CZ2001516A3 - Peptidové inhibitory hepatidity typu C - Google Patents

Peptidové inhibitory hepatidity typu C Download PDF

Info

Publication number
CZ2001516A3
CZ2001516A3 CZ2001516A CZ2001516A CZ2001516A3 CZ 2001516 A3 CZ2001516 A3 CZ 2001516A3 CZ 2001516 A CZ2001516 A CZ 2001516A CZ 2001516 A CZ2001516 A CZ 2001516A CZ 2001516 A3 CZ2001516 A3 CZ 2001516A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alkyl
amido
optionally substituted
amino
lower alkyl
Prior art date
Application number
CZ2001516A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ301268B6 (cs
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray D. Bailey
Dale Cameron
Anne-Marie Faucher
Elise Ghiro
Nathalie Goudreau
Teddy Halmos
Marc-André Poupart
Jean Rancourt
Youla S. Tsantrizos
Dominik M. Wernic
Original Assignee
Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. filed Critical Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.
Publication of CZ2001516A3 publication Critical patent/CZ2001516A3/cs
Publication of CZ301268B6 publication Critical patent/CZ301268B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/081—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
    • C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Peptidové inhibitory viru hepatitidy typu C
Oblast techniky
Současný vynález se týká sloučenin, způsobu jejich přípravy, přípravků a postupů terapie virové hepatitidy typu O. Vynález se především týká nových peptidových analogů, farmaceutických přípravků obsahujících tyto analoga a postupů jejich použití při terapii virové hepatitidy typu C. Vynález se také týká meziproduktů a způsobu jejich přípravy k syntéze shora uvedených peptidových analog.
Dosavadní stav techniky
Virus způsobující hepatitidu typu C (HCV) je hlavním etiologickým agens post-transfúzní nebo nenozokomiální non-A, non-B-hepatitidy. Přibližně 150 milionů lidí na světě je tímto virem infikováno. Vysoké procento nosičů v populaci je chronicky infikováno a přechází do chronického stadia onemocnění, tzv. chronické hepatitidy typu C. Tato skupina pacientů je ohrožena vážným až smrtelným onemocněním jater, jakými jsou jaterní cirhóza, hepatocelulární karcinom a jaterní selhání.
Mechanismus vzniku virové perzistence a příčina častého přechodu do chronického stadia jaterního onemocnění nejsou přesně vysvětleny. Není známé jak HCV napadá a poškozuje imunitní systém hostitele. Není ani objasněna role buněčné a humorální imunitní odpovědi proti infekci virem HCV. K profylaxi posttransfúzní virové hepatitidy jsou doporučovány imunoglobuliny, ačkoli the Centre for Disease Control (Ústav pro kontrolu infekčních chorob) v současné době použití imunoglobulinů k tomuto účelu nedoporučuje. Nedokonale účinná obranná imunitní odpověď znemožňuje vývoj vakcíny nebo zavedení profylaktických opatření po expozici nákaze.
- 2 Jedinou možností řešení v blízké budoucnosti jsou intervence namířené proti virům samotným.
Ke zjištění účinných farmaceutických činidel vhodných k terapii infekcí virem HOV u pacientů s chronickou hepatitidou typu C se již provedlo mnoho rozličných klinických studií. Během těchto studu se sledovalo užití interferonu alfa samotného nebo v kombinaci s ostatními antivirovými léčivy. Studie prokázaly, že u podstatné části sledovaných pacientů je tato terapie neúčinná, a pokud účinná je, pak ve velkem procentu případů dochází po ukončení terapie k relapsu onemocněni.
Jedinou a podle klinických studií prokazatelně vhodnou terapii chronické virové hepatitidy O bylo donedávna podávání interferonu (IFN). Taková terapie však vede jen u malého procenta případu k podstatnému zlepšení a navíc terapie interferonem má závazné vedlejší účinky (retinopatie, thyroiditis, akutní panktreatitida, deprese), které snižují kvalitu života takto léčených pacientů. Kombinace s ribavirinem má pozitivní účinek u pacientů neodpovídajících na lecbu samotným interferonem, tato kombinace však nesnižuje výskyt vedlejších nežádoucích účinků způsobených interferonem samostatné podaným.
Z uvedeného vyplývá nutnost účinného antivirového činidla k terapii infekce HCV, které překoná současné omezení farmakologicke terapie tohoto závažného onemocnění.
HCV patří do skupiny jednořetězových RNA virů s pozitivní polaritou a lipidovou obálkou, čeleď Flaviviridae. Jediný řetězec RNA genomu HCV tvoří podélně přibližně 9500 nukleotidů s jednoduchým otevřeným čtecím rámcem (open reading frame ORF) k dekódování jediného velkého polyproteinu o přibližně 3000 aminokyselinách. V infikovaných buňkách je tento polyprotein mnohočetně štěpen buněčnými a virovými proteázami za vzniku strukturálních a nestrukturálních (NS) proteinů. V případě HCV je tvorba zralých
- 3 nestrukturálních proteinů (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, a NS5B) způsobená dvěmi virovými proteázami. První z nich, velmi spatné popsaná, štěpí místo spojení NS2-NS3. Druhá, serinová proteáza je v N-terminální oblasti molekuly NS3 (proto označovaná jako NS3 proteáza) zprostředkovává všechna štěpení za NS3 dolů, v cis pro NS3NS4 štěpení a v trans pro štěpení ve zbývajících místech, tedy NS4ANS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Protein NS4A má zřejme několik funkcí, je kofaktorem NS3 proteázy a pravděpodobně napomáhá membránové lokalizaci NS3 a ostatních virových replikových komponent. Komplex tvořící NS3 protein a NS4A je zřejmě důležitým mezičlánkem ovlivňujícím proteolytické pochody na popsaných místech štěpení proteinu. NS3 protein vykazuje nukleosid-trifosfatázovou a RNAhelikázovou aktivitu. Protein NS5B je RNA-dependentní RNA polymeráza ovlivňující replikaci viru HCV.
Při výzkumu a vývoji antivirového činidla se hlavním cílem stala taková látka, která inaktivuje virem kódované enzymy, ktere jsou esenciální pro replikaci viru. Zveřejněná přihláška WO č. 97/06804 popisuje (-)-enantiomer nukleosidového analoga cytosin-1,3-oxathiolanu (3TC), který je účinný proti HCV viru. Tato sloučenina, která byla označena v předchozími klinickými studiemi za bezpečnou, je prokazatelně účinná proti virům HIV a HBV. Stále ještě zbývá klinicky doložit její účinnost proti HCV a popsat mechanismus antivirového účinku.
Rozsáhlé úsilí objevit sloučeniny, které inhibují NS3-proteazu nebo RNA-helikázu viru HCV vedlo k následujícím odhalením.
US patent č. 5 633 388 popisuje heterocykly substituované karboxamidy a jejich analoga účinné proti viru HCV. Účinek těchto sloučenin je namířen proti helikázovému účinku protienu NS3. Výsledky klinických testů nejsou zatím k dispozici.
- 4 Podle studie vedené Chu a spol. (Tet. Lett., 1996, str. 7229-7232) je fenantren-chinon in vitro účinný proti proteáze NS3 proteinu. Výsledky dalšího výzkumu této sloučeniny nebyl zatím zveřejněn.
Studie prezentovaná na deváté mezinárodní konferenci o antivirovém výzkumu (Urabaai, Fukyshima, Japonsko 1996, Antiviral Research, 30. 1. 1996, A23 (článek 19)) popisuje thiazolidinové deriváty jako inhibitory HCV proteázy.
Několik studií se zabývalo sloučeninami inhibujícími jiné sennove proteázy, především lidskou leukocytární elastázu. Jedna skupina z těchto sloučenin je popsána ve zveřejněné přihlášce WO č. 95/33764 (Hoechst Marion Rousse, 1995). Peptidy popisované v této přihlášce jsou strukturálně odlišné od peptidů podle současného vynalezu.
Zveřejněná přihláška WO č. 98/17679 (Vertex Pharmaceuticals Inc.) se týká inhibitorů serinové proteázy, především proteázy NS3 proteinu HCV viru. Tyto inhibitory jsou analoga peptidů odvozena od NS5A/5B. Všechny tyto peptidy obsahují jako svoji základní vlastnost Cterminál peptidů aktivovaný karbonylovou funkční skupinou. Tyto peptidy jsou podle popisu účinné proti jiným serinovým proteazam a nejsou tudíž specificky účinné proti proteáze NS3 proteinu viru HCV.
Hoffman LaRoche také popisuje hexapeptidy jako antivirová činidla působící jako inhibitory proteináz vhodná k terapii infekcí HCV virem. Tyto peptidy obsahují na svém C-terminálu aldehyd nebo kyselinu boritou.
Steinkůhler a spol. a Ingallinella a spol. popisují inhibici produkty štěpení na N-terminálu (Biochemistry 1998, 37, 8899-8905 a 89068914). Tyto peptidy a jejich analoga nijak nepřipomínají peptidy podle současného vynálezu.
Předností současného vynálezu je, že se týká tripeptidú inhibujících NS3 proteázu viru HCV.
- 5 Jinou předností současného vynálezu je, že se týká shora uvedených peptidů, které specificky inhibují NS3 proteázu a které nemají do 300 μmol signifikantní inhibiční účinek na ostatní serinové proteázy, jakými jsou lidská leukocytární elastázy (HLE), prasečí pankreatická elastáza (PPE) nebo hovězí pankreatický chymotrypsin nebo na cysteinové proteázy (lidský jaterní katepsin B (Cat B)).
Další předností tohoto vynálezu je, že se týká malých peptidů o nízké molekulární hmotnosti, které dobře penetrují membránami buněk, působí uvnitř buněk a in vivo mají dobrý farmakokinetický profil.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou racemáty, diastereoizomery a optické izomery sloučeniny obecného vzorce I:
kde B je atom vodíku, Cs nebo Cio aryl, C7.16 aralkyl; heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný C^galkylem; Ci.6alkoxy, Ci-s alkanoyl, hydroxyskupina, hydroxy-alkylová skupina, atom halogenu, haloalkyl, nitroskupina, kyanoskupina, kyano-alkylová skupina, aminoskupina eventuálně substituovaná Ci.6alkylem; amidoskupina nebo (nižší alkyl)-amidoskupina nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(0)-, karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, amidoskupina vzorce R4-N(R5)-C(O)-, thio-amidoskupina vzorce R4-N(R5)-C(S)- nebo sulfonyl vzorce R4-SO2, kde R4 je i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Cj.ealkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)amidoskupinou nebo ii/ C3.7 cykloalkyl, C3.7cykloalkoxy nebo C4.ioalkyl-cykloalkyl, vždy eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci.6alkoxy)-karbonylovou skupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci.galkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo iii/ aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci.6alkylem, amidoskupina nebo (nižší alkyl)-amidoskupina nebo iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.i6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný (^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci.6alkylem,
R5 je atom vodíku nebo Ci-ealkyl;
za předpokladu, že pokud R4 je amidoskupina nebo thioamid, pak R4 není ii/ cykloalkoxy;
- 7Y je atom vodíku nebo Ci.6 alkyl;
R3 je Ci.8alkyl, C3.7cykloalkyl nebo C4.10 alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, Cvgthioalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou, Cg nebo Cio arylem nebo C7-i6 aralkylem,
R2 je CH2-R2o> NH-R20, O-R20 nebo S-R2o>
kde R2o je nasycený nebo nenasycený C3.7cykloalkyl nebo C4-io (alkylcykloalkyl), vždy eventuálně mono-, di- nebo tri- substituované R2i nebo
R20 znamená C6 nebo C10 aryl nebo C7.14 aralkyl, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R21 nebo
R20 je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně mono-, di-nebo tri-substituované R2i, kde každé R21 je nezávisle C^galkyl, Ci.6alkoxy, nižší thioalkyl, sulfonyl, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, aminoskupina eventuálně mono-nebo di- substituovaná Ci.galkylem, C6 nebo C10arylem, C7.14aralkyl, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het; amidoskupina eventuálně mono- substituovaná Ci.6alkylem, C6 nebo C10arylem, C7.14 aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het; karboxylová skupina, karboxy-(nižší alkyl), C6 nebo C10 aryl, C7.14 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Cvgalkyl, C3.7cykloalkyl, Ci.6alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.galkylem, sulfonylová skupina, (nižší alkyl)-sulfonylová skupina, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, karboxylová skupina, amidoskupina, (nižší λ λ · · · · η · · * . · «»« e · « · τ······ · «
-8- i ···* »· alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus eventuálně substituovaný Ci-ealkylem,
R1 je atom vodíku, C^alkyl, C3-7cykloalkyl, C2.6alkenyl nebo C2.6 alkinyl, vždy eventuálně substituovaný atomem halogenu, nebo jejich farmaceuticky vhodné soli nebo estery.
Podstatou vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující účinné množství sloučeniny obecného vzorce 1, které působí proti viru HCV, nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru, v adiční směsi s farmaceuticky vhodným nosičem nebo pomocnou látkou.
Důležitou podstatou vynálezu je způsob terapie virové hepatitidy typu C savců, která spočívá v podání specificky anti-HCV působícího účinného množství sloučeniny obecného vzorce 1 nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru nebo shora uvedeného přípravku.
Jinou podstatou vynálezu je způsob inhibice replikace viru hepatitidy typu C působením takovým množstvím sloučeniny obecného vzorce I nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru nebo shora uvedeného přípravku, které způsobí inhibici virové proteázy NS3 proteinu viru HCV.
Další podstatou vynálezu je způsob terapie virové hepatitidy C u savců podáním specificky proti HCV viru působícího účinného množství kombinace sloučeniny obecného vzorce I nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru. Podstatou vynálezu je přípravek obsahující další imunomodulační činidlo. Příkladem takového činidla jsou α-, β- a δinterferony.
Radikály označené R a S, popisují konfiguraci radikálu ve vztahu ke sloučenině (například Ri sloučeniny obecného vzorce I). Jde o vztah radikálu ke sloučenině.
- 9 Přirozeně se vyskytující aminokyseliny kromě glycinu obsahují chirální atom uhlíku. Pokud není dále uvedeno jinak, pak preferujeme aminokyseliny v L-konfiguraci. V případech blíže určených předkladatelé předpokládají, že některé aminokyseliny obecného vzorce I mohou mít konfiguraci buď D- nebo L- nebo se mohou vyskytovat ve směsi D- a Lizomerů, včetně racemických směsí.
Výrazy „P1, P2, P3...“ se používají k označení pozice zbytku aminokyseliny od C-konce peptidu směrem k N-konci (P1 označuje pozici 1 od C- konce, P2 označuje druhou pozici od C-konce...). Literatura: A. Berger & I. Schechter, Transactions of the Royal Society London series B257, 249-264 (1970)).
Zkratky pro a-aminokyseliny jsou uvedeny v následující tabulce
A:
aminokyselina symbol
1 -aminocyklopropyl-karboxylová kyselina Acca
Alanin Ala
Aspartová kyselina Asp
Cystein Cys
Cyklohexylglycin (2-amino-2-cyklohexyloctová kyselina) Chg
Glutamová kyselina Glu
Izoleucin lie
Leucin Leu
Fenylalanin Phe __
Prolin Pro
terc.butylglycin Tbg
Valin Val
Termín 1-aminocyklopropyl-karboxylová kyselina' (Acca) znamená sloučeninu obecného vzorce:
o
Termín terc.-butylglycin (Tbg) znamená sloučeninu obecného vzorce:
o
Termín zbytek aminokyseliny nebo derivátu aminokyseliny znamená radikál odvozený od odpovídající α-aminokyseliny odštěpením hydroxylu karboxylové skupiny a jednoho vodíkového atomu aaminoskupiny. Například termíny Gin, Ala, Gly, He, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar a Tyr znamenají zbytky L-glutaminu, L-alaninu, glycinu, L-izoleucinu, L-argininu, L-aspartové kyseliny, L-fenylalamnu, L-serinu, L-leucinu, L-cysteinu, L-asparaginu, sarkosinu a L-tyrosinu.
Jako vedlejší řetězec aminokyseliny nebo zbytku aminokyseliny znamená skupinu vázanou na atom α-uhlíku a-aminokyseliny. Například, R- vedlejší řetězec u glycinu je atom vodíku, u alaninu je to metyl, u valinu je to izopropyl. Specifické R-skupiny nebo vedlejší řetězce a-aminokyselin jsou uvedeny v učebnici A. L. Lehninger's text on Biochemistry (kapitola 4).
-11··:·· : ·..· : ·..· .:.
Jako halogen označujeme atom halogenu, a to atom brómu, chlóru, fluóru nebo jódu.
Termín Ci.6alkyl nebo (nižší) alkyl, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená přímý nebo větvený řetězec alkylových zbytků obsahující až šest atomů uhlíku včetně, například metyl, etyl, propyl, butyl, hexyl, 1-metyletyl, 1-metylpropyl, 2metylpropyl, 1,1-dimetyletyl (tj. terc-butyl).
Termín „C3.-cykloalkyl, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená zbytek cykloalkylu obsahující od tří do sedmi atomů uhlíku a zahrnuje cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl.
Termín „spiro“ -cyklická skupina označuje například spirocyklopropyl nebo spiro-cyklobutyl:
Termín „nenasycený cykloalkyl například označuje cyklohexenyl:
Termín „C4.10 (alkylcykloalkyl)“ znamená zbytek cykloalkylu obsahující od čtyř do deseti atomů uhlíku vázaný na zbytek alkylu. Vázané zbytky obsahují až deset atomů uhlíku, například cyklopropylmetyl, cyklopentyletyl, cyklohexylmetyl, cyklohexyletyl nebo cykloheptyletyl.
- 12 ’
Termín „C2-io alkenyl použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená zbytek alkylu obsahující od 2 do 10 atomů uhlíku a dále obsahující nejméně jednu dvojnou vazbu. Jde například o alkenyl včetně alylu a vinylu.
Termín „Ci-6 alkanoyl, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená přímý nebo větvený zbytek 1-oxoalkylu obsahující jeden až šest atomů uhlíku. Mezi takové alkanyly patří formyl, acetyl, 1-oxopropyl (propionyl), 2-metyl-1 -oxopropyl, 1-oxohexyl.
Termín ,,Ci.6 alkoxy“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným radikálem, znamená zbytek -©(Cvealkyl), kde shora definovaný alkyl obsahuje až šest atomů uhlíku. Alkoxy znamená metoxy, etoxy, propoxy, 1 -metyl-etoxy, butoxy a 1,1-dimetyl-etoxy (známý jako terc.butoxy).
Termín „C3.7cykloalkoxy“ použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená C3.7cykloalkylovou skupinu vázanou na atom kyslíku, například:
Termín „C6 nebo CiOaryl použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená buď aromatickou monocyklickou skupinu obsahující 6 atomů uhlíku nebo aromatickou bicyklickou skupinu obsahující 10 atomů uhlíku. Například aryl znamená fenyl, 1-naftyl nebo 2-naftyl.
Termín „C7.i6aralkyl použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená C6 nebo C10 aryl vázaný na alkylovou skupinu, . 13 kde shora definovaný alkyl obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku. Mezi C7 16aralkyly patří například butylfenyl a 1-naftylmetyl.
Termín „amino-aralkyl, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená aminoskupiny substituované s C7-is3ralkylovou skupinu. Jde například o amino-aralkyl:
Termín „(nižší alkyl)amid“, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným radikálem znamená amidoskupinu mono-substituovanou Ci.6alkylem:
Termín „karboxy-(nižší)alkyl, použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená karboxylovou skupinu (COOH) vázanou na (nižší) alkylovou skupinu. Jde například o kyselinu máselnou.
Termín „heterocyklus nebo Heť použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená monovalentní zbytek odvozený odštěpením atomu vodíku z pěti-, šesti- nebo sedmičetného nasyceného nebo nenasyceného (včetně aromatického) heterocyklu obsahujícího od jednoho do čtyř heteroatomů, a to atomu dusíku, kyslíku a síry. Navíc výraz Heť, znamená shora definovaný- heterocyklus fúzovaný do jednoho nebo více jiných cyklů za vzniku heterocyklu nebo jiného dalšího cyklu. Příkladem vhodných heterocyklů jsou: pyrolidin, tetrahydrofuran, thiazolidin, pyrol, thiofen, diazepin, 1H-imidazol, 9 · ··»* · · φ . 14·:·. : ···· : ‘ .:.
izoxazol, thiazol, tetrazol, piperidin, 1,4-dioxan, 4-morfolin, pyridin, pyrimidin, thiazol-[4,5-b]-pyridin, chinolin nebo indol nebo následující heterocykly:
Termín „(nižší alkyl)-Het, zde uváděný, znamená heterocyklický zbytek vázaný na řetězec nebo větvenou alkylovou skupinu, kde shora definovaný alkyl obsahuje od 1 do 6 atomů uhlíku. Příkladem „(nižší alkyl)-Heť je:
Termín „farmaceuticky vhodný ester použitý samostatně nebo v kombinaci s jiným zbytkem, znamená estery sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém jakákoli karboxylová funkční skupina, ale především karboxy-terminál, je nahrazena alkoxykarbonylovou funkční skupinou:
, ve které R skupina esteru nezávisle znamená alkyl (metyl, etyl, n-propyl, t-butyl, n-butyl), alkoxyalkyl (metoxymetyl), alkoxyacyl (acetoxy mety I), aralkyl (benzyl), aryloxyalkyl (fenoxymetyl) nebo aryl (fenyl) eventuálně substituovaný halogenem, C1.4 alkylem nebo zbytkem C1.4 alkoxy. Ostatní vhodné farmaceuticky vhodné estery lze nalézt v publiklaci „Design of prodrugs“ Bundgaard, H. Ed. Elsevier (1985). Takové farmaceuticky vhodné estery jsou hydrolyzovány in vivo po injekční aplikaci savcům a přeměněny na kyselinu sloučeniny obecného vzorce 1.
S odkazem na shora popsané estery a pokud není uvedeno jinak, obsahuje každá alkylová skupina od jednoho do šestnácti atomů uhlíku, především od jednoho do šesti atomů uhlíku. Je vhodné, když každá arylová skupina přítomná v takových esterech obsahuje fenylovou skupinu.
Především jde o tyto estery: Ci.16alkylester, nesubstituovaný benzylester nebo benzylester substituovaný nejméně jedním atomem halogenu, Ci.6alkylem, zbytkem C^alkoxy, nitroskupinou nebo trifluormetylem.
Termín „farmaceuticky vhodné soli znamená soli odvozené od farmaceuticky vhodných zásad. Příkladem vhodných zásad jsou cholin, etanolamin a etylen-diamin. Podstata tohoto vynálezu se týká i sodných, draselných a vápenatých solí. Literatura: „Pharmaceutical salts“, S. M. Birge a spol., J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1-19).
Podstata současného vynálezu se především týká sloučeniny obecného vzorce I, kde B je především C6 nebo C10aryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Cj.ealkoxy, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupina eventuálně substituovanou Ci. 6 alkylem nebo • · · · · · · · · ·
-16 : ’
Β je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný C-i.salkylem, Ct.6alkoxy, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6alkylem nebo
B je především R4-SO2, kde R4 je především Ci.6alkyl, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo CiOaryl, C7.14 aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný Ci.6 alkylem nebo
B je především acylový derivát vzorce R4-C(O)kde R4 je především i/ Ct.10alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6 alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C-i.6alkylem;
ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Csgalkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.ealkylem;
iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C^alkylem;
v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou Cj.galkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou (^alkylem.
B je především a karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kde R4 je především i/ Ci.w alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C-|.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
-17,:’. : ' J.
ii/ C37cykloalkyl, C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cvealkoxyj-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Cvealkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl eventuálně substituovaný C^galkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C-|.6alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituovaný alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou.
B je především amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je především i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^salkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C-|.6alkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Ci.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^galkylem, iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.3 alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný (^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C-i.6 alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^ealkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem • · · · * · « c ·
- is-;. : ‘”Γ ’ J a
R5 je především atom vodíku nebo metyl.
B znamená především thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kde R4 je především i/ C^o alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ον6 alkanoylem nebo CV6alkoxy;
ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4-ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C-,.6 alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou.
B především znamená C6 nebo C10 aryl eventuálně substituovaný Cvealkylem, C^salkoxy, C^ealkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem, takže B je například:
nebo B je především heterocyklus eventuálně substituovaný
Ci.6alkylem, C^alkoxy, Cj.ealkanoylem, hydroxyskupinou, atomem • · · * * * ··«.
• · ♦ · ♦ ···· · · · β . ΐ9 -···· : *..· ; ·..· halogenu, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou C^ealkylem, takže B je například:
B je především R4-SO2, kde R4 je především C6 nebo C10 aryl, C^uaralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný C^alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, takže B je například B:
B je především acylový derivát vzorce RrCíO)-, kde R4 je především i/ Ci.10 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxy;
ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, karboxylem, (C^ alkoxy)karbonylem,
nebo R4 je především iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, takže B je například:
nebo R4 je především v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.galkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou, takže B je například:
B je především karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kde R4 je především i/ C^iq alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, C1>6 alkoxy nebo amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou, aminoskupinou eventuálně mono-nebo di-substituovanou C^alkylem;
ii) C3-7 cykloalkyl, C4.io alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C^ alkoxy)karbonylem,
amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^ealkylem, takže B je například:
nebo R4 je především iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný (^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou (^alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.ealkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono-substituovanou C^alkylem, takže B je například:
B je především amid vzorce R4-N (R5)-C(O)-, kde R4 je především i/ C-j_i0 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, Cj.galkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem,
-22- ·:·· : *··’ : ’··’ ··’· ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C1.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Cvealkylem a
R5 je atom vodíku nebo metyl, takže B je například:
nebo R4 je především iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná C^aalkylem, takže B je například:
nebo R4 je především iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Cvgalkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6 alkylem nebo v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.galkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou, takže B je například:
B je především thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kde R4 je především i/C^alkyl nebo ii/ C3.-cykloalkyl, takže B je například:
Velmi výhodné je, když B znamená amid vzorce R4-NH-C(O)-, kde R4 je především 1/ C^oalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, (^alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou C^alkylem, ii/ C3-7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cvealkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^alkylem,
nebo R4 je především iv/ C6 nebo CiOaryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C^ealkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou, takže B je například:
o
Preferujeme, když B je terc.-butoxykarbonyl (Boc) nebo
Preferujeme, když Y je atom vodíku nebo metyl. Nejvíce preferujeme, když Y je atom vodíku.
Preferujeme, když R3 je Ci.g alkyl, C3.7 cykloalkyl nebo C^ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, Ci.ealkoxy, Ci-6 thioalkylem, acetamidovou skupinou, C6 nebo C10arylem nebo C7.i6 aralkylem, takže R3 je například:
-25- ,:··
Preferujeme, když R3 je vedlejší řetězec terc.-butylglycinu (Tbg) , lie, Val, Chg nebo
Nejvíce preferujeme, když R3 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val.
Podstata současného vynálezu se týká sloučeniny vzorce I, kde preferujeme, když
R2 je S-R20 nebo O-R20 , kde R20 je především C6 nebo C10aryl, C7.16 aralkyl, heterocyklus nebo -CH2-Het, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R21, kde R21 je Ci.6alkyl, Ci.ealkoxy, nižší thioalkyl, amino skupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná Cvealkylem, C6 nebo C10arylem, C7.16 aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-heterocyklem, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina, C6nebo C10aryl, C7. 16aralkyl, nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22.
Preferujeme, když R21 je Ci.galkyl, Ci.ealkoxy, aminoskupina, aminoskupina, di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina, C6 nebo C10aryl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný pomocí R22·
Preferujeme, když R22 ίθ Ci.ealkyl, Ci.salkoxy, aminoskupina, mono- nebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid,
- 26 - .....
sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus.
Především preferujeme, když R22 je C^alkyl, C-|.6 alkoxy, halogen, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina nebo heterocyklus.
Nejvíce preferujeme, když R22 je metyl, etyl, izopropyl, terč.butyl, alkyl, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina nebo (nižší alkyl) 2-thiazol.
Preferujeme, když R2 je jedna z následujících skupin:
Preferujeme, když R2 je 1-nafty Imetoxy-, 2-naftylmetoxy-, benzyloxy-, 1-naftyloxy-, 2-naftyloxy- nebo chinolinoxy- nesubstituovaný, mono- nebo di-substituovaný R2iNejvíce preferujeme, když R2 je 1-naftyImetoxy- nebo chinolinoxy, nebo di-substituovaný R21 (shora definovaný), nesubstituovaný, monotakže R2 je například:
Nejvíce preferujeme, když R2 je:
Preferujeme, když R2ia je Cv6alkyl (izopropyl, terč.butyl nebo cyklohexyl), C^alkoxy (metoxy) a dále:
nižší thioalkyl:
halogen (chlór), aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Cj.ealkylem nebo C6 nebo CiOaryl, takže R2iAje například dimetylamino, Ph-N(Me)-, dále nesubstituovaný C@ nebo C-joaryl, C7.16 arylalkyl (feny!) nebo p^ nebo R2ia je především heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Ci.6alkyl, Ci.6 alkoxy, aminoskupina eventuálně mononebo di- substituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina nebo heterocyklus,
Nejvíce preferujeme, když R2ia je C6, C10aryl nebo Het, vždy eventuálně substituovaný R22, takže R21Aje například:
Nejvíce preferujeme, když R2 je:
-29- .:.. : : ·..’ .:.
kde R22a je především Ci_6 alkyl (metyl), C^e alkoxy (metoxy) nebo halogen (chlór),
R22B je především C^alkyl, aminoskupina eventuálně monosubstituovaná alkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou a
R2ib je C1.6 alkyl, Ct.6 alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl nebo karboxyl.
Především preferujeme, když R21B je Ci.6alkoxy nebo di-(nižší alkyl)aminoskupina.
Nejvíce preferujeme, když R21B je metoxy.
Vynález se především týká sloučeniny obecného vzorce I, kde Pí segment (cyklopropylový nebo cyklobutylový kruh) je substituovaný Rv Je vhodné, když R1 je atom vodíku, C1.3, C3.5cykloalkyl nebo C2.4alkenyl eventuálně substituovaný halogenem.
Preferujeme, když R1 je etyl, vinyl, cyklopropyl, 1- nebo 2-brom-etyl nebo 1- nebo 2-brom-vinyl.
Nejvíce preferujeme, když R! je vinyl.
-30 Pokud Ri není atom vodíku, a pak P1 je především cyklopropylový kruh vzorce:
kde Ci a C2 znamenají asymetrické atomy uhlíku v pozicích 1 a 2 cyklopropylového kruhu. Ikdyž nevylučujeme přítomnost ostatních možných center asymetrie v jiných segmentech sloučeniny obecného vzorce I, přítomnost těchto dvou center asymetrie způsobuje, že sloučeniny obecného vzorce I mohou existovat jako racemické směsi diastereoizomerů. Jak je následně popsáno v příkladech provedení vynálezu, tyto racemické směsi se připraví, a pak se rozdělí do jednotlivých optických izomerů nebo lze tyto optické izomery připravit chirální syntézou.
Sloučenina obecného vzorce I se může vyskytovat jako racemická směs diastereoizomerů na uhlíku 1, kde Ri na uhlíku 2 je orientováno do syn pozice vzhledem ke karbonylu na pozici 1, a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
• · · · » · · ·
- 31 - .............
nebo sloučenina obecného vzorce I, může být racemickou směsí diastereoizomerů, kde Rf na uhlíku 2 je orientováno do anti pozice ke karbonylu na uhlíku 1, a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
Racemické směsi lze separovat na individuální optické izomery.
Nejzajímavější vlastnost současného vynálezu spočívá v prostorovém uspořádání P1 segmentu a v adici R1 substituentu na atomu uhlíku 2. Podstata vynálezu se týká konfigurace asymetrického atomu uhlíku na pozici 1. Preferovanou podstatou vynálezu je sloučenina podle vzorce I, kde Ri není atom vodíku a asymetrický atom uhlíku na pozici 1 má R konfiguraci.
-32- — ·
Přítomnost substituenta Rt na uhlíku C2 zvyšuje účinnost sloučeniny, pokud C1 je pak v R konfiguraci. Například sloučeniny 901 (1R,2S) a 203 (1R,2R) mají účinnost 25 a 82 nM, nesubstituovaná cyklopropylová sloučenina 111 má účinnost 475 nM.
Pokud atom uhlíku v pozici 1 má R konfiguraci (např. sloučenina 901 a 203), pak inhibice proteázy NS3 viru HCV je dále zvýšena pozicí substituenta Ri (alkylu nebo alkylenu) na uhlíku 2 cyklopropylového kruhu, tzn. že sloučenina, kde R-j je syn ke karboxylové skupině, má vyšší účinnost (25nM) než v případě anti enantiomeru (82nM). Z porovnání účinnosti sloučenin 801 (1R, 2S), která je 6 nM a jejího odpovídajícího (1S.2S) izomeru, jehož účinnost je vyšší než 10μΜ, vyplývá, že izomer (1R,2S) je 1500x účinnější než izomer (1 S,2S)H
Nejvíce preferovanou sloučeninou podle současného vynálezu je optický izomer s Rí substituentem a karbonylem v orientaci syn v následující absolutní konfiguraci:
V případě, že například R1 je etyl, pak asymetrické atomy uhlíky pozicích 1 a 2 mají R,R konfiguraci.
.33 - -’·· : ’·.· : *··* ···
Podstata současného vynálezu se týká sloučenihy obecného vzorce I, kde B je především C6 nebo C-toaryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.ealkylem, Ci.6alkoxy, Ci.galkanoyl, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6 alkylem nebo je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Ci.galkoxy, Ci.galkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6alkylem nebo
