Page 2, ligne 41, il faut lire "ATCC Il.796 , au lieu de "Souche isolée 14.576- 4".
<Desc/Clms Page number 2>
Lettre rectificative (Suite)o Page, 4, lignes 48, 50, page 5, ligne 7, 10, 18, 21, 35, 38 - page 6, li- gnes 1, 9, 10, 13. 18, 19, 22. 28, page 7, lignes 2, 5, 6, 10, 14, 16, 18, 22, 28, 33 page 8, ligne 1, 48 - page 9, lignes 5 et 6.12, 17, 20, 27, page
EMI2.1
10, ligne 25, il faut lire "anisomycine" ou "'Id-aiiisom7yeinen au lieu de "posa. 107" ou'UéPoÀ 107 " ou1tle ce P.A.1C7" selon le cas.
Page 6, ligne 7, il faut ajouter 'Inactivité anti-fongi de l'anisomycine chez les êtres humains n'a pas encore été démontrée jusqu'à présent ".
Page 7, ligne 3.. il faut lire " ATCC 11. Î,6 " au lieu de rt n 14.576-4" .
Page 8, ligne 58, lire "224" au lieu de "231,5 ".
EMI2.2
Page 9, â la fin de la ligne 11, il faut ajouter OLO s ue lle est dissoute dans du chloroforme (C,1%), sa rotation optique estLo{J?-5 = - 450 ..:t:)o If.
D Page 9, ligne Ils. lire -J" et admise à venir à l'équilibre n awlieu de "à".
**ATTENTION** fin du champ CLMS peut contenir debut de DESC **.
2ème lettre rectificative jointe pour valoir comme de droit à la dite du 1er décembre 1955.
EMI2.3
Page 11, lignes27 et 28, lire 'Id-lanisomyoineu au lieu de "d'un nouvel anti- biotique, dénommé P.A. 107";
EMI2.4
Page 11, ligne 29, lire 't ACT 11.79e " au lieu de if n 14.576",- Page 11, ligne 35 et lignes 37 et 38, lire 1115anisomycine " au lieu de ."l'an-. tibiotique" ; Page 11, lignes 41 et 42, lire "d'anisomycine " au lieu de " d'un nouvel antibiotique (dénommé P.A. 107)
EMI2.5
Page 11, lignes 43, 45 et page 12, ligne 11, lire : "anisomycine " au lieu de "nouvel antibiotique dénommé P.A. 107"; Page 12, ligne 5, lire : "224" au lieu de 11231,511.
<Desc/Clms Page number 3>
L'invention est relative à un procédé de préparation d'un anti- biotique utile, dénommé P.A. 107; et elle concerne, plus particulièrement, sa production par fermentation, des méthodes pour sa production et sa concen- tration à partir de solutions brutes, telles que des bouillons de fermenta- tion, et des procédés pour sa purification. L'antibiotique peut se présenter sous la forme de produits dilués, de concentrats bruts et à l'état cristal- lisé pur. Les produits obtenus sont particulièrement utiles pour combattre des micro-organismes pathogènes, plus spécialement des fongi ou champignons et des protozoaires.
L'antibiotique en question est formé pendant la culture, dans des conditions convenablement réglées, d'une nouvelle souche d'une espèce de micro-organisme connue sous le nom de Streptomyces griseolus ou d'une nou- velle souche d'une autre espace de micro-organisme connue sous le nom de Streptomyces roseochromogenus. Ces microorganismes ont été identifiés en plantant et en essayant des cultures de ceux-ci dans des milieux utilisés normalement pour une telle identification et leurs caractéristiques cultu- rales ont été comparées à celles décrites dans le traité de Bergey "Manual of Determinativer Bacteriology" 6ème édition (1948). La nouvelle souche de S. griseolus a été désignée par Souche isolée n 14576-4. La nouvelle souche de S. roseochromogenus a été désignée par Souche isolée n 15855-4.
Les caractéristiques culturales de ces deux micro-organismes la production des antibiotiques à partir de ceux-ci et les caractéristiques de ces antibiotiques sont décrites ci-dessous. Les caractéristiques cultu- rales du S. griseolus sont indiquées dans le tableau ci-dessous. A moins qu'on le spécifie autrement, les résultats sont basés sur ceux obtenus avec six produits identiques inoculés pendant deux semaines. Les couleurs, ac- compagnées de la lettre R, sont celles indiquées dans le traité de Ridgway "Golor Standards and Nomenclature".
TABLEAU I.
Streptomvces griseolus.
Souche isolée. n 14576-4.
Couleur
EMI3.1
<tb> Milieu <SEP> Degré <SEP> de <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Pigment <SEP> Remarques
<tb>
<tb>
<tb> croissance <SEP> et <SEP> sporulation <SEP> soluble
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glucose <SEP> modéré <SEP> sporulation <SEP> mo- <SEP> aucun <SEP> environ <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> aspargine <SEP> dérée;
<SEP> presque <SEP> crèmeux;
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> brun <SEP> Benzo <SEP> (R) <SEP> 'spores <SEP> gram-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> positifs, <SEP> mesu-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rant <SEP> 1-1,3(1,3)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> x <SEP> 0,65 <SEP> (1,0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> x1,3 ;en <SEP> spi-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rales.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> gélatine <SEP> modéré <SEP> colonies <SEP> d'un <SEP> aucun <SEP> liquéfaction
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> blanc <SEP> cireux <SEP> modérée.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> crème;
<SEP> aucune
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sporulation;
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> aucun <SEP> mycelium
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> aérien
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lait <SEP> écrémé <SEP> modéré <SEP> anneaux <SEP> blancs <SEP> rose <SEP> aucune <SEP> coagula-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (28 ) <SEP> crémeux <SEP> corail <SEP> tion;hydrolyse;
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (R) <SEP> le <SEP> pH <SEP> change <SEP> de
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 6,4 <SEP> à <SEP> 6,9.
