BRPI0721053A2

BRPI0721053A2 - INIBIDORES DE ESPIROCETONA ACETIL-CoA CARBOXILASE

Info

Publication number: BRPI0721053A2
Application number: BRPI0721053-1A
Authority: BR
Inventors: Jeffrey Wayne Corbett; Richard Louis Elliott; Andrew Simon Bell
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2006-11-29
Filing date: 2007-11-16
Publication date: 2014-07-29
Also published as: WO2008065508A1; CR10831A; KR20090083956A; JP2010511035A; TN2009000204A1; ATE552262T1; MX2009005604A; CO6180424A2; ECSP099371A; AU2007326950B2; AU2007326950A1; CA2670422C; EP2097420A1; EP2097420B1; NO20091889L; IL198779A0; US20090270435A1; SV2009003281A; CN101541809A; ZA200903268B

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTO INIBIDOR DE ESPIROCETONA ACETIL-CoA CARBOXILASE, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E USO DO REFERIDO COMPOSTO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a compostos 1'-(benzoil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona substituídos que agem como inibidores de acetil-CoA carboxilases e a seu uso no tratamento de obesidade. Fundamento da Invenção

Obesidade extrema é uma doença principal nos Estados Unidos e outros países. Suas complicações incluem hipertensão, diabetes, doença arterial coronariana, acidente vascular cerebral, insuficiência cardíaca congestiva, doenças venosas, problemas ortopédicos múltiplos e insuficiência pulmonar com expectativa de vida notadamente diminuída. Controle médico, incluindo medicamentos dietéticos, psicoterapia e técnicas de modificação comportamental têm produzido resultados extremamente pobres em ensaios múltiplos. Têmse tentado diversas técnicas cirúrgicas que têm desviado a superfície absorptiva do intestino delgado ou têm visado reduzir o tamanho do estômago por meio de partição ou desvio. Esses procedimentos demonstram ser ambos perigosos para realizar em pacientes morbidamente obesos e são carregados com numerosas complicações pós-operatórias potencialmente letais. Além disso, tais procedimentos operatórios são frequentemente difícies de reverter-se.

Acetil-CoA carboxilases (ACC) são uma família de enzimas encontradas na maior parte de espécies e são associadas a síntese de ácidos graxos e metabolismo por meio de catalisação da produção de malonil-CoA a partir de acetil-CoA. Em mamíferos, duas isoformas da enzima ACC são identificadas. ACC1, que é expressea sob altos níveis em tecidos lipogênicos, tais como gordura e o fígado, controlar a primeira etapa comprometida na biossíntese de ácidos graxos de cadeia longa. Se acetil-CoA não é carboxilada para formar malonil-CoA, ela é metabolizada por meio do ciclo de Krebs. ACC2, que é um componente menor de ACC hepática, mas a isoforma predominante no coração e músculo esquelético, e catalisa a produção de malonil-CoA na superfície cistólica de mitocôndria, regula quanto ácido graxo é utilizado na oxidação β inibindo carnitina palmitoil transferase. Desse modo, aumentando utilização de ácido graxo e impedindo aumento na síntese de ácido graxo de novo, administração crônica de uma ACC-I poderá também exaurir depósitos de TG no fígado e tecido adiposo em indivíduos 5 obesos que consomem uma dieta alta ou baixa de gordura, levando a perda seletiva de gordura corporal.

Atualmente, nenhum inibidor ACC1 ou ACC2 está sendo usado como medicamentos antiobesidade.

Portanto, há uma necessidade contínua de medicamentos contendo inibidores ACC1 e ACC2 para respectivamente, tratar obesidade inibindo síntese de ácido graxo e aumentando oxidação de ácido graxo. Sumário da Invenção

A presente invenção refere-se a compostos que apresentam a estrutura de Fórmula (1)

(1)

ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que:

(a) R1 é H, OH, halo, ciano, C1.3 alquila, C1.3 alcóxi, C-|.3 haloalquila, Ci-3 haloalcóxi, C1-3 alquilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0C-|.3 alquila ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10;

(b) cada R10 é independentemente OH, halo, ciano, C-|.3 alquila,

C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou Ci-3 haloalcóxi;

(c) R2 e R3, são cada um independentemente H, OH, halo, ciano, C-1.3 alquila, C1.3 alcóxi, C1-3 haloalquila, Ci-3 haloalcóxi, C^3 alquilsulfonila, CO(O)H, -C(0)0Ci.3 alquila, -C(O)NR11R12, ou fenila em que essa fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10;

(d) R11 e R12 são tomados separadamente e são, cada um independentemente, H ou C-1-3 alquila, ou R11 e R12, são tomados juntamente, com o nitrogêio ao qual se ligam, para formar uma heterocicloalquila de 4-7- membros;

(e) R4 é H, halo, ciano, C1.3 alquila ou Ci-3 haloalquila;

(f) R6 é tomado separadamente e é H, OH, halo, Ci_3 alquila, Ci_3

alcóxi, C-i-3 haloalquila ou C^3 haloalcóxi;

(g) R7 é tomado separadamente e é H, OH, halo, Ci.3 alquila, Ci. 3 alcóxi, Ci-3 haloalquila ou Ci_3 haloalcóxi;

(h) R5 é tomado separadamente e é um heteroarila de 4-7- membros opcionalmente substituída com halo, C1.3 alquila, C1.3 alcóxi, C1-3

alquil-OH, Ci_3 haloalquila ou Ci_3; ou

(i) R5 é tomado juntamente com R6 ou R7, e com a fenila, a qual R5 e R6 ou R7 se ligam, para formar um radical policíclico heterocíclico, com um anel portador de nitrogênio em que pelo menos um átomo de nitrogênio

se liga a um átomo de carbono da fenila, no qual o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-dihidro-1H-piridin-2-ona, e em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente substituído independentemente com um a dois oxo, halo, C1-3 alquila, C-1.3 alcóxi, Ci-3 alquil-OH, C^3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, heteroarila de 4-7- 20 membros, heterocicloalquila ou fenila de 4-7-membros, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10, contanto que R5 seja não tomado juntamente com R6 para formar uma benzotriazolila ou uma benzoxadiazolila e contanto que R5 não seja tomado juntamente com R7 para formar uma benzoxadiazolila; e 25 (j) R8 e R9 são, independentemente H, OH, halo, C1-3 alquila, C1-3

alcóxi, C-1.3 haloaluila ou Ci_3 haloalcóxi,

contanto que 0 composto não seja 1'-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-5- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 6-cloro-7-metil-1'-[3-(1Hpirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 6,7-dimetil-1'-[3- 30 (1 H-pirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona ou 6,7- dimetil-IHS-OH-pirazoM-iObenzoiljespirotcromeno^^-piperidinM^Hy-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A presente invenção também se refere uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula (1) ou um dos compostos

1 '-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-5-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]4(3H)-ona; 6-cloro-7-metil-1 '-[3-(1 H-pirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'5 piperidin]-4(3H)-ona; 6,7-dimetil-1 '-[3-(1 H-pirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; e 6,7-dimetil-1 '-[3-(1 H-pirazol-4-il)benzoil]espiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, ou um sal do composto farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável, veículo, diluente ou excipiente.

A presente invenção adicionalmente refere-se a um método de

tratamento de uma condição de estar em excesso de peso em um mamífero com necessidade de tal tratamento, método este que compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (1) ou 1'-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-5-metoxiespiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; 6-cloro-7-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-4-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; 6,7-dimetil-1 ’-[3-(1 Hpirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; e 6,7-dimetil-1'[3-(1 H-pirazol-4-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto.

Os compostos, sais e composições farmacêuticas da presente

invenção são usadas para tratar diabete do tipo 2, resistência à insulina, síndrome metabólica, aterosclerose, hiperlipidemia, dislipidemia, insuficiência cardíaca congestiva, doença cardíaca coronariana, acidente vascular cerebral e câncer. Preferencialmente, os compostos, sais e composições farma25 cêuticas da presente invenção são usados para tratar uma condição de excesso de peso ou obesa em um mamífero.

Descrição Detalhada

Os termos usados para descrever a presente invenção apresentam os seguintes significados neste relatório.

Os compostos e intermediários da presente invenção foram ge

ralmente designados neste relatório, de acordo com as recomendações de IUPAC (International Union for Pure and Applied Chemistry) em Nomenclatura de Química Orgânica (Nomenclature of Organic Chemistry) e as regras de índice CAS.

O teor de átomo de carbono das várias porções contendo hidrocarboneto neste relatório poderá ser indicado por um prefixo designando o 5 número mínimo e máximo de átomos de carbono na porção, por exemplo, os prefixos (Ca-Cb)alquila e Ca-balquila, indicam uma porção alquila do número inteiro "a" para "b" átomos de carbono, inclusiva. Desse modo, por exemplo, (C-|-C6)alquila e C-i_6alquila referem-se a um grupo alquila de um a seis átomos de carbono, inclusivo.

O termo "substituído" entende-se que um átomo de hidrogênio

sobre um átomo de carbono, nitrogênio ou enxofre no radical foi substituído com um átomo ou radical diferente. O átomo ou molécula substituindo o átomo de hidrogênio denota-se como um "substituinte."

O termo "radical" denota um grupo de átomos que comporta-se como um único reagente em uma reação química, por exemplo, um radical orgânico é um grupo de átomos que confere propriedades características a um composto que o contém, ou que permanece inalterado durante uma série de reações, ou transformações.

O termo "alquila" denota uma cadeia normal ou ramificada, saturada de átomos de carbono. Exemplos de grupos alquila incluem, mas sem se limitar aos mesmos, metila, etila, propila, isopropila, butila e terc-butila.

O termo "alcóxi" denota uma cadeia normal ou ramificada, monovalente, saturada de átomos de carbono ligados a um átomo de oxigênio. Exemplos de grupos alcóxi incluem metóxi, etóxi, propóxi, iso-butóxi, tercbutóxi, e similares.

O termo "halo" refere-se a cloro, flúor ou bromo.

O termo "haloalquila" refere-se a um grupo alquila em que um ou mais carbonos são substituídos com grupos halo. Exemplos de grupos haloalquila incluem, mas sem se limitar aos mesmos, difluormetila, trifluormetila e 1,2-difluoretila.

O termo, "heterocicloalquila de 4-7-membros" significa um radical que apresenta um anel não-aromático contendo quatro a sete átomos no anel, o qual inclui um nitrogênio, e, opcionalmente, um a dois heteroátomos adicionais selecionados do grupo que consiste de O, N e S. Exemplos desse anel heterocicloalquila de 4-7 membros incluem, mas sem se limitar aos mesmos, azetidina, pirrolidina, piperidina, azepano, pirrolina, imidazolina, 5 imidazolidina, pirazolidino morfolina, tiomorfolina e piperazina.

O termo "heteroarila de 4-7 membros" refere-se a um radical que apresenta um anel monocíclico aromático contendo quatro a sete átomos no anel que consiste de carbono e um a três heteroátomos, cada um selecionado do grupo que consiste de O, N e S. Exemplos de tais heteroarilas inclu10 em, mas sem se limitar aos mesmos, pirrol, pirazol, piridina, imidazol, oxadiazol, pirimidina, oxazol, isoxazol, triazol, tetrazol, piridazina, pirazina, tiazol e tiadiazol. Um grupo heteroarila da presente invenção pode ser opcionalmente substituído um a duas vezes com substituintes independentemente selecionados de halo, Ci-3alquila, C1-3 alcóxi, C1.3 alquil-OH, C1.3 haloalquila e Ci15 3 haloalcóxi.

O termo "radical policíclico heterocíclico" refere-se a um radical heterocíclico de dois ou três anéis que compreende um anel benzeno que é fundido com um anel portador de nitrogênio aromático ou não-aromático de

5-6 membros em que o anel portador de nitrogênio contém um átomo de nitrogênio que se liga a um átomo de carbono no anel benzeno e, opcionalmente contém um a dois heteroátomos adicionais selecionados de N, O e S. O anel portador de nitrogênio do heterociclo policíclico poderá opcionalmente ser fundido com um terceiro anel selecionado do grupo que consiste de ciclo-hexeno e 5,6-di-hidro-1 H-piridin-2-ona. Exemplos de grupos heterociclo policíclicos incluem, mas sem se limitar aos mesmos, 1H-indazol, 1Hbenzoimidazol, quinolina, 1,2,3,4-tetra-hidroquinolina, quinoxalina, 1H-indol, 2,3-di-hidro-1H-benzoimidazol e 1 H-benzo[d][1,2,3]triazol, 6,7,8,9-tetra-hidro5H-carbazol, 2,3,4,9-tetra-hidro-1 H-pirido[3,4-b]indol e benzoxazol. Em um heterociclo policíclico da presente invenção, o anel portador de nitrogênio é opcionalmente substituído com um a dois substituintes independentemente selecionados de oxo, halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, Ci_3 alquil-OH, C1.3 haloalquila, C^3 haloalcóxi, fenila, anel heterocíclico de 4-7 membros. A expressão "sais correlatos" conforme usados neste relatório significa sais de compostos da presente invenção farmaceuticamente aceitáveis.

A expressão "farmaceuticamente aceitáveis" indica que o trans

portador, veículo, diluente, excipiente(s), e/ou sal designados é geralmente química e/ou fisicamente compatível com os outros ingredientes que compreendem a formulação, e fisiologicamente compatível com o recipiente dos mesmos.

O termo "mamífero" refere-se a um animal individual que é um membro da classe mamífero taxonômica. Exemplos de mamíferos incluem, mas sem se limitar aos mesmos, humanos, cães, gatos, cavalos e gados. Na presente invenção, os mamíferos preferidos são humanos, cães e gatos. Mais preferencialmente, o mamífero é um humano.

A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma 15 quantidade de um composto da presente invenção que (i) trata ou impede a doença particular, condição, ou distúrbio, (ii) atenua, melhora, ou elimina um ou mais sintomas da doença particular, condição, ou distúrbio, ou (iii) impede ou retarda o início de um ou mais sintomas da doença particular, condição, ou distúrbio descritos neste relatório.

Os termos "tratar", "tratado", ou "tratamento" conforme empre

gados neste relatório incluem impedir (por exemplo, profilaxia), paliação, retardando progressão e cura de uma doença, tal como obesidade.

Em uma modalidade dos compostos de Fórmula (1), e dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos, em que R5 é tomado junta

mente com R7, o anel portador de nitrogênio opcionalmente substituído, opcionalmente contém um segundo heteroátomo N, O, ou S. Esse anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-hidropiridina ou 5,6-di-hidro-1 H-piridin-2-ona.

Mais preferencialmente, em relação a compostos e sais em que R5 e R7 são tomados juntamente, esse radical heterocíclico policíclico é 1Hindazolila, 1 H-benzoimidazolila, quinolila, 1,2,3,4-tetrahidroquinolila, quinoxalila, 1 H-indolila, 2,3-di-hidro-1 H-benzoimidazolila, 1H-benzo[d][1,2,3]triazolila, 6,7,8,9-tetra-hidro-5H-carbazolila, 2,3,4,9-tetra-hidro-1 Hpirido-[3,4-b]indolila ou benzoxazolila. O anel portador de nitrogênio desse radical heterocíclico policíclico é opcionalmente substituído.

Nessa modalidade, ainda mais preferencialmente, o radical hete5 rocíclico policíclico é 1H-indazolila, 1H-benzoimidazolila, 1 H-indolila ou 2,3,4,9-tetra-hidro-1H-pirido[3,4-b]indolila opcionalmente substituídas. Contudo, ainda mais preferencialmente, em relação a compostos e sais, em que R5 e R7 são tomados juntamente, R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; R3 é H, halo, CH3 ou OCH3; e R4 é H.

Em uma outra modalidade dos compostos de Fórmula (1), e dos

sais farmaceuticamente aceitáveis destes, em que R5 é tomado juntamente com R6, 0 anel portador de nitrogênio opcionalmente substituído, opcionalmente contém um segundo heteroátomo N, O, ou S. Esse anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-di-hidro-1 H-piridin-2-ona.

Mais preferencialmente, em relação a compostos e sais, em que R5 e R6 são tomados juntamente, esse radical heterocíclico policíclico é 1Hindazolila, 1 H-benzoimidazolila, 1 H-indolila ou 2,3-di-hidro-1Hbenzoimidazolila. O anel portador de nitrogênio desse radical heterocíclico policíclico é opcionalmente substituído.

Nessa modalidade, ainda mais preferencialmente, o radical heterocíclico policíclico é 1H-indazolila opcionalmente substituída. Contudo, ainda mais preferencialmente, em relação a compostos e sais, em que R5 e R7 são tomados juntamente, R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; R3 é H, halo, CH3 ou OCH3; e R4 é H.

Onde R5 é tomado separadamente, prefere-se que R5 seja uma heteroarila opcionalmente substituída selecionada do grupo que consiste de pirazolila, imidazolila, oxadiazolila e pirimidinila. Mais preferencialmente, R5 é uma heteroarila opcionalmente substituída selecionada do grupo que consis30 te de pirazolila e imidazolila. Ainda mais preferencialmente, R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; R3 é H, halo, CH3 ou OCH3; e R4 é H.

Os compostos da presente invenção poderão conter centros estereogênicos. Esses compostos poderão existir como misturas de enantiômeros ou como enantiômeros puros. Onde um composto inclui um centro estereogênico, os compostos poderão ser resolvidos para os enantiômeros puros por meio de métodos conhecidos daqueles versados no estado da técnica, por exemplo, por meio de formação de sais diastereoisoméricos que pode poderão ser separados, por exemplo, por meio de cristalização; formação de derivados ou complexos estereoisoméricos que poderão ser separados, por exemplo, por meio de cristalização, cromatografia gasosa-líquida ou líquida; reação seletiva de um enantiômero com um reagente específico a enantiômero, por exemplo, esterificação enzimática; ou cromatografia gasosa-líquida ou líquida em um ambiente quiral, por exemplo, em um suporte quiral, por exemplo, sílica com um Iigante quiral ligado ou na presença de um solvente quiral. Considerar-se-á que onde o estereoisômero desejado é convertido em uma entidade química por um dos procedimentos de separação descritos acima, uma etapa adicional é exigida para liberar a forma enantiomérica desejada. Alternativamente, os estereoisômeros específicos poderão ser sintetizados usando um material de partida opticamente ativo, por meio de síntese assimétrica usando reagents opticamente ativos, substratos, catalisadores ou solventes, ou convertendo um estereoisômero em outra transformação assimétrica.

Certos compostos de Fórmula (1) poderão existir em diferentes formas conformacionais estáveis que poderão ser separáveis. Assimetria de torção devido à rotação restrita em torno de uma ligação única assimétrica, por exemplo, devido a impedimento estérico ou tensão do anel, poderá per25 mitir separação de diferentes confôrmeros. Os compostos da presente invenção adicionalmente incluem cada isômero conformacional de compostos de Fórmula (1), e misturas dos compostos.

Sais farmaceuticamente aceitáveis, conforme usados neste relatório em relação a compostos da presente invenção, incluem sais inorgânicos e orgânicos desse composto farmaceuticamente aceitáveis. Esses sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e purificação final de um composto, ou separadamente reagindo o composto ou pró-fármaco do mesmo, com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e isolando o sal assim formado. Sais representativos incluem, mas sem se limitar aos mesmos, os sais bromidreto, cloridrato, iodreto, sulfato, bissulfato, nitrato, acetato, trifluoracetato, oxalato, besilato, palmitato, pamoato, malonato, estearato, 5 laurato, malato, borato, benzoato, lactato, fosfato, hexafluorofosfato, benzenossulfonato, tosilato, formato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glicoeptonato, Iactobionato e laurilsulfonato, e similares. Esses poderão também incluir cátions baseados nos metais alcalinos e alcalinos-terrosos, tais como sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, e similares, 10 bem como amônio não-tóxico, amônio quaternário, e cátions amina incluindo, mas sem se limitar aos mesmos, amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamônio, dimetilamônio, trimetilamônio, trietilamônio, etilamônio, e similares. Para exemplos adicionais ver, por exemplo, Berge1 e outros, J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).

Os compostos e sais da invenção poderão existir tanto em for

mas não-solvatadas quanto solvatadas. O termo 'solvato' é usado neste relatório para descrever um complexo molecular que compreende o composto da invenção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitável, por exemplo, etanol. O termo 'hidrato' é empregado quando o solvente 20 é água. Solvatos farmaceuticamente aceitáveis incluem hidratos e outros solvates, em que o solvente de cristalização poderá ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO (sulfóxido de dimetila).

Certos compostos de Fórmula (1) e seus sais poderão existir em mais de uma forma cristalina. Polimorfos de compostos representados por 25 Fórmula (1) formam parte desta invenção e poderão ser preparados por meio de cristalização de um composto de Fórmula (1) sob diferentes condições. Por exemplo, usando diferentes solventes ou diferentes misturas de solvente de recristalização; cristalização sob diferentes temperaturas; vários modos de resfriamento, que variam de resfriamento muito rápido a muito 30 lento durante cristalização. Polimorfos poderão também ser obtidos por meio de aquecimento ou fusão de um composto de Fórmula (1) seguido por resfriamento gradual ou rápido. A presença de polimorfos poderá ser determinada por meio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de sonda sólida (RMN)1 espectroscopia infravermelha (IR)1 calorimetria diferencial de varredura, difração de raios X de pós ou tais outras técnicas.

Esta invenção também inclui compostos isotopicamente marcados, que são idênticos àqueles descritos por Fórmula (1), mas em relação ao fato de que um ou mais átomos são substituídos por um átomo apresentando uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa usualmente encontrado na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, enxofre e flúor, tais como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 36CI, 125I, 129I, e 18F, respectivamente. Compostos da presente invenção, e sais dos compostos farmaceuticamente aceitáveis que contêm os isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do escopo desta invenção. Certos compostos isotopicamente marcados da presente invenção, por exemplo, aqueles em que isótopos radioativos tais como 3H e 14C são incorporados, são úteis em ensaios de distribuição em fármacos e/ou tecido substrato. Isótopos tritiados (isto é, 3H), e carbono-14 (isto é, 14C), são particularmente preferidos por sua facilidade de preparação e detectabilidade. Adicionalmente, substituição com isótopos mais pesados tal como deutério (isto é, 2H), pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultando de maior estabilidade metabólica, por exemplo, aumento de meia-vida in vivo ou exigências de dosagem reduzidas e, portanto, poderá ser preferida em algumas circunstâncias. Compostos de Fórmula (1) isotopicamente marcados, desta invenção, e sais dos compostos, podem geralmente ser preparados realizando os procedimentos descritos nos esquemas e/ou nos Exemplos abaixo, substituindo um reagente isotopicamente marcado prontamente disponível por um reagente nãoisotopicamente marcado.

Os compostos da presente invenção poderão ser isolados e usados per se ou na forma de seus sais farmaceuticamente aceitáveis. De acordo com a presente invenção, compostos com átomos de nitrogênio múltiplos básicos podem formar sais com número de equivalentes variáveis ("eq.") de ácido. Será entendido por profissionais que todos esses sais estão dentro do escopo da presente invenção.

A presente invenção adicionalmente inclui pró-fármacos de compostos de Fórmula (1). Um pró-fármaco de um composto de Fórmula (1) 5 poderá ser aquele formado de uma maneira convencional com um grupo funcional do composto, tal como, com um grupo amino, hidróxi ou carbóxi. O termo "pró-fármaco" significa um composto que é transformado in vivo para produzir um composto de Fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do composto. A transformação poderá ocorrer por meio de vários meca10 nismos, tal como, por meio de hidrólise no sangue. Uma discussão do uso de pró-fármacos é proporcionada por T. Higuchi e W. Stella, "Pro-drugs as Novel Deiivery Systems," Vol. 14 da Série Simpósio A.C.S., e in Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceuticai Association e Pergamon Press, 1987.

Por exemplo, como muitos dos compostos da presente invenção

incorporam um grupo amina funcional, um pró-fármaco pode ser formado pela substituição de um átomo de hidrogênio no grupo amina com um grupo tais como R-carbonila, RO-carbonila, NRR'-carbonila, em que ReR' são, cada um independentemente, (Ci-C10)alquila, (C3-C7)cicloalquila, benzila, ou 20 R-carbonila é um α-aminoacila natural ou α-aminoacila natural-a-aminoacila natural, -C(OH)C(O)OY' em que Y' é H, (CrC6)alquila ou benzila, -C(OY0)Yi em que Y0 é (C1-Ci,) alquila e Yi é (CrC6)alquila, carbóxi(Ci-C6)alquila, amino(Ci-C4)alquila ou mono-N- ou di-N,N-(CrC6)alquilaminoalquila, -C(Y2)Ys em que Y2 é H ou metila e Y3 é mono-N- ou di-N,N-(CrC6)alquilamino, mor25 folino, piperidin-1-ila ou pirrolidin-1-ila.

Similarmente, se um composto da presente invenção contém um um grupo álcool funcional, um pró-fármaco pode ser formado pela substituição do átomo de hidrogênio do grupo álcool com um grupo tais como (Cr C6)alcanoiloximetila, 1 -((CrC6)alcanoilóxi)etila, 1 -metil-1 -((CrCeJalcanoilóxi) 30 etila, (CrC6)alcoxicarboniloximetila, N-(CrC6)alcoxicarbonilaminometila, succinoíla, (CrC6)alcanoíla,

a-amino(Ci-C4)alcanoíla, arilacila e α-aminoacila, ou a-aminoacil-aí minoacila, em que cada grupo α-aminoacila é independentemente selecionado dos L-aminoácidos que ocorrem naturalmente, P(O)(OH)2, -P(0)(0(Cr C6)alquil)2 ou glicosila (o radical resultante da remoção de um grupo hidroxila da forma hemiacetal de um carboidrato).

Se um composto da presente invenção contém um grupo ácido

carboxílico funcional, um pró-fármaco pode compreender um éster formado pela substituição do átomo de hidrogênio do grupo ácido com um grupo tais como (CrC8)alquila, (C2-Ci2)alcanoiloximetila, 1-(alcanoilóxi)etila apresentando de 4 a 9 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcanoilóxi)-etila apresentando 10 de 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetila apresentando de 3 a 6 átomos de carbono, 1-(alcoxicarbonilóxi)etila apresentando de 4 a 7 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcoxicarbonilóxi)etila apresentando de 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxicarbonil)aminometila apresentando de 3 a 9 átomos de carbono, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etila apresentando de 4 a 10 átomos de 15 carbono, 3-ftalidila, 4-crotonolactonila, gama-butirolacton-4-ila, di-N,N-(CiC2)alquilamino(C2-C3)alquila (tal como β-dimetilaminoetila), carbamoil-(Cr C2)alquila, N,N-di(C1-C2)alquilcarbamoil-(C1-C2)alquila e piperidino-, pirrolidino- ou morfolino(C2-C3)alquila.

Síntese

Em geral, os compostos de Fórmula (1) desta invenção poderão

ser preparados por métodos que incluem processos conhecido no estado da técnica de química, particularmente, à Iuz da descrição contida neste relatório. Certos processos para a produção dos compostos de Fórmula (1) desta invenção são ilustrados pelos seguintes esquemas de reação. Outros pro25 cessos são descritos na seção experimental. Alguns dos compostos de partida para as reações descritas nos esquemas e Exemplos, são preparados conforme ilustrados neste relatório.

Os compostos de Fórmula (1), em que R1, R2, R3, R4 R5, R6, R71 R8 e R9 são, conforme definidos acima, poderão ser preparados, conforme mostrados abaixo no Esquema A. Esquema A

No Esquema A, um composto de Fórmula (1) é formado por meio de acoplamento de uma cetona espirocíclica (2) com um ácido carboxíIico (3) enquanto em solução. A cetona espirocíclica (2) e ácido carboxílico (3) poderão ser acoplados formando um éster de ácido carboxílico ativado, tal como, por meio de contato do ácido carboxílico (3) com um reagente de acoplamento peptídico, tal como hexafluorofosfato 2-(7-aza-1 H-benzotriazol1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (HATU), na presença de um agente de ativação, tal comc Ν,Ν-diisopropiletilamina (DIEA) e em seguida contatando o éster de ácido carboxílico ativado com a cetona espirocíclica (2) para formar um composto de Fórmula (1). Alternativamente, compostos de Fórmula (1) podem ser formados, primeiro convertendo o ácido carboxílico (3) em um cloreto ácido, tal como reagindo com cloreto de tionila, e em seguida reagindo o cloreto ácido com a cetona espirocíclica (2) para formar um composto de Fórmula (1).

A síntese de compostos de Fórmula (2), e seus materiais de partida, poderão ser preparados conforme descritos nos Esquemas BaE. Esquema B

10

O

N

I

Boc

F *1 O R2 Pirrolidina \ -3*. I Solvente R3 R4 R1 (4) Boc

Acido

Para preparar espirocetona (2), uma solução de uma 1-(2- hidroxifenil)etanona substituída ou não-substituída (5), 4-oxopiperidino-1- carboxilato de terc-butila e pirrolidina (razão molar 1:1:1) em um solvente, tal como metanol, é agitada por 24 horas sob uma temperatura que varia de temperatura ambiente até refluxo e evaporada para proporcionar uma NBoc-espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (4). Um ácido, tal como HCI ou ácido trifluoroacético é em seguida adicionado a uma solução da N-Bocespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (4) em solvente, tais como diclorometano, isopropanol ou dioxano, com agitação subsequente, para desproteger a amina removendo o grupo Boc (f-butiloxicarbonila) para formar uma cetona espirocíclica (2). Esquema C

CO

Catalisador

Solvente

Boc

(14)

(24)

CF3v ,0

10

OH

íf^ I O R4 (34) Tf2O

Base

Solvente

,N,

CO

Catalisador

Solvente

Álcool

Boe

Boc

Alternativamente, uma N-Boc-espiro[cromeno-2,4'-piperidin]4(3H)-ona poderá ser derivatizada conforme mostrada no Esquema C. Por exemplo, tratando uma N-Boc-espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, em que um de R11 R2, R3 ou R4 é um grupo bromo (14), com monóxido de carbono na presença de um catalisador adequado, tal como diclorobis(trifenilfcsina)paládio II, uma base tal como trietilamina e na presença de um solvente álcool, tal como metanol, proporciona os derivados de éster metílico N-Bcc-espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (24). Uma preparação alternada exige submeter uma solução de um composto derivado de hidroxilN-Boc-es(:iro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (34) em um solvente inerte, tal como cloreto de metileno, a anidrido triflíco na presença de uma base adequada, tal como piridina, proporciona o triflato desejado derivado N-Bocespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (44). Tratando uma solução do triflato em um solvente tal como dimetilformamida com uma mistura de catalisador adequado, tais como acetato de paládio e 1,1 '-bis(difenilfosfino) ferroceno, na presença de uma base adequada, tal como trietilamina na presença de um álcool, tal como metanol, com monóxido de carbono proporciona o éster metílico desejado (54).

quemas BeC podem ser adicionalmente derivados para fornecer amidas, ésteres e ácidos conforme mostrados no Esquema D. Remoção mediada por 10 ácido do grupo de proteção N-Boc a partir do éster metílico proporciona espirociclo derivado de éster (12). Alternativamente, saponificação do espirociclo protegido por N-Boc proporciona o intermediário ácido carboxílico (64). Aminas podem ser acopladas ao ácido carboxílico utilizando métodos conhecidos daqueles versados no estado da técnica para proporcionar derivados de

5

Esquema D

R4

(24)

Amina Solvente Agente de acoplamento base

(64)

Acid

R4

(22)

Ésteres espirocíclicos preparados via métodos descritos nos Esamida (74) que, quando tratados com ácido, proporcionam as aminas espirocíclicas desejadas (22).

