mas também podem ser um sal de cálcio, ferro ou zinco ou podem ser uma suspensão insolúvel de tirosina acilada ou açúcares acilados ou podem ser sacarídeos catiônica ou anionicamente derivados, polifosfazenos, microesferas biodegradáveis, monofosforil lipídeo A (MPL), derivados de lipídeo A (por exemplo, de toxicidade reduzida), MPL 3-0- desacilado, quil A, Saponina, QS21, tocol (EP 0382271), Adjuvante Incompleto de Freund (Difco Laboratories, Detroit, MI), Adjuvante Merck 65 (Merck and Company, Inc., Rahway, NJ), AS-2 (Smith-Kline Beecham, Filadélfia, PA), oligonucleotídeos de CpG, bioadesivos e mucoadesivos, micropartículas, lipossomas, formulações de éter de polioxietileno, formulações de éster de polioxietileno, polipeptídeos de muramila ou compostos de imidazoquinolona (por exemplo, imiquamod e seus homólogos). Imunomoduladores humanos adequados para o uso como adjuvantes na invenção incluem citocinas tais como interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, etc), fator estimulador de colônia de macrófago (M-CSF), fator de necrose de tumor (TNF), fator estimulador de colônia de granulócito macrófago (GM-CSF) também podem ser usados como adjuvantes.
Em uma forma de realização da invenção, a composição de adjuvante das formulações induz uma resposta imune predominantemente do tipo THl. Os níveis altos de citocinas tipo THl (por exemplo, IFN-γ, TNFa, IL-2 e IL-12) tendem a favorecer a indução de resposta imunes mediadas por célula para um antígeno administrado. Dentro de uma forma de realização, em que uma resposta é predominantemente tipo TH1, o nível de citocinas tipo THl aumentará a um grau maior do que o nível de citocinas tipo TH2. Os níveis destas citocinas podem ser facilmente avaliados usando ensaios padrão. Para uma revisão das famílias de citocinas, ver a Mosmann e Coffman, 1989, Ann. Rev. Immunol. 7: 145.
Consequentemente, os sistemas de adjuvante adequados que promovem uma resposta predominantemente THl incluem, derivados de lipídeo A (por exemplo, de toxicidade reduzida), Monofosforil lipídeo A (MPL) ou um derivado deste, particularmente monofosforil lipídeo A 3-des- O-acilado (3D-MPL) e uma combinação de monofosforil lipídeo A, de modo opcional monofosforil lipídeo A 3-des-O-acilado junto com um sal de alumínio. Um sistema realçado envolve a combinação de um monofosforil lipídeo A e um derivado de saponina, particularmente a combinação de QS21 e 3D-MPL como divulgado na WO 94/00153 ou uma composição menos reatogênica onde o QS21 é extinto com colesterol como divulgado na WO 96/33739. Uma formulação de adjuvante particularmente potente envolvendo QS21, 3D-MPL e tocoferol em uma emulsão de óleo em água é descrita na WO 95/17210. A vacina pode adicionalmente compreender uma saponina, que pode ser QS21. A formulação também pode compreender uma emulsão de óleo em água e tocoferol (WO 95/17210). CpG não metilado contendo oligonucleotídeos (WO 96/02555) também são indutores preferenciais de uma resposta THl e são adequados para o uso na presente invenção.
As vacinas da invenção também podem compreender combinações de aspectos de um ou mais dos adjuvantes da invenção identificados acima.
Qualquer adjuvante da invenção pode ser absorvido por ou combinados com os componentes de IPV da invenção.
Quando da alusão ao hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio, referência é feita a todos os adjuvantes de hidróxido de alumínio e ou fosfato de alumínio como descritos por Hem e White (Pharm Biotechnol- 1995; 6: 249-276). Em uma forma de realização, fosfato de alumínio também pode ser aludido como hidroxifosfato de alumínio. Em uma outra forma de realização, o fosfato de alumínio tem uma carga negativa em um pH de 7,4. Tipicamente, o ponto isoelétrico (pi) do fosfato de alumínio é de 5 a 7 ou de 6 a 7 ou em torno de ou exatamente 5. Em uma outra forma de realização, fosfato de alumínio tem uma razão molar de fosfato:alumínio de 0,3 a 0,9 ou de 0,3 a 0,6 ou de 0,8 a 0,9.
Em uma forma de realização, hidróxido de alumínio tem uma carga positiva em um pH de 7,4. Tipicamente, o pi do hidróxido de alumínio é de 8 a 11, de 9 a 11, de 10 a 11 ou em torno de ou exatamente 11.
Tipicamente, o teor de alumínio total é de 200 a 1000 μg, 300 a 900 400 a 800 500 a 700 μg ou em torno de ou exatamente 630 de Al3+ por dose de 0,5 ml. Este pode ser tudo hidróxido de alumínio ou tudo
T ι β
fosfato de alumínio. Alternativamente o teor de Al pode ser de uma mistura de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio na seguinte proporção: 1:8 a 8:, 1:4 a 4:1, 3:8 a 8:3, 1:2 a 2:1 ou 1:1 de fosfato de alumínio:hidróxido de alumínio. Em uma forma de realização uma razão de 12:1 a 4:1, 11:1 a 5:1, 10:1 a 6:1, 9:1 a 7:1 ou 8:1 de fosfato de alumínio:hidróxido de alumínio é usada.
Embora a maior parte do alumínio seja fornecida pelos antígenos pré-absorvidos antes da mistura para formar uma vacina de combinação, algum alumínio pode ser adicionada na forma livre durante a formulação da vacina de combinação da invenção, por exemplo, antes da etapa de ajuste do pH aqui descrita. Tipicamente, o teor de alumínio livre por dose de 0,5 ml pode ser de 0 a 300 μg, 50 a 250 μ^, 75 a 200 μ^ 100 a 150 μg ou em torno de ou exatamente 115 μg def Al3+. O Al3+ livre pode ser todo Al(OH)3 ou todo AlPO4 ou uma mistura de Al(OH)3 e AlPO4 na seguinte proporção (w:w A13+:A13-): 1:1 a 1:6, 1:1,1 a 1:5, 1:1,2 a 1:4, 1:1,3 a 1:3, 1:1,4 a 1:2, por exemplo, 23/92 ou 69/46 ou 6:1 a 1:1, 5:1 a 1,1:1, 4:1 a 1,2:1, 3:1 a 1,3:1,2:1 a 1,4:1, por exemplo, 46/69 ou 92/23.
Alternativamente certos componentes das vacinas da invenção podem não ser expressamente absorvidos em adjuvante, em particular os sais de alumínio.
IPV pode ser não absorvido ou absorvido em Al(OH)3 ou uma mistura de Al(OH)3 e AlPO4. DT pode ser absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4, TT pode ser absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4, Pw pode ser absorvido em ou misturado com AlPO4, PRN pode ser absorvido em Al(OH)3, FHA pode ser absorvido em Al(OH)3, PT pode ser absorvido em Al(OH)3, HB pode ser absorvido em AlPO4, Hib pode ser absorvido em AlPO4 ou não absorvido, Men ACWY pode ser absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4 ou não absorvido, o componente MenB pode ser absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4 ou não absorvido, Vi pode ser absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4 ou não absorvido, HepA pode ser absorvido em Al(OH)3 ou A1P04.
Os antígenos que são pré-absorvidos em um sal de alumínio podem ser pré-absorvidos individualmente antes de misturar. Em uma outra forma de realização, uma mistura de antígenos pode ser pré-absorvida antes da mistura com outros adjuvantes. Em uma forma de realização, IPV pode ser absorvido separadamente ou como uma mistura de IPV tipos 1, 2 e 3 ou quando misturado com componentes DeT absorvidos.
O significado de "antígeno absorvido" é por exemplo intencionado a significar mais do que 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % absorvido.
O significado dos termos "fosfato de alumínio" e "hidróxido de alumínio" como aqui usados inclui todas as formas de hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio que são adequadas para adjuvantar vacinas. Por exemplo, fosfato de alumínio pode ser um precipitado de fosfato de alumínio insolúvel (amorfo, semi-cristalino ou cristalino), que pode ser de modo opcional mas não exclusivamente preparado misturando-se sais de alumínio e sais do ácido fosfórico solúveis. "Hidróxido de alumínio" pode ser um precipitado de hidróxido de alumínio insolúvel (amorfo, semi-cristalino ou cristalino), que pode ser de modo opcional mas não exclusivamente preparado pela neutralização de uma solução de sais de alumínio. Particularmente adequados são as várias formas de géis de hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio disponíveis de fontes comerciais por exemplo, Alhydrogel (hidróxido de alumínio, suspensão a 3 % em água) e Adjuphos (fosfato de alumínio, suspensão a 2 % em solução salina) fornecido pela Brenntag Biosector (Dinamarca). Componentes não imunológicos de vacinas da invenção
As vacinas da invenção tipicamente, além dos componentes antigênicos e adjuvantes mencionados acima, compreenderá um ou mais "carregadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis", que incluem qualquer excipiente que por si só não induz a produção de anticorpos nocivos para o indivíduo que recebe a composição. Os excipientes adequados são tipicamente macromoléculas grandes, lentamente metabolizados tais como proteínas, sacarídeos, ácidos poliláticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácido, sacarose (Paoletti et al., 2001, Vaccine, 19: 2118), trealose (WO 00/56365), lactose e agregados lipídicos (tais como gotícuias oleosas ou lipossomas). Tais carregadores são bem conhecidos por aqueles de habilidade comum na técnica. As vacinas também podem conter diluentes, tais como água, solução salina, glicerol, etc. Adicionalmente, substâncias auxiliares, tais como agentes de umectação ou emulsificação, substâncias tamponizadoras de pH e outras, podem estar presentes. A solução salina fisiológica isenta de pirogênio estéril, tamponada com fosfato é um carregador típico. Um debate completo de excipientes farmaceuticamente aceitáveis está disponível na referência Gennaro, 2000, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edição, ISBN: 0683306472. As composições da invenção podem ser liofilizadas ou na forma aquosa, isto é soluções ou suspensões. As formulações líquidas deste tipo permitem que as composições sejam administradas diretamente da sua forma embalada, sem a necessidade para reconstitução em um meio aquoso e são assim ideais para a injeção. As composições podem ser apresentadas em frascos ou elas podem ser apresentadas em seringas já enchidas. As seringas podem ser fornecidas com ou sem agulhas. Uma seringa incluirá uma dose única da composição, ao passo que um frasco pode incluir uma dose única ou doses múltiplas (por exemplo, 2 doses). Em uma forma de realização a dose e para o ser humano. Em uma outra forma de realização a dose é para um ser humano adulto, adolescente, criança entre um e três anos, bebê ou menor do que um ano de idade e pode ser administrada pela injeção.
As vacinas líquidas da invenção também são adequadas para reconstituir outras vacinas a partir de uma forma liofilizada. Onde uma vacina deva ser usada para tal reconstituição extemporânea, a invenção fornece um
, · r
kit, que pode compreender dois frascos ou pode compreender uma seringa ja enchida e um frasco, com os conteúdos da seringa sendo usados para reconstituir os conteúdos do frasco antes da injeção.
As vacinas da invenção podem ser embaladas na forma de dose unitária ou na forma de dose múltipla (por exemplo, 2 doses). Para as formas de dose múltipla, os frascos são preferidos às seringas pré-enchidas. Os volumes de dosagem eficazes podem ser rotineiramente estabelecidos, mas uma dose humana típica da composição para injeção tem um volume de 0,5 ml.
Em uma forma de realização, as vacinas da invenção têm um pH dentre 6,0 e 8,0, em uma outra forma de realização as vacinas da invenção têm um pH dentre 6,3 e 6,9, por exemplo, 6,6 ± 0,2. As vacinas podem ser tamponadas neste pH. O pH estável pode ser mantido pelo uso de um tampão. Se uma composição compreende um sal de hidróxido de alumínio, um tampão de histidina pode ser usado (W003/009869). A composição deve ser estéril e/ou isenta de pirogênio.
As composições da invenção podem ser isotônicas com respeito aos seres humanos.
As vacinas da invenção podem incluir um antimicrobiano, particularmente quando embaladas em um formato de dose múltipla. Tiomersal deve ser evitado visto que este leva à perda de potência do componente de IPV. Outros antimicrobianos podem ser usados, tais como 2- fenoxietanol ou parabenos (metil, etil, propil parabenos). Qualquer conservante está preferivelmente presente em níveis de dose baixos. O conservante pode ser adicionado exogenamente e/ou pode ser um componente dos antígenos de volume que são misturados para formar a composição (por exemplo, presente como um conservante em antígenos da coqueluche).
Em uma forma de realização, as vacinas da invenção são isentas de tiomersal ou substancialmente isentas de tiomersal. Por "isento de tiomersal" ou "substancialmente isento de tiomersal" é intencionado que não haja tiomersal suficiente presente na formulação final para impactar negativamente a potência do componente de IPV. Por exemplo, se tiomersal é usado durante o processo de purificação de Pw ou antígeno de superfície da Hepatite B o mesmo deve ser substancialmente removido antes da mistura com IPV. O teor de tiomersal na vacina final deve ser menor do que 0,025 μg/μg de proteína, 0,02 μg/μg de proteína, 0,01 μg/μg de proteína ou 0,001 μg/μg de proteína, por exemplo 0 μg/μg de proteína. Em uma forma de realização, tiomersal não é adicionado nem usado na purificação de qualquer componente. Ver por exemplo a EP1307473 para a Hepatite B e ver o acima para processos de Pw onde a morte é obtida não na presença de tiomersal.
As vacinas da invenção podem compreender detergente por exemplo, um Tween (polissorbato), tal como Tween 80. Os detergentes estão no geral presentes em níveis baixos por exemplo, < 0,01 %. As vacinas da invenção podem incluir sais de sódio (por exemplo, cloreto de sódio) para dar tonicidade. A composição pode compreender cloreto de sódio. Em uma forma de realização, a concentração de cloreto de sódio na composição da invenção está na faixa de 0,1 a 100 mg/ml (por exemplo, 1 a 50 mg/ml, 2 a 20 mg/ml, 5 a 15 mg/ml) e em uma outra forma de realização a concentração de cloreto de sódio é de 10 ± 2 mg/ml de NaCl por exemplo, cerca de 9 mg/ml.