<tb>
<Desc/Clms Page number 4>
Couleur
EMI4.1
<tb> milieu <SEP> Degré <SEP> de <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Pigment <SEP> Remarques
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> croissance <SEP> et <SEP> sporulation <SEP> soluble.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
Glucose <SEP> bon <SEP> mycélium <SEP> aérien <SEP> brun <SEP> envers <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> blanc; <SEP> sporula- <SEP> rosâtre <SEP> moyen
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tion
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> nutri- <SEP> pauvre <SEP> mycelium <SEP> aérien <SEP> brun <SEP> envers <SEP> blanc
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tif <SEP> mmince, <SEP> plat <SEP> et <SEP> très <SEP> crèmeux
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> blanc. <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> maléate@de <SEP> pauvre <SEP> mycelium <SEP> aérien <SEP> aucun <SEP> maléata <SEP> de
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> calcium <SEP> à <SEP> modéré <SEP> blanc <SEP> ;
<SEP> aucune <SEP> calciauta <SEP> digéré <SEP> ;
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> @'u <SEP> sporulation <SEP> envers <SEP> blanc
<tb>
<tb>
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<tb> crémeux.
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> syn- <SEP> pauvre <SEP> sporulation <SEP> aucun <SEP> envers <SEP> blanc
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> thétique <SEP> @pauvre <SEP> pres- <SEP> crémeux <SEP> à
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> que <SEP> gris <SEP> sou- <SEP> gris <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ris <SEP> pâle <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> modéré <SEP> sporulation <SEP> modé- <SEP> brun <SEP> envers <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> d'Emerson <SEP> rée <SEP> presque <SEP> gris <SEP> clair <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> souris <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb> cellulose <SEP> aucun
<tb>
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<tb>
<tb> bouillon <SEP> de <SEP> modéré <SEP> aucune <SEP> ré-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> de <SEP> duction <SEP> des
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> dextrose <SEP> nitrates
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rondelles <SEP> bon <SEP> sporulation <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de <SEP> pommes <SEP> plus <SEP> foncée <SEP> moyen
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de-terre <SEP> que <SEP> gris <SEP> sou- <SEP> à <SEP> fon-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ris <SEP> (R)
<SEP> cé
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> amidon <SEP> modéré <SEP> sporulation <SEP> aucun <SEP> croissance
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> presque <SEP> brun <SEP> superificiel-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Benzo <SEP> (R) <SEP> le <SEP> jaune;
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> envers <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> clair; <SEP> zone
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> étroite <SEP> d'hydro-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lyse
<tb>
La nouvelle souche de S.griseolus diffère des souches décrites du même micro-organisme de différentes manières qui sont indiquées dans le tableau suivant.
TABLEAU II.
EMI4.2
<tb>
Milieu <SEP> S.Griseolus <SEP> Description <SEP> de <SEP> Bergey
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯Souche, <SEP> isolée <SEP> 14576-4
<tb>
<tb> gélatine <SEP> colonies <SEP> d'un <SEP> blanc <SEP> ci- <SEP> pellicules <SEP> jaunâtres <SEP> et <SEP> floreux <SEP> crème <SEP> (dans <SEP> des <SEP> cuvet- <SEP> conneuses <SEP> avec <SEP> sédiment <SEP> (dans
<tb> tes <SEP> de <SEP> Pétri), <SEP> des <SEP> bâtonnets <SEP> de@gélatine).
<tb>
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
Milieu -- S.Griseolus Description de Bergey Souche isolée,;1à576-L
EMI5.2
<tb> agar <SEP> sporulation <SEP> pauvre <SEP> près- <SEP> Mycelium <SEP> aérien <SEP> d'abord <SEP> gris
<tb>
<tb>
<tb> synthé- <SEP> que <SEP> gris <SEP> souris <SEP> (R) <SEP> ; <SEP> et <SEP> devenant <SEP> ensuite <SEP> d'un <SEP> gris
<tb>
<tb>
<tb> tique <SEP> croissance <SEP> pauvre. <SEP> neutre <SEP> et <SEP> pâle;
<SEP> croissance
<tb>
<tb>
<tb> superficielle <SEP> limitée <SEP> presqu'
<tb>
<tb>
<tb> entière <SEP> à <SEP> du <SEP> mycélium <SEP> aérien.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glucose <SEP> croissance <SEP> bonne; <SEP> myce- <SEP> croissance <SEP> étalée <SEP> ; <SEP> cen-
<tb>
<tb>
<tb> 'agar <SEP> lium <SEP> aérien <SEP> blanc <SEP> ; <SEP> aucunetrale <SEP> de <SEP> couleur <SEP> crème <SEP> prononcée
<tb>
<tb>
<tb> sporulation, <SEP> et <SEP> devenant <SEP> foncée.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lait <SEP> de <SEP> (sur <SEP> du <SEP> lait <SEP> écrémé <SEP> à <SEP> 28 ) <SEP> croissance <SEP> abondante <SEP> ; <SEP> pelli-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tournesol <SEP> croissance <SEP> modérée; <SEP> cules <SEP> roses; <SEP> coagulé, <SEP> peptonisé;
<tb>
<tb>
<tb> anneau <SEP> blanc <SEP> crémeux;
<SEP> devient <SEP> alcalin.
<tb>
<tb> pigment <SEP> soluble <SEP> d'un <SEP> rose
<tb>
<tb>
<tb> corail <SEP> (R) <SEP> ; <SEP> aucune <SEP> coagula-
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> ; <SEP> hydrolyse; <SEP> le <SEP> pH <SEP> de-
<tb>
<tb>
<tb> vient <SEP> alcalin.