Ésteres espirocíclicos preparados via métodos descritos nos Esquemas BeC podem ser adicionalmente derivados para o aldeído correspondente utilizando métodos conhecidos daqueles versados no estado da técnica conforme mostrados no Esquema E. O aldeído pode ser convertido em vários heterociclos de cinco membros via métodos descritos in Tanaka, A.; e outros., J. Med. Chem. 1998, 41, 2390 - 2410. Alternativamente, um brometo de arila pode ser convertido diretamente em uma amida de Weinreb utilizando um protocolo conhecido (Buchwald, S. L., e outros., Org. Lett. 2006, pré-impresso online). A amida de Weinreb resultante pode ser convertida em cetona desejada usando métodos conhecidos daqueles versados no estado da técnica. As cetonas resultantes podem ser transformadas em vários heterociclos de cinco membros via métodos descritos in Tanaka, A.; e outros., J. Med. Chem. 1998, 41, 2390 - 2410. Esquema F

1) AcCI/solvente R1 temperatura ambien- R1 O

te ou térmica

Para preparar orto-hidroxiacetofenona (5), um reagente de acetilação, tal como cloreto de acetila ou anidrido acético, é adicionado a fenol (6) e a mistura reacional agitada sob uma temperatura entre temperatura ambiente e de refluxo. Reagente de acetilação de excesso é removido in vacuo, e 5 em seguida o fenol O-acetilado é tratado com AICI3 e aquecido a uma alta temperatura, tal como 180°C. A mistura reacional é em seguida esfriada, suprimida com ácido aquoso, tal como ácido clorídrico diluído, e filtrada para proporcionar a orto-hidroxiacetofenona desejada.

Uma composição farmacêutica da presente invenção compreen1U de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (1), ou um sal do composto farmaceuticamente aceitável, e um transportador, veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.

Em uma modalidade preferida de uma composição farmacêutica da presente invenção, em que R5 e R7 são, tomados juntamente, o radical 15 heterocíclico policíclico é 1H-indazolila, IH-benzoimidazoliia, quinolila, 1,2,3,4'tetrahidroquinolila, quinoxalila, 1 H-indolila, 2,3-di-hidro-1 Hbenzoimidazolila, 1 H-benzo-[d][1,2,3]triazolila, 6,7,8,9-tetra-hidro-5Hcarbazolila, 2,3,4,9-tetra-hidro-1H-pindo-[3,4-b]indolila ou benzoxazolila. O anel portador de nitrogênio do radical heterocíclico policíclico é opcionalmen20 te substituído.

Em uma outra modalidade preferida de uma composição farmacêutica da presente invenção, em que R5 e R6 são, tomados juntamente, o radical heterocíclico policíclico é 1 H-indazolila, 1 H-benzoimidazolila,

1 H-indolila ou 2,3-di-hidro-1 H-benzoimidazolila fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-di-hidro-1H-piridin-2-ona. O anel portador de nitrogênio do radical heterocíclico policíclico é opcionalmente substituído.

Em ainda uma outra modalidade preferida de uma composição farmacêutica da presente invenção, em que R5 é tomado separadamente e é pirazolila, imidazolila, oxadiazolila ou pirimidinila opcionalmente substituídas.

As composições farmacêuticas formadas por meio de combinação dos compostos desta invenção e os transportadores, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis são em seguida prontamente administrados em uma variedade de formas de dosagem tais como comprimidos, pós, 10 pastilhas em forma de losangos, xaropes, soluções injetáveis e similares. Essas composições farmacêuticas podem, se desejadas, conter ingredientes adicionais tais como aromatizantes, aglutinantes, excipientes e similares.

Desse modo, para propósitos de administração oral, comprimidos contendo vários excipientes tais como citrato de sódio, carbonato de 15 cálcio e/ou fosfato de cálcio, poderão ser empregados juntamente com vários desintegrantes tais como amido, ácido algínico e/ou certos silicatos complexos, juntamente com agentes de ligação tais como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e/ou acácia. Adicionalmente, agentes lubrificantes tais como estearato de magnésio, Iauril sulfato de sódio e talco são frequente20 mente úteis para propósitos de produção de comprimidos. Composições sólidas de um tipo similar poderão também ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina mole e dura cheias. Materiais preferidos para isso inclui Iactose ou leite em pó e polietileno glicóis de alto peso molecular. Quando suspensões aquosas ou elixires são desejados para administração oral, o 25 agente farmacêutico ativo nesse particular poderá ser combinado com vários agentes edulcorantes ou aromatizantes, matéria colorante ou corantes e, se desejado, agentes de emulsificação ou suspensão, juntamente com diluentes tais como água, etanol, propileno glicol, glicerina e/ou combinações destes.

Para administração parenteral, soluções dos compostos ou

composições desta invenção em óleo de sésamo ou amendoim, propileno glicol aquoso, ou em soluções aquosas estéreis poderão ser empregadas. Tais soluções aquosas devem ser adequadamente tamponadas, se necessárias, e o diluente líquido primeiro tornado isotônico com solução salina ou glicose suficiente. Essas soluções aquosas particulares são especialmente adequadas para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea e 5 intraperitoneal. Neste contexto, os meios aquosos estéreis empregados são todos prontamente disponíveis por meio de técnicas padrões conhecidas daqueles versados no estado da técnica.

Para administração intranasal ou administração por meio de inalação, os compostos ou composições da invenção são convenientemente transferidas na forma de uma solução ou suspensão a partir de um recipiente bomba de pulverização que é pressionado ou bombeado pelo paciente ou como uma apresentação de spray aerossol a partir de um recipiente pressurizado ou um nebulizador, com o uso de um propelente adequado, por exemplo, diclorodifluormetano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoretano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem poderá ser determinada proporcionando uma válvula para transferir uma quantidade dosada. O recipiente pressurizado ou nebulizador poderá conter uma solução ou suspensão de um composto desta invenção. Cápsulas e cartuchos (produzidos, por exemplo, de gelatina) para uso em um inalador ou insuflador poderão ser formulados contendo uma mistura de pós de um composto ou compostos da invenção e uma base de pó adequada tal como Iactose ou amido.

Métodos de preparação de várias composições farmacêuticas com uma certa quantidade de ingrediente ativo são conhecidos, ou serão 25 visíveis à Iuz desta descrição, àqueles versados neste estado da técnica. Para exemplos de métodos de preparação de composições farmacêuticas, ver Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19a. Edição (1995).

A presente invenção também se refere a métodos terapêuticos para tratamento ou prevenção de condições de excesso de peso ou obesas em um mamífero, incluindo um humano, em que um composto de Fórmula (1) desta invenção, ou um sal do composto, é administrado como parte de um regime de dosagem apropriado destinado a obter os benefícios da terapia. O regime de dosagem apropriado, a quantidade de cada dose administrada e os intervalos entre doses do composto dependerão do composto de Fórmula (1) desta invenção que é usado, do tipo de composições farmacêu5 ticas que é usado, das características do indivíduo que é tratado e da severidade das condições.

Em geral, uma dosagem eficaz dos compostos, e sais, da presente invenção situa-se na faixa de 0,001 miligrama (mg)/kg/dia a 100 mg/kg/dia, preferencialmente de 0,01 mg/kg/dia a 10 mg/kg/dia de composto 10 ativo em doses únicas ou divididas. Alguma variação na dosagem ocorrerá necessariamente, contudo, dependendo da condição do indivíduo que é tratado. O indivíduo responsável por dosagem, em qualquer evento, determinará a dose apropriada para o indivíduo isoladamente. Profissionais considerarão que "kg" refere-se ao peso do paciente medido em quilogramas. Doses 15 atualmente consideradas para uso humano variam de 10-300 mg/kg. Compostos com potência elevada e ou farmacodinâmica aperfeiçoada possuiriam exigências menores de doses, tipicamente de 0,1- 10 mg/kg.

Os compostos ou composições desta invenção poderão ser administrados em doses únicas (por exemplo, uma vez diariamente) ou múlti20 pias ou via infusão constante. Os compostos desta invenção poderão também ser administrados isolados ou em combinação com transportadores, veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, em doses únicas ou múltiplas. Transportadores, veículos e diluentes farmacêuticos adequados incluem diluentes ou cargas sólidas inertes, soluções aquosas estéreis e 25 vários solventes orgânicos.

Os compostos ou composições da presente invenção poderão ser administrados a um indivíduo com necessidade de tratamento por meio de uma variedade de vias de administração convencionais, incluindo oral e parenteralmente, (por exemplo, intravenosa, subcutânea ou intramedular30 mente). Adicionalmente, as composições farmacêuticas desta invenção poderão ser administradas intranasalmente, como um supositório, ou usando uma formulação "instantânea", isto é, permitindo que a medicação dissolva na boca sem a necessidade de utilizar água.

Exemplificacão

Os Exemplos apresentados neste relatório abaixo são para fins ilustrativos apenas. As composições, métodos, e vários parâmetros considerados neste relatório são pretendidos apenas para exemplificar vários aspectos e modalidades da invenção, e não são pretendidos limitar o escopo da invenção reivindicada de modo algum.

A não ser que observados de outra maneira, todos os reagents foram obtidos comercialmente.

Cromatografia instantânea foi realizada de acordo com o método

descrito por Still e outros, J. Org. Chem., 1978, 43, 2923.

Todas as purificações Biotage®, discutidas neste relatório, foram realizadas usando uma coluna 40M ou 40S Biotage® contendo sílica KP-SIL (40-63 uM, 60 Ângstrõns) (Bioatge AB\ Uppsala, Suécia).

Todas as purificações Combiflash®, discutidas neste relatório,

foram realizadas usando um sistema CombiFlash® Companion (Teledyne Isco-, Lincoln, Nebraska) utilizando colunas de sílica recheadas RediSep®.

Espectros de massa foram registrados em um espectrômetro Waters (Waters Corp.] Milford, MA) Micromass Platform II. A não ser que de outra maneira especificado, espectros de massa foram registrados em um espectrômetro Waters (Milford, MA) Micromass Platform II.

Deslocamentos químicos de RMN de prótons são dados em partes por milhão em relação ao baixo campo de tetrametilsilano e foram registrados em espectrômetro Varian Unity 400 MHz (megaHertz) (Varian Inc.; 25 Palo Alto, CA). Deslocamentos químicos de RMN são dados em partes por milhão em relação ao baixo campo de tetrametilsilano (para prótons) ou fluortriclorometano (para flúor).

As seguintes preparações foram usadas na síntese de compostos da presente invenção que são adicionalmente exemplificados nos exempios seguintes.

Cetonas Espirocíclicas

Cetonas espirocíclicas que foram usadas para preparar compostos da presente invenção exemplificados, foram preparadas usando o método de uma das seguintes Preparações de Cetona Espirocíclica de 1-25. Preparação de Cetona Espirocíclica 1 7-Metoxiespirorcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona A uma solução de 1-(2-hidróxi-4-metoxifenil)etanona (Acros Or

ganics USA, Morris Piains, NJ) (83 miligramas ("mg"), 0,5 milimol ("mmol") em metanol (1 mililitro ("ml_")) foi adicionado 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (111 mg, 0,56 mmol) e pirrolidina (42,5 microlitros ("μΐ_"), 0,51 mmol). A mistura foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi 10 esfriada a temperatura ambiente, concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage (acetona/heptano a 8%) para proporcionar N-Boc-7- metoxiespiro-[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como um sólido amarelo (89 mg, 51%), 248 (M-Boc, ES+).

A uma solução de N-Boc-7-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]15 4(3H)-ona (58 mg, 0,17 mmol) em metanol (1 ml_) foi adicionado HCI 4 N em dioxano (0,40 ml_). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi concentrada para proporcionar cloridrato 7- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona que foi usado sem purificação adicional (45 mg, 95%), 248 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 2

6-Metoxiespirofcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

A uma solução de 1-(2-hidróxi-5-metoxifenil)etanona (831 mg, 5,0 mmols) em tolueno (5 ml_) foi adicionado 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (1,20 gramas ("g"), 6,0 mmols) e pirrolidina (356 mg, 5,0 25 mmols). A mistura foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage (acetona/heptano a 8%) para proporcionar N-Boc-6- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como um sólido amarelo (1,27 g, 70%).

1H de RMN (CDCI3) 57,27 (d, J=3, 1H), 7,10 (dd, J=9, 3, 1H), 6,91 (d, J=9, 1H), 3,84 (m, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,18 (t, J=12, 2 H), 2,68 (br s, 2H), 2,01 (d, J=13, 2H), 1,57 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). A uma solução de N-Boc-6-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]4(3H)-ona (42 mg, 0,12 mmol) em metanol (1 ml_) foi adicionado HCI 4 N em dioxano (0,30 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 90 minutos. A mistura foi concentrada para proporcionar 6-cloro-7- 5 metile?piro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona que foi usada sem purificação adicional (34 mg, 100%).

Preparação de Cetona Espirocíclica 3 e-Cloro-y-metilespirorcromeno^^-piperidinMOHVona

A uma solução de 1-(5-cloro-2-hidróxi-4-metilfenil)etanona (371 10 mg, 2,0 mmols) em benzeno (2 mL) foi adicionado 4-oxopiperidino-1- carboxilato de terc-butila. A mistura foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage (acetona/heptano a 10%) para proporcionar N-Boc-6-cloro-7-metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como um 15 sólido amarelo (670 mg, 91%). N-Boc-6-Cloro-7-metilespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona, 91%, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,79 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 2,66 (s, 2H), 2,42 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,98 (m, 2H), 1,58 (m, 2H), 1,44(s, 9H).

A uma solução de N-Boc-6-cloro-7-metilespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona (60 mg, 0,16 mmol) em MeOH (1 mL) foi adicionado HCI

4 N em dioxano (0,40 mL). A mistura foi agitada sob tempertura ambiente por 4 horas. A mistura foi concentrada para proporcionar cloridrato 6-cloro-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona que foi usado sem purificação adicional (50 mg, 100%), 266 (ES+)

Preparação de Cetona Espirocíclica 4

5.6,7-Trimetoxiespirorcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

A uma solução de 1-(6-hidróxi-2,3,4-trimetoxifenil)etanona (452 mg, 2,0 mmols) em benzeno (2 mL) foi adicionado 4-oxopiperidino-1- carboxilato de terc-butila (438 mg, 2,2 mmols) e pirrolidina (0,2 mL, 2 30 mmols). A mistura foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage (acetona/heptano a 15%) para proporcionar N-Boc-5,6,7- trimetoxiespiro-[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como um sólido amareloacastanhado (203 mg, 33%), 308 (ES+).

A uma solução de N-Boc-5,6,7-trimetoxiespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona (60 mg, 0,15 mmol) em metanol (1 mL) foi adicionado 5 HCI 4 N em dioxano (0,40 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 4 horas. A mistura foi concentratada para proporcionar cloridrato 5,6,7-trimetoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona que foi usado sem purificação adicional (53 mg, 100%), 308 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 5 6-Cloro-5-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

A uma solução de 2-hídróxi-6-metoxiacetofenona (500 mg, 3,0 mmols) em éter dietílico (4,5 mL) sob

O0C foi adicionado cloreto de sulfurila (0,27 mL, 3,4 mmols) gota a gota. A mistura resultante foi aquecida sob refluxo por 4 horas antes de esfriamento 15 a temperatura ambiente. A solução de éter dietílico foi lavada duas vezes com água, a fase orgânica foi separada e concentrada. O material foi purificado por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 S, acetona/heptano a 6%) para proporcionar 1-(3-cloro-6-hidróxi-2-metoxifenil)etanona como um líquido amarelo (563 mg, 93%). ES- m/z 199 (M-, 100%), 1H de RMN (CDCb) 20 δ 12,68 (s, 1H), 7,41 (d, J=9,2, 1H), 6,72 (d, J=9,2, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,74 (s, 3H).

A uma solução de 1-(3-cloro-6-hidróxi-2-metoxifenil)etanona (563 mg, 2,8 mmols) em metanol

(3 mL) foi adicionado 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (623 mg, 25 3,13 mmols) e pirrolidina (0,24 mL, 2,9 mmols). A mistura foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage (acetona/heptano a 7 - 10%) para proporcionar N-Boc-6-cloro-5- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como um sólido vermelho 30 (670 mg, 63%), 1H de RMN (CDCI3) δ 7,45 (d, J=9, 1H), 6,74 (d, J=9, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,18 (m, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,43 (t, J=5, 1H), 1,97 (br d, J=13, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,44 (s, 9H). A uma solução de N-Boc-6-cloro-5-metoxiespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona (64 mg, 0,17 mmol) em MeOH (1 mL) foi adicionado HCI 4 N em dioxano (0,40 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi concentrada para produzir 6-cloro-5- 5 metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-c na que foi usada sem purificação adicional (56 mg, 100%), 282 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 6

Cloridrato 4-oxo-3.4-di-hidroespiro[cromeno-2.4'-piperidin1-6-carboxilato de metila

(Etapa 1) A uma solução 1-(5-bromo-2-hidroxifenil)etanona (2,0

g, 9,3 mmols) em metanol (20 mL) foi adicionado pirrolidina (0,8 mL, 9,6 mmols) e 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (1,91 g, 9,6 mmols). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura reacional foi concentrada e purificada por meio de cromatografia Biotage 15 (coluna 40M, 8% - 20% de gradiente acetato de etila/heptano) para proporcionar 6-bromo-4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espirotcromeno^^-piperidinoJ-l 'carboxilato de terc-butila como um sólido amarelo (3,09 g, 84%). 1H de RMN (CDCI3) δ 7,96 (d, J=2,5, 1H), 7,56 (dd, J=8,7, 2,5, 1H), 6,89 (d, J=8,7, 1H), 2,70 (s, 2H), 1,44 (s, 9H).

(Etapa 2) A uma solução de 6-bromo-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H

espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1’-carboxilato de terc-butila (0,8 g, 2 mmols) em metanol (60 mL) foi adicionado trictilamina (0,32 mL) e diclorobis(trifenilfosfino)paládio Il (144 mg, 0,21 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C sob 0,35 MPa (50 psi) de monóxido de carbono por 2 dias. A mistura 25 foi esfriada a temperatura ambiente, filtrada por meio de terra diatomácea e purificada através de cromatografia Biotage (coluna 40 S, EtoAc/heptano a 15%) para produzir 4-oxo-3,4-di-hidrocspiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6- carboxilato de N-Boc metila como um sólido amarelo (677 mg, 90%). 1H de RMN (CDCI3) δ 8,55 (d, J=2,1, 1H), 8,16 (dd, J=8,8, 2,1, 1H), 7,04 (d, J=8,7, 30 1H), 3,90 (s, 3H), 2,76 (s, 2H), 1,46 (s, 9H).

(Etapa 3) A uma solução de 4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno2,4'-piperidino]-6-carboxilato de N-Boc metila (225 mg, 0,60 mmol) em metanol (4 mL) foi adicionado HCI 4 N em dioxano (1,5 ml). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 3 horas, concentrada para produzir o composto do título como um sólido amarelo (195 mg, 100%). EM (ACPI) m/z 276 (M+H)+, Tempo de Retenção de HPLC ("TR") 1,0 minutos.

5 Preparação de Cetona Espirocíclica 7

Ácido_V-fterc-butoxicarbonilM-oxo-S^-di-hidroespirofcromeno^^'

piperidinol-6-carboxílico

A uma solução de 4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'piperidino]-6-carboxilato de N-Boc metila, a partir de Preparação de Espiro10 cetona 6, (375 mg, 1,0 mmol) em metanol/água (razão 1:1, 5 mL) foi adicionado hidróxido de lítio (49 mg). A mistura foi aquecida a 50°C por 2 horas antes de resfriamento a temperatura ambiente. A mistura foi concentrada, diluída com água e acidificada com KHSO4 a pH 3. O precipitado que se formou foi extraído com EtOAc, secado sobre Na2SO4, filtrado e concentrado 15 para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo (260 mg, 72%). EM (ACPI) m/z 360 (M-H)', TR de HPLC 2,4 minutos. 1H de RMN (CDCI3) δ 8,63 (2,0, 1H), 8,20 (dd, J=8,7, 2,5, 1H), 6,69 (d, J=8,8, 1H), 2,76 (s,2H), 1,45 (s, 9H).

Preparação de Cetona Espirocíclica 8 6-(Pirrolidin-1-ilcarboniDespiroícromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

(Etapa 1) A uma solução de 1'-(terc-butoxicarbonil)-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato (54 mg, 0,15 mmol) em CH2CI2 (1 mL) foi adicionada pirrolidina (17 mg, 20 jL, 0,24 mmol), hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N''tetrametilurônio (HATU) (60 25 mg, 0,16 mmol) e trietilamina (50 CL, 0,36 mmol). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura foi em seguida concentrada e o material bruto foi dissolvido em EtOAc, lavado com água e o extrato orgânico foi concentrado para produzir o composto do título como uma goma pegajosa que foi usada como é sem purificação adicional (79 mg). EM 30 (ACPI) m/z 415 (M+H)+, TRde HPLC 2,3 minutos.

(Etapa 2) A uma solução de 4-oxo-6-(pirrolidin-1-ilcarbonil)-3,4- di-hidro-1'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1-carboxilato de terc-butila (62 mg, 0,15 mmol) em metanol (0,5 mL) foi ódicionado HCI 4 N em dioxano (0,15 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 2 horas e trietilamina (80 GL) foi adicionada para neutralizar o ácido e a mistura foi concentrada para proporcionar o produto bruto que foi usado sem purificação adicional. EM (ACPI) m/z 315 (M+H)+, TR de HPLC 0,3 minutos.

Preparação de Cetona Espirocíclica 9

N-lsopropil-4-oxo-3.4-di-hidroespiroícromeno-2.4'-piperidino1-6-carboxilato

Seguindo o procedimento descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8, substituindo isopropilamina, forneceu 6- [(isopropilamino)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidro-1 ’H-espiro[cromeno-2,4'

piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila como uma goma que foi usada sem purificação adicional (89 mg). EM (ACPI) m/z 403 (M+H)\ TR de HPLC 2,5 minutos.

O composto do título foi preparado a partir de 6- [(isopropilamino)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidro-1 ’H-espiro[cromeno-2,4'

piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8 (etapa 2). EM (ACPI) m/z 303 (M+H)+, TR de HPLC 0,6 minutos.

Preparação de Cetona Espirocíclica 10 N,N-dimetil-4-oxo-3,4-di-hidroespiroícromeno-2.4'-piperidinol-6-carboxilato cloridrato

Seguindo o procedimento descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8, substituindo dimetilamina, proporcionou 6- [(dimetilamino)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'25 piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila como um sólido amarelo que foi usado sem purificação adicional (58 mg). EM (ACPI) m/z 389 (M+H)+, TR de HPLC 2,2 minutos.

O composto do título foi preparado a partir de 6- [(dimetilamino)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'piperidino]-1’-carboxilato de terc-butila conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8 (etapa 2), exceto que nenhuma trietilamina foi adicionada. EM (ACPI) m/z 289 (M+H)+, TR de HPLC 0,2 minutos. Preparação de Cetona Espirocíclica 11

6-(Morfolin-4-ilcarbonil)espiroícromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

Seguindo o procedimento descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8, substituindo morfolina, proporcionou 6-(morfolin-4-ilcarbonil)-4- oxo-3,4-di-hidro-1'l-l-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de tercbutila como um sólido amarelo que foi usado sem purificação adicional (56 mg). EM (ACPI) m/z 431 (M+H)\ TR de HPLC 2,3 minutos.

O composto do título foi preparado a partir de 6-(morfolin-4- ilcarbonil^-oxo-S^-di-hidro-VH-espirolcromeno^^-piperidinoj-l'carboxilato de terc-butila conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8 (etapa 2), exceto que nenhuma trietilamina foi adicionada. EM (ACPI) m/z 331 (M+H)+, TR de HPLC 0,3 minutos.

Preparação de Cetona Espirocíclica 12

N-Metil-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino1-6-carboxilamida Seguindo o procedimento descrito na Preparação de Cetona Es

pirocíclica 8, substituindo metilamina, proporcionou 6-[(metilamino)carbonil]

4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1 '-carboxilato de tercbutila como um sólido amarelo que foi usado sem purificação adicional (52 mg). EM (ACPI) m/z 375 (M+H)\ TR de HPLC 1,8 minutos.

O composto do título foi preparado a partir de 6-

[(metilamino)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]1'-carboxilato de terc-butila conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8 (etapa 2). EM (ACPI) m/z 275 (M+H)+, TR de HPLC 0,3 minutos. Preparação de Cetona Espirocíclica 13 4-Oxo-3,4-di-hidroespirofcrorneno-2.4'-piperidino1-6-carboxilamida

Um frasco foi carregado com 4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno2,4'-piperidino]-6-carboxilato de N-Boc metila (56 mg, 0,15 mmol), preparado conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 6 (etapa 2), e hidróxido de amônio (1 mL). A mistura foi aquecida a 65°C da noite para o dia. 30 A mistura reacional foi esfriada até temperatura ambiente e concentrada para produzir 6-(aminocarbonil)-4-oxo-3,4-di-hidro-1 ’H-espiro[cromeno-2,4'piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (56 mg, 100%). EM (ACPI) m/z 361 (Μ+Η)+.

O composto do título foi preparado a partir de 6-(aminocarbonil)

4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1 '-carboxilato de tercbutila conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 8.

EM (ACPI) m/z 261 (M+H)+, TR de HPLC 1,1 minutos.

Preparação de Cetona Espirocíclica 14

Cloridrato 6-lsopropoxiespirorcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

Uma solução de 1-(2,5-di-hidroxifenil)etanona (3,82 g, 25,1 mmols), 4-oxopiperidino-1 -carboxilato de terc-butila (5,0 g, 25,1 mmols) e 10 pirrolidina (2,1 mL, 25,1 mmols) em metanol (100 mL). A mistura foi aquecida a 60°C por 2 dias antes de concentração e purificação por meio de cromatografia Biotage para proporcionar 6-hidróxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1 '-carboxilato de terc-butila como um sólido amarelo (7,80 g, 93%).

Uma mistura de 6-hidróxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno

2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (1,00 g, 3,00 mmols), acetona (5,0 mL), iodeto de isopropila (3,06 g, 1,80 mL, 18 mmols), e K2CO3 (1,24 g,

9,0 mmols) foi aquecida em um tubo selado a 70°C da noite para o dia. Os sólidos foram removidos por meio de filtração a vácuo e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia Biotage para proporcionar 6-isopropóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno-2,4'piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (890 mg, 79%).

Uma mistura de 6-isopropóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (890 mg, 2,37 25 mmols), metanol (5,0 mL), e HCI concentrado foi agitado sob temperatura ambiente da noite para o dia para proporcionar cloridrato 6- isopropoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (750 mg, 100%). Preparação de Cetona Espirocíclica 15 Cloridrato 6-Etoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidinl-4(3H)-ona 30 Uma mistura de 6-hidróxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno

2,4'-piperídíno]-1'-carboxilato de terc-butila (1,00 g, 3,00 mmols), preparada conforme descrita na Preparação de Cetona Espirocíclica 14, acetona (5,0 mL), iodoetano (2,81 g, 1,45 mL, 18 mmols), e K2CO3 (1,24 g, 9,0 mmols) foi aquecida em um tubo selado sob 70°C da noite para o dia. Os sólidos foram removidos por meio de filtração a vácuo e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia Biotage para proporcionar 6- 5 etoxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (1,00 g, 92%).

Uma mistura de 6-etoxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (1,00 g, 2,77 mmols), metanol (5,0 mL), e HCI concentrado foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia para proporcionar cloridrato 6-etoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]4(3H)-ona (830 mg, 100%).

Preparação de Cetona Espirocíclica 16

Cloridrato 5-cloro-7-metoxiespirorcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

A 3-cloro-5-metoxifenol (4,00 g, 25,2 mmols) foi adicionado clo15 reto de acetila (9,0 mL, 5,0 mmols) e a mistura foi aquecida a 60°C da noite para o dia. O cloreto de acetila foi removido sob pressão reduzida e AICI3 (1,96 g, 14,7 mmols) foi adicionado, e a mistura foi aquecida a 180°C por 1 hora. A mistura reacional foi esfriada a temperatura ambiente. A esta mistura foi lentamente adicionado HCI a 38%/água (30 mL/100 mL) e agitado vigoro20 samente por 4 horas. A mistura foi filtrada para obter uma mistura de 1-(2- cloro-6-hidróxi-4-metoxifenil)etanona e 1-(4-cloro-2-hidróxi-6-

metoxifenil)etanona (5,38 g).

A uma mistura de 1-(2-cloro-6-hidróxi-4-metoxifenil)etanona e 1- (4-cloro-2-hidróxi-6-metoxifenil)etanona (5,38 g, 26,8 mmols), 4- 25 oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (5,34 g, 26,8 mmols), metanol (100 mL), pirrolidina (1,9 g, 2,2 mL, 27 mmols). A mistura foi aquecida a 60°C da noite para o dia. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e purificados por meio de CombiFlash® [cromatografia de sílica] para obter 7- cloro-5-metóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1,H-espiro[cromeno-2>4'-piperidino]-1'30 carboxilato de terc-butila (2,32 g) e 5-cloro-7-metóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (1,40 g).

Uma mistura de 5-cloro-7-metóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (500 mg, 1,31 mmol) em metanol (5,0 mL) e HCI concentrado (6,6 mL) foi agitado sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura reacional foi concentrada para obter o produto do título (425 mg, 100%).

Preparação de Cetona Espirocíclica 17

7-Cloro-5-metoxiespirofcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

Uma solução de 7-cloro-5-metóxi-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (preparado conforme descrito na Preparação de Cetona Espirocíclica 16) (500 mg, 1,31 10 mmol) em metanol (5,0 mL) contendo HCI concentrado (6,6 mL) foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura reacional foi concentrada para proporcionar o composto do título (420 mg, 100%).

Preparação de Cetona Espirocíclica 18

Cloridrato 7-Metóxi-5-metilespirorcromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona A uma solução de 1-(2-hidróxi-4-metóxi-6-metilfenil)etanona

(0,81 g, 4,5 mmols) em metanol (15 mL) foi adicionada pirrolidina (0,38 mL,

4,5 mmols) e 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (896 mg, 4,5 mmols). A mistura foi agitada a 60°C da noite para o dia. Os solventes foram removidos e o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash® [cromatografia de sílica] para obter 7-metóxi-5-metil-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (960 mg, 59%).

A uma mistura de 7-metóxi-5-metil-4-oxo-3,4-di-hidro-1'Hespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (960 mg, 2,66 mmols) em metanol (5,0 mL) foi adicionado HCI 2 M (13,3 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia e em seguida concentrada para obter o produto do título (780 mg, 99%).

Preparação de Cetona Espirocíclica 19 Espirorcromeno-2.4'-piperidin1-4(3H)-ona

Uma solução de 1-(2-hidroxifenil)etanona (100 g, 0,74 mol), 4- oxopiperidino-1 -carboxilato de terc-butila (146 g, 0,74 mol) e pirrolidina (61 mL, 0,74 mol) em metanol (600 mL) foi agitada por 24 horas e evaporada. O resíduo foi submetido a cromatografia (hexano/acetato de etila 100:0—» 90:10) sobre sílica-gel para proporcionar N-Boc-Espiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 97% (225 g), 218 (M-Boc; ES+).