B je R4-SO2, kde R4 je především amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo CiOaryl, C7.14 aralkyl nebo heterocyklus, všechny eventuálně substituované Ci.6 alkylem nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(O)kde R4 je i/ C^oalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo C^alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou Ci.6alkylem, ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkylcyklo-alkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (C1.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C-|.6alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituované Ci_6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.galkylem,
-34substituované Ct.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou Cvealkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cvealkylem nebo
B je karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kde R4 je i/ Ci.io alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^ealkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, ii/ C3.7cykloalkyl, C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituované karboxylem, (Ci.6alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovaná (^alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.i6aralkyl eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituované C^alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo
B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je i/ alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, 6alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou Ci.6alkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Ci.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^alkylem;
Hi) aminoskupina eventuálně mono- nebo di-35 substituovaná C1.3 alkylem;
iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci-6 alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou 0^6 alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem a
R5 je především atom vodíku nebo metyl nebo
B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kde R4 je i/ C^o alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6 alkanoylem nebo C^alkoxy;
ii/ Ca^cykloalkyl nebo C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cve alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou,
Y je atom vodíku nebo metyl, r3 je C^s alkyl, C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituované hydroxyskupinou, C^ealkoxy, Cvethioalkylem, acetamidem, C6 nebo C10arylem nebo C7. i6 aralkylem,
R2 je S-R2o nebo O-R20 >
kde R20 je především Ce nebo C10 aryl, Cy.iearalkyl, Het nebo
-CH2-Het, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2i, kde R2i je C^alkyl, Ci.6alkoxy, nižší thioalkyl, aminoskupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.galkylem, Cg nebo Cwarylem, C7.igaralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het, dále nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina, Cg nebo Cwaryl, C7-16 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocykius eventuálně substituovaný pomocí R22, kde
R22 je C^alkyl, C3.7cykloalkyl, C^alkoxy, aminoskupina, mono- nebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus nebo
R2 je jedna z následujících skupin:
R2 je 1-naftylmetoxy-, 2-naftylmetoxy-, benzyloxy-, 1-naftyloxy-, 2naftyloxy- nebo chinolinoxy- nesubstituovaný, mono- nebo disubstituovaný R2i ,
P1 segment je cyklopropylový nebo cyklobutylový kruh, oba eventuálně substituované R^ kde
R1 je atom vodíku, Ci.3alkyl, C3.5cykloalkyl nebo C2-4alkenyl eventuálně substituované halogenem a zároveň Ri na atomu uhlíku v pozici 2 je syn vzhledem ke karbonylu v pozici 1:
• · ·» *» * «♦ • · · · ·*»···· ** • · » · » · ·-
-37 - .............
Podstata současného vynálezu se týká sloučeniny obecného vzorce I, kde B je především C6 nebo C10aryl, eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Ci.6alkoxy, Cvealkanoyl, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6 alkylem nebo
B je heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Ci.6alkoxy, 6alkanoylem, hydroxyskupinou, halogenem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C^galkylem nebo
B je R4-SO2, kde R4 je C6 nebo C10aryl, C7.14 aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný Cve alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl) amidoskupina nebo
B je především acylový derivát vzorce R4-C(O)-, kde R4 je i/ Ci-iOalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxyskupinou nebo ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.ioalkylcykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci.6alkoxy)-karbonylem nebo iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7-1 6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, v/ heterocyklus eventuálně substituovaný
Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou nebo
B je karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kde Ri je i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ct.salkylem, • * · » * ·» * « · · t H C * * < · * · U * _ 38 - ** * ** * ·· ·»<
ii/ C3.7cykloalkyl, C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C-i.6alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7-i6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.ealkylem, hydroxyskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Cvealkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně mono-substituovanou (^alkylem nebo
B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je i/ alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Cvealkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4-ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Ci.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^ealkylem,
Hi) aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Cvs alkylem, iv/ C6 nebo CiOaryl nebo C7.i6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou, nebo amidoskupinou eventuálně substituovanou Ci-6 alkylem nebo v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.ealkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou a
R5 je atom vodíku nebo metyl nebo • · · · * “ »* ·’ • · · “ *» * · · · · * ·· et · · η· • · · · * «t«>
····· ·· · » · »«·
-39 Β je thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kde R4 je i/ Ci.10 alkyl nebo ii/ C3.7cykloalkyl nebo
B je amid vzorce R4-NH-C(O)-, kde R4 je i/ Ci.10 alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C-|.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem;
ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C-|.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^galkylem, iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou,
Y je atom vodíku nebo metyl,
R3 je vedlejší řetězec terc-butylglycinu (Tbg), lie, Val, Chg nebo:
▼ nebo T r2 je 1-naftyImetoxy nebo chinolinoxy nesubstituovaný, mono- nebo di- substituovaný R21 (shora uvedený) nebo
R2 je:
.40- ·:·· · ’··’ : .:.
, kde R2ia je C^alkyl, Ci.6alkoxy, C6, C10aryl nebo heterocyklus, nižší thioalkyl, halogen, aminoskupina eventuálně monosubstituovaná Cvsalkylem, nebo C6 nebo C10 aryl, C7.16 arylalkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22 >
kde R22 je C^alkyl, Ci_6 alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci.6 alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus,
P1 je cyklopropylový kruh, kde atom v pozici 1 má R konfiguraci,
a R1 je etyl, vinyl, cyklopropyl, 1- nebo 2-brom-etyl nebo 1- nebo 2 brom-vinyl.
Podstata současného vynálezu se týká sloučenin obecného vzorce I, kde B je terc-butoxykarbonyl (Boc) nebo
R3 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val;
R2 je:
nebo . 41 - : * .:.
kde R22a je Ci-6 alkyl (metyl), alkoxy (metoxy) nebo halogen (chlór), r22B je C1l6 alkyl, aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Ci-6 alkylem, amidoskupina nebo (nižší alkyl)amid a
R21B je C^alkyl, C^alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl nebo karboxyl a
PI je:
Podstatou současného vynálezu je každá sloučenina obecného vzorce I, která je uvedená v tabulkách 1—10.
Podstatou vynálezu je farmaceutický přípravek, který obsahuje další anti-HCV činidla. Příkladem takových látek jsou a- nebo βinterferon, ribavirin a amantadin.
Podstatou současného vynálezu je farmaceutický přípravek podle současného vynálezu, který také obsahuje jiné inhibitory HCV proteázy.
Další podstatou současného vynálezu je farmaceutický přípravek podle současného vynálezu, který obsahuje jiná inhibiční činidla zasahující jiným způsobem do biologických pochodů viru HCV, včetně například helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES.
• · · · · · · · • · ·· ······· *
-42- ,:·· : : ’··’ ···
Farmaceutický přípravek podle současného vynálezu lze podat orálně, parenterálně nebo cestou implantovaného zásobníku. Preferujeme podání orální nebo injekční. Součástí farmaceutického přípravku podle současného vynálezu mohou být obvyklé netoxické farmaceuticky vhodné nosiče, pomocné látky a jiné přísady. Ke zvýšení stability některých sloučenin nebo jejich lékových forem, je v některých případech nutná úprava pH přípravku přidáním farmaceuticky vhodných kyselin, zásad nebo pufrů.
Jako parenterální podání označujeme podání subkutánní, intrakutánní, intravenózní, intramuskulární, intra-artikulární, intrasynoviální, intrasternální, intrathékální, injekční aplikace do leze nebo infuzní formou.
Jednou z vhodných forem farmaceutického přípravku podle současného vynálezu je sterilní injekční přípravek, respektive sterilní injekční přípravek ve formě vodné nebo olejová suspenze. Tuto suspenzi lze připravit obecně známými postupy za použití vhodných disperzních činidel nebo smáčedel (Tween 80) a suspenzních činidel.
Farmaceutický přípravek podle současného vynálezu lze orálně podat ve formě kapslí, tablet, vodných suspenzí a roztoků. Tablety pro orální podání obsahují nosiče obecně používané pro orální podání, včetně laktózy a kukuřičného škrobu. Obvykle se přidají i lubrikační činidla (stearát hořečnatý). Při výrobě kapslí pro orální podání se použijí ředidla (laktóza) a sušený kukuřičný škrob. V případě vodných suspenzí podávaných orálně se účinná látka sloučí s emulzifikačnimi a suspenzními činidly. Do přípravku lze přidat i určitá sladidla a/nebo látky pro úpravu chuti a/nebo látky pro úpravu barvy.
Ostatní vhodné přísady a nosiče pro přípravu farmaceutického přípravku podle současného vynálezu jsou uvedeny ve farmaceutické literatuře: Remington's Pharmaceutical Sciences, The Science and • · · ··· · · · w • · ·· ······· · « .43. ···· ·· *..· : ·..· .:.
Practice of Pharmacy, 19th Ed. Mack Publishing Company, Easton, Penn, (1995).
V případě použití sloučenin podle současného vynálezu jako inhibitorů proteázy HCV k prevenci a k léčbě onemocnění způsobených virem HCV, pak je dávkování v rozmezí od přibližně 0,01 do přibližně 100 mg/kg tělesné hmotnosti a den, především v rozmezí od přibližně 0,5 do přibližně 75 mg/kg tělesné hmotnosti a den. Farmaceutické přípravky podle současného vynálezu se podávají jedenkrát až pětkrát denně nebo eventuálně jako kontinuální infuze. Tuto formu podání lze použít při léčbě chronického nebo akutního onemocnění. Velikost jediné dávky lékové formy, která obsahuje účinnou složky eventuálně s materiálem nosiče, se liší podle stavu pacienta a způsobu podání léčiva. Obvykle obsahuje od přibližně 5%hmotnostních do přibližně 95%hmotnostních účinné složky. Preferujeme, když tyto přípravky obsahují od přibližně 20% do přibližně 80% účinné sloučeniny.
Velikost jednotlivých dávek účinné sloučeniny ovlivňuje mnoho v oboru známých okolností. Dávkování a režimy dávkování se u jednotlivých pacientů liší podle věku, tělesné hmotnosti, celkového zdravotního stavu, pohlaví, dietních návyků, době podání a míře vylučování. Závisí také na použité lékové kombinaci, závažnosti a průběhu infekčního onemocnění, a dále na dispozici pacienta k infekčním onemocněním a také na terapeutické zkušenosti lékaře.
Terapie obvykle začíná podáváním malých dávek, podstatně nižších než je optimální dávka peptidu. Dávkování se pak postupně pomalu zvyšuje přidáváním malých množství účinné látky do nastavení optimálního dávkování s požadovaným účinkem. Je důležité, aby dávkování bylo stanoveno tak, aby nezpůsobovalo pacientovi vážné a kvalitu života omezující vedlejší účinky.
Pokud přípravek podle současného vynálezu obsahuje kombinaci sloučeniny obecného vzorce I a jedno nebo více dalších terapeutických
- 44* ** · »9 ·· • * ♦ « » • · · « ť · nebo profylaktických činidel, pak by jednotlivá dávka sloučeniny podle současného vynálezu spolu s dalším činidlem měla být přítomna v množství od 10 do 100%. Preferujeme množství účinné látky a dalších terapeutických nebo profylaktických činidel podávaných jako monoterapeutikum v rozmezí od přibližně 10 do 80%.
Pokud se sloučeniny podle současného vynálezu nebo jejich farmaceuticky vhodné soli podávají společně s farmaceuticky vhodným nosičem k inhibici proteáz NS3 viru HCV nebo k terapii nebo prevenci infekce virem HCV, pak lze vytvořený přípravek podávat in vivo savcům (člověku). Tuto terapii lze provést podáním sloučeniny podle současného vynálezu v kombinaci s činidly, mezi které také patří, imunomodulační činidla (α-, β-, nebo γ-interferony), jiná antivirová činidla (ribavirin, amantadin), další inhibitory proteáz NS3 viru HCV, inhibitory dalších životně důležitých biologických procesů viru HCV (inhibitory helikázy, polymerázy, metaloproteázy, IRES nebo kombinace těchto činidel. Tyto další terapeutická a profylaktická činidla lze sloučit se sloučeninami podle současného vynálezu za vzniku jediné úcmne dávky. Tyto další složky lze také savcům podat odděleně jako součást mnohočetných jednotlivých dávek.
Podstata současného vynálezu se týká způsobu inhibice NS3 proteázy viru HVC u savců podáním sloučeniny obecného vzorce I, substituované podle shora uvedených definic.
Preferovaná podstata současného vynálezu se týká způsobu snížení proteázové aktivity NS3 viru HCV u savců. Pokud farmaceutický přípravek obsahuje pouze sloučeninu podle současného vynálezu jako účinnou složku, pak tento způsob navíc zahrnuje následné podání imunomodulačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteáz nebo inhibitoru jiných životně důležitých funkcí viru HCV (inhibitoru helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES). Tyto činidla lze podat savcům před, současně nebo následně po podání přípravku podle současného vynálezu.
Jiná podstata současného vynálezu se týká inhibice virové replikace u savců. Tento postup je významný v terapii a prevenci infekčních onemocnění způsobených virem HCV. Pokud farmaceutický přípravek obsahuje pouze sloučeninu podle současného vynálezu jako účinnou složku, pak tento způsob navíc zahrnuje následné podání imunomodulačních činidel, antivirových činidel, inhibitorů HCV proteaz nebo inhibitoru jiných životně důležitých funkcí viru HCV (inhibitoru helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES). Tyto činidla lze podat savcům před, současně nebo následně po podání přípravku podle současného vynálezu.
Sloučeniny podle současného vynálezu lze použít jako laboratorní reakční činidla. Sloučeniny podle současného vynálezu lze také použit k terapii nebo prevenci virové kontaminace materiálu, a tak snížit riziko virové infekce laboratorního nebo lékařského personálu, pacientů nebo osob, které jsou vystaveny styku s infekčním materiálem (krev, tkané, chirurgické a laboratorní nástroje a prádlo, zásobníky krve a transfúzních zařízení).
Sloučeniny podle současného vynálezu lze použít jako reakční činidla pro výzkum. Sloučeniny podle současného vynálezu lze také použít jako pozitivní kontrolu při stanoveních za použití náhradních buněk (surrogate cell-based assay) nebo při replikačních in vitro nebo in vivo stanoveních.
Přehled postupu přípravy
Sloučeniny podle současného vynálezu se připraví podle postupu popsaného schématem I (kde CPG znamená ochrannou skupinu karboxylu a APG znamená ochrannou skupinu aminoskupiny):
• · *
-46- ·:·· ·' *·.· .
Schéma i
P2-P1-CPG + APG-P3 ______c
APG-P3-P2-P1-CPG
B-P3-P2-P1
Zbytky P1, P2 a P3 lze navázat obecně známými technikami pro vazbu peptidů. Skupiny P1, P2 a P3 lze společně spojit jakýmkoli způsobem tak, aby výsledné peptidy odpovídaly sloučenině uvedeného vzorce I. Například, skupinu P3 lze navázat ke P2-P1 nebo P1 navázat na P3-P2.
Peptidy se obvykle prodlouží odštěpením ochranné skupiny z aamino skupiny N-konce peptidu a následnou vazbou na nechráněnou karboxylovou skupinu aminokyseliny s chráněným N-koncem, a to peptidovou vazbou popsaným způsobem. Tato deprotekce a následná vazba se opakuje do vzniku požadované sekvence. Vazebná reakce se provede metodou postupné syntézy (schéma I) nebo kondenzací fragmentů (o dvou nebo několika aminokyselinách) nebo kombinací obou metod. Peptidy lze připravit syntézou peptidů na pevné fázi podle * · ·· · · K
- 47 - ............
popsaného postupu Merrifielda uveřejněného v J. Am. Chem., Soc. (1963), 85, 2149-2154.
Vazbu dvou aminokyselin, aminokyseliny a peptidu nebo dvou zbytků peptidů lze provést standartními vazebnými postupy - azidovou metodou, metodou směsných anhydridu kyseliny karbonylové a karboxylové (izobutyl-chlormravenčan), metodou karbodiimidovou (dicyklohexyl-karbodiimid, diizopropyl-karbodiimid nebo ve vodě rozpustný karbodiimid), metodou aktivovaného esteru (p-nitrofenyl-ester, imido-ester kyseliny N-hydroxysukcinové), K-metodou Woodwardým činidlem, metodou karbonyl-diimidazolovou, metodou s činidly fosforu nebo oxidačně-redukčními metodami. Některé uvedené metody (především karbodiimidovou metodu) lze pozitivně ovlivnit přidáním 1hydroxy-benzotriazolu. Uvedené vazebné reakce lze provést bud v roztoku (kapalná fáze) nebo na pevné fázi.
Vazebná reakce, která vede ke vzniku amidové vazby, zahrnuje vazbu volného karboxylu jednoho reakčního činidla svolnou aminoskupinou druhého reakčního činidla za přítomnosti vazebného činidla. Popisem vazebných činidel se zabývá učebnice chemie peptidů (M. Bodanszky, Peptide Chemistry, druhé upravené vydání, SpnngerVerlag, Berlin, Germany, (1993)).
Příkladem vhodných vazebných činidel je N.N'-dicyklohexylkarbodiimid, 1-hydroxybenzotriazol za přítomnosti N.N'-dicyklohexylkarbodiimidu nebo N-etyl-N'-[(3-dimetylamino)-propyl]-karbodiimidu. Velmi praktická a použitelná jsou komerčně dostupná vazebná činidla (benzotriazol-1-yl-oxy)tris-(dimetylamino)-fosfonium-hexafluorfosfat, a to buď samostatný nebo za přítomnosti 1-hydroxybenzotnazolu. Jiným komerčně dostupným činidlem je 2- (1 H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'tetrametyl-uronium-tetrafluor-borát. Dalším komerčně dostupným činidlem je O-(7-azabenzotriazol-1 -yl)-N ,N ,N' ,N'-tetrametyluroniumhexafluorfosfát.
Vazebná reakce se provede v inertním rozpouštědle (dichlormetanu, acetnitrilu nebo dimetylformamidu). Do reakční směsi se v přebytku přidá terciární amin (diizopropyletylamin, N-metylmorfolin nebo N-metylpyrolidin) k pH reakční směsi přibližně 8. Teplota reakční směsi je v rozmezí 0°C a 50°C a reakční doba je v rozmezí 15 minut až 24 hodin .
Pokud se peptid připravuje metodou na pevné fázi, pak karboxylová skupina na C-konci je připevněna na nerozpustný nosič (obvykle polystyren). Tento nerozpustný nosič obsahuje skupinu, která vstoupí do reakce s karboxylovou skupinou za vzniku vazby, která je vůči elongaci stabilní, ale je později štěpena. Lze použít: chlor- nebo brom-metylovou pryskyřici, hydroxymetylovou pryskyřici, tritylovou pryskyřici a 2-metoxy-4-alkoxy-benzyl-alokonolovou pryskyřici.
Většina těchto pryskyřic sjiž inkorporovaným C-koncem aminokyseliny je na trhu dostupná. Aminokyseliny lze eventuálně inkorporovatdo pevné fáze obecně známými postupy (S.S Wang, J. Am. Chem. Soc, (1973), 95, 1328, E. Atherton, R. C. Shepard Solid-phase peptide synthesis, a practical approach IRL Press: Oxford, (1989), 131148.
Dalšími postupy syntézy peptidů se zabývají následující publikace: Stewart a Young Solid-Phase Peptide Synthesis, druhé vydání, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984), Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds., The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, sv. 1,2,3,5, a 9, Academic Press, New-York, (19801987), Bodansky a spoL, The Practice of Peptide Synthesis SpringerVerlag, New-York (1984).
Funkční skupiny jednotlivých aminokyselin vstupujících do vazebné reakce musí být chráněny, tak aby se zabránilo vzniku nežádoucích vazeb. Popisem ochranných skupin se zabývají publikace: Green - Protective Groups in Organic Chemistry, John Wiley & Sons, .· : : ::··· · · : : .49- ”* * *·* : ’··* ·:·
New York (1981) a
The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, sv. 3, Academic Press, New York (1981).
Karboxylové skupiny vázané na α-uhlíkový atom C-konce peptidu jsou obvykle chráněny estery (CPG), jejichž oddělením vznikne kyselina karboxylová. Vhodnými ochrannými skupinami jsou: 1) alkylestery (metylu, trimetylsilyletylu a t-butylu), 2) aralkylestery (benzylestery a estery substituovaného benzylu) nebo 3) estery, které lze štěpit mírným působením zásadou nebo mírným redukčním činidlem (trichloretylem a fenacyl-estery).
Aminoskupina vázaná na a uhlíkový atom každé aminokyseliny musí být pro uvedení do vazebné reakce na narůstajícím peptidovém řetězci chráněna ochrannou skupinou aminokyselin (APG). Lze použit jakoukoli v oboru známou ochrannou skupinu. Příkladem vhodných skupin jsou:
1) acylové skupiny (formyl, trifluoracetyl, ftalyl, a p-toluensulfonyl),
2) aromatické karbamátové skupiny (benzyloxykarbonylová skupina (Cbz nebo Z), substituované benzyloxykarbonylové skupiny a 9fluorfenyl-metyloxykarbonyl (Fmoc),
3) alifatické karbamátové skupiny (terc.-butyloxykarbonyl (Boc), etoxykarbonyl, diizopropyl-metoxykarbonyl a alyloxykarbonyl),
4) cyklické alkyl-karbamátové skupiny (cyklopentyl-oxykarbonyl a adamantyl-oxykarbonyl),
5) alkylové skupiny (trifenyl-metyl a benzyl),
6) trialkyl-silyl (trimetylsilyl) a
7) thiol obsahující skupiny (fenyl-thiokarbonyl a dithiasukcinoyl).
Preferovanou ochrannou skupinou aminoskupiny vázané na a uhlíkovém atomu aminokyseliny je buď Boc nebo Fmoc. Na trhu je pro syntézu peptidů k dispozici mnoho eventuálně chráněných derivátu aminokyselin.
Před uvedením do reakce s další aminokyselinou je nutné odštěpení ochranné skupiny z cc-aminoskupiny. Pokud je ochrannou skupinou Boc, pak k odštěpení ochranné skupiny lze zvolit čistou kyselinu trifluoroctovou nebo její roztok v dichlormetanu, dále kyselinu chlorovodíkovou v dioxanu nebo v etylacetátu. Vytvořená amoniová sůl se pak neutralizuje buď před vazebnou reakcí nebo in situ přidáním zásaditých roztoků (vodných roztoků pufrů, terciárních aminů v dichlormetanu, acetnitrilu nebo dimetylformamidu). Pokud se použije skupina Fmoc, pak činidlem volby je piperidin nebo substituovaný piperidin v dimetylformamidu, ale lze také zvolit některý sekundární amin. Odštěpení ochranných skupin se provede při teplotě v rozmezí od 0°C do teploty místnosti (RT), obvykle 20-22°C.
Každá funkční skupina vedlejšího řetězce aminokyseliny se během přípravy peptidu musí chránit shora uvedenými ochrannými skupinami. Výběr a použití vhodných ochranných skupin těchto funkčních skupin závisí na druhu aminokyseliny a přítomnosti jiných ochranných skupin v peptidu. Výběr ochranných skupin se řídí také tím, že se tyto skupiny nesmí odstranit během deprotekce a vazebných reakcí a-aminoskupin.
Pokud je Boc ochrannou skupinou α-aminoskupiny, pak jako ochrannou skupinu vedlejšího řetězce lze použít následující skupiny: ptoluen-sulfonylovou (tosylovou) skupinu lze použít k ochraně aminoskupiny vedlejšího řetězce lysinu a argininu. Acetamidometylovou, benzylovou nebo t-butylsulfonylovou skupinu lze použít k ochraně sulfidové skupiny vedlejšího řetězce cysteinu. Benzyl-(Bn)-étery jsou vhodné k ochraně hydroxys kup i ny vedlejšího řetězce šeřinu, threoninu nebo hydroxyprolinu. Benzylestery se používají k ochraně karboxyskupiny vedlejšího řetězce aspartové kyseliny a glutamové kyseliny.
-51 - :λ : ’’ ÍJ J.
Pokud jako ochranou skupinu α-aminoskupiny použijeme Fmoc, pak lze vedlejší řetězce aminokyselin chránit vazbou s ochrannými skupinami založenými na terc.-butylu. Pro lysin a arginin lze použít terc.-butyloxy-karbonyl (Boc), terc.-butyléter pro serin, threonin a hydroxyprolin a terc.butyl-ester pro kyseliny aspartovou a glutamovou. Trifenylmetylovou (tritylovou) skupinu lze použít k ochraně sulfidové skupiny vedlejšího řetězce cysteinu.
Po elongaci peptidů se všechny ochranné skupiny odstraní. Pokud jsme zvolili metodu syntézy peptidů v roztoku, pak se ochranné skupiny odštěpí sloučeninami typickými pro jednotlivé ochranné skupiny.
Pokud se peptidy připravují metodou syntézy na pevné fázi, pak je vytvořený peptid odštěpen z pryskyřice se současným odstraněním ochranných skupin. V případě použití ochranné terc.butyloxykarbonylové skupiny (Boc), pak preferovaným způsobem odštěpení peptidů z pryskyřice je působení bezvodým roztokem fluorovodíku obsahujícího přísady (dimetyl-sulfid, anizol, thioanizol nebo p-kresol) při teplotě 0°C. Odštěpení peptidů lze dosáhnout i jinými kyselými reakčními činidly (směsí trifluormetan-sulfonové kyseliny a kyseliny trifluoroctové). Při použití Fmoc ochranných skupin se skupina Fmoc na N-terminálu peptidů odštěpí činidly shora popsanými. Ostatní ochranné skupiny a peptidy se z pryskyřice odštěpí za použití roztoku kyseliny trifluoroctové a různých přísad (anizolu atd.).
Syntéza ochranné (capping) skupiny B
1.1) Pokud B znamená aryl, aralkyl, pak se arylované aminokyseliny připraví jednou z následujících tří metod:
a) Přímé nukleofilní nahrazení fluor-nitroskupiny arylu:
NO2 (a) (b)
Ϊ3
HjN^COOH
COOH
4-Fluor-3-nitro-benz-trifluorid (a) se při teplotě 80°C uvede do reakce s L-aminokyselinou (b) za přítomnosti zásady (uhličitanu draselného) za vzniku požadované N-aryl-aminokyseliny (c).
b) Vazebná reakce katalyzovaná mědí (podle Ma a spol., J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 12459-12467).
COOH (e)
(d)
H2N COOH (b)
Brom-4-fluor-benzen (d) se uvede do reakce s L-aminokyselinou (b) za přítomnosti zásady (uhličitanu draselného) a katalytického množství jodidu měďného při teplotě 90°C za vzniku požadované N-arylaminokyseliny (e) nebo
c) Nukleofilní nahrazení trifluoracetátu anilinem:
COOH
-53 Do reakce se uvede o-anisidin (f) s trifluoracetátem (g) za přítomnosti zásady (2,6-lutidinu) při teplotě 90°C za vzniku benzyl-esteru (h). Hydrogenaci za přítomnosti 10% katalyzátoru paladia na aktivním uhlí vznikne požadovaná N-aryl-aminokyselina (i).
1.2) Pokud B znamená amino-thiazolový derivát:
a) Fmoc-N=C=S η2ν-ρ3-{ρ2-ΡιΚ°ΟΜ6--*
Fmoc-NH-C(S)-HN-P3-[P2-P J-COOMe
b) DBU, DMF
Ó ~
R2
NH-C(S)-HN-P3-[P2-Pi]-COOMe
a) Fmoc-thiokyanát (připravený podle Kearney a spoL, 1998, J. Org. Chem, 63, 196) se uvede do reakce s chráněným zbytkem P3 nebo celým peptidem nebo peptidového segmentu za vzniku thiomočoviny.
b) Derivát thiomočoviny je uveden do reakce s vhodným bromketonem za vzniku odpovídajícího thiazolového derivátu.
1.3) Pokud B je R4-C(O)-, R4-S(O)2:
Chráněný P3 nebo celý peptid nebo peptidový segment se naváže na vhodný acyl-chlorid nebo sulfonyl-chlorid, které jsou bud na trhu dostupné nebo je jejich syntéza v oboru známá.
1.4) Pokud B je R4Q-C (O)- :
Chráněný P3, celý peptid nebo peptidový segment se naváže na vhodný chlormravenčan, který je buď na trhu dostupný nebo je jeho syntéza v oboru známá. Pro Boc-deriváty se používá (Boc) 2O. Například:
a) Na cyklobutanol se působí fosgenem za vzniku odpovídajícího chlormravenčanu.
b) Na chlormravenčan se působí požadovaným NH2-tripeptidem za přítomnosti zásady (trietylaminu) za vzniku cyklobutylkarbamátu.
1.5) Pokud B je R^N (R5)-C(O)-, nebo R4-NH-C(S)-, pak se na chráněný P3 nebo celý peptid nebo peptidový segment působí fosgenem, a následně aminem podle SynLett., únor 1995; (2); 142-144.
2. Syntéza P2 zbytků
2.1 Syntéza prekurzorú:
A) Syntéza haloaryl-metanových derivátů
Příprava halometyl-8-chinolinu lid se provede podle postupu K. N.
Campbella a spol., J. Amer. Chem. Soc, (1946), 68,1844.
SCHÉMA II
Kyselina 8-chinolin-karboxylová lla se přemění na odpovídající alkohol llc redukcí odpovídajícího acyl-halogenidu lib redukčním činidlem (lithium-aluminium-hydridem). Působením odpovídající halogenvodíkovou kyselinou vznikne požadovaný derivát lid. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 1.
B) Syntéza aryl-alkoholových derivátů:
2-fenyl-4-hydroxychinolinové deriváty lile se připraví podle Giardina a spoL. (J. Med. Chem, (1997), 40, 1794-1807).
SCHÉMA III
-56R22 & R2ib = alkyl, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, aminoskupina, nitroskupina.
Kondenzací benzoyl-acetamidu lila s vhodným anilinem lllb vznikne imin, který se cyklizuje působením kyseliny polyfosforečné za vzniku odpovídajícího 2-fenyl-4-hydroxychinoiinu lile. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 2.
Jiným způsobem přípravy je postup popsaný v příkladě 3: Benzylester Illa se kondenzuje odpovídajícím anilinem lllb za přítomnosti kyseliny nebo iminu získaného cyklizací zahříváním k teplotě 260-280°C za vzniku odpovídajícího 2-fenyl-4-hydroxychinolinu lile. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 3 (sloučenina 3e).
2.2 . Syntéza P2:
A) Syntéza 4-substituovaného prolinu, kde R2 je s uhlíkovým cyklem spojeno atomem uhlíku podle znázorněného prostorového uspořádání:
Sloučenina se připraví podle schématu IV a podle postupů J. Ezquerra a spol. (Tetrahedron, 1993, 38, 8665-8678) a C. Pedregal a spol. (Tetrahedron Lett, 1994, 35, 2053-2056).
Boc-pyroglutamová kyselina je chráněna za vzniku jejího benzylesteru. Působením silnou zásadou (diizopropylamidem lithným), a následným přidáním alkylačního činidla (Br-R20 nebo l-R20) se po redukci amidem a odštěpením esterové ochranné skupiny vytvoří požadovaná sloučenina IVe.
B) Syntéza O-substituovaného-4-(R)-hydroxyprolinu:
Boc
COOH ^O-R20 se provede různými způsoby následně popsanými:
1) Pokud je R20 aryl, heterocyklus, aralkyl nebo (nižší alkyl)heterocyklus, pak je postup přípravy popsán E. M. Smithem a spot. (J. Med. Chem. (1988), 31, 875-885). Na komerčně dostupný Boc-4(R)-hydroxyprolin se působí zásadou (hydridem sodným nebo terč.
• * * ; ’ · · * · -58- ..... ” : * ’* * butyloxidem draselným) a vytvořený alkoxid se uvede do reakce s halogen-R20 (Br-R20, l-R20, atd..) za vzniku požadovaných sloučenin. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 4,5 a 7.
2) Pokud R20 je aryl nebo heterocyklus, pak lze sloučeniny také připravit Mitsunobuvou reakcí (Mitsunobu 1981, Synthesis, leden, 1-28; Ráno a spol., 1995, Tet. Lett. 36 (22), 3779-3792; Krchňák a spol., 1995, Tet. Lett. 36 (5), 62193-6196; Richter a spol., (1994), Tet. Lett. 35 (27), 4705-4706). Na komerčně dostupný metylester Boc-4(S)hydroxyprolinu se působí vhodným aryl-alkoholem nebo thiolem za přítomnosti trifenylfosfinu a dietylazo-dikarboxylátu (DEAD). Vytvořený ester se hydrolyzuje na kyselinu. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 6 a 8.
SCHÉMA V
Ar-OH nebo Ar-SH
Va
Vb
Mitsunobuvu reakci lze provést na pevné fázi (Schéma V). Na desku s 96 prohlubněmi pro Model 396 syntetizátoru (advanced ChemTech) vybavené alikvoty pryskyřici vázající sloučeniny Va se přidají aryl-alkoholy nebo thioly a vhodná reakční činidla. Po inkubaci, se produkt Vb vázaný na pryskyřici promyje, suší a odštěpí z pryskyřice.
Reakcí podle Suzuki (Miyaura a spol., 1981, Synth. Comm. 11,513, Sato a spol., 1989, Chern. Lett, 1405, Watanabe a spol., 1992, Synlett, 207, Takayuki a spol., 1993, J. Org. Chern. 58,2201, Frenette a
-59spol., 1994, Tet. Lett. 35 (49), 9177-9180, Guiles a spol., (1996), J. Org. Chern. 61, 5169-5171) lze k arylovému substituentu vázat další funkční skupiny.
3. Syntéza skupin P1
3.1 Syntéza 4 možných izomerů 2-substituovaných 1aminocyklopropyl-karboxylových kyselin
Syntéza se provede podle schématu VI.
SCHÉMA VI po,c^^co2p
Via
Vid
' Vle
R, je „syn“ k esteru
a) Di-chráněný malonát Via a 1,2-dihaloalkan Vlb nebo cyklický sulfát Vic (K. Burgess a Chun-Yen KE, Synthesis, 1996, 14631467) se uvedou do reakce při zásaditém pH za vzniku diesteru Vid.
b) Místně selektivní hydrolýzou méně blokovaného esteru vznikne kyselina Vle.
c) Reakcí podle Curtise se kyselina Vle uspořádá za vzniku racemické směsi derivátů 1 -aminocyklopropyl-karboxylové kyseliny Vlf, kde R1 je syn vzhledem ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 9.
d) e) Alternativním způsobem přípravy je vytvoření selektivního esteru z kyseliny Vle za použití vhodného halogenidu (P*CI) nebo alkoholu (P*OH) za vzniku diesteru Vlg, kde P* ester se odštěpí selektivní hydrolýzou. Hydrolýzou P esteru vznikne kyselina Vlh.
f) Uspořádáním podle Curtiuse kyseliny Vlh se vytvoří racemická směs derivátů 1-aminocyklopropyl-karboxylové kyseliny Vli, kde R1 je v anti ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 14.
- 61 Alternativní syntéza přípravy derivátů Vlf, kde Ri je vinyl syn ke karboxylové skupině, je popsána dále.
SCHÉMA VII
Na komerčně dostupný nebo snadno vyrobitelný imin Vila se za přítomnosti zásady působí 1,4-dihalobutenem Vllb. Po hydrolýze vytvořeného iminu Vile vznikne Vild s alylovým substituentem v poloze syn ke karboxylové skupině. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladech 15 a 19.
Rozdělení shora uvedených směsí enantiomerů s asymetrickým atomem uhlíku v poloze 1 (Vie a Vild) lze provést.
1) Enzymatickou separací (příklady 13, 17 a 20),
2) krystalizací s chirální kyselinou (příklad 18) nebo
3) chemickou derivatizací (příklad 10).
Po rozdělení lze absolutní stereochemii izomerů určit postupem podle příkladu 11.
Rozdělení a následné určení absolutní stereochemie izomeru, kde substituent na atomu uhlíku v poloze 2 je v poloze anti ke karboxylové
- 62 skupině (Vli), lze provést způsobem uvedeným pro směsi enantiomerů na asymetrickém uhlíku v poloze 1.
3.2 Syntéza 1-amino-cyklobutyl-karboxylové kyseliny
Syntéza 1,1 -amino-cyklobutan-karboxylové kyseliny se provede podle Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985), 15 (4), 267-72.
SCHÉMA Vlil
Vlila
A
Vlllb
X = halogen
Vllid hydrochloric!
Na sloučeninu Vlila se působí zásadou za přítomnosti Vlllb za vzniku odpovídajícího cyklobutylového derivátu Vlllc. Hydrolýzou izokyanátových a esterových skupin Vlllc za přítomnosti kyseliny (HCI) vznikne hydrochiorid 1-amino-cyklobutyl-karboxylové kyseliny Vllld. Karboxylová kyselin se následně esterifikuje za přítomnosti metanolu v chlorovodíku. Podrobný popis této podstaty vynálezu je uveden v příkladě 21.