<tb>
bouillon aucune réduction en nitrites nitrites obtenus. de nitrate de dextrose
TABLEAU III
EMI5.3
Streptomyces roseochromo2eneâ.
Souche isolée n 15855-4.
' Couleur
EMI5.4
<tb> Milieu <SEP> Degré <SEP> de <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Pigment <SEP> Remarques
<tb> croissance <SEP> et <SEP> sporulation¯¯¯soluble¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯
<tb>
<tb> Plaques <SEP> modéré <SEP> mycelium <SEP> aérien <SEP> aucun <SEP> Colonie <SEP> légèrement <SEP> éleglucose <SEP> blanc; <SEP> jaune <SEP> ci- <SEP> vée; <SEP> surface <SEP> plissée;
<tb> asparagine <SEP> reux <SEP> le <SEP> long <SEP> du <SEP> envers <SEP> entre <SEP> jaune <SEP> abribord <SEP> d'une <SEP> colo- <SEP> cot <SEP> (R) <SEP> et <SEP> jaune <SEP> de <SEP> cadnie <SEP> ; <SEP> sporulation <SEP> mium <SEP> (R) <SEP> ; <SEP> spirales <SEP> prépresque <SEP> fauve <SEP> sentes;
<SEP> spores <SEP> ellipsoi-
<tb>
EMI5.5
vinacé pâle (R) daux,grapositifs, 0,66- 95(a95)x,95-13(1,3)
EMI5.6
<tb> Colonies <SEP> sur <SEP> des <SEP> plaques
<tb> de <SEP> dilution <SEP> se <SEP> transforment <SEP> depuis <SEP> une <SEP> sporulation <SEP> ayant <SEP> une <SEP> couleur
<tb> fauve <SEP> vinacée <SEP> pâle <SEP> (R)
<tb> à <SEP> roux <SEP> vinacé <SEP> (R),où
<tb> cette <SEP> sporulation <SEP> forme
<tb> des <SEP> amas,
<SEP> en <SEP> des <SEP> colonies <SEP> d'une <SEP> couleur <SEP> brun
<tb> clair <SEP> et <SEP> sans <SEP> pores.
<tb>
<tb> plaques <SEP> de <SEP> bon <SEP> mycélium <SEP> aérien <SEP> brun <SEP> bonne <SEP> liquéfaction.
<tb> gélatine <SEP> blanc <SEP> foncé
<tb>
<Desc/Clms Page number 6>
douleur
EMI6.1
<tb> Milieu <SEP> Degré <SEP> de <SEP> croissance <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Pigment <SEP> Remarques
<tb>
<tb>
<tb> et <SEP> sporulation <SEP> soluble
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lait <SEP> écré- <SEP> pauvre <SEP> anneau <SEP> jaune <SEP> plus <SEP> aucune <SEP> coagula-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> mé <SEP> (28 ) <SEP> à <SEP> modéré <SEP> clair <SEP> à <SEP> brun <SEP> claire <SEP> tion <SEP> ; <SEP> aucune
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> moyen <SEP> qu'avel- <SEP> hydrolyse;
<SEP> le
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lane <SEP> (R) <SEP> pH <SEP> change <SEP> de
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 6,5 <SEP> à <SEP> 6,9.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> glucose <SEP> modéré <SEP> brun <SEP> clair, <SEP> brun <SEP> envers <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> cireux,myce- <SEP> moyen <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> lium <SEP> aérien
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> blanc <SEP> à <SEP> la <SEP> partie
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> supérieure <SEP> de <SEP> la
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> souche <SEP> ;
<SEP> aucune
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<tb>
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<tb> sporulation.
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> nu- <SEP> pauvre <SEP> à <SEP> brun <SEP> clair, <SEP> ci- <SEP> brun <SEP> envers <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tritif <SEP> modéré <SEP> reux <SEP> clair <SEP> à <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> moyen
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> syn- <SEP> pauvre <SEP> sporulation <SEP> aucun <SEP> envers <SEP> presque
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> thétique <SEP> presque <SEP> roux <SEP> incolore
<tb>
<tb>
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<tb> vinacé <SEP> (R)
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> maléate <SEP> pauvre <SEP> sporulation <SEP> aucun <SEP> envers <SEP> presque
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de <SEP> cal- <SEP> presque <SEP> fauve <SEP> incolore
<tb>
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<tb>
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<tb> cium <SEP> (R)
<tb>
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<tb>
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<tb>
<tb> rondelles <SEP> modéré <SEP> mycelium <SEP> aérien <SEP> brun
<tb>
<tb>
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<tb>
<tb> de <SEP> pommes <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> clair
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de <SEP> terre <SEP> clair; <SEP> sporula-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> depuis <SEP> fau-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ve <SEP> clair <SEP> vinacé
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb> (R) <SEP> à <SEP> roux <SEP> vinacé
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<tb> (R)
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<tb> plaques <SEP> pauvre <SEP> blanc <SEP> crémeux, <SEP> ci- <SEP> aucun <SEP> hydrolyse <SEP> pauvre
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> d'amidon <SEP> reux,
<SEP> pas <SEP> de <SEP> spo- <SEP> à <SEP> modérée.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rulation.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
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<tb> bouillon <SEP> modéré <SEP> pas <SEP> de <SEP> réduc-
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<tb>
<tb> au <SEP> nitra- <SEP> tion <SEP> èn <SEP> nitri-
<tb>
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<tb>
<tb> te <SEP> de <SEP> dex- <SEP> tes.
<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> trose
<tb>
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<tb>
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<tb>
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<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> modéré <SEP> brun <SEP> clair, <SEP> cireux <SEP> ; <SEP> brun
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> sporulation <SEP> fauve <SEP> clair
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> vinacé <SEP> (R) <SEP> à <SEP> fauve
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> vinacé <SEP> clair <SEP> (R).