Ácido trifluoroacético puro (80 mL) foi adicionado a uma solução de [N-Boc-Espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona ou 4-Oxo-3,4-di-hidro5 1'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila] (40 g, 0,126 mol) em diclorometano (250 mL). A solução foi em seguida agitada da noite para o dia e em seguida evaporada. Água (aproximadamente 300 mL) foi adicionada ao resíduo, e a solução obtida tornou-se alcalina com NaOH 10 N a pH de aproximadamente 14. O produto foi em seguida extraído com clo10 rofórmio. O extrato foi secado sobre Na2SO4 e evaporado para fornecer espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 93,7% (25,6 g), 218 (ES+)

Preparação de Cetona Espirocíclica 20

Cloridrato 7-fluorespirofcromeno-2.4'-piperidinl-4(3H)-ona hidratado Uma solução de 1-(4-flúor-2-hidroxifenil)etanona (200 g, 1,3

mol), 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (258 g, 1,3 mol) e pirrolidina (108 mL, 1,3 mol) em metanol (800 mL) foi agitada por 24 horas e em seguida evaporada. Em seguida, o resíduo foi dissolvido em acetato de etila, lavado com água, HCI 0,5 N, solução de NaHCO3 e NaCI saturado aquoso e 20 passado por meio de uma camada delgada de SiO2 e Na2SO4. O filtrado foi evaporado, e o resíduo foi lavado com mistura de hexano/acetato de etila (9:1) e submetido a cromatografia (hexano/acetato de etila 90:10-» 80:20) para proporcionar N-Boc-7-Fluorespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 33% (144 g), 236 (M-Boc; ES+).

HCI (90 mL) foi adicionado a uma solução de N-Boc-7-

fluorespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona] (44,2 g, 0,132 mol) em isopropanol (150 mL), e a mistura obtida foi submetida a refluxo por 3 horas. Após isso, a mistura foi evaporada, e o resíduo foi coevaporado duas vezes com isopropanol, lavado com éter e secado para fornecer cloridrato 7- 30 fluorespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona hidratado em rendimento de 99% (35,8 g), 236 (API+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 21 6-Metilespiro[cromeno-2.4'-piperidin1-4(3H)-ona

Uma solução de 1-(2-hidróxi-5-metilfenil)etanona (100 g, 0,67 mol), 4-oxopiperidino-1 -carboxilato de terc-butila (133 g, 0,67 mol) e pirrolidina (55,8 mL, 0,67 mol) em metanol (600 mL) foi agitada por 24 horas e filtra5 da. Os cristais separados foram lavados com mistura de hexano/acetato de etila (9:1), em seguida submetidos a refluxo com hexano (150 mL) e separados por meio de filtração novamente. Os cristais foram finalmente secados para fornecer 6-metil-4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]1'-carboxilato de terc-butila em rendimento de 89% (195,5 g). 1H de RMN 10 (DMSO-de) δ 7,48 (s, 1H), 7,36 (dd, J=3, 8, 1H), 6,94 (d, J=8, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 2,76 (s, 2H), 2,23 (s, 3H), 1,82 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,36 (s, 9H).

Ácido trifluoroacético puro (80 mL) foi adicionado a uma solução de 6-metil-4-oxo-3,4-di-hidro-1 'H-espiro[cromeno-2,4'-piperidino]-1 '

carboxilato de terc-butila (40 g, 0,12 mol) em diclorometano (300 mL). A solução obtida foi agitada da noite para o dia e em seguida evaporada. Água (200 mL) e clorofórmio (200 mL) foram em seguida adicionados ao resíduo, e a solução obtida tornou-se alcalina com NaOH 19 N em torno de pH 12. O produto foi em seguida extraído com clorofórmio. O extrato foi passado por 20 meio de uma camada de SiO2 e Na2SO4 e evaporado para fornecer 6- metÍlespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 96% (26,7 g), 232 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 22 6,7-Dimetilespiro|cromeno-2.4'-piperidin1-4(3H)-ona 1-(2-Hidróxi-4,5-dimetilfenil)etanona (150 g, 0,914 mol) e pirroli

dina (76,3 mL, 0,914 mol) em metanol (1 L) foram agitadas por 15 minutos. Em seguida, 4-oxopiperidino-1 -carboxilato de terc-butila (182,2 g, 0,914 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada por 24 horas. O precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com hexano e secado para fornecer 30 245 g de 6,7-dimetil-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno-2,4’-piperidino]1'-carboxilato de terc-butila puro. Os filtrados combinados foram evaporados, e o resíduo foi cristalizado a partir de algum hexano para fornecer uma porção adicional (21 g) de produto. O rendimento total foi de 77,1% (266 g). 1H de RMN (CDCI3) δ 7,58 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 3,84 (br d, J=13, 2H), 3,18 (m, 2 H), 2,64 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 1,99 (br d, J=12, 2H), 1,59 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 344 (API-).

Ácido trifluoroacético puro (80 mL) foi adicionado sob resfria

mento com água fria a 6,7-dimetil-4-oxo-3,4-di-hidro-1'H-espiro[cromeno2,4'-piperidino]-1'-carboxilato de terc-butila (50 g, 0,145 mol) em diclorometano (300 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia e em seguida os voláteis foram evaporados. O resíduo foi dissolvido 10 em água e a camada aquosa lavada duas vezes com éter, em seguida tornada alcalina com NaOH em torno de pH 14. O produto foi extraído com CHCI3, secado (Na2SO4), e concentrado para proporcionar o produto (27,9 g; 78,6%). 1H de RMN (DMSO-d6) δ 7,49 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 3,34 (br s, 6 H), 3,95 (br d, J=12, 1H), 3,82 (t, J=12, 1H), 2,82 (s, 1H), 2,24 (s, 2H), 2,18 (s, 15 2H), 2,59 (d, J=15, 1H), 2,34 (t, J=11, 1 H). CL/EM API+246 (MH+). Preparação de Cetona Espirocíclica 23 6-CloroespiroFcromeno-2.4'-piperidinl-4(3H)-ona

Uma solução de 1-(5-cloro-2-hidroxifenil)etanona (ASDI Inc., Newark, DE) (103,9 g, 0,609 mol), 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc20 butila (2; 121,2 g, 0,609 mol) e pirrolidina (50,8 mL, 0,609 mol) em metanol (500 n ,L) foi agitada por 24 horas, e em seguida os cristais precipitados foram separados por meio de filtração e lavados com mistura de hexano/aceiato de etila (9:1). Em seguida, hexano (150 mL) foi adicionado, e a misture obtida foi submetida a refluxo e em seguida filtrada. Os cristais sepa25 rados foram secados para fornecer N-Boc-6-cloroespiro-[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 72% (153 g).

Ácido trifluoroacético puro (80 mL) foi adicionado a uma solução de N-Poc-6-cloroespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (50 g, 0,14 mol) em diclorometano (300 mL). A mistura foi agitada por 24 horas e em seguida CO evapo:ada. Água (200 mL) e clorofórmio (200 mL) foram adicionados ao resíduo, e a mistura obtida tornou-se alcalina com NaOH 19 N em torno de pH 12. O produto foi extraído com clorofórmio. O extrato foi passado por meio de uma camada delgada de SiO2 e Na2SO4 para fornecer 6- cloroespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 88% (30,8 g), 252/254 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 24 5-Metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin1-4(3H)-ona

1-(2-Hidróxi-6-metoxifenil)etanona (40,5 g, 0,244 mol) e pirrolidina (20,3 mL, 0,244 mol) em metanol (250 mL) foram agitadas por 15 minutos, e em seguida 4-oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (48,6 g, 0,244 mol) foi adicionado. A mistura foi agitada por 24 horas adicio10 nais e filtrada. O precipitado separado foi lavado com hexano e secado para fornecer N-Boc-5-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 83,5% (70,7 g), 248 (M-Boc; ES+)

Ácido trifluoroacético puro (80 mL) foi adicionado a N-Boc-5- metoxiespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona (50 g, 0,144 mol) em diclo15 rometano (200 mL), e a mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia e em seguida evaporada. O resíduo foi diluído com água (500 mL) e tornado alcalino com NaOH 10 N a pH 14. O produto foi extraído com clorofórmio, e o extrato foi secado sobre Na2SO4 e evaporado. O resíduo foi submetido a cromatografia (clorofórmio/metanol/trietilamina 100:0:0—> 20 91:9h> 0:86:14) sobre sílica-gel para fornecer 5-metoxiespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona em rendimento de 84,7% (30 g), 248 (ES+).

Preparação de Cetona Espirocíclica 25

A uma mistura de um orto-hidroxiacetofenona ou 2- hidroxibenzamida e pirrolidina (0,75 a 1 equivalente) em um solvente ade25 quado, tais como metanol, benzeno ou tolueno, foi adicionado 4- oxopiperidino-1-carboxilato de terc-butila (1 equivalente) e a mistura agitada 18-48 horas sob uma temperatura entre temperatura ambiente e de refluxo. Produto foi isolado por meio de filtração, opcionalmente purificado via cromatografia de sílica após um processamento aquoso.

Sob temperatura ambiente, uma solução de N-Boc

espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em um solvente adequado, tais como diclorometano, dioxano ou metanol, foi tratada com um ácido adequado, tal como ácido trifluoroacético ou HCI 4 N em dioxano, até a reação ser completa. Os voláteis foram evaporados para proporcionar o sal do produto desejado. O produto prosseguiu como a forma salina ou, quando a base livre foi preparada, fez-se isso dissolvendo o resíduo em água lavando a camada 5 cquosa com éter, tornando a fase aquosa básica com NaOH a pH aproximadamente 14. O produto foi extraído com CHCI3, secado (Na2SO4), e concentrado para proporcionara base livre do produto desejado.

Usando esse método, cetonas espirocíclicas foram preparadas a partir das seguintes orto-hidroxiacetofenons comercialmente disponíveis: 2'hidróxi-4'-metilacetofenona (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 1-(4-cloro-2- hidróxi-fenil)etanona (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japão), 1-(3-hidróxi-bifenil-4-il)etanona (Bradsher, C. K.; e outros, J. Am. Chem. Soc. 1954, 76, 2357-2362), 1-(2-hidróxi-3,5-dimetil-fenil)etanona (Oakwood Products, Inc., West Columbia, SC), 1-(2-hídróxi-5-trifluormetóxi-fenil)etanona (Apollo Scientific Ltd., Cheshire, UK), 3-acetil-4-hidróxi-benzonitrila (Ramidus AB, Lund, Suécia), 4',5'-dimetóxi-2'-hidroxiacetofenona (Indofine Chemical Company, Inc., Hillsborough, NJ), 1-(3,5-dicloro-2-hidroxifenil)etanona (ASDI Inc., Newark, DE), ácido 3-acetil-4-hidroxibenzoico (Princeton BioMoIecuIar Research Inc., Monmouth Junction, NJ), 1-(2-hidróxi-5- (metilsulfonil)fenil)etanona (CiventiChem, Research Triangle Park, NC), e 1- (2-hidróxi-5-isopropilfenil)etanona (AstaTech, Inc., Bristol, PA).

Além disso, as seguintes orto-hidroxiacetofenonas que foram preparadas conforme descritas abaixo, foram usadas para preparar cetonas espirocíclicas, usando o método de Preparação de Cetona Espirocíclica 25: 25 4'-cloro-2'-hidróxi-5'-metilacetofenona, 4'-cloro-2'-hidroxiacetofenona, 4',5'dicloro-2'-hidroxiacetofenona, 4-acetil-3-hidróxi-benzonitrila, 1-(2-hidróxi-5- trifluormetil-fenil)etanona, 1 -(5-cloro-4-flúor-2-hidroxifenil)etanona, 1 -(4-cloro5-flúor-2-hidroxifenil)etanona, 1-(5-bromo-2-hidróxi-4-metilfenil)etanona, 1- (2,4-dicloro-6-hidroxifenil)etanona, 1 -(3-cloro-6-hidróxi-2,4-

dimetilfenil)etanona, e 1-(2-flúor-6-hidróxi-3-metoxifenil)etanona. Orto-Hidroxiacetofenonas

Orto-hidroxiacetofenonas, que foram usadas para preparar compostos da presente invenção exemplificados, foram preparadas usando o método de uma das seguintes Preparações de Hidroxiacetofenonas 1-6. Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 1 1-(4-cloro-2-hidróxi-5-metilfenil)etanona A 3-cloro-4-metilfenol (1,97 g, 13,8 mmols) foi adicionado cloreto

de acetila (1,15 g, 1,04 mL, 14,6 mmols) e a mistura resultante foi aquecida a 60°C por 2 horas. A esta foi adicionado AICb (1,84 g, 13,8 mmols) e a mistura foi aquecida a 180°C por 30 minutos. A mistura reacional foi em seguida esfriada a temperatura ambiente e lentamente suprimida com HCI a 10 38%/água (8 mL/17 mL) e agitada por 30 minutos. Os sólidos foram removidos por meio de filtração, com água, concentrada e secado para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo (1,97 g, 77%). 1H de RMN (CDCI3) δ 11,21 (s, 1 H), 7,54 (s, 1 H), 7,00 (s, 1 H), 2,59 (s, 3 H), 2,32 (s, 3 H).

Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 2 1-(2-Hidróxi-5-trifluormetil-fenil)etanona

Uma mistura de 4-trifluormetil-2-bromofenol (1,00 g, 4,15 mmols), tolueno (20 mL), (l-etoxivinil)tributilestanano (1,65 g, 4,56 mmols) e dicloro-bis (trifenilfosfino)paládio (146 mg, 0,207 mmol) foi aquecida a 100°C 20 da noite para o dia antes de resfriamento a temperatura ambiente. A essa mistura foi adicionado HCI 1 N (6 mL) e a mistura foi em seguida vigorosamente agitada por aproximadamente 90 minutos. A fase orgânica foi lavada com água (30 mL), NaCI saturado aquoso, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada para obter um óleo negro. O produto foi purificado por meio de 25 cromatografia Biotage (gradiente EtOAc/heptano) para obter o composto do título como um ólec amarelo-pálido (335 mg, 39,5%).

Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 3 1-(2-hidróxi-6-metóxi-4-metilfenil)etanona

A uma solução de 5-metil-cicloexano-1,3-diona (1,01 g, 8,0 mmols) em CH2CI2 (15 mL) foi adicionada trietilamina (1,2 mL, 8,6 mmols) seguido pot cloreto de acetila (0,6 mL, 8,4 mmols). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 3 horas antes de lavagem com água (2x). A fase aquosa foi outra vez extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram concentrados e purificados por meio de cromatografia Biotage (coluna 40S, acetona/heptano a 15%) para proporcionar acetato de 5-metil-3- oxocicloex-1-enila (1,2 g, 89%).

5 Uma mistura de acetato de 5-metil-3-oxocicloex-1-enila (1,2 g,

7,1 mmols), CH3CN (15 mL), trietilamina (2,1 mL) e cianeto de sódio (7 mg, 0,1 mmol) foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura foi concentrada, redissolvida em EtOAc e acidificada com HCI 1 N. A fase orgânica foi isolada, concentrada e purificada por meio de cromatografia Bio10 tage (coluna 40S, acetona/heptano a 8%) para proporcionar 2-acetil-5- metilcicloexano-1,3-diona (0,96 g, 96%).

Uma solução de 2-acetil-5-metilcicloexano-1,3-diona (0,96 g, 5,7 mmols) em metanol (28 mL) contendo iodo (2,90 g, 11,4 mmols) foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A mistura foi esfriada a temperatura ambien15 te e concentrada. O material foi dissolvido em CH2CI2 e lavado com Na2S2O3 aquoso e a fase aquosa foi outra vez extraída com CH2CI2 (2x). Os extratos orgânicos combinados foram concentrados e purificados por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 M, acetona/heptano a 10%) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo-pálido (550 mg, 53%).

Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 4 1-(2-flúor-C-hidróxi-3-metoxifenil)etanona

A uma solução a -78°C de 1,4-dimetóxi-2-fluorbenzeno (1,56 g, 10 mmols) em THF (15 mL) foi adicionado n-BuLi (5,0 mL de solução de hexanos 2,5 M, 12 mmols). A mistura foi agitada por 30 minutos antes de adi25 ção lenta de acetaldeído (0,79 mL, 14 mmols). A mistura reacional foi agitada por 30 minutos adicionais antes da reação ser suprimida por adição de metanol e NH4CI saturado aquoso. A mistura reacional foi aquecida a temperatura amtiente e extraída com EtOAc. O extrato orgânico foi concentrado e purificado por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 S, acetona/heptano 30 a 15%) para proporcionar 1-(2-flúor-3,6-dimetoxifenil)etanol (1,57 g, 79%).

A uma solução esfriada com gelo de 1-(2-flúor-3,6- dimetoxifenil)etanol (1,57 g, 7,84 mmols) em acetona (23 mL) foi lentamente adicionado reagente de Jones (preparado por meio de adição de 1,57 g de CrO3 em 1,6 mL de H2SO4 concentrado a 4,7 mL de água gelada). A mistura foi agitada por 30 minutos antes do banho de resfriamento foi removida e adição de isopropanol (2 mL). O precipitado verde resultante foi removido 5 através de filtração por intermédio de terra diatomácea, e a terra diatomácea foi lavada com acetato de etila ("EtOAc"). O filtrado foi concentrado e redissolvido em EtOAc, lavado com NaHCO3 saturado aquoso, NaCI saturado aquoso, concentrado, e purificado por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 S, acetona/heptano a 8%) para proporcionar o composto do título como 10 um óleo amarelo (1,06 g, 68%).

Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 5

A um fenol foi adicionado um reagente de acetilação, tal como cloreto de acetila (1,0 - 2,0) ou anidrido acético, e a mistura reacional agitada por 2-18 horas sob uma temperatura entre temperatura ambiente e de reflu15 xo. Reagente de acetilação de excesso foi removido a vácuo, em seguida o fenol O-acetilado foi tratado com AICI3 (1,0-1,25 eq) e aquecido a uma alta temperatura, tal como 180°C por 30-60 minutos. A mistura reacional foi em seguida esfriada, suprimida com ácido aquoso, e filtrada para proporcionar o orto-hidroxiacetofenona.

Hidroxiacetofenonas foram preparadas, usando o método de

Preparação de Hidroxiacetofenona 5, a partir de reagentes comercialmente disponíveis como seguem: 4-acetil-3-hidróxi-benzonitrila a partir de 3- hidroxibenzonitrila, 1-(5-cloro-4-flúor-2-hidroxifeníl)etanona a partir de 4- cloro-3-fluorfenol, 1-(4-cloro-5-flúor-2-hidroxifenil)etanona a partir de 3-cloro25 4-fluorfenol, 1-(5-bromo-2-hidróxi-4-metilfenil)etanona a partir de 4-bromo-3- metilfenol, 1-(2,4-dicloro-6-hidroxifenil)etanona a partir de 3,5-diclorofenol, 1- (3-cloro-6-hidróxi-2,4-dimetilfenil)etanona a partir de 4-cloro-3,5-dimetilfenol. Preparação de Orto-Hidroxiacetofenona 6

1-(4.5-Dicloro-2-hidroxifenil)etanona A 3,4-diclorofenol (2,00 g; 12,3 mmols) foi adicionado cloreto de

acetila (1,02 g, 13 mmols) sob temperatura ambiente, e após 30 minutos, a mistura reacional foi aquecida a 60°C por 45 minutos. AICI3 (1,64 g, 12,3 mmols) foi em seguida adicionado e a mistura reacional aquecida a 180°C por 30 minutos. A mistura reacional foi deixada esfriar e lentamente suprimida com HCI a 38%/H20 (30 mL/100 mL), em seguida agitada por 2,5 horas.

O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água, e secado sob alto vá5 cuo para obter o produto como um sólido esbranquiçado (2.07 g; rendimento de 82%). 1H de RMN (CDCI3) δ 12.16 (s, 1H), 7,78 (s, 1H) 7,11 (s, 1H), 2,61 (s, 3H); CL-EM m/z @ 203, 205, 207 (ES-).

Ácidos Carboxílicos

Os seguintes ácidos carboxílicos comercialmente disponíveis foram usados para preparar compostos exemplificados de Fórmula (1) da presente invenção: ácido 2-etil-1-(3-metóxi-fenil)-1 H-benzoimidazol-5- carboxílico (DiscoveryLab Ltd., Rússia), ácido 1 H-indazol-5-carboxílico (Tyger Scientific, Inc., Ewing, NJ), ácido 1H-lndazol-6-carboxílico (Sinova Inc., Bethesda, MD), ácido 1 -Metil-1 H-indol-5-carboxílico (ASDI Inc., Newark, DE), ácido 1 H-Benzoimidazol-5-carboxílico (Infarmatik, Inc., Newark, DE), ácido 2-piridin-2-il-1H-benzoimidazol-5-carboxílico (Aurora Fine Chemicals Ltd., Graz, Áustria), ácido 2-trif!uormetil-1H-benzoimidazol-5-carboxílico (Oakwood Products, Inc., West Columbia, SC), ácido 2-metil-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico (Acros Organics USA, Morris Plains, NJ), ácido 1H-indazol-4-carboxílico; ácido 1 H-indol-7-carboxílico (J & W PharmLab LLC, Morrísville, PA), ácido 1H-indol-6-carboxílico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), ácido 1-metil-1 H-indol-4-carboxílico (Maybridge, Cornwall, UK), ácido

2-piridin-4-il-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (Infarmatik, Inc., Newark, DE), ácido 2-hidroximetil-1 H-benzoimidazol-4-carboxílico (Matrix Scientific, Co25 lumbia, SC), ácido 1H-benzoimidazol-4-carboxílico (Infarmatik, Inc., Newark, DE), ácido 2-metil-1H-benzoimidazol-4-carboxílico (Infarmatik, Inc., Newark, DE), ácido 1-metil-2-oxo-2,3-di-hidro-1 H-benzoimidazol-5-carboxílico (Chemstep, Carbon Blanc, França), ácido quinolino-6-carboxílico (Alfa Aesar, Ward Hill, MA), ácido 1H-benzotriazol-5-carboxílico (Sigma-Aldrich, St. Louis, 30 MO), ácido 1-metil-1 H-benzotriazol-5-carboxílico (Ryan Scientific, Mt. Pleasant, SC), ácido 3-(1H-pirazol-3-il)-benzoico (Maybridge, Cornwall, UK), ácido 3-pirazol-1-il-benzoico (ASDI Inc., Newark, DE), ácido 1H-indol-4- carboxílico (Matrix Scientific, Columbia, SC), ácido 1-metil-1 Hbenzoimidazol-5-carboxílico (Ambinter Sarl, Paris, França), ácido 3-(5-metil[1,2,4]oxadiazol-3-il)-benzoico (ASDI Inc. Newark, DE), ácido 1-oxo2,3,4,4a,9,9a-hhexa-hidro-1H-beta-carbolino-6-carboxílico (J & W PharmLab 5 LLC, Morrisville, PA), ácido 2-fenil-1H-benzimidazol-6-carboxílico (Fluorochem Ltd., Derbyshire, UK), 1-(2,3,4,9-tetra-hidro-1H-carbazol-6-il)etanona (Matrix Scientific, Columbia, SC), ácido 1 H-benzimidazol-6-carboxílico (ASDI Inc., Newark, DE), ácido 2,3-dimetil-1 H-indol-5-carboxílico (Matrix Scientific, Columbia, SC), ácido benzotriazol-5-carboxílico (Sigma-Aldrich, St. Louis, 10 MO), ácido 2,3-dimetil-1H-indol-5-carboxílico (Matrix Scientific, Columbia, SC), 5-carboxiindol (Apollo Scientific Ltd., Cheshire, UK), ácido 1,2-dimetil1H-benzoimidazol-5-carboxílico (Matrix Scientific, Columbia, SC), ácido 5- benzimidazolcarboxílico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), ácido benzotriazol-5- carboxílico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), ácido 1-iso-propilbenzotriazol-5- 15 carboxílico (Fluorochem Ltd., Derbyshire, UK), ácido 2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolino-6-carboxílico (Aurora Fine Chemicals Ltd., Graz, Áustria) e ácido quinoxalino-6-carboxílico (Ryan Scientific, Inc., Mount Pleasant, SC).

Os seguintes ácidos carboxílicos que foram usados para preparar os compostos da presente invenção conforme descritos nos Exemplos, 20 foram preparados por meios anteriormente publicados: ácido 2-metil-1Hindol-6-carboxílico (Journal of Organic Chemistry (1980), 45(8), 1546-7, exemplo 7, página 1547), ácido 1 -isopropil-1 H-benzoimidazol-4-carboxílico (US 2005/020626, página 17, Preparação 11), ácido 3-(1H-imidazol-2-il)benzoico (US 2003/0232860, página 14, exemplo 14) e ácido 1,3- 25 benzoxazol-5-carboxílico (Sawada, Y.; e outros, Pest Management Science (2003), 59(1), 25-35).

Além disso, ácidos carboxílicos, que foram usados para preparar compostos da presente invenção conforme descritos nos Exemplos, foram preparados conforme descritos nas seguintes Preparações de Ácido:

Preparação de Ácido 1

Ácido 7-metil-1 H-indazol-5-carboxílico

A uma solução de 5-bromo-7-metilindazol (adquirido de PharmaLab, Morrisville, PA) (2,00 g, 9,47 mmols) em THF anidro (50 ml) foi adicionado NaH (570 mg, 14,25 mmols; suspensão a 60% em óleo mineral) sob temperatura ambiente. Após 20 minutos, a mistura foi esfriada a -78°C e sec-butil-lítio (1,4 M em cicloexano, 17 ml; 23,8 mmols) foi adicionada gota a gota e a mistura resultante foi agitada por 4 horas. CO2 seco foi em seguida borbulhado através da mistura reacional por 1 hora enquanto permitindo aquecimento a temperatura ambiente. Em seguida foi agitado sob temperatura ambiente da noite para o dia. HCI 1 N foi adicionado e a solução extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com NaCI saturado aquoso, secada (MgSO4), em seguida filtrada e concentrada. O resíduo foi redissolvido em MeOH, filtrado, em seguida concentrado para proporcionar o produto conforme um sólido castanho (1,445 g, 86,6%). 1H de RMN (DMSO-d6) δ 8,23 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 2,46 (s, 3H). CL/EM ES+ 177 (MH+). Preparação de Ácido 2 Ácido 1 H-indazol-7-carboxílico

Uma mistura de ácido 2-amino-3-metilbenzoico (15,2 g, 0,10 mol), dimetilformamida (333 mL) e CsCO3 (49 g, 0,15 mol) foi agitada sob temperatura ambiente por aproximadamente 40 minutos antes de adição gota a gota de iodometano (14,2 g, 6,2 mL, 0,10 mol) em dimetilformamida 20 ("DMF") (115 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura foi diluída com água (1 L), e extraída com éter dietílico. A fase aquosa foi outra vez extraída com éter dietílico. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com NaCI saturado aquoso, secados sobre MgSO4, filtrados e concentrados. O material resultante foi secado sob tempera25 tura ambiente/0,5 mmHg para proporcionar 2-amino-3-metilbenzoato de metila (17 g, 100%).

A uma solução de 2-amino-3-metilbenzoato de metila (16,5 g, 0,10 mol) em CHCI3 (286 mL) foi adicionado anidrido acético (23,5 g, 21,7 mL, 0,23 mol) a fim de manter a temperatura interna < 40°C. A mistura foi 30 agitada a temperatura ambiente por 1 hora antes de adição de acetato de potássio (2,94 g, 30 mmols) e nitrito de isoamila (25,8 g, 30 mL, 0,22 mol). A mistura resultante foi aquecida sob refluxo da noite para o dia. A essa mistura foi em seguida adicionado metanol (94 mL) e HCI 6 N (94 mL) e a mistura foi agitada da noite para o dia. A mistura reacional foi concentrada para proporcionar um sólido laranja que foi subsequentemente triturado com acetato de etila e os sólidos foram isolados por meio de filtração a vácuo. Os sólidos 5 foram secados sob temperatura ambiente/0,5 mmHg para proporcionar 1Hindazol-7-carboxilato de metila (15,4 g, 88%).

Uma solução de 1H-indazol-7-carboxilato de metila (14,96 g,

84,9 mmols) em metanol (180 mL) foi esfriada a 0°C antes de adição de hidróxido de potássio aquoso a 29% (36 mL). O banho de gelo foi removido e 10 a mistura reacional foi agitada sob tempertura ambiente da noite para o dia. O pH foi ajustado em 5,5 usando HCI concentrado. Os voláteis foram removidos por meio de filtração a vácuo e o material resultante foi suspenso em água (100 mL) e acetato de etila (200 mL). O precipitado resultante foi isolado por meio de filtração a vácuo e lavado com acetato de etila. Os sólidos 15 foram secados sob temperatura ambiente/0,5 mmHg para proporcionar o composto do título (7,54 g, 55%).

Preparação de Ácido 3

Ácido 2-metil-2H-indazol-6-carboxílico

1 H-indazol-6-carboxilato de metila foi preparado de acordo com 20 o procedimento descrito in J. Med. Chem. 2000, 43 (1), 41-58 (exemplo 12b, página 49). Alquilação sob condições padrões (hexametildisilazida de sódio, THF, iodometano, refluxo) proporcionou 2-metil-2H-indazol-6-carboxilato de metila (44%). Saponificação sob condições padrões (NaOH 1 N) proporcionou o produto do título (53%).

Preparação de Ácido 4

Ácido 3-(5-trifluormetil-1 H-pirazol-3-il)-benzoico

Hidreto de sódio (60% em óleo, 2,20 g, 55 mmols) foi colocado em um frasco de reação seco em forno sob nitrogênio e lavado duas vezes com porções de 10 mL de hexano, removendo o hexano por meio de decan30 tação. O hidreto de sódio foi em seguida suspenso em 30 mL de 1,2- dimetoxietano seco ("DME") com agitação. Uma solução de 9,0 mL (75 mmols) de trifluoracetato de etila purificado e 3,63 g (25 mmols) de 3- cianoacetofenona (AIdrich) em 40 mL de DME foram adicionados gota a gota por 40 minutos. A mistura reacional foi agitada por 60 minutos adicionais, após o que excesso de hidreto foi destruído por adição de metanol (aproximadamente 3 mL). Os componentes voláteis foram removidos por meio de 5 evaporação sob vácuo e o resíduo foi suspenso em 30 mL de água. A mistura foi acidificada com 70 mL de ácido clorídrico 1 M e extraído com éter. O éter foi lavado com água, NaCI saturado aquoso, secado (MgSO4) e evaporado a 7,02 g de um resíduo sólido de ácido 3-(4,4,4-triflúor-3-oxo-butiril)benzoico contendo algum ácido trifluoroacético residual.

O produto de Etapa 1 (3,71 g, 15 mmols) foi dissolvido em 30 mL

de etanol e aquecido até refluxo, sob o qual ponto 0,97 mL de hidrazina anidra (31 mmols) foi adicionado em uma porção. Aquecimento foi continuado por 90 minutos, após o que a mistura foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi tratado com água e éter; o éter foi lavado com ácido clorídrico 1 M, água, 15 NaCI saturado aquoso, secado (MgSO4) e evaporado. Acetonitrila foi adicionada e a evaporação foi repetida para fornecer um sólido branco, o qual foi dissolvido em 15 mL de ácido acético glacial, aquecido sob refluxo por 20 minutos e concentrado sob vácuo para proporcionar 3,12 g de 3-(5- trifluormetil-2H-pirazol-3-il)-benzonitrila como um sólido branco.

O produto de Etapa 2 (3,12 g, 13 mmols) foi dissolvido em 20 mL

de 1-propanol. Uma solução de 4,33 g de hidróxido de potássio em 8 mL de água foi adicionada e a mistura foi aquecida sob refluxo por 2 horas. A mistura foi esfriada e evaporada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em 75 mL de água, aquecido até ebulição, e acidificado com ácido clorídrico concen25 trado. A mistura foi deixada esfriar-se e o precipitado foi filtrado, lavado com água e secado para proporcionar 3,21 g do composto do título como um sólido branco.