As vacinas da invenção no geral incluirão um tampão. Um tampão de fosfato ou histidina é típico.
As vacinas da invenção podem incluir íons fosfato livres em solução (por exemplo, pelo uso de um tampão de fosfato) de modo a favorecer a não absorção de antígenos. A concentração de íons fosfato livres na composição da invenção está em uma forma de realização entre 0,1 e 10,0 mM ou em uma outra forma de realização entre 1 e 5 mM ou em uma outra forma de realização de cerca de 2,5 mM. Propriedades das vacinas da invenção
Em uma forma de realização as vacinas da invenção são formuladas como uma vacina para a administração in vivo ao hospedeiro em um tal modo que os componentes individuais da composição sejam formulados tal que a imunogenicidade de componentes individuais não seja substancialmente prejudicada por outros componentes individuais da composição. Por não substancialmente prejudicada, é intencionado que na imunização, um título de anticorpo contra cada componente seja obtido que é maior do que 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % ou 95 a 100 % do título obtido quando o antígeno é administrado em isolação. Assim, em formas de realização preferidas, nenhum efeito (significantemente) nocivo ocorre aos componentes adicionais (em termos de eficácia protetor) na combinação quando comparado com a sua administração em isolação. Formulações de Vacina
Em uma forma de realização, as vacinas da invenção são formuladas como uma vacina para a administração in vivo ao hospedeiro, tal que confiram um título de anticorpo superior ao critério para a soroproteção para cada componente antigênico para uma porcentagem aceitável de pacientes humanos. Isto é um teste importante na avaliação de uma eficácia da vacina por toda a população. Antígenos com um título de anticorpo associado acima do qual um hospedeiro é considerado ser soroconvertido contra o antígeno são bem conhecidos e tais títulos são publicados pelas organizações tais como WHO. Em uma forma de realização, mais do que 80 % de uma amostra estatisticamente significante de pacientes são soroconvertido, em uma outra forma de realização mais do que 90 % de uma amostra estatisticamente significante de pacientes são soroconvertidos, em uma outra forma de realização mais do que 93 % de uma amostra estatisticamente significante de pacientes é soroconvertida e já em uma outra forma de realização 96 a 100 % de uma amostra estatisticamente significante de pacientes são soroconvertido.
A quantidade de antígeno em cada dose de vacina é selecionada como uma quantidade que induz uma resposta imunoprotetor sem efeitos colaterais adversos, significantes nas vacinas típicas. Tal quantidade variará dependendo de quais imunógenos específicos são utilizados. No geral é esperado que cada dose compreenderá de 1 a 1000 μg de imunógeno total ou de 1 a 100 μg ou 1 a 40 μg ou 1 a 5 μg. Uma quantidade ótima para uma vacina particular pode ser averiguada pelos estudos envolvendo a observação de títulos de anticorpo e outras respostas em pacientes. Um curso de vacinação primária pode incluir 2 a 3 doses de vacina, dadas de um a dois meses separadamente, por exemplo, seguindo as recomendações da WHO para a imunização de DTP (isto é no primeiro ano de vida). As doses reforçadoras podem seguir no segundo e/ou em ano(s) subsequente(s) de vida. Potência da pólio como medida pelo teste de soroneutralização em ratos
Para o propósito da invenção, o ensaio para a avaliação quantitativa de IPV da potência da vacina das vacinas contendo IPV da invenção deve ser realizado usando uma dose única de vacina e deve ser feito pela determinação da razão do título médio geométrico da vacina de teste (GMT) para o GMT da vacina de referência e é relatado como a resposta relativa (RR) ou potência relativa (RP). O GMT de referência pode ser o GMT obtido com qualquer vacina de IPV que compreenda 40-8-32 unidades de antígeno D de IPV tipos 1-2-3 respectivamente e pode ser o GMT obtido com a vacina Poliorix® conhecida. Tipicamente, o teste de RP é realizado como segue:
A potência de poliovírus Tipos 1, 2 e 3 é determinada em ratos pela soroneutralização:
Grupos de 10 ratos saudáveis (Sprague-Dawley (OFA) ou qualquer cepa validada de antemão) são inoculados intramuscularmente com as diluições (1/1,25; 1/3,125; 1/7,81) das amostras de teste ou material de referência em solução salina tamponada com fosfato. Se necessário, a faixa de diluição pode ser extendida a 4 diluições pela inoculação de vacina não diluída e as três diluições anteriormente mencionadas. Dez ratos inoculados com o diluente são usados como controles negativos. Os ratos são observados uma vez por semana para detectar qualquer reação anormal. 20 a 22 dias depois da inoculação, cada animal é profundamente anestesiado e sangrado e o soro é coletado para ser analisado pelo teste de soroneutralização.
Para o teste de soroneutralização, os soros são inativados pela incubação a 56° C por 30 minutos em um banho de água. Três séries de diluição dos soros, uma para cada tipo de pólio, são preparadas em microplacas usando o meio de diluição apropriado. As placas são armazenadas a + 4o C.
Para os três tipos de vírus da pólio, uma quantidade pré determinada de vírus (30 a 300 CCID50) é adicionada às diluições de soro. As três suspensões de vírus são diluídas levando-se em conta os seus respectivos títulos. A diluição final é chamada de 'diluição de trabalho'. Cada diluição de trabalho é adicionada às microplacas correspondentes. As placas são depois seladas e incubadas a 37° C ± Io C por 16 horas. As células Hep-2 são depois adicionadas e as microplacas são incubadas a 37° C ± Io C por 7 dias. O efeito citopatogênico (CPE) do vírus é lido usando um microscópio invertido depois da coloração com azul de Coomassie. A presença de anticorpos anti- poliomielite inibe o crescimento dos vírus e o aparecimento do CPE correspondente. Os títulos de vírus anti-pólio (tipo 1, 2 e 3) correspondem à recíproca da última diluição sem qualquer CPE. Em cada grupo, animais com anticorpos neutralizadores são registrados e o título de anticorpo de cada amostra de soro é determinado para os diferentes tipos de poliovírus. O título do anticorpo neutralizador é expressado como o log2 da inversa da diluição mais alta da amostra sérica que inibe totalmente o efeito citopático de poliovírus em células Hep-2.
O título médio geométrico por diluição (GMT) e por tipo de vírus também é determinado para cada grupo de ratos. Empacotamento de vacinas da invenção
Vacinas da invenção podem ser empacotadas em vários tipos de recipiente por exemplo, em frascos, em seringas, etc. Um frasco de dose múltipla tipicamente compreenderá um orifício plástico re-selável através do qual uma agulha estéril pode ser inserida para remover uma dose de vacina, que re-sela uma vez que a agulha tenha sido removida.
A vacina pode ser fornecida em vários recipientes (por exemplo, 2 ou 3). Os conteúdos dos recipientes podem ser misturados extemporaneamente antes de administrar a um hospedeiro em uma única injeção ou podem ser administrados concomitantemente em sítios diferentes. A dose da vacina ou cada vacina se um kit é administrado concomitantemente (em dois ou mais recipientes) tipicamente será de 0,5 ml.
Em uma forma de realização deste aspecto da invenção é fornecido um kit que compreende duas vacinas multi-valentes para conferir proteção em um hospedeiro contra doença causada pelo poliovírus, Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium difteriae e de modo opcional um ou mais de Hepatite B, Haemophilus influenza tipo B, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Neisseria meningitidis tipo B, Salmonella typhi, Hepatite A ou Malária. O kit compreende um primeiro recipiente que compreende:
(1) (a) vírus da pólio inativado (IPV) da invenção,
(b) toxóide da difteria (DT ou D) (ver a acima),
(c) toxóide do tétano (TT ou T) (ver a acima),
(d) célula integral morta de Bordetella pertussis (Pw) ou 2 ou mais componentes da coqueluche acelulares (Pa) (ver acima),
(e) de modo opcional antígeno de superfície da Hepatite B (HepB ou HB) (ver acima),
(f) de modo opcional um conjugado de uma proteína carregadora e o sacarídeo capsular de H. influenzae tipo B (Hib) (ver acima),
(g) de modo opcional cada um ou ambos dos conjugados de
uma proteína carregadora e um sacarídeo capsular de um N. meningitidis tipo A (MenA) ou N. meningitidis tipo C (MenC) (ver a acima), e
um segundo recipiente que compreende:
(2A)(a) conjugados de uma proteína carregadora e um sacarídeo capsular de N. meningitidis tipo A (MenA), N. meningitidis tipo C (MenC), N. meningitidis tipo W (MenW) e/ou N. meningitidis tipo Y (MenY) (ver acima para as várias combinações de sacarídeo Men da invenção), e
(b) de modo opcional um conjugado de uma proteína carregadora e o sacarídeo capsular de H. influenzae tipo B (Hib); ou (2Β) (a) um conjugado de uma proteína carregadora e o sacarídeo capsular de H. influenzae tipo B (Hib), e
(b) de modo opcional um conjugado de uma proteína carregadora e sacarídeo Vi de Salmonella typhi
O kit pode de modo opcional compreender um terceiro recipiente que compreende:
(3) (a) de modo opcional antígeno de superfície da Hepatite B (b) de modo opcional um conjugado de uma proteína carregadora e sacarídeo Vi de Salmonella typhi
Os recipientes podem em cada caso adicionalmente compreender antígeno(s) HepA e/ou antígeno(s) MenB e/ou RTS.S e/ou antígeno(s) de Streptococcus pneumonia.
Em cada caso, o mesmo antígeno não deve estar presente em ambos os recipientes.
Em uma forma de realização o primeiro recipiente tem além dos componentes a), b), c), d) também e), f), g), e) + f), e) + g), f) + g) ou e) +
f) + g)·
Em uma forma de realização a vacina do primeiro recipiente pode ser líquida e a vacina do segundo recipiente pode ser líquida ou liofílizada (por exemplo, na presença de um excipiente de estabilização conhecido tal como sacarose ou trealose).
Os recipientes do kit podem ser empacotados separadamente ou, de modo opcional, empacotados juntos. Em uma forma de realização, o kit é fornecidos com um lista de instruções para a administração das vacinas nos dois ou mais recipientes.
Em uma forma de realização, onde um recipiente em um kit contém um certo conjugado de sacarídeo, o mesmo conjugado não está presente nos outros recipientes do kit.
Os inventores acreditam que um kit fornecido no modo acima pode vantajosamente apresentar os vários antígenos a um sistema imune hospedeiro em uma maneira ótima. O kit pode munir um médico com um método ideal de imunizar um hospedeiro com uma ou mais das seguintes vantagens: eficácia protetor para todos os antígenos, reatogenicidade mínima, interferência de supressão de carregador mínima, interferência de adjuvante/antígeno mínima ou interferência antígeno/antígeno mínima. Em um tal modo, estas metas podem ser obtidas com o número mínimo de (duas) administrações, de modo a ocorrer opcionalmente na mesma visita ao médico.
Em uma forma de realização as vacinas dos primeiro e segundo recipientes são administradas concomitantemente em sítios diferentes (como descrito abaixo sob "administração de vacinas da invenção) e em uma forma de realização alternativa os inventores pressentem que os conteúdos do primeiro e segundo recipientes podem ser misturados (de modo extemporaneamente opcional) antes da administração como uma vacina única.
Preparar vacinas da invenção
A presente invenção também fornece um método para produzir uma formulação de vacina que compreende a etapa de misturar os componentes da vacina juntos com um excipiente farmaceuticamente aceitável.
Em uma forma de realização da presente invenção é fornecida uma vacina como aqui descrita para o uso em um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças causadas pela infecção pelo poliovírus e de modo opcional Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium difteriae, vírus da Hepatite B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi ou Hepatite A.
Em uma outra forma de realização da invenção é fornecido um uso das vacinas da invenção na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças causadas pela infecção pelo poliovírus e de modo opcional Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium difteriae, vírus da Hepatite B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi ou Hepatite A.
Adicionalmente, um método de imunizar um ser humano hospedeiro contra doença causada pelo poliovírus e de modo opcional Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium difteriae, vírus da Hepatite B, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Salmonella typhi ou Hepatite A, método este que compreende administrar ao hospedeiro uma dose imunoprotetor da vacina da invenção também é fornecido.
A quantidade de antígeno em cada dose de vacina é selecionada como uma quantidade que induz uma resposta imunoprotetor sem efeitos colaterais adversos, significantes em vacinas típicas. Tal quantidade variará dependendo de qual imunógeno específico é utilizado e como o mesmo será apresentado. Em uma forma de realização cada dose compreenderá de 0,1 a 100 μg de sacarídeo, em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 0,1 a 50 μg, em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 0,1 a 10 μg, já em uma outra forma de realização cada dose compreenderá de 1 a 5 μg de sacarídeo.
Em uma forma de realização, o conteúdo de antígenos de proteína na vacina estará na faixa de 1 a 100 μg, em uma outra forma de realização o conteúdo de antígenos de proteína nas vacinas estará na faixa de a 50 μg, em uma outra forma de realização o conteúdo de antígenos de proteína nas vacinas estará na faixa de 5 a 25 μg.
A preparação de vacina é no geral descrita em Vaccine Design ["The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M. F. & Newman M. J.) (1995) Plenum Press Nova Iorque]. A encapsulação dentro de lipossomas é descrita por Fullerton, Patente US 4.235.877. Conjugação de proteínas às macromoléculas é divulgada, por exemplo por Likhite, Patente US 4.372.945 e por Armor et al., Patente US 4.474.757. O uso de Quil A é divulgado por Dalsgaard et al., 1977, Acta Vet Scand. 18: 349. 3D-MPL está disponível da Ribi Immunochem, USA e é divulgado no Pedido de Patente Britânica 2220211 e Patente US 4.912.094. QS21 é divulgado na Patente US 5.057.540.
Em uma outra forma de realização da invenção é fornecida uma vacina multi-valente que compreende poliovírus inativados (IPV) da invenção e de modo opcional célula integral morta de Bordetella pertussis (Pw), toxóide do tétano (TT), toxóide da difteria (DT), um conjugado de uma proteína carregadora e o sacarídeo capsular de H. influenzae tipo B (Hib — de modo opcional conjugado a TT, DT ou CRM197), em que a quantidade de conjugado por dose de 0,5 ml de vacina volumosa é de 1 a 8 e a imunogenicidade do conjugado é equivalente ou melhorado em relação a tais composições que compreendem quantidades maiores de conjugado. Opcionalmente, antígeno de superfície da Hepatite B também pode ser incluído.