3.3 Syntéza 2-substituované 1-amino-cyklobutyl-karboxylové kyseliny
-63SCHÉMA IX
a) Chráněný glycin-esterový derivát (imin IXa) se alkyluje homoalylickým elektrofilem IXb za použití vhodné zásady (hydrid, hydroxid nebo alkoxid kovu). Vhodnými odštěpitelnými skupinami v IXb jsou halogeny (X = atom chlóru, brómu nebo jódu) nebo sulfonát-estery (mesylat, tosylát nebo trifluroacetát). Funkční skupina alylického alkoholu v IXb je chráněna hydroxylovými ochrannými skupinami ( acetát, silyl, acetaly).
b) Druhým krokem přípravy je odstranění ochranné skupiny z hydroxylu monoalkylovaného derivátu IXc a přeměna na vhodnou elektrofilní funkční skupinu X (podle shora popsaného postupu pro sloučeninu IXb).
c) Cyklizace IXd na cyklobutanový derivát IXe se provede působením zásadou (hydridy, alkoxidy kovu), a nasledne hydrolýzou za použití vodného roztoku minerální kyseliny a neutralizací mírnou zásadou. Následně lze syn a antí-izomery IXe oddělit rychlou chromatografií.
d) Eventuálně se dvojná vazba v IXe hydrogenuje za standardních podmínek za vzniku odpovídajícího nasyceného derivátu IXf.
- 64Další podstatou vynálezu je postup přípravy peptidového analoga obecného vzorce I, kde P1 je substituovaný zbytek aminocyklopropylkarboxylové kyseliny, který má tyto části.
• vazebná reakce APG-P3-P2 nebo APG-P2 • s P1 meziproduktem vzorce:
,kde Ri je C,.6alkyl. cykloalkyl nebo C2.6alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem. CPG je ochranná skupina karboxylové skupiny aminokyseliny a APG znamená ochrannou skupinu aminoskupiny a P3 a P2 jsou shora popsány.
Podstata vynálezu se týká postupu přípravy: 1) peptidoveho analoga inhibitoru serinové proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru HOV NS3 proteázy, který zahrnuje:
• vazebnou reakci (vhodně chráněné) aminokyseliny, peptidu Inebo peptidového fragmentu • s Pí meziproduktem vzorce:
- 65 ,kde Ri je C^alkyl, C3.7cykloalkyl nebo C2.6alkenyl, vždy eventuálně substituovaný halogenem a CPG je ochranná skupina karboxyskupiny.
Podstata vynálezu se týká postupu přípravy: 1) peptidového analoga inhibitoru proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy, který zahrnuje:
• vazebnou reakci (vhodně chráněné) aminokyseliny, peptidu nebo peptidového fragmentu • s meziproduktem vzorce:
,kde CPG je ochranná skupiny karboxylu.
Podstatou vynálezu je použití Pí meziproduktu vzorce:
,kde Ri je C^galkyl, cykloaikyl nebo C2.galkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem, CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny
-66pro přípravu 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy.
Podstatou vynálezu je použití P1 meziproduktu vzorce:
H2N r
O-CPG ,kde CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny, pro přípravu 1) peptidového analoga inhibitoru proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy.
Podstatou vynálezu je použiti Pí meziproduktu vzorce:
R nebo S
O-CPG H N
O-CPG ,kde Ri je Ci.salkyl, cykloalkyl nebo C2.6alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem, CPG znamená ochrannou skupinu karboxyskupiny pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I.
- 67 Podstata současného vynálezu se týká použití prolinového analoga vzorce:
kde R2ia je C^alkyl, Cvealkoxy, nižší thioalkyl, halogen, aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Ci.6alkylem, dale C6, C10 aryl, C7.16 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Cv6 alkyl, Cj-ealkoxy, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Cve alkylem nebo Het, a kde R21b je C-,_6alkyl, C^alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl) amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetylová nebo karboxylová skupina v přípravě: 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo
2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy nebo
3) peptidového analoga shora uvedeného obecného vzorce I.
Příklady provedení vynálezu
Sloučeniny podle současného vynálezu jsou podrobněji popsaný následnými nelimitujícími příklady.
Teplota je uvedena ve stupních Celsia. Roztoky jsou vyjádřeny ve hmotnostně objemových procentech, poměry roztoků jsou vyjádřeny ve
- 68 - —’ vztahu objemů, pokud není uvedeno jinak. Hodnoty spektra NMR se odečítají na spektrometru Bruker 400 MHz, hodnoty chemického posunu se udávají v částicích na milion (ppm). Rychlá chromatografie se provede na silikagelu (SiO2) podle Stiliovy techniky rychlé chromatografie (W. C. Still a spoi., J. Org. Chem., 1978, 43, 2923).
Použité zkratky:
Bn benzyl
Boc terc.-butyloxykarbonyl {Me3COC(O)}
BSA hovězí sérový albumin
CHAPS 3-[(3-cholamido-propyl)dimetyl-amonio]-1 - -propan-sulfonát
DBU 1,8-diazabicyklo-[5,4,0]-undec-7-en
CH2CI2 = DCM metylen-chiorid
DEAD dietylazodikarboxylát
DIAD diizopropyl-azodikarboxylát
DIEA diizopropyletylamin
DIPEA diizopropyletylamin
DMAP dimetylaminopyridin
DCC 1,3-dicyklohexyl-karbodiimid
DME 1,2-dimetyl-oxyetan
DMF dimetylformamid
DMSO dimetylsulfoxid
DTT dithiothreitol nebo threo-1,4-dimerkapto-2,3butandiol
DPPA difenylfosforyl-azid
- 69 --··
EDTA etylen-diamin-tetraoctová kyselina
Et etyl
EtOH etanol
EtOAc etylacetát
Et2O dietyléter
HATU [0-7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-hexafluorfosfát]
HPLC kapalinová chromatografie s vysokou rozlišovací schopností
MS hmotnostní spektrometrie
MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie MALDI-TOF
FAB bombardování rychlými atomy
LAH lithium-aluminium-hydrid
Me metyl
MeOH metanol
MES (2-{N-morfolino}-etan-sulfonová kyselina)
NaHMDS bis-(trimetylsilyl)-amid sodný
NMM N-metylmorfolin
NMP N-metylpyrolidin
Pr propyl
Succ 3-karboxypropanoyl
PNA 4-nitrofenyl-amino- nebo p-nitroanilin
TBAF tetra-n-butyiammonium-fluorid
TBTU 2-(1 H-benzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3- -tetrametyluronium-tetrafiuorborát
TCEP tris-(2-karboxyetyl)-fosfin-hydrochlorid
TFA kyselina trifluoroctová
THF tetrahydrofuran
TIS triizopropylsilan
TL.C chromatografie na tenké vrstvě
TMSE trimetylsilyletyl
Tris/HCI tris-(hydroxymetyl)-aminometan-hydrochlorid.
Stavební jednotky P2
Příklad 1
Syntéza brom-metyl-8-chinolinu (1):
Do 2,5 g (14,4 mmol) komerčně dostupné 8-chinolin-karboxylové kyseliny se přidá 10 ml (144 mmol) čistého thionyl-chloridu. Tato směs se 1 hodinu zahřívá na teplotu 80°C, a pak se přebytek thionyl-chloridu se odstraní destilací za sníženého tlaku. Do vytvořené nahnědlé pevné látky se přidá 15 ml absolutního etanolu, směs se 1 hodinu zahriva na teplotu 80°C, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi etylacetát a nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahusti za
- 71 vzniku 2,8 g hnědého oleje. Tento materiál (přibližně 14,4 mmol) se po kapkách přidá během 35 minut do suspenze 0,76 g (20,2 mmol) lithiumaluminium-hydridu v dietyletéru, která se zchladí na teplotu -60°C. Reakční směs se během 1,5 hodiny pomalu zahřeje -35°C. Reakce se ukončí pomalým přidáním během 30 minut vodného roztoku síranu hořečnatého (MgSO4 . 10H2O), a pak vodného roztoku tetrahydrofuranu. Směs se rozdělí mezi dietyléter a 10% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 2,31 g (výtěžek 80%) nažloutlé pevné látky odpovídajícího alkoholu. Ve 20 ml 30% roztoku kyseliny octové v bromovodíku (Aldrich) se rozpustí 2,3 g (11,44 mmol) tohoto alkoholu a reakční směs se 2,5 hodiny zahřívá na teplotu 70°C. Směs se zahustí ve vakuu do sucha, rozdělí se mezi 100 ml etylacetátu a nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, produkt se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 2,54 g požadované sloučeniny 1 jako nahnědlé pevné látky s výtěžkem 100%.
Příklad 2
Syntéza 2-fenyl-4-hydroxychinolinu (2):
V uzavřené trubici se na teplotu 85°C 2 hodiny zahřívá roztok 6,00 g (31,2 mmol) komerčně dostupného etyl-benzylacetátu v 75 ml 30% roztoku hydroxidu amonného. Pevný produkt získaný zchlazením reakční směsi se filtruje a 2 hodiny zahřívá pod refluxem ve vodě. Roztok se třikrát extrahuje metylenchloridem. Organické podíly se sloučí, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený • · · ·►» · · · n ·· · * ‘ « M • · · · ♦··«··» e « • · · * * ··« ···♦· · · · · · ··« - 72 žlutý zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně silikagelu při eluci směsí etylacetátu a hexanu v poměru 3 : 7 za vzniku 1,60 g odpovídajícího amidu jako bílé pevné látky s výtěžkem 31 %.
Směs 250 mg (1,53 mmol) tohoto amidu, 143 mg (1,53 mmol) anilinu a 10 mg (0,08 mmol) anilin-hydrochloridu v 10 ml toluenu se 16 hodin zahřívá pod refluxem za použití Dean-Starkova zařízení. Roztok se zahustí za vzniku hnědého oleje, který se smísí se 2 g fosforečné kyseliny a směs se 20 minut zahřívá na teplotu 135°C. Reakční směs se vlije do vody a přivede se k pH 8 přidáním 5 M roztoku hydroxidu sodného. Vodná suspenze se dvakrát extrahuje etylacetátem. Organické podíly se sloučí, promyjí se nasyceným roztokem chloridu sodného, susi se nad síranem horečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci 3% roztokem metanolu v etylacetátu za vzniku 67 mg (20% výtěžek) 2-fenyl4-hydroxychinolinu (2).
1H NMR (DMSO-d6): δ 8,11 (d, J = 7 Hz, 1H), 7,86-7,83 (m, 2H), 7,77 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 7,61-7,58 (m, 3H), 7,35 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 6,34 (s, 1H).
Příklad 3
Syntéza 4-hydroxy-2-fenyl-7-metoxychinolinu (3)
4-hydroxy-2-fenyl-7-metoxychinolin (e):
Roztok 100,0 g (0,52 mol) etyl-benzylacetátu (b), 128,1 g (1,04 mol) m-anisidinu (a) a 5,2 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu v 1,0 I toluenu se 6,25 hodin zahřívá pod refluxem za použití Dean-Starkova zařízení. Zchlazený toluenový roztok se postupně promyje dvakrát 300 ml 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, dvakrát 300 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného, jedenkrát 300 ml vody a jedenkrát 150 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Toluenový podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku za vzniku 144,6 g směsi esteru c a amidu d (45% / 38% surový výtěžek) v poměru 1,2 : 1,0 jako tmavě hnědého oleje. Surový olej se 80 minut zahřívá na teplotu 280°C, přičemž se destilací odstraní etanol. Zchlazením vytvořená tmavá pevná látka se rozetře s 200 ml metylenchloridu. Suspenze se filtruje a vytvořená pevná látka se promyje metylenchloridem za vzniku 22,6 g (17% z produktu a) produktu e jako béžové pevné látky.
1H NMR (DMSO-d6): δ 8,00 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,81-7,82 (m, 2H), 7,57-7,59 (m, 3H), 7,20 (d, J = 2,2Hz, 1H), 6,94 (dd, J = 9,0,2,2Hz, 1H), 6,26 (s, 1H), 3,87 (s, 3H).
4-chloro-2-fenyl-/-metoxychinolin (3)
Suspenze 8,31 g (33,1 mmol) produktu e v 90 ml chloridu fosforylu (POCI3) se 2 hodiny zahřívá pod refluxem. Zahříváním vznikne čirý roztok, který se zahustí za sníženého tlaku. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi 1 N roztok hydroxidu sodného (exotermní reakce, přidá se 10N roztok hydroxidu sodného k vysoké hodnotě pH) a 500 ml etylacetátu. Organický podíl se promyje 100 ml vody a 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku za vzniku 8,60 g (96%) 4-chloro2-fenyl-7-metoxychinolinu (3) jako světle žluté pevné látky.
1H NMR (DMSO-d6): δ 8,28-8,30 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,10 (d, J = 9, 1Hz, 1H), 7,54-7,58 (m, 3H), 7,52 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 9,1,2,5 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H).
Tato reakce se opakuje třikrát s 96-98% výtěžkem, který je významně vyšší než 68% výtěžek podle J. Med. Chem. 1997, 40,1794.
Příklad 4
Syntéza Boc-4(R)-(naftalen-1-yl-metoxy)prolinu (4):
Ve 100 ml tetrahydrofuranu se rozpustí 5,00 g (21,6 mmol) komerčně dostupného Boc-4(R)-hydroxyprolinu a roztok se zchladí na teplotu 0°C. Po částech se během 10 minut přidá 1,85 g (45,4 mmol) 60% disperze hydridu sodného v oleji a suspenze se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Následně se přidá 8,00 g (36,2 mmol) 1-(brommetyl)naftalenu, jehož příprava je popsána v E. A. Dixon a spol.. Can. J. Chem, (1981), 59,2629-2641. Směs se 18 hodin zahřívá na teplotu refluxu, vlije se do 300 ml vody a promyje se hexanem. Vodný podíl se okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a dvakrát se extrahuje se etylacetátem. Organické podíly se sloučí a promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci směsí hexanu, etylacetátu a kyseliny octové v poměru 49:49:2 za poskytnutí v názvu uvedené sloučeniny jako 4,51 g (56% výtěžek) bezbarvého oleje.
1H NMR (DMSO-d6) zjistila přítomnost dvou rotamerú: δ 8,05 (m, 1H), ♦ · · · « - » V >.
• · · ♦ * · · Ik ·· i.
• · · · « ·= •ΙίΛ í ·♦ « ···»·
7,94 (m, 1H), 7,29 (d, J = 14 Hz, 1H), 7,55 - 7,45 (m, 4H), 4,96 (m, 2H), 4,26 (br s, 1H), 4,12 (dd, J = 8 Hz, 1H), 3,54-3,42 (m, 2H), 2,45 - 2,34 (m, 1H), 2,07-1,98 (m, 1H) 1,36 (s, (3/9) 9H), 1,34 (s, (6/9) 9H).
Příklad 5
Syntéza Boc-4(R)-(8-chinolin-metoxy)-prolinu (5):
Do suspenze 1,4 g (34 mmol) 60% disperze hydridu sodného v oleji ve 100 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,96 g (8,5 mmol) Boc-4(R)hydroxyprolinu v 20 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Tato reakční směs se nejprve 30 minut míchá, a pak se přidá roztok 2,54 g (11,44 mmol) brom-metyl-8-chinolinu (přiklad 1) v 30 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se 5 hodin zahřívá na teplotu 70°C, přebytek hydridu sodného se opatrně odstraní vodným roztokem tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahustí ve vakuu a vytvořený materiál se rozpustí v etylacetátu a vodě. Zásaditý vodný podíl se oddělí a okyselí k pH přibližně 5 přidáním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, a následně se extrahuje 150 ml etylacetátu. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku hnědého oleje. Čištění rychlou chromatografii při eluci 10% roztokem metanolu v chloroformu se získá 2,73 g (86%) požadované sloučeniny (5) jako světle žluté pevné látky.
HPLC (97,5%),
- 76 1H-NMR (DMSO-d6) prokázala rotamery v poměru 6:4: δ 12-11,4 (bs, 1H), 8,92 (dvakrát d, J = 4,14 a 4,14 Hz, 1H), 8,38 (dvakrát d, J = 8,27 a 8,27 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,637,54 (m, 2H), 5,14 (dvakrát s, 2H), 4,32-4,29 (m, 1H), 4,14-4,07 (m, 1H), 3,523,44 (m, 2H), 2,43-2,27 (m, 1H), 2,13-2,04 (m, 1H), 1,36 a 1,34 (dvakrát s, 9H).
Příklad 6
Příprava Boc-4(R)-(7-chlor-chinolin-4-oxo)prolinu (6):
Směs 500 mg (2,04 mmol) komerčně dostupného metylesteru Boc-4(S)-hydroxyprolinu a 440 mg (2,45 mmol) 7-chlor-4-hydroxychinolinu se umístí do 10 ml bezvodého tetrahydrofuranu při teplotě 0°C. Nejprve se přidá 641 mg (2,95 mmol) trifenylfosfinu, a následně se pomalu přidá 426 mg (2,45 mmol) diizopropyl-azodikarboxylátu DIAD. Směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se pak zahustí, zpracuje etylacetátem a třikrát se extrahuje 1N roztokem kyseliny chlorovodíkové. Vodný podíl se převede na zásadité pH přidáním uhličitanu sodného a dvakrát se extrahuje etylacetátem. Organické podíly se sloučí, suší se nad síranem hořečnatým, filtrují se a zahustí za vzniku zbytku jako žlutého oleje, který se čistí rychlou
- 77 chromatografií za vzniku 498 mg metylesteru výsledné sloučeniny 6 jako bílé pevné látky s 58% výtěžkem.
Za použití 1,7 ml (1,7 mmol) 1M vodného roztoku hydroxidu sodného ve 4 ml metanolu se při teplotě 0°C 3 hodiny hydrolyzuje 400 mg (0,986 mmol) shora vyrobeného metylesteru sloučeniny 6. Roztok se zahustí k odstranění metanolu a neutralizuje se přidáním 1M vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Suspenze se zahustí do sucha a zpracuje ve 20 ml metanolu, soli se odstraní filtrací a filtrát se zahusti za vzniku 387 mg (kvantitativní výtěžek) požadované sloučeniny 6 jako bílé pevné látky.
1H NMR (DMSO-d6) (směs rotamerú v poměru 1:1): δ 8,74 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,13 - 8,09 (m, 1H), (s, 1H), 7,58 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,26 - 5,20 (m, 1H), 4,10 - 4,01 (m, 1H), 3,81 - 3,72 (m, 1H), 3,59 (dd, J = 12,10 Hz, 1H), 2,41-2,31 (m, 2H), 1,34 a 1,31 (s, 9H).
Příklad i
Syntéza Boc-4(R)-(2-fenyl-7-metoxychinolin-4-oxo)-prolinu (7):
Boc-4(R)-[(7-metoxy-2-fenyl-4- -chinolinyl)oxy]-L-prolin (7):
Do roztoku 6,73 g (29,1 mmol) komerčně dostupného 4-(S)hydroxyprolinu v 83 ml DMSO se při teplotě 25°C po malých castech • w během 15 minut přidá 8,16 g (72,7 mmol) terc-butoxidu draselného. Směs se míchá 1,5 hodiny při teplotě 25°C. Do vytvořené reakční směsi se během 15 minut přidá ve čtyřech částech 8,61 g (32,0 mmol) chlor-2fenyl-7-metoxychinolinu (3). Reakční směs se 19 hodin míchá pn teplote 25°C. Vytvořená suspenze se vlije do 650 ml vody a směs se trikrat promyje 150 ml dietyléteru k odstranění přebytku chlor-chmolmu (účinnější byl následně shledán etylacetát). Vodný podíl se okyselí k pH 4-5 přidáním 1N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové (vypočteno 38 ml 1,5 ekv., požadováno 43,6 ml). Bílá pevná látka jako sraženina se oddělí filtrací. Vlhká pevná látka se suší za sníženého tlaku nad oxidem fosforečným za vzniku 12,6 g (výtěžek 91%, obsahuje 2,3% hmotnostních DMSO) prolinového derivátu (7) jako béžové pevné látky.
1H NMR (DMSO-d6) (směs rotamerú v poměru 2:1): δ 8,27 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 8,00, 7,98 (2d, J = Hz, 1H), 7,48-7,56 (m, 3H), 7,45, 7,43 (2s, 1H), 7,39 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,17 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H), 5,53 5,59 (m, 1H), 4,34 - 4,41 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,76 (široké s, 2H), 2,63 - 2,73 (m, 1H), 2,32 - 2,43 (m, 1H), 1,36, 1,33 (2s, 9H).
Příklad 8
Syntéza Boc-4 (R)-(2-fenyl-6-nitrochinolin-4-oxo)prolinu (8)
Do míchaného roztoku 1,28 g (4,88 mmol) trifenylfosfinu v 15 ml tetrahydrofuranu se při teplotě 0°C po kapkách prida 0,77 ml (4,89 mmol) dietyl-azodikarboxylátu. Po 30 minutách míchání v atmosféře • ·>
dusíku se přidá roztok 1,00 g (4,08 mmol) metylesteru Boc-4(S)hydroxyprolinu v 5 ml tetrahydrofuranu, a následně suspenze 1,30 g (4,88 mmol) komerčně dostupného 6-nitro-2-fenyl-4-chinolinolu v 10 ml stejného rozpouštědla. Červená směs se při teplotě 0°C míchá 15 minut a přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu.
Olej se zředí etylacetátem a promyje se dvakrát hydrogenuhlicitanem sodným, jedenkrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí chromatografií na silikagelu při eluci směsí hexanů a etylacetátu 70:30 za vzniku 1,70 g (výtežek 85%) požadovaného metylesteru jako světle žluté pevné látky.
1H NMR (CDCI3) rotamery = 3 : 7: δ 9,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,46 (dd, J = 9,2,5 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,14-8,07 (m, 2H), 7,59 - 7,50 (m, 3H)> 719 (Si 1H), 5,39 - 5,30 (m, 1H), 4,67 (t, J = 8 Hz, 0,3H), 4,61 (t, J = 8 Hz, 0,7H), 4,07 - 4,01 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,89 - 2,73 (m, 1H), 2,55 - 2,47 (m, 1H), 1,49 (s, 2,7H), 1,45 (s, 6,3H).
Do roztoku 503 mg (1,02 mmol) metylesteru ve směsi 10 ml tetrahydrofuranu a 4 ml vody se přidá 85 mg (2,05 mmol) monohydratu hydroxidu lithného. Do vzniku homogenního roztoku se přidají 2 ml metanolu. Po 30 minutách vznikne bílá sraženina. Vytvořená suspenze se dalších 6 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí 10% vodným roztokem citrónové kyseliny a extrahuje se etylacetátem. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu za vzniku 416 mg (85%) požadované kyseliny (8).
1H NMR (DMSO-d6): δ 8,92-8,87 (m, 1H), 8,47 (dd, J = 9,3Hz, 1H), 8,38 - 8,32 (m, 2H), 8,19 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,62 - /,55 (m, 3Ηχ 5i73.5,66 (m, 1H), 4,41 (t, J = 8 Hz, 1H), 3,89 - 3,/6 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, 1H), 2,47 - 2,35 (m, 1H), 1,38 (s, 9H).
- 80 Stavební jednotky P1
Příklad 9
Syntéza směsi (1R, 2R) / (1S, 2R) 1-amino-2-etyl-cyklopropyl-karboxylové kyseliny
d) 1.0 M TBAF
THF teplota místnosti až reflux
H„N CO2tBu
9f etyi syn k esteru směs (RR/SS) 1
a) Do suspenze 21,0 g (92,19 mmol) benzyl-trietyl-amonium-chloridu v 50% vodného roztoku 92,4 g hydroxidu sodného v 185 ml vody se postupně přidá 20,0 g (92,47 mmol) diterc.-butylmalonátu a 30,0 g (138,93 mmol) 1,2-dibrombutanu. Reakční směs se energicky míchá přes noc při teplotě místnosti, pak se přidá směs ledu a vody. Surový produkt se třikrát extrahuje metylenchloridem, a postupně se třikrát promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí. Vytvořený zbytek se čistí rychlou chromatografií (7 cm, 2 až 4 % roztok dietyléteru v hexanu) za vzniku 19,1 g (70,7 mmol, výtěžek 76%) požadovaného cyklopropanového derivátu 9c.
- 81 β <Β 1Η NMR (CDCI3): δ 1,78-1,70 (m, 1Η), 1,47 (s, 9Η), 1,46 (s, 9Η), 1,441,39 (m, 1H), 1,26-1,64 (m, 3H), 1,02 (t, 3H, J = 7,6 Hz).
b) Do suspenze 6,71 g (59,79 mmol, 4,4 ekv.) terc-butoxidu draselného v 100 ml bezvodého éteru se při teplotě 0°C přidá 270 μΙ (15,00 mmol, 1,1 ekv.) vody. Po 5 minutách se do suspenze přidá 3,675 g (13,59 mmol) diesteru 9c v 10 ml éteru. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, a pak se vlije do směsi ledu a vody a třikrát se promyje éterem. Vodný podíl se při teplotě 0°C okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny citrónové a třikrát se extrahuje etylacetátem. Sloučený organický podíl se postupně dvakrát promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem sodným, filtraci a zahuštění) vznikne 1,86 g (8,68 mmol, 64% výtěžek) požadované kyseliny 9d jako světle žlutého oleje.
NMR (CDCl3): δ 2.09-2,01 (m, 1H), 1,98 (dd, J = 3,8, 9,2Hz, 1H), 1,81-1,70 (m, 1H), 1,66 (dd, J = 3,0, J = 8,2Hz, 1H), 1,63-1,56 (m, 1H), 1,51 (s, 9H), 1,0 (t, J = 7,3Hz, 3H).
c) Do směsi 2,017 g (9,414 mmol) kyseliny 9d ve 32 ml bezvodého benzenu se postupně přidá 1,50 ml (10,76 mmol, 1,14 ekv.) trietylnitritu a 2,20 ml (10,21 mmol, 1,08 ekv.) DPPA. Reakční směs se zahřívá pod refluxem 3,5 hodiny, pak se přidá 2,70 ml (18,84 mmol, 2,0 ekv.) 2-trimetyl-siiyl-etanolu. Reakční směs se pod refluxem přes noc zahřívá, pak se reakční směs zředí dietyléterem a postupně se promyje 10 % vodným roztokem citrónové kyseliny, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem horečnatým, filtraci a zahuštění) se zbytek čistí rychlou chromatografií (5 cm, 10% roztok etylacetátu v hexanu) za vzniku 2,60 g (7,88 mmol, 84% výtěžek) požadovaného karbamátu 9e jako světle žlutého oleje.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 330 (MH+), ήΗ NMR (CDCI3): δ 5,1 (bs, 1H), 4,18 - 4,13 (m, 2H), 1,68 - 1,38 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,24 - 1,18 (m, 1H), 1,00-0,96 (m, 5H), 0,03 (s, 9H).
d) Do 258 mg (0,783 mmol) karbamátu 9e se přidá roztok 940 μΙ (0,94 mmol, 1,2 ekv.) 1,0 M roztoku tetra-n-butylammonium-fluoridu (TBAF) v tetrahydrofuranu. Po 4,5 hodině se přidá dalších 626 μΙ (0,63 mmol, 0,8 ekv.) 1,0M roztoku TBAF. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, 30 minut se refluxuje, a pak se zředí etylacetátem. Roztok se postupně promyje dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po obvyklém zpracování (sušení nad síranem horečnatým, filtraci a zahuštění) se získá 84 mg (0,453 mmol, výtěžek 58%) požadovaného aminu 9f jako světle žluté kapaliny.
4H NMR (CDCI3): δ 1,96 (bs, 2H), 1,60 - 1,40 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,31 - 1,20 (m, 1H), 1,14 (dd, J = 4,1, 7,3Hz, 1H), 1,02 (dd, J = 4,1, 9,2Hz, 1H), 0,94 (t, J = 7,3Hz, 3H).
Příklad 10
Chemické rozdělení t-butyl-(1 R,2R)/(1S,2R)-1-amino-2-etylcyklo-propyl-karboxylátu (výsledné sloučeniny příkladu 9):
iRR izomer SR izomer , Na 8,50 g (25,86 mmol) sloučeniny 9e (příklad 9) se při teplotě refluxu 45 minut působí 26 ml 1M roztoku tetra-n-butylamonium-fluoridu (TBAF) v tetrahydrofuranu. Zchlazená reakční směs se zředí
-83etylacetátem, třikrát se promyje vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného, a pak se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje za vzniku volného aminu jako světle žlutého oleje. Volný amin se rozpustí ve 120 ml bezvodého metylenchloridu a do roztoku se postupně přidá 8,5 ml (77,57 mmol) roztoku N-metylmorfolinu, 10,08 g (27,15 mmol) sloučeniny 4 (příklad 4) a 11,79 g (31,03 mmol) HATU. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak zpracuje podle shora uvedeného postupu. Surová diastereomerická směs se rozdělí rychlou chromatografií při eluci směsí hexanu a dietyléteru v poměru 25:75 za vzniku dipeptidu 10a (méně polární eluční skvrna) jako 4,42 g bílé pěny (64% teoretického výtěžku) a 10b (méně polární eluční skvrna) jako 4 g nažloutlé pěny (57% teoretického výtěžku). V tomto případě jsou odděleny oba izomery, ikdyž jejich stereochemické vlastnosti stále nejsou známé.
Příklad 11
Zjištění stereochemické konfigurace sloučeniny 10a a 10b korelací se známou konfigurací t-butyl-(1 R-amino-2R-etylcyk!opropyl-karboxylátu
10a přímé porovnání pomocí TLC, HPLC a NMR
-84Prof. A. Charette z University of Montreal popsal přípravu sloučeniny 11a, jejíž stereochemickou konfiguraci určil rentgenovou krystalografií (J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 12721). Ve 240 μΙ 1M roztoku kyseliny chlorovodíkové v etylacetátu se rozpustí 13,2 mg (0,046 mmol) sloučeniny 11a a směs se míchá přibližně 48 hodin. Směs se odpařuje do sucha za vzniku sloučeniny 11b jako světle žluté pasty, která se sloučí se 18 mg (0,049 mmol) sloučeniny 4 (příklad 10) za použití 20,3 μΙ (0,185 mmol) N-metylmorfolinu a 21,1 mg (0,056 mmol) HATU v metylenchloridu. Surový materiál se čistí rychlou chromatografií při eluci směsí hexanu v dietyléteru v poměru 50:50 za vzniku dipeptidu 11c jako 7,7 mg oleje (výtěžek 31 %). TLC, HPLC a NMR analýzou dipeptidu 11c se zjistilo, že jde o identickou sloučeninu s méně polární sloučeninou 10a (příklad 10) s konfigurací (1R, 2R).
Příklad 12 (1R,2R) / (1S,2R)-1-Boc-amino-2-etyl-cyklopropyl-karboxylová kyselina (12a)
1.TFA, 0°C ---►
2. vodný NaOH, THF, (Boc)2O
12a
Roztok 2.6 g (7,88 mmol) karbamátu 9e (příklad 9) v TFA se 40 minut míchá při teplotě 0°C. Směs se pak zahustí a zředí 10 ml tetrahydrofuranu. Přidá se 700 mg (17,5 mmol) vodného roztoku hydroxidu sodného v 8,8 ml vody, a následně roztok 2,06 g (9,44 mmol, 1,2 ekv.) (Boc)2Ov 13 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti při udržování pH 8 eventuálním přidáváním 10
-85% vodného roztoku hydroxidu sodného, zředí se vodou, třikrát se promyje dietyléterem a při teplotě 0°C se okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny citrónové. Vodný podíl se třikrát extrahuje etylacetátem a postupně se dvakrát promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění vznikne 788 mg (3,44 mmol, výtěžek 44%) požadované Boc-chráněné aminokyseliny (12a).
1H NMR (CDCI3): δ 5,18 (bs, 1H), 1,64-1,58 (m, 2H), 1,55-1,42 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,32-1,25 (m, 1H), 0,99 (t, 3H, J = 7,3Hz).
Příprava metylesteru (1R.2R) / (1S,2R)-1-Boc-amino-2-etyl-cyklo-propyl-karboxylové kyseliny (12b)
12a
V 10 ml dietyléteru se rozpustí 0,30 g (1,31 mmol) Boc-derivátu 12a a na reakční roztok se při teplotě 0°C působí čerstvě připraveným roztokem diazometanu v dietyléteru za vzniku žlutého zabarvení roztoku, způsobeného mírným přebytkem roztoku diazometanu. Po 20 minutách míchání při teplotě místnosti se reakční směs zahustí do sucha za vzniku sloučeniny 12b jako 0,32 g (100%) čirého bezbarvého oleje. 1H NMR (CDCI3): δ 5,1 (bs, 1H), 3,71 (s, 3H), 1,62 - 1,57 (m, 2H), 1,55 (s, 9H), 1,53 - 1,43 (m, 1H), 1,28 - 1,21 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,3Hz, 3H).
Příklad 13
Enzymatická rezoluce metyl-(1R, 2R) / (1S, 2R)-Boc-1-amino-2-etyl-cyklopropyl-karboxylátu
(S,R)/(R,R)
a) Alcalase
NaOH
/ 13a (S,R) fa ch2n2
* analýza pomocí HPLC za použití Chiracel® OD-Hkolony ** ostatní estery jsou také přijatelné (Et)
a) Ve 3 ml acetonu se rozpustí 0,31 g (1,27 mmol) směsi enantiomerů metylesteru (1S,2R) / (1 R,2R)-1-Boc-amino-2etyl-karboxylové kyseliny (příklad 10), a pak se roztok za energického míchání zředí 7 ml vody. Hodnota pH roztoku se udržuje na 7,5 přidáváním 0,05 M vodného roztoku hydroxidu sodného, a následně se přidá 300 mg Alcalase® (2,4 I extraktu vyrobeného v Novo Nordisk Industrials). Během inkubace se pH stabilizuje přidáváním hydroxidu sodného za použití pHstat titrátoru. Po 40 hodinách se směs zředí etylacetátem a vodou (obsahujícího 5 ml nasyceného roztoku hydrogenuhlicitanu sodného) a podíly se oddělí. Vodný podíl se okyselí přidáním 10% vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se etylacetátem, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 48,5 mg kyseliny 13a. Stereochemicka konfigurace se určí analýzou popsanou v příkladech 10 a 11.
b) Na podíl kyseliny 13a se působí roztokem diazometanu v dietyléteru za vzniku metylesteru, který se analyzuje HPLC za použití chirální kolony Chiralcel® OD-H eluci 2,5% roztokem izopropanolu v hexanu za izokratických podmínek. Z analýzy vyplývá, že jde o směs s přítomností (1S, 2R) izomeru 51:1.
Příklad 14 (1R.2S) / (1S,2S)-1-amino-2-etyl-cyklopropyl-karboxylová kyselina teplota místnosti
HO2C 9d etyl syn k esteru
c) DBU, (ch3cn . teplota 1 místnosti
d) TFA, CH^
f)1.0 MTBAF
THF teplota ·reflux místnosti
etyl anti ke kyselině (RS) i (SS)
Výchozí sloučeninou přípravy je sloučenina 9d, jejíž příprava je popsána v příkladě 9:
c) Do roztoku 1,023 g (4,77 mmol) sloučeniny 9d ve 25 ml metylkyanidu se postupně přidá 860 μΙ (5,75 mmol, 1,2 ekv.) DBU a 620 μΙ (7,16 mmol, 1,5 ekv.) alyl-bromidu. Reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, a pak se zahustí. Vytvořený zbytek se zředí dietyléterem a postupně se dvakrát promyje 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem horečnatým, filtraci a zahuštění se získá 1,106 g (3,35 mmol) esteru sloučeniny 14a s 91% výtěžkem jako bezbarvého oleje.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 255 (MH+),
1H NMR (CDCh): δ 5,96-5,86 (m, 1H), 5,37-5,22 (m, 2H), 4,70-4,65 (m, 1H), 4,57-4,52 (m, 1H), 1,871,79 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 1,45-1,40 (m, 1H), 1,33-1,24 (m, 3H), 1,03 (t, J =
7,3Hz, 3H).
d) Do roztoku 1,106 g (4,349 mmol) esteru 14a v 5 ml bezvodého metylenchloridu se při teplotě místnosti přidá 5 ml kyseliny trifluor-octové. Reakční směs se 1,5 hodiny míchá, a pak se zahustí za vzniku 854 mg (4,308 mmol) sloučeniny 14b s 99 % výtěžkem.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 199 (MH+),
1H NMR (CDCh): δ 5,99-5,79 (m, 1H), 5,40-5,30 (m, 2H), 4,71-4,62 (m, 2H), 2,22-2,00 (m, 2H), 1,95-1,88 (m, 1H), 1,841,57 (m, 2H), 0,98 (t, J = 7,3Hz, 3H).
e) Do roztoku 853 mg (4,30 mmol) kyseliny 14b v 14,8 ml bezvodého benzenu se postupně přidá 684 μΙ (4,91 mmol, 1,14 ekv.) trietylnitritu a 992 μΙ (4,60 mmol, 1,07 ekv.) DPPA. Reakční směs se 4,5 hodiny zahřívá pod refluxem, a pak se přidá 1,23 ml (8,58 mmol, 2,0 ekv.) 2-trimetyl-silyl-etanolu. Směs se pod refluxem zahřívá přes noc, a pak se zředí dietyléterem a postupně se promyje jedenkrát 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, jedenkrát vodou, jedenkrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a
-89- ..... ·· · ·· ·“· zahuštění se zbytek čistí rychlou chromatografií (5 cm) při eluci 10 až 15 % roztokem etylacetátu v hexanu za vzniku 1,212 g (3,866 mmol) karbamátu 14c jako světle žlutého oleje s 90% výtěžkem.
Hmotnostní spektrometrie (FAB) 314 (MH+),
1H NMR (CDCI3): δ 5,93 - 5,84 (m, 1H), 5,32 - 5,20 (m, 2H), 5,05 (bs, 1H), 4,60 - 4,56 (m, 2H), 4,20 - 4,11 (m, 2H), 1,71 1,60 (m, 3H), 1,39 - 1,22 (m, 1H), 1,03 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 0,96-0,86 (m, 1H), 0,04 (s, 9H).
f) Do 267 mg (0,810 mmol) karbamátu 14c se přidá 1,62 ml (1,62 mmol, 2,0 ekv.) 1,0M roztoku tetra-n-butylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, refluxuje se 30 minut, a pak se zředí etylacetátem. Roztok se postupně promyje dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění se připraví 122 mg (0,721 mmol) požadovaného aminu 14d s 89% výtěžkem jako světle žluté kapaliny.
1H NMR (CDCI3): δ 5,94 - 5,86 (m, 1H), 5,31 - 5,22 (m, 2H), 4,58 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 1,75 (bs, 2H), 1,61 - ť,53 (m, 2H), 1,51 - 1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,3Hz, 3H), 0,70 - 0,62 (m, 1H).
Příklad 15
Syntéza etyl-(1R, 2S) / (1S, 2S)-1-amino-2-vinyl-cyklopropylkarboxylátu
Ph ,Br a) 'BuOK Ph \7
I + Br ► \_ /X
Ph^ N ^COjEt THF p./^N CO2Et
15b -78°CažO°C 15c
15a s' b) 1N vodný r. HCI, EbO t. NaHCOj d) 4N HCI/dioxan
HCIH2N CO2Et
15d vinyl syn k esteru
a) Do 180 ml tetrahydrofuranového roztoku 4,62 g (41,17 mmol, 1,1 ekv.) terc-butoxidu draselného se při teplotě -78°C přidá 10,0 g (37,41 mmol) komerčně dostupného iminu 15a ve 45 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se zahřeje na teplotu 0 C a 40 minut se míchá při této teplotě. Směs se opět zchladí na teplotu -78°C a přidá se 8,0 g (37,40 mmol) 1,4-dibrombutenu 15b. Reakční směs se pak 1 hodinu míchá při teplotě 0 C, zchladí se na teplotu -78°C,a pak se přidá 4,62 g (41,17 mmol, 1,1 ekv.) terc-butoxidu draselného. Nakonec se reakční směs míchá další jednu hodinu při teplotě 0°C a zahustí se za vzniku sloučeniny 15c.
b) c) d) Sloučenina 15c se zpracuje 265 ml dietyléteru, a na roztok se působí 106 ml 1N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po 3,5 hodinách při teplotě místnosti se podíly oddělí a vodný podíl dvakrát se promyje dietyléterem a převede na zásadité pH přidáním nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Požadovaný amin se třikrát extrahuje dietyléterem a kombinovaný organický extrakt se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem hořečnatým, filtraci a zahuštění se na vytvořený zbytek působí 187 ml (748 mmol) 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové vdioxanu. Po zahuštění se získá hydrochlorid
-91 15d jako 2,467 g (12,87 mmol) hnědé pevné látky s 34% výtěžkem.
1H NMR (CDCI3): δ 9,17 (bs, 3H), 5,75 - 5,66 (m, 1H), 5,39 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,35 - 4,21 (m, 2H), 2,77 - 2,70 (m, 1H), 2,05 (dd, J = 6,4, 10,2 Hz, 1H), 1,75 (dd, J = 6,4, 8,3Hz, 1H), 1,33 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Příklad 16 etyl-ester (1R,2S / 1S,2S)-1-Boc-amino-2-vinyl-cyklopropylkarboxylové kyseliny
(Boc)2O
DIPEA DMAP THF