<tb>
Les caractéristiques susdites correspondent presque entièrement avec la description du Streptomyces roseochromogenrs décrit dans le traité de Bergey.
Bien qu'on connaisse une autre souche de S. roseochromogenus pour former l'antibiotique roseomycine, il a été clairement établi que le P.A. 107 est différent de la roséonycine, come il résulte des particula- rités indiquées ci-après.
Il est à noter que pour la production du P.A. 107, l'invention
<Desc/Clms Page number 7>
n'est pas limitée à l'organisme susdit ou à des organismes qui répondent complètement, à la description faite ci-dessus, celle-ci n'ayant été donnée qu'à titre illustratif. En réalité on désire et on envisage d'inclure l'u- sage des espèces mutcntes obtenues à partir de l'organisme décrit en ayant recours à divers moyens, par exemple une exposition aux rayons X ou aux rayons ultra-violets, l'utilisation de moutardes à l'azote et analogues.
Alors que l'antibiotique P.A. 107 est actif contre-une varié- té de micro-organismes, comme indiqué plus haut, il est particulièrement actif contre les protozoaires et fongi pathogènes''. Le tableau ci-dessous montre le spectre antibiotique du P.A. 107 obtenu par des essais effectués avec divers fongi. Ces essais ont lieu en ensemençant du bouillon nutri- tif, contenant des concentrations différentes de l'antibiotique pur avec l'organisme particulier spécifié et en observant les concentrations pour lesquelles aucune croissance ou une croissance effective a lieu. L'antibio- tique est utilisé avec des concentrations de 1, 10, 50, 100,500 et 1.000
EMI7.1
micr05rammeajmillilitre (mcgm7.). L'essai a lieu dans des conditions nor- malisées.
TABLEAU IV.- a) Spectre du P.A. 107. Fongi pathogènes
EMI7.2
P 107 du S. riseolus)
EMI7.3
<tb> Organisme <SEP> Concentration
<tb>
<tb>
<tb> P.A. <SEP> 107 <SEP> : <SEP> mcg/ml.
<tb>
<tb>
<tb> croissance <SEP> aucune
<tb>
EMI7.4
########¯¯¯¯¯¯¯¯ croissance
EMI7.5
<tb> Microsporum <SEP> canis <SEP> 10 <SEP> 100
<tb>
<tb> Microsporum <SEP> audouini <SEP> 10 <SEP> 100
<tb>
<tb>
<tb> Histoplasma <SEP> capsulatum <SEP> 10 <SEP> 100
<tb>
<tb>
<tb> Cryptococcus <SEP> neoformans <SEP> 1 <SEP> 10
<tb>
<tb>
<tb> Trichophyton <SEP> 100 <SEP> 500
<tb>
<tb>
<tb> Phialophora <SEP> verrucosa <SEP> 100 <SEP> 500
<tb>
EMI7.6
Blastomyces dernatiditie ' 500
EMI7.7
<tb> Sporotrichum <SEP> schenkii <SEP> > <SEP> 500
<tb>
<tb> Trichophyton <SEP> violaceum <SEP> > <SEP> 500 <SEP>
<tb>
<tb> Hormodendron <SEP>
compactum <SEP> > <SEP> 500 <SEP>
<tb>
<tb> Blastomyces <SEP> brasilienais <SEP> > <SEP> 500
<tb>
b) Spectre du P.A. 107 - Fongi pathogènes
EMI7.8
(P.Aa 107 du S, roseochromogenus)
EMI7.9
<tb> Concentration
<tb>
EMI7.10
Organisme P.A. 107 : meir/ml. croissance aucune #######¯¯¯¯¯¯¯¯ croissance
EMI7.11
<tb> M.canis <SEP> 50 <SEP> I <SEP> 100
<tb> M. <SEP> audouini <SEP> 10 <SEP> 50
<tb>
<tb> H. <SEP> capsulatum <SEP> 50 <SEP> I <SEP> 100
<tb>
EMI7.12
Crypt.neorormans 1 10
EMI7.13
<tb> T. <SEP> sulfureum <SEP> 10 <SEP> 50
<tb>
<tb> Ph. <SEP> verrucosa <SEP> 100 <SEP> 500
<tb>
<tb>
<tb> B. <SEP> dermatiditis <SEP> 100 <SEP> 1000
<tb>
<tb>
<tb> Sp. <SEP> schenkii <SEP> 100 <SEP> 1000
<tb>
<tb>
<tb> T. <SEP> violaceum <SEP> 100 <SEP> 1000
<tb>
<tb>
<tb> H. <SEP> conpactum <SEP> 100 <SEP> 1000
<tb>
<tb>
<tb> B.
<SEP> brasiliensis <SEP> 100 <SEP> 1000
<tb>
IP indique une inhibition partielle.
<Desc/Clms Page number 8>
Inactivité anti-fongi de l'antibiotique P.A. 107 est illustrée en outre, par le tableau V, celui-ci montrant la concentration minimum de l'antibiotique à laquelle la croissance de souches différentes de Can- dida Albicans ne se produit pas. Cette concentration est exprimée en mcg/ml comme étant la "concentration inhibi-toire minimum". Une méthode normalisée est utilisée, analogue, à celle décrite ci-dessus- à propos- du ta- bleau IV.
TABLEAU V. a) Spectre du P.A. 107 contre le Candida Albicans (P.A. 107 du S. griselous)
EMI8.1
<tb> Candida <SEP> Albicans <SEP> Concentration <SEP> ihhibitoire
<tb> souche <SEP> n <SEP> minimum
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> P.A. <SEP> 107 <SEP> en <SEP> mcg/ml.
