CH651825A5

CH651825A5 - Prolinderivate sowie verfahren fuer ihre herstellung.

Info

Publication number: CH651825A5
Application number: CH3751/82A
Authority: CH
Inventors: Sadao Tanaka; Kiyonori Kuromaru; Yasuo Fujimura; Isao Matsunaga; Tomoyasu Iwaoka; Noriko Obatake; Junichiro Aono; Yoshikazu Hinohara; Hideki Nakano; Masafumi Fukushima; Hiroyuki Nabata; Kazushige Sakai; Shun-Ichi Hata
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1981-06-19
Filing date: 1982-06-17
Publication date: 1985-10-15
Also published as: CA1235120A; SE453595B; HU188177B; KR890000769B1; GB2102412A; FI75804B; DK273082A; DE3222779A1; AT377496B; NO156408B; IT1157053B; KR840000488A; NO821997L; GB2102412B; NL193282C; FR2508040A1; PT75076A; NO156408C; ES520582A0; DK156054B

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Prolinderivate der nachfolgend angeführten Formel I sowie auf Verfahren zu ihrer Herstellung.

Die erfindungsgemässen Verbindungen weisen die folgende Formel auf

(I)

20

worin R einen Acylrest der Gruppe Cyclopropancarbonyl, Cy-clohexancarbonyl und Adamantancarbonyl und A einen Gly-cinrest, einen Sarcosinrest oder den Rest einer a-D-Aminosäure bedeuten, wobei der Acylrest R mit der a-Aminogruppe von A unter Bildung einer Amidbindung verbunden ist und die in der 25 Gruppe A enthaltene Carbonylgruppe an das Schwefelatom unter Bildung einer Thiolesterbindung gebunden ist.

Die genannten Verbindungen können auch als pharmazeutisch annehmbare Salze vorliegen.

Verbindungen, die denjenigen der Formel I ähnlich sind, 30 zum Beispiel solche, worin R eine Benzoyl-, Acetyl- oder tertiäre Butyloxycarbonylgruppe ist und A den Rest L-a-Amino-säure bedeutet, werden in der britischen Patentanmeldung Nr. 2 050 395 A beschrieben. In der europäischen Patentanmeldung Nr. 9 898 AI werden Verbindungen beschrieben, worin R eine 35 Benzoyl-, Acetyl-, tert.-Butyloxycarbonyl-, Cyclo-pentancarbo-nylgruppe usw. ist und A den Rest einer L-a-Aminosäure bedeutet. In der EP-Anmeldung Nr. 35 383 AI werden Verbindungen beschrieben, worin R die Benzoylgruppe ist und A den Rest einer D-Phenylalanylgruppe bedeutet. Bis jetzt sind noch 40 keine Veröffentlichungen bekannt, in welchen die weiter oben beschriebenen Verbindungen der Formel I speziell beschrieben sind. Aus diesem Grund handelt es sich hier eindeutig um neue Verbindungen. Diese sind als pharmazeutische Mittel nützlich, wie nachfolgend noch beschrieben wird. 45

Der in Formel I enthaltene Aminosäurerest A ist ein Glycin-, Sarcosin- oder ein a-D-Aminosäurerest. Beispiele für a-D-Aminosäuren umfassen neutrale, saure oder basische Aminosäuren oder aliphatische, aromatische, heterocyclische oder alicyclische Aminosäuren, wie zum Beispiel D-Alanin, D- 50

Leucin, D-Asparagin, D-Methionin, D-Glutamin, D-Phenyl-alanin, D-Tryptophan, D-Ornithin, D-Phenylglycin, D-Threonin, D-Glutaminsäure, D-Arginin, D-Cystein, D-Aspara-ginsäure, D-Histidin, D-Isoleucin, D-Prolin, D-Lysin, D-Serin, D-Tyrosin und D-Valin. Funktionelle Gruppen in diesen Ami- 55 nosäuren sind zum Beispiel Hydroxyl-, Mercapto-, Amino- und Carboxylgruppen, die durch Niederalkyl, Benzyl- und niedere Alkanoylgruppen substituiert sein können. Bevorzugte Beispiele für den Substituenten A sind Reste, die sich von Glycin, Sarcosin, D-Alanin, D-Leucin, D-Methionin, D-Glutamin, D-Phenyl- 60 alanin, D-Tryptophan und D-Phenylglycin ableiten.

Die Gruppe cooh in Verbindungen der Formel I kann in D-Form, L-Form oder in einer DL-Form vorliegen, und jede dieser Formen wird von der vorliegenden Erfindung umfasst. Wegen ihrer biologischen Aktivität sind die L- und die DL-Form besonders bevorzugt.

Beispiele für pharmazeutisch annehmbare Salze von Prolinderivaten der Formel I sind Salze mit Alkalimetallen, wie zum Beispiel Natrium und Kalium, Salze mit Erdalkalimetallen, wie zum Beispiel Calzium und Magnesium, sowie Salze mit basischen Aminosäuren, wie zum Beispiel Arginin und Lysin. Cal-ziumsalze sowie auch die Lysinsalze werden bevorzugt.

Das erste Verfahren zur Herstellung der neuen Prolinderivate der Formel I und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze ist dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel II

CH3 I

R-A'-S-CH2CHCOOH

(ii)

oder ein reaktionsfähiges Derivat davon, worin R weiter oben definiert ist und

A' = A ist, aber mit dem Unterschied, dass in Rest A' gegebenenfalls vorhandene freie funktionelle Gruppen, die nicht an der Umsetzung teilnehmen sollen, geschützt sind, mit einer Verbindung der Formel III

HN

y

(in>

COOR'

welche in der Strukturformel I enthalten ist, weist ein asymetri-sches C-Atom auf, so dass diese Gruppe in D-Form, L-Form oder einem reaktionsfähigen Derivat davon, worin R' Wasserstoff oder eine Carboxyl-Schutzgruppe bedeutet, in einem inerten organischen Lösungsmittel zwischen —50 und 20° C umsetzt, gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen aus dem Reaktionsprodukt entfernt und erhaltene Verbindungen gegebenenfalls in die pharmazeutisch annehmbaren Salze überführt.

Falls in Verbindungen der Formel I der Substituent A eine freie funktionelle Gruppe aufweist, wie zum Beispiel eine Mercapto-, Hydroxyl-, Amino- oder Carboxylgruppe, die während der erfindungsgemässen Umsetzung nicht reagieren sollte, so verwendet man im erfindungsgemässen Verfahren Verbindungen der Formel II, worin derartige Reste geschützt sind.

Beliebige funktionelle Gruppen im Substituenten A', die keine Reaktion eingehen sollen, können durch Gruppen geschützt werden, die aus der Peptid-Synthese bekannt sind und welche man unter verhältnismässig milden Bedingungen entfernen kann. So zum Beispiel kann eine Mercaptogruppe durch eine Aralkylgruppe geschützt sein, wie zum Beispiel einen Trityl-, Benzyl- oder p-Methoxybenzylrest. Eine Hydroxylgruppe kann durch die Benzylgruppe geschützt sein. Eine Aminogruppe kann als Schutzgruppe eine tert.-Butyloxycarbonylgruppe aufweisen und eine Carboxylgruppe kann durch eine tert.-Butyl-gruppe geschützt sein. Diese Schutzgruppen können entfernt werden, indem man mit Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoffsäure behandelt. Es besteht auch die

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4

Möglichkeit, eine Carboxylgruppe durch eine niederalkyl-substituierte Silylgruppe zu schützen, wie zum Beispiel eine Tri-methylsilylgruppe, die man anschliessend durch Behandlung mit Wasser entfernen kann. Falls in Verbindungen der Formel III der Rest R' eine Carboxylschutzgruppe darstellt, so kann dies eine tert.-Butylgruppe oder eine niederalkyl-substituierte Silylgruppe sein und man kann diese Schutzgruppen entfernen, indem man mit Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure, Chlorwasserstoff oder Wasser behandelt.

Die reaktionsfähigen Derivate von Verbindungen der Formel II-sind solche, in denen die Carboxylgruppe, welche sich während der Reaktion umsetzt, aktiviert ist. Die Carboxylgruppe kann auf übliche Weise aktiviert sein, vorzugsweise durch solche Gruppen, wie sie in der Peptidsynthese verwendet weden, wie zum Beispiel aktivierte Amide, Säurehalogenide, aktivierte Ester sowie auch gemischte Säureanhydride. Unter diesen Formen sind aktivierte Ester mit N-Hydroxysuccinimid, gemischte Säureanhydride mit Carbonsäuremonoestern sowie aktivierte Amide mit Carbonyldiimidazol besonders bevorzugt. Carbodiimide, wie zum Beispiel Dicyclohexylcarbodiimid, können als Kondensationsmittel verwendet werden, um eine Amidbindung zwischen der Carboxylgruppe und der Iminogruppe herzustellen.

Die reaktionsfähigen Derivate von Verbindungen der Formel III sind solche, in welchen die Iminogruppe der genannten Verbindung aktiviert ist. Die Iminogruppe kann nach bekannten Methoden aktiviert sein, üblicherweise nach solchen Methoden, wie sie in der Peptid-Synthese eingesetzt werden, zum Beispiel durch das Verfahren, eine Silylgruppe, wie eine Trimethyl-silylgruppe, einzuführen, ebenfalls auch durch Anwendung der «Phosphazo-Methode», und der Verwendung einer phosphor-haltigen Verbindung, wie zum Beispiel Phosphor(III)-chlorid. Zu diesen Methoden gehört auch die phosphorige Säure-Ester-Methode, unter Verwendung eines Esters der phosphorigen Säure, wie zum Beispiel dem Tetraäthylester von Pyrophos-phorsäure oder der «N-Carboxyanhydrid-Methode» (NCA-Methode).

Die Umsetzung wird in einem inerten organischen Lösungsmittel ausgeführt, wie zum Beispiel Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Dichlormethan oder Acetonitril. Man führt die Reaktion unter Kühlung oder bei Zimmertemperatur (—50°C - 20°C) aus, vorzugsweise bei einer Temperatur von —30°C - 10°C. Die Reaktionszeit hängt von der Reaktionstemperatur, den umzusetzenden Verbindungen sowie dem Lösungsmittel ab und sie beträgt im allgemeinen 0,5 bis 48 Stunden, vorzugsweise arbeitet man 1 bis 6 Stunden lang.

Nach der Amidbildung können gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen im Reaktionsprodukt nach beliebigen Methoden, wie sie weiter oben für entsprechende Schutzgruppen angeführt wurden, entfernt werden.