Preparação de Ácido 5 Ácido 7-cloro-1 H-indazol-5-carboxílico A uma solução de 4-amino-3-cloro-5-metilbenzonitrila (3,00 g,

18,0 mmols) em CHCI3 (50 mL) foi adicionado anidrido acético (3,9 mL, 41,4 mmols). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia e em seguida aquecida sob refluxo por 5 horas. A mistura reacional foi esfriada a temperatura ambiente e acetato de potássio (530 mg, 5,40 mmols) e nitrito de isoamila (5,28 mL, 39,6 mmols) foram adicionados. A mistura foi aquecida sob refluxo por 3 dias. A mistura reacional foi lavada com NaHCO3 5 saturado aquoso, secada sobre Na2SO4 e concentrada. A essa mistura foi adicionado metanol seguido por água (25 mL) e HCI a 38% (25 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. A mistura reacional foi concentrada e o pH foi ajustado a aproximadamente 7. Os sólidos foram isolados por meio de filtração e em seguida lavados com água (2 x 30 10 mL) e heptano (2 x 30 mL). Purificação por meio de cromatografia Biotage (gradiente CH2CI2-heptano (1:1)/MeOH para proporcionar 7-cloro-1Hindazol-5-carbonitrila foi isolada como um sólido branco (585 mg, 18%).

A uma solução de 7-cloro-1 H-indazol-5-carbonitrila (250 mg, 1,41 mmol) em etanol/água (razão 3:1, 15 mL) foi adicionado hidróxido de 15 potássio (395 mg, 7,04 mmols) e a mistura foi aquecida sob refluxo. Após 3 horas, a maior parte do etanol foi deixada a destilar-se fora, hidróxido de potássio adicional (614 mg) foi adicionado e aquecimento foi continuado da noite para o dia. A mistura reacional foi esfriada a temperatura ambiente, lavada com Et2O (3 x 20 mL) e o extrato orgânico foi acidificado com HCI 1 20 N. O precipitado resultante foi isolado por meio de filtração a vácuo, lavado com água (aproximadamente 15 mL) e heptano (aproximadamente 15 mL), secado sob temperatura ambiente/0,5 mmHg para proporcionar o composto do título (221 mg, 79,7%).

Preparação de Ácido 6 Ácido 5-bromo-1 H-indazol-7-carboxílico

A uma solução de ácido 2-amino-3-metilbenzoico (5,00 g, 33,1 mmol) em ácido acético (110 mL) sob O0C foi adicionada gota a gota uma mistura de bromo (1,7 mL, 33 mmols) em ácido acético (50 mL) durante aproximadamente 5 minutos. Após adição, o banho de resfriamento foi remo30 vido e a mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 30 minutos antes de remoção de ácido acético sob pressão reduzida. A mistura foi diluída com CH2CI2 e lavada com Na2CO3 saturado aquoso. A fase aquosa foi outra vez extraída com CH2CI2. A fase aquosa foi acidificada usando HCI concentrado a pH 7,2, com intensa formação de espuma observada. Quantidades copiosas de precipitado formado foram isoladas por meio de filtração a vácuo. O filtrado foi adicionalmente acidificado com HCI concentrado a pH 6,3 e uma 5 segunda cultura de precipitado foi coletada. Os sólidos combinados foram secados a 65°C /0,5 mmHg para proporcionar ácido 2-amino-5-bromo-3- metilbenzoico (6,43 g, 85%).

Uma solução de ácido 2-amino-5-bromo-3-metilbenzoico (6,43 g,

27,9 mmols) em DMF (93 mL) contendo carbonato de césio (13,7 g, 41,9 10 mmols) foi agitada a temperatura ambiente por 40 minutos antes de adição gota a gota de uma solução de iodometano (1,7 mL, 28 mmols) em DMF (21 mL). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 2 dias. A mistura foi diluída com água (300 mL) e extraída com EtOAc (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre MgSO4, filtrados e concentra15 dos para proporcionar um óleo castanho que solidificou-se em um sólido bege após secagem a temperatura ambiente/0,5 mmHg para proporcionar 2- amino-5-bromo-3-metilbenzoato de metila (5,45 g, 80%).

A uma solução de 2-amino-5-bromo-3-metilbenzoato de metila (5,45 g, 22,3 mmols) em CHCb (64 mL) foi adicionado anidrido acético (4,9 20 mL) em tal taxa quanto a manter a temperatura interna abaixo de 40°C. A mistura resultante foi agitada sob temperatura ambiente por 1 hora e em seguida acetato de potássio (0,66 g, 6,7 mmols) e nitrito de isoamila (6,6 mL, 49 mmols) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida sob refluxo da noite para 0 dia e em seguida esfriada a temperatura ambiente e concen25 trada. O resíduo foi dissolvido em metanol (22 mL) e HCI 6 N (22 mL) e agitado sob temperatura ambiente por aproximadamente 4 horas. Um sólido amarelo foi isolado por meio de filtração a vácuo e lavado com água. Os sólidos foram secados a 65°C/0,5 mmHg para proporcionar 5-bromo-1Hindazol-7-carboxilato de metila (4,90 g, 86%).

A uma solução de 5-bromo-1 H-indazol-7-carboxilato (250 mg,

0,98 mmol) em metanol (2 mL) a O0C foi adicionado KOH aquoso a 30% (0,15 g de KOH em 0,5 mL de água). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 2 dias. Os sólidos resultantes foram isolados por meio de filtração a vácuo e lavados com MeOH. O material sólido foi secado a 65°C/0,5 mmHg para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo-claro (182 mg, 67%).

Preparação de Ácido 7

Ácido 3-metil-1 H-indazol-6-carboxílico

Uma solução de 2-flúor-4-metoxiacetofenona (2,0 g, 12 mmols) em hidrazina (30 mL) foi aquecida sob refluxo por 2 dias. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente, derramada em água e extraída com EtOAc 10 (3x). Os extratos orgânicos combinados foram concentrados, dissolvidos em uma quantidade mínima de CH2CI2, filtrados para proporcionar 6-metóxi-3- metil-1 H-indazol como um sólido amarelo (620 mg, 32%).

A uma solução de 6-metóxi-3-metil-1 H-indazol (620 mg, 3,82 mol) em CH2CI2 (25 mL) a O0C foi adicionada uma solução de diclorometano 15 de tribrometo de boro (17 mL de solução 1 M). A mistura foi agitada a temperatura ambiente da noite para o dia. A solução foi cuidadosamente suprimida derramando lentamente em NaHCO3 saturado aquoso gelado. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3x). Os extratos orgânicos combinados foram concentrados e o material bruto foi purificado 20 por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 S, acetona/heptano a 45% 500 mL e 60% 150 mL) para proporcionar 3-metil-1H-indazol-6-ol como um sólido laranja (458 mg, 81%).

Uma solução de 3-metil-1H-indazol-6-ol (458 mg, 3,1 mmols) em THF (30 mL) foi tratada com hidreto de sódio (0,50 g de dispersão oleosa a 25 60%). Após a efervescência inicial depositar-se, a solução foi aquecida a 50°C por 1 hora antes de resfriamento a temperatura ambiente e adicionando N-feniltrifluormetanossulfonimida (2,50 g, 7,0 mmols). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 horas antes de derramamento em água. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (3x). Os extratos orgânicos combinados 30 foram concentrados e o material bruto foi purificado por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 M, acetona/heptano a 12%). Para proporcionar trifluormetanossulfonato de 3-metíl-1-(trifluormetilsulfonil)-1H-indazol-6-ila (1,13 g, 89%).

Uma solução de trifluormetanossulfonato de 3-metil-1- (trifluormetilsulfonil)-1H-indazol-6-ila (0,61 g, 1,5 mmol) em DMF (6 mL) foi descarregada com dióxido de carbono por 5 minutos. A essa solução foi adi5 cionado acetato de paládio (68 mg, 0,30 mmol), 1,1'bis(difenilfosfino)ferroceno (167 mg, 0,30 mmol), trietilamina (0,33 g, 0,45 mL, 3,2 mmols), e metanol (4 mL). A solução foi agitada a temperatura ambiente da noite para o dia sob uma atmosfera de CO. A solução foi derramada em água e extraída com EtOAc (3x). Os extratos orgânicos combinados 10 foram concentrados e purificados por meio de cromatografia Biotage (coluna 40 S, EtOAc/heptanos a 8%) para proporcionar 3-metil-1- (trifluormetilsulfonil)-1H-indazol-6-carboxilato de metila (330 mg, 69%).

A uma solução de 3-metil-1-(trifluormetilsulfonil)-1 H-indazol-6- carboxilato (590 mg, 1,83 mmols) em MeOH/água (3:1, 72 mL) foi adiciona15 do carbonato de potássio (1,01 g, 7,31 mmols) e a mistura foi aquecida sob refluxo por 2 horas. A mistura foi esfriada a temperatura ambiente e metanol foi removido sob pressão reduzida. A solução aquosa foi acidificada com KHSO4 a pH 3 - 3,5. O precipitado branco que se formou foi isolado por meio de filtração a vácuo, dissolvido em EtOAc e lavado com água. O extrato or20 gânico foi secado sobre MgSO4, filtrado, concentrado e secado para produzir o composto do título como um sólido branco (259 mg, 80%).

Preparação de Ácido 8

Ácido 7-etil-1 H-indazol-5-carboxílico

A uma solução de 2-etil-6-metilanilina (2,03 g, 15 mmols) em DMF (50 mL) a O0C foi adicionado

N-bromossucinimida (2,66 g, 14,9 mmols). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 10 minutos antes de adição a NaCI saturado aquoso. A mistura foi extraída com EtOAc, a fase orgânica foi lavada com NaCI saturado aquoso (2x), concentrada e o material bruto foi purificado por cromatografia 30 Biotage (40M, EtOAc/heptano a 15%) para proporcionar 4-bromo-2-etil-6- metilbenzenamina como um líquido castanho-avermelhado (3,21 g, 100%).

Uma solução de 4-bromo-2-etil-6-metilbenzenamina (3,21 g, 15 mmols) em ácido acético (50 mL) foi agitada por 3 horas antes de adição de uma solução 2 M de nitrito de sódio (11 mL, 22,5 mmols). A mistura resultante foi agitada da noite para o dia sob temperatura ambiente. A solução foi concentrada e o sólido foi dissolvido em EtOAc e lavado com NaCI saturado 5 aquoso (3x). O extrato orgânico foi secado sobre Na2SO4, filtrado e concentrado, o material bruto foi purificado por meio de cromatografia Biotage (40M, EtOAc/heptano a 15-30%) para proporcionar 5-bromo-7-etil-1 H-indazol (1,11 g, 33%) e 5-bromo-3,7-dimetil-1 H-indazol (0,84 g, 25%).

A uma solução de 5-bromo-7-etil-1 H-indazol (225 mg, 1,00 mmol) em dio10 xano (1,5 mL), hexacarbonilmolibdênio (132 mg, 0,50 mmol), catalisador de Herrmann (trans-Bis(acetato)bis[o-(di-o-tolilfosfino)benzil]dipaládio) (46,9 mg, 0,05 mmol) e uma solução de carbonato de sódio (318 mg, 3,00 mmols) em água (2 mL). A suspensão foi selada e irradiada em um micro-onda a 165°C por 15 minutos (ajuste de alta absorção). O frasco foi ventilado, filtrado por 15 meio de terra diatomácea, lavado com EtOAc e concentrado para proporcionar o composto do título (140 mg, 74%).

Preparação de Ácido 9

Ácido 3-cloro-1 H-indol-5-carboxílico

A uma solução de ácido indol-6-carboxílico em diclorometano (40 mL) e DMF (4 mL) foi adicionado

N-clorossucinimida e deixado agitar-se sob temperatura ambiente por 3 ho

I

ras. A mistura reacional foi em seguida concentrada sob pressão reduzida e o material bruto foi agitado em diclorometano (100 mL) por 2 horas, filtrado, secado da noite para o dia para obter o composto do título (1,15 g, 95%).

Preparação de Ácido 10

Ácido 3,7-dimetil-1 H-indazol-5-carboxílico

A um recipiente de reação contendo uma solução repurificada de

5-bromo-3,7-dimetil-1 H-indazol (preparada conforme descrita para Preparação de Ácido 8, 285 mg, 1,27 mmol) em dioxano (1,3 mL) foi adicionado hexacarbonilmolibdênio (264 mg, 1,0 mmol), catalisador de Herrmann (93 mg, 0,1 mmol) e uma solução de Na2CO3 em água (636 mg em 2 mL de água). A suspensão foi aquecida em um micro-onda a 165°C por 15 minutos (alta absorção). O frasco foi ventilado, acidificado com HCI 1 N (a pH 2). A mistura reacional foi filtrada por meio de terra diatomácea, lavada com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com NaCI saturado aquoso (3x). O extrato orgânico foi concentrado para produzir o composto do título como um sólido rosado (65 mg, 17%).

Preparação de Ácido 11

Ácido 1 -metil-1 H-indol-6-carboxílico

A ácido N-metilindol-6-carboxílico éster metílico em 3 mL de acetonitrila/THF/água/MeOH 1:1:1:1 foi adicionado LiOH e deixado agitar-se sob 10 temperatura ambiente durante fim de semana. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida antes de adicionar EtOAc e água. A fase orgânica foi separada e a água acidificada com HCI 1N e extraída em EtOAc (3 x 50 mL), lavada com água, NaCI saturado aquoso, secada sobre MgSO4, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O material foi secado sob pres15 são reduzida para proporcionar o produto do título (0,16 g, 86%).

Preparação de Ácido 12

Ácido 1 -metil-2-pirrolidin-1 -il-1 H-benzimidazol-5-carboxílico

3-nitro-4-clorobenzoato de metila (72,01 g, 0,334 mol) foi suspenso em acetonitrila recentemente destilado (360 mL) sob agitação. Aceta20 to de sódio anidro (41,1 g, 0,5 mol) e solução aquosa a 30% de metilamina (69 mL, 0,67 mol) foram adicionados a essa suspensão sob agitação vigorosa. A mistura obtida foi submetida a refluxo por 7 horas e em seguida mantida da noite para o dia com monitoração de TLC (clorofórmio/CCI4 1:2). O precipitado amarelo foi separado por meio de filtração e misturado com uma 25 solução de K2CO3 (25 g) em água (500 mL). A mistura foi agitada por 30 minutos e filtrada. O precipitado amarelo foi lavado com água para atingir pH 7.

O filtrado foi concentrado sob uma pressão reduzida a um volume de aproximadamente 200 mL e misturado com uma solução de K2CO3 (5 g) em água (100 mL). A mistura foi agitada por 30 minutos e filtrada. O precipitado 30 amarelo foi lavado com água para atingir pH 7. Dois precipitados acima foram combinados e secados para fornecer 4-(metilamino)-3-nitrobenzoato de metila como um pó amarelo em (67,63 g, 96%). 4-(Metilamino)-3-nitrobenzoato (63,06 g, 0,3 moi) foi suspenso sob agitação vigorosa em metanol (700 mL). Uma suspensão de níquel de Raney (15 g, recentemente preparado por meio de tratamento de liga de níquel-alumínio 50/50 com a solução de NaOH 2N) em metanol (30 mL) foi 5 adicionada à suspensão. A mistura obtida foi aquecida a 40-45°C sob agitação vigorosa, e mono-hidrato de hidrazina (60 mL, 1,2 mol) foi adicionado gota a gota à suspensão por 3 horas sob uma temperatura abaixo de 55°C. A mistura foi agitada a 50-55°C por 3 horas e mantida da noite para o dia sob temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida novamente a 40- 10 45°C sob agitação vigorosa, e uma quantidade adicional de hidrato de hidrazina (5 mL) foi adicionada à mistura. A suspensão foi submetida a refluxo por

2 horas sob agitação vigorosa, esfriada, e diluída com clorofórmio (1 L). A mistura foi passada por meio de terra diatomácea (camada superior de 2 cm, diâmetro de 17 cm) e sílica-gel (camada inferior de 5 cm) para remover ní15 quel de Raney. As camadas foram lavadas com mistura de clorofórmio/metanol (1:1, 5 x 600 mL). O filtrado foi concentrado sob uma pressão reduzida. O resíduo foi diluído com benzeno (100 mL), e a mistura foi concentrada sob uma pressão reduzida para remover água. Essa operação foi repetida para fornecer 3-amino-4-(metilamino)benzoato de metila como um 20 sólido castanho cristalino em (53,6 g, 99%) o qual foi usado no estágio seguinte sem purificação adicional.

3-Amino-4-(metilamino)benzoato de metila (53,6 g, 0,3 mol) foi dissolvido em diclorometano anidro (700 mL). 1,1'-Carbonildiimidazol (CDI,

62,59 g, 0,386 mol) foi adicionado a essa solução em diversas pequenas 25 porções sob agitação por 2 horas. A mistura reacional foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. O precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com éter frio (3 * 50 mL), e secado para fornecer 1- metil-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-benzimidazol-5-carboxilato de metila como cristais rosa-claro em (49,75 g, 81% ).

Brometo de fosforila (POBr3, 102,4 g, 0,357 mol) foi dissolvido

em dicloroetano (400 mL). 1-Metil-2-oxo-2,3-di-hidro-1 H-benzimidazol-5- carboxilato de metila (36,7 g, 0,178 mol) foi adicionado a essa solução em diversas pequenas porções sob agitação, e a suspensão obtida foi submetida a refluxo com monitoração de TLC (clorofórmio/1,2-dimetoxietano 10:1). Em seguida, a reação foi completada (aproximadamente 19 horas), a mistura reacional foi esfriada em um banho de gelo e cuidadosamente neutraliza5 da por 3 horas com água (50 mL), ε em seguida com uma solução de Na2CO3 (100 g) em água (800 mL) intensa formação de espuma observada. A mistura suprimida foi extraída com clorofórmio (2 L). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída novamente com clorofórmio (500 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água (3 * 250 10 mL), e secadas sobre CaCI2. A solução orgânica foi concentrada sob uma pressão reduzida. O sólido cinza-pálido resultante foi recristaIizado a partir de acetonitrila para fornecer 2-bromo-1 -metil-1 H-benzimidazol-5-carboxilato de metila como um sólido branco em (37,1 g, 77,5%).

Uma mistura de 2-bromo-1 -metil-1 H-benzimidazo!-5-carboxilato de metila (40,0 g, 0,149 mol), pirrolidina (25,37 g, 30 mL, 0,357 mol), fluoreto de césio CsF (31,61 g, 0,208 mol), e DMSO (240 mL) foi colocada em um reator de micro-ondas (MILESTONE Microwave Labstatiorr, Shelton, CT). A mistura reacional foi tratada com radiação de micro-ondas sob agitação em uma temperatura interna de 115°C por 8 horas, esfriada, e derramada em água gelada (1 L). O precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com água fria (2 χ 50 mL), hexano (2 χ 100 mL), e secado. O produto foi misturado com éter (250 mL) e acetonitrila (20 mL), e a mistura foi colocada em um banho ultrassônico por 1.5 horas. O precipitado foi separado por meio de filtração, lavado com éter (2 χ 50 mL), e secado para fornecer 1- metil-2-pirrolidin-1-il-1H-benzimidazol-5-carboxilato de metila em (28,82 g, 75%).

Uma suspensão de 1-me til-2-pirrolidin-1-il-1 H-benzimidazol-5- carboxilato de metila (28,8 g, 0,111 mel) em metanol (200 mL) foi misturado com uma solução de KOH (12,44 g, 0,222 mol) em água (200 mL). A mistura 30 foi submetida a refluxo por 3 horas e mantida da noite para o dia sob temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada sob uma pressão reduzida para remover metanol. O resíduo foi misturado com uma solução de KHSO4 (30,21 g, 0,222 mol) em água (200 mL), e a mistura foi agitada por 1 hora. A mistura reacional foi concentrada sob uma pressão reduzida até secura, e o produto foi extraído do resíduo sólido com uma mistura quente de clorofórmio e isopropanol (1:1, aproximadamente 7 L). O extrato obtido foi 5 concentrado sob uma pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em uma mistura em ebulição de diclorometano e isopropanol (1:1, 500 mL). A solução foi submetida a refluxo por 30 minutos e esfriada em um congelador. O precipitado formado foi separado por meio de filtração e secado para fornecer ácido 1-metil-2-pirrolidin-1-il-1H-benzimidazol-5-carboxílico como um só10 lido amarelo-pálido cristalino em (18,3 g, 67%).

Preparação de Ácido 13

Ácido 3-cloro-1 H-indol-6-carboxílico

A uma solução de ácido 1 H-indol-5-carboxílico em diclorometano (20 mL) e DMF (2 mL) foi adicionado N-clorossucinimida e deixado agitar-se 15 a temperatura ambiente por 3 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O material bruto foi agitado em diclorometano (100 mL) da noite para o dia, filtrado e secado para proporcionar o composto do título (0,439 g, 72%).

Preparação de Ácido 14 Ácido 1-metil-1 H-indazol-6-carboxílico

1 H-lndazol-6-carboxilato de metila foi preparado de acordo com o procedimento descrito in J. Med. Chem. 2000, 43 (1), 41-58 (exemplo 12b, página 49). Alquilação foi feita sob condições padrões (hexametildisilazida de sódio, THF, iodometano, refluxo) proporcionou 1-metil-1 H-indazol-6- 25 carboxilato de metila (43%). Saponificação foi realizada sob condições padrões (NaOH 1 N) proporcionou o produto do título (96%).

Preparação de Ácido 15

Ácido 1,3-dimetil-1 H-indazol-6-carboxílico

Ácido metanossulfônico éster 2-acetil-5-bromofenílico foi preparado conforme descrito in Publicação de Pedido Internacional Número WO 2005/090305 (Exemplo 40a). Ácido metanossulfônico ester 2-acetil-5- bromofenílico foi em seguida tratado com metilidrazina e acetato de amônio sob refluxo por 6 dias para proporcionar 6-bromo-1,3-dimetil-1 H-indazol (60%). Uma solução de 6-bromo-1,3-dimetil-1 H-indazol em THF foi tratada com n-BuLi seguido por dióxido de carbono para proporcionar o composto do título (1,23 g, 60%).

Preparação de Ácido 16

Ácido 3-etil-1 -metil-1 H-indazol-6-carboxílico

Me tanossulfonato 5-bromo-2-propionilfenila foi tratado com metiIidrazina e acetato de amônio sob refluxo por 6 dias proporcionou 6-bromo-3- etil-1-metil-1 H-indazol (33%). Uma solução de 6-bromo-3-etil-1-metil-1 Hindazol em THF foi tratada com n-BuLi seguido por dióxido de carbono para proporcionar o composto do título (66%).

Preparação de Ácido 17

Ácido 2-flúor-5-( 1 H-pirazol-3-iO-benzoico

Ácido 5-bromo-2-fluorbenzoico (100 g, 0,457 mol) foi adicionado 15 a uma solução de HCI em metanol (400 mL; aproximadamente 11%). A suspensão foi submetida a refluxo por 8 horas, e em seguida evaporada in vácuo. O resíduo foi dissolvido em benzeno (500 mL), e a solução foi lavada com solução aquosa de K2CO3 (2 χ 50 mL) e água (3 χ 100 mL), secada sobre Na2SO4 e evaporada a vácuo para proporcionar 5-bromo-2-fluorbenzoato 20 de metila como um óleo amarelo em rendimento de 88% (93,7 g).

5-Bromo-2-fluorbenzoato de metila (154,2 g, 0,66 mol), benzeno seco (450 mL), etinil(trimetil)silano (78,0 g, 0,79 mol), diisopropilamina (100 g, 0,99 mol) e tetra(trifenilfosfino)paládio (20,0 g, 0,017 mol) foram colocados sob uma atmc sfera de argônio em um balão de 1 litro de fundo redondo com 25 três gargalos, equipado com um agitador magnético e um termômetro. A mistura foi acitada por 30 minutos e em seguida esfriada a 10°C. Iodeto de cobre (12,5 a. 0,066 mol) foi adicionado, e a suspensão obtida foi agitada por 2,5 horas a 20°C e em seguida a 60°C por 3 horas e finalmente deixada permanecer scb temperatura ambiente da noite para o dia. Após isso, a mis30 tura foi diluída com éter (200 mL), e o precipitado foi separado por meio de filtração e lavado com éter (2 χ 100 mL). A solução orgânica obtida (800 mL) foi lavada com soluções saturadas aquosas de NH4CI e NaCI, secada sobre Na2SO4 e evaporada. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia (hexano/acetato de etila 10:1) sobre uma coluna de sílica-gel para fornecer 2-flúor-5-(2-trimetilsilil)etinil)benzoato de metila contendo aproximadamente 13% de 5-bromo-2-fluorbenzoato de metila, em aproximadamente rendimento de 80% (148,1 g).

Uma suspensão de 2-flúor-5-(2-trimetilsilil)etinil)benzoato (171,1 g, 0,684 mol), diacetato de mercúrio (2+) (12,0 g, 0,051 mol) em THF (400 mL) e concentrada, H2SO4 (74 mL, 1,37 mol) foi agitada a 50-60°C por 2 horas. Em seguida, a mistura foi esfriada, e THF (350 mL) foi evaporado a vá10 cuo. O resíduo foi diluído com éter (700 mL) e filtrado para remover sais de mercúrio, os quais foram lavados a partir de ácido. A solução de éter foi em seguida secada sobre Na2SO4 e concentrada. O produto bruto (125 g) foi purificado por meio de cromatografia sobre uma coluna de sílica-gel, eluindo a princípio com mistura de hexano/acetato de etila (10:1) para remover mis15 tura de 5-bromo-2-fluorbenzoato de metila, e em seguida com hexano/acetato de etila (1:1) para fornecer 5-acetil-2-fluorbenzoato de metila em rendimento de 75% (90,0 g).

(Dimetoximetil)dimetilamina (92 mL, 0,69 mol) foi adicionada a uma suspensão de 5-acetil-2-fluorbenzoato de metila (90,0 g, 0,46 mol) em 20 tolueno (90 mL). A mistura foi submetida a refluxo por 7 horas, durante esse tempo metanol que se forma foi destilado. A solução foi em seguida concentrada a vácuo, e o resíduo (115,2 g) foi purificado por meio de cristalização para fornecer 5-(3-(dimetilamino) acriloil)-2-fluorbenzoato de metila como prismas amarelos em rendimento de 80% (93,9 g).

Uma mistura de 5-(3-(dimetilamino)acriloil)-2-fluorbenzoato de

metila (50 g, 0,2 mol), hidrato de hidrazina (11,0 g, 0,22 mol) em metanol (500 mL) foi deixada em repouso a 20°C por 48 horas. Em seguida, o solvente foi evaporado, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila/hexano 1:2) sobre uma coluna de sílica-gel para proporcio30 nar 22,0 g de 2-flúor-5-(1H-pirazol-3-il)benzoato de metila, contendo uma impureza. O produto foi purificado por meio de cristalização de etanol para fornecer 2-flúor-5-(1H-pirazol-3-il)benzoato de metila como prismas amarelos em rendimento de 45% (19,9 g).

Uma solução de 2-flúor-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoato de metila (25,2 g, 0,115 mol) foi submetida a refluxo por 2 horas em HCI concentrado (150 ml). Em seguida, a mistura reacional foi esfriada e filtrada. O precipita5 do separado foi lavado com etanol, secado e em seguida submetida a refluxo em água (200 mL) por 30 minutos para remover traços de éster metílico e HCI, esfriada e filtrada. O precipitado separado foi lavado com água e secado para fornecer o composto do título em rendimento de 90,7% (21,4 g). Preparação de Ácido 18 10 Ácido 2-cloro-5-(1 H-pirazol-3-il)-benzoico

5-Bromo-2-clorobenzoato de etila (100 g, 0,38 mol), benzeno seco (450 mL), etinil(trimetil)silano (44,7 g, 0,45 mol), piperidina (38,3 g, 0,45 mol) e tetra(trifenilfosfino)paládio (22,0 g, 0,019 mol) foram colocados sob uma atmosfera de Ar em um balão de 1 litro de fundo redondo com três gar15 galos, equipado com um agitador magnético e um termômetro. A mistura foi agitada por 30 minutos e em seguida esfriada a O0C. Iodeto de cobre (7,23 g, 0,038 mol) foi adicionado, e a suspensão obtida foi agitada por um adicional de 2,5 horas a 30-35°C e filtrada. O precipitado separado foi lavado com benzeno, e o filtrado combinado foi lavado com soluções saturadas aquosas 20 de NH4CI e NaCI, secado sobre Na2SO4 e evaporado. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia (hexano/acetato de etila 10:1) sobre uma coluna de sílica-gel para fornecer 2-cloro-5-(2- (trimetilsilil)etinil)benzoato de etila em rendimento de 95% (101 g).

Uma suspensão de 2-cloro-5-(2-(trimetilsilil)etinil)benzoato de 25 etila (101 g, 0,36 mol), diacetato de mercúrio(2+) (8,6 g, 0,027 mol) em THF (250 mL) e H2SO4 concentrado (40 mL) foi agitado a 60°C por 3 horas. Em seguida, a mistura foi esfriada, diluída com éter (500 mL) e lavada para obter meio neutro. Em seguida, a solução foi secada sobre Na2SO4 e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia (hexano/acetato de etila 30 4:1) sobre uma coluna de sílica-gel para fornecer 5-acetil-2-clorobenzoato de etila em rendimento de 70% (57 g).

(Dimetoximetil)dimetilamina (40 mL) foi adicionado a uma suspensão de 5-acetil-2-clorobenzoato de etila (57 g, 0,25 mol) em tolueno (60 mL). A mistura foi submetida a refluxo por 9 horas, durante esse tempo metanol que se forma foi destilado. A solução foi em seguida concentrada a vácuo, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila) 5 sobre uma coluna de sílica-gel para proporcionar 2-cloro-5-(3- (dimetilamino)acriloil)benzoato de etila como cristais prismáticos amarelos em rendimento de 80% (57,6 g).

Hidrato de hidrazina (5,5 g, 0,11 mol) foi adicionado a uma suspensão de 2-cloro-5-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de etila (28 g, 0,1 mol) 10 em etanol (100 mL). A mistura reacional foi deixada em repouso a 20°C da noite para o dia e em seguida concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila/hexano 1:2) sobre uma coluna de sílicagel para proporcionar 2-cloro-5-(1H-pirazol-3-il)benzoato de etila em rendimento de 94% (22,9 g).

Uma suspensão de composto 2-cloro-5-(1 H-pírazol-3-il)benzoato

de etila (22,9 g, 0,091 mol), metilato de sódio (7,4 g, 0,14 mol) em etanol (250 mL) foi submetida a refluxo por 10 minutos. O precipitado formado foi separado e dissolvido em água (1 L). A solução aquosa obtida foi acidificada com HCI concentrado a pH aproximadamente 2 que levou a precipitação. O 20 precipitado foi separado por meio de filtração, lavado com água e secado para fornecer ácido 2-cloro-5-(1H-pírazol-3-il)benzoico como cristais amarelados em rendimento de 92% (18,9 g).

Preparação de Ácido 19 Ácido 2-hidróxi-5-( 1 H-pirazol-3-il)-benzoico Uma mistura de 5-acetil-2-hidroxibenzoato de metila (1,20 g,

0,1341 mol), (clorometil)benzeno (17,82 g, 0,1410 mol) e Na2CO3 (17,1 g, 0,1613 mol) em DMF (50 mL) foi aquecida (110-115°C) sob agitação por 2 horas. Em seguida, a mistura reacional foi esfriada, e o resíduo foi removido por meio de filtração e lavado com DMF (15 mL). O filtrado combinado foi 30 evaporado a vácuo, e água (100 mL) foi adicionada ao resíduo. A mistura obtida foi evaporada a vácuo para remover (clorometil)benzeno. Em seguida, traços de água foram removidos por meio deco-evaporação com tolueno (2 χ 100 mL) a vácuo. O resíduo foi triturado com hexano (100 mL), separado por meio de filtração e secado para fornecer 5-acetil-2-(benziloxi)benzoato de metila em rendimento de 84,7% (27,17 g).

(Dimetoximetil)dimetilamina (28,70 g, 32,0 mL, 0,241 mol) foi 5 adicionada a uma suspensão de 5-acetil-2-(benzilóxi)benzoato de metila (27,17 g, 0,1135 mol) em DMF (30 mL). A mistura foi aquecida (110 - 115°C) sob agitação por 8 horas, durante esse tempo o metanol que se forma foi destilado. Em seguida, a solução foi concentrada a vácuo, e o resíduo foi tratado com éter seco (150 mL), separado por meio de filtração e lavado com 10 éter seco (30 mL) novamente para fornecer 2-(benzilóxi)-5-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de metila como prismas amarelos em rendimento de 82,1% (31,63 g).