<tb>
<tb>
8 <SEP> 3,12 <SEP> IP
<tb> 9 <SEP> 6,25 <SEP> IP
<tb> 11 <SEP> 3.12
<tb> 13 <SEP> 12,5
<tb>
b) Spectre du P.A. 107 contre le Candida Albicans.
(P.A. 107 du S. reseochromogenus).
EMI8.2
<tb>
Candida <SEP> Albicans <SEP> Concentration <SEP> inhibitoire
<tb>
<tb>
<tb> souche <SEP> n <SEP> minimum
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ <SEP> P.A. <SEP> 107 <SEP> en <SEP> mcg/ml.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
8 <SEP> 3,12
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 9 <SEP> 6,25
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 11 <SEP> 3,12
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 13 <SEP> 6,25
<tb>
IP indique une;inhibition partielle.
L'activité antiprotozoaire de l'antibiotique P.A. 107 est déterminée en inoculant des tubes contenant des concentrations différentes de l'antibiotique avec des protozoaires pathogènes typiques, Trichomonas vaginalis et Endamoeba histolytica et en observant le'degré de mobilité et/ou dé croissance des micro-organismes après une incubation pendant 48 heures.
A'titre comparatif, les menés essais ont été faits avec l'antibiotique dénomme fumagilline, qui est connu pour son activité antiprotozoaire. Les résultats de ces essais sont indiqués dans le tableau VI qui montre les degrés d'activité contre les Trichomonas en se basant sur la mobilité et la croissance observées avec des lamelles préparées à partir de tubes incubés avec les concentrations spécifiées Pour déterminer l'activité contre le Trichomonas, le chiffre 4+ indique une activité inhibitoire complète des antibiotiques essayés, c'est-à-dire une mobilité et une croissance nulles du micro-organisme; le chiffre 3+ indique une activité marquée de l'antibiotique ou une mobilité et/ou une croissance réduite;
le chiffre 2+ indique une activité modérée; 1+ indique une activité légère et (-) indique une activité nulle. L'activité contre l'Endemceba est déterminée en comparant le nombre de cellules dans des tubes de repère eu nombre de cellules dans des tubes contenant les antibiotiques avec les concentrations, les tubes marqués par le signe (+) ayant une activité inhibitoire complète et ceu:: marqués par le signe (-) n'ayant aucune activité.
<Desc/Clms Page number 9>
TABLEAU VI a) activité anti-protozoaires du P.A. 107 (de S. griselous).
EMI9.1
<tb>
Activité <SEP> à <SEP> des <SEP> concentrations <SEP> de <SEP> : <SEP>
<tb> Antibiotique <SEP> Protozoaire <SEP> 7.8 <SEP> mcg/ml <SEP> 3.9 <SEP> mcg/ml <SEP> 1.9 <SEP> mcg/ml
<tb>
<tb> P. <SEP> A. <SEP> 107 <SEP> Trichomonas <SEP> 4+ <SEP> 3+ <SEP> 2+
<tb> P.A. <SEP> 107 <SEP> Endamoeba <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> Fumsgilline <SEP> Trichomonas <SEP> 3 <SEP> + <SEP> - <SEP> Fumagilline <SEP> @ <SEP> Endamoeba <SEP> - <SEP> -
<tb>
@ aucune activité n'est observée en dessous de 15,6 mcg/ml. b) Activité anti-protozoaire du P.A. 107 ( de S.roseochromoge- nus)
EMI9.2
<tb> Activité <SEP> à <SEP> des <SEP> concentrations <SEP> de
<tb> Antibiotique <SEP> Protozoaire <SEP> 7.8 <SEP> mcg/ml <SEP> 3.9 <SEP> mcg/ml <SEP> 1.9 <SEP> mcg/ml
<tb>
<tb> P.A.
<SEP> 107 <SEP> Trichomonas <SEP> 4+ <SEP> 4+ <SEP> 4+
<tb> i <SEP> 4+ <SEP> 3+ <SEP> 2+
<tb> P.A. <SEP> 107 <SEP> Endamoeba <SEP> + <SEP> + <SEP> +
<tb> + <SEP> + <SEP> +
<tb>
Il résulte du tableau ci-dessus que l'antibiotique P.A. 107 est fortement actif contre le Trichomonas et l'Endamoeba. Par ailleurs, les résultats montrent que l'antibiotique est beaucoup plus actif contre ces organismes que la fumagilline.
On n'a observé aucune activité de l'antibiotique P.A. 107 con- tre les mycobactéries Saprophytiques quand des concentrations de l'anti- biotique allant jusqu'à 100 mcg/ml sont essayées contre les espèces M. ranae, phlei, smegmatis, N 607, berolinense et butyricum. Une légère ac- tivité seulement est observée contre divers micro-organismes gram-positifs et gram-négatifs.
On a constaté que l'antibiotique Po A. 107 ne possède qu'un de- gré de toxicité relativement bas quand il est utilisé pour des essais avec des animaux. Par exemple, l'indice IDo, quand l'antibiotique est adminis- tré, par voie intraveineuse, à des souris, en solution aqueuse, est d'environ 2 mg/20g de souris.
Suivant un aspect de l'invention, l'antibiotique P.A. 107 est produit pendant la culture du micro-organisme S. griseolus n 1457b-4 ou du micro-organisme S.roseochromogenus n 15855-4 dans un milieu nutritif aqueux a une température d'environ 24-300 et dans des conditions submergées d'agi- tation et d'aération. Des milieux nutritifs qui sont utiles pour ces métho- des contiennent un hydrate de carbone, tels que des sucres, un amidon du gly- cérol, de la farine de blé, une source d'azote organique, telle la caséine, la farine de soja, de la farine d'arachides, du gluten de blé, de la farine de coton, de la lectalbumine le produit de digestion enzymatique de caséine, du tryptome.