Das Endprodukt kann aus der Reaktionsmischung isoliert und nach üblichen Methoden gereinigt werden, zum Beispiel durch die verschiedensten Arten der Chromatographie unter Verwendung von Silikagel, Dextranvernetztem-Polymer und porösen polymeren Verbindungen, wie zum Beispiel Styroldivi-nylbenzol oder Acrylsäureestern. Ein geeignetes, zur Entwicklung verwendbares Lösungsmittel kann aus der folgenden Gruppe ausgewählt werden: Chloroform, Äthylacetat, Methanol, Ethanol, Tetrahydrofuran, Benzol, Wasser und Acetonitril. Es besteht auch die Möglichkeit, die Endprodukte zu erhalten, indem man zuerst das Reaktionsprodukt in Form eines organischen Salzes isoliert, wie zum Beispiel eines Cyclohexyl-aminsalzes, welches anschliessend mit einer Säure behandelt wird, wie zum Beispiel Chlorwasserstoffsäure, oder mit Kaliumhydrogensulfat.

Die auf diese Weise erhaltene Verbindung der Formel I besitzt eine Carboxylgruppe an der Seite des Prolinteils, so dass sie die Fähigkeit aufweist, mit den verschiedenen basischen Materialien, falls erwünscht ist, pharmazeutisch annehmbare Salze zu bilden. Solche Salze können nach bekannten Methoden erhalten werden, zum Beispiel durch Behandlung der genannten Carboxylgruppe mit einer äquimolaren Menge einer der weiter oben angeführten Basen (zum Beispiel Alkalimetall-Basen, Erd-alkalimetall-Basen und basische Aminosäuren).

Die im erfindungsgemässen Verfahren verwendeten Verbindungen der Formel II können sehr leicht nach der folgenden Methode erhalten werden:

Eine Verbindung der Formel VI

R-OH (VI)

worin der Substituent R weiter oben beschrieben ist, oder ein reaktionsfähiges Derivat davon in bezug auf die Carboxylgruppe, wird mit einer Aminosäure der Formel VII

H2N-A"-COOR" (VII)

worin A" einen Aminosäurerest bedeutet, welcher A' minus der Gruppe NH oder C = 0 äquivalent ist und R" Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe bedeutet oder ein reaktionsfähiges Derivat der genannten Verbindung der Formel VII, umgesetzt. Anschliessend wird im Rest R" eine Schutzgruppe, falls vorhanden, entfernt, wobei sich eine Verbindung der Formel Villi bildet

R-NH-A"-COOH (VIII)

worin R und A" weiter oben definiert sind. Dann wird die Verbindung der Formel VIII oder ein reaktionsfähiges Derivat davon mit einer Verbindung der Formel IX

CH3 I

HS-CHjCHCOOR'" (IX)

umgesetzt, worin R'" ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe bedeutet, gefolgt von der Entfernung der Schutzgruppe des Substituenten R"\ falls vorhanden.

Beispiele für reaktionsfähige Derivate der Carboxylgruppe von Verbindungen der Formel VI umfassen solche, welche ganz allgemein bei der bekannten Peptid-Synthese verwendet werden, wie zum Beispiel aktivierte Amide, Säurehalogenide, aktivierte Ester sowie gemischte Anhydride.

Für den Fall, dass der Substituent R" in der Aminosäure der Formel VII eine Schutzgruppe darstellt, so sind bevorzugte Beispiele für diese Schutzgruppe eine tert.-Butylgruppe, die durch Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff entfernt werden kann, eine Benzylgruppe, die man durch katalytische Reduktion mit Palladium oder durch Anwendung ähnlicher Methoden entfernen kann sowie auch niedere Alkyl-gruppen, wie zum Beispiel Methyl und Äthyl, die man durch Hydrolyse unter alkalischen Bedingungen entfernen kann.

Die reaktionsfähigen Derivate der Aminosäure der Formel VII sind solche, in welchen die Aminogruppe aktiviert ist, und derartige Derivate können nach beliebigen Aktivierungsmethoden, die üblicherweise bei der bekannten Peptid-Synthese angewandt werden, hergestellt werden, wie zum Beispiel durch Einführung einer Silylgruppe (wie zum Beispiel die Trimethyl-silylgruppe), durch Anwendung der «Phosphazo-Methode», durch Anwendung der Phosphorsäureestermethode sowie auch der N-Carboxyarihydridmethode.

Als Kondensationsmittel, um eine Amidbildung zwischen einer Verbindung der Formel IV und der Aminosäure der Formel VII zu bilden, kann man ein Carbodiimid verwenden, wie zum Beispiel Dicyclohexylcarbodiimid.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

5

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Die Umsetzung kann in einem inerten organischen Lösungsmittel durchgeführt werden, wie zum Beispiel Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Dichloromethan oder Acetonitril. Im allgemeinen führt man die Umsetzung unter Kühlung oder bei Zimmertem- 5 peratur (—50 bis 20° C) durch, vorzugsweise bei einer Temperatur von —30 bis 10°C. Die Zeitdauer hängt im allgemeinen von der Reaktionstemperatur, den umzusetzenden Verbindungen und dem Lösungsmittel ab, und in der Regel beträgt sie 0,5 bis 48 Stunden, vorzugsweise 1 bis 6 Stunden. io

Falls in Verbindungen der Formel VII der Substituent R"

eine Schutzgruppe darstellt, kann diese aus dem Reaktionsprodukt nach bekannten Methoden, die weiter oben beschrieben worden sind, entfernt werden.

Die Verbindungen der Formel VIII können aus der Reak- 15 tionsmischung nach beliebigen Methoden isoliert und gereinigt werden, zum Beispiel durch Umkristallisation aus Ethylacetat, n-Hexan, Aceton oder Wasser oder durch die verschiedensten Chromatographiearten, wie sie zum Beispiel in Verbindung mit der Isolierung und Reinigung von Verbindungen der Formel I 20 beschrieben wurden, oder durch Zersetzung eines organischen Salzes des Reaktionsproduktes mit einer Säure.

Die Verbindungen der Formel VIII können mit Verbindungen der Formel IX umgesetzt werden, indem man die Carboxylgruppe in der zuerst genannten Verbindung mit der Mercapto- 25 gruppe der später genannten Verbindung in Gegenwart eines Kondensationsmittels umsetzt, wie zum Beispiel Carbodiimide wie Dicyclohexylcarbodiimid. Ein reaktionsfähiges Derivat der Verbindung der Formel VIII kann mit der Verbindung der Formel IX umgesetzt wwerden. Beispiele für reaktionsfähige Deri- 30 vate der Verbindung der Formel VIII umfassen aktivierte Amide, Säurehalogenide, aktivierte Ester sowie auch gemischte Anhydride. Amide, die mit Carbonyldiimidazol aktiviert sind,

werden besonders bevorzugt.

In Verbindungen der Formel IX kann die Carboxylgruppe 35 gegebenenfalls geschützt sein. Bevorzugte Schutzgruppen sind die tert.-Butylgruppe und andere Reste, die man unter sauren Bedingungen entfernen kann.

Die Reaktion zur Herstellung der Thiolester wird vorzugsweise in einem inerten organischen Lösungsmittel ausgeführt, 40 wie zum Beispiel Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Dichlorme-than oder Acetonitril. Im allgemeinen führt man die Reaktion unter Kühlung oder bei Zimmertemperatur (—50 bis 20°C), vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen —30 und 10° 45 durch, falls man die Verbindung der Formel VIII in Form eines aktivierten Amids oder Säurehalogenids verwendet. Bei dem Einsatz von einem Säureanhydrid arbeitet man bevorzugt bei einer Temperatur zwischen —10 und 10°C. Die Reaktionszeit hängt von der Reaktionstemperatur, den umzusetzenden Ver- 50 bindungen und dem verwendeten Lösungsmittel ab, und beträgt im allgemeinen zwischen 0,5 und 48 Stunden, vorzugsweise zwischen 1 und 6 Stunden. Nach der Reaktion der Thiolesterbil-dung entfernt man gewönhlich den Substituenten R'", falls er eine Schutzgruppe darstellt, aus dem Reaktionsprodukt. Falls 55 die Schutzgruppe einen tert.-Butylrest darstellt, kann er nach bekannten Methoden entfernt werden, zum Beispiel durch Umsetzung mit Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff.

Das Reaktionsprodukt kann man aus der Reaktionsmi- «0 schung nach üblichen Verfahren isolieren und reinigen, wie zum Beispiel Umkristallisation aus einem organischen Lösungsmittel wie Äthylacetat oder n-Hexan. Man kann ebenfalls verschiedene Arten der Chromatographie anwenden, wie sie in Verbindung mit der Isolierung und Reinigung der Verbindun- 65 gen der Formel I beschrieben wurden, oder man kann auch ein organisches Salz des Reaktionsproduktes mit einer Säure zersetzen.

Ein zweites Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemässen Verbindungen umfasst die Umsetzung von Verbindungen der Formel IV

R-A'-OH

(IV)

worin R und A' weiter oben definiert sind, oder eines reaktionsfähigen Derivates dieser Verbindungen der Formel IV, mit einer Verbindung der Formel V

CHo hs-ch2ckco-n

(V)

coor'

in einem inerten organischen Lösungsmittel bei —50 bis 20° C.

Der Substituent R' ist weiter oben definiert. Nach der Umsetzung werden gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen aus dem Reaktionsprodukt entfernt und erhaltene Verbindungen werden gegebenenfalls in ein pharmazeutisch annehmbares Salz überführt.

Falls in Verbindungen der Formel I der Substituent A eine freie funktionelle Gruppe aufweist, die nicht während Durchführung der Reaktion reagieren sollte, wie zum Beispiel eine Mercapto-, Hydroxyl-, Amino- oder Carboxylgruppe, so bedeutet dies, dass in Verbindungen der Formel I derartige Gruppen geschützt sein können.

Beliebige funktionelle Gruppen bei der Bedeutung von A', welche während der Umsetzung nicht reagieren sollten, werden durch solche Gruppen, wie sie ganz allgemein aus der Peptid-Synthese bekannt sind, geschützt und welche man unter verhältnismässig milden Bedingungen später abspalten kann. So zum Beispiel kann eine Mercaptogruppe durch eine Aralkylgruppe geschützt sein, wie zum Beispiel Trityl, Benzyl oder p-Methoxy-benzyl; eine Hydroxylgruppe kann durch eine Benzylgruppe geschützt sein und eine Aminogruppe kann als Schutzgruppe eine tert.-Butyloxycarbonylgruppe aufweisen. Carbonylgruppen können durch tert.-Butylgruppen geschützt sein. Alle diese Gruppen kann man durch Behandlung mit Fluorwasserstoff oder Chlorwasserstoff entfernen.