Em uma forma de realização a quantidade de conjugado por dose de 0,5 ml de vacina volumosa é menor do que 10 μg (de sacarídeo no conjugado), em uma outra forma de realização a quantidade de conjugado é de 1 a 7, em uma outra forma de realização a quantidade de conjugado é de 2 a 6 μg ou em uma outra forma de realização de cerca de 2,5, 3, 4 ou 5 μg.
Será avaliado que certos componentes, por exemplo componentes DTPw, podem ser combinados separadamente antes de adicionar o HBsAg absorvido ou outros componentes.
Um método para fabricar vacinas da invenção também é fornecido que compreende a etapa de misturar IPV tipo 1, IPV tipo 2 e/ou IPV tipo 3 com um excipiente farmaceuticamente aceitável. Um processo típico para preparar vacina volumosa da invenção com outros antígenos adicionarão os componentes de IPV a uma mistura dos componentes DeT, isto é os componentes DT são misturados com os componentes de IPV. Esta ordem de misturar possibilita que a concentração iônica e/ou o pH da composição sejam ajustados (por exemplo, pH < 7) antes da adição dos componentes de Pa ou Pw. Tipicamente, HB pré-absorvido em AIPO4 é adicionado primeiro se incluído na composição, seguido pela adição de DT pré-absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4, seguido pela adição de TT pré- absorvido em Al(OH)3 ou AlPO4, seguido pela adição de IPV de modo opcional pré-absorvido em Al(OH)3, antes do ajuste do pH para por exemplo, pH 5,9 a 7,2 ou pH 6 a 7 ou pH 6,2 a 6,8 ou pH 6,4 a 6,6 e depois a adição de Pw pré-absorvido em AlPO4. Opcionalmente, os antígenos Hib, Vi, MenA, MenC, MenW, Men Y, MenB e/ou HepA podem ser adicionados em qualquer ponto neste processo. Em uma forma de realização, os antígenos Hib, Vi, MenA, MenC, MenW, Men Y, MenB e/ou HepA são adicionados antes do ajuste do pH. Em uma forma de realização um ou mais antígenos da invenção são absorvidos em fosfato de alumínio ou hidróxido de alumínio ou uma mistura de ambos. Em uma outra forma de realização os antígenos da invenção são misturados com um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou adjuvante(s).
Em uma forma de realização, a composição de vacina da invenção pode ser preparada na seguinte ordem: HBsAg pré-absorvido é adicionado, seguido pelo toxóide da difteria pré-absorvido, seguido pelo toxóide do tétano pré-absorvido e IPV, o pH é depois ajustado para aproximadamente 6,5 antes da adição de Pw pré-absorvido.
Em uma outra forma de realização, a composição de vacina da invenção pode ser preparada na seguinte ordem: toxóide do tétano pré- absorvido é adicionado, seguido por IPV, seguido por HBsAg pré-absorvido, seguido por toxóide da difteria pré-absorvido, o pH é depois ajustado a aproximadamente 6,5 antes de adicionar Pw pré-absorvido.
No geral, as composições de vacina combinadas de acordo com qualquer aspecto da invenção podem ser preparadas como segue: O IPV, DTPw, HepB, MenA, MenC, MenW, MenY, MenB, Vi, Hepatite A ou outros componentes são pré-absorvidos em um adjuvante adequado, especialmente hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos. Depois deixando tempo para a absorção completa e estável dos respectivos componentes, os componentes diferentes são combinados sob condições apropriadas. O(s) conjugado(s) Hib, Vi, MenA, MenC, MenW e/ou MenY pode(m) ser ou absorvidos ou não em sal adjuvante de alumínio antes de serem misturados com a vacina de DTPw.
Em uma forma de realização, as vacinas da invenção são preparadas entre 15° C e 30° C (por exemplo, entre 19° C e 27° C ou a 23 ± 4o C). Administração de vacinas da invenção
A invenção fornece um método para incitar uma resposta imune em um mamífero, que compreende a etapa de administrar uma quantidade eficaz de uma vacina da invenção. As vacinas podem ser administradas profilaticamente (isto é para prevenir a infecção). A resposta imune é preferivelmente protetor e preferivelmente envolve anticorpos. O método pode incitar uma resposta reforçadora.
A seguir de uma vacinação inicial, os pacientes podem receber uma ou diversas imunizações de reforço (subsequentes) adequadamente espaçadas. O tratamento de dosagem pode ser um programa de dose única ou um programa de dose múltipla. As doses múltiplas podem ser usadas em um programa de imunização primária e/ou em um programa de imunização de reforço. Um programa de dose primária, que pode ser no primeiro ano de vida, pode ser seguido por um programa de dose de reforço. O controle de tempo adequado entre as doses de imprimação (por exemplo, entre 4 a 16 semanas) e entre imprimação e reforço pode ser rotineiramente determinada. Em uma forma de realização, o mamífero é um ser humano. Onde a vacina é para o uso profilático, o ser humano é preferivelmente uma criança (por exemplo, uma criança entre um e três anos ou bebê) ou um adolescente; onde a vacina é para o uso terapêutico, o ser humano é preferivelmente um adulto. Uma vacina pretendida para criança também pode ser administrada aos adultos por exemplo, para avaliar a segurança, dosagem, imunogenicidade, etc.
As preparações de vacina da presente invenção podem ser usadas para proteger ou tratar um mamífero suscetível à infecção, por meio de administração da dita vacina diretamente a um paciente, a liberação direta pode ser realizada pela administração parenteral (intramuscular, intraperitoneal, intradérmica, subcutânea, intravenosamente ou ao espaço intersticial de um tecido); ou pela administração retal, oral, vaginal, tópica, transdérmica, intranasal, ocular, aural, pulmonar ou outra administração mucósica. Em uma forma de realização, a administração é pela injeção intramuscular na coxa ou no ante braço. A injeção pode ser por intermédio de uma agulha (por exemplo, uma agulha hipodérmica), mas a injeção sem agulha pode alternativamente ser usada. Uma dose intramuscular típica é de 0,5 ml.
As infecções bacterianas afetam várias áreas do corpo e assim
as composições da invenção podem ser preparadas em várias formas. Por exemplo, as composições podem ser preparadas como injetáveis, como soluções ou suspensões líquidas. A composição pode ser preparada para a administração pulmonar por exemplo, como um inalador, usando um pó fino ou pulverização. A composição pode ser preparada como um supositório ou pessário. A composição pode ser preparada para a administração nasal, aural ou ocular por exemplo, como pulverização, gotas, gel ou pó (ver por exemplo, Almeida & Alpar, 1996, J Drug Targeting, 3: 455; Bergquist et al., 1998, APMIS, 106: 800). A administração intranasal bem sucedida de vacinas de DTP foi relatada (Ryan et al., 1999, Infect. Immun., 67: 6270; Nagai et al., 2001, Vaccine, 19:4824).
Em uma forma de realização as vacinas do primeiro e segundo (e terceiro onde aplicável) recipientes são administradas concomitantemente em locais diferentes e em uma forma de realização alternativa os inventores preveem que os conteúdos do primeiro e segundo recipientes podem ser misturados (de modo opcional extemporaneamente) antes da administração como uma vacina única.
A invenção pode ser usada para evocar imunidade sistêmica
e/ou mucósica.
Um modo de checar a eficácia do tratamento terapêutico envolve monitorar a infecção bacteriana depois da administração da composição da invenção. Um modo de checar a eficácia do tratamento profilático envolve monitorar as respostas imunes contra os antígenos depois da administração da composição. A imunogenicidade das composições da invenção podem ser determinadas pela administração das mesmas aos pacientes de teste (por exemplo, crianças de 12 a 16 meses de idade ou modelos de animal - WO 01/30390) e depois determinar os parâmetros imunológicos padrão. Estas respostas imunes no geral serão determinadas em torno de 4 semanas depois da administração da composição e comparadas aos valores determinados antes da administração da composição. Ao invés de avaliar a eficácia protetor real em pacientes, o animal padrão e modelos in vitro e correlatos de proteção para avaliar a eficácia das vacinas de DTP são bem conhecidos.
Os termos "compreendendo", "compreender" e "compreende" aqui são intencionados pelos inventores a serem de modo opcional substituíveis com os termos "que consiste de", "consistir de" e "consiste de", respectivamente, em todos os casos. Isto não muda o significado normal destes termos e é apenas intencionado a fornecer base para a substituição, não para torná-los equivalentes no significado.
Todas as referências e publicações citadas são aqui incorporadas por referência. EXEMPLOS
Os exemplos são fornecidos unicamente para os propósitos de ilustração e não são intencionados a limitar o escopo da invenção. Exemplo 1: Testes em formulações de IPV de dose baixa
Para todas as formulações do Exemplo 1, os antígenos são absorvidos pela adição de sal de alumínio antes da formulação exceto IPV que é adicionado sem absorção.
As tabelas abaixo apresentam o método de absorção para D, T,
Pw e HBsAg.
AlPO4
D (7,5 Lf/0,075 mg de Al3)
I
Agitar de 15 até 20 min. na temperatura ambiente t° Ajustar o pH ao pH 5,1 +/- 0,1
I
Agitar de 15 até 20 min. na temperatura ambiente t°
I
Checar o pH 5,1 +/- 0,1
I
Agitar de 15 até 45 min. na temperatura ambiente t°
I
Maturar 7 dias +/- 8 h a 37° C +/- 1° C sem agitar (vaso de vidro) com agitação (vaso de aço inoxidável)
I
Agitar de 15 até 45 min. na temperatura ambiente t°
I
Ajustar o pH ao pH 6,1 +/- 0,1
I
Agitar de 15 até 20 min. na temperatura ambiente t°
ChecaropH 6,1 +/- 0,1
1
Armazenagem por um mínimo de 7 dias a +2 / +8° C antes da formulação COMPOSIÇÃO FINAL por dose Difteria 7,5 Lf ( +/- 420 Lf/ml) Ar 0,075 mg NaCl 150 mM pH 6,1 +/- 0,1 Volume aproximadamente 18 μΐ
Tabela 1. Método de produções para a absorção do toxóide da difteria.
Al(OH)3 tipo SUPERFOS
T (3,25 Lf/ 0,070 mg de Al3+)
I
Agitar 15 min. de 1 a 20 min. na temperatura ambiente Ajustar ao pH 6,1 +/- 0,1
I
Agitar 15 min. de 1 a 20 min. na temperatura ambiente
I
ChecaropH 6,1 +/- 0,1 Agitar 16 horas até 24 horas na temperatura ambiente
I
NaCl 1500 mM. (ad. 150 mM)
I
Agitar 15 min. de 1 a 45 min. na temperatura ambiente Ajustar ao pH 6,1 +/- 0,1
I
Agitar 15 min. até 20 min. na temperatura ambiente ChecaropH 6,1 +/- 0,1 Armazenar por um mínimo de 14 dias a +2° C / +8° C0 antes da formulação.
COMPOSIÇÃO FINAL por dose Tétano 3,25 Lf (+/- 360 Lf/ml) A1J+ 0,070 mg NaCl 150 mM pH 6,1 +/-0,1 Volume aproximadamente 9 μΐ Tabela 2. Método de produções para a absorção do toxóide do tétano.
AlPO4 0,17 mg Al3+ /d (Brenntag)
Ajustar o pH ao pH 6,5 +/- 0,1
Agitar 15 min. até 20 min. na temperatura ambiente t°
ChecaropH 6,5 +/-0,1
I
Pw 20IOU/d
Agitar 15 min. até 45 min. na temperatura ambiente t°
I
Medir o pH
Armazenagem a + 2° C - + 8° C
COMPOSIÇÃO FINAL por dose Antígenos Adjuvante TAl3+I (mg) Pw 20 OU AlPO4 0,170 mg ΑΓ 0,170 mg AlPO4 NaCl 150 mM PH 6,8 Volume aproximadamente 65 μΐ Tabela 3. Método de produções para a absorção de Pw
HBsAg IOpg
Al3+ 0,20 mg A1P04
Agitar 15 min. até 30 min. na temperatura ambiente t°
I
Ajustar o pH ao pH 5,3 +/- 0,1 Agitar 15 min. até 30 min. na temperatura ambiente t° Checar o pH ao pH 5,3 +/- 0,1 Agitar 20 horas +/- 4 horas na temperatura ambiente t° (absorção) Ajustar o pH ao pH 6,1 +/- 0,1
I
Agitar 15 min. até 30 min. na temperatura ambiente t° Checar o pH ao pH 6,1 +/- 0,1
I
Armazenar 14 dias na temperatura ambiente t° (maturação) Armazenagem 2o C a 8o C COMPOSIÇÃO FINAL por dose Antígenos Adjuvante [A1J+] (mg) HBsAg 10 μ§ AlPO4 0,200 mg Al3+ 0,200 mg AlPO4 NaCl 150 mM pH 6,1 ± 0,1 Volume aproximadamente 50 μΐ
Tabela 4. Método de produções para a absorção de HBsAg
Várias formulações diferentes foram testadas:
• Uma combinação de toxóide da difteria, toxóide do tétano, célula inteira da coqueluche e antígeno de superfície da Hepatite B : DTPwsf-
HB como uma referência (DTPwSF significa que o mesmo é uma formulação isenta de tiomersal), formulados com o método de produção 1 (tabela 5).
• GlaxoSmithKline Biologicals S.A. produto Poliorix® (IPV autônomo não absorvido) como referência de não absorvido na dose padrão, formulado com o método de produção 2 (tabela 5).
· Uma combinação de toxóide da difteria, toxóide do tétano,
célula inteira da coqueluche, antígeno de superfície da Hepatite B e vírus da pólio inativado: DTPwSF-HB-IPV com a adição do IPV antes do Pw, formulados com o método de produção 3 (tabela 5).
• Uma combinação de toxóide da difteria, toxóide do tétano, célula inteira da coqueluche, antígeno de superfície da Hepatite B e vírus da
pólio inativado: DTPwsf-HB-IPV com a adição do IPV exatamente depois de T absorvido, este método de adição permite a absorção de IPV em Al(OH)3- Esta vacina é formulada com o método de produção 4 (tabela 5).
Um placebo contendo apenas sais de alumínio, IPV e tampões dos outros antígenos. Como IPV é o único antígeno neste placebo, não há nenhuma competição quanto a absorção. Portanto, IPV é completamente absorvido. Esta vacina é formulada com o método de produção 5 (tabela 5).