vinyl syn k esteru
Ve 30 ml tetrahydrofuranu se rozpustí 1,0 g (5,2 mmol) hydrochloridu 15d a 1,2 g (5,7 mmol) (Boc)2O a na směs se působí 0,13 g (1,04 mmol, 0,2 ekv.) dimetyl-aminopyridinu a 2,8 ml (15,6 mmol) diizopropyl-etylaminu. Reakční směs se 24 hodin míchá, a následně se zředí 40 ml etylacetátu a postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 5% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí. Zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci 15% roztokem etylacetátu v hexanu za vzniku 0,29 g výsledné sloučeniny 16a s výtěžkem 23%.
1H NMR (CDCI3): δ 5,80 - 5,72 (m, 1H), 5,29 - 5,25 (dd, J = 17,2 Hz, 1H), 5,24-5,1 (bs, 1H), 5,10 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1H), 4,22 - 4,13 (m,
-92 2H), 2,15 - 2,04 (m, 1H), 1,85 - 1,73 (bs, 1H), 1,55 - 1,5 (m, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,26 (t, J= 7,3 Hz, 3H).
Příklad 17
Enzymatické rozdělení etyl-(1 R,2S) / (1S,2S)-1-amino-2-vinyl-cyklopropyl-karboxylátu
analýza pomocí HPLC za použiti Chiracei® OD-H kolony
a) V 5 ml acetonu se rozpustí 0,29 g (1,14 mmol) racemického derivátu 17a a směs se zředí 10 ml vody. Hodnota pH se upraví přidáním 0,2N vodného roztoku hydroxidu sodného na pH 7,2, a následně se přidá 300 mg Alcalase®. Po dobu 9 dní inkubace se roztok hydroxidu sodného přidává pH/stat titrátorem, přičemž se během této doby přidá teoreticky vypočítané množství zásady. Následná extrakce je popsána v příkladě 13 za vzniku 0,15 g (100%) nehydrolyzovaného esteru a 0,139 g (95%) hydrolyzovaného materiálu. Analýzou nehydrolyzovaného esteru pomocí HPLC za použití chirální kolony se prokázala přítomnost požadované sloučeniny 17c v poměru 43:1 (chemická korelace popsaná v příkladech 10 a 11).
Podmínky HPLC analýzy: kolona Chiralcel® OD-H (4,6 mm x 25 cm), izokratické podmínky, mobilní fáze: 2,5% roztok izopropanolu v hexanu.
-93Příklad 18
Rozděleni (1R.2S) / (1S,2S)-1-amino-2-vinyl-cyklopropylkarboxylátu krystalizací s dibenzyl-D-vinnou kyselinou
Do roztoku surového racemického (1S,2S a 1R,2S)-etyl-1-amino-2-vinyl-cyklopropyl-karboxylátu (získaného z 25,0 g (93,5 mol) etylesteru N-(difenyl-metylen)-glycinu podle postupu příkladu 15) v 800 ml etylacetátu se přidá 33,5 g (93,5 mol) dibenzyl-D-vinné kyseliny. Směs se zahřívá pod refluxem, nechá se 15 minut při teplotě místnosti, a pak se zchladí na teplotu 0°C. Po 30 minutách se získá bílá pevná látka. Pevný produkt se filtruje, promyje se 100 ml etylacetátu a susi se na vzduchu. Pevný produkt se uvede do suspenze v 70 ml acetonu, a po působením ultrazvukem se třikrát filtruje. Pevný produkt se nechá krystalizovat dvakrát z horkého acetonu (získaná část A). Matečné louhy se zahustí a vytvořený zbytek se třikrát krystalizuje z horkého acetonu (získaná část B). Získané amorfní bílé produkty části A a B jako soli kyseliny dibenzyl-D-vinné se sloučí za vzniku 5,53 g produktu, který se uvede do suspenze ve směsi 250 ml dietyléteru a 150 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a filtruje se. Filtrát se zředí 100 ml 1N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dietyleteru a zahustí se za sníženého tlaku. Olejovitý zbytek se odpařuje s tetrachlórmetanem za vzniku 940 mg etyl-1(R)amino-2(S)-vinyl-cyklopropan-karboxylát-hydrochloridu s 11% výtezkem jako bílé hygroskopické pevné látky.
[a]25D +39.5°C (c 1,14 metanol),
[a]25 D +88,5 °C (c 1,14 metanol),
1H NMR (DMSO-d6): δ 9,07 (široké s, 2H), 5,64 (ddd, J = 17,2, 10,4, 8,7 Hz, 1H), 5,36 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1H), 4,24-4,16 (m, 2H), 2,51-2,45 (m, vrcholy bráněné DMSO, 1H), 1,84 (dd, J = 10,0, 6,0 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 8,3, 6,0 Hz, 1H), 1,23 (t, J = 7, 1Hz, 3H), hmotnostní spektrometrie (ESI) m/z 156 (MH) +, čistota enantiomerů: 91 % přebytek enantiomerů HPLC analýzou Boc derivátu (kolona CHIRALPAK AS®, směs hexanu a izopropanolu).
Příklad 19
Příprava hydrochloridu metyl-esteru (1R,2S) / (1S,2S)-1-amino-2-vinyl-cykloprópan-karboxylové kyseliny (19f)
H3N+^CO2Et .HCI
19a______
Na^C^/TBME
CO2Et
LiOtBu (2,1 ekv.) toluen / teplota místnosti, a pak H3O’, pak NaOH
Boc2O
TBME
BocHN
19e
NaOMe _ --->MeOH
BocHN CO2Me
19f
Příprava iminu 19b
Do suspenze se uvede 1519,2 g (10,88 mol, 1,0 ekv.) hydrochloridu etylesteru glycinu 19a v 8 I terc-butylmetyléteru. Po přidání 1155 g (10,88 mol, 1 ekv.) benzaldehydu a 773 g (5,44 mol, 0,5 ekv.) bezvodého sulfátu sodného se směs zchladí na teplotu 5°C v lázni ledu a vody. Po kapkách se během 15 minut přidá 2275 ml (16,32 mol, 1,5
-95ekv.) trietylaminu (za použití 0,5 I terc-butylmetyléteru). Reakční směs se míchá 40 hodin při teplotě místnosti . Reakce se pak ukončí přidáním 5 I ledově studené vody a organický podíl se oddělí. Vodný podíl se extrahuje 1 I terc-butylmetyléteru a kombinované organické podíly se promyjí směsí 400 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 1,6 I vody, a pak nasyceným roztokem chloridu sodného. Roztok se suší se nad síranem hořečnatým, zahustí za sníženého tlaku a vytvořený žlutý olej se suší ve vakuu do konstantní hmotnosti. Získá se 2001 g (96% výtěžek) iminu 19b jako hustého žlutého oleje, který tuhne při teplotě -20°C.
1H NMR (CDCh, 400 MHz): δ 8,30 (s, 1H), 7,79 (m, 2H), 7,48 - 7,39 (m, 3H), 4,40 (d, J = 1,3Hz, 2H), 4,24 (q, J = 7Hz, 2H), 1,31 (t, J = 7 Hz, 3H).
Příprava racemického hydrochloridu etyl-esteru N-Boc-(1 R,2S)Z (1S,2S)-1-amino-2-vinyl-cyklopropan-karboxylové kyseliny 19e:
Do suspenze se uvede 4,203 g (52,5 mmol, 2,1 ekv.) terc-butoxidu lithného v 60 ml bezvodého toluenu. Ve 30 ml bezvodého toluenu se rozpustí 5,020 g (26,3 mmol, 1,05 ekv.) iminu 19b a 5,348 g (25 mmol, 1 ekv.) dibromidu 19c a tento roztok se při teplotě místnosti během 30 minut po kapkách přidá do míchaného roztoku terc-butoxidu lithného. Vytvořená temně červená směs se míchá dalších 10 minut a reakce se ukončí přidáním 50 ml vody a 50 ml terc-butylmetyléteru (TBME). Vodný podíl se oddělí a podruhé se extrahuje 50 ml TBME. Organické podíly se sloučí, přidá se 60 ml 1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Organický podíl se oddělí a extrahuje se 40 ml vody. Vodné podíly se pak sloučí, sytí se 35 g soli a 50 ml TBME. Míchaná směs se pak převede na zásadité pH 13-14 opatrným přidáním 10 N roztoku hydroxidu sodného. Organický podíl se oddělí a vodný podíl dvakrát extrahuje 50 ml TBME. Organické extrakty obsahující volný amin 19d se sloučí a přidá se 5,46 g (25 mmol, 1 ekv.)
-96diterc.-butyldikarbonátu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak se podle TLC zjistí přítomnost nezpracovaného volného aminu. Po přidání 1,09 g (5 mmol, 0,2 ekv.) diterc.-butyldikarbonátu se směs 2 hodiny zahřívá pod zpětným chladičem. Následná TLC potvrdí úplnou přeměnu sloučeniny 19d na 19e. Roztok se zchladí na teplotu místnosti, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí rychlou chromatografií při eluci nejprve 10%, a pak 20% roztokem etylacetátu v hexanu. Čištěním se vytvoří 4,014 g (63% výtěžek) čirého žlutého oleje sloučeniny 19d, který pomalu tuhne ve vakuu.
1H NMR (CDCI3i 400 MHz): δ 5,77 (ddd, J = 17,10,9 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17,1,5 Hz, 1H), 5,18 (široké s, 1H), 5,11 (dd J = 10,1,5 Hz, 1H), 4,24-4,09 (m, 2H), 2,13 (q, J = 8,5 Hz, 1H), 1,79 (široké m, 1H), 1,46 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,26 (t, J = 7 Hz, 3H).
Příprava výsledné sloučeniny 19f trans-esterifikací sloučeniny 19e:
V 50 ml bezvodého metanolu se rozpustí 10,807 g (42,35 mmol) etylesteru 19e, a následně se přidá 9,7 ml (42 mmol, 1 ekv.) 25 %hmotnostních roztoku metoxidu sodného v metanolu. Směs se 2 hodiny zahřívá na teplotu 50°C. TLC analýzou se potvrdí zpracování výchozích sloučenin trans-esterifikací (19e: Rf = 0,38, 19f: Rf = 0,34, v 20% roztoku etylacetátu v hexanu). Reakční směs se zchladí na teplotu místnosti a okyselí k pH 4 za použití 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Chlorid sodný jako sraženina se odstraní filtrací (promytí tercbutylmetyl-éterem) a těkavé podíly se odstraní za sníženého tlaku. Do vytvořeného zbytku se přidá 100 ml terc-butyl-metyléteru a pevná látka se odstraní filtrací. Odpařováním filtrátu za sníženého tlaku a sušením ve vakuu se získá 10,11 g (99% výtěžek) čistého metylesteru 19f. 1H NMR (CDCh, 400 MHz): δ 5,75 (ddd, J = 17,10,9 Hz, 1H), 5,28 (dd, J = 17, 1Hz, 1H), 5,18 (široké s, 1H), 5,11 (ddd, J = 10,1,5,0,5 Hz, 1H),
-97- ”··
3,71 (s, 3H), 2,14 (q, J = 9 Hz, 1H), 1 ,/9 (široké m, 1H), 1,50 (široké m, 1H), 1,46 (s, 9H).
Příklad 20
Enzymatická rezoluce hydrochloridu metylesteru (1R, 2S)-1 -amino-2-vinyl-cyklopropan- karboxylové kyseliny
BocHN CO2Me
Alcalase 2.4L
BocHN CO2Me pH 8.2-8.5
4N HCl-dioxan
H,N CO,Me .HCI
Příprava metylesteru N-Boc-(1 R,2S)-1-amino-2-vinyl-cyklopropankarboxylové kyseliny 20a:
Ve 3 ml acetonu se rozpustí 0,200 g (0,83 mmol) racemického esteru 19f, a následně se přidá v 3 ml acetonu a 7 ml vody. K hodnotě pH 8 se přidá 1 kapka 0,05 M roztoku hydroxidu sodného, a pak se přidá 2,4 I Alcalase® (Novo Nordisk Biochem, 0,3 g v 1 ml vody). Směs se míchá energicky při teplotě místnosti při udržování pH roztoku 8 za použití automatického titračního zařízení. Začátkem 4. a 5. dne míchání při pH 8 se přidají 0,3 g enzymatického roztoku. Po celkem 5 dnech se spotřebuje celkem 8,3 ml 0,05 M roztoku hydroxidu sodného. Reakční
-98 směs se zředí etylacetátem a vodou a organický podíl se oddělí. Po promytí nasyceným roztokem chloridu sodného se organický extrakt suší nad síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Získá se 0,059 g (30% výtěžek) sloučeniny 20a jako čirého oleje .
1H NMR identická se sloučeninou 19f.
HPLC (Chiralcel ODH 4,6 x 250 mm, izokratická eluce 1% roztokem etanolu v hexanu rychlostí průtoku 0,8 ml/min):
(1R, 2S)-2: Rt= 19,3 min (97%);
(1S, 2R)-2: Rt = 17,0 min (3%).
Příprava hydrochloridu metylesteru (1 R,2S)-1 -amino-2-vinyl-cyklopropan-karboxylové kyseliny 20b:
Ve 25 ml dioxanu se rozpustí 39,96 g (165,7 mmol) sloučeniny 20a a roztok se za stálého mícháni po kapkách přidá do 250 ml 4 N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu (Aldrich). Po 45 minutách se TLC analýzou potvrdí zpracování výchozích sloučenin. Těkavé podíly se odstraní za sníženého tlaku a zbytek dvakrát odpařuje se 100 ml metanolu. Do hnědého olejovitého zbytku se přidá 300 ml éteru a 10 ml metanolu, směs se míchá přes noc při teplotě místnosti za vzniku sraženiny jako polotuhé látky. Po dalším přidání 15 ml metanolu se v míchání pokračuje 6 hodin, a pak se nažloutlá pevná látka sebere filtrací. Produkt se promyje 50 ml 5% roztokem metanolu v éteru a dvakrát 50 ml éteru. Po sušení ve vakuu vznikne 22,60 g (76% výtěžek) sloučeniny 20b jako nažloutlé pevné látky. Filtrát (včetně promývacích podílů) se odpařuje ve vakuu za vzniku dalšího podílu sloučeniny 20b jako 7,82 g (26% výtěžek) hnědého oleje. Oba podíly jsou dostatečně čisté pro použití k výrobě inhibitorů HCV proteáz: [a]D 25 +38,2 (c 1,0, metanol).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,15 (široké s, 3H), 5,65 (ddd, J = 17,10,9 Hz, 1H), 5,36 (dd, J = 17,1,5 Hz, 1H), 5,19 (dd, J = 10,1,5 Hz, • · · · · ·
- 99 -.............
1H), 3,74 (s, 3H), 2,50 (q, překrytý DMSO, J = 9 Hz, 1H), 1,86 (dd, J = 10, 6 Hz, 1H), 1,64 (dd, J = 8, 6 Hz, 1H).
Příklad 21
Syntéza metylesteru 1-aminocyklobutyl-karboxylové kyseliny
hydrochlorid 21a
HCl / CH30H
21b
1,1-Amino-cyklobutan-karboxylová kyselina se připraví podle Kavin Douglas; Ramaligam Kondareddiar; Woodard Ronald, Synth. Commun. (1985) 15 (4), 267-72. Ve 40 ml bezvodého metanolu se při teplotě 20°C míchá 1,00 g (6,6 mmol) sůl aminokyseliny (21a). Směs se sytí bezvodým chlorovodíkem za vzniku sloučeniny (21 b). Míchaní teto směsi pokračuje další 4 hodiny, horký roztok se filtruje a filtrát se zahustí (Rotavap, 30°C) za vzniku zbytku, který se čistí rozetřením v etyléteru. Po filtraci a sušení vznikne 0,907 g (83%) bílého prasku.
NMR (400MHz, D2): δ CH3O (3H s, 3,97 ppm); CH2 (2H, m, 2,702,77 ppm); CH2 (2H, m, 2,45-2,53 ppm) a CH2 (2H, m, 2,14-2,29 ppm).
Tripeptidy
Příklad 22
Obecný postup vazebných reakcí na pevné fázi.
Syntéza se provede na paralelním syntetizátoru (model ACT396, Advanced ChemTechs) na deskách s 96 prohlubněmi. Obvykle se vyrábí 24 peptidů v paralele za použití standardních technik syntézy na
- 100 pevné fázi. Výchozí komplex (Fmoc-amino)-cyklopropan (eventuálně substituovaná)-karboxylová kyselina - pryskyřice Wang se připraví vazebnou reakcí DCC/DMAP (E. Atherton, R. C. Scheppard, Solid Phase Peptide Synthesis, a Practical Approach; IRL Press: Oxford (1989); str. 131-148).
Každá prohlubeň se naplní 100 mg výchozí pryskyřice (přibližně 0,05 mmol). Pryskyřice se promyje postupně 1,5 ml podíly jedenkrát NMP a třikrát dimetylformamidu. Ochranné skupiny Fmoc se odstraní působením 20 minut 1,5 ml 25%objemových roztoku piperidinu v dimetyl-formamidu. Pryskyřice se promyje 1,5 ml podíly, a to čtynkrat dimetyl-formamidem, třikrát metanolem a třikrát dimetyl-formamidem. Vazebná reakce se provede v 350 μΐ dimetylformamidu, za použití 400 μ| (0,2 mmol) 0,5 M roztoku Fmoc-aminokyseliny v HOBt-hydratu v dimetylformamidu, 400 μΙ (0,4 mmol) 1M roztoku DIPEA v dimetylformamidu a 400 μΙ (0,2 mmol) 0,5M roztoku TBTU v dimetylformamidu. Po 1 hodině protřepávání se prohlubně vysuší, pryskyřice se promyje 1,5 ml dimetylformamidu a vazebná reakce se opakuje ještě jednou za stejných podmínek. Pryskyřice se pak promyje podle shora uvedeného postupu a cyklus se opakuje pro každou aminokyselinu.
Ochranné (capping) skupiny se uvedou do vazby dvěma způsoby;
1. V podobě karboxylové kyseliny, která se naváže podle shora uvedeného postupu nebo
2. jako acylační činidlo (anhydrid nebo kyselý chlorid).
Následující příklad popisuje ochranu anhydridem kyseliny sukcinove: Po oddělení ochranné skupiny Fmoc a následným promytím se přidá 350 μΙ dimetylformamidu, a následně 400 μΙ (0,2 mmol) 0,5 M dimetylformamidového roztoku anhydridu kyseliny sukcinové a 400 μΙ (0,4 mmol) 1,0 M roztoku DIPEA. Pryskyřice se 2 hodiny míchá, a pak se provede vazebná reakce. Nakonec se pryskyřice promyje 1,5 ml podíly, a to třikrát roztokem dichlormetanu, třikrát metanolem, třikrát roztoku
-101- -·· dichlormetanu a suší se 2 hodiny ve vakuu. Odštěpení z pryskyrice a průvodní vazba ochranné skupiny na vedlejší řetězec se provede přidáním 1,5 ml směsi kyseliny trifluoroctové, vody, dithiothreitolu (DTT) a triizopropyl-silanu (TIS) v poměru 92,5 : 2,5 : 2,5 : 2,5. Po 2,5 hodinách protřepávání se pryskyřice filtruje a promyje 1,5 ml roztokem dichlormetanu. Filtrát se sloučí a zahustí vakuovou centrifugací. Každá sloučenina se čistí preparativní HPLC na reverzní fázi za použití kolony C18 (22 mm x 500 mm). Podíly obsahující produkt se určil hmotnostní spektrometrií MALDI-TOF, sloučí se a lyofilizují.
Příklad 23
Obecný postup vazebných reakcí v kapalné fázi {viz také R. Knorr a spol., Tetrahedron Letters, (1989), 30,1927.}
Reakční činidla, t.j. 1 ekv. volného aminu (nebo jeho hydrochloridu) a 1 ekv. volné karboxylové kyseliny se rozpustí v metylenchloridu, metylkyanidu nebo dimetylformamidu. V atmosféře dusíku se do míchaného roztoku přidají 4 ekv. N-metylmorfolmu a 1,05 ekv. vazebného činidla. Po 20 minutách se přidá 1 ekv. druhého reakčního činidla, tj. volné karboxylové kyseliny. (Praktickými a účinnými vazebnými činidly jsou k tomuto účelu: (benzotriazol-1-yl-oxy)tris-(dimetyl-amino)-fosfonium-hexafluorfosfát (HOBT) nebo především 2-(1 H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluronium-tetrafluorborát (TBTU) nebo 0-(7azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluronium-tetrafluorborát (HATU). Průběh reakce se sleduje TLC.
Po ukončení reakce se rozpouštědlo odpařuje za sníženého tlaku. Vytvořený zbytek se rozpustí v etylacetátu. Roztok se promyje postupné 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za
-102 - — · sníženého tlaku. Pokud se zbytek čistí, pak se čištění provede rychlou chromatografií shora uvedeným postupem.
Příklad 24
Syntéza sloučeniny 304
sloučenina 304
a) Na 0,12 g (0,49 mmol) (R,R)-izomeru Boc-Et-Acca-OMe 13c získaného enzymatickou rezolucí (příklad 13) se 45 minut působí 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu, a pak se směs zahustí ve vakuu za vzniku bílé pevné látky. Do přibližně 0,49 mmol hydrochloridu se přidá 0,17 g (0,54 mmol) TBTU, 0,18 g (0,49 mmol) Boc-4(R)-(8-chinolin-metyíoxy)prolinu 5 (příklad 5) a 0,3 ml (1,7 mmol) DIPEA v 10 ml metylkyanidu. Směs se 3,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, a pak se zahustí ve vakuu. Vytvořený materiál
- 103 se rozpustí v etylacetátu a promyje postupně nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku sloučeniny 24b jako 0,122 g (50% výtěžek) bílé pevné látky.
b) Na 0,12 g (0,25 mmol) sloučeniny 24b se 30 minut působí při teplotě místnosti 4N roztokem kyseliny chlorovodíkové v dioxanu, a pak se zahustí ve vakuu. Na přibližně 0,25 mmol vytvořeného hydrochloridu se působí 75 mg (0,27 mmol) Boc-Chg-OH · H2O, 87 mg (0,27 mmol) TBTU v 10 ml metylkyanidu, a nakonec při teplotě 0°C 0,15 ml (0,87 mmol) DIPEA. Zbytek se zředí etylacetátem, postupně se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku 0,2 g sloučeniny 24c jako špinavě bílé pevné látky. Vznikne 0,14 g produktu, který se rozpustí v dimetylsulfoxidu a čistí se preparativní HPLC. Po lyofilizaci vznikne 35 mg (33%výtěžek) sloučeniny 24c jako bílé pevné látky. HPLC (98%);
Hmotnostní spektrum (FAB) m/z: 637,3 (MH+);
HRMS vypočteno pro C35H48N4O7 (MH+): 637,36011:
nalezeno: 637,36250;
1H-NMR (DMSO-d6) výskyt rotamerů: δ 8,91 (dvakrát d, J = 4,1 a 4,1 Hz, 1H), 8,40 - 8,36 (m, 2H), 7,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,6 - 7,54 (m, 2H), 6,80 (d, J = 8. 6 Hz, 1H), (dvakrát s, 2H), 4,40 (bs, 1H), 4,31 (t, J = 8,3Hz, 1H), 4,12 (d, J = 11,44 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 7,9Hz, 1H), 3,78 - 3,72 (m, 1H), 3,56 (s, 3H), 2,35 2,27 (m, 1H), 2,06 - 1,97 (m, 1H), 1,71 - 1,55 (m, 10H), 1,53 - 1,38 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,18 - 1,06 (m, 2H), 1,02 - 0,93 (m, 2H), 0,89 (t, J = 7,3Hz, 3H).
····· ·· · ·· ···
- 104sloučenina 304:
c) Do 30 mg (přibližně 0,047 mmol) sloučeniny 24c se přidá 1 ml metanolu, 1 ml tetrahydrofuranu a 12 mg (0,29 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného v 1 ml vody. Čirý roztok se energicky míchá 48 hodin, a pak se zahustí ve vakuu. Surový peptid se rozpustí v dimetylsulfoxidu a čistí se preparativní HPLC. Po lyofilizaci vznikne 21 mg (72% výtěžek) sloučeniny 304 jako bílé pevné látky. HPLC (99%);
Hmotnostní spektrum (FAB) m/z: (MH+) 623,3;
HRMS vypočteno pro C34H46N4O7 (MH+): 623,34448, nalezeno: 623,34630, 1H NMR (DMSO-de) výskyt rotamerů 1:1: δ 8,90 (dvakrát d, J = 4, 1Hz, 1H), 8,37 (d, J = 8,3Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,3Hz, 1H), 7,77 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,67,53 (m, 2H), 6,88 a 6,79 (dvakrát d, J = 8,6 a 7,9 Hz, 1H), 5,17 a 5,16 (dvakrát s, 2H), 4,43 - 4,35 (bs, 1H), 4,29 (t, J = 8,3Hz, 1H), 3,82 - 3,71 (m, 1H), 2,35 - 2,27 (m, 1H), 2,06 - 1,97 (m, 1 H), 1,72 - 1,53 (m, 10 H), 1,52 - 1,44 (m, 2H), 1,37 a 1,29 (dvakrát s, 9H), 1,18-1,05 (m, 3H), 1,0 - 0,94 (m, 1H), 0,91 (t, J = 7,3Hz, 3H).
• v ·· a-····*· · · . 105 - : ’.·· : .:.
Příklad 25
Syntéza sloučeniny 301
sloučenina 301
a) Do suspenze se uvede 282 mg (1,23 mmol) sloučeniny 25a (=12a) v 6 ml bezvodého metylkyanidu. Postupně se přidá 221 μΙ (1,48 mmol) DBU a 161 μΙ (1,35 mmol) benzylbromidu a vytvořená reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Směs se zahustí, vytvořený olej se zředí etylacetátem a 10% vodným roztokem citrónové kyseliny a postupně dvakrát se promyje 10% roztokem citrónové kyseliny, dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Etylacetátový podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje se do sucha. Surový bezbarvý olej se čistí rychlou chromatografií při eluci gradientem poměrů směsi hexanu a etylacetátu od 95: 5 do 90: 10 za vzniku 368 mg (93%) benzylovaného produktu 25b jako bezbarvého oleje.
Hmotnostní spektrum (FAB): 318,2 MH', 320,2 MH+, 342,2 (M+Na)+,
- 106 NMR (CDCI3): δ 7,37 - 7,28 (m, 5H), 5,22 - 5,10 (m, 1H), 5,19 (d, J = 12Hz, 1H), 5,16 (d, J = 12Hz, 1H), 1,60 - 1,40 (m, 4H), 1,39 (s, 9H), 1,31 - 1,22 (m, 1H), 0,91 (t, J = 7,5,14,5 Hz, 3H).
b) Na 368 mg (1,15 mmol) sloučeniny 25b se působí 6 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu podle shora uvedeného postupu. Surový hydrochlorid se naváže na 470,8 mg (1,27 mmol) sloučeniny 4 (příklad 4) za použití 507μΙ (4,61 mmol) NMM a 525,6 mg (1,38 mmol) HATU (namísto TBTU) v 6 ml metyíenchloridu podle postupu popsaného v příkladě 22 za vzniku surového racemického dipeptidu jako oranžového oleje. Surový materiál se čistí rychlou chromatografií při eluci směsí hexanu a dietyléteru v poměru 50: 50 za vzniku 223 mg (teoretický výtěžek 68%) čistého dipeptidu 25c (méně polární skvrna) jako bílé pěny.
Hmotnostní spektrum 571,4 MH-, 573,3 MH+, 595,3 (M+Na)+, 1H NMR (CDCI3) směs rotamerů přibližně 1:1:5 8,03 (b d, J = 8Hz, 1H), 7,86 (b d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,82 (b d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,61 (bs, 0,5 H), 7,57 - 7,40 (m, 4H), 7,31 - 7,21 (m, 5H), 6,48 (bs, 0,5H), 5,22 - 5,11 (m, 1 H), 5,08 - 4,81 (m, 3H), 4,41 - 3,74 (m, 3H), 3,49 3,18 (m, 1H), 2,76- 1,90 (m, 2H), 1,69 - 1,48 (m, 3H), 1,40 (s, 9H), 1,40 - 1,23 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,5, 15 Hz, 3H).
c) Na 170,1 mg (0,297 mmol) dipeptidu 25c se působí 2 ml 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu podle shora uvedeného postupu. Surový hydrochlorid se naváže na 84,1 mg (0,327 mmol) Boc-ChgOH za použití 130,7 pl (1,19 mmol) NMM a 135,5 mg (0,356 mmol) HATU (namísto TBTU) v 2 ml metyíenchloridu během 2,75 hodin při teplotě místnosti, a pak se zpracuje podle shora uvedeného postupu za vzniku přibližně 211,4 mg surového tripeptidu 25d jako bílé pěny s výtěžkem 100%.
Hmotnostní spektrum (FAB): 712,5 MH+.
- 107- ”·· : sloučenina 301:
d) Ve 2 ml absolutního etanolu se rozpustí přibližně 15,4 mg (0,022 mmol) surového tripeptidu 25d, a následně se přidá odhadnuté množství (špička špachtle) 10% roztoku paladia na aktivním uhlí a octanu amonného. Směs se hydrogenuje přes noc v atmosféře vodíku při teplotě místnosti a při atmosférickém tlaku. Reakční směs se filtruje přes 0,45 pm Millex® filtr, odpařuje se do sucha, zředí se etylacetátem a 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a promyje se znovu jedenkrát 10% vodným roztokem citrónové kyseliny, dvakrát vodou a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se, odpařuje do sucha a lyofilizuje za vzniku 11,0 mg (výtezek 82%) tripeptidu 301 bílé pevné látky.
Hmotnostní spektrum (FAB): 622,5 MH+, 644,5 (M+Na)+, 1H NMR (DMSO), směs rotamerů přibližně 1:4: δ 8,54 & 8,27 (s, 1H), 8,06 - 7,99 (m, 1H), 7,96 - 7,91 (m, 1 H), 7,87 (d, J = 8Hz, 1H), 7 57 _ 7,42 (m, 4H), 6,81 (d, J = 8Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12Hz, 1H), 4,88 (d, J = 12Hz, 1H), 4,46 - 4,19 (m, 2H), 4,17 - 4,02 (m, 2H), 3,88 - 3,67 (m, 1H), 2,28 - 2,19 (m, 1H), 2,05 - 1,93 (m, 1H), 1,73 1,43 (m, 8H), 1,32 - 1,07 (m, 6H), 1,28 (s, 9H), 1,03 - 0,85 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,5, 15Hz, 3H).
- 108 Příklad 26
Syntéza sloučeniny 306
sloučenina 306
b) HCI 4N
c) Boc-CHG-OH TETU CH^Clj
a) Za použiti 192 mg (0,600 mmol) TBTU a 226 mg (1,75 mmol) DIRE v 10 ml metylenchloridu se během 20 hodin sloučí 180 mg (0.500 mmol) kyseliny 26a a 96 mg (0,500 mmol) aminu 15d. Reakční směs se zahustí, zpracuje se etylacetátem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hornatým, filtruje se a zahustí za vzniku 26c jako hnědého oleje, který se použije v následujícím kroku syntézy bez dalšího čistem.
b) c) Přibližně 0,500 mmol surové sloučeniny 26c se 30 minut mícha v 4 ml chlorovodíku v dioxanu a zahusti se do sucha. Pevný produkt se
- 109zpracuje 10 ml metylenchloridu, a pak se postupně přidá 226 mg (1,75 mmol) DIPEA, 138 mg (0,500 mmol) monohydrátu Boc-Chg-OH a 192 mg (0,600 mmol) TBTU. Roztok se 5 hodin míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí, zpracuje se etylacetátem, promyje se dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a zahustí za vzniku hnědého oleje, který se čistí rychlou chromatografií za vzniku 204 mg (výtěžek 64% během dvou vazebných reakcí) sloučeniny 26d jako žlutého oleje.
1H NMR (CDCI3): δ 8,77 - 8,74 (m, 1H), 8,14 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 9, 7 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 8,7 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,80 - 5,70 (m, 1H), 5,35 - 5,27 (m, 2H), 5,14 - 5,07 (m, 2H), 4,89 - 4,83 (m, 1H), 4,39 4,32 (m, 1H), 4,30 - 4,24 (m, 1H), 4,20 - 4,07 (m, 2H), 4,00 - 3,92 (m, 1H), 3,04 - 2,92 (m, 1H), 2,39 - 2,29 (m, 1H), 2,16-2,04 (m, 1H), 1,91 - 1,83 (m, 1H), 1,82 - 1,62 (m, 7H), 1,45 - 1,35 (m, 9H), 1,27 1,07 (m, 8H).
c) Ve 4 ml tetrahydrofuránu a 2 ml metanolu se rozpustí 136 mg (0,214 mmol) sloučeniny 26d. Přidají se 2 ml vodného roztoku 72 mg (1,72 mmol) hydrátu hydroxidu lithného a reakční směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti. Roztok se zahustí a čistí preparativní HPLC za vzniku 25 mg sloučeniny 306 (méně polární izomer) jako bílé pevné látky.
sloučenina 306:
Hmotnostní spektrum (FAB) 607,4 (MH+), 1H NMR (DMSO-d6): 6 9,16 (d, J = 6 Hz, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,35 (d, J = 8 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,05 (dd, J = 8, 7 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8, 7 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8Hz, 1H), 5,75 - 5,66 (m, 2H), 5,19 (d, J = 18 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 10 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 12Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 10,8 Hz, 1H), 4,03 (d, J = * * · «······ · ·
- no- ·-· : *-· :
Hz, 1H), 3,87 - 3,83 (m, 1H), 2,66 -2,59 (m, 1H), 2,36 - 2,30 (m, 1H), 1,98 (dd, J = 18,9 Hz, 1H), 1,75 - 1,56 (m, 8 H), 1,38 - 1,35 (m, 1H), 1,25-1,22 (m, 1 H), 1,09 (s, 9 H), 1,12 - 0,95 (m, 3H).
Příklad 27
Syntéza sloučeniny 307
27ΰ
c) Na roztok 505 mg (105 mmol) kyseliny (8) (příklad 8) v 5 ml dichlormetanu se působí 376 mg (1,17 mmol) TBTU. Do roztoku aktivovaného esteru se přidá 279 mg (1,46 mmol) hydrochloridu (R,S)vinyl-AccaOEt (18) (příklad 18) v 7 ml dichlormetanu obsahující 0,60 ml (5,46 mmol) N-metyl-morfoiinu. Vytvořený roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek zředí se etylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem bikarbonátu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí chromatografií na silikagelu při eluci směsí hexanů a etylacetátu v poměru 60:40 za vzniku 173 mg dipeptidu 27c s výtěžkem 27%.
d, e) Při teplotě místnosti se 1 hodinu míchá roztok 70 mg (0,114 mmol) dipeptidu 27c v 3 ml 4,0 M roztoku chlorovodíku v 1,4-dioxanu (po 10 minutách vznikne sraženina). Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a vytvořených 0,114 mmol amin-hydrochloridu 27d se zředí 1,5 ml acetnitriiu. Roztok neutralizuje přidáním 65 μΙ (0,591 mmol) N-metylmorfolinu. Na roztok 39 mg (0,142 mmol) Boc- ChgOH · H2O v 1,5 ml acetnitriiu se působí 46 mg (0,143 mmol) TBTU, a pak se vytvořený roztok přidá do shora uvedeného roztoku aminu. Vytvořený roztok se 2 dny míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí etylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného. Organický podíl se suší nad síranem horečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu. Vznikne 86 mg (výtěžek 100%) tripeptidu 27e. Surová výsledná sloučenina se použije v následujícím postupu syntézy bez dalšího čištění.
d) Do roztoku 86 mg (0,114 mmol) tripeptidu 27e v 5 ml směsi tetrahydrofuránu a vody v poměru 2,5 : 1 se přidá 22 mg (0,524 mmol) monohydrátu hydroxidu lithného. Přidá se dalších 0,25 ml metanolu za vzniku homogenního roztoku, který se přes noc míchá při teplotě místnosti, a pak se rozpouštědlo odpařuje ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozdělí mezi vodu a etylacetát. Vodný podíl se okyselí přidáním 1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové, a pak extrahuje dvakrát etylacetátem. Požadovaná sloučenina se vyskytuje v etylacetátu z první zásadité extrakce. Organický podíl se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a odpařuje ve vakuu za vzniku 69 mg surové kyseliny, která se čistí preparatorní HPLC. Sloučenina se rozpustí ve 4 ml metanolu a nastřikuje se na ekvilibrovaný sorbent Whatman Partisil 10-ODS-3 (2,2 x 50cm) C18 reversní fáze kolony, (λ = 230 nm, rozpouštědlo A = 0,06% roztok kyseliny trifluoroctové ve vodě, rozpouštědlo B = 0,06% roztok kyseliny trifluoroctové v metyl kyanidu). Program čištění: od 20% do 70% rozpouštědla B během 60 minut. Podíly se analyzují analytickou HPLC. Podíly obsahující výsledný produkt se seberou a lyofilizují za vzniku 50 mg (60%) požadovaného tripeptidu 307 jako bílé pevné látky, sloučenina 307:
1H NMR (DMSO-d6) rotamery: δ 8,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,85 (s, 0,2H), 8,64 (s, 0,8H), 8,49 (dd, J = 9,5, 3Hz, 0,2H), 8,45 (dd, J = 9,2Hz, 0,8H), 8,39 - 8,33 (m, 2H), 8,20 (d, J = 9,5 Hz, 0,2H), 8,18 (d, J = 9,5 Hz, 0,8H), 7,81 (s, 0,2H), 7,78 (s, 0,8H), 7,64 - 7,56 (m, 3H), 6,87 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,36 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,82 - 5,67 (m, 2H), 5,27 - 5,17 (m, 1H), 5,09 - 5,03 (m, 1H), 4,73 (t, J = 8 Hz, 0,2H), 4,55 (dd, J =
10,7,5 Hz, 0,8H), 4,49 - 4,40 (m, 1H), 4,00 - 3,95 (m, 1H), 3,83 - 3,76 (m, 1H), 2,87 - 2,80 (m, 0,2H), 2,69 - 2,62 (m, 0,8H), 2,39 - 2,26 (m, 1H), 2,08 - 2,00 (m, 1H), 1,75 - 1,41 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,32 - 1,27 (m, 1H), 1,17 - 0,82 (m, 5H), 0,94 (s, 7,2H).
Příklad 28
Syntéza sloučeniny 311
sloučenina 310
Sloučenina 311 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 24, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
Sloučenina 310: 1H NMR (DMSO-d6): δ 8,98 (d, J = 6 Hz, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,24 (d, J = 9 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 2Hz, 1H), 7,63 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 6 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,75 - 5,66 (m, 1H), 5,57 (br s, 1H), 5,24-5,19 (m, 1H), 5,08 - 5,01 (m, 1H), 4,57 - 4,40 (m, 2H), 4,00 - 3,96 (m, 1H), 3,82 (dd, J = 9,8 Hz, 1H), 2,59 - 2,54 (m, 1H), 2,32 - 2,26 (m, 1H), 1,99 (dd, J = 17,9 Hz, 1H), 1,74 - 1,55 (m, 8 H), 1,37 (s, 1H), 1,26 - 1,22 (m, 1H), 1,14 - 1,08 (m, 9 H), 1,02 - 0,91 (m, 3H).
- ΪΤ4
Příklad 29
Syntéza sloučeniny 302
Sloučenina 302 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
1H NMR (DMSO-de): δ 8,34 (s, 1H), 8,04-8,01 (m, 1H), 7,94-7,92 (m, 1 H), 7,87 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,54-7,50 (m, 3H), 7,45 (dd, J = 17, 8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,94 (dd, J = 55,12Hz, 2H), 4,34 (s, 1H), 4,27 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 11 Hz, 1H), 4,07 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 3,72-3,65 (m, 2H), 3,59-3,54 (m, 1H), 2,24 - 2,18 (m, 1H), 2,021,95 (m, 2H), 1,75 - 1,70 (m, 1H), 1,53 - 1,44 (m, 2H), 1,32 - 1,27 (m, 1H), 1,21 - 1,17 (m, 1H), 0,96 - 0,85 (m, 10 H), 0,80 - 0,77 (m, 5 H), 0,62-0,57 (m, 1 H).
Příklad 30
Syntéza sloučeniny 308
308
- its Sloučenina 308 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
1H NMR (DMSO-d6) rotamery ~ 2 : 8: δ 8,77 (s, 0,2H), 8,45 (s, 0,8H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 8,03 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 7,89 - 7,83 (m, 1H), 7,55 - 7,37 (m, 4H), 7,05 - 6,59 (m, 1H), 6,95 (d, J = 8 Hz, 0,8H), 6,26 (d, J = 8,5 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,64 (m, 1H), 5,33 - 5,28 (m, 1H), 5,26 - 5,15 (m, 1H), 5,08 - 5,02 (m, 1H), 4,60 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,38 - 4,27 (m, 1,8H), 4,09 - 3,91 (m, 1,8H), 3,74 (dd, J = 12,5, 4 Hz, 0,2H), 2,69 - 2,60 (m, 0,2H), 2,50 - 2,40 (m, 1H), 2,36 - 2,28 (m, 0,2H), 2,23 2,14 (m, 0,8H), 2,05 - 1,97 (m, 0,8H), 1,76 - 1,44 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,29 (s, 7,2H), 1,28 - 1,20 (m, 1H), 1,16 - 0,88 (m, 5H).
Příklad 31
Syntéza sloučeniny 309
Sloučenina 309 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
1H NMR (DMSO-d6) rotamery = 2 : 8: δ 8,75 (s, 0,2H), 8,50 (s, 0,8H), 7,89 - 7,78 (m, 3H), 7,50 - 7,44 (m, 1H), 7,42 - 7,32 (m, 2H), 7,17 7,09 (m, 0,8H), 7,08 - 7,03 (m, 0,2H), 6,79 (d, J = 8,5 Hz, 0,8H), 6,33 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 5,81 - 5,65 (m, 1H), 5,30 - 5,16 (m, 2H), 5,10 - 5,02 (m, 1H), 4,56 (t, J = 7,5 Hz, 0,2H), 4,33 (t, J = 8 Hz, 0,8H), 4,10 - 3,90 (m, 2,8H), 3,74 - 3,68 (m, 0,2H), 2,45 - 2,37 (m, 1H), 2,34 - 2,17 (m, ····· · · · ·· ···
- 116 1H), 2,05 - 1,97 (m, 1H), 1,76 - 1,48 (m, 7H), 1,37 (s, 1,8H), 1,23 (s, 7,2H), 1,21 - 0,88 (m, 6H).
Příklad 32
Syntéza sloučeniny 305
305
Sloučenina 305 se připraví podle postupu popsaného v příkladě 27, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
’H NMR (DMSO-d6) rotamery (1: 9): δ 8,68 (s, 0,1 H), 8,43 (s, 0,9H), 8,04-8,00 (m, 1H), 7,95 - 7,91 (m, 1H), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,57 7,49 (m, 3H), 7,47 - 7,42 (m, 1H), 6,82 (d, J = 8,5 Hz, 0,9H), 6,21 (d, J = 8,5 Hz, 0,1H), 5,80 - 5,64 (m, 1H), 5,21 (dd, J = 17,2Hz, 0,1H), 5,18(dd, J = 17,2Hz, 0,9H), 5,06 (dd, J = 10,5, 2Hz, 1H), 5,02 - 4,85 (m, 2H), 4,43 (t, J = 7,5 Hz, 0,1 H), 4,34 (brs, 1H), 4,23(t,J = 8,5 Hz, 0,9H), 4,16 - 4,05 (m, 1,8H), 3,89 - 3,82 (m, 0,2H), 3,74 (dd, J = 11, 3,5 Hz, 0,9H), 3,53 (dd, J = 12, 5,4 Hz, 0,1 H), 2,30 - 2,21 (m, 1H), 2,02 - 1,94 (m, 2H), 1,74- 1,38 (m, 7H), 1,36 (s, 0,9H), 1,28 (s, 8, 1H), 1,25 - 0,87 (m, 6H).
Příklad 33
Syntéza sloučeniny 303 • · · · ·
- 117 -
303
Sloučenina 303 se připraví podle postupu popsaného v příkladě TI, ale za použití odpovídajících stavebních jednotek.
Ή NMR (DMSO-d6): δ 8,29 (s, 1H), 8,04 - 8,01 (m, 1H), 7,94 - 7,92 (m, 1 H), 7,87 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,56 - 7,52 (m, 3H), 7,46 (dd. J = 8,/ Hz, 1H), 7,19 (d, J = 9 Hz, 1H). 5,01 (d, J = 12Hz, 1H). 4,86 (d, J = 12Hz, 1H), 4,34 (br s, 1H), 4,24 (t, J = 8Hz, 1 H), 4,18 - 4,09 (m, 2H), 3,74 3,53 (m, 3H), 2,24 - 2,18 (m, 1H), 2,04 - 1,95 (m, 1H), 1,74 - 1,45 (m, 10 H), 1,31 -1,13 (m, 4 H), 0,96 - 0,86 (m, 7 H), 0,79 - 0,76 (m, 5 H).