Es besteht auch die Möglichkeit, eine Carboxylgruppe mit einer niederalkylsubstituierten Silylgruppe zu schützen, wie zum Beispiel mit einer Trimethylsilylgruppe, die man anschliessend durch Behandlung mit Wasser entfernen kann. Falls in Verbindungen der Formel V der Substituent R' eine Carboxyl-Schutz-gruppe darstellt, so kann dies eine tert.-Butylgruppe oder eine niederalkylsubstituierte Silylgruppe sein und man kann diese durch Behandlung mit Fluorwasserstoff, Trifluoressigsäure, Chlorwasserstoff oder Wasser entfernen.

Die reaktionsfähigen Derivate einer Verbindung der Formel IV sind solche, in denen die Carboxylgruppe, die sich umsetzen soll, aktiviert ist. Die Carboxylgruppe kann auf geeignete Weise aktiviert werden, nämlich sie kann in aktivierte Amide, Säurehalogenide, aktivierte Ester oder gemischte Säureanhydride überführt werden. Bevorzugt werden mit Carbonyldiimidazol aktivierte Amide. Carbodiimide, wie zum Beispiel Dicyclohexylcarbodiimid, können als Kondensationsmittel verwendet werden, um zwischen der Carboxylgruppe und der Mercaptogruppe eine Amidbindung herzustellen.

Die Umsetzung zwischen der Verbindung der Formel IV oder dem reaktionsfähigen Derivat davon und der Verbindung der Formel V wird in einem inerten organischen Lösungsmittel ausgeführt, wie zum Beispiel Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Di-chlormethan oder Acetonitril. Man führt die Reaktion unter Kühlung oder bei Zimmertemperatur (—50 bis 20°C) durch

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und vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen —30 und 10°C, wenn die verwendete Verbindung der Formel IV in Form eines aktivierten Amids oder Säurehalogenids vorliegt. Wenn diese Verbindung z.B. in Form eines Säureanhydrids eingesetzt wird, so arbeitet man in der Regel zwischen —10 und 10°C. Die 5 Reaktionssäure hängt von der Reaktionstemperatur, den zu umsetzenden Verbindungen und dem Lösungsmittel ab und sie beträgt im allgemeinen zwischen 0,5 und 48 Stunden, vorzugsweise zwischen 1 und 6 Stunden.

Nach der Reaktion der Bildung des Tiolesters können gege- 10 benenfalls vorhandene Schutzgruppen aus dem Reaktionsprodukt durch beliebige Methoden entfernt werden, wie sie für die entsprechenden Schutzgruppen weiter oben beschrieben wurden.

Das Endprodukt kann aus der Reaktionsmischung nach be- 15 kannten Methoden, die bereits weiter oben beschrieben wurden, isoliert und gereinigt weiden. Zu solchen Reinigungsmethoden gehören die verschiedensten Arten der Chromatographie unter Verwendung von Silicagel, Dextran-vernetztem Polymer und porösen Polymeren, wie zum Beispiel Styrol-Divinylbenzol oder 20 Acrylsäureestern. Ein Lösungsmittel, das sich für die Entwicklung eignet, kann aus der folgenden Gruppe ausgewählt werden: Äthylacetat, Chloroform, Methanol, Äthanol, Tetrahydrofuran, Benzol, Wasser und Acetonitril. Es besteht auch die Möglichkeit, das Endprodukt zu erhalten, indem man zuerst 25 das Reaktionsprodukt in Form eines organischen Salzes isoliert, wie zum Beispiel als Dicyclohexylaminsalz, welches man dann mit einer Säure behandelt, wie zum Beispiel Chlorwasserstoffsäure oder Kaliumhydrogensulfat.

Die erfindungsgemässen Endprodukte, nämlich die Prolin- 30 derivate der Formel I sowie auch die pharmazeutisch annehmbaren Salze dieser Verbindungen, verhindern die Produktion von Angiotensin II aus Angiotensin I, indem sie die Aktivität der die Bildung von Angiotensin fördernden Enzymen hemmen. Aus diesem Grund eignen sich die neuen Verbindungen zur Be- 35 handlung der Hypertension, die durch Angiotensin II hervorgerufen wird und ausserdem können sie als Mittel zur Behandlung kardialer Insuffizienz verwendet werden.

Die Aktivität einiger dieser erfindungsgemässen Verbindun-- gen zur Herabsetzung des Angiotensin-umwandelnden Enzyms 40 wurde gemessen.

(1) Methode

Ein Angiotensin-umwandelndes Enzym wurde aus einer Kaninchenlunge extrahiert. 0,6 ml einer 0,111 M Borsäure- 45 Na2C03-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 8,3, 0,2 ml einer 0,111 M Borsäure-Na2C03-Pufferlösung mit eine pH-Wert von 8,3, die 25 mM Benzoylglycosylhistidylleucin (Substrat) enthielten sowie 0,1 ml einer 0,111 M Borsäure-Na2C03-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 8,3, welche 10"8 bis 10"3 M der Test- 50 Verbindung enthielten (13 erfindungsgemässe Verbindungen, wie sie in der nachfolgenden Tabelle beschrieben sind), gab man in Teströhren und unterwarf sie einer Vor-Inkubation bei einer Temperatur von 37°C während 5 bis 10 Minuten. Anschliessend wurden 0,1 ml einer Lösung des Enzyms (Aceton- 55 pulver) zu jeder Teströhre hinzugegeben und man bebrütete jede Mischung bei einer Temperatur von 37°C 30 Minuten lang. Das Benzoylglycin, das durch die Einwirkung des Enzyms produziert wurde, wurde mit Äthylacetat in Gegenwart von Chlorwasserstoffsäure extrahiert und man bestimmte seine Menge mit Hilfe der UV-Absorption bei 228 nm. Die Aktivität des Enzyms in Gegenwart der Testverbindungen, in bezug auf Versuche, die keine Testverbindungen (100) enthielten, wurde bestimmt. Die Konzentration jeder Testverbindung, bei welcher die relative Aktivität des Enzyms 50% betrug, würde als Aktivität für jede eingesetzte Testverbindung, um die Aktivität des Enzyms herabzusetzen, betrachtet und mit dem I5o-Wert bezeichnet.

(2) Resultate

Testverbindung

I50

Verbindung Nr. 1

1,6x10"

»

Nr. 2

4,8 X IO"7

»

Nr. 3

1,3 xlO-7

»

Nr. 4

4,0 xlO-7

»

Nr. 5

1,8 xlO-7

»

Nr. 6

2,4 xlO"7

»

Nr. 7

i,oxio-7

»

Nr. 8

1,5 xlO-7

»

Nr. 9

1,7 xlO"7

»

Nr. 10

4,8 xlO-8

» .

Nr. 11

1,7 xlO"7

»

Nr. 12

5,4 xlO"7

»

Nr. 13

4,4 xlO"7

Verbindung Nr. 1:

» Nr. 2:

» Nr. 3:

» Nr. 4:

» Nr. 5:

» Nr. 6;

» Nr. 7:

» Nr. 8:

N-[3-N-Cyclohexancarbonyl-D-alanyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

N-[3-(N-Cyclopropancarbonyl-D-alanyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-proIin

N-[3-(N-Cyclohexancarbonylglycylthio)--2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-N-methyIgIy-cylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

N-[3-(N-Cyclopropancarbönylglycylthio)--2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

N-[3-(N-Adamantancarbonylglycylthio--2-methylpropanoyl] -L-prolin

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylaIa-nylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

N-[3-(N-Cyelohexancarbönyl-D-leucyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

Nr. 9: N-[3-(N-CyclohexancarbonyI-D-trypto-phylthio)-2-D-methyIpropanoyl]-L-prolin

Nr. 10: N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylgIy-cylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

Nr. 11 : N- [3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-methionyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

Nr. 12: N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-glutami-nylthio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

Nr. 13: N-[3-(N-Adamantancarbonyl-D-alanyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

Die Aktivität der erfindungsgemässen Verbindungen hält länger an als diejenige bekannter Verbindungen, die eine ähnli-60 che Aktivität aufweisen, wie zum Beispiel 3-Mercapto-2-D-me-thylpropanoyl-L-prolifl (üblicherweise als Captopril bezeichnet) und daraus geht hervor, dass man die gewünschte Herabsetzung des Blutdruckes durch eine geringere Anzahl an täglichen Verabreichungsdosen erzielen kann. Captopril und andere bekann-65 te Verbindungen verursachen eine plötzliche Herabsetzung des Blutdruckes in der Anfangsperiode bei der Verabreichung und dadurch kann sich eine orthostatische hypotensive Asthenia entwickeln, [Lancet, Band 1, Nr. 8, 115, Seite 557 (März 10,

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1979)]. Die erfindungsgemässen Verbindungen haben jedoch nur eine milde hypotensive Wirksamkeit in der Anfangsperiode ihrer Verabreichung und daher bestehen geringe Chancen, dass sich eine orthostatische hypotensive Asthenia entwickelt. Medikamente, wie zum Beispiel Captopril, welche eine freie Mercaptogruppe aufweisen, verursachen verschiedene Nebenwirkungen, die man der genannten Mercaptogruppe zuschreibt. Einige dieser Nebenwirkungen sind Störungen des Geschmackes, Auftreten von Albumin im Harn, Agranulocytosis sowie Hauterkrankungen, begleitet durch Fieber [siehe Lancet, Band 1, Nr. 8160, Seite 150 (19. Januar 1980), sowie in der gleichen Zeitschrift Band 2, Nr. 8186, Seite 129, (19. Juli 1980) und «South African Medicai Journal», Band 58, 172 (1980)]. Andererseits ist die Thiolesterbindung in den Verbindungen der vorliegenden Erfindung unzugänglich für eine Hydrolyse in vivo und daher ist es wenig wahrscheinlich, dass sich eine Mercaptogruppe bildet. Aus disem Grund haben die erfindungsgemässen Verbindungen nur eine geringe Chance, die weiter oben genannten Nebenerscheinungen, die der Mercaptogruppe zugeschrieben werden, hervorzurufen.

Die Prolinderivate der Formel I und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze können in Zusammensetzungen für eine orale Verabreichung formuliert werden, wie zum Beispiel Tabletten, Kapseln, Granulate, Pulver, Sirup und Elixiere. Sie können aber für eine parenterale Verabreichung als sterile Lösungen oder Suspensionen vorliegen. Für diese Zwecke kann man pharmazeutische Zusammensetzungen aus einer oder mehreren der erfindungsgemässen Verbindungen oder ihren pharmazeutisch annehmbaren Salzen als aktiven Bestandteil herstellen, wobei die pharmazeutischen Zusammensetzungen Adju-vantien, wie zum Beispiel inerte Substanzen, Trägermaterialien Bindemittel, Stabilisatoren und Geschmacksstoffe, enthalten können. Die tägliche Dose der erfindungsgemässen Verbindungen für Erwachsene beträgt in der Regel 0,5 mg bis zu 2 g, vorzugsweise etwa 1 bis 500 mg, bei der oralen Verabreichung und 0,1 bis 600 mg, vorzugsweise etwa 0,3 bis 300 mg, bei der parenteralen Verabreichung.

Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemässen Verbindungen werden in den nachfolgenden Beispielen beschrieben, wobei diese Beispiele jedoch keine Einschränkung darstellen sollen.

5

Beispiel 1

Hersteilung von N-substituierten Aminosäuren:

(a) Man löst 4,5 g D-Alanin in 230 ml von wässrigem 1N-10 Na2CC>3 unter Rühren. Zu dieser Lösung gab man tropfenweise bei einer Temperatur von 5 bis 10°C 100 ml Tetrahydrofuran, welche 9,0 g Cyclohexancarbonylchlorid enthielten. Bei dieser Temperatur wurde die Mischung noch 30 Minuten lang gerührt. Anschliessend rührte man bei Zimmertemperatur 1,5 Stunden 15 lang. Dann gab man 2N-HC1 zu der Reaktionsmischung, um den pH auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Man extrahierte die Reaktionsmischung mit Äthylacetat und die organische Phase wurde mit gesättigter NaCl Lösung gewaschen und über MgSC>4 getrocknet. Man verdampfte das Filtrat im 20 Vakuum um die rohe Verbindung zu erhalten. Durch Umkristallisation aus Äthylacetat/n-Hexan erhielt man 4,65 g N-Cy-clohexancarbonyl-D-alanin. Md = +26,6°.

(b) Man löst einen Ester von Adamantancarbonsäure und N-Hydroxysuccinimid (3,0 g) in 30 ml Tetrahydrofuran. Zu

25 dieser Lösung gab man 5 ml Wasser, welche 0,89 g D-Alanin und 1,1g Triäthylamin enthielten. Die Mischung wurde über Nacht bei einer Temperatur von 5°C gerührt. Nach der Entfernung von Tetrahydrofuran gab man Wasser zu dem Rest und fügte 2N-HC1 hinzu, um den pH der Lösung auf einen Wert 30 zwischen 1 und 2 einzustellen. Dann wurde die Lösung behandelt, wie es weiter oben unter (a) beschrieben ist, und man erhielt 0,38 g N-Adamantancarbonyl-D-alanin. Md = +11,6° (C=1,0 MeOH).

35 Die nachfolgend zusammengestellten Verbindungen wurden entweder nach dem Verfahren (a) oder dem Verfahren (b) hergestellt.

N-substituierte Reaktanten Reaktions- physikalische

Aminosäuren Methode Lösungsmittel Eigenschaften

N - Adamantancarbonyl-glycin ,

(b)

N-hydroxysuccinimid, Dicyclohexylcarbodiimid

Wasser,

Tetrahydrofuran

'H-NMR (CD3OD, 5) 1,6-2,3 (15H, m), 3,86 (2H, S)

N-Cyclohexancarbonyl--D-phenylalanin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

Mo = —18,8° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclohexancarbonyl--D-leucin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

[a]D = -19,9° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclohexancarbonyl--D-tryptophan

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

MD = -10,5° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclohexancarbonyl--D-phenylglycin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

Md = —133,5° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclohexancarbonyl -D-glutamin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

Md +5,1° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclopropancarbonyl--D-alanin

(b)

Cyclopropancarbonyl-chlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

MD = +51,1° (C=1,0, MeOH)

N-Cyclohexancarbonyl-glycin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

T etrahydrofuran

'H-NMR (CD3OD, 5) 1,2-2,5 (11 H, m), 3,95 (2H, s)

N-Cyclohexancarbonyl-sarcosin

(a)

Cyclohexancarbonylchlorid

Wasser,

Tetrahydrofuran

■H-NMR (CD3OD, ö) 1,1-2,5 . (11H, m), 3,00, 3,30 (3H, 2S), 4,13, 4,25 (2H,2S)

651 825

N-substituierte Aminosäuren

Reaktanten

Methode

Reaktions-Lösungsmittel physikalische Eigenschaften

N-Cyclopropancarbonyl-glycin

N-Cyclohexancarbonyl--D-methionin

Cyclopropancarbonyl-(a) chlorid

Cyclohexancarbonyl-(a) chlorid

Wasser,

T etrahydrofuran

Wasser,

Tetrahydrofuran

'H-NMR (CD3OD, 8) 0,5-2,1 (4H, m), 2,4-2,9 (1H, m) 3,90 (2H, S)

Md = -7,1° (C= 1,0, MeOH)

Beispiel 2

(a) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propionsäure

Man löst 5,97 g N-cyclohexancarbonyl-D-alanin in 100 ml trockenem Tetrahydrofuran. Zu dieser Lösung gab man bei einer Temperatur zwischen —20 und —15°C 5,84 g Carbonyldiimidazol und dann wurde die Mischung bei dieser Temperatur eine Stunde lang gerührt. Anschliessend wurden 3,60 g 3-Mer-capto-2-D-methylpropionsäure hinzugefügt und man rührte die Mischung bei einer Temperatur zwischen —15 und —10°C eine Stunde lang und anschliessend noch eine weitere Stunde bei Zimmertemperatur. Die Mischung wurde im Vakuum eingedampft, um das Lösungsmittel zu entferrten. Zu dem Rückstand gab man 40 ml Wasser und dann fügte man 2N-HC1 zu der Mischung, um den pH auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Die Mischung wurde mit Äthylacetat extrahiert und man wusch die organische Schicht zweimal mit gsättigter NaCl-Lösung und trocknete über Magnesiumsulfat. Das Filtrat wurde unter Vakuum verdampft um eine rohe Verbindung zu erhalten. Durch Umkristallisation aus Äthylacetat/n-Hexan erhielt man farblose prismatische Kristalle der Titelverbindung (7,50 g, 83%).

Schmelzpunkt: 149-152°C Hd = +46,4° (C= 1,7, MeOH)

NMR (CD3OD, 5): 1,20 (3H, d), 1,35 (3H, d), 1,20-2,0 (11H, m), 2,40-2,80 (1H, m) 3,05 (2H, m), 4,50 (1H, m)

(b) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylglycylthio)-2-D--methylpropionsäure

Unter Verwendung von 2,61 g N-Cyclohexancarbonyl-D--phenylglycin, 1,95 g Carbonyldiimidazol und 1,20 g 3-Mer-capto-2-D-methylpropionsäure wiederholte man das weiter oben unter «a» beschriebene Verfahren. Man erhielt die Titelverbindung in Form eines gelben Öls (2,07 g, 57%). Md = —48,7° (C= 1,19, MeOH)

NMR (CDCI3, 5): 1,24 (3H, d), 1,20-2,10 (11H, m), 2,40 bis 2,80 (1H, m), 3,10 (2H, m), 5,75 (1H, d), 6,40-6,80 (1H, m), 7,50 (5H, s), 8,90 (1H, s)

(c) 3-(N-Cyclohexancarbonyl~D-leucylthio)-2-D-methyl-propionsäure

Unter Verwendung von 2,41 g N-Cyclohexancarbonyl-D--leucin, 1,95 g Carbonyldiimidazol und 1,20 g 3-Mercapto-2--D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Die Titelverbindung wurde in Form eines Öls erhalten (2,40 g, 70%).

Md = + 12,2° (C= 1,03, MeOH)

NMR (CDC13, Ô): 0,95 (6H, d), 1,28 (3H, d), 1,20-2,10 (11H, m), 2,40-2,80 (1H, m), 3,10 (2H, m), 4,70 (1H, m), 6,00-6,30 (1H, m), 9,20 (1H, s)

(d) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-glutaminylthio)-2-D--methylpropionsäure

-2-D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Man erhielt 0,70 g der Titelverbindung (20%). 15 Schmelzpunkt: 146-149°C

Md = + 10,8° (C = 1,05, MeOH)

NMR (CD3OD, Ô): 1,20 (3H, d), 1,20-2,10 (11H, m), 2,30 (4H, m), 2,40-2,80 (1H, m), 3,05 (2H, m), 4,50 (1H, m)

(e) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-glycylthio)-2-D-methyl-

20

Propionsäure

Unter Verwendung von 0,78 g N-Cyclopropancarbonyl--glycin, 1,06 g Carbonyldiimidazol und 0,66 g 3-Mercapto-2-D--methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Die 25 Titelverbindung wurde in Form eines Öls erhalten (0,70 g,

52%).

Md = —33,8° (C = l,01, MeOH)

NMR (CDCI3, Ò): 0,70-1,20 (4H, m), 1,25 (3H, d), 1,30-1,80 (1H, m), 2,40-2,80 (1H, m), 3,14 (2H, m), 4,20 (2H, d), 30 7,30 (1H, s)

(f) 3-(N-Adamantancarbonyl-glycylthio)-2-D-methyl-propionsäure

Unter Verwendung von 2,38 g N-Adamantancarbonyl-35 -glycin, 1,95 g Carbonyldiimidazol und 1,20 g 3-Mercapto-2--D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Man erhielt 1,08 g der Titelverbindung (32%).

Schmelzpunkt: 132°C (dee.)

Md = —8,3° (C=l,01, MeOH)

40 NMR (CD3OD, ô): 1,25 (3H, d), 1,65-2,30 (15H, m), 2,40-2,80 (1H, m), 3,14 (2H, m), 4,06 (2H, d)

g) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylalanylthio)-2-D--methylpropionsäure

45 Unter Verwendung von 1,37 g N-Cyclohexancarbonyl-D--phenylalanin, 1,0 g Carbonyldiimidazol und 0,60 g 3-Mer-capto-2-D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Die Titelverbindung fiel in Form eines Öls an (1,5 g, 79%). Md = +13,9° (C = 1,02, MeOH)

50 NMR (CDCI3, Ô): 1,25 (3H, d), 1,20-2,0 (10H, m), 2,1-3,0 (2H, m), 3,0-3,4 (4H, m), 4,95 (1H, t), 6,19 (1H, d), 7,24 (5H, s), 10,12 (1H, s)

(h) 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-methionylthio)-2-D-j5 -methylpropionsäure

Unter Verwendung von 0,325 g N-Cyclohexancarbonyl-D--methionin, 0,25 g Carbonyldiimidazol und 0,15 g 3-Mercapto--2-D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Die Titelverbindung fiel in Form eines Öls an (0,29 g, 64%). 60 Md = —7,9° (C = 1,0, MeOH)

NMR (CDCI3, Ô): 1,26 (3H, d), 1,2-2,0 (10H, m), 2,09 (3H, s), 2,0-3,2 (8H, m), 4,5-5,0 (1H, m), 6,62 (1H, d), 10,07 (1H, s).