As vacinas formuladas com os métodos de produção 2, 3, 4 e 5 foram produzidas com uma faixa de dose de IPV entre 12,5 % e 100 % da dose de IPV padrão de 40/8/32 IU/0,5 ml.
Etapa Método de produção 1 : DTPwsF-HB 1 Agua para injeção para atingir um volume de dose final de 0,5 ml 2 Adicionar NaCl 1,5 M para atingir uma concentração final de 150 mM 3 Adicionar 115 μg de Al3+ como AlPO4 4 Adicionar 10 μg de HBsAg absorvido Adicionar 7,5 Lf de toxóide da difteria absorvido 6 Adicionar 3,25 Lf de toxóide do tétano absorvido 7 Agitar 8 Ajustar 0 pH ao 6,5 +/- 0,1 9 Agitar Adicionar 20 IOU de Pw absorvido 11 Agitar 12 Armazenar de +2 a +8° C
EtapaMétodo de produção 2: IPV autônomo
1 Adicionar IPV em uma dose de
Tipo 1 Tipo 2 Tipo 3 40 IU 8 IU 32 IU IU 4 IU 16 IU IU 2 IU 8 IU IU 1 IU 4 IU
2 Adicionar tampão M199 para atingir um volume final de 0,5 ml
9 Agitar
Ajustar o pH ao 6,9 +/- 0,2 14 Armazenar a +2 to +8° C
Etapa_ Método de produção 3: DTPwsF-HB-IPV_
1 Agua para injeção para atingir um volume de dose final de 0,5 ml
2 Adicionar NaCl 1,5 M para atingir uma concentração final de 150 mM
3 Adicionar 115 μg de Al3+ como AIPO4
4 Adicionar 10 μg de HBsAg absorvido
Adicionar 7,5 Lf de toxóide da difteria absorvido
6 Adicionar 3,25 Lf de toxóide do tétano absorvido
7 Agitar
8 Adicionar IPV em uma dose de
Tipo 1 Tipo 2 Tipo 3 40 IU 8 IU 32 IU IU 4 IU 16 IU 10IU 2 RJ 8 IU IU 1 IU 4 IU
9 Agitar Ajustar 0 pH a 6,5 +/- 0,1 11 Agitar 12 Adicionar 20 IOU de Pw absorvido 13 Agitar 14 Armazenar de +2 a +8° C Etapa_ Método de produção 4 : DTPwsF-HB-IPV_
1 Agua para injeção para atingir um volume de dose final de 0,5 ml
2 AdicionarNaCl 1,5 M para atingir uma concentração final de 150 mM
3 Adicionar 3,25 Lf de toxóide do tétano absorvido
4 Adicionar IPV em uma dose de
Tipo 1 Tipo 2 Tipo 3 40 IU 8 IU 32 IU IU 4 IU 16 IU IOIU 2 IU 8 IU IU 1 IU 4 IU
Agitar
6 Adicionar 115 μg de Al3+ como AIPO4
7 Adicionar 10 de HBsAg absorvido
8 Adicionar 7,5 Lf de toxóide da difteria absorvido
9 Agitar
Ajustar o pH a 6,5 +/- 0,1
11 Agitar
12 Adicionar 20 IOU de Pw absorvido
13 Agitar
1 4_Armazenar de +2 a +8° C__
Método de produção 5: Placebo_____
Como para o Método de produção 3, entretanto todos os antígenos outros que não IPV foram omitidos.__
Tabela 5. Método de produções para dose de 0,5 ml
Para o método de produção da formulação 1: HBsAg, DeT são absorvidos separadamente em AlPO4, AlPO4 e Al(OH)3 respectivamente. Os três antígenos são seqüencialmente adicionados a uma suspensão contendo água, NaCl e AlPO4 livre. A mistura é agitada por 60-75 min. Depois o pH é ajustado a 6,5 antes da adição de Pw absorvido.
Para o método de produção da formulação3, os três antígenos absorvidos são seqüencialmente adicionados a uma suspensão contendo água, NaCl e AlPO4 livre. A mistura é agitada por 60 a 75 min antes da adição de IPV. O pH é ajustado a 6,5 antes da adição de antígenos Pw.
Para o método de produção da formulação 4, o antígeno T é absorvido em Al(OH)3. O antígeno T pré absorvido é adicionado a uma suspensão contendo água e NaCl, seguido por IPV tipos 1, 2 e 3. A mistura é agitada por 60 a 75 minutos antes da adição de AlPO4 livre. HBsAg pré- absorvido é depois adicionado, seguido pelo antígeno D pré-absorvido e a mistura é depois agitada por um adicional de 60 a 75 minutos. O pH é ajustado a 6,5 antes da adição dos antígenos Pw. O método de produção 3 foi eventualmente selecionado devido à facilidade de fabricação visto que este protocolo envolveu apenas uma etapa de agitação. Durante o processo de fabricação da vacina, tiomersal não é usado e não é adicionado ao produto de vacina final. £
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Dose de IPV | Unidades de antígeno D (*) (T1/T2/T3) NA 40/8/32 20/4/16 10/2/8 5/1/4 40/8/32 20/4/16 10/2/8 5/1/4 40/8/32 20/4/16 10/2/8 5/1/4 40/8/32 20/4/16 10/2/8 5/1/4 % de dose padrão NA 100% 50% 25% 12,50% 100% 50% 25% 12,50% 100% 50% 25% 12,50% 100 % 50% 25% 12,50% Dose de HBsAg cm i o NA oo a o 00 o NA Dose da coqueluche 20 IOU NA 20 IOU 20 IOU < Z Dose do toxóide do tétano 3,25 Lf NA 3,25 Lf 3,25 Lf NA Dose do toxóide da difteria 7,5 Lf NA 7,5 Lf 7,5 Lf NA A1(0H)3 livre NA NA NA NA 00 =L O Γ- A1P04 livre M 3. Υ"! NA oo A 00 A ν-ϊ 560 μδ o s s ε a. t q ^ tj uSs + tf! Si ^ 9- 8 < < - M =L O Γ- NA 00 i O Γ— oo =L O r- NA O 5 í ε a. a O JC ΐ u + -J-i o O e- < ^ 1 όο A. O O (N NA 200 200 μg NA η 2 S a c c^-s S s + 5 K- " o 8 ■—' χι < — · < oo a. o Γ- NA oo =L O Γ- oo α o Γ- NA ca O2Q C « w I o + o f m CU g < < < οο =L r- NA οο i r- οο α ιη r- NA Descrição Método de produção 1 DTPWSF-HB Método de produção 2 IPV Método de produção 3 DTPwsp-HB-IPV Método de produção 4 DTPWSf-HB-IPV Método de produção 5 Placebo Determinação da potência da pólio em ratos pela soroneutralização
A potência da vacina foi determinada por um teste de soroneutralização depois da inoculação intramuscular de ratos (Sprague- Dawley (OFA) ou qualquer cepa validada de antemão). Grupos de 10 ratos saudáveis ingênuos foram inoculados intramuscularmente (0,5 ml) com diluições das amostras de teste, material de referência em solução salina tamponada com fosfato ou diluente (solução salina tamponada com fosfato). Depois dez ratos inoculados com o diluente foram usados como controles negativos. Vinte a vinte e dois dias depois da inoculação (período de imunização), cada animal foi profundamente anestesiado antes da coleta de sangue pela punção cardíaca. As amostras de sangue foram centrifugadas (a aproximadamente 800 g) e os soros foram avaliados. Teste de Soroneutralização:
Os soros foram inativados pela incubação a 56° C por 30 minutos. Três séries de diluição dos soros, uma para cada tipo de pólio, foram preparadas em microplacas usando o meio de diluição apropriado. Para os três tipos de vírus da pólio, uma quantidade predeterminada de vírus foi adicionada às diluições séricas. As três suspensões virais foram diluídas levando-se em conta os seus respectivos títulos. A diluição final é chamada de 'diluição de trabalho'. Cada diluição de trabalho foi adicionada às microplacas correspondentes. As placas foram depois seladas e incubadas a 37° C ± Io C por 16 horas. Células Hep-2 foram depois adicionadas e as microplacas foram incubadas a 37° C ± Io C por 7 dias. O efeito citopatogênico (CPE) do vírus foi lido usando um microscópio invertido depois da coloração com azul de Coomassie.
A presença de anticorpos anti-poliomielite inibe o crescimento do vírus e o aparecimento do CPE correspondente. Os títulos virais anti-pólio (tipo 1, 2 e 3) correspondem à recíproca da última diluição sem qualquer CPE. Em cada grupo, os animais com anticorpos neutralizadores são registrados e o títulos de anticorpo de cada amostra sérica é determinado para os diferentes tipos de poliovírus. O título do anticorpo neutralizador e expressado como o log2 da inversa da diluição mais alta da amostra sérica que totalmente inibe o efeito citopático das células do poliovírus em Hep-2. O título médio geométrico por diluição (GMT) e por tipo de vírus é depois determinado para cada grupo de ratos.
Para cada tipo de vírus, a diluição de vacina e subseqüentemente a quantidade de antígeno D que induziu os anticorpos neutralizadores em 50 % dos ratos (ED50) também foi calculada pela análise probit. A ED50 foi expressada em unidades de antígeno D.
De modo a quantificar a potência em relação àquela da vacina de referência (usualmente Poliorix®, mas pode ser uma vacina de DTPaHBIPV tal como Pediarix®), a potência relativa (RP) definida como a razão de duas respostas de dose equivalentes em um teste de dose múltipla foi medida. Neste método, a potência da vacina de teste é calculada pelo ensaio de linha paralela como descrito em Finney, 1978 (Statistical Method in Biological Assay, Charles Griffin & Company Ltd, Londres, 1978). Determinação da potência da pólio Tipo 1, 2 e 3 pelo ELISA
A determinação da potência da pólio pelo ELISA é realizada em uma ou duas etapas dependendendo se a medição está sendo realizada no todo do IPV não absorvido vs vacinas formuladas respectivamente:
1. Dessorção para a vacina absorvida final (para medir unidades de antígeno D em vacinas formuladas - não requerida para a medição no todo do antígeno de IPV não absorvido);
2, O teste de ELISA para a quantificação do teor de antígeno D de vacina dessorvida e não absorvida e/ou pólio volumoso
Etapa de Dessorção
Depois da centrifugação por 10 minutos da vacina absorvida sob teste, três dessorções sucessivas são realizadas, pela adição de um tampão de fosfato de desabsorção às pelotas, misturando e incubando na temperatura ambiente. O primeiro e o segundo períodos de desabsorção são de 2 horas, o período de incubação para a terceira extração sendo uma noite na temperatura ambiente. As colheitas das três extrações são reunidas e diluídas com solução tampão de fosfato (PBS) sem Ca e Mg contendo albumina sérica bovina (BSA) e Tween 20.
Os três antígenos do poliovírus são quantificados pelo ELISA como descrito abaixo. Quantificação de antígeno D pelo ELISA:
As placas microtituladoras são revestidas com IgG anti-vírus da pólio de coelho específica (tipo 1, 2 ou 3), diluída com tampão de carbonato/bicarbonato (pH 9,6) e incubado durante a noite a 4o C. Depois da lavagem, a solução de saturação (solução salina tamponada com fosfato w/o Ca e Mg + 1 % de BSA) é adicionada. Os brancos (PBS) e as diluições em série das amostras de vacina e padrão não absorvido feito em casa são adicionadas em duplicata. A preparação do padrão trivalente feito em casa contém antígenos tipo 1, 2 e 3 calibrados. O calibrador é a referência do European Pharmacopoeia Biological (EPBRP).
Para todas as etapas seguintes, as placas microtituladoras são incubadas durante 1 hora e 30 minutos a 37° C e lavadas. A IgG anti-vírus da pólio de coelho (tipo 1, 2 ou 3) conjugado à peroxidase, diluída com tampão de fosfato (w/o Ca e Mg + Tween 20) contendo BSA, é adicionada. A solução de substrato, contendo a tetrametilbenzidina dissolvida em sulfóxido de dimetila (DMSO) e diluída em tampão de acetato contendo 0,003 % de H2O2, é adicionada, seguida por uma incubação de 15 a 30 minutos no escuro. A solução de bloqueio, contendo H2SO4, é depois adicionada. Dentro de uma hora a densidade óptica (O.D.) de cada reservatório é lida usando um fotômetro ajustado a 450 nm com uma referência em 620 nm. A concentração do antígeno D nas amostras de teste e calculada a partir da curva padrão obtida plotando-se os valores de O.D. contra as concentrações de antígeno padrão.
Como um suplemento para a potência pelo ELISA, qualquer antígeno de IPV não absorvido pode ser detectado pelo integralidade do método:
Integralidade de absorção para o Pólio Tipo 1, 2 e 3 não ligado a adjuvante pelo Elisa
Duas centrifugações sucessivas são realizadas. O sobrenadante é depois colhido e testado não diluído em duplicata nas microplacas pelo ELISA. As placas microtituladoras são revestidas com IgG anti-vírus da pólio de coelho específica (tipo 1, 2 ou 3), diluída com tampão de carbonato/bicarbonato (pH 9,6) e incubadas durante a noite a 4o C. Depois da lavagem, a solução de saturação (solução salina tamponada com fosfato w/o Ca e Mg + 1 % de BSA) é adicionada. Os brancos (PBS), o sobrenadante e o padrão não absorvido feito em casa são adicionados em duplicata.
Para todas as etapas seguintes, as placas microtituladoras são incubadas durante 1 hora e 30 minutos a 37° C e lavadas. A IgG anti-vírus da pólio (tipo 1, 2 ou 3) de coelho conjugada à peroxidase, diluída
com tampão de fosfato (w/o Ca e Mg + Tween 20) contendo BSA, é adicionada. A solução de substrato, contendo a tetrametilbenzidina dissolvida em sulfóxido de dimetila (DMSO) e diluída em tampão de acetato contendo 0,003 % de H2O2, é adicionada, seguida por uma incubação de 15 a minutos no escuro. A solução de bloqueio, contendo H2SO4, é depois adicionada. Dentro de uma hora a densidade óptica (O.D.) de cada reservatório é lida usando um fotômetro ajustado a 450 nm com uma referência em 620 nm.