Příklad 34
Syntéza sloučeniny 403
DMF
- ITO -*
a) Vazebná reakce P2 s P1
Při teplotě místnosti se 1 hodinu míchá 170 mg (0,355 mmol) metylesterového derivátu 7 (34a) ve 4 ml 50% roztoku tetrahydrofuranu v metanolu a 1 ml 1M vodného roztoku hydroxidu lithného. Roztok se zahustí (Rotavap, 30°C), zbytek se okyselí k pH 6 a roztok se lyofilizuje. Vytvořený prášek se míchá v 3 ml bezvodého dimetylformamidu za přítomnosti 0,4 ml DIEA, a následně se postupně přidá 140 mg (0,845 mmol) hydrochloridu metylesteru 1,1-amino-cyklobutyl-karboxylové kyseliny 34b a 134 mg (0,417 mmol) TBTU. Po 18 hodinách míchání při teplotě místnosti se směs čistí rychlou chromatografií na silikagelu (230400 Mesh) při eluci směsí etylacetátu a hexanu v poměru 1:2 za vzniku 98 mg (čistota podle HPLC 90%) oranžového oleje.
b) Vazebná reakce P1-P2 s P3
(34b)
1. HCl / dioxan
2. Boc-NH^cOjH
TBTU/ DIEA/DMF
3. vodný KOH
4. vodný 'FA
403
V 5 ml 4N roztoku chlorovodíkové v dioxanu se 1 hodinu míchá 97 mg (90%, 0,155 mmol) dipeptidu 34b při teplotě místnosti. Roztok se pak zahustí do sucha (Rotavap, vysoké vakuum) za vzniku béžové pevné látky. Tento materiál se míchá ve 2 ml bezvodého dimetylformamidu při teplotě místnosti za přítomnosti 0,4 ml DIEA, a následně se přidá 80 mg (0,35 mmol) L-Boc-Tbg a 112 mg (0,35 mmol) TBTU. Po 2 dnech míchání při teplotě místnosti se roztok vlije do etylacetátu k získání .:λ ’ *.·* *· * ’·*’ ·“
- 119 - volných bází za použití 5% vodného roztoku uhličitanu draselného. Organický podíl se zpracuje za vzniku žlutého olejovitého zbytku. Materiál se čistí rychlou chromatografíí na silikagelu (230-400 Mesh) za použití směsi etylacetátu a hexanu v poměru 1:2 a 3:1. Získá se 40 mg oleje, podle HPLC homogenního.
Mícháním při teplotě místnosti se během 3 hodin sapomfikuje 40 mg metylesteru ve 2 ml 1N roztoku hydroxidu draselného ve 4 ml metanolu. Reakční směs se zahustí (Rotavap, 30°C) a k pH 4 se okyselí přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Směs se čistí preparativní HPLC na C18 koloně při eluci gradientem koncentrací vodného roztoku acetmtnlu od 0 do 50% obsahujícího 0,1% roztok kyseliny trifluoroctove pri 220 nm. Podíly obsahující požadovaný produkt se oddělí, zahusti na poloviční objem a lyofilizuje se za vzniku 10 mg sloučeniny 403 bíle pevné látky.
iH NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ směs rotamerů: NH+ (1H, s, 8,6 ppm), CH (3H, m, 8,2 ppm), Ph (5H, široké s, 7,66 a 7,53 ppm), CH (1H, široké, 7,22 ppm), NH (1H, d, J = 7,6 Hz, 6,71 ppm), CHO (1H, široké s, 5,76 ppm), CH (2H, m, 4,58 - 4,49 ppm), CH (1H, m, 4,04 ppm), CH3O (3H, s, 3,97 ppm), CH (1H, d, 3,86 ppm), CH (7H, velmi široké, 1,8 2,6 ppm), Boc skup. (9H, s, 1,25 ppm) a t-butyl skup. (9H, s, 0,97 ppm). Hmotnostní spektrometrie: M+H+ při m/e 675 (100%),
HPLC vrchol 98% při teplotě 18,9 minut.
Příklad 35
Syntéza sloučeniny 333 (tabulka 3)
Roztok 9,15 ml (81,4 mmol) m-anisidinu 35a a 10,0 ml (81,3 mmol) dimetyl-acetylen-dikarboxylátu 35b ve 160 ml metanolu se 2 hodiny zahřívá pod refluxem. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně při eluci směsí hexanů a etylacetátu v poměru 90:10. Získá se 17,0 g (79% výtěžek) sloučeniny 35c jako oranžového oleje.
1H NMR (CDCI3): δ 9,62 (široké s, 1H), 7,17 (dd, J = 7 a 8,5 Hz, 1 H), 6,66 - 6,62 (m, 1H), 6,49 - 6,45 (m, 2H), 5,38 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,71 (s, 3H).
(35d) (35c)
- 171 -*
V lázni písku pří vnitřní teplotě přibližně 250°C se zahřívá 50 ml difenyléteru. V 5 ml difenyl-éteru se rozpustí 7,5 g (28,3 mmol) sloučeniny 35c a roztok se během 2 minut přidá do vroucího rozpouštědla. Směs se 5 minut zahřívá, a reakční směs se pak nechá zchladit na teplotu místnosti. Rychle se vytvoří béžová pevná látka jako sraženina, která se oddělí filtrací, a pak se rozetře s metanolem. Vznikne 4,1 g (62% výtěžek) požadované sloučeniny 35d.
1H NMR (DMSO-d6): δ 7,97 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 9 a 2Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,84 (s, 3H).
Roztok 1,71 g (5,33 mmol) derivátu cis-4-hydroxy-L-prolinu 35e, 1,25 g (5,36 mmol) derivátu 4-hydroxy-chinolinu 35f a 2,80 g (10,68 mmol) trifenylfosfinu v 75 ml tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu 0°C, pomalu po kapkách se během 1 hodiny přidá 1,70 ml (10,80 mmol) DEAD. Reakční směs se pak nechá zahřát pomalu na teplotu místnosti a v míchání se pokračuje přes noc. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatog rafií při eluci směsí etylacetátu a hexanu v poměru 70:30. Vznikne 0,7 g čisté sloučeniny 35g a 1,8 g sloučeniny 35g kontaminované přibližně 50% trifenylfosfát-oxidem jako bílé pevné látky.
NMR (CDCl3) rotamery v poměru 4: 6: δ 8,04 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 - 7,32 (m, 6H), 7,23 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H),
- 122 5,33 - 5,13 (m, 3H), 4,66 (t, J = 7,5Hz, 0,4H), 4,54 (t, J = 8Hz, 0,6H) 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 4,04-3,80 (m, 2H), 2,78 - 2,65 (m, 1H), 2,47 - 2,34 (m, 1H), 1,45 (s, 3,6H), 1,37 (s, 5,4H).
Do roztoku 0,70 g (1,31 mmol) benzyl-esteru derivátu prolinu 35g ve směsi 10 ml metanolu a 10' ml etylacetátu se přidá 100 mg 10% katalyzátoru paladia na aktivním uhlí. Vytvořená suspenze se míchá při teplotě místnosti v atmosféře vodíku 1,5 hodiny. Katalyzátor se pak filtruje na filtrační jednotce Millex-HV Millipore (0,45 pm) a rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu. Vytvoří se kvantitativní výtěžek 0,59 g požadované kyseliny 35h.
1H NMR: (CDCI3) rotamery v poměru 70:30: δ 8,06 (d, J = 9,5 Hz, 0,3H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 0,7 H), 7,56 (d, J = 2Hz, 1H), 7,44 (široké s, 0,7 H), 7,41 (široké s, 0,3 H), 7,24 (dd, J = 9 H), 4,08 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 4,04 - 3,80 (m, 2H), 2,83 - 2,72 (m, 1H), 2,71 - 2,47 (m, 1H), 1,46 (s, 9H).
- 123 -
Na 215 mg (1,21 mmol) soli aminu 35i v 7 ml acetnitrilu se působí 0,95 ml (5,45 mmol) DIEA. Tento roztok se pak přidá do roztoku 590 mg (1,32 mmol) kyseliny 35h a 389 mg (1,21 mmol) TBTU v 5 ml metylkyanidu. Vytvořený roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se zředí etylacetátem a promyje dvakrát nasyceným roztokem bikarbonátu sodného, jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a susi se nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně při eluci směsi etylacetátu a hexanů v poměru 75:25 za vzniku 527 mg (70% výtezek) požadovaného dipeptidu 35j.
NMR (CDCI3): δ 8,01 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,22 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H), 5,81 - 5,71 (m, 1H), 5,36 - 5,28 (m, 2H), 5,18 - 5,12 (m, 1H), 4,61 - 4,45 (m, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,91- 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99 - 2,84 (m, 1H), 2,49 - 2,34 (m, 1H), 2,20 - 2,08 (m, 1H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,58 - 1,52 (m, 1H), 1,44 (s, 9H).
- 124-
Roztok 716 mg (1,25 mmol) diesteru 35j ve směsi 1,5 ml tetrahydrofuranu a 1,5 ml metanolu se zchladí na teplotu 0°C, a pak se na zchlazený reakční roztok působí 1,25 ml (1,25 mmol) 1M vodného roztoku hydroxidu sodného. Po 1 hodině míchání při teplotě 0°C se směs neutralizuje přidáním 3 kapek ledové kyseliny octové. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a sloučenina se suší několikahodinovým odčerpáváním.
(35K)
- 175*- ’
Roztok 1,25 mmol sodné soli kyseliny 35k a 0,19 ml (1,36 mmol) trietylnitritu v 8 ml tetrahydrofuranu se zchladí na teplotu 0°C a přidá se 0,18 ml (1,39 mmol) izobutyl-chlor-mravenčanu. Po 40 minutách se přidá 9 ml (6,30 mmol) diazometanu a vytvořený roztok se 30 minut míchá při teplotě 0°C a 2 hodiny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí etylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým, rozpouštědlo se odpařuje ve vakuu a zbytek se čistí rychlou chromatografií na koloně při eluci směsí hexanů a etylacetátu v poměru 50:50 za vzniku 378 mg (52% výtěžek) požadovaného diazoketonu 35I. 1H NMR (CDCI3): δ 8,00 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 9 a 2,5 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,81 - 5,71 (m, 1H), 5,35 - 5,28 (m, 3H), 5,17 - 5,13 (m, 1H), 4,61- 4,40 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,96 - 3,74 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,94 - 2,38 (m, 2H), 2,18 - 2,06 (m, 1H), 1,98 - 1,84 (m, 1H), 1,57 - 1,52 (m, 1H), 1,42 (s, 9H).
Do zchlazeného (0°C) roztoku 0,37 g (0,642 mmol) diazoketonu 35I v 15 ml tetrahydrofuranu se přidá 0,25 ml 48% bromovodíku. Vytvořený žlutý roztok se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Reakční směs se rozdělí mezi etylacetát a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organický
- 126 podíl se ještě jednou promyje hydrogenuhličitanem sodným a susi se nad síranem sodným. Po odpařování rozpouštědla ve vakuu vznikne 0,36 g (90% výtěžek) a-brom ketonu 35m.
Na roztok 170 mg (0,271 mmol) α-bromketonu 35m v 10 ml izopropanolu se působí 64 mg (0,542 mmol) 1 -acetyl-2-thio-močovmy. Vytvořený roztok se 1 hodinu zahřívá na teplotu 75°C. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Vytvořený zbytek se zředí etylacetátem a dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem hořečnatým. Odpařováním rozpouštědla ve vakuu vznikne 182 mg (výtěžek vyšší než 100%) surového produktu 35n.
-127
Na 145 mg (0,223 mmol) dipeptidu 35n se působí 3 ml 4M roztoku chlorovodíku v dioxanu. Vytvořený roztok se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se suší odčerpáváním. Na sůl aminu 35o v 5 ml metylkyanidu se působí 195 μΙ (1,12 mmol) DIEA. Tento roztok se pak přidá do roztoku 103 mg (0,446 mmol) Boc-terc-butylglycinu a 186 mg (0,489 mmol) HATU v 3 ml metylkyanidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Metylkyanid se odpaří ve vakuu a vytvořený zbytek se zředí etylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhlicitanu sodného, jedenkrát nasyceným roztokem chloridu sodného a susi se nad síranem hořečnatým. Po odstranění rozpouštědla se získá 274 mg (> 100%) surového tripeptidu 35p.
- 128-
Roztok 56 mg (0,0733 mmol) tripeptidu 35p ve 4 ml 4M roztoku chlorovodíku v dioxanu se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se susi odčerpáváním.
Získaná sůl aminu se rozpustí ve 4 ml metylenchloridu a na roztok se působí 0,13 ml (0,746 mmol) DlEA, a následně 26 mg (0,0876 mmol) trifosgenu. Po 3 hodinách inkubace se přidá 20 mg (0,146 mmol) 1,2,2-trimetyl-propylaminu Čehož syntéza je popsaná v N. Moss, J. Gauthier, J.M. Ferla, Feb. 1995, SynLett. (2), str. 142-144). Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se přes noc míchá při teplote místnosti. Po odpaření metylenchloridu ve vakuu se vytvořený zbytek zředí etylacetátem, dvakrát se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jedenkrát nasyceným roztokem chloridu
-729 sodného a suší se nad síranem hořečnatým za vzniku 60 mg (výtěžek
100%) požadované močoviny 35q.
Na roztok 57 mg (0,0721 mmol) metylesteru 35q ve směsi 2,5 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody se působí 25 mg (0,595 mmol) pevného hydrátu hydroxidu lithného (LiOH H2O), a následně se přidá 1 ml metanolu k vytvoření čirého roztoku. Po 4 hodinách míchání při teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje přidáním 1 M roztoku chlorovodíku. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním ve vakuu a zbytek se čistí preparativní chromatografií. Sloučenina se rozpustí v 2,5 ml metanol, vstříkne se na ekvilibrovaný sorbent Whatman Partisil 10-ODS3 (2,2 x 50 cm) C18kolony v reverzní fázi. Postup čištění: lineární gradient rychlostí průtoku 20 ml/nm, λ 220 nm, vstříknuto při 10% A do 60% A během 60 minut. A: 0,06% roztok kyseliny trifluoroctové v metylkyanidu; B: 0,06% kyseliny trifluoroctové ve vodě. Podíly se analyzují analytickou HPLC. Produkt sebere a lyofilizuje za vzniku 15 mg sloučeniny 333 jako špinavě bílé pevné látky s 27%výtěžkem.
1H NMR (DMSO-d6): δ 8,88 (s, 0,2H), 8,84 (d, J = 4,5 Hz, 0,2H), 8,68 (d, J = 8,5 Hz, 0. H), 8,56 (s, 0,8H), 8,40 - 8,13 (m, 1,5H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 0,2H), 7,72-7,44 (m, 2,4H), 7,35 - 7,09 (m, 1,2H), 6,98 (d, J = 9 Hz, 0,2H), 6,15 (d, J = 9Hz, 0,2H), 6,06 (d, J = 9Hz, 0,8H), 5,93 (d, J = 9,5 Hz, 0,24H), 5,86 (d, J = 9Hz, 0,8H), 5,79 - 5,67 (m, 1H), 5,69 - 5,44
- T30 - ........
(m, 1H), 5,24 - 5,14 (m, 1H), 5,09 - 5,01 (m, 1H), 4,50 - 4,35 (m, 2H). 4,24 (d, J = 9,0Hz, 0,2H), 4,20 (d, J = 9,0 Hz, 0,8H), 4,06 - 3,98 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,77 - 3,60 (m, 2H), 2,58 - 2,50 (m, 1H), 2,33 - 2,28 (m, 1H), 2,22 (s, 2,4H), 2,21 (s, 0,6H), 2,02 (q, J = 9Hz, 1H), 1,56 -1,38 (m, 1H), 1,28 - 1,22 (m, 1H), 0,97 (s, 9H), 0,83 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,72 (s, 9H).
Hmotnostní spektrum (FAB) 778,3 (m + H) +, 776,3 (M-H)-.
Příklad 36
Klonování, exprese a čištění rekombinantní proteázy NS3 viru HCV typu 1 b.
Sérum virem HCV infikovaného pacienta se získá širší spoluprácí vědeckých týmů (Bernard Willems MD, Hópital St-Luc, Montréal, Kanada a Dr. Donald Murfy, Laboratoire de Santé Publique du Québec, Ste-Anne de Bellevue, Canada). Kopie HCV genomu, resp. cDNA v celé délce, která se získá reverzní transkripcí-polymerázovou řetězovou reakcí (RT-PCR) sérové RNA za použití specifických primerů vybraných na základě homologie mezi ostatními liniemi genotypu 1b. Tento HCV izolát byl zařazen do genotypové skupiny 1b (Simmonds a spoL, J. Clin. Microbiol., (1993), 31, str. 1493-1503) na základě stanovení jeho kompletní genomické sekvence. Sekvence aminokyselin nestrukturální oblasti NS2-NS4B se ukázala zvíce než 93% identická s HCV genotypem 1b (BK, JK a 483 izolantů) a 88% identických s HCV genotypem 1a (HCV1 izolát). DNA fragment kódující polyproteinový prekurzor (NS3/NS4A/NS4B/NS5A/ /NS5B) se vyrobí pomocí PCR a zavede se do eukaryotního expresního vektoru. Po přechodné transfekci se zpracování polyproteinu zprostředkované proteázou NS3 viru HCV projeví při Western-blot analýze přítomností kompletního funkčního NS3 proteinu. Tento NS3 protein se neprojevil expresí polyproteinového
- 131 prekurzoru s mutací S1165A, která inaktivuje NS3 proteázu, čímž se potvrzuje funkční schopnost proteázy NS3 viru HCV.
DNA fragment kódující rekombinantní proteázu NS3 viru HCV (aminokyseliny 1027 až 1206) se klonuje v bakteriálním expresním vektoru pET11d. Exprese NS3 proteázy v E. coli BL21 (DE3) pLysS se navodí 3 hodinovou inkubací 1 mM roztokem IPTG při teplotě 22°C. Fermentací (18 I) vznikne přibližně 100 g vlhké buněčné pasty. Buňky se znovu uvedou do suspenze v 3,0 ml/g lyzátového pufru obsahujícího 25 mM roztoku fosfátu sodného o pH 7,5, 10%objemových glycerolu, 1 mM roztoku EDTA a 0,01% NP-40 a uskladní se při teplotě -80°C. Buňky se rozmrazí a homogenizují s následným přidáním 5 mM roztoku DTT. Přidá se chlorid hořečnatý a DNáza do konečné koncentrace homogenátu 20 mM a 20 pg/ml. Po 25 minutách inkubace při teplotě 4°C se homogenát zpracuje působením ultrazvuku a centrifuguje se 30 minut při 15000xg při teplotě 4°C. Hodnota pH supernatantu se pak upraví na 6,5 za použití 1M roztoku fosfátu sodného.
K postupu čištění ve dvou krocích popsanému ve zveřejněné přihlášce WO č. 95/22985 se přidá ještě gelová filtrace. Supernatant z bakteriálního extraktu vstříkne na sorbent kolony SP HiTrap (Pharmacia), který se předem ekvilibruje v pufru A o rychlosti průtoku 2 ml/min (50 mM roztoku fosfátu sodného o pH 6,5, 10% glycerol, 1 mM roztoku EDTA, 5 mM roztoku DTT, 0,01% NP-40). Kolona se promyje pufrem A obsahujícím 0,15 M roztoku chloridu sodného a proteáza se eluuje deseti objemy kolony lineárním gradientem od 0,15 do 0,3M roztoku choridu sodného. Podíly obsahující NS3 proteázu se spojí a zředí do konečné koncentrace 0,1 M chloridu sodného. Enzym se dále čistí na koloně HiTrap Heparin (Pharmacia), jejíž sorbent se ekvilibruje pufrem B (25 mM roztoku fosfátu sodného o pH 7,5, 10% glycerol, 5 mM roztoku DTT, 0,01 % NP-40). Vzorek nastřikuje při průtokové rychlosti 3 ml/min. Kolona se pak promyje pufrem B obsahujícím 0,15 M
-1*32 -· ........
roztoku chloridu sodného průtokovou rychlostí 1,5 ml/min. Promytí se provede ve dvou krocích za přítomnosti pufru B obsahujícího 0,3 nebo 1 M roztoku chloridu sodného. Proteáza se promyje 0,3M roztokem chloridu sodného, trojnásobně se zředí pufrem B, a znovu se umístí na kolonu HiTrap Heparin při eluci pufrem B obsahujícím 0,4 M roztoku chloridu sodného. Podíly obsahující NS3 proteázu se umístí na kolonu Superdex 75 HiLoad 16/60 (Pharmacia) ekvilibrované pufrem B obsahujícím 0,3 M roztoku chloridu sodného. Podle SDS-PAGE a následnou denzitometrickou analýzou je čistota proteázy NS3 viru HCV získané ze spojených podílů vyšší než 95%.
Enzym se uskladní při teplotě -80°C, a před použitím se rozmrazí na ledu a zředí.
Příklad 37
Radiometrické hodnocení působení komplexu rekombinantní proteázy NS3 viru HCV a NS4A peptidového kofaktoru
Enzym se klonuje, exprimuje a připraví podle postupu popsaného v příkladě 30. Enzym se uskladní při teplotě -80°C, rozmrazí se na ledu a před zkouškou se zředí pufrem pro zkoušku obsahujícím peptidový NS4A kofaktor.
Mezi cysteinovými a serinovými zbytky se enzymaticky štěpí substrát pro radiometrickou zkoušku DDIVPC-SMSYTW. Sekvence DDIVPC-SMSYTW odpovídá přirozenému místu štěpení NS5A/NS5B, kde cysteinový zbytek v segmentu P2 se nahradil prolinem. Peptidový substrát DDIVPC-SMSYTW a indikátor biotin-DDIVPC-SMS[125l-Y]TW se inkubují s rekombinantní NS3 proteázou a NS4A peptidovým kofaktorem KKGSWIVGRIILSGRK (molární poměr enzym : kofaktor = 1: 100) bez nebo s použitím inhibitorů. Oddělení substrátu z produktu se provede přidáním kuliček avidinem obalené agarózy, a následně filtrací.
- .133 ·:
Z množství SMS[1251-Y]TW produktu ve filtrátu lze vypočítat přeměnu substrátu v procentech a procenta inhibice.
A. Činidla
Tris a Tris-HCI (UltraPure) vyrábí firma Gibco-BRL. Glycerol (UltraPure), MES a BSA vyrábí firma Sigma. TCEP lze získat od firmy Pierce, DMSO z Aldrich a hydroxid sodný z Anachemia.
Pufr pro zkoušku: 50 mM roztok Tris HCI o pH 7,5, 30% hmotnostně /objemová glycerolu, 1 mg/ml BSA, 1 mM roztoku TCEP (TCEP se přidá před použitím z 1 M zásobního roztoku ve vodě).
Substrát: DDIVPCSMSYTW, konečná koncentrace 25 μΜ (k zabránění oxidace se používá z 2 mM zásobního roztoku v DMSO uskladněného při teplotě —20°C).
Indikátor: redukovaný monojodovaný substrát biotin DDIVPC SMS[125I Y]TW o výsledné koncetraci přibližně 1 nM.
Proteáza NS3 viru HCV typu 1b o konečné koncetraci 25 nM (ze zásobního roztoku 50 mM fosfátu sodného o pH 7,5, 10% glycerolu, 300 mM roztoku chloridu sodného, 5 mM DTT, 0,01% NP40).
Peptidový NS4A kofaktor: KKGSWIVGRIILSGRK, konečná koncentrace roztoku 2,5 μΜ (ze 2 mM zásobního roztoku v DMSO uskladněného při teplotě -20°C).
B, Protokol postupu
Zkouška se provede na polypropylenové plotně s 96 prohlubněmi firmy Costar. Každá prohlubeň obsahuje:
μΙ substrátu / indikátoru v pufru pro zkoušku μΙ ± inhibitoru v 20% roztoku DMSO / pufru pro zkoušku μΙ NS3 proteázy typu 1b / NS4 peptidový kofaktor (molární poměr = 1: 100).
* · ·· ·»····· · · • * · · · · · - 1¾ - ........
Slepý vzorek (žádný inhibitor a žádný enzym) a kontrolní vzorek (žádný inhibitor) se také připraví na stejné plotně zkoušky.
Enzymatická reakce se zahájí přidáním roztoku komplexu enzymu a NS4A peptidu a zkoumaná směs se 40 minut inkubuje při teplotě 23°C při mírné agitaci. K ukončení enzymatické reakce se přidá 10 μΙ 0,5N roztoku hydroxidu sodného a 10 μ11 M roztoku MES o pH 5,8.
Na filtrační desku Millipore MADP N65 se přidá 20 μΙ kuliček avidinem obalené agarózy (Pierce). Po ukončení enzymatické reakce se zkoumaná směs přenese na filtrační desku a při mírné agitaci se inkubuje 60 minut při teplotě 23°C.
Desky se filtrují za použití filtračního zařízení Millipore MultiScreen Vacuum Manifold Filtration. Na neprůhlednou desku s 96 prohlubněmi obsahující 60 μΙ scintilačního kokteilu v každé prohlubni se přenese 40 μΙ filtrátu.
Radioaktivita filtrátu se měří na zařízení TopCount firmy Packard s použitím protokolu pro 125l-kapalina za 1 minutu.
Procenta inhibice se vypočítají podle následující rovnice:
100-[(početinh-početS|ep)/ (početkontr -početsiep) X 100]
Výsledky experimentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena IC50 (koncentrace vedoucí k 50% inhibici) za použití SAS softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. Cary, N. C.).
Příklad 38
Sledování aktivity NS3-NS4A heterodimerového proteinu (o celé délce)
Nekódující segment NS2-NS5B-3' se klonuje pomocí RT-PCR ve vektoru pCR®3 (Invitrogen) za použití RNA extrahované ze séra
-•135 infikovaného jedince virem HCV genotypem 1b (poskytnutého Dr. Bernardem Willemsem, Hópital St-Luc, Montreal, Québec, Canada). DNA oblast NS3-NS4A se nejprve klonuje pomocí PCR ve vektoru exprese baculoviru pFastBac™HTa (Gibco/BRL). Vektorová sekvence obsahuje oblast kódující 28-zbytek N-terminální sekvenci o 28 zbytcích se značkou z 6 histidinů. Systém exprese baciloviru Bac-to-Bac™ (Gibco/BRL) se použije k přípravě rekombinantního baculoviru. Heterodimerový zralý protein NS3 a NS4A o plné délce (His-NS3NS4AFL) se exprimuje 0,1-0,2 násobnou infekcí 106 Sf21 buněk / ml rekombinantním bacilovirem při teplotě 27°C. Infikovaná kultura buněk se sklidí po 48 až 64 hodinách odstředěním při teplotě 4°C.
Buněčná peleta se homogenizuje v 50 mM roztoku NaPO4 o pH 7,5, 40%hmotnostně objemových glycerolu a 2 mM roztoku β-merkaptoetanolu za přítomnosti směsi proteázových inhibitorů. His-NS3-NS4AFL se z buněčného lyzátu extrahuje za použití 1,5%NP-40, 0,5% TritonXlOO, 0,5M chloridu sodného a DNázy. Po odstředění ultracentrifugou se rozpustný extrakt čtyřnásobně zředí a absorbuje na chelatační kolonu Pharmacia Hi-Trap Ni- , kde se His-NS3-NS4AFL eluuje ve více než 90% formě (podle SDS-PAGE) gradientem 50 až 400 mM roztoku imidazolu. Tento produkt, His-NS3-NS4AFL se uskladní při teplotě -80°C v 50 mM roztoku fosfátu sodného o pH 7,5, 10% (hmotnostně/objemových) glycerolu, 0,5 M roztoku chloridu sodného, 0,25 M roztoku imidazolu, 0,1 % NP-40. Produkt se před použitím rozmrazí na ledu a zředí.
Aktivita proteázy His-NS3-NS4AFL se sleduje v 50 mM roztoku Tris-HCI o pH 8,0, 0,25 M roztoku citrátu sodného, 0,01% (hmotnostně/objemových) n-dodecyl-p-D-maltosidu a 1 mM roztoku TCEP. Roztok 1,5 nM His-NS3-NS4AFL se 45 minut inkubuje při teplotě 23°C s 5 μΜ roztokem vnitřně zhašeného substrátu antranilylDDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH za přítomnosti různých • · · · ······· · · -.1:36-: ·..· : ·..· .:.
koncentrací inhibitoru. Konečná koncentrace DMSO nepřesáhla 5,25%. Reakce se ukončí přidáním 1M roztoku MES o pH 5,8. Fluorescence Nterminálu produktu se odečítá florimetrem Perkin-Elmer LS-50B vybaveném čtečkou plotny s 96 prohlubněmi (vlnová délka excitačního záření: 325 nm, vlnová délka emisního záření: 423 nm). Výsledky experimentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena IC5o (koncentrace vedoucí k 50% inhibici) za použití SAS softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. Cary, N. C.).
Příklad 39
Sledování účinku NS3 proteázy v buňkách
Sledování se provede na linii lidských buněk získaných z hepatomu označovaných jako Huh-7. Do buněk byly současně transfekcí zavedeny 2 DNA systémy:
1. systém exprimující polyprotein obsahující nestrukturální proteiny viru HCV ve fúzi stTA v následujícím pořadí: NS3NS4A-NS4B-NS5A-tTA (označovaný jako NS3),
2. systém exprimující reporterový protein, sekreční alkalickou fosfatázu, pod kontrolou tTA (označovaný jako SEAP).
K uvolnění dokonalých proteinů se polyprotein musí štěpit NS3 proteázou. Po uvolnění zralých proteinů se předpokládá, že virové proteiny vytvoří komplex na membráně endoplazmatického retikula, zatímco tTA migruje do jádra a změní aktivitu SEAP genu. Z toho vyplývá, že by snížení NS3 proteolytické aktivity mělo vést ke sníženi hladiny zralého tTA a k průvodnímu snížení SEAP aktivity.
Ke kontrole ostatních účinků sloučenin se provede paralelní transfekce, kde se systém exprimující samotný tTA (označovaný tTA)
-.1371 současně transfektuje systémem SEAP tak, aby aktivita SEAP byla nezávislá na NS3 proteolytické aktivitě.
Protokol postupu zkoušky:
Buňky Huh-7 se pěstují na CHO-SFMII + 10% FCS (fetální telecí sérum), transfektují se buď NS3 a SEAP nebo tTA a SEAP za použití protokolu FuGen (Boehringer Mannheim). Po 5 hodinách při teplotě 37°C se buňky promyjí, natráví trypsinem se a umístí na plotnu s 96 prohlubněmi (80 000 buněk / prohlubeň) obsahující různé koncentrace zkoumaných sloučenin. Po 24 hodinách inkubace se podíl živného prostředí oddělí a aktivita SEAP v tomto podílu se měří pomocí kitu Phosfa-Light (Tropix).
Výpočet procent inhibice SEAP aktivity v závislosti na koncentraci sloučeniny se provede SAS softwarovým programem, kterým se vypočítá hodnota EC5q.
Toxický účinek sloučeniny (TC50) se následné hodnotí zkouškou MTT: 20 μΙ MTT roztoku (5 mg/ ml živného prostředí) se přidá do každé prohlubně a 4 hodiny se inkubuje při teplotě 37°C, živné prostředí se odstraní a přidá se 50 μΙ 0,01 N roztoku kyseliny chlorovodíkové + 10% Triton X-100. Směs se protřepává nejméně 1 hodinu při teplotě místnosti, absorbance každé prohlubně se odečítá při vlnové délce 595 nm.
Hodnota TC50 se vypočítá podle stejného postupu jako při výpočtu
EC50.
-^38-· '··’ ; ·
Příklad 40
Stanovení specifity sloučenin
Specifita zkoumaných sloučenin se stanoví porovnáním jejich účinku na několik proteáz: lidskou leukocytární elastázu, prasečí pankreatickou elastázu a hovězí pankreatický α-chymotrypsin a na jednu cysteinovou proteázou: lidským jaterním katepsinem B. Ve všech případech se použije postup s plotnou s 96 prohlubněmi za použití kolorimetrického p-nitroanilinového (pNA) substrátu specifického pro každý enzym. Každá série se předem inkubuje 1 hodinu s inhibitorem enzymu při teplotě 30°C, a následně se přidá substrát. Hydrolýza se sleduje do 30% konverze čtečkou mikroploten UV Thermomax®. Koncentrace substrátu se udržuje na nejnižší možné hodnotě vzhledem k Km k zamezení kompetice se substrátem. Koncentrace sloučenin se pohybuje od 300 do 0,06 μΜ v závislosti na jejich účinnosti.
Podmínky každé zkoušky:
mM Tris-HCI o pH 8, 0,5 M síranu sodného, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 0,01 % Tween-20 s,
[100 μΜ Succ-AAPF-pNA a 250 pM a-chymotrypsin], [133 μΜ Succ-AAA-pNA a 8 nM prasečí elastázy], [133 μΜ Succ-AAV-pNA a 8 nM leukocytární elastázy], nebo
[100 mM hydrogenfosforečnanu sodného o pH 6, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 1mM TCEP, 0,01% Tween-20, 30 μΜ Z-FR-pNA a 5 nM katepsin B (enzym v zásobním roztoku se před použitím aktivuje v pufru obsahujícím 20 mM TCEP)].
Znázorňující příklad užití prasečí pankreatické elastázy:
Na polystyrénovou plotnu s plochým dnem a s 96 prohlubněmi se za použití pipetovacího automatu Biomek (Beckman) přidá:
• · · · ·♦·<···· · ·
-139-: '.·· : ·..* .:.
* 40 μΙ pufru pro zkoušku (50 mM Tris-HCI o pH 8, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA), * 20 μΙ roztoku enzymu (50 mM Tris-HCI o pH 8, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 40 nM prasečí pankreatické elastázy) a * 20 μΙ roztoku inhibitoru (50 mM Tris-HCI o pH 8, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 1,5 mM - 0,3 μΜ inhibitoru, 15% objemových DMSO).
Po 60 minutách předběžné inkubace při teplotě 30°C se do každé prohlubně přidá 20 μΙ roztoku substrátu (50 mM Tris/HCI o pH 8, 0,5 M síranu sodného, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA, 665 μΜ Succ-AAA-pNA) a reakční směs se dále inkubuje 60 minut při teplotě 30°C. Hodnota absorbance se odečítá na čtečkou destiček UV Thermomax®. Na několik řad prohlubní se umístí kontrolní vzorky (bez inhibitoru) a slepé vzorky (bez inhibitoru a bez enzymu).
Následné dvojnásobné zředění roztoku inhibitoru se provede na separované plotně pipetovacím automatem za použití 50 mM Tris-HCI o pH 8, 50 mM chloridu sodného, 0,1 mM EDTA, 0,02% Tween-20, 15% DMSO. Všechny ostatní stanovení specifity se provedou obdobným způsobem.
Procenta inhibice se vypočítají za použití rovnice:
[1-((UVinh-UVSiep) / (UVkontr-UVS|en))] x 100
Výsledky experimentu s různými koncentracemi inhibitoru byly proloženy nelineární křivkou na základě Hillova modelu a byla určena IC50 (koncentrace vedoucí k 50% inhibici) za použití SAS softwarového programu (Statistical Software System, SAS Institute, lne. Cary, N. C.).
-140- : : ,:.
Tabulky sloučenin
Sloučeniny podle současného vynálezu se podrobily stanovením podle příkladů 37 a 38. Míra jejich účinku byla rozdělena do skupin podle hodnoty IC50: skupina A - hodnota IC nižší než 50 μΜ, skupina B - hodnota IC nižší než 5 μΜ, skupina C - hodnota IC nižší než 0,5 μΜ,
Aktivita v buňkách a specifita zkoumaných sloučenin:
Reprezentativní sloučeniny podle současného vynálezu se sledují zkouškou podle příkladu 39 a jednou nebo více zkouškami příkladu 40. Například sloučenina 601 tabulky 6 má podle zkoušky příkladu 37 hodnotu IC5o = 50 nM a 30 nM podle zkoušky příkladu 38. Hodnota EC50 = 8,2 μΜ se určí zkouškou podle příkladu 39. Stanovením specifity podle v příkladu 40 se získají následující hodnoty pro uvedenou sloučeninu: HLE > 75 μΜ, PPE > 75 μΜ, cc-chym. > 75 μΜ, kat.B > 75 μΜ.
Uvedené výsledky potvrzují, že tato skupina sloučenin je vysoce specifická pro NS3 proteázu.
Seznam uvedený v tabulkách znázorňuje vlastnosti sloučenin podle současného vynálezu.
Použité zkratky:
MS výsledky hmotnostní spektrometrie,
Ac acetyl,
Bn benzyl,
Boc terc-buty loxykarbonyl,
cHex cyklohexyl,
* ' · * * * r • * - ? * * - < * · · * *· · · * · · ? * · · * e ♦ S· . ^1’. ·* · ·· *··
Chg cyklohexyl-glycin (2-amino-2-cyklohexyl-octová kyselina),
iPr izopropyl,
O-Bn benzyloxy,
Ph fenyl,
t-Bu terc.-butyl,
Tbg 1- nebo 2 Np 1-nebo 2-NpCH2O terc.-butylglycin, 1- nebo 2-naftyl, 1- nebo 2-naftylmetoxy.
- 142 - ···*
Tabulka 1
Tabi slouč. č
101
102
103
104
105
Τθ6
107 ‘
108
Β ' .........ί R3 < ..........R2
Boc cHex......-O-CH2-1 -naftyl
-O-CH2-1-naftyl ’
-O-CH2-1-naftyl r
-*-O-CH2-1-naftyl
-O-CH2-1 -naftyl
.o účinnost .
594~A ”632 A
642’”·....... 728
619”
702..... B
720 A
M+Na*
662 ’ A
- 143 -
Tabulka 2
“Ri ' anti kekarboxylu etyi (jeden ízomer)
Tab 2 B Γ R3 R2 slouč. č.
201 Boc cyklohexyl -O-CH2-I -naftyl
202 : Boc cyklohexyl -O-ČH2-'l-naftyl
MS ... \ účinnost
622 A etyl 622 A (jiný izomer)
203 Boc t-Bu
vinyl 687.5 C
AR, 2R \
- 144 -
Tabulka 3
Tab 3 B R3 R2 slouč. č.
301 Boc ' cHex ~ΟΌΗ?Ϊ -nafty I
302 1? iPr -O-CH2-I -naftyl I syn ke , účinnost karboxylU;___ _ __ ethyl : 622 A ' ethyl “”582 “” Á
303
304
305
306
307
308
309
310
cHex
Boc cHex
Boc cHex
Boc
Boc
Boc
Boc
Boc *’-O-CH2-1-naftyl
-O-CH2-1-naftyl Ί vinyl
cHex
622' Á
623“ A
620 B vinyl 607 B vinyl 728 C vinyl 606 B vinyl 606 B vinyl 607 B cHex
-145- ’··· tab? 3 B R3 slouč. č. ... -- β00 cHex
βϊ MS · Účinnost syn ke karboxylu _________ vinyl 641 B
312 Boc cHex
313 Boc cHex
314 Boc cHex
621 ’ B
607 .........A
315
Boc cHex
316 Acetyl cHex
698 B
625 S
317................. Boc
318............CF3-C(O)- . i-Pr cHex
- 146 Table 3 B R3 slouč. č.
319^ —’o cHex iQ^
320 J cHex H0 ΐΠ
321 Boc t-Bu
322 . Boc t-Bu
323 Boc t-Bu
324 Boc t-Bu
325 - Boc t-Bu
326 Boc t-Bu
vinyl 658.7
vinyl 717.6
- 147 -
-148-
Tab 3 B R3 slouč. č ~ 334 ~ if ΡΒυ R2 ri Mb účinnost syn Ke ... . __________ _______ .karboxylu ;..... _ _____________ vinyl 764.4 C N s 1 XJCX
- 149 Tabulka 4
R2
OH
402 Boc r;
MS účinnost
H 589.1 A
403 Boc
404 Boc
405 Boc
406 Boc
Ή ' 603.6 A
H 675.4 C
3-(=CH2) 687.1 B
2-vinyí 702.3 C
2-Ét 703.3 C
-150 -
- 151 -
- 152 Tabulka 6
Tab 6 slouč. č.
601
602
603
604
605
606
607
608
609
610
611
612
613
614’ ’“615
r3 R21A R21B MS účinnost
APr Ph 7-OMe 673.3 C
t-Bu Ph 8-OMe, 7-OMe : 717.2 C
μρΓ 7-ethyl 6712” c
t-Bu — 7-OMe : 611.2 : c
t-Bu Ph 7-O-řr 715.3 č
ř-Bu — 7-CI 615.2 c
řr — 7-CI 601.2 c
ČHríPr — 7-ď ’ 615.3 ~B
t-Bu — ‘680.2’ - —
t-Bu Cl — 613.3 c
t-Bu Ph ' 7-N(Me)2 700.5 c
t-Bu — 666.4
t-Bu <X — 650.4 B
.....“t-Bu — ‘ 664.5- ’
f-Bu ' — 7-N{Me)2 - 624 5 ’ ~'Č
-154Tabulka 7
Rzia
Tab 7 ' R3 slouc. č.
701 f-Bu
702 ř-Bu
703 ř-Bu
7Q4 f-Bu
705 ř-Bu
706 f-Bu
707 t-Bu
708 t-Bu
709....... ř-Bu
7IÓ ř-Bu
711
712 ř-Bu ř-Bu
(Me)2N-
MS účinnost
691.3 'C
713.4 ' C
655~3“~'' ’ C ~
728.4C~
696.4“ ' ' 'C
693.3 ........'Č
694.3 C '716'4' ~C '709Í2 “C
655^3B '7Ό8Ϊ2C '654.3' C
- 155 Tab 7 slouč. č.
713 —7Ϊ4 ~7Ϊ5~
716
723.3C
625.3C
751.2 C
733.4 ”C
724.1 ’C
7373......' C
- 156 Tab 7 slouč_č.
725 '
R3 t-Bu
726 ř-Bu
účinnost
688.3
727 ř-Bu
728
729
689.3
730
731
732
733
734
735 ř-Bu ř-Bu t-Bu ř-Bu ^Bu ř-Bu t-Bu ř-Bu
786.1
669.2
669.2
791.0
765.3
671.3
683.3 ř-Bu
736 ř-Bu
667.4
737 ř-Bu
CHex
693.4
- 157Tabulka 8
Tab 8 B _ slouč. č.
802 “803
804
^Bu í-Bu účinnost
6867C'
7277C “
68577C ’
711.7C
- ' 629.6 C
.....'7257 C
- 672.4 ' C
- Q- 158 Tab 8 slouč. č.
809
8Ϊ0~ b“........ R3 R^ ms
Boc
811 ΉΓ
113 ‘814
815
816
817
818
819
820
821 '822
823
824
825
APr -649.3
ABu -'749.3
ABu 44DÍ72Ϊ.3
ABu -7061
ABu702.2 ~ÁBu 2<ΐ72T3~
Boc ABu 3-Čí
.......APr
7211
658.1
720 2
728.3
762.3 ’732.2“
679.1 '663.3
Boc ABu 2-OMe 717.2
Boc í-Bu 3-OMe 719.2
Boc ABu : 4-ÓMe 7191
účinnost c
Č
c č ~č ~č
-159 Tab . 8 slouč. č. “ 826~
827
APr
ř-Bu
663.3 B
67372 7 C
69173“C ~734.3C ~64573~C
701?3~ Č ’ 801.3C
.....715.2Č
663.3Č c
836
837
83Γ
APr“............'694.4 Č
APr ---- -- - 6g3i3 c
APr ......- 679TÍC
^22 MS účinnost
7-Pr ' - 674^ C~
Ί-Pr ' - 667.4C~ ř-Bu ’ ~ I-Me 701.5C~ ?Bu 3-Me 701^5Č~
TBu 4-Me 7(7L5 ~ C
ř-Bu’.....~4-0Me...... 716.6~~ C
693.4C
~..........713’4 'C ’ ~ 687.5C
-.........701.5Č
731.5’ .C
689.5C ' 68975C
- 161 Tab ' 8
Slouč/Č.' ’853
MS
765.5’ účinnost
C~
723.4C (M-H)*
693.3C
688.3C
716.4C
70(7.4C
655.4B
759.3C
- ' 688.3 .....C
- ’ 685.3~C
- 699Z C
.......667.3C
- ”701.4”C
- 162 Tab 8 slouč. č.
866*
867
Η 22
873 účinnost 70274~Č~
70Í?3C
713.3C
69SL4 C
700.4 ~ C
7Ϊ4.3 Č
7Ϊ4.4C
-163 Tab' 9' slouč. č. '901
902
903
904
905
906
907
Tabulka 9
B.
B
MS
685.3 účinnost
Boc
825.4
769.3
707.3
685.2
728.2
717.2
-164- ····
Tab - 9 síouč. č.
908
účinnost
69T2 .
715.3
911
912
913
914
915
916
721.3
733.2
713.3
805.3
692.2
680.3
-165 - : · :j -:· · ::
Tabulka 10
Tab Ví O i ’ B-X- ‘ ' R3 ’ ’ Z slouč. č. :
1001 Ph-N(Me)- APr O
ABu S αρΓ i.....O
R21B Mš účinnost
H ....... 663?3* C
OMe 703.4 TČ
V_. 663.3~ ;C

