CZ297379B6 - Izolovaná DNA molekula, DNA konstrukt, rostlinná bunka a transgenická rostlina, peptid, zpusob prípravy transgenické rostlinné bunky, osivo transgenické rostliny, zpusob produkce tabákové rostliny a zpusob snízení a zvýsení exprese genu - Google Patents
Izolovaná DNA molekula, DNA konstrukt, rostlinná bunka a transgenická rostlina, peptid, zpusob prípravy transgenické rostlinné bunky, osivo transgenické rostliny, zpusob produkce tabákové rostliny a zpusob snízení a zvýsení exprese genu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ297379B6 CZ297379B6 CZ0367799A CZ367799A CZ297379B6 CZ 297379 B6 CZ297379 B6 CZ 297379B6 CZ 0367799 A CZ0367799 A CZ 0367799A CZ 367799 A CZ367799 A CZ 367799A CZ 297379 B6 CZ297379 B6 CZ 297379B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- dna
- plant
- phosphoribosyl transferase
- plant cell
- quinolate phosphoribosyl
- Prior art date
Links
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims abstract description 122
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 77
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims description 60
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 36
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title claims description 20
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims abstract description 74
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims abstract description 72
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 44
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 231
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims description 118
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims description 114
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 71
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims description 71
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 71
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 46
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 37
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 34
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 24
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 20
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 17
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 17
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims description 16
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims description 15
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 14
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 claims description 12
- 101000583239 Homo sapiens Nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase [carboxylating] Proteins 0.000 claims description 11
- 102100030830 Nicotinate-nucleotide pyrophosphorylase [carboxylating] Human genes 0.000 claims description 11
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 7
- YXLXNENXOJSQEI-UHFFFAOYSA-L Oxine-copper Chemical compound [Cu+2].C1=CN=C2C([O-])=CC=CC2=C1.C1=CN=C2C([O-])=CC=CC2=C1 YXLXNENXOJSQEI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 6
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 6
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 claims description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 92
- GWWNCLHJCFNTJA-UHFFFAOYSA-N nicandrenone-2 Natural products C12OC2C2(O)CC=CC(=O)C2(C)C(CCC23C)C1C3CCC2(O)C(C)C1OC(O)C2(C)OC2(C)C1 GWWNCLHJCFNTJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- PWHVEHULNLETOV-UHFFFAOYSA-N Nic-1 Natural products C12OC2C2(O)CC=CC(=O)C2(C)C(CCC2=C3)C1C2=CC=C3C(C)C1OC(O)C2(C)OC2(C)C1 PWHVEHULNLETOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 19
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 9
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 9
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 8
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 8
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 6
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 101100268840 Danio rerio chrna1 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 description 4
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 4
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 4
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SWQALSGKVLYKDT-UHFFFAOYSA-N Gly-Ile-Ala Natural products NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(C)C(O)=O SWQALSGKVLYKDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 108010060641 flavanone synthetase Proteins 0.000 description 3
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000000442 meristematic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- HUUOZYZWNCXTFK-INTQDDNPSA-N Ala-His-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N HUUOZYZWNCXTFK-INTQDDNPSA-N 0.000 description 2
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 2
- ORJQQZIXTOYGGH-SRVKXCTJSA-N Asn-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ORJQQZIXTOYGGH-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- GWWSUMLEWKQHLR-NUMRIWBASA-N Asp-Thr-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O GWWSUMLEWKQHLR-NUMRIWBASA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 230000026774 DNA mediated transformation Effects 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O LZEUDRYSAZAJIO-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N Gly-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CN)C(O)=O OQQKUTVULYLCDG-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- XKIYNCLILDLGRS-QWRGUYRKSA-N His-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 XKIYNCLILDLGRS-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- CYHYBSGMHMHKOA-CIQUZCHMSA-N Ile-Ala-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N CYHYBSGMHMHKOA-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 2
- 101100288095 Klebsiella pneumoniae neo gene Proteins 0.000 description 2
- ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N Leu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- QNTJIDXQHWUBKC-BZSNNMDCSA-N Leu-Lys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QNTJIDXQHWUBKC-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- UQJOKDAYFULYIX-AVGNSLFASA-N Lys-Pro-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 UQJOKDAYFULYIX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 241000208134 Nicotiana rustica Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 240000007377 Petunia x hybrida Species 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- XNXRTQZTFVMJIJ-DCAQKATOSA-N Ser-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XNXRTQZTFVMJIJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 2
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 2
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000005442 molecular electronic Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 101150047250 nadC gene Proteins 0.000 description 2