65 (i) 3-(Cyclohexancarbonyl-D-tryptophylthio-2-D-methyl-propionsäure

Unter Verwendung von 2,56 g N-Cyclohexancarbonyl-D--glutamin, 1,95 g Carbonyldiimidazol und 1,20 g 3-Mercapto-

Unter Verwendung von 0,157 g N-Cyclohexancarbonyl-D--tryptophan, 0,1 g Carbonyldiimidazol und 0,06 g 3-Mercapto-

9

651 825

-2-D-methylpropionsäure wiederholte man das Verfahren (a). Die Titelverbindung fiel in Form eines gummiartigen Produktes an (0,17 g, 82%7.

[a]D = —7,1 ° (C = 1,0, MeOH)

NMR (CDCI3, §): 1,26 (3H, d), 1,2-2,4 (11H, m), 2,5-2,9 (1H, m), 3,0-3,3 (2H, m), 3*,35 (2H, d), 4,87 (1H, t), 6,4-6,9 (2H, breit s), 6,9-7,8 (5H> m), 10,5 (1H, s)

Beispiel 3

(a) N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin

1,51 g (3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propionsäure wurden in 40 ml trockenem Tetrahydrofuran gelöst. Zu dieser Lsoung gab man bei einer Temperatur von —5°C unter Rühren 0,61 g Triäthylamin und 0,65 g Äthyl-chlorformiat. 5 Minuten später gab man eine Lösung, die 0,58 g L-Prolin und 0,61 g Triäthylamin in 5 ml Wasser aufgelöst enthielt, hinzu, und man rührte die Mischung eine Stunde lang bei einer Temperatur von 0°C und schliesslich 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur. Die Mischung wurde im Vakuum eingedampft, um das Lösungsmittel zu entfernen. Nach der Zugabe von Wasser zu dem Rückstand fügte man 2N-HC1 zu der Mischung, um den pH auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat extrahiert und dann wusch man die organische Schicht zweimal mit einer gesättigten NaCI-Lösung und trocknete über Magnesiumsulfat. Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert, um das Äthylacetat zu entfernen und den Rückstand unterwarf man der Chromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung aus Chloroform und Methanol (100 : 1 zu 100 : 2) als Eluiermittel. Die Fraktionen, die das Endprodukt enthielten, wurden gesammelt und unter Vakuum eingedampft, wobei man 0,3 g der Titelverbindung als gummiartiges Produkt erhielt.

(b) Die gleiche Verbindung konnte nach der folgenden Methode hergestellt werden:

6,03 g 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-me-thylpropionsäure und 2,3 g N-Hydroxysuccinimid wurden in 50 ml trockenem Tetrahydrofuran gelöst. Bei einer Temperatur zwischen 0 und 5°C gab man zu dieser Lösung 4,3 g Dicyclohexylcarbodiimid hinzu und die Mischung wurde über Nacht bei dieser Temperatur gerührt. Nach beendeter Reaktion filtrierte man den Niederschlag ab und der unlösliche Stoff wurde mit einer geringen Menge Tetrahydrofuran gewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeiten wurden vereinigt und man dampfte unter Vakuum ein. Zu dem Rückstand gab man Äthylacetat und die Mischung wurde filtriert. Die Äthylacetatlösung wurde mit 0,5 N Salzsäure, Wasser, wässrigem Na2CÜ3 und gesättigter NaCI-Lösung in der angegebenen Reihenfolge gewaschen. Die Lösung wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, im Vakuum eingedampft und durch Zugabe einer Mischung aus Äthylacetat und Hexan (1 : 10) wurde der Rückstand fest. Die Ausbeute an festem Produkt betrug 6,90 g (87%).

Schmelzpunkt: 113-116°C Hd= + 14,2°C(C= 1,05, MeOH)

NMR (CDCI3, 8): 1,38 (6H, d), 1,20-2,20 (11H, m), 2,82 (4H, s), 2,8-3,3 (3H, m), 4,75 (1H, m), 6,30 (1H, breit d)

3,98 g des aktivierten Esters löste man in 40 ml Tetrahydrofuran. Zu dieser Lösung gab man 5 ml Wasser, das 1,15 g aufgelöstes L-Prolin enthielt sowie 1,26 ml N-Äthylmorpholin. Die Mischung wurde über Nacht gerührt. Dann dampfte man die Mischung im Vakuum ein, um die Lösungsmittel zu entfernen und man gab Wasser zu dem Rückstand. Zu der Lösung gab man 2N-HC1 um den pH auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat extrahiert und die organische Schicht wurde mit gesättigter NaCl-

Lösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Man dampfte das Filtrat im Vakuum ein. Den Rückstand unterwarf man der Kolonnenchromatographie an Silicagel unter der Verwendung einer Mischung aus Chloroform und Methanol (100 : 1 bis 100 : 2) als Eluiermittel. Das Produkt wurde durch Verdampfen des Eluats (1,45 g) im Vakuum erhalten und man stellt durch NMR-Analyse fest, dass die Verbindung mit der Titelverbindung identisch ist.

(c) Die Titelverbindung konnte ebenfalls nach dem nachfolgenden Verfahren hergestellt werden:

Man löst 4,52 g 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)--2-D-methylpropionsäure in 5 ml Thionylchlorid. Zu dieser Lösung gab man einen Tropfen Dimethylformamid und die Mi-15 schung wurde bei Zimmertemperatur über Nacht gerührt. Man dampfte die Mischung im Vakuum ein, um die Lösungsmittel zu entfernen und zu dem Rückstand gab man 2 ml trockenes Toluol. Die Mischung wurde abermals im Vakuum eingedampft um das Lösungsmittel zu entfernen. Zu dem Rückstand gab 20 man unter Rühren 10 ml trockenes Tetrahydrofuran. Die Tetra-hydrofuranlösung, die das Säurechlorid enthielt, wurde tropfenweise bei einer Temperatur zwischen 5 und 10°C unter Rühren zu 25 ml Wasser gegeben, welches 2,3 g L-Prolin und 2,5 g Na2C03 gelöst enthielt. Man rührte die Mischung bei dieser 25 Temperatur eine Stund lang und dann noch für 2 weitere Stunden bei Zimmertemperatur. Die Reaktionsmischung wurde der Extraktion mit Chloroform unterworfen. Zu der wässrigen Schicht gab man 2N-HC1, um deren pH auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Nach der Extraktion mit Chloro-30 form wurde die Chloroformschicht zweimal mit einer gesättigten NaCI-Lösung gewaschen und über MgSÛ4 getrocknet. Nach der Entfernung des Chloroforms unterwarf man den Rückstand der Kolonnenchromatographie an Silicagel unter Verwendung einer Mischung aus Chloroform und Methanol (100 : 1 zu 35 200 : 2) als Eluiermittel. Nach dem Verdampfen im Vakuum erhielt man 1,6 g einer gummiartigen Substanz. Durch NMR-Analyse konnte festgestellt werden, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

(d) Die Titel Verbindung konnte nach einem weiteren, nachfolgend beschriebenem Verfahren hergestellt werden:

3,01 g 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propionsäure und 1,71 g des tert.-Butylesters von L-Prolin wurden in 50 ml trockenem Dichlormethan gelöst und man gab 2,15 45 g Dicyclohexylcarbodimid unter Rühren und unter Kühlung mit Eis zu der Lösung. Die Mischung wurde bei der gleichen Temperatur 1,5 Stunden lang gerührt und über Nacht bei einer Temperatur von 5°C stehen gelassen. Man filtrierte die Reaktionsmischung und das unlösliche Produkt wurde mit Dichlorme-50 than gewaschen. Man vereinigte das Filtrat und die Waschlösungen und es wurde mit 1N-HC1, Wasser, lN-NaHC03 und gesättigter NaCI-Lösung in der angegebenen Reihenfolge gewaschen, man trocknete über MgS04 und verdampfte unter Vakuum, wobei man eine gummiartige Substanz des tert.-Butyl-55 esters von N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-me-thylpropanoyl]-L-prolin (4,3 g) erhielt. Man löste eine Probe von 4,0 g dieses Esters in 30 ml Anisol und gab 10 ml Trifluoressigsäure zu dieser Lösung. Die Mischung wurde bei Zimmertemperatur 1 Stunde lang gerührt und dann unter Vakuum ein-60 gedampft um den Überschuss an Trifluoressigsäure zu entfernen. Den Rückstand unterwarf man der Kolonnenchromatographie an Silicagel (Kolonne: 2x35 cm) unter Verwendung einer Mischung aus Methanol und Chloroform (1:100 zu 3 :100) als Eluiermittel. Die Fraktionen, welche die Endverbindungen ent-65 hielten wurden gesammelt und im Vakuum eingedampft, wobei man 3,4 g einer gummiartigen Substanz erhielt. Durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie wurde festgestellt, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

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10

Die Reaktionsteilnehmer, Reaktionslösungsmittel sowie die : auch die physikalischen Eigenschaften der erhaltenen Endpro-

verwendeten Methoden zur Herstellung der Titelverbindung dukte sind in der nachfolgenden Tabelle enthalten. In dieser von Beispiel 3 sind in der nachfolgenden Tabelle zusammenge- Tabelle bezeichnen die Zahlen in Anschluss an (1) und (2) in stellt. Diese Tabelle enthält auch die physikalischen Eigenschaf- der Kolonne «Rf-Wert» die Rf-Werte, die mit Dünnschichtchro-ten der hergestellten Verbindungen. Unter Verwendung der in 5 matographie unter Verwendung von CHCl3/MeOH/AcOH

Beispiel 3 beschriebenen Methoden, Methode (a) - (d), wurden (2 : 1 : 0,003) bzw. n-Bu0H/Ac0H/H20 (4 : 1 : 1) als Eluier-

weitere Verbindungen hergestellt. Einzelheiten darüber sowie mittel erhalten wurden.

Verbindungen

Me

Reaktanten

Reaktions-

MD

NMR (CDCI3, 5)

Rf-Wert

thode

Lösungsmittel

N-[3-(N-Cyclohexancar-

(a)

Ethyl-

Tetrahydrofuran,

1,20 (3H, breit d, CH3),

bonyl-D-alanylthio)-2-

chlorformiat

Wasser

1,38 (3H, d, CH3),

—D-methylpropanoyl] -

1,55-2,0 (10H, m, CH2),

(D 0,66

-L-prolin

(b)

•Dicyclohexyl do.

—51,6°

2,0-2,5 (4H, m, CH2),

carbodiimid,

2,5-3,3 (4H, m CH&CH2),

N-Hydroxy-

(C = l,06,

3,4-3,9 (2H, m, CH2),

(2) 0,71

succinimid

MeOH)

4,0-5,0 (2H, m, CH),

6,0-6,5 (1H, m, NH),

(c)

Thionyl-

DO.