Uma mistura de 2-(benzilóxi)-5-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de metila (68,1 g, 0,20 mol) e hidrato de hidrazina (11,0 g, 0,22 mol) em me15 tanol (600 mL) foi deixada em repouso sob temperatura ambiente por 48 horas. Em seguida, o solvente foi removido, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila) sobre uma coluna de sílica-gel para proporcionar 2-(benzílóxi)-5-(1H-pirazol-3-il)benzoato de metila em rendimento de 70% (43,0 g).

Uma suspensão de 2-(benzilóxi)-5-(1H-pirazol-3-il)benzoato de

metila (43,0 g, 0,139 mol) foi submetida a refluxo em HCI concentrado (250 mL) por 2,5 horas, removendo cloreto de benzila. A mistura reacional foi em seguida esfriada, e o precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com água e secado para fornecer o composto do título em rendimento de 75,4% (27,0 g).

Preparação de Ácido 20

Ácido 2-cloro-5-( 1 -metil-1 H-pirazol-3-il)-benzoico

Uma mistura de 2-cloro-5-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de etila, preparada conforme descrita na Preparação 15, (31,7 g, 0,13 mol), metilidrazina (12,44 g, 0,32 mol) em metanol (120 mL) foi deixada permanecer sob temperatura ambiente por 24 horas. Em seguida, o solvente foi evaporado, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila/hexano 1:2) sobre uma coluna de sílica-gel para proporcionar 2-cloro-5-(1- metil-1H-pirazol-3-il)benzoato de etila em rendimento de 28% (9,6 g).

Uma suspensão de 2-cloro-5-(1-metil-1 H-pirazol-3-il)benzoato de etila (9,6 g, 0,046 mol), metilato de sódio (4,8 g, 0,07 mol) em etanol (150 5 mL) foi submetida a refluxo por 30 minutos. O precipitado foi separado por meio de filtração e dissolvido em água. A solução aquosa foi acidificada com HCI concentrado a pH aproximadamente 2 que levou à precipitação. O precipitado foi separado por meio de filtração, lavado com água e secado para proporcionar o composto do título como cristais em rendimento de 92%.

Preparação de Ácido 21

Ácido 3-pirimidin-4-il-benzoico

3-Bromobenzoato de metila (110 g, 0,51 mol), acetonitrila seca (500 mL), etínil(trimetil)silano (60,0 g, 0,61 mol), diisopropilamina (62,0 g, 0,61 mol) e tetra(trifenilfosfino)paládio (23,6 g, 0,02 mol) foram colocados sob uma atmosfera de argônio em um balão de 1 litro de fundo redondo com três gargalos, equipado com um agitador magnético e um termômetro. A mistura foi agitada por 30 minutos e em seguida esfriada a 10°C. Iodeto de cobre (9,7 g, 0,06 mol) foi adicionado, e a suspensão obtida foi agitada por um adicional de 2,5 horas a 20°C e finalmente por 3 horas a 60°C. Em seguida, a mistura foi deixada em repouso sob temperatura ambiente da noite para o dia e filtrada. O precipitado de bromidreto foi lavado com éter, e o filtrado combinado foi lavado com soluções saturadas aquosas de NH4CI e NaCI, secado sobre Na2SO4 e evaporado. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia (hexano) sobre uma coluna de sílica-gel para fornecer 3-(2-(trimetilsilil)etinil)benzoato de metila em rendimento de 95% (112,8 g).

Uma suspensão de 3-(2-(trimetilsilil)etinil)benzoato de metila (112,8 g, 0,48 mol), diacetato de mercúrio(2+) (16,2 g, 0,005 mol) em THF (350 mL) e H2SO4 concentrado (40 mL) foi agitada a 60°C por 3 horas. Em seguida, a mistura foi esfriada, diluída com éter (500 mL), filtrada para remo30 ver sais de mercúrio precipitados e lavados a meio neutro obtido. Em seguida, a solução foi secada sobre Na2SO4 e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia (hexano/acetato de etila 4:1) sobre uma coluna de sílica-gel para fornecer 3-acetilbenzoato ck metila em redimento de 75% (65,2 g).

(Dimetoximetil)dimetilamina (90 mL) foi adicionada a uma suspensão de 3-acetilbenzoato de metila (65,2 g, 0,27 mol) em tolueno (90 mL).

A mistura foi submetida a refluxo por 9 horas, durante esse tempo metanol que se forma foi destilado. A solução foi em seguida concentrada a vácuo, e o resíduo foi purificado a partir de éter por meio de cristalização para fornecer 3-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de metila como cristais prismáticos amarelos em rendimento de 80% (68,1 g).

Acetato de imidoformamida (20,3 g, 0,19 mol) foi adicionado a

uma suspensão de 3-(3-(dimetilamino)acriloil)benzoato de metila (30,3 g, 0,13 mol) em tolueno (300 mL). A mistura reacional foi submetida a refluxo por 20 horas, durante esse tempo tolueno e acetato de dimetilamina foram destilados. Em seguida, acetato de imidoformamida (6,7 g) e tolueno (175 15 mL) foram adicionados novamente, e após 8 horas a mistura foi evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia (acetato de etila/hexano 3:1) sobre uma coluna de sílica-gel para proporcionar 3-(pirimidin

4-il)benzoato de metila em rendimento de 70% (19,5 g).

Uma suspensão de 3-(pirimidin-^-il)benzoato de metila (19,5 g, 20 0,091 mol), metilato de sódio (7,6 g, 0,14 mol) em etanol (250 mL) foi submetida a refluxo por 30 minutos. Em seguida, a mistura reacional foi esfriada, e o precipitado formado que foi separadc por meio de filtração foi dissolvido em água. A solução obtida foi acidificada com HCI concentrado a pH aproximadamente 2 que levou a precipitaçãc . O precipitado foi separado por 25 meio de filtração, lavado com água e secacc para fornecer o composto do título como cristais em rendimento de 94% (17,2 g).

Preparação de Ácido 22

Ácido 1 -metil-2-pirrolidin-1 -il-1 H-benzimidazoi 5-carboxílico

3-Nitro-4-clorobenzoato de metila (72,01 g, 0,334 mol) foi suspenso em acetonitrila recentemente destilad; (360 mL) sob agitação. Acetato de sódio anidro (41,1 g, 0,5 mol) e soluç; o aquosa a 30% de metilamina (69 mL, 0,67 mol) foram adicionados a essa suspensão sob agitação vigorosa. A mistura obtida foi submetida a refluxo por 7 horas e em seguida mantida da noite para o dia com monitoração de TLC (clorofórmio/CCU 1:2). O precipitado amarelo foi separado por meio de filtração e misturado com uma solução de K2CO3 (25 g) em água (500 mL). A mistura foi agitada por 30 mi5 nutos e filtrada. O precipitado amarelo foi lavado com água para atingir pH 7. O filtrado foi concentrado sob uma pressão reduzida até um volume de aproximadamente 200 mL e misturado com uma solução de K2CO3 (5 g) em água (100 mL). A mistura foi agitada por 30 minutos e filtrada. O precipitado amarelo foi lavado com água para atingir pH 7. Dois precipitados acima fo10 ram combinados e secados para fornecer 4-(metilamino)-3-nitrobenzoato de metila como um pó amarelo em rendimento de 96% (67,63 g).

4-(Metilamino)-3-nitrobenzoato de metila (63,06 g, 0,3 mol) foi suspenso sob agitação vigorosa em metanol (700 mL). Uma suspensão de níquel de Raney (15 g, recentemente preparado por meio de tratamento de 15 liga de níquel-alumínio 50/50 com a solução de NaOH 2N) em metanol (30 mL) foi adicionada à suspensão. A mistura obtida foi aquecida a 40-45°C sob agitação vigorosa, e mono-hidrato de hidrazina (60 mL, 1,2 mol) foi adicionado gota a gota à suspensão por 3 horas sob uma temperatura abaixo de 55°C. A mistura foi agitada a 50-55°C por 3 horas e mantida da noite para o 20 dia sob temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida novamente a 40-45°C sob agitação vigorosa, e uma quantidade adicional de hidrato de hidrazina (5 mL) foi adicionada à mistura. A suspensão foi submetida a refluxo por 2 horas sob agitação vigorosa, esfriada, e diluída com clorofórmio (1 L). A mistura foi passada por meio de terra diatomácea (camada superior de 25 2 cm, diâmetro de 17 cm) e sílica-gel (camada inferior de 5 cm) para remover níquel de Raney. As camadas foram lavadas com mistura de clorofórmio/metanol (1:1, 5 χ 600 mL). O filtrado foi concentrado sob uma pressão reduzida. O resíduo foi diluído com benzeno (100 mL), e a mistura foi concentrada sob uma pressão reduzida para remover água. Essa operação foi 30 repetida para fornecer 3-amino-4-(metilamino)benzoato de metila como um sólido castanho cristalino em rendimento de 99% (53,6 g). 3-Amino-4- (metilamino)benzoato de metila foi usado no estágio seguinte sem purificação adicional.

3-Amino-4-(metilamino)benzoato de metila (53,6 g, 0,3 mol) foi dissolvido em diclorometano anidro (700 mL). 1,1’-Carbonildiimidazol (CDI,

62,59 g, 0,386 mol) foi adicionado a essa solução em diversas pequenas 5 porções sob agitação por 2 horas. A mistura reacional foi agitada sob temperatura ambiente da noite para o dia. O precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com éter frio (3 χ 50 mL), e secado para fornecer 1- metil-2-oxo-2,3-di-hidro-1/-/-benzimidazol-5-carboxilato de metila como cristais rosa-claro em rendimento de 81% (49,75 g).

Brometo de fosforila (POBr3, 102,4 g, 0,357 mol) foi dissolvido

em dicloroetano (400 mL). 1-Metil-2-oxo-2,3-di-hidro-1/-/-benzimidazol-5- carboxilato de metila (36,7 g, 0,178 mol) foi adicionado a essa solução em diversas pequenas sob agitação, e a suspensão obtida foi submetida a refluxo com monitoração de TLC (clorofórmio/1,2-dimetoxietano 10:1). Em seguida, a reação foi completada (aproximadamente 19 horas), a mistura reacional foi esfriada em um banho de gelo e cuidadosamente neutralizada por 3 horas com água (50 mL), e em seguida com uma solução de Na2CO3 (100 g) em água (800 mL) com intensa formação de espuma observada. A mistura obtida foi extraída com clorofórmio (2 L). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída novamente com clorofórmio (500 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água (3 χ 250 mL), e secadas sobre CaCI2. A solução orgânica foi concentrada sob uma pressão reduzida. O sólido cinza-pálido resultante foi recristalizado a partir de acetonitrila para fornecer 2-bromo-1 -metil-1 /-/-benzimidazol-5-carboxilato de metila como um sólido branco em rendimento de 77,5% (37,1 g).

Uma mistura de 2-bromo-1 -metil-1 H-benzimidazol-5-carboxilato de metila (40,0 g, 0,149 mol), pirrolidina (25,37 g, 30 mL, 0,357 mol), fluoreto de césio (CsF) (31,61 g, 0,208 mol), e DMSO (240 mL) foi colocada em um reator de micro-ondas. A mistura reacional foi tratada com radiação de mi30 cro-ondas sob agitação em uma temperatura interna de 115CC por 8 horas, esfriada, e derramada em égua gelada (1 L). O precipitado formado foi separado por meio de filtração, lavado com água fria (2 χ 50 mL), hexano (2 χ 100 mL), e secado. O produto foi misturado com éter (250 mL) e acetonitrila (20 mL), e a mistura foi colocada em um banho ultrassônico por 1,5 horas. O precipitado foi separado por meio de filtração, lavado com éter (2x50 mL), e secado para fornecer 1-metil-2-pirrolidin-1-il-1/-/-benzimidazol-5-carboxilato de metila em rendimento de 75% (28,82 g).

Uma suspensão de 1-metil-2-pirrolidin-1-il-1/-/-benzimidazol-5- carboxilato de metila (28,8 g, 0,111 mol) em metanol (200 mL) foi misturada com uma solução de KOH (12,44 g, 0,222 mol) em água (200 mL). A mistura foi submetida a refluxo por 3 horas e mantida da noite para o dia sob tempe10 ratura ambiente. A mistura reacional foi concentrada sob uma pressão reduzida para remover metanol. O resíduo foi misturado com uma solução de KHSO4 (30,21 g, 0,222 mol) em água (200 mL), e a mistura foi agitada por 1 hora. A mistura reacional foi concentrada sob uma pressão reduzida até secura, e o produto foi extraído a partir do resíduo sólido com uma mistura 15 quente de clorofórmio e isopropanol (1:1, aproximadamente 7 L). O extrato obtido foi concentrado sob uma pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em uma mistura em ebulição de diclorometano e isopropanol (1:1, 500 mL). A solução foi submetida a refluxo por 30 minutos e esfriada em um congelador. O precipitado formado foi separado por meio de filtração e secado para 20 fornecer ácido 1-metil-2-pirrolidin-1-il-1H-benzimidazol-5-carboxílico como um sólido amarelo-pálido cristalinoiem rendimento de 67% (18,3 g). Preparação de Ácido 23

Ácido 7-cloro-4-metóxi-2-metil-1 H-benzimidazol-5-carboxílico

A ácido sulfúrico concentrado (10 mL) esfriado em um banho de 25 gelo/acetona foi adicionado 4-(acetilamino)-5-cloro-2-metoxibenzoato de metila comercialmente disponível (500 mg, 2,0 mmols) e agitado por 5 minutos. A este foi adicionado gota a gota ácido nítrico fumegante (2 mL) por 10 minutos enquanto mantendo a temperatura abaixo de 10°C. A mistura reacional foi agitada por um adicional de 20 minutos a O0C. A mistura reacional foi 30 cuidadosamente derramada em gt Io (30 mL), o sólido resultante foi isolado por meio de filtração e secado a vácuo para proporcionar 4-(acetilamino)-5- cloro-2-metóxi-3-nitrobenzoato de metila (497 mg, 85%). Uma mistura de 4-(acetilamino)-5-cloro-2-metóxi-3-nitrobenzoato de metila (5,53 g, 18,3 mmols) e níquel de Raney (500 mg) em etanol (95 mL) e água (5 ml_) foi agitada sob 13,61 kg (30 pounds) por polegada quadrada (psi) de hidrogênio por 5 horas sob temperatura ambiente. A mistura 5 reacional foi filtrada por meio de arbocel e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar 4-(acetilamino)-3-amino-5-cloro-2-metoxibenzoato de metila (4,60 g, 92%).

4-(Acetilamino)-3-amino-5-cloro-2-metoxibenzoato de metila (4,60 g, 16,9 mmols) e ácido p-toluenossulfônico (290 mg, 1,69 mmols) foi 10 dissolvido em tolueno e aquecido sob refluxo por 1 hora. Os solventes foram evaporados e particionado entre CH2CI2 e NaHCC>3 saturado aquoso. O extrato orgânico foi concentrado para fornecer 7-cloro-4-metóxi-2-metil-1Hbenzimidazol-5-carboxilato de metila (4,21 g, 98%).

Uma mistura de 7-cloro-4-metóxi-2-metil-1H-benzimidazol-5- 15 carboxilato de metila (2,00 g, 7,85 mmols) em THF contendo NaOH 1 M (12 mL) foi aquecida sob refluxo por 3 horas. A reação não foi completa, desse modo NaOH 1 M adicional (6 mL) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida sob refluxo por um adicional de 4 horas. O THF foi evaporado e a solução resultante foi cuidadosamente neutralizada com HCI concentrado 20 (1,4 mL). Um precipitado branco surgiu após agitação por 10 minutos. Agitação continuou sob temperatura ambiente por 10 minutos antes de coleta por meio de filtração a vácuo e lavagem com água. O sólido foi secado sob vácuo, com água residual azeotrópica com metanol, para proporcionar ácido 7- cloro-4-metóxi-2-metil-1 H-benzimidazol-5-carboxílico (1,89 g, 100%).

Exemplos

Preparação de Compostos de Fórmula (1)

Os compostos de Fórmula (1) foram preparados por um dos seguintes seis métodos usando os ácidos carboxílicos apropriados e espirocetonas:

Método A: A tubos de cultura de 10 x 75 mm foram adicionados

500 μL (1 equivalente ("eq.")) de uma solução 0,2 M de ácido carboxílico apropriado em DMF anidro. A esta foram adicionados 500 pL (0,10 mmol) e um solução 0,2 M de amina espirocíclica 6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona em dimetilformamida anidra (DMF). A esta foram adicionados 200 μΙ_ (1 eq.) de uma solução 0,5 M de trietilamina em DMF anidro. A esta foram adicionados 200 μΙ_ (1 eq.) de uma solução 0,5 M de hexa5 fluorofosfato 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N'-tetrametilurônio (HATU) em DMF anidro. Os tubos foram tampados e as misturas reacionais foram agitadas por 16 horas sob temperatura ambiente. Os voláteis dos tubos foram removidos usando um sistema evaporador rotativo a 55°C por 4 horas. Sulfóxido de dimetila (1.540 μΙ_ contendo 0,01% de 2,6-di-t-butil-4-metilfenol 10 (BHT)) foi adicionado a cada tubo (concentração teórica final 0,05 M). Os tubos foram cobertos com celofane e agitados por 5 minutos ou até que o produto em cada tubo fosse dissolvido. Produto foi analisado por CL/EM.

Alternativamente, no Método A, a análise seguinte e método de purificação foi usado (daqui por diante, "Método Al"). Em todo o Método A1, os solventes usados foram: A: água, B: acetonitrila e C: 1% ácido trifluoroacético aquoso. [porcentagem em volume]

Análise de pré-purificação foi conduzida em uma coluna de 4,6 x 30 mm Waters (Waters Corp.) X-Bridge C18, 5 μιη sob uma vazão de 2,5 mL/minuto em um volume de injeção de 2 μΐ_ i] em DMSO no seguinte gradi20 ente: acetonitrila a 5%/água a 95% para acetonitrila a 95%/água a 5% durante 3,0 minutos, ácido trifluoroacético aquoso a 1%/água a 99% foram mantidos em 1%. Detectores usados incluídos: detector de ensaio de diodo (DAD), detector de espalhamento de Iuz evaporativo (ELSD), e espectrometria de massa de tempo de vôo: electrospray em modo positivo (TOF MS: ES 25 (+)).

Cromatografia preparativa foi conduzida em uma coluna de 19 x 50 Waters X-Bridge C-18, 5 μιτι sob uma vazão de 25 mL/minuto em um volume de injeção de 900 μί em DMSO (10-30 mg) usando um gradiente que foi determinado com base no tempo de retenção em análises de pré30 purificação usando detectores DAD, EM: ES (+) com coleta de fração iniciada por EM registrando íon de seleção; um tubo por injeção. Pré-Purificação Método de Purificação Tempo de Retenção (minuto)

0,4 - 0,7 Gradiente focalizado 1

0,7 - 1,0 Gradiente focalizado 2

1,0 -1,4 Gradiente focalizado 3 1,4- 1,8 Gradiente focalizado 4 00 Gradiente focalizado 5 I ro 2,4-3,0 Gradiente focalizado 6 Tempo (min) % A / B / C 0,0 90/5/5 Gradiente focalizado. 1 2,0 85/10/5 4,0 5/90/5 0,0 90/5/5 Gradiente focalizado. 2 2,0 70/25/5 4,0 5/90/5 0,0 85/10/5 Gradiente focalizado. 3 2,0 55/40/5 4,0 5/90/5 0,0 70/25/5 Gradiente focalizado. 4 2,0 40/55/5 4,0 5/90/5 0,0 55/40/5 Gradiente focalizado. 5 2,0 25/70/5 4,0 5/90/5 0,0 40/55/5 Gradiente focalizado. 6 2,0 10/85/5 4,0 5/90/5 Análise pós-purificação foi conduzida em uma coluna de 4,6 x 30 nim Waters X-Bridge C8, 5 pm sob uma vazão de 2,5 mL/minuto usando um volume de injeção de 2 pL em DMSO usando um gradiente de 4% de B para 95% de B durante 3,0 minutos, C mantido em 1%. Detectores usados incluídos: modo DAD, ELSD1 TOF MS: ES (+).

Método B: A um frasco foi adicionado a amina ou cloridrato de amina apropriado (1 equivalente), DMF ou CH2CI2 (aproximadamente 0,1 M), ácido carboxílico, Ν,Ν-diisopropiletilamina (DIEA) (4-6 equivalentes) ou trieti5 lamina (TEA) (4-6 equivalentes) e HATU (1-1,3 equivalentes). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente até que a reação fosse completa conforme determinado por CLC/EM. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada com NaHCO3 saturado aquoso (2x) e em seguida NaCI saturado aquoso. O extrato orgânico foi secado sobre MgSO4, filtrado e concentrado. O 10 material bruto foi purificado por meio de cromatografia líquida para proporcionar o produto. Alternativamente, (daqui por diante, "Método B1"), a mistura reacional bruta foi concentrada e diretamente purificada por meio de cromatografia conforme descrita no Método A1.

Método C: A uma solução de uma espirocetona, produzida por Método B, em MeOH/água (aproximadamente 0,1 M; V:V 2:1), foi adicionado LiOH (1-5 eq.). A solução foi aquecida a 50°C por 3 horas. A mistura reacional foi em seguida esfriada, concentrada, e purificada por meio de cromatografia de coluna.

Método D: Em frascos de 1 dracma foram adicionados 260 pL de 20 solução 0,25 M de aminas dissolvidas em uma solução de trietilamina 1 M em CH2CI2. A isso foram adicionados 260 pL de uma solução 0,25 M do ácido carboxílico em CH2CI2. A mistura foi girada em rotação e nessa mistura foram adicionados 260 pL de HATU em CH2CI2. O frasco foi girado em rotação e em seguida agitado vigorosamente sob temperatura ambiente por 16 25 horas. A mistura reacional bruta foi purificada por meio de cromatografia líquida para proporcionar o produto desejado.

Método E: Em uma poço de 2,2 mL em uma placa de 96 poços de profundidade foi adicionada uma solução do ácido carboxílico (0,5 mL de solução de DMF 0,5 M), uma solução da amina (0,5 mL de solução de DMF 30 0,5 M), e uma solução de HATU (0,5 mL de solução de DMF 0,5 M). A essa solução foi adicionada trietilamina (3 equivalentes). A placa foi selada e agitada por 16 horas. Os solventes foram removidos por meio de evaporação centrífuga sob pressão reduzida. Os resíduos foram dissolvidos em CH2CI2 (1 mL), e lavados seqüencialmente com K2CO3 (2 x 0,7 mL de solução 0,5 M) e água (0,7 mL) antes de ser transferido para uma placa de coleta. O resíduo aquoso final foi reextraído com CH2CI2 (0,5 mL), combinado com o primeiro extrato de CH2CI2 e evaporado até secura.

Método F: A uma solução de uma espirocetona em MeOH/água (aproximadamente 0,1 M; V:V 2:1), foi adicionado LiOH (1-5 eq.). A solução foi aquecida a 50°C por 3 horas. A mistura reacional foi em seguida esfriada, concentrada, e purificada por meio de cromatografia de coluna.

Sais de ácido trifluoroacético foram obtidos em relação a produ

tos finais sob cromatografia de HPLC usando uma fase aquosa que continha TFA.

Exemplos A1-A35

Exem Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 ACC2 ACC2 pio todo CI50 n* CI50 n* (nM) (nM) A1 B1 H I CH3 H 23,5 31 36,4 2 : co A2 A H CH3 CH3 H 30,1 1 A3 B H OCH(CH3)2 H H 14,5 1 17,2 1 A4 B H OCH2CH3 H H 19,5 1 29,9 1 A5 B H C(O)NHCH3 H H 29,5 1 A6 B Cl H OCH3 H 31,9 1 A7 B H OCH3 H H 32,5 2 138 2 A8 B H Br CO H 32,6 2 I O A9 B F OCH3 H H 37,4 2 ! Exem Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 ACC2 ACC2 pio todo CI50 n* CI50 n* (nM) (nM) A10 B H C(0)NH2 H H 38,2 1 A11 B H C(O)OCH3 H H 40,0 1 A12 B H OCF3 H H 41,9 2 A13 B H Cl 0 H 45,0 3 1 CO A14 B H Cl Cl H 52,0 1 A15 B H 0 H H 53,6 3 1 CO A16 B H OCH3 H H 55,1 1 A17 B H H Cl H 70,5 1 A18 B CH3 Cl CO H 72,0 1 I ü A19 B OCH3 H Cl H 81,5 1 A20 B H CO H H 96,6 2 LL O A21 B H Cl F H 96,6 2 A22 B H F Cl H 104 1 A23 B H i-propila H H 109 1 A24 B H H OCH3 H 122 1 A25 B OCH3 H H H 112 1 A26 B H Cl H H 113 1 A27 B H C(O)N(CH3)2 H H 125 1 A28 B CH3 H OCH3 H 138 1 A29 B CO H CO H 146 1 I I O O A30 B Cl H Cl H 209 1 A31 B H -CN H H 234 1 A32 B H H -CN H 277 1 A33 C H C(O)OH H H 303 1 A34 B H H fenila H 395 1 A35 B H -S(O)2CH3 H H 1110 1 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo A1: Usou-se o Método B1 para formar 6,7-dimetil-1 '-[(7-

metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]espiro-[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona como segue. Uma solução de 6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (300 mg, 0,83 mmol) em CH2CI2 (5 mL) foi tratada com trietilamina (0,70 mL,

5,0 mmols) e hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N,,N'tetrametilurônio ("HATU") (317 mg, 0,84 mmol). A mistura foi agitada sob temperatura ambiente por 6 horas antes de remoção dos solventes sob 5 pressão reduzida e purificada por cromatografia para proporcionar o composto do título (50 mg, 48%). 1H de RMN (CDCI3) δ 8,24 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 2,66 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).

Exemplo A2: Usou-se o Método A para formar 6,7-dimetil-1'-[(7- metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]espiro-[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona sal de ácido trifluoroacético como segue. A tubos de cultura de 10 x 75 mm foram adicionados 400 pL (0,08 mmol) de uma solução 0,2 M de 6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona em dimetilformamida anidra (DMF) seguida por uma barra de agitação. A isso foram adicionados 400 pL (1 eq.) de uma solução 0,2 M do ácido carboxílico apropriado em DMF anidra. A isso foram adicionados 160 pL (1 eq.) de uma solução 0,5 M de trietilamina em DMF anidra. A isso foram adicionados 160 pL (1 eq.) de uma solução de HATU 0,5 M em DMF anidra. Os tubos foram cobertos com celofane e as misturas reacionais foram agitadas por 16 horas. Os voláteis dos tubos foram removidos usando um sistema evaporador rotativo com aquecimento médio. Sulfóxido de dimetila (1.540 pL contendo 0,01% de 2,6-di-tbutil-4-metilfenol (BHT)) foi adicionado a cada tubo (concentração teórica final 0,05 M). Os tubos foram cobertos com celofane e agitados por 5 minutos ou até que o produto em cada tubo fosse dissolvido. EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 1,56 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,24 (br s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 2,66 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).

Exemplo A3: 6-isopropóxi-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 434, HPLC TR 2,4. 1H de RMN (CDCK) δ 8,14 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,27- 7,28 (m, 2H), 7,10-7,12 (dd, 1H), 6,94-6,96 (d, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 2,75 (br s, 2H), 2,59 (s, 3H), 1,32-1,33 (d, 6H). Exemplo A4: 6-etóxi-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 420 HPLC TR 2,4. 1H de RMN (CDCI3) δ 8,14 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,30-7,31 (d, 1H), 7,12-7,14 (dd, 1H), 6,95-6,97 (d, 1H), 4,01-4,05 (m, 2H), 2,75 (br s, 2H), 2,60 (s, 3H), 1,40-1,43 (t, 3H).

Exemplo A5: N-metil-1 '-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo

3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 433 HPLC TR 1,7.

Exemplo A6: 5-cloro-7-metóxi-1'-[(7-rnetil-1H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 440. 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,68 (m, 1H), 6,53-6,54 (d, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,73 (s, 2H), 2,58 (s, 3H).

Exemplo A7: 6-metóxi-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 406 (M+H)+, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,24 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (d, J=3, 1H), 7,15 (dd, J=3, 8,8, 1H), 6,96 (d, J=8,8, 1H), 2,77 (br s, 2H), 2,63 (s, 3H).

Exemplo A8: 6-bromo-7-metil-1 '-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 486(M+H)+, HPLC TR 2,64 minutos.

Exemplo A9: 5-flúor-6-metóxi-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 424 (M+H)+, HPLC TR 2,1 minutos.

Exemplo A10: 1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z (M+H)+

419 HPLC TR 1,6 minutos.

Exemplo A11: 1 '-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila, EM(ACPI) m/z 434 (M+H)+, HPLC TR 2,15 minutos.

Exemplo A12: 1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil]-6-

(trifluormetóxi)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 460 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos , 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,69-7,74 (m, 2Η), 7,38 (dd, J=2,6, 9,3, 1H), 7,07 (d, J=8,8, 1H), 2,80 (s, 2H), 2,59 (s, 3H).

Exemplo A13: 6-cloro-7-metil-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 424 (M+H)\ HPLC TR 2,5 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 9,40 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,79-7,81 (m, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 2,72 (s, 2H).

Exemplo A14: 6,7-dicloro -1'-[(7-metil-1 H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 444 (M+H)\ HPLC TR 2,6 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,20 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 2,78 (s, 2H), 2,65 (s, 3H).

Exemplo A15: 6-metil-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 390 (M+H)\ 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,68-7,69 (m, 2H), 7,34 (dd, J=2,6, 8,3, 1H),

7,27 (s, 1H), 6,93 (d, J=8,8), 2,75 (s, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,32 (s, 3H).

Exemplo A16: 6-metóxi-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]

espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 406 (M+H)+, HPLC TR 2,1 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,27 (d, J=3,1, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18 (d, J=3,3, 1H), 7,16 (d, J=3,1, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 4,91 (s, 2H), 3,78 (s, 3H), 2,60 (s, 3H).

Exemplo A17: 7-cloro-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil]

espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 410 (M+H)+, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,82 (d, J=8,2, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,02-7,03 (m, 1H), 2,77 (s, 2H), 2,58 (s, 3H).

Exemplo A18: 6-cloro-5,7-dimetil-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 438(M+H)+, HPLC TR 2,7 minutos.

Exemplo A19: 7-cloro-5-metóxi-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 440. 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,64 (m, 1H), 6,43-6,44 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 2,76 (s, 2H), 2,59 (s, 3H).

Exemplo A20: 1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil]-6- (trifluormetil)espiro[crcmeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 444 (Μ+Η)\ HPLC TR 2,5 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,18 (s, 1H), 8,13 (s,

1H), 7,76 (dd, J=2,0, 8,8, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,27 )s, 1H), 7,15 (d, J=8,8, 1H), 2,83 (s, 2H), 2,59 (s, 3H).

Exemplo A21: 6-cloro-7-flúor-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 426 (ΜΗ)’, HPLC TR 2,4 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,95 (d, J=8,3, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,85 (d, J=3,1, 1H), 2,77 (s, 2H), 2,59 (s, 3H).

Exemplo A22: 7-cloro-6-flúor-1'-[(Tr-ITietiM H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 428 (M+H)+, HPLC TR 2,4 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,17 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,62 (d, J=8,3, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,14 (d, J=5,7, 1H), 2,78 (s, 2H), 2,62 (s, 3H).

Exemplo A23: 6-isopropil-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 418(M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos.