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 3-(1-methylpyrrolidin-2-yl)pyridine;7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC=N2.CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 MNIQECRMTVGZBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJZBKCVVFPTFAW-UHFFFAOYSA-N 4-Methylaminobutanal Chemical compound CNCCCC=O PJZBKCVVFPTFAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N Ala-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- PNALXAODQKTNLV-JBDRJPRFSA-N Ala-Ile-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PNALXAODQKTNLV-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N Ala-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- GCTANJIJJROSLH-GVARAGBVSA-N Ala-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C)N GCTANJIJJROSLH-GVARAGBVSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N Arg-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PEFFAAKJGBZBKL-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N Arg-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O VVJTWSRNMJNDPN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JCROZIFVIYMXHM-GUBZILKMSA-N Arg-Met-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JCROZIFVIYMXHM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N Asn-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O XSGBIBGAMKTHMY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N Asn-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DDPXDCKYWDGZAL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IICZCLFBILYRCU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YGHCVNQOZZMHRZ-DJFWLOJKSA-N Asn-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YGHCVNQOZZMHRZ-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 1
- JXMREEPBRANWBY-VEVYYDQMSA-N Asn-Thr-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JXMREEPBRANWBY-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- XOQYDFCQPWAMSA-KKHAAJSZSA-N Asn-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOQYDFCQPWAMSA-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SLHOOKXYTYAJGQ-XVYDVKMFSA-N Asp-Ala-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 SLHOOKXYTYAJGQ-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Lys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O CJUKAWUWBZCTDQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N Asp-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Asp-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YXALGQBWVHQVLC-UHFFFAOYSA-N Asp-Pro-Ser-Leu-Lys Natural products CC(C)CC(NC(=O)C(CO)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(N)CC(=O)O)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)O YXALGQBWVHQVLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLNJUJGNLDSFOP-UWJYBYFXSA-N Asp-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PLNJUJGNLDSFOP-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- RKXVTTIQNKPCHU-KKHAAJSZSA-N Asp-Val-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O RKXVTTIQNKPCHU-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000724252 Cucumber mosaic virus Species 0.000 description 1
- OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OZHXXYOHPLLLMI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 102100030011 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093099 Endoribonucleases Proteins 0.000 description 1
- MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N MXOODARRORARSU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N Glu-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- RDPOETHPAQEGDP-ACZMJKKPSA-N Glu-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RDPOETHPAQEGDP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HVYWQYLBVXMXSV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VGBSZQSKQRMLHD-MNXVOIDGSA-N Glu-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VGBSZQSKQRMLHD-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- LKOAAMXDJGEYMS-ZPFDUUQYSA-N Glu-Met-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LKOAAMXDJGEYMS-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- TWYSSILQABLLME-HJGDQZAQSA-N Glu-Thr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYSSILQABLLME-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- CGWHAXBNGYQBBK-JBACZVJFSA-N Glu-Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWHAXBNGYQBBK-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N Glu-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- UXJHNZODTMHWRD-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O UXJHNZODTMHWRD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- SWQALSGKVLYKDT-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ile-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SWQALSGKVLYKDT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N Gly-Ile-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- UCDWNBFOZCZSNV-AVGNSLFASA-N His-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O UCDWNBFOZCZSNV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ZVKDCQVQTGYBQT-LSJOCFKGSA-N His-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZVKDCQVQTGYBQT-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- GYAFMRQGWHXMII-IUKAMOBKSA-N Ile-Asp-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N GYAFMRQGWHXMII-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N Ile-Asp-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N LLZLRXBTOOFODM-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N Ile-Gly-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YKZAMJXNJUWFIK-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- CNMOKANDJMLAIF-CIQUZCHMSA-N Ile-Thr-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNMOKANDJMLAIF-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Asn-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZURHXHNAEJJRNU-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZURHXHNAEJJRNU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N Leu-Asp-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XVSJMWYYLHPDKY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N Leu-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N Leu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ala Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N Lys-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JYVCOTWSRGFABJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VHGIWFGJIHTASW-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- RRIHXWPHQSXHAQ-XUXIUFHCSA-N Met-Ile-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RRIHXWPHQSXHAQ-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- ORRNBLTZBBESPN-HJWJTTGWSA-N Met-Ile-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ORRNBLTZBBESPN-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- LNXGEYIEEUZGGH-JYJNAYRXSA-N Met-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)CC1=CC=CC=C1 LNXGEYIEEUZGGH-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CIDICGYKRUTYLE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IQJMEDDVOGMTKT-SRVKXCTJSA-N Met-Val-Val Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IQJMEDDVOGMTKT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010047562 NGR peptide Proteins 0.000 description 1
- 241001495644 Nicotiana glutinosa Species 0.000 description 1