A integralidade é considerada positiva (antígeno no sobrenadante) se a OD média da amostra é mais alta do que os valores da OD média de brancos + 3 desvios padrão e se a OD média da amostra é mais alta do que 0,1.
No caso de integralidade positiva, o teor de antígeno é medido pelo método de ELISA como descrito na segunda etapa da Potência do Pólio Tipo 1,2 e3 pelo ELISA.
Método de medir a Unidade de Opacidade Internacional (IOU)
A concentração de célula (IOU) pode ser determinada usando a solução padrão de IRPO visual (Preparação de Referência Internacional de Opacidade) ou pela medição pela absorbância a 660 nm. A opacidade da Suspensão de Cepa Única é depois
determinada aplicando-se a equação de "opacidade designada" como segue:
AO = LO/KOxCO;
onde AO = opacidade designada, LO = opacidade colhida viva, KO = opacidade colhida morta e CO = opacidade concentrada. RESULTADO
Determinação da potência da pólio em ratos pela soroneutralização na dose de 40:8:32 padrão
Experimentos foram realizados para determinar a potência de IPV tipos 1, 2 e 3. Os resultados são mostrados na Tabela 8 abaixo (no presente documento, 40:8:32 unidades de antígeno D de IPV tipos 1, 2 e 3 respectivamente é equivalente a 100 % da dose de IPV)._
Descrição Potência de IPV (ED50 expressada em IU/dose) Tipo 1 Tipo 2 Tipo 3 Ref. Poliorix 20,78 8,88 40,02 Ref. DTPaHBIPV 3,21 0,57 8,62 DTPwsf-HB-IPV Método de produção 3 <1,93 0,64 <2,57 Tabela 8. Potência de IPV tipos 1, 2 e 3 em três formulações de vacina diferentes.
A formulação DTPwsf-HB-IPV (100 % de IPV) apresenta potências de IPV melhores do que a referência Poliorix e similar ou melhor do que a referência DTPaHBIPV.
Avaliação da potência do IPV com dosagens de IPV reduzidas
A potência é medida pelos métodos in vitro e in vivo descritos
acima.
A potência pelo Elisa da dose reduzida de IPV para ambas as formulações dos métodos de produção 3 e 4 foi examinada in vitro e comparada com a DTPaIPVHB de referência como mostrado na Tabela 9. Dois lotes para cada formulação foram testados para o método de produção 3.
A percentagem de recuperação foi calculada com respeito ao teor de antígeno tomado do todo do IPV para cada formulação (por exemplo, 40/8/32 por formulação contendo 100 % de IPV; 20/8/16 por formulação contendo 50 % de IPV; 10/4/8 para formulação contendo25 % de IPV; 5/2/4 para formulação contendo 12,5 % de IPV) P conclusão (% de recuperação) O- Z x^ Ox ^t r- x^ Ov Fx Ox •t VO xS Ox Vl Λ Ox P- On VS V X= Ox O SO X= Ox ν» xO Ox Os SO X= Ox SO X= ©S OO Vl X= Ox Vl V xS Ox Vl V Ox Vl V Vl V •o ^3 «3 .ss ^ sr o *__ l- <§ O o. ο ΓΞ u o- £ g S c«i cts Ox •t CS xS Ox OO Os CS •S? Ox CTs xJ OS m cn χΟ On r- O Ox OO ts xO Ox m cs X= Ox OO CS xJ Ox m m X= Ox O Tt Ox O X= Ox X= Ox Tt O X= Ox OO CTS Μ H S S * a O. 5 3 U o § e υ .g χ= Cx Bh Z Ox vi V -Ç Ox o νΓ V xS νι V sS Cx Wl V Ox Vl V Cx "Ο V x^ Ox ν> V X= Ox Vl V "-Ç Ox Vl V x^ Ox Vl V x^ Ox Vi V xP Ox Vl V Ox Vl V xP Sx Vl V Ox VI V -O « .2 £ 8" g - S 2 .2 §· x^ Ox os Os Ox os Ox O O Ox OO Os xS Ox OS CTs S V-) Ox IO xS Ox ο x^ Ox Cl Os Ox OO CTS v^ Ox O 00 xP Ox O O xP 00 CTs Ox O xP Ox ο ο ■sÇ Ox O O H o IT «3 «9 CO ü O- 3 -U g g t §■ υ 8 U1 CL, Z xS Ox t- s? Ov Ό V Ov m xS Pv Vl V "t Cl Ox Vl V Ox ^ CN xJ Ox OO Ox r-- m Ox OO CS xP Ox CS cs xP Ox Vl V sS Ox Vl V vS Ox Vl V xS Ox Vl V o" O 2 ■3 §· .2 S O i- c u S -S O V© a, rO a. xS Ox CS OO xS On VO TÍ" xS O OO xS OO Tt Ov r- xS Ox Tf W-I Ov OO x^ Ox O V) x^ Ox Τί- xS Ox r^ TJ- Ox Vl xP Ox CS TJ- Ox SO OO ^ Ti- os Ox O OO Ox CS r- Amostra .2 'υ C <υ Ul ,U υ Oá OQ K > CU Ώ a, H Q > Eh υ T3 xS Ox O O rn S O" 3 •u o ί- α. υ -a o ■u 0 -S S > o- CQ X 1 P- Vl S O- H Q > ο- υ -a x^ Ox O O Fo o ItS O- 3 •o O L- o. υ •β O -U 0 -S S (Ν > ο- ι CQ X 1 U- οο S Q- H Q > 0. υ -ο xS Ox O Vl ίη O κβ O- 3 -α ο Ι- Ο. υ •ο ο •u ο > Ο- ι CD X ι U- OO S ο- ί- α > Ba υ •ο •-Ç O «η Cl O κβ Ο· 3 •u O ι- ο. υ •α ο Τ3 O -S ψ. CS > Cl, ι CQ X ι te. OO S ο- ί- α > Ss U Ό Ox V) CS ί-Ί O ICO O- 3 -u ο ι- Ο. υ Ό 0 •α ο -S > Ο- ι CQ 33 1 U- ΙΛ S α. H α > Ê3 ■α £ VI (Ν ΓΊ O W Ο· 3 •Ό O U α U -α ο -ο 0 -S ψ fN > Oj ά χ d. cη 1 fr α > & U ■ο x^ Ox V1 CsT S 3 -ο O ί- Ο. υ -α ο -ο ο -U > α. CQ X ι U- OO ϊ 0- H α > £3 υ -U Ox O O ϊΐ O «0 O- 3 -U 2 ο. υ -U ο -U O -O ψ > Ο- ι CO X uL Vi ϊ ά- μ- α > Ο- υ •u xP Ox O Vl Ti- O Ice O- 3 ■u ε ο. ο ■u ο -U ο ■S S > Ο- ι CD X ι Ü— 00 ί O- H α > Ο- υ -U S Vl CS Tf- O ICS O- 3 -U ε ο. υ -U ο -U ο -υ ψ > Ο- ι 03 X ■ te- Vi S CU H α > Ο- υ -U x^ Ox >η PsT Tt ,§ O- 3 -U g ο. υ -U ο -U ο « ψ. > O- CQ X U- Vl S CL. H α > ο. υ -U x^ Ox O O Vl O κβ O- 3 -U 2 ο. υ -U ο -U ο -O ψ, O Λ O M κ, > Ο- υ -U Ox O Vl Vl S O- 3 -U O ί- Ο. υ -U O -U O -υ S ο .ο υ M <£ > Ο- υ -U Ox Vl cs 5η ο W O- 3 -U ε ο. υ -U ο -U ο -υ S O Xl υ J HI > Ο- υ ■u xS Ox Vl^ rí Vl O κβ O- 3 •u O k. 0. O •u O -u O -S ψ O •Ο υ ο α.
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H A Tabela 9 mostra que a integralidade da absorção é similar para todas as doses de IPV. O Tipo 1 e Tipo 3 são fortemente dessorvido (17 % a 74 %) enquanto que o Tipo 2 permanece bem absorvido. Os três tipos são bem absorvidos para a formulação de placebo para todas as doses de IPV. A absorção é similar como para a vacina de referência de DTPaIPVHB.
Existe uma variabilidade na integralidade do IPV por causa do fato de que o método de quantificação da integralidade não é validado nem para formulações de IPV DTPwHB nem para concentrações de IPV mais baixas (< 40/8/32 Unidades de antígeno D /0,5 ml).
A potência relativa (expressada em comparação com a vacina poliorix de referência) da dose reduzida de IPV para ambas as formulações de métodos de produção 3 e 4 foi examinada in vivo em comparação com formulações de referência como mostrado nas Figuras 1 e 2. Dois lotes para cada formulação foram testados para o método de produção 3.
A Figura 1 mostra que a potência do IPV de DTPwSF-HB-IPV com 100 % de IPV é levemente maior do que a potência de IPV em DTPaHBIPV. A potência do IPV de DTPwSF-HBIPV 50 % da formulação do método de produção 3 pode ser observada ser similar a 100 % de DTPaHBIPV. A potência do IPV para DTPwSF-HB-IPV 25 % do método de produção 3 é levemente mais baixas do que para Poliorix®. Também foi descoberto que 12,5 % da dose de IPV não foi suficiente para se obter uma boa potência do IPV.
A Figura 2 mostra que a potência do IPV é similar para a formulação do método de produção 3 e a formulação do método de produção 4. Também é mostrado que existe uma tendência de melhor potência para o placebo do que para DTPwSF-HB-IPV.
Estes dados portanto confirmam que uma dose de IPV reduzida é suficiente para se obter uma boa potência in vivo. Exemplo 2: Praticabilidade de não usar nenhum tiomersal nas vacinas da invenção
O Teste de Eficácia de Conservante (PET) permite a demonstração da atividade antimicrobiana da vacina testada. O teste consiste em:
- inocular a preparação de vacina, na sua etapa de receptor final, com um inóculo prescrito de micro-organismos adequados,
- armazenar a preparação inoculada em uma temperatura
prescrita
- retirar amostras do receptor em intervalos especificados de
tempo e contagem dos organismos nas amostras tomadas.
O procedimento de teste de PET é descrito na European Pharmacopoeia (5.1.3) e no USP (<51>). De acordo com estas diretrizes, a atividade antimicrobiana é avaliada pela comparação da redução no número de micro-organismos viáveis com os critérios mencionados na seguinte tabela (Tabela 7) _
Microorganismos Tempo Critérios : redução Iog EPA EPB EPC USP Bactérias Staphilococus aureus 6h 2 Eseheriehia coli dl 3 1 Ni* Pseudomonas aeruginosa d7 3 Ni* 1 dl4 Nr* Ni* 3 3 d28 Ni* Ni* Levedura e mofos Candida albicans d7 2 Ni* Aspergillus niger dl4 1 Ni* Ni* d28 Ni* Ni* Ni* Ni*
Tabela 7. Critérios EP e USP Nr* : não recuperado Ni* : não aumentado Exemplo 3: Efeito do componente Hib na potência de IPV e estabilidade de IPV com o tempo
A Potência Relativa de IPV foi medida como descrito no Exemplo 1 para determinar quais efeitos o componente de Hib pode ter sobre a potência do IPV e para avaliar a estabilidade de IPV com o tempo em doses diferentes de IPV. As vacinas investigadas foram DTPwHBIPV (40-8-32), DTPwHB IPV com Hib reconstituído e armazenado por 8 meses, DTPwHBIPV (20-4-16), DTPwHBIPV (20-4-16) com Hib reconstituído e armazenado por 8 meses, DTPwHBIPV (20-4-16) e armazenado por 8 meses, DTPwHBIPV (10-2-8) e DTPwHBIPV (10-2-8) com Hib reconstituído e armazenado por 8 meses. Os valores de RP foram medidos em relação à DTPaIPVHB (Pediarix) (Figura 3a) ou Poliorix (Figura 3b). Foi descoberto que o componente Hib não tem nenhum impacto sobre a potência do IPV. A potência relativa de IPV foi descoberta ser mantida por 8 meses (Figura 3). Exemplo 4: Efeito da proporção de AlPO4ZAl(OH)j sobre o aspecto visual, da absorção de D e T e da potência de IPV
As formulações foram realizadas com mudança da composição
de alumínio.
As formulações de DTPwsf-HB-IPV usualmente contêm 630 μg de Alumínio: 560 μg de Al3+ como AlPO4, 70 μg de Al3+ como Al(OH)3- Sais de alumínio são usados para absorver D, T, Pw e HBsAg. 115 μg de Al de AlPO4 livre são adicionados durante a formulação.
As formulações foram realizadas com as seguintes proporções
ii
de Al livre:
Al(OH)3 μg de Al3+ AlPO4 μg de Al3+ Lote 1 0 115 Lote 2 23 92 Lote 3 69 46 Lote 4 46 69 Lote 5 92 23 Lote 6 115 0 Tabela 10. Proporção de AIPO4ZAI(Oh)3
Etapa Método de produção 3: DTPwsF-HB-IPV 1 Água para injeção para atingir um volume de dose final de 0,5 ml 2 Adicionar NaCl 1,5 M para atingir uma concentração final de 150 mM 3 Adicionar 115 μg de Al3+ com proporções diferentes de Α1(0Η)3/ΑΓΡ04 4 Adicionar 10 μg de HBsAg absorvido Adicionar 7,5 Lf de toxóide da difteria absorvido 6 Adicionar 3,25 Lf de toxóide do tétano absorvido 7 Agitar 8 Adicionar IPV em uma dose de 40/8/32 IU 9 Agitar Ajustar o pH a 6,5 +/- 0,1 11 Agitar 12 Adicionar 20 IOU de Pw absorvido 13 Agitar 14 Armazenar de +2 a +8° C
Tabela 11. Método de produção para DTPwHB-IPV
O aspecto visual foi observado e até a razão de 69/46, agregação aceitável é obtida.
As formulações foram realizadas com o mesmo método de
produção e uma faixa de dose para IPV entre Oe 100 % da dose de IPV regular.