Exemplo A24: 7-metóxi-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 406 (M+H)+, HPLC TR 2,0 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,14 (s, 1H), 7,82 (d, J=8,8, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,59 (dd, J=8,8, 2,6, 1H), 6,47 (dd, J=2,0, 1H), 3,87 (s, 3H), 2,73 (s, 2H), 2,60 (s, 3H).

Exemplo A25: 5-metóxi-1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 406 (M+H)+, HPLC TR 1,9 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,15 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,41 (t, J=8,3, 1H), 6,62 (d, J=8,8, 1H), 6,53 (d, J=8,3, 1H), 3,92 (s, 3H), 2,75 (s, 2H), 2,60 (s, 3H).

Exemplo A26: 6-cloro-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 410 (M+H)+, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,16 (s, 1H), 7,84 (d, J=2,6, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,46 (dd, J=8,8, 3,1, 1H), 7,00 (d, J=8,8, 1H), 2,78 (s, 2H), 2,61 (s, 3H).

Exemplo A27: N,N-dimetil-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbcnil]-4-

oxo-3,4-di-hidroespiro[cromenO'2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 447 HPLC TR 1,7 minutos. Exemplo A28: 7-metóxi-5-metil-1,-[(7-metil-1H-indazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+

420 HPLC TR 2,3 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,13 (s, 1H), 7,69 (s, 1H),

7,27 (s, 1H), 6,36-6,38 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 2,71 (s, 2H), 2,62 (s, 3H), 2,59 (s, 3H).

Exemplo A29: 5,7-dimetil-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos.

Exemplo A30: 5,7-dicloro-1'-[(7-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 444 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos.

Exemplo A31: 1 '-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carbonitrila, EM(ACPI) m/z 401 (M+H)+, HPLC TR 1,9 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,21-8,23 (m, 2H), 7,77 (dd, J=8,8, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,15 (d, J=8,8, 1H), 2,85 (s, 2H),

2,66 (s, 3H).

Exemplo A32: 1 '-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4,-piperidino]-7-carbonitrila, EM(ACPI) m/z 401 (M+H)+, HPLC TR 2,3 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,17 (s, 1H), 7,97 (d, J=7,7, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,30-7,32 (m, 1H), 2,84 (s, 2H), 2,62 (s, 3H).

Exemplo A33: Método C foi usado para preparar ácido 1'-[(7- metil-1H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'piperidino]-6-carboxílico sal de ácido trifluoroacético. A uma solução de metil 25 1’-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno], preparado por Método B, em MeOH/água (1,4 mL, 2:1), foi adicionado LiOH (7,5 mg). A solução foi aquecida a 50°C por 3 horas. A mistura reacional foi em seguida esfriada, concentrada, e purificada por meio de cromatografia de coluna. EM(ACPI) m/z 420 (M+H)+, HPLC TR 2,0 minutos. EM(ACPI) m/z 30 420 (M+H)+, HPLC TR 1,85 minutos.

Exemplo A34: 1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-7- fenilespiro[cromeno-2,4'-piperídin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 452 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos.

Exemplo A35: 1'-[(7-metil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-

(metilsulfonil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 454 (M+H)+, HPLC TR 1,85 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,47 (d, J=2,6, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,07 (dd, J=1,3, 8,8, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,22 (d, J=8,8, 1H), 3,08 (s, 3H), 2,86 (s, 2H), 2,60 (s, 3H).

Exemplos B1-B14

E- Mé R1 R2 R3 R4 ACC ACC ACC ACC EM(ACPI Hxe to¬ 1 1 2 2 ) PLC m- do Cl50 n* CI5O n* m/z TR plo (nM) (nM) (M+Hf (min ) B1 B H CH3 CH3 H 24,1 1 424 2,3 B2 B H O- H H 16,1 1 31,1 1 454 2,5 CH(CH3)2 B3 B H O- H H 21,4 1 34,3 1 440 2,4 CH2CH3 B4 B H Cl CH3 H 56,8 2 127 1 444 2,5 B5 B H OCH3 H H 81,0 1 231 1 426 2,3 B6 B OC H H H 109 1 426 1,9 H3 B7 B H H OC H 166 1 426 2,1 H3 B8 B H Cl H H 166 1 428 2,5 B9 B Cl H Cl H 180 1 465 2,6 B10 B H F Cl H 209 1 448 2,4 B11 B F OCH3 H H 217 1 444 2,1 B12 B H CO H H 257 3 464 2,5 UO B13 B H Cl F H 287 1 446 2,5 B14 B H CN H H 331 1 421 2,2 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo B1: 1 ’-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,16 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 5,29 (s, 1H), 2,70 (s, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).

Exemplo B2: 1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-

isopropoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ

8,18 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,32-7,33 (d, 1H), 7,10-7,12 (dd, 1H), 6,94-6,96 (d, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 2,84 (br s, 2H), 2,75 (br s, 2H), 1,32- 1,34 (d, 6H).

Exemplo B3: 1 ’-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-etoxiespiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,18 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,30-7,31 (d, 1H), 7,12-7,15 (dd, 1H), 6,95-6,97 (d, 1H), 4,01-4,05 (q, 2H), 2,84 (s, 2H), 2,75 (s, 2H), 1,40-1,43 (t, 3H).

1 Exemplo B4: 6-cloro-7-metil-1'-[(7-cloro-1H-indazol-5-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,16 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 2,72 (s, 2H), 2,38 (s, 3H).

Exemplo B5: 1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,16 (s, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,28-7,30 (m, 1H), 7,10-7,14 (m, 1H), 6,91-6,95 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,73 (s, 2H).

Exemplo B6: 1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-5-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,19 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,41-7,44 (m, 1H), 6,63 (d, J=8,3, 1H), 6,54 (d, J=8,3, 1H), 3,93 (s, 3H), 2,75 (s, 2H).

Exemplo B7: 1'-[(7-cloro-1H-indazol-5-il)carbonil]-7-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,18 (s, 1H), 7,83 (d, J=5,2, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,59-6,62 (m, 1H), 6,47-6,48 (m, 1 Η), 3,87 (s, 3Η), 2,73 (s, 2Η).

Exemplo Β8: 6-cloro-1'-[(7-cloro-1H-indazol-5-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCb) δ 8,19 (s, 1H), 7,85 (d, J=3,1, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,47 (dd, J=8,8, 2,5, 1H), 7,00 (d, J=8,8, 1H), 2,78 (s, 2H).

Exemplo B9: 5,7-dicloro-1'-[(7-cloro-1H-indazol-5-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ

8.18 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,08 (d, J=2,1, 1H), 7,01 (d, J=1,5, 1H), 2,81 (s, 1H).

Exemplo B10: 7-cloro-1'-[(7-cloro-1H-indazol-5-il)carbonil]-6-

fluorespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,18 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8,3, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,15 (d, J=5,7, 1H), 2,78 (s, 2H).

Exemplo B11: 1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-5-flúor-6- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo B12: 1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-

(trifluormetil)espiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ

8.19 (s, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,76 (dd, J=8,3, 2,1, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,16 (d, J=8,9, 1H), 2,84 (s, 2H).

Exemplo B13: 6-cloro-1'-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-7-

fluorespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,15 (s, 1H), 7,90-7,93 (m, 1H), 7,75 (d, J=1,2, 1H), 7,47 (d, J=1,2, 1H), 6,83 (d, J =9,6, 1H), 2,75 (s, 2H).

Exemplo B14: 1 ’-[(7-cloro-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carbonitrila.

Exemplos C1-C5 Exemplo Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM(ACPI) Htodo CI50 n* m/z PLC (nM) (M+H)+ TR (min) C1 B H CO I CO H 17,5 2 418 2,5 X I O O C2 B H OCH3 H H 22,6 2 420 2,2 C3 B OCH3 H CH3 H 29,5 2 434 2,2 C4 B H Cl CO I H 30,6 2 438 2,7 X 1 O C5 B H CO(O)CH3 H H 49,8 2 448 2,3 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo C1: 1 '-[(7-etil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6,7-dimetilespiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo C2: 1 '-[(7-etil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-6-metoxiespiro [cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo C3: 1'-[(7-etil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-5-metóxi-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo C4: 6-cloro-1 '-[(7-etil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

1u Exemplo C5: 1'-[(7-etil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di

hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila.

Exemplos D1-D3

Exemplo Método R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM(ACPI) HPLC Cl50 n* m/z (M+H)+ TR (nM) (min) D1 B H O CH3 H 57,9 1 404 2,5 X CO D2 B H OCH3 H H 216 1 406 2,2 D3 B H Cl CO H 250 1 424 2,7 X O * - n é ο número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo D1: 6,7-dimetil-1'-[(1-metil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo D2: 6-metóxi-1'-[(1-rrietil-1H-indazol-5-il)carbonil]

espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo D3: 6-cloro-7-metil-1'-[(1-frietil-1H-indazol-5-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplos E1-E4

R8 R6

E- R5 Méto¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 xem- R9-^ ^-R7 do CI50 n* plo R8 R6 (nM) E1 _ / B H 0 CH3 H 96,5 2 N 1 H CO E2 _ / B H Cl CH3 H 108 2 N H E3 V \ B H CH3 CH3 H 9,8 1 /N "1 E4 B H C(O)OCH3 H H 54,3 1 Γ \ . N L// * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo E1: 1'-(1H-indazol-5-ilcarbonil)-6,7-dimetilespiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 390 (M+H)+, HPLC TR 2,2

minutos.

Exemplo E2: 6-cloro-1'-(1H-indazol-5-ilcarbonil)-7-metilespiro

[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 410 (M+H)+, HPLC TR 2,3 minutos.

Exemplo E3: 1'-[(3,7-dimetil-1H-indazol-5-il)carbonil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 418, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplo E4: 1 '-[(3,7-dimetil-1 H-indazol-5-il)carbonil]-4-oxo-3,4- di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 448 HPLC TR 2,3 minutos.

Exemplos F1-F5

Exem¬ Méto¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM(ACPI) Hplo do CI50 n* m/z PLC (nM) (M+H)+ TR (min) F1 B H CH3 CH3 H 35,7 1 404 2,5 F2 B H OCH3 H H 49,2 1 406 2,1 F3 B H Cl CO H 107 1 424 2,5 I O i F4 B H C(O)OCH3 H H 126 1 434 2,3 F5 C H C(O)OH H H 586 1 420 2,0 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo F1: 6,7-d imetil-1 ’-[(3-metil-1 H-indazol-6-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo F2: 6-metóxi-1'-[(3-metil-1H-indazol-6-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo F3: 6-cloro-7-metil-1'-[(3-metil-1 H-indazol-6- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo F4: 1'-[(3-metil-1 H-indazol-6-il)carbonil]-4-oxo-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila.

Exemplo F5: Método C foi usado para formar ácido 1'-[(3-metil

1 H-indazol-6-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6- carboxílico, sal de ácido trifluoroacético. Método B foi usado para preparar 1'-[(3-metil-1 H-indazol-6-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'piperidino]-6-carboxilato de metila. A uma solução de 1'-[(3-metil-1 H-indazol6-il)carbonil]-4-oxo-3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila em MeOH/água (1,4 mL, 2:1), foi adicionado LiOH (7,5 mg). A solução foi aquecida a 50°C por 3 horas. A mistura reacional foi em seguida esfriada, concentrada, e purificada por meio de cromatografia de coluna (16,6 mg, 33%).

Exemplos G1-G5 Ex Mé¬ R R2 R3 R R Ra Rb ACC1 ACC EM(ACP Hem todo 1 4 9 CI50 1 i) PLC pio (nM) n* m/z TR (M+H)+ (min ) G1 A1 H CH CH H H H H 271 1 390 1,56 3 3 G2 Al H CH CH H H CH H 167 2 404 1,67 3 3 3 G3 Al H CH CH H H CH CH3 75,4 2 418 1,71 3 3 3 G4 A1 H CH CH H H CH CH2C 80,1 2 432 1,84 3 3 3 H3 G5 A H Cl H H B H H >1,00 1 475 1,77 r 0 * - n é c número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo G1: 1'-(1 H-indazol-6-ilcarbonil)-6,7-dimetilespiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona sal de ácido trifluoroacético.

Exemplo G2: 6,7-dimetil-1 '-[(1-metil-1 H-indazol-6-il)carbonil] espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo G3: 1 '-[(1,3-dimetil-1 H-indazol-6-il)carbonil]-6,7- dimeti · spiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo G4: 1 ’-[(3-etil-1 -metil-1 H-indazol-6-il)carbonil]-6,7- dimetik spiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo G5: 1'-[(7-bromo-1H-indazol-6-il)carbonil]-6-

cloroe; piro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemt os H1-H24 Exem¬ Método R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM (AC¬ Hplo CI50 n* PI) PLC (nM) m/z TR (M+H)+ (min) Η1 D H CH3 OH3 H 163 2 390 2,5 H2 B H CH3 Cl H 226 1 410 2,55 H3 B H Br I H 264 1 454 2,65 CO X Oi H4 B OCH3 H CH3 H 279 1 406 2,1 H5 B H Cl CH3 H 321 1 410 2,5 H6 B F OCH3 H H 381 1 410 2,15 H7 B H OCH3 H H 562 1 392 2,25 H8 B CH3 Cl CO H 590 1 424 2,7 I O H9 B H CH3 H H 634 1 376 3,2 H10 B H i- H H 693 1 404 2,6 propila H11 B OCH3 OCH3 ro O H 756 1 452 2 I ' CO I H12 B H H CH3 H 850 2 376 2,3 H13 E H CH3 H CH3 1320 1 390 3,4 H14 E H Cl H H 1390 1 396 3,4 H15 B Cl H Cl H 1480 1 400 2,6 H16 E OCH3 H H H 1620 1 392 2,7 H17 B OCH3 Cl H H 1830 1 426 2,3 H18 B H H feni- H 2210 1 438 2,65 Ia H19 D H H F H 2 350 2 380 2,2 H 20 D OCH3 H H H 2430 2 392 2,0 H21 B H H O- H 2530 1 392 2,1 CH3 H22 B H Cl H Cl 2660 1 430 2,6 H23 B H H H H >3000 1 362 2,2 H24 B H H H H 3540 1 362 2,2 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo H1: Método D foi usado para formar 1'-(1 H-indazol-7- ilcarbonil)-6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona. Especificamente, em um frasco de 1 dracma foram adicionados 260 μΙ_ de solução 5 0,25 M de 6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona dissolvidos em uma solução de trietilamina 1 M em CH2CI2. Nessa foram adicionados 260 pL de uma solução 0,25 M de ácido 1 H-indazol-7-carboxílico em CH2CI2. A mistura foi girada em rotação e nessa mistura foram adicionados 260 pL de HATU em CH2CI2. O frasco foi girado em rotação e em seguida agitado vigo10 rosamente sob temperatura ambiente por 16 horas. A mistura reacional bruta foi purificada por meio de cromatografia líquida para proporcionar o produto do título.

Exemplo H2: 7-cloro-1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-6-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H3: 6-bromo-1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H4: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-5-metóxi-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H5: e-cloro-V-CIH-indazol^-ilcarbonil)^

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H6: 5-flúor-1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-6-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H7: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-6-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H8: 6-cloro-1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-5,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H9: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-6-metilespiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H10: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-6-

isopropilespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H11: 1'-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)-5,6,7-

tnmetoxiespirofcromeno^^-piperidinJ^SHJ-ona. Exemplo H12: 1'-(1H-indazol-7-ílcarbonil)-7-metilespiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H13: Método E foi usado para formar 1'-(1H-indazol-7- ilcarbonil)-6,8-dimetilespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona. Em uma poço de 2,2 mL em uma placa de 96 poços de profundidade foi adicionada uma solução de ácido 1H-indazol-7-carboxílico (0,5 mL de solução de DMF 0,5 M), uma solução de 6,8-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (0,5 mL de solução de DMF 0,5 M), e uma solução de HATU (0,5 mL de solução de DMF 0,5 M). A essa solução foi adicionada trietilamina (3 equivalentes). A placa foi selada e agitada por 16 horas. Os solventes foram removidos por meio de evaporação centrífuga sob pressão reduzida. Os resíduos foram dissolvidos em CH2CI2 (1 mL), e lavados seqüencialmente com K2CO3 (2 x 0,7 mL de solução 0,5 M) e água (0,7 mL) antes de ser transferidos para uma placa de coleta. O resíduo aquoso final foi reextraído com CH2CI2 (0,5 mL), combinado com o primeiro extrato de CH2CI2 e evaporado até secura. EM(ACPI) m/z 390.(M+H)+, HPLC TR 3,4 minutos.

Exemplo H14: 6-cloro-1 '-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)espiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H15: 5,7-dicloro-1'-(1 H-indazol-7-ilcarbonil) espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H16: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-5-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H17: 6-cloro-1'-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)-5-

metoxiespiro[crcmeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H18: 1'-(1H-indazol-7-ilcarbonil)-7-fenilespiro[cromeno

2,4’-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H19: 7-flúor-1 '-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)espiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H20: 1'-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)-5-

metoxiespiro[crcmeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,11 (s, 1H), 7,85 (d, J=7,9, 1H), 7,37-7,42 (m, 2H), 7,14-7,18 (m, 1H), 6,61 (d, J=8,3, 1H), 6,52 (d, J=8,3, 1H), 3,90 (s, 3H), 2,72 (s, 2H). Exemplo H21: 1'-(1 H-indazol-7-ilcarbonil)-7-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H22: 6,8-dicloro-1'-(1H-indazol-7-

ilcarboniOespirofcromeno^^^piperidinJ^SH^ona.

Exemplo H23: 1'-[(1H-indazol-7-il)carbonil]-6-cloro-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo H24: 1'-[(1H-indazol-7-il)carbonil]-6-cloro-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplos J1-J3

Exem

plo

R5

Méto

do

R1

R

R9-

R7

ACC1

CI50

(nM)

ACC1

J1

Br

R8 R6

B

H

Cl

CH,

H

345

N

H

J2

B

H

Cl

CH3

H

375

N

J3

B

H

CH3

CH2

H

353

N—

N

* - n é 0 número de vezes que 0 ensaio foi realizado.

Exemplo J1: 1'-[(5-bromo-1 H-indazol-7-il)carbonil]-6-cloro-7- metilespirotcromeno^^-piperidinH^H^ona, EM(ACPI) m/z 488 (M+H)+, HPLC TR 2,8 minutos.

Exemplo J2: 6-cloro-1'-(1H-indazol-4-ilcarbonil)-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 410 (M+H)+, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,14 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,59 (d, J=8,3, 1H), 7,44-7,47 (m, 1H), 7,23 (d, J=6,8, 1H), 6,95 (s, 1H), 2,75 (s, 2H), 2,40 (s, 3H).

Exemplo J3: 6,7-dimetil-1'-[(2-metil-2H-indazol-6-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplos K1-K3

Exemplo Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM(ACPI) Htodo CI50 n* m/z PLC (nM) (M+H)+ TR (min) K1 A H CH3 CO H 9,98 1 458 1,62 X O K2 A OCH3 H H H 28,8 1 460 1,28 K3 A H Cl H H 106 1 464 1,66 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo K1: 6,7-dimetil-1'-[(1-oxo-2,3,4,9-tetra-hidro-1 H-betacarbolin-6-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo K2: S-metóxi-l-K^-oxo^.S^.g-tetra-hidro-IH-betacarbolin-6-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo K3: 6-cloro-1'-[(1-oxo-2,3,4,9-tetra-hidro-1 H-betacarbolin-6-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona. Exemplos L1-L48

Exem R5 Mét R1 R2 R3 R ACC1 ACC pio R9---^ ^-R7 odo 4 CI50 1 R8 R6 (nM) n* L1 WV H A1 H CH CH H 190 1 ^Ν\ 3 3 L2 i H A1 H CH CH H 155 2 3 3 L3 H A1 H CH CH H 368 2 3 3 L4 A H CH CH H 83,3 1 3 3 L5 A H Cl H H <1,00 1 0 L6 Cl A CO H H H 47,3 1 ό δ L7 Cl A H Cl H H 183 1 L8 H B H Cl CH H 456 1 rN 3 L9 H A H CH CH H 43,8 1 rN 3 3 Cl LI O H A O O H H H 101 1 ΓΝ\ ^ ' Cl I CO L11 H A CO H H H 113 1 L) ό δ LI 2 H A H Cl H H <1,00 1 LJ 0 LI 3 ^^0 A H CH CH H <3,00 1 3 3 0 LI 4

H

—* VS/y

Al

H

CH

3

CH

3

H

479

L15

Al

H

CH

3

CH

3

H

415

LI 6

O

CH3

H

65,0

LI 7

VvV

-N H

A1

H

CH

3

CH

H

885

L18

N

// \ N

B

H

Cl

CH

3

H

2010

L19

•M,

H

A1

H

CH

3

CH

3

H

<3000

L20

VVV

-N

n'

H

Λ

A1

H

CH

3

CH

3

H

919

OH L29 ^)---N I A H CH CH H 130 1 N 3 3 \ L30 B H H H H 390 2 L31 B 0- H H H 1140 1 CH3 L32 0 A1 H CH CH H 190 1 N\ 3 3 L33 c> A H CH CH H 99,9 1 N 3 3 H L34 c> A H Cl H H >1,00 1 N 0 H L35 --nMD A1 0- H H H 15,5 1 H CH3 L36 V Ό< -N7 V_^ A H CH CH H 50,7 1 H 3 3 L37 V Γ \χ A H CH CH H 151 1 N 3 3 N7 H L38 Γ \Ν A H Cl H H <1,00 1 N 0 N7 H L39 Ή Α1 H CH CH H 362 1 Vn 3 3 L40 V / Ν B H Cl CH H 4860 1 3 L41 \ /N Α1 H CH CH H <3000 1 N 3 3 I L42 Vn A H Cl H H >1,00 1 0 L43 0 Α1 H CH CH H 121 1 3 3 L44 A H CH CH H <3000 1 3 3 L45 \ / A H CH CH H <3000 1 3 3 L46 C c> B H Cl CH H 369 1 3 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo L1:1'-(1 H-indol-7-ilcarbonil)-6,7-dimetilespiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 389 (M+H)+, HPLC TR 1,9 minutos.

Exemplo L2: 1'-(1H-indol-6-ilcarbonil)-6,7-dimetilespiro[cromeno

2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 389 (M+H)\ HPLC TR 1,80 minutos.

Exemplo L3: 6,7-dimetil-1’-[(2-metil-1H-indol-6-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 403 (M+H)+, HPLC TR 1,89 minutos.

Exemplo L4: 6,7-dimetil-1'-[(1-metil-1 H-indol-6-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 403 (M+H)\ HPLC TR 1,88.

Exemplo L5: 6-cloro-1'-[(1 -metil-1 H-indol-6-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 409 (M+H)+’ HPLC TR 2,08.

Exemplo L6: 1'-[(3-cloro-1 H-indol-6-il)carbonil]-5-

metoxiespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 425 (M+H)+, HPLC TR 1,63.

Exemplo L7: 6-cloro-1'-[(3-cloro-1 H-indol-6-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 429 (M+H)+, HPLC TR 1,9.

Exemplo L8: 6-cloro-1'-(1H-indol-5-ilcarbonil)-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456 (M+H)+, HPLC Tempo de Retenção 2,8 minutos, 1H de RMN (DMSO-de) δ 11,29 (s, 1H), 7,63-7,64 (m, 2H), 7,41-7,43 (m, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,14-7,15 (m, 2H), 6,48 (s, 1Η), 2,87 (s, 2Η), 2,35 (s, 3Η).

Exemplo L9: 1'-[(3-cloro-1H-indol-5-il)carbonil]-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 423 (M+H)\ HPLC TR 1,85.

Exemplo L10: 1'-[(3-cloro-1H-indol-5-il)carbonil]-5-

metoxiespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 425 (M+H)+, HPLC TR 1,54.

Exemplo L11: 1'-[(2,3-dimetil-1H-indol-5-il)carbonil]-5- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 419 (M+H)+, HPLC TR 1,68.

Exemplo L12: 6-cloro-1'-[(2,3-dimetil-1H-indol-5-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 423 (M+H)\ HPLC TR 1,88.

Exemplo L13: 6,7-dimetil-1'-[(2-oxo-2,3-di-hidro-1H-indol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 405 (M+H)+, HPLC TR 1,45.

Exemplo L14: 1'-(1H-indol-4-ilcarbonil)-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 389 (M+H)+, HPLC TR 1,7771 minutos.

Exemplo L15: 6,7-dimetil-1'-[(1-metil-1 H-indol-4-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 403 (M+H)+, HPLC TR 1,88 minutos.

Exemplo L16: 5-metóxi-1 '-(2,3,4,9-tetra-hidro-1 H-carbazol-6- ilcarbonil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 445 (M+H)+, HPLCTR 1,7.

Exemplo L17: 1'-(1H-benzimidazol-4-ilcarbonil)-6,7-

dimetilespir0[cr0men0'2,4'-piperidin]-4(3H)-0na, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 390 (M+H)+, HPLC TR 1,24 minutos.

Exemplo L18: 1'-(1H-benzimidazol-4-ilcarbonil)-6-cloro-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 410 (M+H)+, HPLC TR 2,2 minutos, 1H de RMN (DMSOd6) δ 8,61 (s, 1H), 7,72 (d, J=8,3, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,34 (t, J=7,8, 1H), 7,29 (d, J=7,3, 1H), 7,16 (s, 1H), 2,86 (s, 2Η), 2,35 (s, 3Η).

Exemplo LI 9: 6,7-dimetil-1'-[(2-metil-1H-benzimidazol-4- il)carbonil]espiro[cromeno-2,^-PiperidinH(SH)-Ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 1,28 minutos.

Exemplo L20: 1 '-{[2-(hidroximetil)-1 H-benzimidazol-6-il]carbonil}

6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 420 (M+H)+, HPLC TR 1,17 minutos.

Exemplo L21: 1 '-[(1 -isopropil-1 H-benzimidazol-4-il)carbonil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético,

EM(ACPI) m/z 432 (M+H)+, HPLC TR 1,38 minutos.

Exemplo L22: 1'-(1 H-benzimidazol-5-ilcarbonil)-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 390 (M+H)+, HPLC TR 1,17 minutos.

Exemplo L23: 6,7-dimetil-1'-[(1 -metil-1 H-benzimidazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 1,21 minutos.

Exemplo L24: 6,7-dimetil-1'-[(2-metil-1 H-benzimidazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 404 (M+H)+, HPLC TR 1,18 minutos.

Exemplo L25: 6,7-dimetil-1'-{[2-(trifluormetil)-1 H-benzimidazol-5-

il]carbonil}espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 458 (M+H)+, HPLC TR 1,68 minutos.

Exemplo L26: 6,7-dimetil-1'-[(2-piridin-2-il-1 H-benzimidazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 467 (M+H)+, HPLC TR 1,47 minutos.

Exemplo L27: 1 '-[(4-cloro-7-metóxi-2-metil-1 H-benzimidazol-6- il)carbonil]-6,7-dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 474 (M+H)+, HPLC TR 1,45 minutos.

Exemplo L28: 1 '-[(1,2-dimetil-1 H-benzimidazol-5-il)carbonil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-[ iperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 344, HPLC TR 1,21 minutos.

Exemplo L29: 6,7-dimetil-1 '-[(1 -metil-2-pirrolidin-1 -ii-1 Hbenzimidazol-5-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona,

EM(ACPI) m/z 473 (M+H)\ HPLC TR 1,33 minutos.

Exemplo L30: 1'-{[2-etil-1-(3-metoxifenil)-1 H-benzimidazol-5- il]carbonil}espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 496 (M+H)+, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplo L31: 1'-{[2-etil-1-(3-metoxifenil)-1 H-benzimidazol-5- il]carbonil}-5-metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 526 (M+H)+, HPLC TR 2,1 minutos.

Exemplo L32: 6,7-dimetil-1'-[(1-rnetil-2-oxo-2,3-di-hidro-1Hbenzimidazol-5-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona,

EM(ACPI) m/z 420 (M+H)+, HPLC TR 1,46 minutos.

Exemplo L33: 1'-(1H-benzimidazol-6-ilcarbonil)-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 390 (M+H)+, HPLC TR 1,16.

Exemplo L34: 1'-(1 H-benzimidazol-5-ilcarbonil)-6-

cloroespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 396 (M+H)+, HPLC TR 1,13.

Exemplo L35: 5-metóxi-1'-[(2-fenil-1H-benzimidazol-6-il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 468 (M+Hf, HPLCTR 1,12.

Exemplo L36: 6,7-dimetil-1'-[(2-piridin-4-il-1H-benzimidazol-6- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 467 (M+H)+, HPLC TR 1,30 minutos.

Exemplo L37: 1'-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 391 (M+H)+, HPLC TR 1,57 minutos.

Exemplo L38: 1'-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-6- cloroespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 397 (M+H)+, HPLC TR 1,47 minutos.

Exemplo L39: 1'-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 391 (M+H)+, HPLC TR 1,46 minutos. Exemplo L40: 1 '-(1H-1,2,3-benzotriazol-5-ilcarbonil)-6-cloro-7- metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (DMSO-de) δ 8,11 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 2,87 (s, 2H), 2,35 (s, 3H); EM(ACPI) m/z 411 (M+H)+, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplo L41: 6,7-dimetil-1'-[(1-metil-1 H-1,2,3-benzotriazol-5-

il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 405 (M+H)+, HPLC TR 1,53 minutos.

Exemplo L42: 6-cloro-1'-[(1-isopropil-1H-1,2,3-benzotriazol-5- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 439 (M+H)+, HPLC TR 1,72 minutos.

Exemplo L43: 6,7-dímetÍM ’-(quinolin-6-ilcarbonil)espiro[cromeno2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 401 (M+H)+, HPLC TR 1,38 minutos.

Exemplo L44: 6,7-dimetil-1'-[(2-oxo-1,2,3,4-tetra-hidroquinolin-6- il)carbonil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 419 (M+H)+, HPLC TR 1,49 minutos.

Exemplo L45: 6,7-dimetil-1'-(quinoxalin-6-

ilcarbonil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 402 (M+H)+, HPLC TR 1,53 minutos.

Exemplo L46: 1 *-(1,3-benzoxazol-5-ilcarbonil)-6-cloro-7-

metilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z (M+H)+ 411. 1H de RMN (CDCI3) δ 8,74 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 6,99-7,01 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,79-6,81 (d, 1H), 2,74 (s, 2H), 2,41 (s, 3H). Exemplos M1-M36 Exem¬ Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 ACC2 ACC2 plo todo Cl50 n* CI50 n* (nM) (nM) Μ1 B OCH3 H CO H 37,5 2 X O M2 B H CO CH3 H 73,6 1 X O M3 B H Cl CO H 105 1 434 1 X O M4 B H -C(O)NHCH3 H H 110 1 M5 B H -C(O)NH2 H H 118 1 M6 B H OCH3 H H 129 1 M7 B H O Cl H 140 1 X CO M8 B H Cl Cl H 178 1 M9 B H pirrolidin-1-il- H H 179 1 C(O)M10 B H Br CH3 H 201 1 M11 B H C(O)OCH3 H H 202 1 M12 B H H CO H 205 1 X O M13 B H OCF3 H H 220 1 M14 B F OCH3 H H 223 1 M15 B H H Cl H 233 1 M16 B Cl H Cl H 319 1 M17 B H C(O)NHCH(CH3)2 H H 350 1 M18 B OCH3 Cl H H 374 1 M19 B H O H H 418 1 τι CO M20 B H -S(O)2CH3 H H 434 1 M21 B OCH3 OCH3 OCH3 H 439 1 M22 B 0 Cl CO H 452 1 1 X CO O M23 B H CH3 H H 475 M24 B H Cl F H 478 1 M25 B H H OCH3 H 481 1 M26 B H i-propila H H 516 1 M27 B OCH3 H H H 545 4 M28 B H H -CN H 556 1 M29 B H -C(O)N(CH3)2 H H 574 1 M30 B H Cl H H 613 1 M31 B H OCH3 OCH3 H 697 1 M32 B H morfolin-4H I-C(O)- H H 737 1 M33 B H -CN H H 816 2 1860 1 M34 B H H F H 817 4 M35 B H Cl H Cl 1400 1 M36 B H F Cl H 1990 1 * - n é ο número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo M1: 5-metóxi-7-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 432 (M+H)\ HPLC TR 2,1 minutos.