- 101100301141 Nicotiana plumbaginifolia RBCS gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 102100037214 Orotidine 5'-phosphate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010055012 Orotidine-5'-phosphate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- SWZKMTDPQXLQRD-XVSYOHENSA-N Phe-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWZKMTDPQXLQRD-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N Phe-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- KXUZHWXENMYOHC-QEJZJMRPSA-N Phe-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXUZHWXENMYOHC-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- GMWNQSGWWGKTSF-LFSVMHDDSA-N Phe-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GMWNQSGWWGKTSF-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- FKYKZHOKDOPHSA-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FKYKZHOKDOPHSA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N Pro-Tyr-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DLZBBDSPTJBOOD-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 230000007022 RNA scission Effects 0.000 description 1
- 241000190984 Rhodospirillum rubrum Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N Thr-Arg-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CCCN=C(N)N WFUAUEQXPVNAEF-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- YAAPRMFURSENOZ-KATARQTJSA-N Thr-Cys-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O YAAPRMFURSENOZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N Thr-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KRGDDWVBBDLPSJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 1
- XTCNBOBTROGWMW-RWRJDSDZSA-N Thr-Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N XTCNBOBTROGWMW-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 1
- LCCSEJSPBWKBNT-OSUNSFLBSA-N Thr-Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N LCCSEJSPBWKBNT-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- YKRQRPFODDJQTC-CSMHCCOUSA-N Thr-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N Thr-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- CURFABYITJVKEW-QTKMDUPCSA-N Thr-Val-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O CURFABYITJVKEW-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N Tyr-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N 0.000 description 1
- MTEQZJFSEMXXRK-CFMVVWHZSA-N Tyr-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N MTEQZJFSEMXXRK-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 RCLOWEZASFJFEX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HVPPEXXUDXAPOM-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HVPPEXXUDXAPOM-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- AUMNPAUHKUNHHN-BYULHYEWSA-N Val-Asn-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N AUMNPAUHKUNHHN-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N Val-Asp-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N Val-Glu-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N OQWNEUXPKHIEJO-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- CHWRZUGUMAMTFC-IHRRRGAJSA-N Val-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)CC1=CNC=N1 CHWRZUGUMAMTFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N Val-Ile-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- YLBNZCJFSVJDRJ-KJEVXHAQSA-N Val-Thr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O YLBNZCJFSVJDRJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N Val-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 241001002356 Valeriana edulis Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 108010076324 alanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N anhydrous quinoline Natural products N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000019506 cigar Nutrition 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010080575 glutamyl-aspartyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000012296 in situ hybridization assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010012988 lysyl-glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000006272 natural pesticide Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000001216 nucleic acid method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010093296 prolyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N quinolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1C(O)=O GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
Abstract
Izolovaná DNA molekula obsahující sekvenci volenou ze skupiny zahrnující: (e) SEQ ID c.: 1 (f) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID c.: 2 (g) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výse a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (h) DNA sekvence, které se lisí od DNA podle (a), (b) nebo (c) uvedených výse, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu, a konstrukty obsahující uvedenou DNA. Zpusoby zmeny exprese chinolát-fosforibosyl-transferázy.
Description
(54) Název vynálezu:
Izolovaná DNA molekula, DNA konstrukt, rostlinná buňka a transgenická rostlina, peptid, způsob přípravy transgenické rostlinné buňky, osivo transgenické rostliny, způsob produkce tabákové rostliny a způsob snížení a zvýšení exprese genu (57) Anotace:
Izolovaná DNA molekula obsahující sekvenci volenou ze skupiny zahrnující:
(e) SEQ ID č.: 1 (f) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (g) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (h) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c) uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu, a konstrukty obsahující uvedenou DNA.
Způsoby změny exprese chinolát-fosforibosyl-transferázy.
Xys.
Izolovaná DNA molekula, DNA konstrukt, rostlinná buňka a transgenická rostlina, peptid, způsob přípravy transgenické rostlinné buňky, osivo transgenické rostliny, způsob produkce tabákové rostliny a způsob snížení a zvýšení exprese genu
Oblast techniky
Uvedený vynález se týká rostlinné chinolát-fosforibosyl-transferázy a DNA kódující tento enzym. Detailněji se uváděný vynález dotýká použití DNA kódující chinolát-fosforibosyl-transferázu pro produkci transgenických rostlin majících geneticky pozměněné úrovně nikotinu, a takto produkovaných rostlin.
Dosavadní stav techniky
Předmětem zájmu je produkce tabákových rostlin se sníženými úrovněmi nikotinu, uvádějící zájem vzhledem k návykové vlastnosti nikotinu. Dodatečně jsou tabákové rostliny s extrémně nízkými úrovněmi produkce nikotinu nebo žádnou produkcí nikotinu zajímavé jako recipienty transgenů zhodnocujících obchodně užitkové produkty, takové jako farmaceutické prostředky, kosmetické prostředky nebo potravinářské přísady. Pro odstranění nikotinu z tabáku byla navržena řada různých způsobů. Avšak většina těchto způsobů odstraňuje z tabáku společně s nikotinem i další složky, čímž nepříznivě ovlivňuje tabák. Klasické techniky pěstování kultury produkují tabákové rostliny s nižšími úrovněmi nikotinu (přibližně 8 %), než jsou úrovně shledané v plných typech tabákových rostlin. Žádané jsou tabákové rostliny a tabák mající dokonce další redukce obsahu nikotinu.