Claims (3)

1. Sloučenina obecného vzorce I, její racemáty, diastereoizomery a optické izomery;
kde B je atom vodíku, C6 nebo C10 aryl, C7.16 aralkyl; heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný Ci.ealkylem; Ci-salkoxy, Ci-6 alkanoyl, hydroxyskupina, hydroxy-alkylová skupina, atom halogenu, haloalkyl, nitroskupina, kyanoskupina, kyano-alkylova aminoskupina eventuálně substituovaná C^alkylem;
amidoskupina nebo (nižší alkyl)-amidoskupina nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(0)-, karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, amidoskupina vzorce R4-N(R5)-C(O)-, thio-amidoskupina vzorce R4N(R5)-C(S)- nebo sulfonyl vzorce R4-SO2, kde R4 je i/ alkyl eventuálně substituovaný karboxylem,
Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Cvsalkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)amidoskupinou nebo ii/ C3.7 cykloalkyl, C3.7cykloalkoxy nebo C4.i0alkyl-cykloalkyl, vždy eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (C1.6alkoxy)-karbonylovou skupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-167- .........
substituovanou C^galkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyi)-amidoskupinou nebo iii/ aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci.ealkylem, amidoskupina nebo (nižší alkyl)-amidoskupina nebo iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaná Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci-ealkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou
Ci-6alkylem,
R5 je atom vodíku nebo C^ealkyl;
za předpokladu, že pokud R4 je amidoskupina nebo thioamid, pak R4 je shora uvedený zbytek kromě ii/ cykloalkoxy;
a
Y je atom vodíku nebo 0^6 alkyl;
R3 je Cvealkyl, C3.7cykloalkyl nebo C4.10 alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, Cvealkoxy, Cvethioalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou, C6 nebo C10 arylem nebo
C7.i6 aralkylem,
R2 je CH2-R20, NH-R20, O-R20 nebo S-R20, kde R2o je nasycený nebo nenasycený C3.7cykloalkyl nebo C4-10 (alkylcykloalkyl), vždy eventuálně mono-, di- nebo tnsubstituovaný R21 nebo
R20 je C6 nebo C,„ aryl nebo C7.„ aralkyl, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2i nebo
-168- .:.. : ·..· : *.·’ R2o je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně mono-, di-nebo tri-substituované R2i, kde každé R2i je nezávisle C^alkyl, C-|.6alkoxy, nižší thioalkyl, sulfonyl, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, aminoskupina eventuálně mono-nebo di- substituovaná Ci.6alkylem, C6 nebo C10arylem, C7.i4aralkyl, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het; amidoskupina eventuálně mono- substituovaná (^alkylem, C6 nebo C10arylem, C7.u aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het; karboxylová skupina, karboxy-(nižší alkyl), C6 nebo C1Q aryl, C7.i4 aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je C^alkyl, C3.7cykloalkyl, Ci.6alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná C^salkylem, sulfonylová skupina, (nižší alkyl)-sulfonylová skupina, nitroskupina, hydroxyskupina, merkaptoskupina, atom halogenu, haloalkyl, karboxylová skupina, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus eventuálně substituovaný C-|.6alkylem,
R1 je atom vodíku, C^alkyl, C3.7cykloalkyl, C2.6alkenyl nebo C2.6 alkinyl, vždy eventuálně substituovaný atomem halogenu nebo jejich farmaceuticky vhodné soli nebo estery.
2. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je C6 nebo C10aryl nebo C7.i6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Ci.6alkoxy, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci. 6 alkylem nebo
-169 - .............
B je heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituované Cvealkylem, C^alkoxy, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.galkylem.
3. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je R4-SO2 a kde R4 je Ci.6alkyl, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo C10aryl, C7.i4aralkyl nebo heterocyklus, všechny eventuálně substituované Ci.6 alkylem.
4. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je acylový derivát vzorce R4-C(O)- a kde R4 je:
i/ Cvioalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci-salkylem, ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci.ealkoxy)karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7-i6aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci-ealkylem, v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou C^salkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cvsalkylem.
5. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je karboxyl vzorce R4-0-C(0)- a kde R4 je:
-170- .:.. : ·..* : .....
i/ C-mo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, C^alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou (^alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, ii/ C37cykloalkyl, C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cvealkoxyj-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.i6aralkyl eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (mzsi alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci-salkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou.
6. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)- a kde R4 je:
i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Cvsalkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci-ealkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4-i0alkylcykloalkyl, vždy eventualne substituovaný karboxylem, (C^alkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di- substituovanou Ci.ealkylem, iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di-substituována Ci.3 alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C^alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (mzsi • · « · ·»····· · · . Π1 - ·:·· : '··’ : ’··’ ·:· alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^ealkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem a
R5 je atom vodíku nebo metyl.
7. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)-, kde R4 je:
i/ Cvio alkyl eventuálně substituovaný karboxylem,
Ci-6 alkanoylem nebo Ci-ealkoxy, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.i0alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C^ alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou.
8. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 2, kde B je C6 nebo C10 aryl eventuálně substituovaný C^alkylem, C^alkoxy, Cvgalkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkýlem, atomem halogenu, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (mzsi alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci-galkylem.
9. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 2, kde B je především heterocyklus eventuálně substituovaný C^alkylem, C^alkoxy, Cv6alkanoylem, hydroxyskupinou, atomem halogenu, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci-ealkylem.
10. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 4, kde B je acylový derivát vzorce R4-C(O)- a kde R4 je:
-172- ·:·· : ’··’ : ’··* ·:· i/ C-mo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxy, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4-ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, karboxylem, (C-|.6 alkoxy)-karbonylem, iv/ C6 nebo C1Qaryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou nebo v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou.
11. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 5, kde B je karboxylový zbytek vzorce R4-O-C(O)- a kde R4 je:
i/ Cmq alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C^alkanoylem, hydroxyskupinou, C^ealkoxy nebo amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci.6alkylem, ii) C3.7cykloalkyl, C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C^alkoxyjkarbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Cvsalkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6alkylem, v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^galkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono-substituovanou C^.galkylem.
12. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 6, kde B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)-a kde R4 je:
i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší
- 173 alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou C-t.ealkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cí-ealkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di- substituovanou Cvealkylem iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di-substituovaná Ci.3alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.i6 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6 alkylem nebo v/ heterocyklus eventuálně substituovaný C^ealkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou a
R5 je atom vodíku
13. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 7, kde B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)- a kde R4 je:
i/ Cvioalkyl nebo ii/ Cs^cykloalkyl.
14. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 12, B je amid vzorce R4-NH-C(O)- a kde R4 je:
i/ Cvio alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, C^alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Cj.ealkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkyl cykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Crealkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di- substituovanou Ci.6alkylem,
- 174 iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný C-|.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou.
15. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je terc.-butoxy-karbonyl (Boc) nebo sloučeniny vzorce:
16. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde Y je atom vodíku nebo metyl.
17. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 16, kde Y je atom vodíku.
18. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde R3 je Ci.8alkyl, C3.7 cykloalkyl nebo C4.1 Oalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy, Ci.6thio-alkylem, acetamidoskupinou, C6 nebo C10arylem nebo C7. i6 aralkylem.
19. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 18, kde R3 je vedlejší řetězec terc.-butylglycinu (Tbg) , lie, Val, Chg nebo:
20. Sloučenina obecného vzorce I podle nároKu .kde R3 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val.
• · · · · «····
- 175 -·.......
21. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde R2 je S-R2o nebo 0-R2o s kde R20 je C6 nebo C10aryl, C7.16 aralkyl, heterocyklus nebo -CH2-Het, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri- substituované R21, kde R21 je C^alkyl, C-^alkoxy, nižší thioalkyl, aminoskupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci-6 alkylem, C6 nebo C10 arylem, C7.16 aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-heterocyklem; nitroskupina, hydroxyskupina, atom halogenu, trifluormetyl, karboxylová skupina, C6 nebo CiOaryl, C7.16aralkyl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je C^alkyl, C3.7cykloalkyl, C^alkoxy, aminoskupina, mono- nebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupina, atom halogenu, trifluormetyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus.
22. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 21, kde R2i je Ci.6alkyl, Cvealkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina, C6 nebo Cwaryl nebo heterocyklus, shora uvedený aryl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22 a kde R22 je Ci.6alkyl, C3.7cykloalkyl, Ci.6alkoxy, aminoskupina, mononebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina, amidoskupina, (nižší alkyl)-amid, atom halogenu, trifluormetyl nebo heterocyklus.
23. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 22, kde R22 je Ci-ealkyl, Cvealkoxy, atom halogenu, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus.
• Μ
24. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 23, kde R22 je metyl, etyl, izopropyl, terč.butyl, metoxy, atom chlóru, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná nižším alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo (nižší alkyl)-2-thiazol.
25. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 21, kde R2 je jedna z následujících skupin:
26. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 21, kde R2 je 1-naftylmetoxy-, 2-naftylmetoxy-, benzyloxy-, 1-naftyloxy-, 2-naftyloxynebo chinolinoxy- nesubstituovaný, mono- nebo di-substituovaný R21, který je definován nárokem 21.
27. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 26, R2 je 1-naftylmetoxy- nebo chinolinoxy, nesubstituovaný, mono- nebo disubstituovaný R21, který je určen nárokem 26.
28. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 27, kde R2 je jedna z následujících skupin:
-177 -
29. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 26, kde R2 je:
, kde R2ia je C^alkyl, Ci.6alkoxy, nižší thioalkyl, atom halogenu (chlór), aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Ci-salkylem, dále C6 nebo C10 aryl, C7.i6aralkyl nebo heterocyklus, uvedený aryl, arylalkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22, kde R22 je Ci.6alkyl, Ci.6 alkoxy, aminoskupina eventuálně mononebo di- substituovaná Ci.salkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina nebo heterocyklus,
R2ib je C-t.6 alkyl, Ci.6 alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, atom halogenu, trifluormetyl nebo karboxyl.
30. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 29, kde R2ia je C6, CiOaryl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný R22. které je určeno nárokem 30.
31. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 30, kde R2 je jedna z následujících skupin:
-178 -
32. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 29, kde R2 je:
, kde R22a je CV6 alkyl, Ci.6 alkoxy nebo atom halogenu a
R2ib je Cv6 alkyl, C^alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl nebo karboxyl.
- 179 -
33. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 29, kde R2 je:
, kde R22b je C^ealkyl, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.6alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina a
R21B je alkyl, Ci.6 alkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl nebo karboxyl.
34. Sloučenina obecného vzorce I podle nároků 32 nebo 33, kde R2ib je Ci.6alkoxy nebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina.
35. Sloučenina obecného vzorce l podle nároků 32 nebo 33, kde R2iB je metoxy.
36. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde P1 je cyklopropylový nebo cyklobutylový kruh substituovaný Ri, kde
R1 je atom vodíku, Ci.salkyl, C3.5cykloalkyl nebo C2-4alkenyl eventuálně substituovaný halogenem.
37. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 36, kde P1 je cyklopropylový kruh a kde R1 je etyl, viny), cyklopropyl, 1- nebo 2-brometyl nebo 1- nebo 2-brom-vinyl.
38. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 37, kde Ri je vinyl.
-180 -
39. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 37, kde Ri na uhlíku 2 je orientováno do syn vzhledem ke karbonylu na pozici 1 a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
40. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 37, kde Ri na uhlíku 2 je orientováno do anti vzhledem ke karbonylu na pozici 1 a zbytek je charakterizován následujícím vzorcem:
41. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 37, kde atom uhlíku 1 má R konfiguraci:
-181 -
42. Optický izomer sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 41, kde uvedený substituent Ri a karbonyl jsou v syn orientaci, charakterizovaný následující absolutní konfigurací:
43. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 42, kde Ri je etyl a atomy uhlíku na pozici 1 a 2 mají R,R konfiguraci.
44. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 42, kde Ri je vinyl a atomy uhlíku na pozici 1 a 2 mají R,S konfiguraci.
45. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1, kde B je C6 nebo C1Qaryl nebo C7.16 aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.salkylem, Ct.6alkoxy, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyal kýlem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C],6 alkylem nebo heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, Ci.ealkoxy, Ci.salkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyal kýlem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci„6aikylem nebo
B je R4-SO2, kde R4 je amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, C6 nebo Cioaryl, C7.14 aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný Ci.8 alkylem nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(O)-182kde R4 je i/ Ci.iOalkyl eventuálně substituovaný karboxylem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou Ci.6alkylem;
ii/ C3.7cykloaikyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší aikyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ch-salkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cvgalkylem, v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálněsubstituovanou Ci.6alkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Cv6alkylem nebo
B je karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kde R4 je i/ Cwo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ci.6alkanoylem, hydroxyskupinou, C>6alkoxy, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^galkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, ii/ C3 7cykloalkyl, C4.ioalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C-t.salkoxy)-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci.galkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem;
iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou C^ealkylem nebo
-183- ···· v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C-t.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ct.6alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo
B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je i/ Cmo alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, C-t.6alkanoylem, hydroxyskupinou, Cv^alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^ealkylem, ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkyl-cykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C1.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci.6alkylem;
iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci.3 alkylem, iv/ C6 nebo Cwaryl nebo C-.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6 alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované C^alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou eventuálně substituovanou C1.salkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem a
R5 je především atom vodíku nebo metyl nebo
B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kde R4 je i/ C^o alkyl eventuálně substituovaný karboxylem,
C-i-6 alkanoylem nebo Cvsalkoxy, ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C^galkoxyj-karbonylem, aminoskupinou nebo amidoskupinou,
-184- .:
Y je atom vodíku nebo metyl,
R3 je Οή.8 alkyl, C3.7cykloalkyl nebo C4.10 alkyl-cykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný hydroxyskupinou, C ^alkoxy, C^ethioalkylem, acetamidoskupinou, C6 nebo C10arylem nebo C7. ιθ aralkylem,
R2 je S-R20 nebo O-R20 kde R2o je C6 nebo C10 aryl, C7.16aralkyl, Het nebo -CH2-Het, vždy eventuálně mono-, di- nebo tri-substituované R2i>
kde R21 je Ci.6alkyl, Ci.6alkoxy, nižší thioalkyl, aminoskupina nebo amidoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.ealkylem, Cg nebo Cioarylem, C7.ie aralkylem, heterocyklem nebo (nižší alkyl)-Het, dále nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina, C6 nebo C10aryl, C7.16 aralkyl nebo heterocyklus, uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný pomocí R22, kde
R22 je Cvealkyl, C3.-cykloalkyl, C ^alkoxy, aminoskupina, mono- nebo di-(nižší alkyl)-aminoskupina, (nižší alkyl)-amid, sulfonylalkyl, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl, karboxylová skupina nebo heterocyklus nebo
R2 je jedna z následujících skupin:
nebo R2 je 1-naftylmetoxy-, 2-naftylmetoxy-, benzyloxy-, 1-naftyloxy-, 2-naftyloxy- nebo chinolinoxy- nesubstituovaný, mono- nebo disubstituovaný R2i> který je shora definovaný a . 185 - ·’ ·. ’ : : · : : :
•··· · ·· e ·· ···
P1 segment je cyklopropylový kruh substituovaný Ri, kde
R1 je atom vodíku, C^salkyl, C3.5cykloalkyl nebo C^alkenyl eventuálně substituovaný halogenem a zároveň Ri na atomu uhlíku v pozici 2 je syn vzhledem ke karbonylu v pozici 1:
nebo její farmaceuticky vhodná sůl nebo ester.
46. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 45, kde B je C6 nebo C10aryl, eventuálně substituovaný C^allc/lem, Crealkoxy, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, hydroxyalkylem, halogenem, haloalkylem, nitroskupinou, kyanoskupinou, kyanoalkylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Ci .6 alkylem nebo
B je heterocyklus eventuálně substituovaný Cí-salkylem, Ci-ealkoxy, Cvealkanoylem, hydroxyskupinou, halogenem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo disubstituovanou Cvealkylem nebo
B je R4-SO2, kde R4 je C6 nebo C10aryl, C7.u aralkyl nebo heterocyklus, vždy eventuálně substituovaný Cve alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)aminoskupina nebo
B je acylový derivát vzorce R4-C(O)
-186- ···· : ·· : ·..· .:.
kde R4 je i/ Ci.^alkyl eventuálně substituovaný karboxyiem, hydroxyskupinou nebo Ci.6alkoxyskupinou, ii/ C3.7cykloalkyl nebo C4.10alkyl-cykloalkyl, oba eventuálně substituované hydroxyskupinou, karboxylovou skupinou, (Ci.ealkoxyj-karbonylem, iv/ C6 nebo C10 aryl nebo C7.i6aralkyl, vždy eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, v/ heterocyklus eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou nebo
B je karboxyl vzorce R4-O-C(O)-, kdeR4je i/ Ci.10 alkyl eventuálně substituovaný karboxyiem, Cvsalkanoylem, hydroxyskupinou, Ci.6alkoxy nebo amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidem, aminoskupinou eventuálně mononebo di-substituovanou C^ealkylem, ii/ C3.7cykloalkyl, C4.i0alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxyiem, (CV6alkoxy)-karbonylem, aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ci-salkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)-amidem, iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou Ci.6alkylem nebo v/ heterocyklus nebo (nižší alkyl)-Het, oba eventuálně substituované Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou eventuálně mono-substituovanou C^galkylem nebo B je amid vzorce R4-N(R5)-C(O)kde R4 je i/ alkyl eventuálně substituovaný karboxyiem, Cj.ealkanoylem, hydroxyskupinou, C-|.6alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem,
-187 - .:λ i * *Τ ’
Η/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.10alkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (C1.6alkoxy)-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou C^salkylem, iii) aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná Ci.3 alkylem;
iv/ C6 nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl, vždy eventuálně substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou, nebo aminoskupinou eventuálně substituovanou C1.6 alkylem nebo v/ heterocyklus substituovaný Ci.6alkylem, hydroxyskupinou, aminoskupinou nebo amidoskupinou a R5 je především atom vodíku nebo metyl nebo B je thioamid vzorce R4-NH-C(S)- , kdeR4je i/ C^o alkyl nebo ii/ C3.7cykloalkyl nebo
Y je atom vodíku,
R3 je vedlejší řetězec terc-butylglycinu (Tbg), lie, Val, Chg nebo:
R2 je 1-naftylmetoxy nebo chinolinoxy nesubstituovaný, mono- nebo di- substituovaný R21 (shora uvedený) nebo
R2 je:
-188 - * : : :
····· ·· · ·· ··« , kde R21A je Ci.6alkyl, Ci.6alkoxy, C6, C10aryl nebo heterocyklus, nižší thioalkyl, halogen, aminoskupina eventuálně monosubstituovaná C-|.6alkylem, dále C6 nebo Cw aryl, C7.16 arylalkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22.
kde R22 je Ci.6alkyl, C-t.6 alkoxy, aminoskupina eventuálně mono- nebo di- substituovaná Ct.6alkylem, amidoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina nebo heterocyklus,
R1 je cyklopropylový kruh, kde atom v pozici 1 má R konfiguraci,
a R1 je etyl, vinyl, cyklopropyl, 1- nebo 2-brom-etyl nebo 1- nebo 2brom-vinyl.
47. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 46, kde
B je amid vzorce R4-NH-C(O)-, kde R4 je i/ C^o alkyl eventuálně substituovaný karboxylem, Ct.6alkanoylem, hydroxyskupinou, C-^alkoxy, amidoskupinou, (nižší alkyl)-amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di-substituovanou Ci.6alkylem;
ii/ C3.7 cykloalkyl nebo C4.1 Oalkylcykloalkyl, vždy eventuálně substituovaný karboxylem, (Cvgalkoxyj-karbonylem, amidoskupinou, (nižší alkyl) amidoskupinou nebo aminoskupinou eventuálně mono- nebo di- substituovanou Ci.6alkylem,
-189 - .:.. :
iv/ Cg nebo C10aryl nebo C7.16aralkyl eventuálně substituovaný C-f.galkylem, hydroxyskupinou, amidoskupinou nebo aminoskupinou,
R3 je vedlejší řetězec Tbg, Chg nebo Val,
R2 je:
kde R22A je C^g alkyl (metyl), C^g alkoxy (metoxy) nebo halogen (chlór), R22B je Ci. g alkyl, aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Ci.g alkylem, amidoskupinou nebo (nižší alkyl)amidem a
R21B je Cvgalkyl, Ci.galkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)-amidoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetyl nebo karboxyl a
Pí je:
-190 -
48. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B, R3, R2 jsou následně definovány:
Tab 1 slouč. č.
~Í01
- -|θ2
B R3 R2
Boc cHex -O-CH2-I -naftyl ।
103
104
.0
- 191 -
49. Sloučenina 111 podle nároku 48.
50. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B, R3, R2a R! jsou následně definovány:
- 192 -
Tat 2 , B r3 slouč. č.
201 Boc cyclohexyl a
203
Ri anti ke karboxylu ~ etyl.....1 ((jeden mer) ____ izomer)--etyl -thyl : Giný izomer)ner) vinyl AR, 2R
51. Sloučenina 203 podle nároku 49.
52. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B, R3, R2 a Ri jsou následně definovány:
Ťab i 3 B R3 R2 Ri slouč. č. syn ke __karboxylu ~3θΐ ~ Boc ’ .o.CH2-l'-naftyT” ethyi
302 ° iPr · -O-CH2-1-naftyl
- 193 -
Tab 3 B slouč. č. 303 jf 304 Boc 305 Boc 306 Boc 307Boc 308 Boc 3ÓT Boc ' 310 Boc 311 Boc 312 Boc 313 Boc «3 K2 71 syn ke ____ ·. karboxylu ” cHex -O-CH2-I -naftyl 1 ethyl cHex ÍOTOI ^OChJ cHex -O-CH2-I-naftyl Ί vinyl cHex @OJ V'nyl cHex' v'ny‘ — chS' Oo) “ cHex (OTO) V'nyi cHex cHex v'nyl cHex ' V,nyl ^0 cHex
- 194 -
Tab 3 B slouč. č.
314 Boc
R3 cHex cHex
Ri syn ke karboxylu .:
vinyl
316 Acetyl ” cHex
317........ Boc cHex
318 ...... CF3-C(O)- i-Pr
321 Boc t-Bu
- 195 -
Tab 3 slouč. č.
322
Boc
323
Ri syn ke _karboxylu vinyl
324
Boc
325
326
- 196 -
53. Sloučenina podle nároku 52, kterou jsou následující sloučeniny:
307, 314, 317, 319, 321,324, 325, 326, 327, 329, 331,332, 333 a 334.
- 197 -
54. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B, R3, R2 a Ri jsou následně definovány:
Tab 4 B R3 slouč. č.
401 Boc APr
402 ~Boc ř-Bu
Hi
2-vinyl
2-Et • · · ♦ ►······ · ·
-198 - .:.. : ·..· : ·..· .:.
55. Sloučenina podle nároku 54, kterou jsou následující sloučeniny: 403, 405 a 406.
56. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce I:
0 í kde R3 je: Ťab 5 R3 slouč. č. ____ 501 t-Bu 502 H 503 ” I T 504 | Y ' '505 | 506 O Π th S o o Tab 5 R3 slouč. č. ____ ; 507 ; i 508 ; S09 φ . __ ’ a 511 . 7
o.
- 199 57. Sloučenina podle nároku 56, kterou je sloučenina: 501,509 a 510.
58. Sloučenina podle nároku 46 obecného vzorce I:
O N H
, kde R3, R2ia a R21B jsou:
Tab 6 slouč. č_
601
R3
APr
602 t-Bu
R21A
Ph
Ph
R21B
7-OMe
603 i-Pr
Ph
8-OMe, 7-OMe 7-ethyí
604 t-Bu
7-OMe
605 t-Bu
Ph
7-O-Pr
606 í-Bu
7-CI
607 /Pr
7-CI
608
CH2-/Pr
7-CI
609 t-Bu o η
L _N.
610 t-Bu
Cl
611 t-Bu
7-N(Me)2
612 t-Bu
Ph
613 t-Bu
- 200 Ťab 6 Ř3 Ř21A Řzib slouč. č._________________________ _____________
614 ř-Bu ;
‘615 ř-Bu - 74M(Meh ;
617
618 t-Bu
Tbu
622 t-Bu—
623 t-Bu MeÓ-—
624 t-Bu (Mej2Ň-—
625 t-Bu Ph 7-S(Me)
626 í-Bu Ph7-Br
627 Í-Bu 'Ph7^”
Tab 6 R3 slouč. č.
a t-Bu
630
59. Sloučenina podle nároku 58, vybraná ze skupiny následujících sloučenin: 601,602, 603, 604, 605, 606, 607, 610, 611, 612, 615, 616, 617, 620, 621,622, 625, 626, 627, 628, 629 a 630.
60. Sloučenina podle nároku 46 obecného vzorce:
, kde R3a R2ia jsou:
Tab 7 R3 slouč. č. ................
701 í-Bu
702 FBu
703 t-Bu
- 202 -
Tab 7’ ’ slouč. č.__
707
708 ' ’ ř-Bu ’ Ph-N(Me)-
(Me)2N712 ř-Bu
- 203 Tab Ύ R3 síouč. č. ____
722 ^Bu
723 ř-Bu
724
t-Bu
727
728
729 't-Bu t-Bu
- 204Tab 7 R3 slouč. č _
733 ř-BÚ“
736 ř-Bu ř-Bu a ř-Bu CHex 737
61. Sloučenina podle nároku 60, vybraná ze skupiny následujících sloučenin: 701,702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709 a 711 až 737.
62. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
, kde B, R3 a R22 jsou:
R3 Rj2
T ab 8 B slouč. č.
ř-Bu ř-Bu -205-
- 206 Tab 8 B R3 r22 slouč. č. _____________________i____ —..... :.....
'818 s í‘Bu
11(
O
-207 -
- 208 -
- 209 -
- 210 -
Tab 8 B R3 R22
63. Sloučenina podle nároku 62 vybraná ze skupiny sloučenin: 801 az 825, 827 až 858 a 860 až 873.
64. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B je:
Tab 9 slouč. č..
901
9G2
Boc
903
904
- 211 -
- 212 -
Tab 9
-Slouč. č.
915
65. Sloučenina podle nároku 45 obecného vzorce:
kde B, X, R3, z a R21B jsou:
Tab 10 slouč. č.
1001
1002 a
1003
B-X- R3 Z. R21B
Ph-N(Mej- APr Ó
Bcc-ŇH- ~ ABu S
H;.....
OMe;
66. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I působící proti virové hepatitidě typu C nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru ve směsi s farmaceuticky vhodným nosičem nebo pomocnou látkou.
-213• · · · · · * r · · · o ······· · ® • · · · ·
67. Způsob terapie virové hepatitidy C savců vyznačující se tím, že se podá účinné množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 působící proti virové hepatitidě typu C nebo terapeuticky vhodné soli nebo esteru nebo shora popsaného přípravku.
68. Způsob terapie virové hepatitidy C savců vyznačující se tím, že se podá účinné množství přípravku působící proti virové hepatitidě typu C podle nároku 67.
69. Způsob inhibice replikace viru způsobujícího virovou hepatitidu C vyznačující se tím, že se na virus hepatitidy C působí takovým množstvím sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, které působí inhibičně na NS3 proteázu viru způsobujícího hepatitidu C, nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru.
70. Způsob terapie virové hepatitidy C u savců vyznačující se t í m, ž e se podá účinné množství kombinace sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 působící proti virové hepatitidě typu C nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru a jiného anti-HCV činidla.
71. Farmaceutický přípravek podle nároku 70 vyznačující se tím, že jako uvedené jiné antivirové činidlo obsahuje a- nebo βinterferon, ribavirin nebo amantadin.
72. Farmaceutický přípravek podle nároku 70 vyznačující se tím, že jako uvedené antivirové činidlo obsahuje inhibitor ostatních životních pochodů viru HCV, především helikázy, polymerázy, metaloproteázy nebo IRES.
73. Postup přípravy peptidového analoga obecného vzorce I, kde P1 je substituovaný zbytek kyseliny aminocyklopropyl-karboxylové, vyznačující se tím, že se do vazebné reakce uvede peptid vybraný ze skupiny stávající se z: APG-P3-P2 nebo APG-P2 a meziprodukt P1 obecného vzorce:
- 214 -
, kde Rt je Ci.6alkyl, cykloalkyl nebo C2.6alkenyl eventuálně substituovaný halogenem, CPG je ochranná skupina karboxylové skupiny a APG je ochranná skupina aminoskupiny, P3 až P2 jsou shora definovány.
74. Postupu přípravy: 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy, vyznačující se tím, že se uvede do vazebné reakce: * (vhodně chráněná) aminokyselina, peptid nebo peptidový fragment a * P1 meziprodukt vzorce:
,kde Ri je Cj.ealkyl, cykloalkyl nebo C2-6alkenyl, vždy eventuálně substituované halogenem a CPG je ochranná skupina karboxylu.
75. Postup přípravy: 1) peptidového analoga inhibitoru proteázy nebo 2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy, vyznačující se tím, že se uvede do reakce:
* (vhodně chráněná) aminokyselina, peptid nebo peptidový fragment a * meziprodukt vzorce:
- 215 -
,kde CPG je ochranná skupina karboxylu.
76. Použití P1 meziproduktu vzorce:
,kde Ri je C^alkyl, cykloalkyl nebo C2.6alkenyl, vždy eventuálně substituovaný halogenem, CPG je ochranná skupina karboxylu, pro přípravu 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo
2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy.
77. Použití meziproduktu vzorce:
O
- 216,kde CPG je ochranná skupina karboxylu, pro přípravu: 1) peptidového analoga inhibitoru proteázy nebo
2) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy.
78. Použití P1 meziproduktu vzorce:
, kde Ri je C^alkyl, cykloalkyl nebo C2-6alkenyl, vždy eventuálně substituovaný halogenem a CPG je ochranná skupina karboxylu, pro přípravu shora určené sloučeniny obecného vzorce I.
79. Analoga aminokyselin vybrané ze skupiny sloučenin vzorce:
80. Postup přípravy podle nároků 73, 74 a 75 vyznačující se tím, že ochranná skupina karboxylové skupiny aminokyseliny (CPG) je vybrána z: alkylesterů, aralkylesterů a esterů odštěpitelných působením mírné zásady nebo mírného redukčního činidla.
81. Postup přípravy podle nároků 73, 74 a 75 vyznačující se tím, že ochranná skupina aminoskupiny aminokyseliny (APG) je vybrána z: acylových skupin, aromatických karbamátových skupin, alifatických karbamátových skupin, cyklických alkyl-karbamátových skupin, alkylových skupin, trialkylsilylových nebo thiol-obsahujících skupin.
82. Postup rezoluce enantiomerů ze směsi metylesteru (1 R/2S)/(1 S,2S)-1-amino-2-vinylcyklopropyl-karboxylové kyseliny vyznačující se t í m, ž e se na uvedenou směs působí esterázou za vzniku odpovídajícího (1 R,2S)-enantiomeru.
83. Postup rezoluce podle nároku 82 vyznačující se tím, ž e uvedenou esterázou je Alcalase®.
84. Použití prolinového analoga vzorce:
kde R2ia je C^galkyl, C^alkoxy, nižší thioalkyl, halogen, aminoskupina eventuálně mono-substituovaná Cv6alkylem, dále C6, C10 aryl, C7.16 aralkyl nebo heterocyklus, uvedený aryl, aralkyl nebo heterocyklus eventuálně substituovaný R22,
-218- .· : · : :··:· · :
•··« v ·· · · · kde R22 je Ci.6 alkyl, C-i-6alkoxy, amidoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina, aminoskupina eventuálně mono- nebo disubstituovaná alkylem nebo heterocyklus, a kde R2ib je C-|.6alkyl, Cvealkoxy, aminoskupina, di-(nižší alkyl)aminoskupina, (nižší alkyl)amidoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, halogen, trifluormetylová nebo karboxylová skupina, pro přípravu: 1) peptidového analoga inhibitoru serinové proteázy nebo
2) peptidového analoga inhibitoru HCV NS3 proteázy nebo
3) peptidového analoga shora uvedeného obecného vzorce I.
85. Použití anti-HCV účinného množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru pro přípravu přípravku působícího terapeuticky proti virové hepatitidě typu C u savců.
86. Použití účinného množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru, které způsobí inhibici NS3 proteázy viru hepatitidy C, pro výrobu přípravku působícího inhibičně na replikaci viru hepatitidy C.
87. Použití účinného množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 působícího proti virové hepatitidě typu C nebo její terapeuticky vhodné soli nebo esteru v kombinaci s interferonem pro výrobu terapeutického přípravku k léčbě virové hepatitidy typu C u savců.
CZ20010516A 1998-08-10 1999-08-09 Peptidové inhibitory viru hepatitidy typu C CZ301268B6 (cs)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9593198P 1998-08-10 1998-08-10
US13238699P 1999-05-04 1999-05-04