Exemplo M2: 6,7-dimetil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 416 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos.

Exemplo M3: 6-cloro-7-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 436 (M+H)\ HPLC TR 2,58 minutos.

Exemplo M4: N-metil-4-oxo-1 '-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-3,4-dihidroespirotcromeno^^-piperidinoj-e-carboxamida, EM(ACPI) m/z 445 (M+H)+, HPLC TR 1,7 minutos.

Exemplo M5: 4-oxo-1'-[3-(1H-pirazol-3-il)benzoil]-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z 431 (M+H)+, HPLC TR 1,6 minutos.

Exemplo M6: 6-metóxi-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 418 (M+H)+, HPLC TR 2,2 minutos.

Exemplo M7: 7-cloro-6-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 436 (M+H)+, HPLC TR 2,59 minutos. Exemplo M8: 6,7-dicloro-1’-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,95 (s, 1H), 7,87 (s,

1H), 7,85 (s, 1H), 7,69 (d, J=2,6, 1H), 7,49 (t, J=7,8, 1H), 7,38 (d, J=7,8, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,68 (d, J=2,6, 1H), 2,77 (s, 2H).

Exemplo M9: 1'-[3-(1H-pirazol-3-il)benzoil]-6-(pirrolidin-1- ilcarbonil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 485 (M+H)+, HPLC TR 1,9 minutos.

Exemplo M10: 6-bromo-7-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 480 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos.

Exemplo M11: 4-oxo-1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxilato de metila, EM(ACPI) m/z 446 (M+H)+, HPLC TR 2,3 minutos.

Exemplo M12: 7-metil-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 402 (M+H)+, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplo M13: 1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6-

(trifluormetoxi)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPl) m/z 472 (M+H)\ HPLC TR 2,6 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,03 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,89 (d, J=7,8, 1H), 7,80 (m, 1H), 7,73-7,74 (m, 1H), 7,49-7,55 (m, 1H), 7,43-7,44 (m, 1H), 7,38-7,39 (m, 1H), 7,07 (d, J=9,4, 1H), 6,72 (br s, 1H), 2,81 (s, 2H).

Exemplo M14: 5-flúor-6-metóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidinJ-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 436.(M+H)+, HPLC TR 2,2 minutos.

Exemplo M15: 7-cloro-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 422 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,84-7,85 (m, 3H), 7,82 (d, J=8,8, 1H), 7,50 (t, J=7,8, 1H), 7,41 (d, J=7,8, 1H), 7,01-7,08 (m, 2H),

6,70 (s, 1H), 2,80 (s, 2H).

Exemplo M16: 5,7-dicloro-1'-[3-(1H-pirazol-3- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456 (M+H)+, HPLC TR [2,6] minutos.

Exemplo M17: N-isopropil-4-oxo-1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]

3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z 473 (M+H)+, HPLC TR 2,0 minutos.

Exemplo M18: 6-cloro-5-metóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 452.(M+H)+, HPLC TR 2,3 minutos.

Exemplo M19: 1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6-

(trifluormetil)espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456 (M+H)\ HPLC TR 2,6 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,18 (d, J=2,0, 1H), 7,85-7,87 (m, 2H), 7,75-7,77 (m, 1H), 7,65-7,66 (m, 1H), 7,47-7,50 (m, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,15 (d, J=8,3, 1H), 6,66 (d, J=2,6, 1H), 2,82 (s, 2H).

Ex: M20: 6-(metilsulfonil)-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456 (M+H)\ HPLC TR 1,7 minutos, 1H de RMN (CD3OD) δ 8,37 (d, J=2,1, 1H), 8,10 (dd, J=2,6, 8,8, 1H), 7,88 (br s, 2H), 7,73 (brs, 1H), 7,53 (br s, 1H), 7,34 (d, J=8,8, 1H), 6,75 (s, 1H), 5,51 (s, 1H), 3,32 (s, 3H), 3,13 (s, 2H).

Exemplo M21: 5,6,7-trimetóxi-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 478 (M+H)\ HPLC TR 2,1 minutos.

Exemplo M22: 6-cloro-5,7-dimetil-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 450 (M+H)\ HPLC TR 2,85 minutos.

Exemplo M23: 6-metil-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperÍdin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 402 (M+H)+, HPLC TR [2,4] minutos.

Exemplo M24: 6-cloro-7-flúor-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 440 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,94-7,97 (m, 1H), 7,84-7,85 (m, 2H), 7,69 (d, J=2,1, 1H), 7,50 (t, J=7,8, 1H), 7,40 (d, J=7,2, 1H), 6,84 (d, J=9,3, 1H), 6,69 (d, J=2,1, 1H), 2,77 (s, 2H). Exemplo M25: 7-metóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiiO[ciOmeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 418.(M+H)\ HPLC TR 2,25 minutos.

Exemplo M26: 5-metóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-pipendin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 430 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos

Exemplo M27: 5-metóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

iObenzoillespirotcromeno^^-piperidinHKSHVona, EM(ACPI) m/z 418 (M+H)+, HPLC TR 2,0 minutos.

Exemplo M28: 1'-(1H-lndazol-7-ilcarbonil)-6-

metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 413 (M+H)+, HPLC TR 2,3 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,97 (d, J=7,8, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,89 (d, J=7,7, 1H), 7,81 (d, J=2,6, 1H), 7,53 (t, J=7,8, 1H), 7,44 (d, J=7,8, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,30 (d, J=6,7, 1H), 6,72 (d, J=2,0, 1H), 2,86 (s, 2H). Exemplo M29: N,N-dimetil-4-oxo-1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]

3,4-di-hidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carboxamida, EM(ACPI) m/z 459 (M+H)+, HPLCTR 1,9 minutos.

Exemplo M30: 6-Cloro-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 422.(M+Hf, HPLC TR 2,4 minutos.

Exemplo M31: 6,7-Dimetóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 448 (M+H)\ HPLC TR 2,3 minutos.

Exemplo M32: 6-(morfolin-4-ilcarbonil)-1'-[3-(1H-pirazol-3- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 501 (M+H)\ HPLC TR 1,9 minutos.

Exemplo M33: 4-oxo-1'-[3-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4'-piperidino]-6-carbonitrila, EM(ACPI) m/z 413 (M+H)+, HPLC TR 2,2 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 8,21 (d, J=2,1, 1H), 30 7,90 (s, 1H), 7,87 (d, J=7,8, 1H), 7,76 (dd, J=8,3, 2,0, 1H), 7,72 (d, J=2,6, 1H), 7,50 (t, J=7,7, 1H), 7,40 (d, J=7,3, 1H), 7,15 (d, J=8,3, 1H), 6,69 (d, J=2,0, 1H), 2,84 (s, 2H). Exemplo M34: 7-Flúor-1'-[3-(1H-pirazol-3-

iObenzoiQespirotcromeno^^-piperidinHÍSH^ona, EM(ACPI) m/z 406 (M+H)+, HPLC TR 2,25 minutos.

Exemplo M35: 6,8-dicloro-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 456.(M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos.

Exemplo M36: 7-cloro-6-flúor-1'-[3-(1 H-pirazol-3-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 440 (M+H)+, HPLC TR 2,5 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,86-7,88 (m, 2H), 7,70 (d, J=2,1, 1H), 7,62 (d, J=8,3, 1H), 7,49 (t, J=7,8, 1H), 7,39 (d, J=7,8, 1H), 7,14 (d, J=5,7, 1H), 2,77 (s, 2H).

Exemplos N1-N3

O

Ex Mé¬ R R2 R R ACC ACC ACC ACC EM(ACP Hem todo 1 3 4 1 1 2 2 l) PLC pio Cl50 n* CI50 n* m/z TR (nM) (nM) (M+H)+ (min ) N1 C H C(O)O H H 891 1 432 1,9 H N2 B H O H H 43,2 1 91,7 1 432 2,5 CH2CH 3 N3 B H O- H H 48,3 1 54,8 1 446 2,6 CH(CH3 h * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo N1: ácido 4-oxo-1'-[3-(1H-pirazol-3-il)benzoil]-3,4-dihidroespiro[cromeno-2,4’-piperidino]-6-carboxílico, sal de ácido trifluoroacétiCO.

Exemplo N2: 6-etóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-il)benzoil]espiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, RMN de

1H (CDCI3) δ 7,87 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,67-7,68 (d, 1H), 7,46-7,49 (m, 1H), 7,37-7,39 (d, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,12-7,14 (dd, 1H), 6,94-6,96 (d, 1H), 6,66-

6.67 (d, 1H), 4,01-4,05 (q, 2H), 2,74-2,75 (m, 2H), 1,40-1,43 (t, 3H).

Exemplo N3: 6-isopropóxi-1'-[3-(1H-pirazol-3-il)benzoil]espiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, RMN de

1H (CDCI3) δ 7,87 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,67 (m, 1H), 7,46-7,49 (m, 1H), 7,37- 7,39 (m, 1H), 7,31-7,32 (d, 1H), 7,09-7,11 (dd, 1H), 6,93-6,95 (d, 1H), 6,66-

6.67 (m, 1H), 4,49-4,55 (q, 1H), 2,74-2,75 (m, 2H), 1,32-1,33 (d, 6H). Exemplos 01-04

Exemplo Método R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 EM(ACPI) HPLC CI50 n* m/z (M+H)+ TR (nM) (min) 01 B H H H H 916 1 388 2,1 02 B Cl H OCH3 H 55,0 1 452 03 B OCH3 H Cl H 455 1 452 04 B CH3 H OCH3 H 468 1 432 2,5 * - n é o número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo 01: 1'-[3-(1 H-pirazol-5-il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'piperidin]-4(3H)-ona.

Exemplo 02: 5-cloro-7-metóxi-1 ’-[3-( 1 H-pirazol-5-il)benzoil]espiro [cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,87 (s, 1H), 7,84-

7,85 (d, 1H), 7,63-7,64 (d, 1H), 7,44-7,47 (m, 1H), 7,34-7,36 (m, 1H), 6,66-

6,67 (d, 1H), 6,63-6,64 (d, 1H), 6,53 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,71-2,72 (m, 2H). Exemplo 03: 7-cloro-5-metóxi-1 ’-[3-(1 H-pirazol-5-il)benzoil]espiro [cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,88 (s, 1H), 7,84-

7,85 (d, 1H), 7,63-7,64 (m, 1H), 7,44-7,48 (m, 1H), 7,35-7,36 (m, 1H), 6,63 (m, 2H), 6,42-6,43 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 2,72-2,73 (m, 1H).

Exemplo 04: 7-metóxi-5-metil-1'-[3-(1H-pirazol-5-il)benzoil]espiro

[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,84-7,87 (m, 2H), 7,64-7,65 (d, 1H), 7,45-7,48 (m, 1H), 7,36-7,38 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 6,35- 6,37 (d, 1H), 3,84 (s, 2H), 2,69-2,70 (m, 1H), 2,61 (s, 3H).

Exemplos P1-P15

R8 R6

Exem¬ R5 R7 Mé¬ R1 R2 R3 R4 ACC1 ACC1 plo / todo Cl50 n* R9 R8 (nM) P1 CO F H CH3 CH3 H 215 1 LL O V=Z (y P2 iTVcf3 B H Cl CH3 H 426 1 N-N P3 A1 H CO CH3 H <3000 1 I υ P11 N^ A1 H CH3 CO H 399 1 I U P12 H A1 H CH3 CH3 H 73,9 1 ÍJ P13 V A1 H CO CH3 H <3000 1 O-Q1 I O P14 A1 H CH3 CH3 H <3000 1 P15 A1 H CH3 CH3 H 7033 1 * - n é ο número de vezes que o ensaio foi realizado.

Exemplo P1: Usando o Método F, 6,7-dimetil-1'-{3-[5- (trifluormetiO-IH-pirazol-S-irçbenzoilJespiro-Icromeno^^-piperidinl-^SH)ona, foi preparado como segue. A um frasco foi adicionado ácido 3-[5- (trifluormetil)-1H-pirazol-3-il]benzoico (84,5 mg, 0,33 mmol) e cloreto de tioniIa (357 mg, 3,0 mmols) e a mistura foi aquecida a 60°C por 1 hora. A mistura reacional foi concentrada e azeotrópica com tolueno (3x) e o resíduo secado sob pressão reduzida. 6,7-Dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona (73,6 mg, 0,3 mmol) foi dissolvido em CH2Cb (1 mL) e DIEA (85 mg, 0,12 mL, 0,66 mmol). Essa solução foi adicionada a uma solução do cloreto ácido em CH2CI2 (a uma concentração final de 1 M). A mistura resultante foi agitada da noite para o dia sob temperatura ambiente. O material foi purificado por meio de cromatografia líquida (Biotage Flash 40, 98:2 CH2CI2ZMeOH) para proporcionar o material do título (96 mg, 70%). EM(ACPI) m/z 484 (M+H)+, HPLC TR 2,9 minutos, 1H de RMN (CDCI3) δ 7,69 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,54 (d, J=7,4, 1H), 7,35-7,39 (m„ 1H), 7,29-7,31 (m, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,70 (s, 1 Η), 2,68 (s, 2Η), 2,26 (s, 3Η), 2,20 (s, 3Η).

Exemplo Ρ2: 6-cloro-7-metil-1'-{3-[5-(trifluormetil)-1 H-pirazol-3- il]benzoil}espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 504 (M+H)\ HPLC TR 3,0 minutos.

Exemplo P3: 1'-[2-cloro-5-(1-metil-1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 464 (M+H)+, HPLC TR 1,88 minutos.

Exemplo P4: 1’-[2-flúor-5-(1H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético , EM(ACPI) m/z 434 (M+H)+, HPLC TR 1,71 minutos.

Exemplo P5: 1'-[2-cloro-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético , EM(ACPI) m/z 450 (M+H)+, HPLC TR 1,76 minutos.

Exemplo P6: 1'-[2-hidróxi-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 432 (M+H)+, HPLC TR 1,48 minutos.

Exemplo P7: 1'-[2-etóxi-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 460 (M+H)+, HPLC TR 1,73 minutos.

Exemplo P8: 1'-[2-etóxi-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-6,7-

dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 460 (M+H)+, HPLC TR 2,6 minutos.

Exemplo P9: 6-cloro-1'-[2-etóxi-5-(1 H-pirazol-3-il)benzoil]-7- metilespirofcromeno^^^piperidinl^SHJ-ona, EM(ACPI) m/z 480 (M+H)+, HPLC TR 2,8 minutos.

Exemplo P10: 1 '-[2-cloro-5-(1 -metil-1 H-pirazol-5-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 464 (M+H)+, HPLC TR 1,83 minutos.

Exemplo P11: ej-dimetil-V-IB-OH-pirazoM

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 416 (M+H)+, HPLC TR 1,78 minutos.

Exemplo P12: 1'-[3-(1H-imidazol-2-il)benzoil]-6,7- dimetilespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, sal de ácido trifluoroacético, EM(ACPI) m/z 416 (M+H)+ 416, HPLC TR 1,26 minutos.

Exemplo P13: 6,7-dimetil-1 '-[3-(pirimidin-4-

il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 428 (M+H)+, HPLC TR 1,64 minutos.

Exemplo P14: 6,7-dimetil-1'-[3-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 432 (M+H)\ HPLC TR 1,82 minutos.

Exemplo P15: 6,7-dimetil-1'-[3-(5-etil-1,2,4-oxadiazol-3- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona, EM(ACPI) m/z 446 (M+H)+, HPLC TR 1,95 minutos.

Protocolos Biológicos

A utilidade dos compostos de Fórmula (1), e dos sais dos compostos farmaceuticamente aceitáveis, no tratamento de doenças (tais como 15 são detalhadas neste relatório) em animais, particularmente mamíferos (por exemplo, humanos) poderá ser demonstrada pela atividade destes, em ensaios convencionais conhecidos daquele versado no estado da técnica relevante, incluindo os ensaios in vitro e in vivo descritos abaixo. Tais ensaios também proporcionam um meio, por meio do qual as atividades dos compos20 tos de Fórmula (1) podem ser comparadas com as atividades de outros compostos conhecidos.

Os seguintes protocolos podem, naturalmente, ser variados por aqueles versados no estado da técnica.

Inibição Direta das Atividades de ACC1 e ACC2 A atividade inibitória de ACC dos compostos de Fórmula (1) des

ta invenção, e os sais desses compostos, foram demonstrados por métodos baseados em procedimentos-padrão. Por exemplo, inibição direta de atividade de ACC1 e ACC2, para compostos de Fórmula (1) foi determinada usando preparações de ACC1 de fígado de rato e ACC2 de músculo esquelético de rato.

[1] Preparação de ACC1 e ACC2. ACC1 foi obtido de fígado de rato e ACC2 foi obtido de músculo esquelético de rato baseado em procedimentos-padrão tais como aqueles descritos por Thampy e Wakil (J. Biol. Chem. 260: 6318-6323; 1985) usando o seguinte método.

Ratos machos CD pesando 150-200 g foram jejuados por 2 dias e em seguida alimentados com uma dieta alta de sacarose (dieta AIN-76A de roedor; N0 de Cat. D10001, Research Diets Inc., New Brunswick, N.J.), por 3 dias, nesse tempo os ratos são sacrificados por meio de asfixia por CO2. Os fígados (para preparação de ACC1) ou tecido do músculo esquelético (para preparação de ACC2) são removidos, lavados em solução salina tamponada fosfato gelado (PBS), e homogeneizados em 5 volumes de tampão de homogeneização (fosfato de potássio 50 mM, pH 7,5, EDTA 10 mM, 2-mercaptoetanol 10 mM, benzamidina 2 mM, fluoreto de fenilmetilsulfonila 0,2 mM (PMSF), 5 mg/L de cada leupeptina, aprotinina, e antitripsina) em um misturador Waring® por 1 minuto a 4°C. Todas as operações subsequentes são realizadas a 4°C. O homogenato torna-se 3% com relação a polietileno glicol (PEG) através da adição de solução de PEG a 50% e centrifugado em

20.000 x g por 15 minutos. O sobrenadante resultante é ajustado em PEG a 5% com a adição de solução de PEG a 50% e agitado por 5 minutos. O pelIet (contém atividade de ACC) é coletado por meio de centrifugação sob

20.000 x g por 20 minutos, lavado com água destilada duplamente gelada para remover excesso de PEG e ressuspenso em um-quarto do volume do

homogenato original com tampão de homogeneização. Sulfato de amônio (200 g/litro) é lentamente adicionado com agitação. Após 45 minutos, a enzima é coletada por meio de centrifugação por 30 minutos sob 20.000 x g, ressuspensa em 10 ml de HEPES 50 mM, pH 7,5, DTT 0,1 mM, EDTA 1,0 25 mM, e glicerol a 10% e dessalgada em uma coluna Sephadexm G-25 (2,5 cm x 50 cm) (Pharmacia, Piscataway, Nova Jérsei, atualmente, GE Healthcare) [HÁ 13 DIFERENTES COLUNAS G25 - QUAL DESSAS FOI USADA?] [THEREARE 13 DIFFERENT G25 COLUMNS - WHICH ONE WAS USED?] equilibrada com o mesmo tampão. A preparação da enzima dessalgada é 30 armazenada em alíquotas a -70°C. Imediatamente, antes de uso, alíquotas congeladas ACC1 ou ACC2 são descongeladas, diluídas com 500 pg/ml em tampão contendo HEPES 50 mM, pH 7,5, MgCI2 10 mM, critrato tripotássio, ditiotreitol 2,0 mM (DTT), e 0,75 mg/ml de soroalbumina bovino livre de ácidos graxos (BSA) e pré-incubadas a 37°C por 30 minutos.

[2] Medição de inibição de ACC. Os procedimentos para medição de inibição de ACC1 e inibição de ACC2 são idênticos exceto para a

fonte da isoenzima. Para medição de atividade de ACC e avaliação de inibição de ACC, compostos de teste são dissolvidos em sulfóxido de dimetila (DMSO) e 1 pL de alíquotas são colocados em tubos de polipropileno de 0,5 ml. Tubos de controle contêm 1 pL de DMSO isolados. Os tubos são incubados a 37°C em um banho de água de temperatura constante. Todos os tu10 bos de ensaio receberam 139 μΐ_ de tampão substrato contendo HEPES 50 mM, pH 7,5, MgCI2 2,0 mM, citrato tripotássio 2,0 mM, DTT 2 mM, 0,75 mg/ml de BSA, 25 μΜ de acetil-CoA, ATP 4,0 mM, e KH[14C]03 12,5 mM (2 x106 cpm). A reação é em seguida iniciada pela adição de 10 pL de fração de ACC pré-incubada preparada conforme descrita acima. Após 7 minutos, a 15 reação é terminada pela adição de 50 pL de HCI 6N e uma alíquota de 150 pL da mistura reacional é transferida para frascos de vidro de cintilação e evaporada até secura a 90°C por pelo menos 1 hora. Os frascos secos são em seguida esfriados, 0,5 ml de água e 5,5 ml de fluido de cintilação em meio líquido Ready Safe (Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA) são adiciona20 dos, e a radioatividade é determinada usando um contador de cintilações líquido.Tubos que receberam HCI antes de ACC serviram como espaços vazios (blanks).

[3] Especificidade de inibição de ACC1 vs ACC2. A especificidade de um composto em relação à inibição de ACC1 vs ACC2 pode ser de

terminada comparando a concentração de composto de teste exigida para inibir 50% da atividade contida em uma alíquota de ACC1 quando comparada com a concentração do mesmo composto exigida para inibir 50% da atividade de uma alíquota de ACC2.

Medição de Inibição de ACC em Células Cultivadas A atividade inibitória de ACC de compostos desta invenção, e os

sais desses compostos, foi confirmada em células humanas cultivadas usando métodos baseados em procedimentos-padrão. Por exemplo, uma vez que ACC catalisa a primeira etapa comprometida na biossíntese de ácidos graxos, a atividade in vivo dos certos compostos de Fórmula (1) foi confirmada medindo a capacidade de compostos, e os sais desses compostos, para impedir a formação de ácidos graxos radiomarcados a partir de acetato 5 radiomarcado em hepatócitos de mamíferos cultivados ou em células de hepatoma humano cultivadas da linhagem celular Hep-G2 (ATCC HB 8065). Avaliação direta de produção de malonil-CoA em células isoladas de tecidos que sintetizam (por exemplo, fígado e tecido adiposo) ou não sintetizam ácidos graxos (por exemplo, músculo esquelético) pode também ser usada pa10 ra determinar inibição de ACC em células isoladas desses tecidos.

[1] Medição de inibição de síntese de ácidos graxos em células cultivadas. Síntese de ácidos graxos é avaliada em hepatócitos de mamífero cultivados ou em células de hepatoma humano cultivadas da linhagem celular Hep-G2 medindo incorporação de [2-14C]acetato para lipídeos saponificá15 veis essencialmente conforme anteriormente descrito para avaliação de síntese de esterol (Harwood e outros, Biochem. Pharmacoi 53: 839-864,1997; Petras e outros, J. Lipid Res. 40: 24-38,1999) com as seguintes modificações para permitir avaliação de síntese de ácidos graxos. Por exemplo, células Hep-G2 crescidas em frascos T-75 e liberadas por meio de tratamento de 20 tripsina conforme anteriormente descritos (Harwood e outros, Biochem. PharmacoL 53: 839-864,1997; Petras e outros, J. Lipid Res. 40: 24-38, 1999), são semeadas em placas de 24 poços sob uma densidade de 1,2 x 105 células/poço e mantidas em 1,0 ml_ de meios mínimos essenciais suplementados por Dulbecco (DMEM) (meio DMEM contendo soro fetal bovino 25 inativado por calor a 10%, L-glutamina 2 mM, 40 pg/mL de gentamicina) por 7 dias em um incubador a 37°C, CO2 a 5% com alterações médias em 3 e 5 dias. Nesse tempo, culturas atingiram 80-90% de confluência e mantinham uma viabilidade celular > 90% (exclusão de corante azul de tripano). No 8o. dia, o meio é removido e substituído com meio fresco contendo DMSO a 1% 30 ±0 composto de teste. Imediatamente, após adição do composto, 25 μΙ_ de meios contendo 4 pCi de [2-14C]acetato (56 mCi/mmol) são adicionados a cada poço de incubação. Placas são em seguida seladas com parafilme (parafilm) para evitar evaporação, e células são incubadas a 37°C por 6 horas com agitação moderada. Após incubação, as amostras são saponificadas por meio de adição a cada poço de 1 ml de KOH 5 N em MeOH1 seguido primeiro por incubação por 2 horas a 70°C, e em seguida incubação da noite 5 para o dia sob temperatura ambiente. Misturas são transferidas para tubos de vidro cônicos e extraídas três vezes com 4,5 ml de hexano para remover os lipídeos não-saponificáveis (por exemplo, colesterol, precursores de coIesterol pós-esqualeno e outros lipídeos não-saponificáveis). A fase aquosa remanescente (contendo sais de sódio de ácidos graxos) é acidificada a pH 10 <2 por meio de adição de 0,5 ml de HCI 12 M. As misturas resultantes são transferidas para tubos de vidro cônicos e extraídas três vezes com 4,5 ml de hexano. As frações orgânicas combinadas (pooled) (contendo ácidos graxos protonados) são secadas sob nitrogênio, ressuspensas em 50 pL de clorofórmio:metanol:1:1(v/v) e aplicadas a canais de 1x 20 cm de de placas 15 de TLC Silica-Gel 60C. Canais contendo ácidos graxos não-radioativos foram incluídos em placas de TLC selecionadas como marcadores de separação. As placas de TLC foram desenvolvidas em hexano:éter dietílico:ácido acético (70:30:2), secadas a ar, e visualizadas em relação a ácidos graxos radioativos por meio de análise usando um Analisador Linear de Radioativi20 dade de Berthold (Berthold, Gaithersburg, Md., USA) que registra localização de pico radioativo e área de pico integrado. Inibição de síntese de ácidos graxos pelo composto de teste pode ser expressa como a concentração exigida para reduzir em 50% o dpm [2-14C]acetato incorporado em lipídeos saponificáveis durante a incubação de 6 horas a 37°C.

[2] Medição de inibição de produção de malonil-CoA em células

cultivadas. Avaliação direta de produção de malonil-CoA em células isoladas de tecidos que sintetizam (por exemplo, fígado e tecido adiposo) ou não sintetizam ácidos graxos (por exemplo, músculo esquelético), por meio de sua conversão estequiométrica em palmitato radiomarcado na presença de sinte30 tase ácido graxo purificado e acetato radiomarcado, pode também ser usada para determinar inibição de ACC em células isoladas desses tecidos conforme anteriormente descritos (McGarry e outros, J. Bioi Chem. 253: 8291- 8293,1978). O procedimento como se refere a todos os tecidos é descrito em linhas gerais abaixo e pode ser prontamente adaptado a células cultivadas por aqueles versados no estado da técnica.

Avaliação acentuada in vivo de Inibição de ACC em Animais Experimentais 5 A atividade inibitória de ACC de compostos desta invenção, e os

sais desses compostos, pode ser confirmada in vivo por meio de avaliação de sua capacidade de inibir produção hepática de ácido graxo e estimular oxidação total corpórea de ácido graxo usando métodos baseados em procedimentos-padrão. Por exemplo, uma vez que ACC catalisa a primeira eta10 pa comprometida na biossíntese de ácidos graxos, a atividade in vivo desses compostos pode ser confirmada medindo a capacidade dos compostos desta invenção, e os sais desses compostos, para impedir a formação de ácidos graxos radiomarcados a partir de acetato radiomarcado no fígado de mamíferos tratados.

Avaliação direta de produção de malonil-CoA radiomarcada a

partir de acetato radiomarcado em tecidos que sintetizam (por exemplo, fígado e tecido adiposo) ou não sintetizam ácidos graxos (por exemplo, músculo esquelético) pode também ser usada para determinar inibição de ACC nesses tecidos. Uma vez que níveis reduzidos de malonil-CoA como uma 20 conseqüência de inibição de ACC, auxilia a inibição de retroalimentação mediada por malonil-CoA de carnitina-palmitoil transferase 1 (CPT1), a enzima que catalisa a reação Iimitante de taxa em oxidação mitocondrial de ácidos graxos, a atividade in vivo dos compostos desta invenção, e os sais desses compostos, podem ser confirmados medindo sua capacidade de aumentar a 25 utilização de ácidos graxos como uma fonte de energia, conforme avaliada por uma redução no quociente respiratório em mamíferos tratados.

[1] Medição de inibição de síntese de ácidos graxos em animais experimentais. Incorporação de [2-14C]acetato em lipídeos saponificáveis nos fígados de mamíferos (por exemplo, camundongos CD1, camundongos 30 C57BI/6J-ob/ob, ratos Sprague Dawiey (disponíveis de Charles River Boston, Mass. ou Jackson Labs Bar Harbor, Me.)) pode ser medida essencialmente conforme anteriormente descrito para avaliação de síntese hepática de esterol (Harwood e outros, Biochem. Pharmacol, 40: 1281-1293, 1990; Harwood e outros, Biochem. Pharmacol. 53: 839-864,1997) com as seguintes modificações para permitir avaliação de síntese de ácidos graxos. Por exemplo, ratos Sprague Dawley são administrados 0,1 ml por 40 g de peso corporal de um bolo (bolus) de veículo oral (por exemplo, água ou metilceluIose a 0,5% em água) ± de composto de teste. Uma a quatro horas após administração do composto, os animais receberam uma injeção intraperitoneal de 0,5 ml de [2-14C]acetato (64 pCi/ml; 57 mCi/mmol). Uma hora após administração radiomarcada, os animais são sacrificados por meio de asfixia por CO2 e dois pedaços de 0,75 g de fígado são removidos e saponificados a 70 pC. por 120 minutos em 1,5 ml de NaOH 2,5 M. Após saponificação, 2,5 ml de EtOH absoluto são adicionados a cada amostra e as soluções são misturadas e deixadas em repouso da noite para o dia. Éter de petróleo, 4,8 ml, é em seguida adicionado a cada amostra e as misturas são primeiro agitadas vigorosamente por 2 minutos, em seguida centrifugadas sob 1000 x g em um tampo ou topo de bancada Sorvall® por 5 minutos. As camadas de éter de petróleo resultantes, as quais contêm os lipídeos não-saponificáveis (por exemplo, colesterol, precursores de colesterol pós-esqualeno e outros lipídeos não-saponificáveis), são removidos e descartados. A camada aquosa remanescente (contendo sais de sódio de ácidos graxos) é acidificada a pH <2 por meio de adição de 0,6 ml de HCI 12 M e extraída duas vezes com 4,8 ml de éter de petróleo. As frações orgânicas combinadas (pooled) (contendo ácidos graxos protonados) são transferidas para frascos de cintilação em meio líquido, secadas sob nitrogênio, dissolvidas em 7 ml de fluido de cintilação líquido de solução aquosa, e avaliadas em relação a radioatividade usando um contador de cintilação em meio líquido. Inibição de síntese de ácidos graxos pelo composto de teste é expressa como a concentração exigida para reduzir em 50% o dpm [2-14C]acetato incorporado em lipídeos saponificáveis durante o intervalo de 1 hora entre injeção de acetato radiomarcado e asfixia por CO2.