Une source de substances de culture, telle que des solubles de distilleries, de l'extrait de levure, des résidus de la fermentation de mé- lasses ainsi que des sels minéraux, tels que du chlorure de sodium, du sul- fate de magnésium et des traces de minéraux, -cels que le cuivre, le zinc et le fer, peuvent également être utilisés avec des résultats désirables. S'il se produit une formation excessive de mousses au cours de la fermentation, des agents anti-mousses, tels que des huiles végétales, peuvent être ajoutés au milieu de fermentation. Le pH de la fermentation tend à rester constant mais si des variations se produisent on peut également ajouter au milieu un agent tampon, tel que le carbonate de calcium.
<Desc/Clms Page number 10>
Un inoculum pour la préparation de l'antibiotique P.A. 107 par la culture du S. griseolus ou S.roseochromogènus peut être obtenu en- utili- sant des cultures de souches sur des milieux tels que l'agar d'Emerson ou du lactose de boeuf. La culture pénètre utilisée pour inoculer des fla- cons secoués ou des cuves à inoculum pour la culture submergée. Suivant une variante, les cuves à inoculum peuvent être ensemencées à l'aide de cultures obtenues dans des flacons secoués. La culture du microorganisme atteint généralement son maximum en environ deux ou trois jours. Toutefois, en faisant varier les appareils utilisés, le degré d'aération, le degré d'agitation, etc-,- on peut agir sur la vitesse à laquelle l'activité maximum est atteinte.
En général, on continue la fermentation jusqu'à ce que le milieu présente une activité antimicrobienre substantielle, une période comprise entre 24 heures et 4 jours étant suffisante dans-la plupart des cas. L'aération du milieu dans les cuves pour une culture submergée se fait avec un. débit d'environ un demi- à deux volumes d'air libre par volume de bouillon et par minute. L'agitation peut se faire à l'aide d'agitateurs de genres appropriés qui sont bien connus par ceux qui s'occupent des indus- tries de fermentation. Des conditions aseptiques doivent, bien entendu, être maintenues pendant le transfert de l'inoculum et pendant la croissance du micro-organisme.
Après la croissance du micro-organisme, le mycélium, qui est gé- néralement très abondant et fin p@ut être séparé du bouillon de fermenta- tion à l'aide de divers appareils normalisés tels que des filtres-presses, centrifuges, etc... Ensuite, l'antibiotique peut être séparé du bouillon de fermentation par plusieurs méthodes différentes. Suivant une variante, tout le bouillon peut être utilisé tel quel ou il peut être séché, L'anti- biotique peut être purifié davantage de différentes manières.
Il peut être extrait, par exemple, hors d'une solution aqueuse avec des pH neutres ou lé- gèrement alcalins, compris de préférence entre environ 6 et environ 10, en se servant de divers solvants organiques non miscibles à l'eau, comprenant des éthers, des hydrocarbures aromatiques, des esters, des cétones, des al- cools inférieurs, des hydrocarbures halogénés et des mélanges de ceux-ci.
A titre d'exemple on cite l'éther diéthylique, le benzène; l'acétate d'éthy- le, l'acétate de butyle, la méthyl isobutyl cétone, le butanol et le chlo- roforme, L'antibiotique peut être extrait à nouveau hors de la plupart des solutions dans un solvant par de l'eau acidifiée ayant, de préférence, un pH inférieur à environ 2,5. Si on le désire, l'extrait dans le solvant peut être concentré avant d'être extrait à nouveau par l'eau acidifiée. En ré- glant le pH pour la neutralité ou l'alcalinité, l'antibiotique peut être extrait à nouveau dans un des solvants indiqués plus haut. Après séchage du solvant et concentration de la solution ; l'antibiotiquecristallise sous la forme de longues aiguilles blanches.
Le produit peut être recristallisé en refroidissant une solution de ce produit dans du butanol chaud, de l'acé- tate d'éthyle, du benzène et du bichlorure d'éthylèns. D'autres méthodes de récupération, qui sont évidentes, comprennent l'absorption sur du charbon de bois avec lavage subséquent, le traitement par des résines échangeuses d'ions et le développement sur des colonnes.d'alumine.
L'antibiotique P.A. 107 est un composé basique et organique blanc qui est soluble dans des acides aqueux dilués tout en étant modéré- ment soluble dans l'eau. Il est très soluble dans plusieurs solvants orga- niques tels que le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le dioxane et le chloro- forme. Il est insoluble dans l'hexane, le cyclchexane. le tétrachlorure de carbone et l'éthero Le composé conserve sa stabilité pendant plusieurs heures à la température ambiahte dans une zone étendue pour le pH. Par cor- tre, il est très instable en étant chauffe dans une solution acide. Il est stable à l'état sec ou en étant dissous dans des solvants secs. L'antibio- tique en question et cristallisé à un point de fusion d'environ 140-141 .
Il présente trois pointes dans la région ultraviolette respectivement à 231,5.
277 et 283,5 u (3.34 mg dans 25 ml de méthanol). Quand il est dissous dans
<Desc/Clms Page number 11>
le chloroforme, l'antibiotique présente plusieurs pointes caractéristiques dans la région infrarouge, les pointes les plus significatives se présentant aux fréquences suivantes (en cm-l) : 3545, 3450, 3320. 2890, 2800, 1725, 1610,
1582, 1515, 1470, 1447, 1380, 1320, 1302. 1242, 1178, 1036 et 962. La figure 1 montre, plus particulièrement, le spectre infrarouge de la base P.A.