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2001516A3 true CZ2001516A3 (cs) 2001-08-15
CZ301268B6 CZ301268B6 (cs) 2009-12-30

Family

ID=26790767

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20090004A CZ302766B6 (cs) 1998-08-10 1999-08-09 Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu
CZ20010516A CZ301268B6 (cs) 1998-08-10 1999-08-09 Peptidové inhibitory viru hepatitidy typu C

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20090004A CZ302766B6 (cs) 1998-08-10 1999-08-09 Zpusob rozdelení enanciomerní smesi methyl-(1R,2S)/(1S,2R)-t-butoxykarbonyl-1-amino-2-vinylcyklopropylkarboxylátu

Country Status (43)

Country Link
US (11) US6323180B1 (cs)
EP (2) EP1105413B1 (cs)
JP (2) JP4485685B2 (cs)
KR (2) KR100631439B1 (cs)
CN (2) CN100339389C (cs)
AR (3) AR020880A1 (cs)
AT (1) ATE430158T1 (cs)
AU (1) AU769738B2 (cs)
BG (1) BG65738B1 (cs)
BR (2) BR9917805B1 (cs)
CA (2) CA2338946C (cs)
CO (1) CO5261542A1 (cs)
CY (2) CY1109291T1 (cs)
CZ (2) CZ302766B6 (cs)
DE (1) DE69940817D1 (cs)
DK (2) DK2028186T3 (cs)
EA (1) EA003906B1 (cs)
EE (1) EE05517B1 (cs)
ES (2) ES2326707T3 (cs)
HK (1) HK1040085B (cs)
HR (1) HRP20010102B1 (cs)
HU (2) HU230701B1 (cs)
ID (1) ID27839A (cs)
IL (3) IL141012A0 (cs)
IN (3) IN211493B (cs)
ME (1) ME00381B (cs)
MX (2) MX261584B (cs)
MY (1) MY127538A (cs)
NO (2) NO328952B1 (cs)
NZ (1) NZ510396A (cs)
PE (1) PE20000949A1 (cs)
PH (1) PH11999002002B1 (cs)
PL (1) PL204850B1 (cs)
PT (2) PT1105413E (cs)
RS (3) RS50798B (cs)
SA (1) SA99200617B1 (cs)
SI (2) SI2028186T1 (cs)
SK (2) SK286994B6 (cs)
TR (2) TR200100432T2 (cs)
TW (1) TWI250165B (cs)
UA (1) UA75026C2 (cs)
WO (1) WO2000009543A2 (cs)
ZA (1) ZA200100971B (cs)