A porcentagem de absorção dos toxóides D e T foi medida pelo ELISA. A estabilidade da absorção foi seguida por um tratamento de 7 dias a 37° C. Os resultados são apresentados nas Tabelas 12 e 14._
Proporção de A1(0H)3/A1P04 dose de IPV 0/115 23/92 46/69 TO 7D 37 0C TO 7D 37 0C TO 7D 37 0C Pwsf 0% <1% 25% <1% 6% / 25 % <1% 29% <1% 15% <1% 5% 50% 3% 41% <1% 26% <1% 17% 75 % 4% 49% <1% 23% <1% 11% Tabela 12. Porcentagem de D toxóide desabsorção em DTPwHB-IPV com a
faixa de dose de IPV
Proporção de A1(0H)3/A1P04 dose de IPV 0/115 23/92 46/69 TO 7D 37 0C TO 7D 37 0C TO 7D 37 0C Pwsf 0% <1% 34% <1% 12% / 25 % <1% 50% <1% 32% <1% 12% 50% 5% 61% <1% 51% <1% 33% 100% 8% 63% <1% 41% <1% 29%
Tabela 13. Porcentagem de desabsorção do toxóide T em DTPwHB-IPV com a faixa de dose de IPV A absorção do IPV foi seguida. A estabilidade da absorção foi
seguida por um tratamento de 21 dias a 25° C.
dose de IPV Estimativa de Ag não absorvido Proporção de Al(OH)3/All PO4 0/115 23/92 46/69 Dose Tipo TO 21 250C TO 21 25 0C TO 21 25 0C 0% N/A N/A N/A N/A AGREGAÇAO % Tipo 1 -10-20% -20-30% -10-20% -20-30% <10% -20-30% Tipo 2 <10% <10% <10% <10% <10% <10% Tipo 3 >30% >30% -20-30% >30% <10% >30% 50% Tipo 1 >30% >30% -10-20% >30% -10-20% >30% Tipo 2 -10-20 -10-20 <10% <10% -10-20% <10% Tipo 3 >30% >30% -10-20% >30% -10-20% >30% 100% Tipo 1 >30% >30% -10-20% >30% -10-20% >30% Tipo 2 -10-20 -10-20 <10% <10% <10% <10% Tipo 3 >30% >30% -20-30% >30% -10-20% >30%
Tabela 14. Porcentagem de desabsorção de IPV em DTPwHB-IPV com a faixa de dose de IPV
O aumento do teor de Al(OH)3 nas formulações permite uma melhora na absorção para D, T e IPV.
A melhor razão de absorção obtida foi com a proporção de A1(0H)3/A1P04 de 46/69.
Nesta proporção:
■ A absorção de T e D é completa em TO. A desabsorção depois de um estudo de estabilidade acelerada de 7 dias a 37° C apresenta <
% de desabsorção para D, < 30 % para T.
■ Cada tipo de IPV é absorvido. A desabsorção do Tipo 3 ocorre em 21 dias a 25° C.
As formulações com a proporção 46/69 foram testadas in vivo e comparadas com Tetravac, Poliorix e uma vacina DTPaIPV.
Amostra ED50 Tipo 1 Tipo 2 Tipo 3 DTPw-HB-IPV 100%/HIB < 1,93 <0,64 2,57 Proporção 46/69 DTPw-HB-IPV 50 %/HIB < 1,59 0,46 < 1,67 Proporção 46/69 DTPw-HB-IPV %/HIB 3,08 0,96 3,25 Proporção 46/69 Tetravac 8,53 0,39 9,15 Poliorix 9,52 2,64 15,06 DTPaHBIPV <5,18 <0,64 15,01
Tabela 15. Resultados de potências in vivo
Não existe nenhuma diferença significante (ED50) entre as formulações de DTPw-HB-IPV. DTPaHB IPV, Tetravac e Poliorix dão resultados similares, inferiores às formulações de DTPw-HB-IPV (exceto para o tipo 2 para o qual todas as formulações são equivalentes). Exemplo 5: Avaliação clínica da vacina DTPw-HBV-IPV/Hib investigacional com dosagens de IPV reduzidas
Um estudo de praticabilidade de Fase II é planejado para avaliar a imunogenicidade, reatogenicidade e segurança de três formulações diferentes da vacina DTPwHBV-IPV/Hib investigacional da GSK Biologicals quando comparada com a DTPw-HBV/Hib comercial e vacinas de IPV administradas concomitantemente.
• Indicação/populações:
Imunização primária de crianças saudáveis na primeira semana de vida contra as doenças de difiteria, tétano, coqueluche, hepatite B, poliomielite e HaemophiIus influenzae tipo b. Grupos de Estudo:
Vacina DTPw-HBV-IPV (dose padrão)/Hib Vacina DTPw-HBV-IPV (49 % da dose padrão)/Hib Vacina DTPw-HBV-IPV(26 % da dose padrão)/Hib
Vacinas DTPw-HBV/Hib + IPV
• Co-objetivos primários:
Os co-objetivos primários serão avaliados na maneira seqüencial: isto é o segundo e terceiro objetivos serão avaliados apenas se o precedente foi atingido.
</ Para demonstrar a não inferioridade da vacina DTPw-HBV- IPV(dose padrão)/Hib em relação à vacina de IPV co-administrada com a vacina DTPw-HBV/Hib em termos de resposta de anticorpo aos três tipos de poliovírus, um mês depois do curso de vacinação primária.
O objetivo de não inferioridade será atingido se o limite superior dos 95 % CI padronizados assintóticos na diferença entre grupos (DTPwHBV/Hib + IPV menos DTPw-HBV-IPV (dose padrão)/Hib) em termos de taxas de soroproteção para cada um dos três tipos de poliovírus é de 10%.
y Para demonstrar a não inferioridade da vacina DTPw-HBV- IPV (49 % da dose padrão)/Hib em relação á vacina de IPV co-administrada com a vacina DTPw-HBV/Hib em termos de resposta de anticorpo aos três tipos de poliovírus, um mês depois do curso de vacinação primária.
O objetivo de não inferioridade será atingido se o limite superior dos 95 % CI padronizado assintótico sobre as diferenças entre grupos (DTPwHBV/Hib + IPV menos DTPw-HBV-IPV (49 % da dose padrão)/Hib) em termos de taxas de soroproteção para cada um dos três tipos de poliovírus éde 10%.
·/ Para demonstrar a não inferioridade da vacina DTPw-HBV- IPV (26 % da dose padrão)/Hib em relação à vacina de IPV co-administrada com a vacina DTPw-HBV/Hib em termos de resposta de anticorpo aos três tipos de poliovírus, um mês depois do curso de vacinação primária.
O objetivo de não inferioridade será atingido se o limite superior dos 95 % CI padronizados assintóticos nas diferenças entre grupos (DTPwHBV/Hib + IPV menos DTPw-HBV-IPV (26 % da dose padrão)/Hib) em termos de taxas de soroproteção para cada um dos três tipos de poliovírus é de 10 %.
• Objetivos secundários:
Imunogenicidade
Para avaliar a imunogenicidade a vacina candidata de DTPw- HBV-IPV/Hib em termos de resposta a todos os antígenos de vacina em comparação com o DTPw-HBV/Hib e vacinas de IPV co-administradas.
Reatogenicidade
Para avaliar a reatogenicidade e segurança das vacinas de estudo, em termos de sintomas solicitados, sintomas não solicitados e eventos adversos sérios.
• Programa de Vacinação
Três programas de vacinação de dose primária em 6, IOe 14 semanas de idade. Todos os pacientes recebem uma dose ao nascer de Hepatite B.
• País:
Filipinas
• Amostragem de sangue:
Pré- e pós-vacinação 3
• Formulações de Vacina: Vacina Formulação/dose Apresentação Volume DTPw-HBV-IPV/Hib da GSK Biologicals Componente de IPV (dose padrão) Componente de IPV ( 49 % da dose padrão) Componente de IPV (26 % da dose padrão) toxóide da difteria: não menos do que 30 IU (7,5 Lf) toxóide do tétano: não menos do que 60 IU (3,25 Lf) Bordetella pertussis, morto: não menos do que 4 IU (20 OU) r-DNA HBsAg: 10 μg Alumínio como sais: 0,66 mg Poliovirus inativados tipo 1: 40 unidades de antígeno D Poliovírus inativados tipo 2: 8 unidades de antígeno D Poliovírus inativados tipo 3: 32 unidades de antígeno D 49 % da dose padrão completa de IPV (40- 8-32) 26 % da dose padrão completa de IPV (40- 8-32) Líquido esbranquiçado em frascos de monodose 0,5 ml da vacina reconstituída Conjugado de polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b: 2,5 μg e toxóide do tétano: 5 a 10 μg Lactose: 12,6 mg Alumínio como sais: 30 μg Pelota secada poi congelamento em frascos de monodose DTPw-HBV/Hib (Zilbrix® Hib) toxóide da difteria: não menos do que 30 IU (7,5 Lf) toxóide do tétano: não menos do que 60 IU (3,25 Lf) Bordetella pertussis, morta: não menos do que 4 IU (20 OU) r-DNA HBsAg: 10 μg Alumínio como sais: 0,66 mg Tiomersal: 8 μg líquido esbranquiçado em frasco de duas doses 1 ml da vacina reconstituída Conjugado de polissacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo b: 2,5 μg e toxóide do tétano: 5 a 10 μg Lactose: 12,6 mg Alumínio como sais: 30 ρ q Pelota secada por congelamento em frascos de duas doses IPV da GSK Biologicals (Poliorix™) Poliovírus inativados tipo 1: 40 unidades de antígeno D Poliovírus inativados tipo 2: 8 unidades de antígeno D Poliovírus inativados tipo 3: 32 unidades de antígeno D 2-fenoxietanol max 2,5 mg Polissorbato max 50 μg Formaldeído max 100 μg Solução salina tamponada com fosfato Contém aminoácidos para injeção q.s, ad 0,5 ml Líquido esbranquiçado Em frascos de monodose 0,5 ml
Tabela 16. Formulações de Vacina PRÉ-ABSORÇÃO DOS ANTÍGENOS
A formulação de DTPw-HBV-IPV combina toxóide da difteria, toxóide do tétano, três cepas de Bordetella pertussis, o antígeno de superfície maior purificado (HBsAg) do vírus da Hepatite B (HBV) e o vírus da pólio inativado (IPV). Estes antígenos, exceto o IPV, foram primeiro pré- absorvidos em sal de alumínio antes de serem misturados com sal de alumínio, tampão de cloreto de sódio e água para injeção. Absorção de toxóide da difteria
O concentrado purificado da difteria foi absorvido em fosfato de alumínio em uma proporção de 15 Lf de toxóide da difteria /0,15 mg de
•51
Al . Os dois componentes foram agitados por 15 até 45 minutos na
temperatura ambiente. O pH foi ajustado ao pH 5,1 ± 0,1, seguido por
agitação por 15 até 45 minutos. A mistura foi armazenada por uma semana a
37° C. Depois de agitar de 15 até 45 minutos na temperatura ambiente, o pH
foi ajustado ao pH 6,1 + 0,1. O concentrado absorvido foi armazenado a +2°
C - +8° C por pelo menos 7 dias antes da formulação final da vacina de
DTPw-HB-IPV. A Figura 1 a seguir destaca o processo de fabricação de
absorção do grosso da Difteria pré-absorvida.
Fluxograma de Absorção de toxóide da difteria
AlPO4
D (15 Lf/0,15 mg de Al3+) i
Agitar de 15 até 45 minutos na temperatura ambiente
i
Ajustar e checar o pH (5,1 ±0,1)
I
Agitar de 15 até 45 minutos na temperatura ambiente
i
Absorção 7 dias a 37° C i
Agitar de 15 até 45 minutos na temperatura ambiente
i
Ajustar e checar o pH (6,1 ±0,1)
Armazenar no mínimo 7 dias a +2° C - +8° C antes da formulação Absorção do toxóide do tétano
O concentrado do tétano foi absorvido em hidróxido de alumínio em uma proporção de 3,25 Lf
/ 0,07 mg de Al3+. Os dois componentes foram agitados por 15 até 20 minutos. O pH foi ajustado no pH 6,1 ± 0,1. A mistura foi armazenada sob agitação por 16 até 24 horas na temperatura ambiente. Uma solução de cloreto de sódio de 1500 mM de
concentração nominal foi adicionada (ad 150 mM). Depois de agitar de 15 até
45 minutos na temperatura ambiente, o pH foi ajustado a 6,1 ± 0,1. O
concentrado absorvido foi armazenado a +2° C - +8° C por pelo menos 14
dias antes da formulação final de vacina de DTPw-HBV-IPV.
Diagrama de fluxo da absorção de toxóide do tétano
Al(OH)3
T (3,25 Lf/0 07 mg A13+) Ψ
Agitar de 15 até 20 minutos na temperatura ambiente
Ajustar e checar o pH 6,1 ±0,1 i
Agitar 16 horas até 24 horas na temperatura ambiente
NaCl 1500 mM (ad 150 mM)
Agitar de 15 até 45 minutos na temperatura ambiente
Ajustar e checar pH (6,1 ± 0,1) i
Armazenar no mínimo 14 dias a +2° C - +8° C antes da formulação
Absorção do antígeno da Hepatite B
O grosso do HBsAg purificado estéril foi misturado com uma
suspensão estéril de fosfato de alumínio de modo a obter uma suspensão que
contém por 10 μg de HBsAg, 0,2 mg de Al3+ (como fosfato de alumínio), 150
mM de NaCl em um volume final de cerca de 50 μΐ.
Procedimento de absorção de HBsAg
HBsAg (IO^ig / 0,5 ml)
Al3+ (0,2 mg / 0,5 ml) (AlPO4)
■i·
Agitar 15 a 20 minutos na temperatura ambiente
i
Ajustar e checar o pH (5,3 ± 0,1)
4'
Agitar 16 a 24 horas na temperatura ambiente
4'
Ajustar o pH a 6,1 ±0,1
4,
Armazenar 14 dias na^temperatura ambiente Armazenagem a 4o C Absorção de antígeno Pw
A solução de AlPO4 foi transferida assepticamente para um vaso estéril. A solução foi agitada por 5 a 10 minutos e o pH foi ajustado a 6,5 +/- 0,1 com HCl 1 M ou NaOH 0,5 M diretamente no vaso. A solução foi agitada por 15 a 20 minutos. O pH foi checado (6,5 ± 0,1) e ajustado se necessário.
Antes da absorção, a colheita reunida da coqueluche (PPH) foi misturada por um mínimo de 15 minutos antes do use e depois a PPH foi adicionada no vaso estéril contendo o AlPO4. A suspensão foi agitada por um mínimo de 15 minutos na temperatura ambiente e pôde ser armazenada durante a noite na temperatura ambiente. Se o produto foi armazenado durante a noite na temperatura ambiente, ele teve que ser recolocado em suspensão por um mínimo de 30 minutos antes da distribuição. As amostras foram tomadas para teste.