107 pour les fréquences comprises entre 5.000 et 1100 cm-1. les abscisses inférieures correspondant à ces fréquences exprimées en microns (#/ ) et les abscisses supérieures en cm-1 ( /cm-1) alors que les ordonnées donnent la transmittance en % (transm/%). La figure la montre le même spectre mais pour des fréquences comprises entre 1100 et 625 cm-1. La base, dissoute dans du méthanol (C,1%). à un [Ó] 5 = -30,0 .
Un échantillon de P.A. 107, obtenu à partir de S.griseolus et cristallisé hors de l'acétate d'éthyle, a été séché pendant trois heures à 56 sans perte de poids. L'antibiotique cristallisé est ensuite analysé et on constate qu'il comprend les éléments suivants en proportions en poids : carbone 63,55; hydrogène 7,27; azote 5,20 et oxygène (par différence) 23,98.
Le poids moléculaire de l'antibiotique P.A. 107 obtenu à partir du S.roseochromogenus, ce poids ayant été déterminé par la méthode ébullios- copique, correspond à 276.
Un échantillon de ce P.A.107, qui a été cristallisé hors de l'a- cétate d'éthyle, est séché pendant trois heures à 56 sans perte de poids.
L'antibiotique cristallisé et séché est ensuite analysé et on trouve qu'il comprend les éléments suivants, en proportions en poids : carbone 63,51; hy- drogène 7,21 ; azote 5,22 et oxygène (par différence) 24,06.
Les analyses ci-dessus correspondent à la formule empirique probable C14H19NO4 pour l'antibiotique basique.
L'antibiotique P.A. 107 se distingue nettement des autres anti- biotiques par ces propriétés, ce qui est mis en évidence par les propriétés indiquées ci-dessus et par des mesures faites au papier chromatographique.
Des sels utiles de l'ahtibiotique peuvent être préparés par des méthodes bien connues, par les spécialistes, par exemple par traitement de la base avec un acide approprié en solution aqueuse ou dans des conditions anhydres.
Par exemple, le chlorhydrate peut être préparé en dissolvant la base dans l'acétone et en faisant passer de l'acide chlorhydrique gazeux dans la solu- tion. D'autres acides, tels que l'acide sulfurique ou phosphorique, peuvent être utilisés pour préparer les sels d'acides de l'antibiotique.
L'invention est illustrée, en outre, par les exemples suivants qui n'ont aucun caractère restrictif ni limitatif.
EXEMPLE I.-
On prépare un milieu nutritif avec les matières suivantes dans un litre d'eau.
EMI11.1
<tb> glucose <SEP> ("Gérélose") <SEP> 10 <SEP> g
<tb>
<tb> Amidon <SEP> de <SEP> blé <SEP> 10
<tb>
<tb> caséine <SEP> hydrolysée <SEP> ("N-Z <SEP> Amine <SEP> B") <SEP> 5
<tb>
<tb> Solubles <SEP> de <SEP> mélasses <SEP> de <SEP> distille-
<tb>
<tb> ries <SEP> (Gurbay <SEP> BG) <SEP> 5
<tb>
<tb> farine <SEP> de <SEP> soja <SEP> 15
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1
<tb>
Après avoir réglé le pH du mélange à 7 à l'aide d'hydroxyde de potassium, on ajoute un gramme de carbonate de calcium et on fait passer de la vapeur d'eau dans le mélange pendant environ 30 à 45 minutes pour sté- riliser celui-ci.
Une culture de la nouvelle souche de S.griseolus est trans-
<Desc/Clms Page number 12>
férée dans 100 ml du milieu susdit dans un flacon d'Erlenmeyer de 300 ml et on secoue le flacon pendant 45 heures jusqu'à ce qu'une bonne croissance soit obtenue. On prépare un inoculum pour la fermentation d'une quantité plus grande en transférant le contenu du flacon susdit, dans des conditions aseptiques, dajns- un litre du même milieu contenu dans un flacon de 3 litres que l'on secoue pendant 48 heures.
On prépare et on stérilise 190 litres du milieu nutritif comme indiqué plus haut et ce milieu est inoculé avec l'inoculum ainsi préparé.
L'organisme est ensuite cultivé dans des conditions submergées pour l'aé- ration et l'agitation, pendant une période de trois jours. Le pH du bouil- lon de fermentation est réglé à environ 2 avec da l'acide sulfurique concen- tré, le bouillon est filtré avec du Supercel pour en séparer le mycellium.
Ensuite, on règle le pH du filtrat à 9 avec de l'hydroxyde de sodium con- centré et on±l'extrait deux fois avec 57 litres de chloroforme.
Les extraits dans le chloroforme sont mélangés concentrés et extraits dans de l'eau acidifiée, jusqu'à avoir un pH=2, avec de l'acide sulfurique. Ensuite, la solution aqueuse acidifiée est concentrée et son pH est réglé à 9 en y ajoutant de l'hydroxyde de- sodium. L'antibio- tique est extrait à nouveau avec du chloroforme que l'on évapore jusqu'à. réduire le volume à 50 ml. Après addition d'un volume égal de cyclohexa- ne et après une nouvelle évaporation, on provoque la cristallisation de l'antibiotique brut et on le récupère par filtration. L'antibiotique brut est purifié en le dissolvant dans l'acétate d'éthyle, en traitant la solu- tion obtenûe avec du carbone absorbant et en évaporant l'acétate d'éthyle ce qui donne l'antibiotique P.A. 107 sous la forme de longs cristaux blancs.