7,31 (IH, S. C02H),

chlorid

(d)

Dicyclohexyl

Dichlor-

carbodiimid methan

N-[3-(N-Cyclohexancar-

1,21 (3H, breit d, CH3),

bonyl-glycylthio)-2-

(d)

Dicyclohexyl

Dimethyl-

—102,0°

1,35-2,5 (14H, m, CH2),

® 0,60

-D-methylpropanoyl]-

carbodiimid formamid

2,6-3,3 (4H, m, CH&CH2),

-L-Prolin

3,4-3,9 (2H, m, CH2),

(C=1,0,

4,0-4,7 (3H, m, CH&CH2),

MeOH)

6,35-7,1 (1H, m, NH),

9,01 (IH, S, C02H)

N-[3-(N-Cyclohexan-

(a)

Ethylchlor-

Tetrahydrofuran,

1,20 (3H, breit d, CH3),

carbonyl-D-phenyl-ala-

formiat

Wasser

1,2-2,5 (14H, m, CH2),

nyIthio)-2-D-methyl-

—58,1°

2,5-3,3 (6H, m, CH&CH2),

® 0 ,64

propanoyl]-L-prolin

(b)

Dicyclohexyl

3,3-3,8 (2H, m, OH2),

carbodiimid,

do.

(C=I,0,

4,0-5,3 (2H, m, CH), © 0,82

N-Hydroxy-

MeOH)

5,7-6,4 (1H, m, NH),

succinimid

7,29 (5H, S, aromatisch),

7,5-7,9 (1H, breit S, C02H)

N-[3-(N-Cyclohexancar-

Dicyclohexyl

Acetonitril

—81,3°

1,23 (3H, breit d, CH3),

bonyl-D-methionylthio)-

(b7

carbodiimid,

1,5-2,4 (16H, m, CH2),

-2-D-methylpropanoyl)-

N-Hydroxy-

Wasser

(C= 1,0,

2,10 (3H, S, CH3),

(J) 0,60

-L-prolin

succinimid

MeOH)

2,59 (2H, t, CH2),

2,7-3,3 (4H, m, CH&CH2),

3,3-3,9 (2H, m, CH),

6,49 (1H, d, NH),

(2) 0,77

7,81 (IH, S, C02H)

N-[3-(N-Adamantancar-

Isobutyl-

Dimethyl-

—47,8°

1,15 (3H, breit d, CH3),

bonyl-D-tryptophyl-

(a)

chlorförmiat formamid,

1,3-2,4 (14H, m, CH2),

thio)-2-D-methylpro-

Wasser

(C = 1,0,

2,5-3,9 (8H, m,CH&CH2)

panoyl]-L-prolin

MeOH)

4,1-4,7 (1H, m, CH),

® 0,58

4,7-5,2 (1H, m, CH),

6,0-6,4 (2H, m, NH),

6,95-7,9 (5H, m, aromatisch),

8,80 (IH, breit S, C02H)

N-[3-(N-Cyclohexancar-

(a)

Ethyl- ;

T etrahydrofuran,

1,18 (3 H, breit d, CH3),

bonyl-D-phenylglycyl-

chlorformiät

Wasser

—50,5°

1,3-2,5 (14H, m, CH2),

thio)-2-D-methyl-

2,5-3,8 (6H, m, CH&CH2),

(D 0,58

propanoyl]-L-prolin

(c)

Thionyl-

4,2-4,7 (1H, d, CH),

chlorid

'5,62 (1H, d, CH),

@ 0,83

6,53 (1H, d, NH),

(d)

Carbonyl

T etrahydrofuran

7,37 (5H, S, aromatisch),

diimidazol

8,90 (IH, S, C02H)

11

651 825

Verbindungen

Me

Reaktanten

Reaktions-

MD

NMR (CDCla, ô)

Rf-Wert

thode i

Lösungsmittel .

N-[3-(N-Cyclohexancar-

(a)

Ethylchlor-

Tetrahydrofuran,

0,93 (6H, d, CH3)

bonyl-D-leucyIthio)-2-

formamid

Wasser

—52,7°

1,21 (3H, breit d, CH3),

-D-methylpropanoyl]-

1,30-2,5 (17H, m, CH&CH2),

(D 0,61

-L-prolin

(b)

Dicyclohexyl do.

(C = 1,0,

2,5-3,3 (4H, m, CH&CH2),

carbodiimid,

MeOH)

3,3-3,9 (2H, m, CH2)

(2) 0,73

N-Hydroxy-

4,0-5,0 (2H, m, CH),

succinimid

5,95-6,5 (1H, m, NH),

7,30 (1H, S, C02H)

N- [3-(N-Cyclohexancar-

(a)

Ethylchlor-

T etrahydrofuran,

1,21 (3H, breit d, CH3),

bonyl-N-methylglycyl-

formiat

Wasser

1,3-2,4 (14H, m, CH2),

thio)-2-D-methylpropa-

2,4-3,3 (4H, m, CH&CH2),

(D 0,66

noyl]-L-prolin

(b)

Dicyclohexyl do.

—70,4°

3,22 (3H, S, CH3),

carbodiimid,

(C = 1,0,

3,3-3,8 (2H, m, CH2),

(2) 0,62

N-Hydroxy-

MeOH)

4,0-4,7 (3H, m, CH&CH2),

succinimid

9,75 (1H, S, C02H)

(c)

Thionylchlorid do.

N-[3-(N-cyclopropancar-

(b)

Dicyclohexyl

Dimethylform-

—108,8°

0,6-1,0 (4H, m, CH2),

b onylgly cylthio)-2-D-me-

carbodiimid,

amid, Wasser

(C=1,0,

1,20 (3H breit d, CH3),

thylpropanoyl] -L-prolin

N-succinimid

MeOH)

1,4-1,9 (1H, m, CH),

1,9-2,4 (4H, m, CH2),

(D 0,47

2,6-3,3 (3H, m, CH&CH2),

3,3-3,9 (2H, m, CH2),

3,9-4,7 (3H, m, CH&CH2),

7,2-8,0 (1H, m, NH),

8,48 (1H, S, C02H)

N-[3-(N-Cyclopropan-

(c)

Thionyl

Acetonitril,

—28,7°

0,6-1,0 (4H, m, CH2)

carbonyl-D-alanylthio)-

chlorid

Wasser

1,20 (3H, breit d, CH3),

-2-D-methylpropanoyl] -

1,42 (3H, d, CH3),

-L-prolin

(d)

Carbonyl

T etrahydrofuran

1,4-1,9 (1H, m, CH),

(D 0,53

diimidazol

1,9-2,4 (4H, m, CH2),

2,5-3,3 (3H, m, CH&CH2),

3,4-3,8 (2H, m, CH2),

4,1-5,0 (2H, m, CH),

6,4-7,0 (1H, m, NH),

7,45 (1H..S, C02H)

N- [3-(N-Adamantancar-.

(d)

Dicyclohexyl

Dichlormethan

—77,4°

1,21 (3H, breit d, CH3),

bonylglycylthio)-2-D-me-

carbodiimid

(C=1,0,

1,6-2,4 (19H, m, CH&CH2),

thylpropanoyl]-L-prolin

MeOH)

2,2-3,2 (3H, m, CH&CH2),

® 0,58

3,4-3,8 (2H, m, CH2),

3,9-4,7 (3H, m, CH&CH2),

6,3-7,0 (1H, m, NH),

8,19 (1H, S, C02H)

N-[3-(N-Cyclohexancar-

(a)

Ethylchlor-

T etrahydrofuran,

—57,0°

1,20 (3H, breit d, CH3),

bonyl-D-glutaminylthio)-

formiat

Wasser

(C=1,0,

1,3-2,5 (16H, m, CH2),

(D 0,42

-2-D-methylpropanoyl]-

MeOH)

2,5-3,2 (6H, m, CH&CH2),

-L-prolin

3,3-3,9 (2H, m, CH2),

4,1-4,9 (2H, m, CH),

5,6-7,6 (4H, m, NH&C02H)

N-[3-(N-Adamantancar-

(c)

Thionyl

T etrahydrofuran,

—61,0°

1,21 (3H, breit d, CH3),

bonyl-D-alanylthio)-2-

chlorid

Wasser

(C=1,0,

1,41 (3 H, d, CH3),

-D-methylpropanoyl]-

MeOH)

1,6-2,4 (19H, m, CH2),

-L-prolin

2,4-3,2 (3H, m, CH&CH2),

3,4-3,9 (2H, breit s, CH2),

4,1-5,0 (2H, m, CH), 6,4-6,8 (IH, breit s, NH), 8,10 (IH, s, C02H)

651 825

12

Beispiel 4

Aus der Verbindung N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D--alanylthio)-2-D-methylpropanol]-L-prolin, hergestellt nach den Beispielen 3 und 5, stellte man die verschiedenen Salze her.

(a) Calcium-Salz

3,98 g der Verbindung, welche nach dem Verfahren von Beispiel 3 oder 5 hergestellt wurde, löste man in 40 ml Methanol auf. Zu dieser Lösung gab man 0,84 g Calciumacetathydrat und die Mischung wurde unter Rückfluss eine Stunde lang gerührt. Die unlösliche Substanz wurde abfiltriert und man dampfte das Filtrat unter Vakuum ein. Zu dem Rückstand gab man Chloroform und die Mischung wurde filtriert und unter Vakuum eingedampft. Zu dem Rest gab man Diäthyläther. Die Mischung wurde filtriert und an Luft getrocknet, wobei man das Calciumsalz der Verbindung von Beispiel 3 oder 5 erhielt (3,40 g).

[ab = —47,2° (C=1,0, MeOH)

(b) Magnesium-Salz

Unter Verwendung von 3,09 g der Verbindung, die nach dem Verfahren von Beispiel 3 oder 5 hergestellt wurde und unter Verwendung von 0,772 g Magnesiumacetât-tetrahydrat wiederholte man das Verfahren (a). Man erhielt 2,42 g des Magnesiumsalzes der Verbindung von Beispiel 3 oder 5.

[a]D = —46,6° (C=1,0, MeOH)

(c) Lysin-Salz

1,19 g der Verbindung, die gemäss Beispiel 3 oder 5 hergestellt wurde, löste man in 22 ml Methanol auf. Zu dieser Lösung gab man 0,416 g Lysin und die Mischung wurde bei Zimmertemperatur 1 Stunde lang gerührt und dann unter Vakuum eingedampft. Zu dem Rest gab man Chloroform und die Mischung wurde filtriert und unter Vakuum eingedampft. Zu dem erhaltenen Rest fügte man Dimethyläther hinzu und man filtrierte das Produkt durch Saugen ab, wobei man das Lysinsalz der Verbindung von Beispiel 3 oder 5 erhielt (1,54 g).