O grosso do Pw absorvido foi distribuído em garrafas de vidro
estéreis e armazenado de 2 a 8o C.
Diagrama de fluxo da absorção de Pw
Transferir AlPO4 em vaso de aço inoxidável estéril
X
Ajustar o pH a 6,5+/-0,1 i
Agitar 15 a 20 minutos na temperatura ambiente
4'
Checar o pH e ajustar se necessário (6,5 ±0,1)
i
Adicionar a PPH no vaso de aço inoxidável estéril
i
Agitar no min. 15 minutos na temperatura ambiente
•i·
Distribuir em garrafas de vidro Armazenagem do Pw absorvido de 2 a 8o C FORMULAÇÃO FINAL DE DTPW-HBV-IPV
O processo foi feito como segue:
- A solução de cloreto de sódio e água foram misturados para injeções de modo a obter uma concentração final de 150 mM de NaCl. - AlPO4 foi adicionado de modo a obter uma concentração de Al3+ livre de 0,115 mg/dose
- Os concentrados de HEF, difteria e tétano absorvidos foram adicionados de modo a obter uma concentração final de 10 μg de HBsAg, 7,5 Lf de toxóide da difteria e 3,25 Lf de toxóide do tétano por dose de 0,5 ml.
- IPV foi adicionado de modo a obter uma concentração final de 40/8/32 ou 19,6/3,9/15,7 ou 10,4/2,1/8,3 Ul/d.
- Agitar suavemente por 60 até 120 minutos na temperatura
ambiente.
- o pH foi ajustado a 6,5 ±0,1
- Agitar por 15 até 20 minutos na temperatura ambiente.
- o pH foi checado: 6,5 ± 0,1
- o concentrado de Pw absorvido foi adicionado de modo a obter uma concentração final de 20 IOU por dose de 0,5 ml
- Agitar por 15 a 45 minutos na temperatura ambiente.
- o pH foi medido
- o grosso final foi armazenado entre +2° C e +8° C até o preenchimento.
Diagrama de fluxo da formulação de vacina DTPw-HBV WFI a 0,5 ml
NaCl de 1,5 M a 150 mM
AlPO4 (115 μ§ de Al3+)
4'
HBsAg absorvido 10 μg
•Ί·
Difteria absorvido 7,5 Lf Tétano absorvido 3,25 Lf IPV 40/8/32 ou 19,6/3,9/15,7 ou 10,4/2,1/8,3 Ul/d
X·
Agitar de 60 min. até 120 min. na temperatura ambiente
■b·
Ajustar e checar o pH (6,5 ±0,1) -i-
Pw absorvido 20 IOU i
Agitar de 15 min. até 45 min. na temperatura ambiente Exemplo 6: Avaliação clínica da vacina de DTPa-HBV- IPV/Hib investigacional com dosagens de Hib e IPV reduzidas
Um estudo de Fase II, exploratório é planejado para avaliar a imunogenicidade, reatogenicidade e segurança de 4 formulações diferentes da vacina DTPaHBV-IPV/Hib investigacional da GSK Biologicals versus a vacina DTPa-HBV-IPV/Hib comercial e as vacinas DTPw-HBV/Hib e IPV comerciais administradas concomitantemente.
• Indicação/populações:
a imunização primária de crianças saudáveis na primeira semana de vida contra as doenças de difteria, tétano, coqueluche, hepatite B, poliomielite e Haemophilus influenzae tipo b.
• Grupos de estudo:
Vacina DTPa-HBV-IPV (49 % da dose padrão)/Hib 5 μg Vacina DTPa-HBV-IPV (49 % da dose padrão)/Hib 2,5 μg Vacina DTPa-HBV-IPV (26 % da dose padrão)/Hib 5 μg Vacina DTPa-HBV-IPV (26 % da dose padrão)/Hib 2,5 μg Vacina DTPa-HBV-IPV/Hib Vacina DTPw-HB V/Hib + IPV
• Objetivos primários:
Para avaliar a imunogenicidade das vacinas candidatas DTPa- HBV-IPV/Hib em termos da resposta ao PRP e os três antígenos da pólio (pólio 1, 2 e 3).
• Objetivos secundários: Imunogenicidade
Para avaliar a imunogenicidade de todas as vacinas do estudo em termas de resposta para todos os antígenos de vacina. Reatogenicidade
Para avaliar a reatogenicidade e segurança das vacinas estudo, em termos de sintomas solicitados, sintomas não solicitados e eventos adversos sérios.
• Programa de Vacinação
O programa de vacinação primária de três doses como de 6 semanas de idade. Todos os pacientes recebem uma dose de Hepatite B no nascimento.
• País: TBC
• Amostragem de sangue:
Pré e pós vacinação 3
· Formulações de Vacina:
A vacina é constituída de duas partes: uma parte de líquido (DTPa-HB-IPV) e uma parte secada por congelamento (Hib).
D, T, PT, FHA, PRN e HBsAg são preliminarmente pré- absorvidos. Água e NaCl são misturados com os antígenos diferentes. A mistura é agitada para homogeneizar e o pH é ajustado. A composição final da parte de DTPa-HB-IPV da vacina é apresentada na tabela a seguir.
Componente Quantidade Toxóide D 25 Lf Toxóide T IOLf PT 25 FHA 25 μ** PRN HBsAg 10 μζ IPV tipo 1 40 ou 19,6 ou 10,4 IU IPV tipo 2 8 ou 3,9 ou 2,1 IU IPV tipo 3 32 ou 15,7 ou 8,3 IU Al3+ De 700 a 790 μg
Tabela 17. Composição para uma dose humana de 0,5 ml de DTPa-HBV-IPV O Hib é pré-absorvido. O Hib pré-absorvido é misturado com sacarose ou lactose antes da secagem por congelamento. A quantidade de Hib será 2,5 ou 5 ou 10 μg por dose humana. O teor de alumínio será de 30 a 120 μg de Al3+ como AlPO4 por dose humana

Claims (15)

1. Vacina de IPV, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) toxóide da difteria; (b) toxóide do tétano; (c) célula integral morta de Bordetella pertussis, substancialmente isenta de tiomersal; ou dois ou mais componentes de pertussis acelulares (Pa) (por exemplo, toxóide de pertussis (PT), hemaglutinina filamentosa (FHA) e pertactina (PRN)), e; (d) poliovírus inativados tipo 1 em uma dose maior que 10 unidades de antígeno D e menor que 20 unidades de antígeno D.
2. Vacina de acordo com as reivindicações 1, caracterizada pelo fato de que o poliovírus inativados tipo 1 está presente de 26 a 49 %, 30 a 45 %, 33 a 40 % ou 35 a 37 % de dose unitária de antígeno D 40 padrão.
3. Vacina de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende poliovírus inativados tipo 3 em uma dose de 8 a 20 unidades de antígeno D, 9 a 19 unidades de antígeno D,10 a 18 unidades de antígeno D, 11 a 17 unidades de antígeno D, 12 a 16 unidades de antígeno D ou 13 a 15 unidades de antígeno D; por exemplo em torno de ou exatamente 14 unidades de antígeno D.
4. Vacina de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende poliovírus inativados tipo 2 em uma quantidade de 2 a 4 unidades de antígeno D por 0,5 ml.
5. Vacina de acordo com as reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que um ou mais do toxóide da difteria, o toxóide do tétano; célula integral morta de Bordetella pertussis, os dois ou mais componentes de pertussis acelulares, os poliovírus inativados tipo 1, os poliovírus inativados tipo 2, os poliovírus inativados tipo 3, são absorvidos em hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos.
6. Vacina de acordo com as reivindicações de 1 a 5, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende antígeno de superfície da Hepatite B, substancialmente isenta de tiomersal, opcionalmente absorvido em fosfato de alumínio.
7. Vacina de acordo com as reivindicações de 1 a 6, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende um conjugado de uma proteína carregadora e o sacarídeo capsular de Haemophilus influenzae tipo B (Hib), opcionalmente absorvido em fosfato de alumínio ou não absorvido em adjuvante.
8. Vacina de acordo com as reivindicações de 1 a 7, caracterizada pelo fato de que adicionalmente compreende um ou mais de: um ou mais conjugados de uma proteína carregadora e um sacarídeo capsular de uma bactéria selecionada do grupo Neisseria meningitidis tipo A5 Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W e Neisseria meningitidis tipo Y, opcionalmente absorvido em hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos ou não absorvido em adjuvante; uma vesícula de membrana externa de Neisseria meningitidis tipo B (MenB) ou LOS ou um sacarídeo capsular MenB conjugado ou derivado deste, opcionalmente absorvido em hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos ou não absorvido em adjuvante; um sacarídeo Vi de Salmonella typhi conjugado a uma proteína carregadora, opcionalmente absorvido em hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos ou não absorvido em adjuvante; ou um antígeno da Hepatite A, opcionalmente absorvido em hidróxido de alumínio ou fosfato de alumínio ou uma mistura de ambos.
9. Método para prevenir ou tratar infecção por poliovírus e opcionalmente infecção por Clostridium tetani, Corynebacterium difteria e Bordetella pertussis, caracterizado pelo fato de ser pela administração da vacina como definida nas reivindicações de 1 a 9 um ser humano em necessidade destes.
10. Método para prevenir ou tratar infecção por poliovírus, Clostridium tetani, Corynebacterium difteria e Bordetella pertussis e opcionalmente uma ou mais infecções pela Hepatite B, Haemophilus influenzae b, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Neisseria meningitidis tipo B, Salmonella typhi e Hepatite A, caracterizado pelo fato de ser pela administração da vacina como definida nas reivindicações de 1 a 8.
11. Uso de uma vacina como definida nas reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para a prevenção de doença causada pelo poliovírus e opcionalmente Clostridium tetani, Corynebacterium difteria e Bordetella pertussis.
12. Uso de uma vacina como definida nas reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para a prevenção de doença causada pelo poliovírus, Clostridium tetani, Corynebacterium difteria e Bordetella pertussis e opcionalmente um ou mais de Hepatite B, Haemophilus influenzae b, Neisseria meningitidis tipo A, Neisseria meningitidis tipo C, Neisseria meningitidis tipo W, Neisseria meningitidis tipo Y, Neisseria meningitidis tipo B, Salmonella typhi e Hepatite A.
13. Vacina, método ou uso de acordo com as reivindicações de1 a 12, caracterizados pelo fato de que o IPV tipo 1, se presente, é da cepa Mahoney.
14. Vacina, método ou uso de acordo com as reivindicações de1 a 13, caracterizados pelo fato de que o IPV tipo 2, se presente, é da cepa MEF-1.
15. Vacina, método ou uso de acordo com as reivindicações de 1 a 14, caracterizados pelo fato de que o IPV tipo 3, se presente, é da cepa Saukett.
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MA (2) MA30715B1 (pt)
MX (2) MX2009002560A (pt)
NO (2) NO20090865L (pt)
NZ (2) NZ575273A (pt)
PL (2) PL2097102T3 (pt)
PT (2) PT2097102E (pt)
SI (2) SI2066344T1 (pt)
WO (2) WO2008028956A1 (pt)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PE20110072A1 (es) * 2005-06-27 2011-02-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica
JP5814507B2 (ja) † 2006-09-07 2015-11-17 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
US8753646B2 (en) 2006-09-29 2014-06-17 Japan Poliomyelitis Research Institute IPV-DPT vaccine
GB0810894D0 (en) * 2008-06-13 2008-07-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Conjugated saccharide
PE20100365A1 (es) 2008-10-24 2010-05-21 Panacea Biotec Ltd Novedosas vacunas de combinacion con tos ferina de celulas enteras y metodo para su elaboracion
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
EP2430040A1 (en) * 2009-05-11 2012-03-21 Novartis AG Antigen purification process for pertactin antigen
WO2011027222A2 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Novartis Ag Immunogenic compositions including tlr activity modulators
CA2798739A1 (en) * 2010-05-26 2011-12-01 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarrier compositions with uncoupled adjuvant
WO2011148382A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Biological E Limited An improved process for the purification of capsular polysaccharides of haemophilus influenza - b, neisseria meningitis such as serotypes a, c, y and w-135, and other similar related capsular polysaccharides produced from both gram negative and gram positive microorganisms using aluminium phosphate with alcohol.
AU2011295853A1 (en) 2010-09-01 2013-04-04 Irm Llc Adsorption of immunopotentiators to insoluble metal salts
WO2012117377A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Novartis Ag Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
GB201105981D0 (en) * 2011-04-08 2011-05-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
WO2013063277A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
DE102011118371B4 (de) 2011-11-11 2014-02-13 Novartis Ag Zur Impfung von Menschen geeignete Zusammensetzung, die ein Diphtherie-Toxoid umfasst, sowie Verfahren zu deren Herstellung
EP2592137A1 (en) 2011-11-11 2013-05-15 Novartis AG Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use
DE102011122891B4 (de) 2011-11-11 2014-12-24 Novartis Ag Fermentationsmedium, das frei von tierischen Bestandteilen ist, zur Herstellung von Diphtherie-Toxoiden zur Verwendung bei der Impfung von Menschen
GB2495341B (en) 2011-11-11 2013-09-18 Novartis Ag Fermentation methods and their products
EP2822584A1 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Novartis AG Combination vaccines with tlr4 agonists
MX372965B (es) 2012-03-08 2020-04-01 Glaxosmithkline Biologicals Sa Formulaciones adyuvadas de vacunas de difteria, tetanos y tos ferina (dtp) de refuerzo.