EXEMPLE II.-
Une souche de Soroseochromogenus sur de l'agar d'Emerson est cultivée, dans des conditions contrôlées, en vue d'obtenir des spores dont on se sert pour inoculer un milieu nutritif ayant la composition suivantes :
EMI12.1
<tb> glucose <SEP> ('tGérélose") <SEP> 10 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> farine <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10
<tb>
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5
<tb>
<tb>
<tb> solubles <SEP> de <SEP> distilleries <SEP> ("Curbay <SEP> BG") <SEP> 5
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> amidon <SEP> de <SEP> blé <SEP> 10
<tb>
Ce mélange de matières nutritives est dilué avec de l'eau jus- qu'à avoir un volume d'un litre, on règle le pH à 7 avec de l'hydroxyde de potassium, on traite avec 0,
1% de carbonate- de calcium qui agit comme un tampon et on soumet l'ensemble de la stérilisation par la chaleur. Le mi- lieu est ensuite refroidi et les spores sont ajoutée dans des conditions aseptiques. La culture de l'organisme a lieu dans des flacons secoués à environ 28 pendant une période de deux jours.
Le mélange de bouillon et de mycelium ainsi formé est utilisé pour inoculer 57 litres d'un milieu de fermentation stérile ayant, en sub- stance, la même composition que celu@ indiqué plus haut. On soumet le mé- lange à une agitation.et- à une aération dans des conditions stériles pen- dant deux-jours à environ 28 Ensuite, on sépare le mycélium à l'aide du Supercel et on concentre le bouillon dans le vide jusqu'à ce qu'il ait un volume de 11,5 litres. Ce concentrat est extrait plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyleo Les phases de solvant mélangées. dont la question correspond à environ 57 litres, sont concentrées sous vide jusqu'à avoir un volume de 1,5 litres et le concentrat est secoué 5 fois avec des portions de 100 ml d'acide chlorhydrique o,1N.
Le pH de la solution acide, contenant l'antibiotique, est réglé à 9,0 avec de l'hydroxyde de sodium et la solution est ensuite extraite dix fois aves des portions de 250 ml d'ét@er. L'éther
<Desc/Clms Page number 13>
est séparé dans le vide et l'eau restante est enlevée par distillation azéo- tropique avec du benzène.. Après concentration du distillat et après sé- paration du benzène, l'antibiotique cristallise et peut être séparé par fil- tration. L'antibiotique est cristallisé à nouveau par dissolution dans de l'acétate d'éthyle chaud, par traitement subséquent avec du carbone activé et par refroidissement de la solution obtenue. Le produit, cristallisé sous la forme de longues aiguilles blanches, est filtré, séché et essayé comme indiqué plus haut.
Ce produit est très actif contre les protozoaires et fongi pathogènes.
On constate que l'antibiotique ainsi préparé est identique à ce- lui obtenu comme décrit dans l'exemple 1 en se basant sur les spectres d'absorption dans l'infrarouge et l'ultraviolet, sur des mesures faites au papier chromatographique et sur le point de fusion mixte des produits mélan- gés. Ceci a été confirmé par les spectres microbiens et par d'autres ca- ractéristiques physiques ét chimiques obtenues au cours d'essais faits avec des produits dérivés de souches du S.roseochromogenus et du S.griseolus dont question plus haut. Les légères différences existant entre les résul- tats d'essai indiqués plus haut se trouvententre les limites d'erreurs ex- périmentales et n'affectent aucunement la conclusion qu'il s'agit de pro- duits identiques.
Gomme il va de soi et comme il résulte d'ailleurs déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à celui de ses modes d'ap- plication non plus qu'à ceux des modes de réalisation de ses diverses par- ties ayant été plus spécialement indiqués, elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes.
REVENDICATIONS.
1. - Procédé de préparation d'un nouvel antibiotique, dénommé P.A. 107, dans lequel on cultive le microorganisme Streptomyces griseolus n 14576-4. ou le microorganisme Streptomyces roseochromogenus n 18855-4 dans un milieu nutritif aqueux et dans des conditions aérobiques submergées.
2. - Procédé suivant la revendication 1, dans lequel la cultu- re a lieu à une température comprise entre environ 24 et environ 30 pen- dant une période comprise entre environ un jour et environ quatre jours.
3.- Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, dans lequel l'antibiotique est obtenu à partir du bouillon de fermenta- tion et, si on le désire, est converti en un sel acide.
4. - Procédé suivant la revendication 3, dans lequel l'antibio- tique est obtenu en filtrant le bouillon et en l'extrayant avec un solvant organique non miscible dans l'eau dans des conditions de pH neutres à alca- lines.
5. - Procédé de production d'un nouvel antibiotique (dénommé P.A. 107), en substance tel que décrit ci-dessus.
6. - Nouvel antibiotique, dénommé P.A. 107, obtenu par le pro- cédé suivant l'une ou l'autre des revendications précédentes.
7. - Nouvel antibiotique, dénommé P.A. 107. inhibant la crois- sance de protozoaires et de champignons pathogènes, consistant en une substance basique (ou un sel d'acide de celle-ci, tel que chlorhydrate), modérément soluble dans l'eau, très soluble dans les solvants organiques et capable de former des sels avec les acides, la base cristalline conte- nant les éléments carbone, hydrogène, azote et oxygène sensiblement dans les proportions pondérales suivantes :
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
<tb> -carbone <SEP> 63,5
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> -hydrogène <SEP> 7,2
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> -azote <SEP> 5,2
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> -oxygène <SEP> (par <SEP> différence) <SEP> 24,1
<tb>
et révélant trois crêtes ou maxima à 231,5, 277 et 283,5 m respectivement, dans la région ultraviolette du spectre, cette base, dissoute dans du chloroforme, révélant une absorption caractéristique dans la région infrarouge aux fréquences suivantes exprimées en centimètres réciproques : 3545, 3450, 3320, 2890, 2800, 1725, 1610, 1582, 1515, 1470, 1460, 1447, 1380. 1320, 1302, 1242, 1178, 1036 et 962.
8.- Nouvel antibiotique, dénommé P.A. 107. en substance, tel que décrit plus haut.