Jedním způsobem snížení úrovně biologického produktu je snížení množství požadovaného enzymu biosyntetickou cestou vytvářející žádaný produkt. Pokud se ovlivněný enzym přirozeně nachází v množství omezující rychlost reakce (porovnáno s dalšími enzymy nezbytnými pro biosyntézu), bude jakékoliv snížení tohoto množství enzymu snižovat produkci konečného produktu. Jestliže však množství enzymu rychlost běžně neomezuje, musí jeho přítomnost v buňce být snížena na úrovně omezující rychlost reakce s cílem snížit množství konečného produktu biosyntézy. Opačně, jestliže přirozeně se vyskytující množství enzymu omezuje rychlost, potom jakékoliv zvýšení aktivity enzymu bude vést ke zvýšení objemu biosyntetického konečného produktu. Nikotin se utváří původně v kořenech tabákové rostliny a je následně transportován do listů, kde je skladován (Tso, Fyziologie a biochemie tabákových rostlin, str. 233-34, Dowden, Hutchinson & Rss, Strodsburg, Pa (1972)). Povinným krokem biosyntézy nikotinu je vytváření kyseliny nikotinové z kyseliny chinolinové, tedy krok, který je katalyzován enzymem chinolin-fosforibosyl-transferázou („QPRTáza“). QPRTáza se projevuje jako enzym ovlivňující rychlost reakce v průběhu biosyntézy, dodávající kyselinu nikotinu pro syntézu nikotinu v tabáku. Viz např. Feth a kol., „Regulace aktivity enzymů nikotinové cesty v tabákovém kalu“, Planta, 168, str. 402-07 (1986); Wagner a spol.., „Regulace aktivity enzymů nikotinové cesty u tabáku“, Physiol. Plant., 68, str. 667-72 (1986). Modifikace úrovní nikotinu u rostlin tabáku pozitivní regulací hnilobné methyltransferázy (PMTáza) je navrženo v patentech US 5 369 023 a US 5 260 205, od Nakatani a Malik. PCT přihláška WO 94/28142 od Wahad a Malik popisuje DNA kódující PMT a použití antikódujících a kódujících PMT konstruktů.
Podstata vynálezu
Prvním hlediskem předloženého vynálezu je izolovaná DNA molekula obsahující SEQ ID č.: 2; DNA sekvence, které kódují enzym obsahující SEQ ID č.: 2; DNA sekvence, které hybridizují na uváděné DNA a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferáza; a DNA sekvence, které se liší od výše uvedených DNA sekvencí díky degeneraci generického kódu. Peptid kódovaný uváděnými DNA je dalším hlediskem vynálezu.
-1 CZ 297379 B6
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je DNA konstrukt obsahující promotor schopný působit v rostlinné buňce a DNA část, kódující enzym chinolát-fosforibosyl-transferáza, umístěnou ve směru z promotoru a k tomuto účinně připojenou. DNA kódující enzym může být kódujícím nebo antikódujícím směru.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je metoda přípravy transgenické rostlinné buňky mající sníženou expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy QPRTáza) zajištěním rostlinné buňky typu známého pro expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy; transformace rostlinné buňky exogenním DNA konstruktem obsahujícím promotor a DNA tvořenou částí sekvence kódující mRNA (mediátorová RNA) chinolát-fosforibosyl-transferázy.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je transgenická rostlina druhů Nicotiana mající sníženou expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) oproti ne-transformované kontrolní rostlině. Buňky uváděných rostlin obsahují DNA konstrukt, který zahrnuje část DNA sekvence kódující mRNA rostlinné chinolát-fosforibosyl-transferázy.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je metoda snížení exprese genu chinolát-fosforibosyltransferáza v rostlinné buňce pěstováním rostlinné buňky transformované v obsahu exogenní DNA, kdy transkript řetězce exogenní DNA je komplementární k mRNA chinolát-fosforibosyltransferázy, která je pro buňky endogenní. Transkripce komplementárního řetězce snižuje expresi endogenního genu chinolát-fosforibosyl.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je metoda produkce tabákové rostliny se sníženými úrovněmi nikotinu v jejich listech pěstováním tabákové rostliny s buňkami, které obsahují exogenní DNA sekvenci, kdy transkripční řetězec exogenní DNA sekvence je komplementární k endogenní chinolát-fosforibosyl-transferáza-mediátorové RNA v buňkách.
Dalším hlediskem vynálezu je metoda tvorby transgenické rostlinné buňky mající zvýšenou expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) transformací rostlinné buňky známé pro expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy exogenním DNA konstruktem, který obsahuje DNA sekvenci kódující chinolát-fosforibosyl-transferázu.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je transgenická Nicotiana rostliny mající zvýšenou expresi chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza), kdy buňky transgenické rostliny obsahují exogenní DNA sekvenci kódující rostlinnou chinolát-fosforibosyl-transferázu.