Families Citing this family (424)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ335276A (en) 1996-10-18 2000-09-29 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus (HCV) NS3 (Non Structural Protein 3) protease
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
KR100878334B1 (ko) * 1999-06-25 2009-01-14 백광산업 주식회사 대사 경로 단백질을 코딩하는 코리네박테리움 글루타미쿰유전자
HK1047947A1 (zh) 2000-04-05 2003-03-14 Schering Corporation 包含n-环状p2部分的丙型肝炎病毒的大环ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂
AU2001253621A1 (en) 2000-04-19 2001-11-07 Schering Corporation Macrocyclic NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus comprising alkyl and aryl alanine P2 moieties
EP1278743A4 (en) * 2000-05-05 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp NEW ANTI-INFECTIOUS ACTIVE SUBSTANCES
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
SK742003A3 (en) 2000-07-21 2003-06-03 Schering Corp Novel peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
AR034127A1 (es) 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
US7012066B2 (en) 2000-07-21 2006-03-14 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
MXPA03004299A (es) * 2000-11-20 2004-02-12 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores de tripeptido de hepatitis c.
AU3659102A (en) 2000-12-12 2002-06-24 Schering Corp Diaryl peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatits c virus
MXPA03006514A (es) 2001-01-22 2004-12-02 Merck & Co Inc Derivados de nucleosidos como inhibidores de polimerasa de acido ribonucleico viral dependiente de acido ribonucleico.
KR100926244B1 (ko) 2001-07-11 2009-11-12 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 브릿지된 바이사이클릭 세린 프로테아제 억제제
CA2455683C (en) 2001-09-14 2010-06-08 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Front grill impact-absorbing structure for a vehicle
MXPA04003825A (es) 2001-10-24 2004-07-08 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasa, en particular la ns3-ns4a proteasa del virus de hepatitis c, que incorpora un sistema de anillo fusionado.
WO2003037893A1 (en) * 2001-11-02 2003-05-08 Glaxo Group Limited Acyl dihydro pyrrole derivatives as hcv inhibitors
US6867185B2 (en) * 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
MXPA04007163A (es) 2002-01-23 2004-10-29 Schering Corp Compuestos de prolina como inhibidores de la proteasa serina ns3 para utilizarse en el tratamiento de la infeccion por el virus de la hepatitis c.
US7119072B2 (en) * 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CA2369970A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
CA2370396A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
EP1497282A2 (en) 2002-04-11 2005-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4 protease
PL215228B1 (pl) * 2002-05-20 2013-11-29 Bristol Myers Squibb Co Zwiazki tripeptydowe, ich zastosowanie i kompozycja farmaceutyczna je zawierajaca oraz jej zastosowanie
ES2315568T3 (es) * 2002-05-20 2009-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c basados en cicloalquilo p1' sustituido.
AU2003248535A1 (en) * 2002-05-20 2003-12-12 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclicsulfonamide hepatitis c virus inhibitors
MY140680A (en) 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
KR100457857B1 (ko) * 2002-05-23 2004-11-18 (주) 비엔씨바이오팜 2-[2-(3-인돌릴)에틸아미노]피리딘 유도체, 그 제조방법및 이를 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
AU2003247084B9 (en) 2002-06-28 2018-07-26 Centre National De La Recherche Scientifique Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviridae infections
US20040033959A1 (en) * 2002-07-19 2004-02-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
AU2003261434A1 (en) * 2002-08-12 2004-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Iminothiazolidinones as inhibitors of hcv replication
EP1408031A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-14 3 D Gene Pharma Pyrolidine derivatives useful in treatment of hepatitis C virus infection
TW200418848A (en) 2002-10-24 2004-10-01 Glaxo Group Ltd Compounds
US20050075279A1 (en) * 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
DE602004029866D1 (de) * 2003-03-05 2010-12-16 Boehringer Ingelheim Pharma Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
JP4550824B2 (ja) * 2003-03-05 2010-09-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎抑制化合物
KR100960802B1 (ko) * 2003-03-08 2010-06-01 주식회사유한양행 씨형 간염바이러스 감염 치료용 엔에스3 프로테아제 억제제
EP1615947A2 (en) * 2003-04-10 2006-01-18 Boehringer Ingelheim International GmbH Process for preparing macrocyclic compounds
ATE422895T1 (de) * 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
WO2004093798A2 (en) * 2003-04-18 2004-11-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US6846836B2 (en) 2003-04-18 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company N-substituted phenylurea inhibitors of mitochondrial F1F0 ATP hydrolase
US7176208B2 (en) * 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
CL2004001161A1 (es) * 2003-05-21 2005-04-08 Boehringer Ingelheim Int Compuestos describe compuestos derivados de quinolina; composicion farmaceutica; y su uso para tratar una enfermedad causada por el virus de la hepatitis c.
RU2358979C2 (ru) 2003-05-30 2009-06-20 Фармассет, Инк. Модифицированные фторированные аналоги нуклеозида
WO2004113365A2 (en) * 2003-06-05 2004-12-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors
US7273851B2 (en) 2003-06-05 2007-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors
US7125845B2 (en) * 2003-07-03 2006-10-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
ATE478886T1 (de) 2003-07-25 2010-09-15 Idenix Pharmaceuticals Inc Purin nucleoside für die behandlung von durch flavividrae verursachten krankheiten, einschliesslich hepatitis c
MXPA06002250A (es) 2003-08-26 2006-05-17 Schering Corp Inhibidores peptidomimeticos novedosos de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
US8025899B2 (en) 2003-08-28 2011-09-27 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage form
US8377952B2 (en) 2003-08-28 2013-02-19 Abbott Laboratories Solid pharmaceutical dosage formulation
MY148123A (en) 2003-09-05 2013-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
EP1673385B1 (en) * 2003-09-22 2011-03-02 Boehringer Ingelheim International GmbH Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
CN1894274A (zh) 2003-09-26 2007-01-10 先灵公司 丙肝病毒ns3丝氨酸蛋白酶的大环抑制剂
NZ546663A (en) 2003-10-10 2010-01-29 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
WO2005037214A2 (en) 2003-10-14 2005-04-28 Intermune, Inc. Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of hcv replication
ES2389201T3 (es) 2003-10-27 2012-10-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Mutantes de resistencia de la proteasa NS3/4A de HCV
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
WO2005043118A2 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
US20050119318A1 (en) * 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MXPA06005683A (es) * 2003-11-20 2006-12-14 Schering Corp Inhibidores despeptidizados de la proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
US7309708B2 (en) * 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
DE602004019973D1 (de) * 2003-12-08 2009-04-23 Boehringer Ingelheim Int Abtrennung von ruthenium-nebenprodukten durch behandlung mit überkritischen flüssigkeiten
ZA200605248B (en) 2003-12-15 2007-10-31 Japan Tobacco Inc Cyclopropane compounds and pharmaceutical use thereof
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
WO2005070955A1 (en) * 2004-01-21 2005-08-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
ES2336009T3 (es) * 2004-01-30 2010-04-07 Medivir Ab Inhibidores de la ns-3 serina proteasa del vhc.
SE0400199D0 (sv) * 2004-01-30 2004-01-30 Medivir Ab HCV Protease inhbitors
EP1711515A2 (en) 2004-02-04 2006-10-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
CN1922174A (zh) 2004-02-20 2007-02-28 贝林格尔·英格海姆国际有限公司 病毒聚合酶抑制剂
WO2005080399A1 (ja) 2004-02-24 2005-09-01 Japan Tobacco Inc. ４環縮合複素環化合物及びそのｈｃｖポリメラーゼ阻害剤としての利用
US20070049593A1 (en) 2004-02-24 2007-03-01 Japan Tobacco Inc. Tetracyclic fused heterocyclic compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
RU2006134002A (ru) 2004-02-27 2008-04-10 Шеринг Корпорейшн (US) Новые соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с
US7635694B2 (en) 2004-02-27 2009-12-22 Schering Corporation Cyclobutenedione-containing compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
RU2006134005A (ru) 2004-02-27 2008-04-10 Шеринг Корпорейшн (US) Новые соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с
EP1742914A1 (en) * 2004-02-27 2007-01-17 Schering Corporation Cyclobutenedione groups-containing compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
ATE438622T1 (de) 2004-02-27 2009-08-15 Schering Corp 3,4-(cyclopentyl)kondensierte prolinverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
RU2428428C9 (ru) 2004-02-27 2012-03-10 Шеринг Корпорейшн Серусодержащие соединения, действующие как ингибиторы сериновой протеазы ns3 вируса гепатита с
CN1950393A (zh) 2004-02-27 2007-04-18 先灵公司 丙型肝炎病毒ns3蛋白酶的抑制剂
AU2005223767B2 (en) * 2004-03-12 2011-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for the preparation of aspartic acetal caspase inhibitors
ES2338666T3 (es) * 2004-03-15 2010-05-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Procedimiento para la preparacion de dipeptidos macrociclicos adecuados para el tratamiento de infecciones viricas de la hepatitis c.
EP1749007A2 (en) * 2004-03-30 2007-02-07 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
US7754718B2 (en) 2004-05-05 2010-07-13 Yale University Antiviral helioxanthin analogs
CN1984922A (zh) 2004-05-20 2007-06-20 先灵公司 用作丙型肝炎病毒ns3丝氨酸蛋白酶抑制剂的取代脯氨酸
EP1753775B1 (en) * 2004-05-25 2012-12-26 Boehringer Ingelheim International GmbH Process for preparing acyclic hcv protease inhibitors
WO2005123087A2 (en) 2004-06-15 2005-12-29 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
US20070265222A1 (en) 2004-06-24 2007-11-15 Maccoss Malcolm Nucleoside Aryl Phosphoramidates for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection
JP4914348B2 (ja) * 2004-06-28 2012-04-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビターペプチド類似体
KR20070034119A (ko) * 2004-07-16 2007-03-27 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 항바이러스 화합물
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
JP4914355B2 (ja) * 2004-07-20 2012-04-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビターペプチド類似体
CN101023094B (zh) * 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
US7597884B2 (en) 2004-08-09 2009-10-06 Alios Biopharma, Inc. Hyperglycosylated polypeptide variants and methods of use
MX2007001589A (es) * 2004-08-09 2007-08-02 Alios Biopharma Inc Variantes de polipeptido resistentes a proteasa, hiperglicosiladas sinteticas, formulaciones orales y metodos para utilizar las mismas.
MX2007002371A (es) 2004-08-27 2007-04-23 Schering Corp Compuestos de acilsulfonamida como inhibidores de la serina proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
ES2725457T3 (es) 2004-09-14 2019-09-24 Gilead Pharmasset Llc Preparación de ribofuranosil pirimidinas y purinas 2'fluoro-2'-alquil-sustituidas u otras opcionalmente sustituidas y sus derivados
WO2006030892A1 (ja) * 2004-09-17 2006-03-23 Nippon Shinyaku Co., Ltd. 複素環化合物の製造方法
US20080267915A1 (en) 2004-10-01 2008-10-30 Vertex Pharmaceuticals Hcv Ns3-Ns4a Protease Inhibition
US7659263B2 (en) 2004-11-12 2010-02-09 Japan Tobacco Inc. Thienopyrrole compound and use thereof as HCV polymerase inhibitor
US7323447B2 (en) * 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN103172697A (zh) 2005-03-08 2013-06-26 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 制备大环化合物的方法
AU2006242475B2 (en) * 2005-05-02 2011-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) * 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP5030947B2 (ja) 2005-05-13 2012-09-19 ヴァイロケム・ファーマ・インコーポレーテッド フラビウイルス感染の治療及び予防のための化合物及び方法
WO2006130666A2 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Medicaments and methods combining a hcv protease inhibitor and an akr competitor
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
US7772178B2 (en) * 2005-06-02 2010-08-10 Schering Corporation Pharmaceutical formulations and methods of treatment using the same
US8119602B2 (en) 2005-06-02 2012-02-21 Schering Corporation Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability
RU2427372C2 (ru) 2005-06-17 2011-08-27 Новартис Аг Применение санглиферина для лечения вируса гепатита с
US7608592B2 (en) * 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
CN101242816B (zh) * 2005-06-30 2012-10-31 维罗贝股份有限公司 Hcv抑制剂
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AR057456A1 (es) * 2005-07-20 2007-12-05 Merck & Co Inc Inhibidores de la proteasa ns3 del vhc
US20080200497A1 (en) * 2005-07-20 2008-08-21 Bailey Murray D Hepatitis C Inhibitor Peptide Analogs
EP2305696A3 (en) * 2005-07-25 2011-10-12 Intermune, Inc. Macrocyclic inhibitors of Hepatitis C virus replication
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
BRPI0614637A2 (pt) 2005-07-29 2011-04-12 Tibotec Pharm Ltd inibidores macrocìclicos do vìrus da hepatite c
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
AR055105A1 (es) 2005-07-29 2007-08-08 Tibotec Pharm Ltd Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
EP1919904B1 (en) 2005-07-29 2014-01-08 Janssen R&D Ireland Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
WO2007014922A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
RU2436787C2 (ru) 2005-07-29 2011-12-20 Тиботек Фармасьютикалз Лтд. Макроциклические ингибиторы вируса гепатита с
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
ATE496042T1 (de) 2005-07-29 2011-02-15 Tibotec Pharm Ltd Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
US8278322B2 (en) * 2005-08-01 2012-10-02 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
ES2401661T3 (es) * 2005-08-02 2013-04-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibidores de serina proteasas
CA2618560A1 (en) 2005-08-09 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Ribonucleoside cyclic acetal derivatives for the treatment of rna-dependent rna viral infection
CA2618682C (en) 2005-08-12 2011-06-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
RU2446171C2 (ru) * 2005-08-19 2012-03-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы и промежуточные продукты
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
EP1934243B1 (en) 2005-09-09 2011-05-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Ring-closing metathesis process for the preparation of macrocyclic peptides
EA200801050A1 (ru) 2005-10-11 2008-12-30 Интермьюн, Инк. Соединения и способы ингибирования репликации вирусного гепатита с
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
NZ568324A (en) 2005-11-11 2012-01-12 Vertex Pharma Hepatitis C virus variants
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
WO2007081517A2 (en) 2005-12-21 2007-07-19 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
EP2345652A1 (en) 2005-12-21 2011-07-20 Abbott Laboratories Antiviral compounds
WO2007076035A2 (en) * 2005-12-21 2007-07-05 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
ATE541844T1 (de) * 2005-12-21 2012-02-15 Abbott Lab Antivirale verbindungen
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
EP1991229A2 (en) 2006-02-27 2008-11-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
NZ570835A (en) 2006-03-08 2011-11-25 Achillion Pharmaceuticals Inc Substituted aminothiazole derivatives with anti-HCV activity
JP2009531315A (ja) 2006-03-16 2009-09-03 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 重水素化ｃ型肝炎プロテアーゼインヒビター
EP2518079A3 (en) 2006-04-11 2012-12-12 Novartis AG HCV/HIV inhibitors and their uses
GB0609492D0 (en) * 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
EP2027143A2 (en) 2006-05-23 2009-02-25 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
US8268776B2 (en) 2006-06-06 2012-09-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US7728148B2 (en) * 2006-06-06 2010-06-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US9526769B2 (en) 2006-06-06 2016-12-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US20080187516A1 (en) * 2006-06-06 2008-08-07 Ying Sun Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
GB0612423D0 (en) * 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
UY30437A1 (es) * 2006-06-26 2008-01-31 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macroceclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
RU2008152171A (ru) * 2006-07-05 2010-08-10 Интермьюн, Инк. (Us) Новые ингибиторы вирусной репликации гепатита с
WO2008008776A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US7718612B2 (en) * 2007-08-02 2010-05-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US7635683B2 (en) * 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
US20090035267A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US20080038225A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008022006A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US7605126B2 (en) * 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
US7582605B2 (en) * 2006-08-11 2009-09-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
US20090098085A1 (en) * 2006-08-11 2009-04-16 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008019477A1 (en) 2006-08-17 2008-02-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CA2666814A1 (en) * 2006-08-21 2008-05-29 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
US8138164B2 (en) * 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
CN101583372A (zh) * 2006-10-24 2009-11-18 默克公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
CA2667165A1 (en) * 2006-10-24 2008-05-02 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
WO2008057208A2 (en) * 2006-10-27 2008-05-15 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
JP5268927B2 (ja) * 2006-10-27 2013-08-21 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション Ｈｃｖｎｓ３プロテアーゼ阻害剤
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
WO2008057995A2 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
SG176488A1 (en) 2006-11-15 2011-12-29 Virochem Pharma Inc Thiophene analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2008059046A1 (en) 2006-11-17 2008-05-22 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
US20100081672A1 (en) * 2006-12-07 2010-04-01 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
GB0625345D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
US8101595B2 (en) * 2006-12-20 2012-01-24 Istituto di Ricerche di Biologia Molecolare P. Angletti SpA Antiviral indoles
GB0625349D0 (en) * 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
EP2094276A4 (en) * 2006-12-20 2011-01-05 Abbott Lab ANTIVIRAL COMPOUNDS
WO2008074035A1 (en) * 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
US20080207528A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-28 Syaulan Yang Hcv protease inhibitors
EA200970806A1 (ru) 2007-02-27 2010-08-30 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Сокристаллы и содержащие их фармацевтические композиции
US8575208B2 (en) 2007-02-27 2013-11-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
WO2008106166A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of liver diseases using specified matrix metalloproteinase (mmp) inhibitors
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
EP2139854A2 (en) * 2007-03-23 2010-01-06 Schering Corporation P1-nonepimerizable ketoamide inhibitors of hcv ns3 protease
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US8377872B2 (en) 2007-04-26 2013-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors
US7910587B2 (en) * 2007-04-26 2011-03-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors
US20080292587A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-27 Ying Sun Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
US20080317712A1 (en) * 2007-04-26 2008-12-25 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008137779A2 (en) * 2007-05-03 2008-11-13 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
MX2009011930A (es) 2007-05-04 2009-11-18 Vertex Pharma Terapia de combinacion para el tratamiento de infeccion de virus de hepatitis c.
EP2481735A1 (en) * 2007-05-09 2012-08-01 Pfizer Inc. Substituted heterocyclic derivatives and compositions and their pharmaceutical use as antibacterials
CA2686546A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Intermune, Inc. Novel peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
GB0709791D0 (en) * 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
AR068794A1 (es) * 2007-06-29 2009-12-09 Gilead Sciences Inc Compuestos antivirales
NZ582096A (en) * 2007-06-29 2012-05-25 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds that inhibit hepatitis c virus (hcv)
AU2008277442A1 (en) * 2007-07-17 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis C infections
CN101754974B (zh) * 2007-07-19 2016-02-03 Msd意大利有限公司 作为抗病毒剂的大环化合物
WO2009018657A1 (en) 2007-08-03 2009-02-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
EP2436682A1 (en) 2007-08-30 2012-04-04 Vertex Pharmceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
GB0718575D0 (en) 2007-09-24 2007-10-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Nucleoside derivatives as inhibitors of viral polymerases
US8419332B2 (en) * 2007-10-19 2013-04-16 Atlas Bolt & Screw Company Llc Non-dimpling fastener
US20090111757A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US8383583B2 (en) 2007-10-26 2013-02-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors
JP2011503201A (ja) 2007-11-14 2011-01-27 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 大環状テトラゾリルｃ型肝炎セリンプロテアーゼ阻害剤
US8030307B2 (en) * 2007-11-29 2011-10-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, C5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis C virus NS3 protease
US8263549B2 (en) * 2007-11-29 2012-09-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2009076166A2 (en) * 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl hcv serine protease inhibitors
CA2708150A1 (en) 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated tripeptide hcv serine protease inhibitors
CA2708047A1 (en) 2007-12-06 2009-06-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for making macrocyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
WO2009079353A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors
EP2234977A4 (en) 2007-12-19 2011-04-13 Boehringer Ingelheim Int VIRAL POLYMERASE INHIBITORS
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
CA2713005A1 (en) * 2008-01-24 2009-07-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluorinated tripeptides as hcv serine protease inhibitors
JP2011510926A (ja) * 2008-01-24 2011-04-07 エナンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヘテロアリール含有トリペプチドｈｃｖセリンプロテアーゼ阻害剤
RU2490272C2 (ru) 2008-02-04 2013-08-20 Айденикс Фармасьютикалз, Инк. Макроциклические ингибиторы серинпротеазы
CA2713108A1 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Virobay, Inc. Inhibitors of cathepsin b
CA2714604A1 (en) 2008-02-25 2009-09-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Macrocyclic hcv ns3 protease inhibitors
CA2719008A1 (en) * 2008-03-20 2009-09-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
TW200946541A (en) * 2008-03-27 2009-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Solid forms of an anti-HIV phosphoindole compound
WO2009142842A2 (en) 2008-04-15 2009-11-26 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102014911A (zh) * 2008-04-28 2011-04-13 默沙东公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
WO2009134987A1 (en) * 2008-04-30 2009-11-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Difluoromethyl-containing macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
US20090285774A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
CN102046648A (zh) 2008-05-29 2011-05-04 百时美施贵宝公司 丙型肝炎病毒抑制剂
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
KR20110065440A (ko) 2008-07-02 2011-06-15 아이데닉스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 바이러스 감염의 치료를 위한 화합물 및 제약 조성물
ES2392611T3 (es) 2008-07-22 2012-12-12 Merck Sharp & Dohme Corp. Compuestos de quinoxalina macrocíclica como inhibidores de la proteasa NS3 del VHC
MX2011000656A (es) 2008-07-23 2011-02-23 Hoffmann La Roche Compuestos heterociclicos antiviricos.
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
AU2009293494B2 (en) * 2008-09-16 2014-04-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline forms of a 2-thiazolyl- 4-quinolinyl-oxy derivative, a potent HCV inhibitor
AU2009293493B2 (en) * 2008-09-17 2014-09-18 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination of HCV NS3 protease inhibitor with interferon and ribavirin
MX2011002846A (es) 2008-09-26 2011-04-07 Hoffmann La Roche Derivados de pirina o pirazina para tratar el virus de la hepatitis c.
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2341924A4 (en) 2008-10-02 2013-01-23 David Gladstone Inst METHOD FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS C VIRUS INFECTIONS
WO2010045266A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Intermune, Inc. Therapeutic antiviral peptides
MX2011004133A (es) 2008-10-30 2011-05-24 Hoffmann La Roche Derivados de arilpiridona antiviral heterociclica.
EP2358355B1 (en) * 2008-11-21 2013-11-06 Boehringer Ingelheim International GmbH Pharmaceutical composition of a potent hcv inhibitor for oral administration
WO2010065668A1 (en) 2008-12-03 2010-06-10 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
AU2009322393B2 (en) 2008-12-03 2017-02-02 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of HCV NS5A
US20100272674A1 (en) * 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MX2011006631A (es) * 2008-12-19 2011-09-06 Gilead Sciences Inc Inhibidores de proteasa ns3 del virus hcv.
AU2009330333A1 (en) 2008-12-22 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
KR20110094352A (ko) 2008-12-22 2011-08-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 헤테로사이클릭 항바이러스 화합물
AR074897A1 (es) 2008-12-23 2011-02-23 Pharmasset Inc Fosforamidatos de nucleosidos
CL2009002206A1 (es) 2008-12-23 2011-08-26 Gilead Pharmasset Llc Compuestos derivados de pirrolo -(2-3-d]-pirimidin-7(6h)-tetrahidrofuran-2-il fosfonamidato, composicion farmaceutica; y su uso en el tratamiento de enfermedades virales.
MX2011006890A (es) 2008-12-23 2011-07-20 Pharmasset Inc Analogos de nucleosidos.
KR20110116136A (ko) 2009-01-07 2011-10-25 싸이넥시스, 인크. Ｈｃｖ 및 ｈｉｖ 감염의 치료에 사용하기 위한 사이클로스포린 유도체
WO2010082050A1 (en) 2009-01-16 2010-07-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic and 7-aminoalkyl-substituted benzoxazocines for treatment of hepatitis c infections
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
WO2010101967A2 (en) 2009-03-04 2010-09-10 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Phosphothiophene and phosphothiazole hcv polymerase inhibitors
JP2012519661A (ja) 2009-03-06 2012-08-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ウイルス性複素環化合物
CN102448458B (zh) 2009-03-18 2015-07-22 小利兰·斯坦福大学理事会 治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物
EA201190224A1 (ru) 2009-03-27 2012-03-30 Пресидио Фармасьютикалс, Инк. Ингибиторы гепатита c, содержащие конденсированные кольца
US8927576B2 (en) 2009-04-06 2015-01-06 PTC Therpeutics, Inc. HCV inhibitor and therapeutic agent combinations
TW201040181A (en) 2009-04-08 2010-11-16 Idenix Pharmaceuticals Inc Macrocyclic serine protease inhibitors
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
WO2010122082A1 (en) 2009-04-25 2010-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
CA2761650C (en) 2009-05-13 2015-05-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI428332B (zh) * 2009-06-09 2014-03-01 Hoffmann La Roche 雜環抗病毒化合物
CN102803212A (zh) 2009-06-24 2012-11-28 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒的杂环化合物
US8232246B2 (en) * 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
EP2448912A4 (en) * 2009-07-02 2014-05-28 Reddys Lab Ltd Dr ENZYMES AND METHODS FOR DEDOLDING AMINOVINYL-CYCLOPROPANECARBOXYLIC ACID DERIVATIVES
PE20120322A1 (es) 2009-07-07 2012-04-14 Boehringer Ingelheim Int Composicion farmaceutica que comprende faldaprevir o una sal del mismo en un vehiculo auto-emulsionante
US8828930B2 (en) 2009-07-30 2014-09-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis C virus NS3 protease inhibitors
AR077712A1 (es) 2009-08-05 2011-09-14 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores de serina proteasa macrociclica
CN102471239A (zh) * 2009-08-10 2012-05-23 住友化学株式会社 光学活性的1-氨基-2-乙烯基环丙甲酸酯的制造方法
US8324417B2 (en) 2009-08-19 2012-12-04 Virobay, Inc. Process for the preparation of (S)-2-amino-5-cyclopropyl-4,4-difluoropentanoic acid and alkyl esters and acid salts thereof
EP2477980B1 (en) * 2009-09-15 2016-06-08 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CN105001302A (zh) * 2009-09-28 2015-10-28 英特穆恩公司 C型肝炎病毒复制的环肽抑制剂
US9193740B2 (en) * 2009-10-19 2015-11-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrocyclic compounds as hepatitis C virus inhibitors
KR20120106942A (ko) 2009-10-30 2012-09-27 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Ｂｉ２０１３３５, 인터페론 알파 및 리바비린을 포함하는 ｈｃｖ 병용 치료요법을 위한 투여 용법
WO2011063076A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Itherx Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds
EP2504329A1 (en) 2009-11-25 2012-10-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections
MY159958A (en) 2009-12-18 2017-02-15 Idenix Pharmaceuticals Inc 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors
CN102883718A (zh) 2009-12-24 2013-01-16 顶点制药公司 用于治疗或预防黄病毒感染的类似物
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CA2788155C (en) 2010-01-27 2018-04-24 AB Pharma Ltd. Polyheterocyclic compounds highly potent as hcv inhibitors
US8530497B2 (en) 2010-03-11 2013-09-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Crystalline salts of a potent HCV inhibitor
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
CA2794181A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011119853A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201141857A (en) 2010-03-24 2011-12-01 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
AP2012006535A0 (en) 2010-03-31 2012-10-31 Gilead Pharmasset Llc Stereoselective synthesis of phosphorous containing actives
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
TWI515000B (zh) 2010-04-01 2016-01-01 伊迪尼克製藥公司 用於治療病毒感染之化合物及醫藥組合物
CA2800509A1 (en) 2010-05-24 2011-12-01 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
WO2011159826A2 (en) 2010-06-15 2011-12-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b protease mutants
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
JP2013529684A (ja) 2010-06-28 2013-07-22 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染の処置または予防のための化合物および方法
JP2013531011A (ja) 2010-06-28 2013-08-01 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染の処置または予防のための化合物および方法
CA2808291A1 (en) 2010-08-17 2012-02-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flaviviridae viral infections
TWI523658B (zh) 2010-09-21 2016-03-01 安塔製藥公司 巨環脯胺酸衍生之ｈｃｖ絲胺酸蛋白酶抑制劑
WO2012041771A1 (en) * 2010-09-30 2012-04-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection
CN103179966B (zh) 2010-10-08 2017-03-15 诺瓦提斯公司 磺酰胺ns3抑制剂的维生素e制剂
ES2716158T3 (es) 2010-11-30 2019-06-10 Gilead Pharmasset Llc 2'-spiro-nucleótidos para el tratamiento de hepatitis C
WO2012083170A1 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
CN103534256B (zh) 2010-12-30 2016-08-10 益安药业 大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂
KR20140003521A (ko) 2010-12-30 2014-01-09 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 페난트리딘 매크로사이클릭 ｃ형 간염 세린 프로테아제 억제제
TW201309690A (zh) 2011-02-10 2013-03-01 Idenix Pharmaceuticals Inc 巨環絲胺酸蛋白酶抑制劑，其醫藥組合物及其於治療ｈｃｖ感染之用途
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US9243025B2 (en) 2011-03-31 2016-01-26 Idenix Pharmaceuticals, Llc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8962810B2 (en) 2011-06-16 2015-02-24 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compound for inhibiting hepatitis C virus and preparation and use thereof
EP2725012A1 (en) 2011-06-21 2014-04-30 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. 1-amino-2-vinyl cyclopropane carboxylic acid amide, salt of same, and method for producing same
WO2012175581A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
CN102807607B (zh) * 2011-07-22 2013-10-23 爱博新药研发(上海)有限公司 抑制丙肝病毒的稠环杂环类化合物、其中间体及其应用
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
WO2013016491A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Thiophene compounds
DE202012012998U1 (de) 2011-08-31 2014-06-13 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels
AU2012308900A1 (en) 2011-09-12 2013-05-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US9403863B2 (en) 2011-09-12 2016-08-02 Idenix Pharmaceuticals Llc Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
KR101621181B1 (ko) 2011-10-10 2016-05-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 항바이러스성 화합물
AR089650A1 (es) 2011-10-14 2014-09-10 Idenix Pharmaceuticals Inc Fosfatos 3,5-ciclicos sustituidos de compuestos de nucleotido de purina y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales
DE112012003510T5 (de) 2011-10-21 2015-03-19 Abbvie Inc. Verfahren zur Behandlung von HCV umfassend mindestens zwei direkt wirkende antivirale Wirkstoffe, Ribavirin aber nicht Interferon
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
CN104023726A (zh) 2011-10-21 2014-09-03 艾伯维公司 用于治疗hcv的一种或多种daa的联合治疗(例如，与abt-072或abt-333)
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US9328138B2 (en) 2011-11-15 2016-05-03 Msd Italia S.R.L. HCV NS3 protease inhibitors
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
US9089574B2 (en) 2011-11-30 2015-07-28 Emory University Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
MX349036B (es) 2011-12-06 2017-07-07 Univ Leland Stanford Junior Metodos y composiciones para tratar enfermedades virales.
CN103987723B (zh) 2011-12-16 2017-03-01 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 Hcv ns5a 的抑制剂
IN2014CN04530A (cs) 2011-12-20 2015-09-11 Hoffmann La Roche
EA024297B1 (ru) 2011-12-20 2016-09-30 Рибосайенс Ллк 2',4'-дифтор-2'-метилзамещенные нуклеозидные производные в качестве ингибиторов репликации рнк вируса гепатита с
US20140037719A1 (en) 2012-01-12 2014-02-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Stabilized pharmaceutical formulations of a potent hcv inhibitor
WO2013106344A1 (en) 2012-01-12 2013-07-18 Ligand Pharmaceuticals, Inc. 2 '-c-methyl nucleosides containing a cyclic phosphate diester of 1, 3-propanediol (2-oxo-[1, 3, 2]-dioxaphosphorinane) at position 5'
WO2013133927A1 (en) 2012-02-13 2013-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate]
CN104185624B (zh) * 2012-02-24 2016-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒化合物
JP2015509980A (ja) 2012-03-14 2015-04-02 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｈｃｖ−ｈｉｖ同時感染患者集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
NZ630805A (en) 2012-03-22 2016-01-29 Alios Biopharma Inc Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
WO2013147749A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype populations
WO2013147750A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
WO2013143581A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in specific patient subgenotype sub-population
EP2852604B1 (en) 2012-05-22 2017-04-12 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
WO2013177195A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
MD20140134A2 (ro) 2012-05-22 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compuşi ai D-aminoacizilor pentru tratamentul bolilor hepatice
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
ES2674980T3 (es) 2012-10-08 2018-07-05 Idenix Pharmaceuticals Llc Análogos de 2'-cloro nucleósidos para infección por VHC
JP6154474B2 (ja) 2012-10-19 2017-06-28 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
EP2909223B1 (en) 2012-10-19 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC Dinucleotide compounds for hcv infection
WO2014066239A1 (en) 2012-10-22 2014-05-01 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2914613B1 (en) 2012-11-02 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2914614B1 (en) 2012-11-05 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
CN103804208B (zh) * 2012-11-14 2016-06-08 重庆博腾制药科技股份有限公司 一种丙肝药物中间体的制备方法
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
WO2014078427A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
US9211300B2 (en) 2012-12-19 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Llc 4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
MX2015009176A (es) 2013-01-23 2015-11-09 Hoffmann La Roche Derivados de triazola antivirales.
WO2014121418A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
WO2014121417A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Tetracyclic heterocycle compounds and methods of use thereof for the treatment of hepatitis c
US20150065439A1 (en) 2013-02-28 2015-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
WO2014135422A1 (en) 2013-03-05 2014-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
EP2964664B1 (en) 2013-03-07 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2014138374A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Oral combination therapy for treating hcv infection in specific patient sub-population
CN105408317A (zh) * 2013-03-14 2016-03-16 艾其林医药公司 用于生产Sovaprevir的方法
EP2981542B1 (en) 2013-04-01 2021-09-15 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
MX2015015781A (es) 2013-05-16 2016-06-02 Riboscience Llc Derivados de nucleósido 4'-azido, 3'-deoxi-3'-fluoro sustituido.
AU2014265293B2 (en) 2013-05-16 2019-07-18 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
EP3004130B1 (en) 2013-06-05 2019-08-07 Idenix Pharmaceuticals LLC. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
EA201690473A1 (ru) 2013-08-27 2017-03-31 ГАЙЛИД ФАРМАССЕТ ЭлЭлСи Комбинированный состав двух противовирусных соединений
EP3046924A1 (en) 2013-09-20 2016-07-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
WO2015066370A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
US9717797B2 (en) 2013-12-05 2017-08-01 International Business Machines Corporation Polycarbonates bearing aromatic N-heterocycles for drug delivery
WO2015095419A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-or nucleosides for the treatment of hcv
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
WO2015134560A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
US20170135990A1 (en) 2014-03-05 2017-05-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015134780A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3131914B1 (en) 2014-04-16 2023-05-10 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
JP7129703B2 (ja) 2016-04-28 2022-09-02 エモリー ユニバーシティー アルキン含有ヌクレオチド及びヌクレオシド治療組成物並びにそれらに関連した使用
EP3684374B1 (en) 2017-09-21 2025-07-30 Riboscience LLC 4'-fluoro-2'-methyl substituted nucleoside derivatives as inhibitors of hcv rna replication
US20220099637A1 (en) 2018-12-04 2022-03-31 Bristol-Myers Squibb Company Methods of analysis using in-sample calibration curve by multiple isotopologue reaction monitoring
WO2023193730A1 (zh) * 2022-04-08 2023-10-12 荣昌生物制药(烟台)股份有限公司 一种甲基奥瑞他汀e中间体的制备及纯化方法

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0475255A3 (en) * 1990-09-12 1993-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid
JPH05155827A (ja) * 1991-12-09 1993-06-22 Banyu Pharmaceut Co Ltd ｃｉｓ−２−アミノシクロプロパンカルボン酸誘導体の製造法
IT1272179B (it) 1994-02-23 1997-06-16 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodologia per riprodurre in vitro l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 del virus hcv.
CN1141591A (zh) * 1994-02-23 1997-01-29 布·安格莱荻公司分子生物学研究所 体外再生丙型肝炎病毒(hcv)ns3蛋白酶的解蛋白活性的方法
US5500208A (en) 1994-06-07 1996-03-19 The Procter & Gamble Company Oral compositions comprising a novel tripeptide
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
IT1277914B1 (it) * 1995-08-22 1997-11-12 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per produrre - in forma pura e in quantita' elevate - polipeptidi con l'attivita' proteolitica della proteasi ns3 di hcv, e
CA2165996C (en) * 1995-12-22 2002-01-29 Murray Douglas Bailey Stereoselective preparation of 2-substituted succinic derivatives
DE19600034C2 (de) 1996-01-02 2003-12-24 Degussa 1,1,2-Trisubstituierte Cyclopropanverbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Dihydroxyethyl-substituierte 1-Amino-cyclopropan-1-carbonsäure
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
NZ335276A (en) 1996-10-18 2000-09-29 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus (HCV) NS3 (Non Structural Protein 3) protease
EP1001764A4 (en) 1997-05-29 2005-08-24 Merck & Co Inc HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUNDS AS INHIBITORS OF CELL ADHESION
IL134232A0 (en) 1997-08-11 2001-04-30 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Hepatitis c inhibitor peptides
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
SE9704543D0 (sv) * 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6455571B1 (en) * 1998-04-23 2002-09-24 Abbott Laboratories Inhibitors of neuraminidases
DE19835120C1 (de) * 1998-08-04 1999-10-21 Westfalia Separator Ag Verfahren und Vorrichtung zum Einstellen des Flüssigkeitsgehalts des aus einer selbstentleerenden Schleudertrommel eines Separators ausgetragenen Feststoffes
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) * 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
DE602004029866D1 (de) * 2003-03-05 2010-12-16 Boehringer Ingelheim Pharma Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
JP4550824B2 (ja) * 2003-03-05 2010-09-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎抑制化合物

Also Published As

Publication number Publication date
KR20060083992A (ko) 2006-07-21
CY1109291T1 (el) 2014-07-02
MY127538A (en) 2006-12-29
UA75026C2 (en) 2006-03-15
PT2028186E (pt) 2013-03-27
KR100631439B1 (ko) 2006-10-09
EP2028186A3 (en) 2009-04-01
ATE430158T1 (de) 2009-05-15
NO328952B1 (no) 2010-06-28
USRE42164E1 (en) 2011-02-22
EA200100228A1 (ru) 2001-10-22
ID27839A (id) 2001-04-26
PL346626A1 (en) 2002-02-25
IN2001MU00127A (cs) 2005-03-04
EP2028186A2 (en) 2009-02-25
BG65738B1 (bg) 2009-09-30
JP4485685B2 (ja) 2010-06-23
CN1323316A (zh) 2001-11-21
WO2000009543A2 (en) 2000-02-24
EP2028186B1 (en) 2013-01-23
USRE41894E1 (en) 2010-10-26
CZ301268B6 (cs) 2009-12-30
USRE41356E1 (en) 2010-05-25
BR9917805B1 (pt) 2014-06-17
MEP58508A (en) 2011-05-10
HUP1300080A2 (cs) 2002-04-29
US6268207B1 (en) 2001-07-31
HK1040085B (zh) 2008-05-30
EP1105413B1 (en) 2009-04-29
DE69940817D1 (en) 2009-06-10
IN2007MU00706A (cs) 2007-07-20
NO20100004L (no) 2001-04-02
TR200100432T2 (tr) 2001-09-21
CA2445938A1 (en) 2000-02-24
BR9913646B1 (pt) 2014-12-02
KR20010085363A (ko) 2001-09-07
MX257413B (es) 2008-05-27
IL141012A (en) 2009-09-01
HUP0105144A3 (en) 2002-11-28
HU229262B1 (en) 2013-10-28
SK2062001A3 (en) 2001-10-08
TR200200129T2 (tr) 2002-06-21
KR100672229B1 (ko) 2007-02-28
BRPI9913646B8 (pt) 2021-05-25
JP2002522554A (ja) 2002-07-23
US20020037998A1 (en) 2002-03-28
HK1113164A1 (en) 2008-09-26
MX261584B (es) 2008-10-22
HRP20010102B1 (en) 2010-07-31
TWI250165B (en) 2006-03-01
YU9401A (sh) 2003-02-28
IL196545A0 (en) 2011-07-31
US6329417B1 (en) 2001-12-11
SK286994B6 (sk) 2009-09-07
WO2000009543A3 (en) 2000-05-25
DK2028186T3 (da) 2013-03-25
CN101143892A (zh) 2008-03-19
CN100339389C (zh) 2007-09-26
EP1105413A2 (en) 2001-06-13
ME00381B (me) 2011-10-10
RS50798B (sr) 2010-08-31
CO5261542A1 (es) 2003-03-31
SK288068B6 (sk) 2013-05-03
USRE40525E1 (en) 2008-09-30
EE200100081A (et) 2002-08-15
HUP0105144A2 (hu) 2002-04-29
US6329379B1 (en) 2001-12-11
NZ510396A (en) 2004-02-27
US6420380B2 (en) 2002-07-16
SA99200617B1 (ar) 2006-06-24
IN211493B (cs) 2008-01-25
US6534523B1 (en) 2003-03-18
ES2405930T3 (es) 2013-06-04
NO20010683D0 (no) 2001-02-09
SI1105413T1 (sl) 2009-10-31
PH11999002002B1 (en) 2007-10-19
CA2338946A1 (en) 2000-02-24
AU5273199A (en) 2000-03-06
CA2445938C (en) 2012-10-30
HU230701B1 (hu) 2017-10-30
BG105232A (en) 2001-11-30
SA99200617A (ar) 2005-12-03
AU769738B2 (en) 2004-02-05
ES2326707T3 (es) 2009-10-16
RS53562B1 (sr) 2015-02-27
AR073428A2 (es) 2010-11-03
NO20010683L (no) 2001-04-02
DK1105413T3 (da) 2009-08-17
US6323180B1 (en) 2001-11-27
PL204850B1 (pl) 2010-02-26
MXPA01001423A (es) 2001-08-01
NO336663B1 (no) 2015-10-12
CY1113935T1 (el) 2016-07-27
EA003906B1 (ru) 2003-10-30
RS20090459A (sr) 2010-06-30
AR069583A2 (es) 2010-02-03
CA2338946C (en) 2010-10-12
HRP20010102A2 (en) 2002-02-28
IL141012A0 (en) 2002-02-10
IL196545A (en) 2012-06-28
JP5021711B2 (ja) 2012-09-12
US20020016442A1 (en) 2002-02-07
CZ302766B6 (cs) 2011-10-26
AR020880A1 (es) 2002-06-05
PE20000949A1 (es) 2000-09-26
BR9913646A (pt) 2001-06-05
PT1105413E (pt) 2009-06-30
SI2028186T1 (sl) 2013-06-28
EE05517B1 (et) 2012-02-15
JP2010043124A (ja) 2010-02-25
CN101143892B (zh) 2010-12-08
HK1040085A1 (zh) 2002-05-24
ZA200100971B (en) 2002-06-26
US6410531B1 (en) 2002-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1105413B1 (en) Hepatitis c inhibitor tri-peptides
EP1105422B1 (en) Hepatitis c inhibitor peptides
MXPA01001422A (en) Hepatitis c inhibitor peptides

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20190809