JP6324961B2 (ja) * 2012-09-06 2018-05-16 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン
RU2015106791A (ru) 2012-10-03 2016-11-20 Глэксосмитиклайн Байолоджикалз Са Иммуногенные композиции
EP2906239A1 (en) 2012-10-12 2015-08-19 GlaxoSmithKline Biologicals SA Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines
KR20140060053A (ko) * 2012-11-09 2014-05-19 아이진 주식회사 인플루엔자 백신용 면역증강제
WO2014135651A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Crucell Holland B.V. Acellular pertussis vaccine
US9839579B2 (en) 2013-04-24 2017-12-12 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9713572B2 (en) 2013-04-24 2017-07-25 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707153B2 (en) 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707154B2 (en) 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9700486B2 (en) 2013-04-24 2017-07-11 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9717648B2 (en) 2013-04-24 2017-08-01 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9603775B2 (en) 2013-04-24 2017-03-28 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9700485B2 (en) 2013-04-24 2017-07-11 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9707155B2 (en) 2013-04-24 2017-07-18 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9717649B2 (en) 2013-04-24 2017-08-01 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
US9849066B2 (en) * 2013-04-24 2017-12-26 Corning Incorporated Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients
CN104634959B (zh) * 2013-11-08 2016-08-24 丽珠集团疫苗工程股份有限公司 一种处理液以及采用其测定铝盐吸附型疫苗中抗原含量的方法
AR101256A1 (es) * 2014-07-21 2016-12-07 Sanofi Pasteur Composición vacunal que comprende ipv y ciclodextrinas
US11793869B2 (en) 2014-10-07 2023-10-24 Serum Institute Of India Pvt Ltd. Methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof
UA125788C2 (uk) * 2014-10-07 2022-06-08 Серум Інстітют Оф Індія Прайвт Лімітед Спосіб інактивації ентеровірусу, ад'ювант адсорбції та композиція із зменшеною дозою вакцини, одержана з ним
KR20250008135A (ko) * 2016-06-01 2025-01-14 액세스 투 어드밴스드 헬스 인스티튜트 사이징제를 함유하는 나노명반 입자
CN106290886A (zh) * 2016-07-28 2017-01-04 北京科兴生物制品有限公司 一种检测ⅲ型脊髓灰质炎病毒d抗原含量的方法
MY191163A (en) * 2016-08-26 2022-06-03 The Centers For Disease Control And Prevention Cdc Multivalent vaccine composition
CN111032078A (zh) * 2017-07-18 2020-04-17 血清研究所印度私人有限公司 具有改善的稳定性、增强的免疫原性和降低的反应原性的免疫原性组合物及其制备方法
CN108241058A (zh) * 2018-01-13 2018-07-03 中国医学科学院医学生物学研究所 一种脊髓灰质炎病毒ⅲ型d抗原预包被检测方法及其检测试剂盒和应用
CN108387726A (zh) * 2018-01-13 2018-08-10 中国医学科学院医学生物学研究所 脊髓灰质炎病毒ⅰ、ⅱ、ⅲ型d抗原同步快速鉴别、定量检测方法及其检测试剂盒和应用
EA202190778A1 (ru) * 2018-10-12 2021-08-05 Серум Инститьют Оф Индия Прайват Лтд Композиция комбинированной вакцины, содержащая уменьшенную дозу инактивированного полиовируса, и способ её получения
WO2020165920A1 (en) * 2019-02-12 2020-08-20 Biological E Limited Multivalent vaccine composition
US11701417B2 (en) * 2019-03-27 2023-07-18 West Virginia University Vaccine formulation to protect against pertussis
EP3799884A1 (en) 2019-10-01 2021-04-07 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic compositions
CN110917344B (zh) * 2019-12-26 2022-11-04 北京科兴中维生物技术有限公司 一种液体疫苗组合物及其应用
CN111000994A (zh) * 2019-12-26 2020-04-14 北京科兴中维生物技术有限公司 一种液体疫苗组合物及其制备方法与应用
CN111053898B (zh) * 2019-12-26 2023-05-16 北京科兴中维生物技术有限公司 一种疫苗组合物及其应用
WO2021176409A1 (en) 2020-03-05 2021-09-10 Sanofi Healthcare India Private Limited Preservative combination for vaccine composition
CN114748616A (zh) * 2022-05-23 2022-07-15 中国医学科学院医学生物学研究所 一种成人青少年用无细胞百白破联合疫苗及其制备方法
GB202211033D0 (en) 2022-07-28 2022-09-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification process
CN118634321B (zh) * 2024-06-28 2025-02-28 重庆医科大学附属第一医院 一种p24病毒样颗粒的佐剂与抗原共价偶联的制备方法

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB759221A (en) 1953-06-25 1956-10-17 Centrale Suiker Mij Nv Process for the separation of valuable organic compounds from desugarized molasses and vinasse
GB777018A (en) 1955-05-02 1957-06-12 Parke Davis & Co Poliomyelitis vaccine products and methods for preparing the same
US3097140A (en) 1958-10-31 1963-07-09 Merck & Co Inc Preparing a mixed polio, pertussis, tetanus, and diphtheria vaccine with benzethonium chloride
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
US4372945A (en) 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
US4356170A (en) 1981-05-27 1982-10-26 Canadian Patents & Development Ltd. Immunogenic polysaccharide-protein conjugates
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4882317A (en) 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
FI861417A0 (fi) 1985-04-15 1986-04-01 Endotronics Inc Hepatitis b ytantigen framstaelld med rekombinant-dna-teknik, vaccin, diagnostiskt medel och cellinjer samt foerfaranden foer framstaellning daerav.
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
GB8516442D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Wellcome Found Cloned antigen
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US4895800A (en) 1985-11-26 1990-01-23 Phillips Petroleum Company Yeast production of hepatitis B surface antigen
AP56A (en) 1987-01-30 1989-09-26 Smithkline Biologicals S A Hepatitis B virus surface antigens and hybrid antigehs containing them.
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
EP1088830A3 (en) 1987-06-22 2004-04-07 Medeva Holdings B.V. Hepatitis b surface antigen particles
DE3789866T2 (de) 1987-07-17 1994-09-22 Rhein Biotech Gesellschaft Fuer Neue Biotechnologische Prozesse Und Produkte Mbh, 40595 Duesseldorf DNA-Moleküle, die für FMDH-Kontrollabschnitte und Strukturgene für ein Protein mit FMDH-Aktivität kodieren, sowie deren Anwendung.
IT1223334B (it) 1987-11-02 1990-09-19 Sclavo Spa Polipeptidi immunologicamente attivi con una tossicita' alterata utili per la preparazione di un vaccino antipertosse
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US6306625B1 (en) 1988-12-30 2001-10-23 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Method for obtaining expression of mixed polypeptide particles in yeast
CA2006700A1 (en) 1989-01-17 1990-07-17 Antonello Pessi Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
ATE115862T1 (de) 1989-02-04 1995-01-15 Akzo Nobel Nv Tocole als impfstoffadjuvans.
GB8914122D0 (en) 1989-06-20 1989-08-09 Wellcome Found Polypeptide expression
KR920703114A (ko) 1989-07-14 1992-12-17 원본미기재 접합체 백신을 위한 시토킨 및 호르몬 운반체
EP0414374B1 (en) 1989-07-25 1997-10-08 Smithkline Biologicals S.A. Novel antigens and methods for their preparation
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
GB9007024D0 (en) 1990-03-29 1990-05-30 Imperial College Novel vaccine
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0484621A3 (en) 1990-07-11 1992-08-26 American Cyanamid Company Efficacious vaccines against bordetella pertussis comprising a combination of individually purified pertussis antigens
ATE128628T1 (de) 1990-08-13 1995-10-15 American Cyanamid Co Faser-hemagglutinin von bordetella pertussis als träger für konjugierten impfstoff.
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059692C (en) 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2067003A1 (en) 1991-04-29 1992-10-30 Peter J. Kniskern Hbsag escape mutant vaccine
AU2927892A (en) 1991-11-16 1993-06-15 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Hybrid protein between cs from plasmodium and hbsag
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
CA2135052A1 (en) 1992-05-06 1993-11-11 R. John Collier Diphtheria toxin receptor-binding region
SG48365A1 (en) 1992-05-23 1998-04-17 Smithkline Beecham Biolog Combined vaccines comprising hepatitis b surface antigen and other antigens
PT652758E (pt) 1992-06-18 2000-04-28 Harvard College Vacinas de toxina da difteria
CA2138997C (en) 1992-06-25 2003-06-03 Jean-Paul Prieels Vaccine composition containing adjuvants
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
WO1995008348A1 (en) 1993-09-22 1995-03-30 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
EP1167379A3 (en) 1994-07-15 2004-09-08 University Of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
NZ304715A (en) 1995-03-22 1999-07-29 Jackson H M Found Military Med Production of immunogenic constructs using organic cyanylating reagents to activate carbohydrates and then coupling the carbohydrate to a protein, peptide or hapten
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
ATE496634T1 (de) 1995-05-04 2011-02-15 Sanofi Pasteur Ltd Azelluläre pertussis-impfstoffe und verfahren zu deren herstellung
TR199701547T1 (xx) 1995-06-07 1998-03-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Polisakarit antijen protein e�leni�i i�eren a��.
US5811102A (en) 1995-06-07 1998-09-22 National Research Council Of Canada Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines
PL184872B1 (pl) 1995-06-23 2003-01-31 Smithkline Beecham Biolog Kombinowana szczepionkaĆ zestaw do przygotowania kombinowanej szczepionkiĆ sposób wytwarzania kombinowanej szczepionki i jej zastosowanie
DE69736709T2 (de) 1996-07-02 2007-10-04 Sanofi Pasteur Ltd., Toronto Vielwertige dtp-polio-impfstoffe
GB9616351D0 (en) 1996-08-02 1996-09-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
BR9714980A (pt) † 1997-09-15 2001-11-06 Pasteur Merieux Msd Vacinas multivalentes
GB9806456D0 (en) * 1998-03-25 1998-05-27 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
DE69941574D1 (de) 1998-08-19 2009-12-03 Baxter Healthcare Sa Immunogenes beta-propionamido-gebundenes polysaccharid-protein konjugat geeignet als impfstoff und hergestellt bei verwendung von n-acryloyliertem polysaccharid
DK1107787T3 (da) 1998-08-28 2003-09-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Salmonella typhi vaccinesammensætning
EP1004314A1 (fr) 1998-11-26 2000-05-31 Pasteur Merieux MSD Vaccin T.d. Polio rappel pour une population vaccinée ou sensibilisée
EP1140157B1 (en) 1998-12-21 2009-02-18 MedImmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and immunogenic fragments for vaccines
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
FR2791895B1 (fr) 1999-03-23 2001-06-15 Pasteur Merieux Serums Vacc Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide
JP2002541808A (ja) 1999-04-09 2002-12-10 テクラブ， インコーポレイテッド ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア
GB9915204D0 (en) 1999-06-29 1999-09-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9918319D0 (en) 1999-08-03 1999-10-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US6515117B2 (en) 1999-10-12 2003-02-04 Bristol-Myers Squibb Company C-aryl glucoside SGLT2 inhibitors and method
GB9925559D0 (en) 1999-10-28 1999-12-29 Smithkline Beecham Biolog Novel method
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
CA2413450C (en) 2000-06-20 2014-02-18 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
CZ20024224A3 (cs) 2000-06-29 2003-05-14 Glaxosmithkline Biologicals S. A. Farmaceutický prostředek
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
UA79735C2 (uk) 2000-08-10 2007-07-25 Глаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. Очищення антигенів вірусу гепатиту b (hbv) для використання у вакцинах
KR100401423B1 (ko) * 2001-01-10 2003-10-17 주식회사 엘지생명과학 혼합 백신의 제조 방법
US6936590B2 (en) 2001-03-13 2005-08-30 Bristol Myers Squibb Company C-aryl glucoside SGLT2 inhibitors and method
DE10117500A1 (de) 2001-04-07 2002-10-17 Cognis Deutschland Gmbh Reinigungstücher zur Haarpflege
AU2002254567B2 (en) 2001-04-11 2007-10-11 Bristol-Myers Squibb Company Amino acid complexes of C-aryl glucosides for treatment of diabetes and method
WO2002091998A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
RU2323002C2 (ru) 2001-07-26 2008-04-27 Чирон Срл. Вакцины, содержащие алюминиевые адъюванты и гистидин
FR2828406B1 (fr) * 2001-08-08 2005-06-24 Aventis Pasteur Composition vaccinale bivalente havi
EP1456231A2 (en) 2001-12-20 2004-09-15 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
GB0213622D0 (en) 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
US20060057160A1 (en) 2002-08-02 2006-03-16 Ralph Biemans Vaccine composition
CA2503946C (en) 2002-11-01 2016-08-16 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Drying process
RU2340627C2 (ru) 2003-03-13 2008-12-10 ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а. Способ очистки бактериального цитолизина
GB0405787D0 (en) 2004-03-15 2004-04-21 Chiron Srl Low dose vaccines
CN103030617A (zh) 2004-03-16 2013-04-10 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 吡喃葡萄糖基取代的苯基衍生物、含该化合物的药物、其用途及其制造方法
GB0420634D0 (en) 2004-09-16 2004-10-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
NZ560930A (en) * 2005-02-16 2011-06-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Hepatitis B virus vaccine comprising a hepatitis B virus surface antigen, aluminium phosphate, 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A and a triethylammonium ion
PE20110072A1 (es) 2005-06-27 2011-02-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica
JP5135220B2 (ja) * 2005-09-01 2013-02-06 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス ゲーエムベーハー アンド カンパニー カーゲー 血清群ｃ髄膜炎菌を含む複数ワクチン接種
EP1988918A4 (en) * 2006-02-22 2010-04-28 Novavax Inc ADJUVANZ AND VACCINE COMPOSITIONS
GB0617602D0 (en) 2006-09-07 2006-10-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0625593D0 (en) 2006-12-21 2007-01-31 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JP5814507B2 (ja) 2006-09-07 2015-11-17 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
CA2681567C (en) * 2007-03-22 2016-07-19 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Method of preparing an immunologically-active adjuvant-bound dried vaccine composition
PE20100366A1 (es) * 2008-10-24 2010-05-21 Panacea Biotec Ltd Novedosas composiciones de vacuna con tos ferina acelular asi como el metodo para su elaboracion
GB0822633D0 (en) * 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB0822634D0 (en) * 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
US8425922B2 (en) * 2009-01-05 2013-04-23 EpitoGenesis, Inc. Adjuvant compositions and methods of use
TW201136603A (en) 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
GB201015132D0 (en) * 2010-09-10 2010-10-27 Univ Bristol Vaccine composition
EP2661277A2 (en) * 2011-01-05 2013-11-13 Bharat Biotech International Limited A combination heptavalent vaccine
GB201105981D0 (en) * 2011-04-08 2011-05-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
JP6283674B2 (ja) * 2012-09-18 2018-02-21 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 外膜小胞

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