Dalším hlediskem předloženého vynálezu je metoda produkce tabákové rostliny mající zvýšené úrovně nikotinu v jejích listech pěstováním tabákové rostliny zahrnující buňky, které obsahují exogenní DNA sekvenci kódující chinolát—fosforibosyl—transferázu, účinnou v buňkách.
Nikotin tabákových rostlin je produkován kondenzací kyseliny nikotinové a 4-methylaminobutanalu. Biosyntetická cesta vedoucí k produkci nikotinu je znázorněná na obrázku 1: Dvě regulační místa genů v chromozómu (Nicl a Nic2) působí jako ko-dominantní (úrovňové) regulátory produkce nikotinu. Analýza enzymů v kořenech jednoduchého a dvojitého Nic mutanta ukazuje, že aktivita dvou enzymů, chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) a hnilobné methyl-transferázy (PMTáza), je přímo úměrná úrovním biosystému nikotinu.
Porovnání aktivity enzymů v tabákových tkáních (kořenech a kalu) s různou schopností syntézy nikotinu ukazuje, že aktivita QPRTázy je v přesném vzájemném vztahu (koreluje) s obsahem nikotinu (Wagner a Wagner, Planta 165:532 (1985)). Saunders a Bush (Plant Physiol 64:236 (1979) prokazují, že úroveň QPRTázy v kořenech mutantů s nízkými úrovněmi nikotinu je přímo úměrná k úrovním nikotinu v listech.
-2CZ 297379 B6
Předložený vynález zahrnuje novou cDNA sekvenci (SEQ ID č.: 1) kódující rostlinnou chinolátfosforibosyl-transferázu (QPRTáza) sekvence SEQ ID č.: 2. Vzhledem ktomu, že aktivita QPRTázy je v přesném korelačním vztahu s obsahem nikotinu, transgenické tabákové rostliny, ve kterých úrovně QPRTázy jsou v kořenech rostliny sníženy (porovnáno s úrovněmi u planých typů rostlin), vedou k rostlinám majícím snížené úrovně nikotinu v listech. Předložený vynález poskytuje metody a konstrukty nukleových kyselin pro produkci uváděných transgenických rostlin, stejně jako uváděné transgenické rostliny. Uváděné metody zahrnují expresi kódující NtQPTl RNA, která snižuje množství QPRTázy v kořenech tabákových rostlin. Nikotin byl dodatečně shledán v netabákových druzích a čeledích rostlin, ačkoliv přítomné množství je obvykle mnohem nižší než v N. tabacum.
Předložený vynález také zajišťuje molekuly antikódující a kódující rekombinantní DNA kódující QPRTázu nebo molekuly antimediátorové (pozitivní) RNA QPRTázy a vektory obsahující uváděné molekuly rekombinantní DNA, stejně jako buňky transgenických rostlin a rostliny transformované uváděnými DNA molekulami a vektory. Transgenické tabákové buňky a rostliny tohoto vynálezu jsou charakteristické nižším nebo vyšším obsahem nikotinu, oproti netransformovaným kontrolním tabákovým buňkám a rostlinám.
Tabákové rostliny s extrémně nízkými úrovněmi produkce nikotinu nebo žádnou produkcí nikotinu jsou zajímavé jako recipienty transgenů vytvářejících obchodně hodnotné produkty, takové jako farmaceutické prostředky, kosmetické prostředky nebo potravinářské přísady. Tabák je zajímavý jako recipientní rostlina transgenů kódujícího žádaný produkt, jelikož je snadno geneticky upravitelný a produkuje velké množství biomasy najeden akr; tabákové rostliny se sníženými zdroji týkajícími se produkce nikotinu, budou ve shodě s tím zahrnovat více zdrojů využitelných pro produkci transgenických produktů. Metody transformace tabáku transgeny produkujícími požadované produkty jsou v oboru známé; použit může být jakýkoliv vhodný způsob využívající tabákové rostliny s nízkým obsahem nikotinu ve shodě s předloženým vynálezem.
Tabákové rostliny se sníženou expresí QPRTázy a sníženými úrovněmi nikotinu, ve shodě s předloženým vynálezem, budou potřebné pro produkci tabákových výrobků majících snížený obsah nikotinu. Tabákové rostliny ve shodě s předloženým vynálezem budou vhodné pro použití v jakémkoliv tradičním tabákovém produktu, zahrnujícím, ale nikterak omezeným na, tabák do dýmky, doutník a cigaretový tabák a žvýkací tabák, tabákový produkt může být v jakékoliv formě zahrnující listový tabák, sekaný tabák a řezaný tabák.