Alguns compostos da presente invenção foram avaliados em relação à inibição de síntese de ácidos graxos conforme descrita acima. Conforme mostrado abaixo, esses compostos foram todos observados inibir a síntese de ácidos graxos in vivo._

Composto Porcentagem de Inibição Porcentagem de Inibição em 10 mg/kg em 30 mg/kg A16 68 83 A13 64 A21 59,5 A12 38,7 A1 35,4 A9 33,5 E1 30,9 E2 30,7 [2] Medição de inibição de produção de malonil-CoA em animais

experimentais. Avaliação direta de produção de malonil-CoA em tecidos que sintetizam (por exemplo, fígado e tecido adiposo) ou não sintetizam ácidos graxos (por exemplo, músculo esquelético), por meio de sua conversão estequiométrica em palmitato radiomarcado na presença de ácido graxo sintetase purificado e acetil-CoA radiomarcado, pode também ser usada para determinar inibição de ACC nesses tecidos conforme anteriormente descritos (McGarry e outros. J. Biol. Chem. 253: 8291-8293, 1978). Os animais são tratados com veículo ± composto de teste conforme descrito em [1] Mediçãode inibição de síntese de ácidos graxos em animais experimentais acima. Resumidamente, ensaios são realizados em duplicata em tubos de vidro de teste tamponados. Misturas reacionais contêm, em 1.025 ml de tampão fosfato de potássio 200 mM (pH = 7,0), ditiotreitol 2,5 mM, EDTA 2,0 mM, NADPH 0,2 mM, 1 mg/ml de soro albumina bovino livre de ácido graxo, 4,4 μΜ [3H]acetil-CoA (aproximadamente 150.000 dpm/nmol), e quantidades apropriadas de malonil-CoA padrão ou extrato de tecido de teste. Extratos de tecido são preparados de tecidos (por exemplo, fígado e músculo esquelético) que são clampeados e congelados (freeze-clamped) dentro de 10 segundos após asfixia por CO2 primeiro pulverizando 0 tecido sob nitrogênio líquido em seguida extraindo 1 g de tecido em pó com 5 ml de HCIO4 a 6% (p/v) e neutralizando o extrato a pH 6,0 com KOH e centrifugação para remover resíduo particulado. Reações são iniciadas por meio de adição de 25 miliunidades (mU) de ácido graxo sintetase purificado. Após uma incubação de 45 minutos a 37°C, reações são terminadas por meio de adição de 25 μί.

de HCIO4 a 70% (p/v) e palmitato nascente é em seguida extraído por meio de adição a cada tubo de 1 ml de EtOH, em seguida 5 ml de éter de petróleo. Após mistura vigorosa por 30 segundos e centrifugação para facilitar separação de fases, a fase éter de petróleo é transferida para um segundo tubo de vidro contendo 2 ml de água, agitada vigorosamente, recentrifugada, 10 e 2,0 ml da fase éter de petróleo são transferidos para frascos de cintilação em meio líquido, secados, e avaliados em relação a radioatividade em um contador de cintilação líquida após adição de 10 ml de fluido de cintilação líquida Aquasol (PerkinEImer, Shelton, CT). Espaços vazios (blanks) não contendo malonil-CoA adicionado nem extrato de fígado são incluídos com 15 cada série de determinações e subtraído de todos os valores. Inibição de produção de malonil-CoA pelo composto de teste é expressa como a concentração exigida para reduzir em 50% o dpm [2-14C]acetiI-CoA incorporado em palmitato durante a incubação de 45 minutos a 37°C.

[3] Medição de Estimulação de Oxidação de Ácido Graxo em

Ratos.

A atividade inibitória de ACC de compostos desta invenção, e dos sais desses compostos, pode ser adicionalmente confirmada in vivo por meio de avaliação da capacidade de inibição de ACC para aumentar utilização de ácido graxo empregando métodos baseados em procedimentos25 padrão. Por exemplo, durante um deslocamento da oxidação de carboidrato para a oxidação de ácidos graxos ou um deslocamento de síntese de ácidos graxos para oxidação, há uma diminuição no quociente respiratório (QR) = razão de produção de C02/consumo de O2. Porque ácidos graxos estão em um estado mais reduzido do que carboidratos (tal como glicose), há grande 30 quantidade de oxigênio consumido por cada CO2 produzido e, portanto, um menor QR. Se um animal está utilizando apenas carboidrato, QR = 1,0, visto que se um animal está utilizando apenas ácidos graxos, QR = 0,7. Desse modo, o QR em animais, incluindo humanos e animais de companhia, é uma medida indireta de tipo de combustível que é utilizado. Calorimetria indireta é comumente usada em animais, incluindo humanos, por aqueles versados no estado da técnica relevante para medir QR.

Aqueles versados no estado da técnica entenderam que diminu

ição de QR e a utilização de combustível de deslocamento concomitante da oxidação de carboidrato para a oxidação de gordura poderá diminuir depósitos de gordura corporal e ser eficaz com relação ao tratamento de, por exemplo, obesidade, síndrome metabólica e diabetes.

A capacidade dos compostos desta invenção, e dos sais desses

compostos, para gerar uma diminuição na resposta de QR, poderá ser demonstrada de acordo com o seguinte protocolo. Essa seleção in vivo destina-se a avaliar a eficácia de compostos que são inibidores de ACC1 usando como uma medição de ponto final de eficácia de consumo total de oxigênio 15 no corpo, produção de CO2 e QR. O protocolo envolve administrar uma única dose de composto a ratos Sprague Dawley. Ratos machos Sprague Dawley apresentando uma faixa de peso corporal de aproximadamente 350- 400 g são alojados sob condições padrões de laboratório antes da iniciação do estudo.

No dia de teste do composto, consumo de oxigênio e QR é me

dido usando um calorímetro indireto de circuito aberto (Oxymax, Columbus Instruments, Columbus, Ohio 43204). Os sensores de gás Oxymax são calibrados com gás N2 e uma mistura gasosa (aproximadamente 0,5% de CO2, aproximadamente 20,5% de O2, aproximadamente 79% de N2) antes de ca25 da experimento. Os ratos em questão são removidos de suas gaiolasmoradia e seus pesos corporais registrados. Os ratos são colocados nas câmaras seladas (43 x 43 x 10 cm) da Oxymax (um rato por câmara), as câmaras são colocadas nos monitores de atividade, e a vazão de ar por meio das câmaras é ajustada em aproximadamente 1,6 L/minuto. O software 30 Oxymax calcula o consumo de oxigênio (mL/kg/h) pelos ratos baseado na vazão de ar por meio das câmaras e a diferença no teor de oxigênio nas portas de entrada e saída. Os monitores de atividade apresentam 15 feixes de Iuz infravermelha espaçados aproximadamente 2,54 cm (uma polegada) ao lado de cada eixo, e atividade de ambulatório é registrada quando dois feixes consecutivos são quebrados, e os resultados são registrados como contagens.

Consumo de oxigênio linha de referência, QR e atividade de

ambulatório são medidos aproximadamente a cada 10 minutos por aproximadamente 1 a 3,5 horas. Após obtenção de dados de linha de referência, as câmaras são abertas e um composto de teste e um veículo são administrados por meio de gavagem oral como uma única dose. Um composto de 10 teste é dissolvido em veículo contendo aproximadamente 0,5% de metilceluIose em água ou outro veículo. O volume de dosagem é aproximadamente 1 ml. Após dosagem, os ratos são retornados às câmaras Oxymax, as tampas das câmaras são fechadas e medições são feitas a cada 10 minutos por aproximadamente 3 a 6 horas após dosagem. Alteração na resposta de QR 15 para compsto de teste ou veículo é calculada em ratos individuais dividindo a média dos valores pós-dosagem (excluindo valores obtidos durante períodos de tempo em que atividade de ambulatório excede a 100 contagens) através da média dos valores de pré-dosagens de linha de referência (excluindo, os primeiros 5 valores e valores obtidos durante períodos de tempo em que ati20 vidade de ambulatório excede a 100 contagens) e expressando os dados como % de alteração em QR.

Eficácia Subcrônica e Crônica em Animais Experimentais

Os compostos da presente invenção são prontamente adaptados para uso clínico como agentes de reversão a hiperinsulinemia, agentes 25 de sensibilização a insulina, agentes antiobesidade e agentes antiateroscleróticos. Tal atividade pode ser determinada pela quantidade de composto de teste que reduz níveis de insulina, neutraliza o aumento e/ou acelera a redução em níveis de insulina e glicose na resposta a um desafio oral de glicose, reduz peso corporal e/ou reduz composição do corpo (por 30 exemplo, reduz a porcentagem de gordura corporal), e reduz a acumulação de deposição de lipídeos nas paredes de vasos sanguíneos em relação a um veículo de controle sem o composto de teste em mamíferos, por exempio, ratos Sprague Dawley alimentados com comida, uma alta dieta de sacarose ou uma alta dieta de gordura em relação a 3-8 semanas antes e durante administração de composto de teste ou camundongos machos ob/ob ou coelhos alimentados com colesterol.

Também, uma vez que a concentração de insulina no sangue é

relacionada à promoção de crescimento celular vascular e aumento na retenção renal de sódio, (além das outras ações, por exemplo, promoção de utilização de glicose) e essas funções são conhecidas causas de hipertensão, os compostos desta invenção, em virtude de sua ação hipoinsulinêmica, impede, controla e/ou regride hipertensão.

[1] Avaliação subcrônica de eficácia antidiabética em ratos e camundongos. O potencial antidiabético de um composto de Fórmula (1) desta invenção, seus pró-fármacos e os sais desses compostos e prófármacos pode ser demonstrado avaliando seu potencial anti15 hiperinsulinemia e potencial sensibilizador a insulina usando métodos baseados em procedimentos-padrão. Por exemplo, o potencial antihiperinsulinemia e potencial sensibilizador a insulina desses compostos podem ser demonstrados em ratos Sprague Dawley alimentados por uma dieta padrão para roedores, uma alta dieta de sacarose (dieta AIN-76A para roe20 dores; Cat. N0 D10001, Research Diets Inc., New Brunswick, N.J.) ou uma alta dieta de gordura (Cat. N0 D12451, Research Diets Inc., New Brunswick, N.J.) ad Iibitum por 3-4 semanas antes e durante administração de composto de teste ou em camundongos machos de 4-8 semanas de idade C57BL/6Job/ob (obtidos de Jackson Laboratory, Bar Harbor, Me.) alimentados com 25 dieta padrão para roedores ad libitum. Os animais são tratados por 1 a 8 semanas com composto de teste administrado por meio de gavagem oral em água ou em metilcelulose a 0,25% em água usando um regime de dosagem

S.D., B.I.D. ou T l.D. ou via administração em alimento usando uma versão em pó das dietas acima mencionadas.

Em relação a estudos em que o potencial anti-hiperinsulinemia

de compostos de Fórmula (1) é avaliado, sob vários tempos durante o estudo ou sob sacrifício (por meio de asfixia por CO2), sangue é coletado de uma veia da cauda de ratos não-anestesiados ou do seio retro-orbitário de camundongos não-anestesiados, ou da veia cava de ratos ou camundongos sob sacrifício em tubos separadores de soro de 0,5 ml. As amostras recentemente coletadas são centrifugadas por dois minutos em 10.000 x g sob 5 temperatura ambiente, e o sobrenadante sérico é armazenado sob -80°C até análise. Concentração sérica de insulina é determinada usando kits Equate®. RIA INSULIN (método duplo de anticorpos; conforme especificado pelo fabricante) disponível de Binax, South Portland, Me. O coeficiente de variação inter-ensaio é de 10%. A atividade de redução de insulina no soro dos 10 compostos de teste é determinada por análise estatística (teste t não emparelhado) da concentração média de insulina no soro entre o grupo composto de teste e o grupo de controle tratado com veículo.

Em relação a estudos em que o potencial sensibilizador a insulina de compostos de teste é avaliado, sob vários tempos durante o estudo, a animais jejuados são administrados um bolo (bolus) de glicose oral ou intraperitoneal de 1,0 g/kg por peso corporal, e sangue é coletado de uma veia da cauda de ratos não-anestesiados ou do seio retro-orbitário de camundongos não-anestesiados, sob vários tempos até 2 horas após administração de glicose em tubos separadores de soro de 0,5 ml. As amostras recentemente coletadas são centrifugadas por dois minutos em 10.000 x g sob temperatura ambiente, e o sobrenadante no soro é armazenado a -80°C até análise. Concentração sérica de insulina é determinada usando kits Equate® RIA INSULIN conforme descritos acima. Concentração sérica de glicose é determinada usando o Auto-analisador Abbott VP™ (Abbott Laboratories, Diagnostics Division, Irving, Texemplo) e VP Super System® (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo), ou pelo Abbott Spectrum CCX™ (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo) usando o sistema reagente de Teste de GIicose-UV AGent™ (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo) (uma modificação do método de Richterich e Dauwalder, Schweizerisehe Medizinisehe Woehensehrift, 101: 860 (1971)). A atividade sensibilizadora a insulina dos compostos de teste é determinada por meio de análise estatística (teste t nãoemparelhado) da diferença média nas concentrações de pico de insulina e glicose e a taxa de desaparecimento de insulina e glicose do plasma após seus níveis de picos respectivos entre o grupo de composto de teste e o grupo de controle tratado com veículo.

Em relação a estudos em que o potencial de redução de lipídeos de compostos de teste é avaliado, sob vários tempos durante o estudo ou sob sacrifício (por meio de asfixia por CO2), sangue é coletado de uma veia da cauda de ratos não-anestesiados ou do seio retro-orbitário de camundongos não-anestesiados, ou da veia cava de ratos ou camundongos sob sacrifício em tubos separadores de soro de 0,5 ml. As amostras recentemente coletadas são centrifugadas por dois minutos em 10.000 x g sob temperatura ambiente, e o sobrenadante sérico é armazenado a -80°C até análise. Triglicerídeos no soro são determinados usando o Auto-analisador Abbott VP™ e VP Super System® (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo), ou o Abbott Spectrum CCX™ (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo) usando o sistema reagente de Teste de Triglicerídeos A-Gent™ (Abbott Laboratories, Diagnostics Division, Irving, Texemplo) (método enzimático acoplado a lipase; uma modificação do método de Sampson, e outros, Clinicai Chemistry 21: 1983 (1975)). Níveis no soro de colesterol total são determinados usando o Autoanalisador Abbott VP™ e VP Super System® (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo), e sistema reagente de Teste de Colesterol A-Gent™ (método enzimático acoplado a colesterol esterase; uma modificação do método de Allain e outros, Clinicai Chemistry 20: 470 (1974)) usando padrões de 100 e 300 mg/dl. Concentração sérica de ácido graxo livre é determinada utilizando um kit de Amano International Enzyme Co., Inc., conforme adaptado para uso com o Auto-analisador Abbott VP™ e VP Super System® (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo), ou 0 Abbott Spectrum CCX™ (Abbott Laboratories, Irving, Texemplo). A atividade de redução de triglicerídeo, colesterol e ácido graxo livre no soro dos compostos de teste é determinada por meio de análise estatística (teste t não-emparelhado) das concentrações médias de triglicerídeos, colesterol e ácido graxo livre no soro entre o grupo composto de teste e o grupo de controle tratado com veículo.

[2] Avaliação subcrônica de eficácia antiobesidade em ratos e camundongos. O potencial antiobesidade de um composto de Fórmula (1) desta invenção, seus pró-fármacos e os sais desses compostos e prófármacos, pode ser demonstrado avaliando seu potencial para produzir uma redução no peso corporal, uma redução percentual de gordura corporal, e uma redução nos níveis plasmáticos de leptina.

Por exemplo, o potencial de redução no peso corporal, redução percentual de gordura corporal, e redução plasmática de leptina de compostos de teste pode ser demonstrado em ratos Sprague Dawley alimentados com uma dieta padrão para roedores, uma alta dieta de sacarose (dieta AIN10 76A para roedores; Cat. N°D10001, Research Diets Inc., New Brunswick, N.J.) ou uma alta dieta de gordura (Cat. N°D12451, Research Diets Inc., New Brunswick, N.J.) ad Iibitum por 3-4 semanas antes e durante administração de composto de teste ou em camundongos machos C57BL/6J-ob/ob de 4-8 semanas de idade (obtidos de Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) 15 alimentados com dieta padrão para roedores ad libitum. Os animais são tratados por 1 a 8 semanas com um composto de teste administrado por gavagem oral em água ou metilcelulose a 0,25% em água usando um regime de dosagem S.D., B.I.D. ou T.I.D. ou via administração em alimento usando uma versão em pó das dietas mencionadas acima.

Perda total de peso corporal pode ser avaliada simplesmente ser

comparação de peso corporal total antes e após tratamento com um composto de teste. Para avaliação de perda de peso e alteração na composição corporal (por exemplo, a alteração no percentual de gordura corporal e na razão de massa magra para massa gorda corporal) tratada e animais de 25 controle foram ligeiramente anestesiados e escaneados usando absorciometria de raios X de dupla energia (DEXA, QDR-1000/W, Hologic Inc., Waltham, Mass.) equipada com software "Regional High Resolution Scan". O tamanho do campo de varredura (scan) foi ajustado para acomodar o tamanho das espécies que são avaliadas. Resolução foi de 0,0254 x 0,0127 cm e 30 velocidade do scan foi de 7,25 mm/segundo. A atividade de redução de peso total corporal, porcentagem de gordura corporal, e razão de massa gorda para massa magra corporal dos compostos de teste são determinadas por meio de análise estatística (teste t não-emparelhado) do peso médio total corporal, porcentagem de gordura corporal, e razão de massa gorda para massa magra corporal entre o grupo composto de teste e o grupo de controle tratado com veículo.

Alterações nos níveis plasmáticos de leptina alterações estrita

mente paralelas na porcentagem de gordura corporal e, são portanto, um marcador útil para avaliar potencial antiobesidade. Para avaliação de alterações nos níveis plasmáticos de leptina em resposta a tratamento com compostos de teste, sob vários tempos durante o estudo ou sob sacrifício (por 10 meio de asfixia por CO2), sangue é coletado de uma veia da cauda de ratos não-anestesiados ou do seio retro-orbitário de camundongos nãoanestesiados, ou da veia cava de ratos ou camundongos sob sacrifício em tubos separadores de soro de 0,5 ml. As amostras recentemente coletadas são centrifugadas por dois minutos em 10.000 x g sob temperatura ambien15 te, e o sobrenadante sérico é armazenado a -80°C até análise. Concentração sérica de leptina é determinada usando kit RIA LINCO de leptina de rato (Cat. N°RL-83K; método duplo de anticorpos conforme especificado pelo fabricante) disponível de LINCO, St Charles, Mo. A atividade de redução de leptina no soro dos compostos de teste é determinada por meio de análise 20 estatística (teste t não-emparelhado) da concentração média de leptina no soro entre o grupo composto de teste e o grupo de controle tratado com veículo.

[3] Avaliação crônica de eficácia anti-aterosclerótica em coelhos. Para demonstrar o potencial anti-aterosclerótico de um composto de Fórmu25 Ia (1) desta invenção, e os sais desses compostos, efeitos antiateroscleróticos podem ser determinados pels quantidade de composto de teste exigida para reduzir a deposição de lipídeos em aorta de coelho. Coelhos brancos machos de Nova Zelândia são alimentados com uma dieta contendo colesterol a 0,2% e óleo de coco a 10% por 4 dias (alimentados uma 30 vez por dia com refeição). Coelhos são sangrados da veia marginal da orelha e valores totais plasmáticos de colesterol são determinados a partir dessas amostras. Os coelhos são em seguida designados a grupos de tratamento de tal modo que cada grupo apresente uma média similar + DP de concentração total plasmática de colesterol, concentração de colesterol HDL e/ou concentração de triglicerídeo. Após designação do grupo, os coelhos são dosados diariamente com composto de teste dado como uma mistura dietética ou em um pedaço pequeno de confecção à base de gelatina. Coelhos de controle receberam apenas o veículo de dosagem, seja o veículo, o alimento ou a confecção de gelatina. A dieta de colesterol/óleo de coco é continuada juntamente com a administração do composto de teste em todo o estudo. Valores plasmáticos de colesterol e/ou triglicerídeos podem ser determinados sob qualquer ponto durante o estudo obtendo sangue da veia marginal da orelha. Após 3-5 meses, os coelhos são sacrificados e as aortas são removidas do arco torácico para a ramificação das artérias ilíacas. As aortas são limpas de adventícia, abertas longitudinalmente e em seguida coradas com Sudan IV conforme descrito por Holman e outros (Lab. Invest. 1958, 7, 42-47). A porcentagem da área superficial corada é quantificada por densitometria usando um Sistema Analisador de Imagem Optimas (Image Processing Systems) (Sistemas de Processamento de Imagens). Deposição de lipídeos reduzida é indicada por uma redução na porcentagem de área superficial corada no grupo que recebe o composto em comparação com os coelhos de controle.

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula <formula>formula see original document page 130</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: (a) R1 é H, OH, halo, ciano, C1.3 alquila, C1.3 alcóxi, C1-3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, C1^ alquilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0Ci.3 alquila ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (b) cada R10 é independentemente OH, halo, ciano, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (c) R2 e R3 são, cada um independentemente H, OH, halo, ciano, C1-3 alquila, C1.3 alcóxi, Ci_3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, C1.3 alquilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0Ci.3 alquila, -C(O)NR11R12, ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (d) R11 e R12 são tomados separadamente e são, cada um independentemente, H ou C1-3 alquila, ou R11 e R12 são tomados juntamente, com o nitrogênio ao qual se ligam, para formar uma heterocicloalquila de 4-7-membros; (e) R4 é H, halo, ciano, Ci-3 alquila ou C1-3 haloalquila; (f) R6 é tomado separadamente e é H, OH, halo, Ci_3 alquila, Ci-3 alcóxi, Ci_3 haloalquila ou Ci_3 haloalcóxi; (g) R7 é tomado separadamente e é H, OH, halo, Ci_3 alquila, Ci_3 alcóxi, Ci_3 haloalquila ou Ci_3 haloalcóxi; (h) R5 é tomado separadamente e é uma heteroarila de 4-7- membros opcionalmente substituída com halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1.3 alquil-OH, C1-3 haloalquila ou C-|.3; ou (i) R5 é tomado juntamente com R6 ou R71 e com a fenila, a qual R5 e R6 ou R7 se ligam, para formar um radical policíclico heterocíclico, com um anel portador de nitrogênio em que pelo menos um átomo de nitrogênio se liga a um átomo de carbono da fenila, em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-idropiridina ou 5,6-dihidro-1 H-piridin-2-ona, e em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente substituído independentemente com um a dois oxo, halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 alquil-OH, C1-3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, heteroarila de 4-7 membros, heterocicloalquila ou fenila de 4-7 membros, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10, contanto que R5 não seja tomado juntamente com R6 para formar uma benzotriazolila ou uma benzoxadiazolila e, contanto que R5 não seja tomado juntamente com R7 para formar uma benzoxadiazolila; e (j) R8 e R9 são, independentemente H, OH, halo, C1-3 alquila, C1.3 alcóxi, C^3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi, contanto que o composto não seja 1'-(1 H-1,2,3-benzotriazol-5- ilcarbonil)-5- metoxiespiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; 6-cloro-7-metil1'-[3-(1H-pirazol-4- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona; 6,7-dimetil-1'[3-(1 H-pirazol-4- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4’-piperidin]-4(3H)-ona; ou 6,7- dimetil-1 ’-[3-(1 H-pirazol-4- il)benzoil]espiro[cromeno-2,4'-piperidin]-4(3H)-ona.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 e R7 são tomados juntamente, em que o anel portador de nitrogênio opcionalmente substituído, opcionalmente contém um segundo heteroátomo N, O, ou S, e em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclohexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-di-hidro-1H-piridin-2-ona.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 e R7 são tomados juntamente, em que o radical policíclico heterocíclico é 1Hindazolila, 1H-benzoimidazolila, quinolila, 1,2,3,4-tetra-hidroquinolila, quinoxalila, 1 H-indolila, 2,3-di-hidro-1H-benzoimidazolila, 1H-benzo[d][1,2,3]triazolila, 6,7,8,9-tetra-hidro-5H-carbazolila, 2,3,4,9-tetra-hidro-1 Hpirido-[3,4-b]indolila ou benzoxazolila, e em que o anel portador de nitrogênio do radical policíclico heterocíclico é opcionalmente substituído.

4. Composto de acordo com a reivindicação 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o radical policíclico heterocíclico é 1H-indazolila, 1H-benzoimidazolila, 1 H-indolila ou 2,3,4,9-tetra-hidro-1 H-pirido[3,4-b]indolila opcionalmente substituídas.

5. Composto de acordo com a reivindicação 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: (a) R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; (b) R3 é H, halo, CH3 ou OCH3; e (c) R4 é H.

6. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 e R6 são tomados juntamente, em que o anel portador de nitrogênio opcionalmente substituído, opcionalmente contém um segundo heteroátomo N, O, ou S, e em o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclohexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-di-hidro-1H-piridin-2-ona.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 e R6 são tomados juntamente, em que o radical policíclico heterocíclico é 1Hindazolila, 1H-benzoimidazolila, 1 H-indolila ou 2,3-di-hidro-1Hbenzoimidazolila, e em que o anel portador de nitrogênio do radical heterocíclico é opcionalmente substituído.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que o radical policíclico heterocíclico é 1 H-índazolila opcionalmente substituída.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: (a) R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; (b) R3 é H, halo, CH3 ou OCH3; e (c) R4 é H.

10. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é tomado separadamente, e é pirazolila, imidazolila, oxadiazolila ou pirimídinila opcionalmente substituída.

11. Composto de acordo com a reivindicação 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R5 é tomado separadamente, e é pirazolila ou imidazolila opcionalmente substituída.

12. Composto de acordo com a reivindicação 11, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: (a) R1 é H, halo, CH3 ou OCH3; (b) R3 é H1 halo, CH3 ou OCH3; e (c) R4 é H.

13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: (i) um composto apresentando a fórmula <formula>formula see original document page 133</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: (a) R1 é H, OH, halo, ciano, C-|.3 alquila, Ci-3 alcóxi, C1.3 haloalquila, C^3 haloalcóxi, C-i-3 alquilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0C-i-3 alquila ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (b) cada R10 é independentemente OH, halo, ciano, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C-1.3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (c) R2 e R3 são, cada um independentemente H, OH, halo, ciano, C1-3 alquila, C1.3 alcóxi, C1-3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, C1.3 alquilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0Ci-3 alquila, -C(O)NR11R12, ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (d) R11 e R12 são tomados separadamente e são, cada um independentemente H ou C1-3 alquila, ou R11 e R12 são tomados juntamente, com 0 nitrogênio ao qual se ligam, para formar uma heterocicloalquila de 4-7 membros; (e) R4 é H, halo, ciano, C1-3 alquila ou C1-3 haloalquila; (f) R6 é tomado separadamente e é H, OH, halo, C1.3 alquila, C1.3 alcóxi, C-i_3 haloalquila ou C-1.3 haloalcóxi; (g) R7 é tomado separadamente e é H, OH, halo, C1-3 alquila, C-i- 3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (h) R5 é tomado separadamente e é uma heteroarila de 4-7- membros opcionalmente substituída com halo, C1-3 alquila, C1.3 alcóxi, C1^ alquil-OH, C1^ haloalquila ou C1-3; ou (i) R5 é tomado juntamente com R6 ou R7, e com a fenila, a qual R5 e R6 ou R7 se ligam, para formar um radical policíclico heterocíclico, com um anel portador de nitrogênio em que pelo menos um átomos de nitrogênio se liga a um átomo de carbono da fenila, em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-hidro-piridina ou 5,6-dihidro-1H-piridin-2-ona, e em que 0 anel portador de nitrogênio é opcionalmente substituído, independentemente com um a dois oxo, halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 alquil-OH, C1-3 haloalquila, C1.3 haloalcóxi, heteroarila de 4-7 membros, heterocicloalquila ou fenila de 4-7 membros, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R101 contanto que R5 não seja tomado juntamente com R6 para formar uma benzotriazolila ou uma benzoxadiazolila, e contanto que R5 não seja tomado juntamente com R7 para formar uma benzoxadiazolila; e (j) R8 e R9 são, independentemente H1 OH1 halo, C^3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; e (ii) um transportador, veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que R5 e R7 são tomados juntamente, em que o radical policíclico heterocíclico é 1H-indazolila, 1 H-benzoimidazolila, quinoliIa1 1,2,3,4-tetra-hidroquinolila, quinoxalila, 1 H-indolila, 2,3-di-hidro-1Hbenzoimidazolila, 1 H-benzo-[d][1,2,3]triazolila, 6,7,8,9-tetra-hidro-5Hcarbazolila, 2,3,4,9-tetra-hidro-1H-pirido-[3,4-b]indolila ou benzoxazolila, e em que o anel portador de nitrogênio do radical policíclico heterocíclico é opcionalmente substituído.

15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que R5 e R6 são tomados juntamente, em que 0 radical policíclico heterocíclico é 1H-indazolila, 1 H-benzoimidazolila, 1Hindolila ou 2,3-di-hidro-1 H-benzoimidazolila, e em que o anel portador de nitrogênio do radical heterocíclico é opcionalmente substituído.

16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que R5 é tomado separadamente e é pirazolila, imidazolila, oxadiazolila ou pirimidinila opcionalmente substituída.

17. Método para tratamento de obesidade ou uma condição de estar em excesso de peso em um mamífero com necessidade de tal tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto que apresenta a fórmula <formula>formula see original document page 136</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: (a) R1 é H, OH1 halo, ciano, C-1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, C1-3 al quilsulfonila, -CO(O)H, -C(0)0Ci_3 alquila ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (b) cada R10 é independentemente OH, halo, ciano, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (c) R2 e R3 são, cada um independentemente H, OH, halo, ciano, C-1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1.3 haloalquila, C-1-3 haloalcóxi, C-1-3 alquilsulfonila, CO(O)H, -C(0)0Ci-3 alquila, -C(O)NR11R12, ou fenila, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10; (d) R11 e R12 são tomados separadamente e são, cada um independentemente H ou C1-3 alquila, ou R11 e R12 são tomados juntamente, com o nitrogênio ao qual se ligam, para formar uma heterocicloalquila de 4-7 membros; (e) R4 é H, halo, ciano, C1^ alquila ou C1-3 haloalquila; (f) R6 é tomado separadamente, e é H, OH, halo, C-i_3 alquila, C-i. 3 alcóxi, C1.3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (g) R7 é tomado separadamente, e é H, OH, halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 haloalquila ou C1-3 haloalcóxi; (h) R5 é tomado separadamente, e é uma heteroarila de 4-7 membros opcionalmente substituída com halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 alquil-OH, C^3 haloalquila ou C-i_3; ou (i) R5 é tomado juntamente com R6 ou R7, e com a fenila, a qual R5 e R6 ou R7 se ligam, para formar um radical policíclico heterocíclico, com um anel portador de nitrogênio em que pelo menos um átomo de nitrogênio se liga a um átomo de carbono da fenila, em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente fundido com ciclo-hexeno, 5,6-di-idropiridina ou 5,6-díhidro-1H-piridin-2-ona, e em que o anel portador de nitrogênio é opcionalmente substituído, independentemente com um a dois oxo, halo, C1-3 alquila, C1-3 alcóxi, C1-3 alquil-OH, C1-3 haloalquila, C1-3 haloalcóxi, heteroarila de 4-7 membros, heterocicloalquila ou fenila de 4-7 membros, em que a fenila é opcionalmente substituída com um a cinco R10, contanto que R5 não seja tomado juntamente com R6 para formar uma benzotriazolila ou uma benzoxadiazolila e, contanto que R5 não seja tomado juntamente com R7 para formar uma benzoxadiazolila; e (j) R8 e R9 são, independentemente H, OH, halo, Ci-3 alquila, C-i_3 alcóxi, Ci.3 haloalquila ou Ci_3 haloalcóxi.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado peIo fato de que o mamífero é um ser humano.

19. Uso de um composto como definido na reivindicação 1, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de obesidade ou uma condição de estar em excesso de peso em um mamífero com necessidade de tal tratamento.