Hd = —23,1° (C=1,0, MeOH)

(d) Natrium-Salz

2,27 g der Verbindung, die nach dem Verfahren von Beispiel 3 oder 5 hergestellt wurde, löste man in 25 ml Methanol auf. Zu dieser Lösung gab man 0,514 g Natriumacetat und die Mischung wurde bei Zimmertemperatur 30 Minuten lang gerührt und unter Vakuum eingedampft. Zu dem Rest gab man 200 ml einer Mischung aus Methanol und Chloroform (3 X 100 v/V) und die erhaltene Mischung wurde filtriert und unter Vakuum eingedampft. Man löste den Rückstand in Methanol auf und die Lössung wurde filtriert und unter Vakuum eingedampft. Zu dem Rückstand gab man Äthylacetat und das Produkt wurde durch Saugen filtriertrwobei man das Natriumsalz der Verbindung von Beispiel 3 oder 5 erhielt (1,85 g).

Hd = —26,7° (C = 1,0, MeOH)

(e) Dicyclohexylamin-Salz

13,1 g der Verbindung, die nach dem Verfahren von Beispiel 3 oder 5 hergestellt wurde, löste man in 120 ml Acetonitril. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren 6 ml Dicyclohexyl-amin gegeben. Die Mischung wurde noch weiter 30 Minuten lang gerührt und dann über Nacht stehen gelassen. Man filtrierte den Niederschlag durch Saugen ab und trocknete ihn an Luft. Die erhaltenen rohen Kristalle wurden in 300 ml Acetonitril suspendiert und man erhitzte die Suspension unter Rückfluss 30 Minuten lang. Diese Suspension wurde abgekühlt und man filtrierte die Kristalle durch Saugen ab und trocknete an man Dicyclohexylaminsalz der Verbindung von Beispiel 3 oder 5 erhielt. (12,2 g).

[o;]D = —24,5 (C = 1,0, MeOH)

Beispiel 5

5

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin

5,98 g N-Cyclohexancarbonyl-D-alanin wurden in 80 ml trockenem Tetrahydrofuran aufgelöst. Zu dieser Lösung gab 10 man bei einer Temperatur von —18°C unter Rühren 5,84 g Carbonyldiimidazol, während man die Mischung mit Eis kühlte. Man rührte die Mischung bei dieser Temperatur 1 Stunde lang und anschliessend gab man 6,29 g N-(3-Mercapto-2-D--methylpropanoyl)-L-prolin zu der Mischung hinzu, man rührte 15 bei einer Temperatur von —18°C 30 Minuten lang und dann noch eine Stunde lang bei Zimmertemperatur. Nach Beendigung der Reaktion dampfte man die Mischung unter Vakuum ein, um das Lösungsmittel zu entfernen. Man gab 50 ml Wasser zu dem Rückstand und fügte 2 N-HC1 zu der Mischung hinzu, 20 um den pH auf einen Wert zwischen 1 bis 2 einzustellen. Die Mischung wurde mit Äthylacetat extrahiert und die Äthylacetat-Schicht wurde mit gesättigter NaCI-Lösung gewaschen, über MgSÜ4 getrocknet und unter Vakuum eingedampft. Zu dem Rückstand gab man 120 ml Acetonitril und dann 6 ml 25 Dicyclohexylamin (DCHA). Die Mischung wurde eine Stunde lang bei Zimmertemperatur gerührt. Nachdem man die Mischung über Nacht stehen liess, wurde der entstandene Niederschlag abfiltriert und an Luft getrocknet, wobei man das rohe Dicyclohexylaminsalz (14,35 g) erhielt. Das rohe Salz wurde in 30 300 ml Acetonitril suspendiert und man erhitzte die Suspension 30 Minuten lang unter Rückfluss. Nach dem Abkühlen sammelte man den Niederschlag durch Absaugen und trocknete an Luft, wobei man 12,20 g des Dicyclohexylaminsalzes erhielt. Diese 12,20 g des Dicyclohexylaminsalzes wurden in 90 ml 35 Äthylacetat suspendiert und zu der Suspension gab man 60 ml 0,5N wässriges Kaliumbisulfat. Die erhaltene Mischung wurde geschüttelt. Die organische Schicht wurde mit destilliertem Wasser gewaschen, über MgSÜ4 getrocknet und dann unter Vakuum eingedampft, wobei man 8,64 g einer gummiartigen Sub-40 stanz erhielt. Durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie wurde gefunden, dass die erhaltene Verbindung mit der Titel Verbindung identisch ist.

Beispiel 6

45 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-glycylthio)-2-D-methylpro-panoylJ-L-prolin

Man löst 1,02 g N-Cyclohexancarbonylglycin in 10 ml trockenem Tetrahydrofuran auf. Zu dieser Lösung gab man 20 so ml trockenes Tetrahydrofuran, das 1,07 g Carbonyldiimidazol enthielt. Die Zugabe erfolgte bei einer Tempratur von —20°C unter Rühren, während Kühlens der Mischung mit Eis. Die Mischung wurde bei dieser Temperatur eine Stunde lang gerührt und anschliessend gab man 6 ml trockenes Tetrahydrofuran, 55 das 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin enthielt hinzu, gefolgt von Rühren bei einer Temperatur von —20°C während 30 Minuten. Anschliessend wurde noch 1 Stunde bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Beendingung der Umsetzung wurde die Mischung unter Vakuum eingedampft, 60 um das Lösungsmittel zu entfernen. Den Rückstand unterwarf man der Kolonnenchrómatographie an Silicagel (Kolonne: 2x35) unter Verwendung einer Mischung aus Methanol und Chloroform (1 : 100 zu 3 : 100) als Eluiermittel. Die Fraktionen, welche das Endprodukt enthielten, wurden vereinigt und 65 unter Vakuum eingedampft, wobei man 1,16 g einer gummiartigen Substanz erhielt. Durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie stellte man fest, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch war.

13

651 825

Beispiel 7

N-[3-(N-Cyclopropancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propanoylJ-L-prolin

635 mg N-Cyclopropanoyl-D-alanin und 0,70 ml Triäthylamin wurden in 14 ml trockenem Tetrahydrofuran aufgelöst. Zu dieser Lösung gab man bei einer Temperatur von —15°C unter Rühren 0,48 ml Äthylchloroformiat, wobei die Mischung mit Eis gekühlt wurde. Diese Mischung rührte man bei dieser Temperatur 15 Minuten lang und anschliessend gab man 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin und 10 ml trockenes Tetrahydrofuran, das 0,70 ml Triäthylamin enthielt, hinzu, und man rührte noch 15 Minuten lang bei Temperatur von —15°C. Dann wurde noch über Nacht bei einer Temperatur von 5°C gerührt. Nach Beendigung der Reaktion dampfte man die Mischung unter Vakuum bei einer Temperatur von 30 bis 35°C ein, um das Lösungsmittel zu entfernen. Zu dem Rückstand gab man 10 ml Wasser und anschliessend 2N-HC1 um den pH der Mischung auf einen Wert zwischen 1 und 2 einzustellen. Die Mischung wurde mit Chloroform extrahiert und man wusch die Chloroformschicht mit gesättigter NaCl-Lösung, trocknete über MgSCU und dampfte unter Vakuum ein. Der Rückstand wurde der Kolonnenchromatographie an Silicagel (Kolonne: 2 X 35) unterworfen, wobei man eine Mischung aus Methanol und Chloroform (1 : 100 zu 3 : 100) als Eluiermittel verwendete. Diejenigen Fraktionen, welche die Endverbindung enthielten, wurden vereinigt und unter Vakuum eingedampft, wobei man 395 mg einer gummiartigen Substanz erhielt. Durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 8

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-N-methylglycylthio)-2'D--methylpropanoyl]-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch N-Cyclohexancarbonyl-N-methylglycin (1,09 g)- Carbonyldiimidazol (1,09 g) und N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L--prolin (1,09 g) ersetzte. Man erhielt 0,76 g einer gummiartigen Substanz und durch NMR-Analyse sowie Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass das erhaltene Produkt mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 9

N-[3-(N-Cyclopropancarbonylglycylthio)-2-D-methyl-propanoylJ-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit dem Unterschied, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 0,96 g N-Cyclopfopancarbonylglycin, 1,09 g Carbonyldiimidazol und 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methyIpropanoyl)-L-proIin ersetzte. Man erhielt 0,4 g einer gummiartigen Substanz und es konnte durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie festgestellt werden, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 10

N-[3-(N-Adamantancarbonylglycylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit dem Unterschied, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,42 g N-Adamantancarbonylglycin, 1,09 g Carbonyldiimidazol und 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methyipropanoyl)-L-prolin ersetzte. Man erhielt 1,7 g einer gummiartigen Substanz und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 11

5 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylalanylthio)-2-D--methylpropanoyl]-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch io 1,54 g N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylalanin, 1,09 g Carbonyldiimidazol und 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L--prolin ersetzte. Man erhielt 0,97 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass dieses Produkt mit der Ti-15 telverbindung identisch ist.

Beispiel 12

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-leucylthio)-2-D-methylpro-20 panoyl]-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit dem Unterschied, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,20 g N-Cyclohexancarbonyl-D-leucin, 0,97 Carbonyldiimidazol und 0,98 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin 25 ersetzte. Man erhielt 1,17 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte man feststellen, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

30

Beispiel 13

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-tryptophylthio)-2-D-methyl-propanoyl]-L-prolin

35 Man wiederholte das Verfahren von Beispiel 6, ersetzte aber N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,75 g N-Cyclohexancar-nyl-D-tryptophan, 1,09 g Carbonyldiimidazol und 1,09 g N-(3--Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin. Man erhielt 0,8 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und 40 Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 14

45 N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylglycylthio)-2-D--methylpropanoylJ-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,30 N-Cyclohexancarbonyl-D-phenylglycin, 0,97 g Carbonyldiimidazol und 0,98 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L--prolin ersetzte. Man erhielt 0,35 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass dieses Produkt mit der Ti-telverbindung identisch ist.

Beispiel 15

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-methionylthio)-2-D-^ -methylpropanoyl]-L-prolin

Man wiederholte das Verfahren von Beispiel 6, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,30 g N-Cyclohexancarbonyl-D-methionin, 1,09 g Carbonyldiimidazol und 1,09 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin 65 ersetzte. Man erhielt 0,59 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass dieses Produkt mit der Titelverbindung identisch ist.