Provedení předloženého vynálezu mohou být také vhodné pro zajištění transgenických rostlin majících zvýšenou expresi QPRTázy a zvýšený obsah nikotinu v rostlině. Uvedená provedení, metody použití těchto provedení a rostliny takto produkované mohou být potřebné pro výrobu tabákových produktů majících upravený obsah nikotinu nebo pro produkci rostlin majících obsah nikotin zvýšený pro jeho insekticidní účinky.
Současní vynálezci zjistili, že TobRD2 gen (viz Conkling a spol, Plant Phas. 93, 1203 (1990), kóduje QPRTázu Nicotiana tabacum a na tomto místě poskytuje cDNA sekvenci NtQPTl (dříve označovanou jako TobRDT) a amino kyselinovou sekvenci kódovaného enzymu. Porovnání NtQPTl amino kyselinové sekvence s GenBank databází ukazuje omezenou podobnost sekvence bakteriálním protein, které kódují chinolát-fosforibosyl-transferázu (QPRTáza) (obrázek 3).
Chinolát-fosforibosyl-transferáza je nezbytná pro biosyntézu nového nikotin-adenindinukleotidu (NAD) jak v prokaryonech, tak i v eukaryonech. V tabáku jsou vysoké úrovně QPRTázy zjištěny v kořenech, ale ne v listech. K určení, že NtQPTl kóduje QPRTázu, současní vynálezci použili Escherichia coli druhu bakterií (TH265), mutant postrádající chinolát-fosforibosyl-transferázu (nadC). Tento mutant nemůže růst na minimálním médiu postrádajícím kyselinu nikotinovou. Avšak, exprese NtQPTl proteinu u tohoto bakteriálního druhu dodala NadC+ fenotyp (obrázek 4) potvrzující, že NtQPTl kóduje QPRTázu.
-3CZ 297379 B6
Současní vynálezci zkoumali účinky Nicl a Nic2 mutantů v tabáku a vlivy upravených tabákových rostlin na úrovně ustáleného stavu mRNA NtQPTl a úrovně nikotinu. (Odstranění apikální dominance vrchní úpravou na počátku období květu je dobře známé a vede ve zvýšené úrovně biosyntézy nikotinu a transportu nikotinu v tabáku a je běžnou praxí při produkci tabáku). Jestliže NtQPTl je ve skutečnosti zahrnuto při biosyntéze nikotinu, očekáváním bude, že (1) NtQPTl mRNA úrovně budou nižší vNicl/Nic2 dvoumutantech a (2) NtQPTl mRNA úrovně budou zvýšeny po vrchní úpravě. NtQPTl mRNA úrovně vNicl/Nic2 dvojitých mutantech byly shledány přibližně 25 % úrovně planému typu (obrázek 5). Dále, po šesti hodinách od provedení vrchní úpravy, NtQPTl mRNA úrovně tabákových rostlin se zvýšily asi osm-krát. NtQPTl bylo takto zjištěno jako klíčový kontrolní gen způsobu biosyntézy nikotinu.
Transfenické rostlinné buňky a rostliny
Kontroly exprese genu v rostlinných buněčných genomech je možné dosáhnout zapojením heterologní DNA pod transkripční kontrolou promotoru účinného v hostiteli, přičemž transkripční řetězec heterologní DNA je komplementární k řetězci DNA, který je přepsán z upravovaného endogenního genu. Zavedená DNA, označovaná jako kódující DNA, zajišťuje RNA sekvenci, která je komplementární k přírodně produkovaným (endogenním) mRNA kyselinám a která potlačuje expresi endogenní mRNA. Mechanismus uvedené regulace exprese genu kódováním není zcela jasný.A niž bychom si přáli být omezeni pouze na jednu jednotlivou teorii, je známé, že jedna teorie regulace kódováním nabízí, aby transkripce kódující DNA vytvářela RNA molekuly, které se váží na a ochraňují nebo potlačují transkripci molekul endogenních mRNA.
Kódující produkt může být podle metod předloženého vynálezu komplementárním ke kódující nebo nekódující (nebo oběma) části přirozeně se vyskytující koncové RNA. Kódující konstrukt může být zaveden do rostlinných buněk jakýmkoliv vhodným způsobem a může být zapojen do rostlinného genomu pro indukovatelnou nebo konstitutivní transkripci pozitivní (kódující) sekvence. Viz např. Patent US 5 453 566 a US 5 107 065, od Sdhewmaker a spol., (v textu zahrnut poznámkami).
Pojmy exogenní nebo heterologní DNA (nebo NRA), jak jsou použity v textu, se vztahují na DNA (nebo RNA), která byla zavedena do buňky (nebo předchůdce buněk) úpravou provedenou člověkem. Uvedená heterologní DNA může být kopií sekvence, která se přirozeně nachází v buňkách určených pro transkripci nebo v jejich částech.
K produkci tabákové rostliny mající snížené úrovně QPRTázy a tudíž nižší obsah nikotinu, než netransformovaná kontrolní tabáková rostlina, mohou být tabákové buňky transformovány exogenním QPRT kódujícím transkripčním celkem obsahujícím neúplnou QPRT cDNA sekvenci, plnou délku QPRT cDNA sekvence, neúplnou QPRT chromozomální sekvenci nebo plnou délku QPRT chromozomální sekvence, v pozitivní (kódující) orientaci s vhodnými účinně propojenými kontrolními sekvencemi. Vhodné kontrolní sekvence zahrnují iniciační sekvenci transkripce („promotor“) účinnou v rostlinách, které mají být transformovány, a polyadenylační/transkripční cílovou koncovou sekvenci. Pro určení klonů nesoucích sekvence QPRTázy v kódujícím (pozitivním) směru účinně připojené na kontrolní sekvence jsou použity běžné techniky, takové jako restrikční mapování, Southemova hybridizace a analýza nukleotidové sekvence. Tabákové rostliny jsou následně regenerovány z úspěšně transformovaných buněk. Je nejvhodnější, aby použitá kódující sekvence byla komplementární k endogenní sekvenci, avšak malé obměny exogenních a endogenních sekvencí mohou být také tolerovány. Je výhodné, aby kódující DNA sekvence byla dostatečně sekvenčně příbuzná tak, aby byla schopná vazby k endogenní sekvenci v kontrolované buňce za striktních podmínek, které jsou popsány dále v textu.
Pro vytvoření transgenických rostlin charakterizovaných nižším než obvyklým množstvím specifického enzymu byla použita v několika laboratořích technologie kódování. Např., rostliny s nižšími úrovněmi chalkonsyntázy, enzymu květního pigmentu biosyntetické cesty, byly vytvořeny dodáním antimediátorového genu chlakonsyntázy do genomu tabáku a petúnie. Tyto trans
-4CZ 297379 B6 genické rostliny tabáku a petúnií vytváří květy světlejší, než je jejich obvyklé zbarvení (Van der Krol a spol., „Antimediátorový gen chalkonsyntázy v transgenických rostlinách potlačuje květní pigmentaci“, Nátuře, 333, str. 866-69 (1988)). Kódující RNA technologie byla také úspěšně použita pro potlačení produkce enzymu polygalakturonázy u rajčat (Smith a spol., „Potlačení exprese genu polygalakturonázy u transgenických rajčat antimediátorovou RNA“, Nátuře, 334, str. 72426 (1988); Sheehy a spol., „Redukce aktivity polygalakturonázy u rajčat antimediátorovou RNA“, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85, str. 8805-09 (1988)) u malých dílčích částí enzymu ribulóza-bisfosfátkarboxylóza u tabáku (Rodermel a spol., „Vzájemné působení jaderných organel: Jaderný antimediátorový gen potlačuje úrovně enzymu ribulóza-bisfosfát-karboxyláza u transformovaných tabákových rostlin“, Cell, 55, str. 673-81 (1988)). Transgenické rostliny charakterizované vyššími než obvyklými množstvími zmíněného enzymu mohou být případně produkovány transformací rostlin genem pro tento enzym v negativním (tj. normálním) směru. Úrovně nikotinu v transgenických tabákových rostlinách předloženého vynálezu mohou být zjištěny obvyklou zkouškou přítomnosti nikotinu. Transformované rostliny, ve kterých je úroveň OPRTázy v porovnání s netransformovanými kontrolními rostlinami snížena, budou mít shodně úroveň nikotinu v porovnání s kontrolní úrovní sníženou; transformované rostliny, ve kterých je úroveň QPRTázy oproti netransformovaným kontrolním rostlinám zvýšena, budou mít shodně úroveň nikotinu při porovnání s kontrolní úrovní zvýšenou.
Heterologní sekvence použitá v metodách kódování předloženého vynálezu může být volena tak,a by byl vytvořen RNA produkt komplementární k celé mRNA sekvenci QPRTázy nebo kjejí části. Sekvence může být komplenetámíková kjakékoliv sousedící sekvenci přirozené mediátorové RNA, tj. může být komplementární k endogenní mRNA sekvenci proximálně na 5'konci nebo v místě překrytí, ve směru od místa překrytí, mezi místem překrytí a iniciační kodonem a může tvořit celek nebo pouze část nekódované oblasti, může tvořit můstek nekódované a kódované oblasti, být komplementární k celku nebo části kódované oblasti, komplementární k 3'-netranslatované oblasti mRNA. Vhodné kódující sekvence mohou být alespoň od asi 13 do asi 15 nukleotidů, alespoň asi 16 až asi 21 nukleotidů, alespoň asi 20 nukleotidů, alespoň asi 30 nukleotidů, alespoň asi 50 nukleotidů, alespoň asi 75 nukleotidů, alespoň asi 100 nukleotidů, alespoň asi 125 nukleotidů, alespoň asi 150 nukleotidů, alespoň asi 200 nukleotidů, nebo více. Dodatečně, sekvence mohou být prodlouženy nebo zkráceny na 3' nebo 5'jejich koncích.