651 825

14

Beispiel 16

N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl-D-glutaminylthio)-2-D--methylpropanoylJ-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 0,5 g N-Cyclohexancarbonyl-D-glutamin, 0,41 g Carbonyldiimidazol und 0,41 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L--prolin ersetzte. Man erhielt 0,3 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte man feststellen, dass diese Substanz mit der Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 17

N-[3-(N-Adamantancarbonyl-D-alanylthio)-2-D-methyl-propanoylJ-L-prolin

Das Verfahren von Beispiel 6 wurde wiederholt, aber mit der Ausnahme, dass man N-Cyclohexancarbonylglycin durch 1,2 g N-Adamantancarbonyl-D-alanin, 0,97 g Carbonyldiimidazol und 0,98 g N-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-proIin ersetzte. Man erhielt 1,02 g einer gummiartigen Substanz, und durch NMR-Analyse und Dünnschichtchromatographie konnte festgestellt werden, dass dieses Produkt mitder Titelverbindung identisch ist.

Beispiel 18

Das Dicyclohexylaminsalz von N-[3-(N-Cyclohexancarbonyl--D-alanylthio)-2-D-methylpropanoyl)-L-prolin

(1) Man suspendierte 241 g 3-(N-Cyclohexancarbonyl-D--alanylthio)-2-D-methylpropionsäure in 1,3 1 trockenem Di-chlormethan. Zu dieser Suspension gab man bei einer Temperatur von —15°C unter Rühren 117 ml Triäthylamin tropfenweise. Dann wurden 104 ml Pivaloylchlorid tropfenweise bei einer Temperatur von weniger als —5°C unter Rühren hinzugefügt und man rührte die Mischung noch 30 Minuten lang.

(2) Man suspendierte 101 g L-Prolin in 1,2 1 trockenem Di-chlormethan. Zu dieser Suspension gab man bei einer Temperatur von —15°C unter Rühren tropfenweise 112 ml Trimethyl-silylchlorid und anschliessend ebenfalls tropfenweise, bei einer Temperatur von weniger als —5°C unter Rühren 122 ml Tri-at-hylamin. Die Mischung wurde dann bei einer Temperatur von —I5°C 30 Min. lang gerührt. Zu der entstandenen Mischung gab man die Lösung, die gemäss (1) hergestellt wurde, und dann rührte man die Mischung unter Kühlung 15 Minuten lang. Anschliessend wurde noch bei Zimmertemperatur 1 Stunde lang gerührt. Nach Beendigung der Umsetzung gab man 1 Liter kaltes destilliertes Wasser zu der Reaktionsmischung unter Kühlung und dann 90 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure, wobei die letztere Zugabe tropfenweise erfolgte. Die Mischung wurde 10 Minuten lange gerührt und man trennte die organische Schicht ab. Diese wurde mit gesättigter NaCI-Lösung zweimal gewaschen und über MgSC>4 getrocknet. Zu dem Filtrat gab man 326 ml Dicyclohexylamin und 800 ml Acetonitril und anschliessend wurde die Mischung 30 Minuten lange gerührt.

Dann gab man 4 Portionen von 400 ml Acetonitril in einem Intervall von 10 Minuten zu der Mischung und die entstandene Mischung wurde über Nacht bei einer Temperatur von 5°C stehen gelassen. Der Niederschlag wurde durch Absaugen abgetrennt und an Luft getrocknet, wobei man eine rohe Substanz erhielt, welche der Titelverbindung entsprach. Diese rohe Probe, solange sie noch heiss war, wurde in 3 Liter Dichlormethan aufgelöst und filtriert. Man rührte das Filtrat 30 Minuten lang bei Zimmertemperatur, gab weitere 4 Portionen von 750 ml Acetonitril in einem Intervall von 10 Minuten hinzu. Man liess die erhaltene Mischung über Nacht bei einer Temperatur von 5°C stehen, der Niederschlag wurde ab filtriert und an Luft getrocknet und man erhielt eine farblose Probe der Titelverbindung (404 g).

Schmelzpunkt: 190-191°C,

[a]D = —24,5° (C= 1,0, MeOH)

Beispiel 19

Das Calciumsalz von N-[3-N-Cyclohexancarbonyl-D-alanyl-thio)-2-D-methylpropanoyl]-L-prolin

404 g einer Probe des Dicyclohexylaminsalzes, hergestellt nach dem Verfahren von Beispiel 18, wurde in 2 Liter Äthylacetat suspendiert und zu dieser Suspension gab man 2,5 10,5N Kaliumbisulfat. Anschliessend wurde die erhaltene Mischung 10 Minuten lang gerührt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit destilliertem Wasser gewaschen und über MgS04 getrocknet. Man dampfte das Filtrat unter Vakuum ein und löste den Rückstand in 1,21 Aceton auf. Zu dieser Acetonlösung gab man 1,21 destilliertes Wasser und 36,6 g Calciumcarbonat. Die erhaltene Mischung wurde heftig bei einer Temperatur von 40° C eine Stunde lang gerührt. Nach dem Abkühlen filtrierte man die Mischung und das Filtrat wurde unter Vakuum eingedampft. Der erhaltene Sirup wurde in einem Liter Aceton suspendiert und man rührte die erhaltene Lösung 5 Stunden lang. Der Niederschlag wurde durch Absaugen abgetrennt, an Luft getrocknet, dann im Vakuum getrocknet, wobei man ein weisses Pulver der Titelverbindung erhielt (212 g).

[o!]D = —47,2° (C= 1,0, MeOH)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Claims

651 825
2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass A den Rest einer der folgenden Aminosäuren Glycin, Sarcosin, D-Alanin, D-Leucin, D-Methionin, D-Glutamin, D-Phenylalanin, D-Tryptophan und D-Phenylglycin bedeutet.

2

PATENTANSPRÜCHE 1. Prolinverbindung der Formel I

(I)

worin R einen Acylrest der Gruppe Cyclopropancarbonyl, Cy-clohexancarbonyl und Adamantancarbonyl und A einen Gly-cinrest, einen Sarcosinrest oder den Rest einer a-D-Aminosäure bedeuten, wobei der Acylrest R mit der a-Aminogruppe von A unter Bildung einer Amidbindung verbunden ist und die in der Gruppe A enthaltene Carbonylgruppe an das Schwefelatom unter Bildung einer Thiolesterbindung gebunden ist, sowie die pharmazeutisch annehmbaren Salze dieser Verbindungen.
3

651 825

3. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der 2-Methylpropanoylteil der Verbindung der Formel I in D-Konfiguration vorliegt.
4. Verbindungen nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass R ein Cyclohexancarbonylrest ist und A den Rest von D-Alanin bedeutet.
5 ein aktiviertes Amid, Säurehalogenid, ein aktivierter Ester oder ein gemischtes Anhydrid ist.

5. Verfahren zur Herstellung von Prolinderivaten der Formel ch-,

I

r-a-s-ch2chco-n y

cooh

(I)

ch3

I

R-A'-S-CH2CHCOOH

(II)

oder ein reaktionsfähiges Derivat davon, worin R weiter oben definiert ist und A' = oder A ist, aber mit dem Unterschied, dass in Rest A' gegebenenfalls vorhandene freie funktionelle Gruppen, die nicht an der Umsetzung teilnehmen sollen, geschützt sind, mit einer Verbindung der Formel III

hn coor1

(Iii)

oder einem reaktionsfähigen Derivat davon, worin R' Wasserstoff oder eine Carboxyl-Schutzgruppe bedeutet, in einem inerten organischen Lösungsmittel zwischen —50 und 20°C umsetzt, gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen aus dem Reak-

• tionsprodukt entfernt und erhaltene Verbindungen gegebenenfalls in die pharmazeutisch annehmbaren Salze überführt.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das reaktionsfähige Derivat der Verbindung der Formel II
7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindungen der Formel II mit einer Verbindung der Formel III in Gegenwart eines Carbodiimids umgesetzt wer-10 den.
8. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung der Formel III in Form eines reaktionsfähigen Derivates vorliegt, in welchem die Aminogruppe eine Silyl-Schutzgruppe aufweist.

15
9. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das inerte organische Lösungsmittel Tetrahydrofuran, Di-oxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Dichlormethan oder Acetonitril ist.
10. Verfahren zur Herstellung von Prolinderivaten der For-20 mei I

ch3

25

r-a-s-chochco-n

H

cooh

(I)

worin R einen Acylrest der Gruppe Cyclopropancarbonyl, Cy-30 clohexancarbonyl und Adamantancarbonyl und A einen Gly-cinrest, einen Sarcosinrest oder den Rest einer ct-D-Aminosäure bedeuten, wobei der Acylrest R mit der ce-Aminogruppe von A unter Bildung einer Amidbindung verbunden ist und die in der Gruppe A enthaltene Carbonylgruppe an das Schwefelatom un-35 ter Bildung einer Thiolesterbindung gebunden ist, sowie von pharmazeutisch annehmbaren Salzen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel IV

worin R einen Acylrest der Gruppe Cyclopropancarbonyl, Cy-clohexancarbonyl und Adamantancarbonyl und A einen Gly-cinrest, einen Sarcosinrest oder den Rest einer «-D-Aminosäure bedeuten, wobei der Acylrest R mit der a-Aminogruppe von A unter Bildung einer Amidbindung verbunden ist und die in der Gruppe A enthaltene Carbonylgruppe an das Schwefelatom unter Bildung einer Thiolesterbindung gebunden ist, sowie von pharmazeutisch annehmbaren Salzen dieser Verbindungen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel II

40

R - A' - OH

(IV)

oder ein reaktionsfähiges Derivat davon, worin R weiter oben definiert ist und A' = A ist, aber mit dem Unterschied, dass im Rest A' gegebenenfalls vorhandene freie funktionelle Gruppen, 4s die nicht an der Umsetzung teilnehmen sollen, geschützt sind, mit einer Verbindung der Formel V

50

ch3

I

hs-ch2chco-n

(v)

55 oder einem reaktionsfähigen Derivat dieser Verbindung, worin R' Wasserstoff oder eine Carboxylschutzgruppe bedeutet, in einem inerten organischen Lösungsmittel zwischen —50 und 20° C umsetzt, gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen aus dem Reaktionsprodukt entfernt und erhaltene Verbindungen 60 gegebenenfalls in pharmazeutisch annehmbare Salze überführt.
11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das reaktionsfähiges Derivat einer Verbindung der Formel IV ein aktiviertes Amid, Säurehalogenid, ein aktivierter Ester oder ein gemischtes Anhydrid ist.

65
12. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung der Formel IV mit einer Verbindung der Formel V in Gegenwart eines Carbodiimids umgesetzt wird.
13. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das inerte organische Lösungsgruppe Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Hexamethylphosphotriamid, Chloroform, Dichlormethan oder Acetonitril ist.

CH3

-CH2CHCO-

oder in DL-Form vorliegen kann, nämlich einer Mischung von D- und L-Formen. Jede dieser Formen wird von der vorliegenden Erfindung umfasst. Die D- und die DL-Formen sind wegen ihrer biologischen Aktivität bevorzugt.

Der Prolinrest der Formel