Jednotlivá kódující sekvence a délka kódující sekvence se bude měnit podle stupně požadovaného útlumu, stabilitě kódující sekvence a podobných. Pracovník zkušený v oboru bude instruován ve výběru vhodných kódujících sekvencí QPRTázy použitím metod dostupných v oboru a informací poskytnutých v tomto textu.
S ohledem na obrázku 2A a SEQ ID č.: 1 uvedenou v textu, oligonukleotid vynálezu může představovat souvislou dílčí část cDNA sekvence QPRTázy v pozitivní orientaci jakékoliv délky, která je dostatečná k dosažení požadovaných účinků, pokud je tato transformovaná do recipientní rostlinné buňky.
Předložený vynález může být také použit v metodách antikódujícího společného potlačení produkce nikotinu. Antikódující DNA sekvence použité v provedení předloženého vynálezu mají délku dostatečnou, jestliže se projevují v rostlinné buňce, k potlačení přirozené exprese rostlinné proteinu QPRTáza podle uváděného textu v této rostlinné buňce. Uváděné antikódující DNA sekvence mohou být základně zcela genomové nebo komplenentámíkové DNA kódující enzym QPRTáza nebo jeho dílčí části, uváděné dílčí části mají obvykle délku alespoň 15 nukleotidů. Metody zjištění délky antikódující DNA, která vede v potlačení exprese nativního genu v buňce, jsou pracovníkům zkušeným v oboru dostupné.
Podle dalšího možného celku předloženého vynálezu, Nicotiana rostlinné buňky jsou transformovány DNA konstruktem obsahujícím DNA část kódující enzymatickou RNA molekulu (tj. „ribozym“), které enzymatická RNA molekula je orientována proti (tj. rozštěpení) mRNAtranskriptu DNA kódující rostlinou QPRTázu podle popisu v textu. Ribozymy obsahují substrá
-5CZ 297379 B6 tové vazebné úseky, které se váží k přístupným úsekům cílové mRNA a oblasti které katalyzují rozštěpení RNA, zamezující přemístění a produkci proteinu. Vazebné úseky mohou zahrnovat kódující sekvence komplementární k cílové mRNA sekvenci; katalytický motiv může představovat kladivový motiv, nebo jiné motivy, takové jako vlásenkový motiv. Štěpná místa ribozymu uvnitř cílové RNA mohou být původně identifikována prohlášením cílové molekuly na štěpná místa ribozymu (např. GUA, GUU nebo GUC sekvence). Jakmile jsou identifikována tato místa, krátké RNA sekvence 15, 20, 30 nebo ribonukleotidů, odpovídající oblasti cílového genu, zahrnují štěpné místo mohou být ohodnoceny předpokládanými strukturálními vlastnostmi. Vhodnost možných cílových míst může být také ohodnocena zkouškou jejich přístupnosti pro hybridizaci volnými oligonukleotidy použitím zkoušky protekce ribonukleázy, která je v oboru známá. DNA sekvence kódující enzymatické RNA molekuly mohou být produkovány známými technikami. Viz např. T. Cech a spol., Patent US 4 987 071; Keene a spol., Patent US 5 559 021; Donson a spol., Patent US 5 589 367; Torrence a spol., Patent US 5 583 032; Joyce, Patent US 5 580 967; Gold a spol., U.S. patent 5 595 877; Wagner a spol., U.S. Patent 5 591 601; a Patent US 5 622 854 (objevy kterých jsou v textu zahrnuty poznámkami celkově). Produkce uvedené enzymatické RNA molekuly v rostlinné buňce a přerušení produkce proteinu QPRTáza snižuje aktivitu QPRTázy v rostlinných buňkách základně stejným způsobem jako produkci kódující RNA molekuly: tj. přerušením kódování mRNA v buňce, která produkuje enzym. Pojem „ribozym“, použitý v textu, popisuje kyselinu nukleovou obsahující RNA, která působí jako enzym (takový jako endoribonukleáza) a může být použit vzájemně zaměnitelně za „enzymatickou RNA molekulu“. Předložený vynález dále zahrnuje DNA kódující ribozymy, DNA kódující ribozymy, která byla vložena do expresívního vektoru, hostitelské buňky obsahující uvedené vektory a metody snížení produkce QPRTázy v rostlinách použitím ribozymů.
Sekvence nukleových kyselin použité pro provedení předloženého vynálezu zahrnuje sekvence se sekvenčními podobnostmi v SEQ ID č: 1 a kódující protein mající aktivitu chinolát-fosforibosyl-transferázy. Tato definice by měla podchytit přírodní alelické variace proteinů QPRTázy. DNA sekvence, které hybridizují na DNA sekvence SEQ ID č.: 1 a kód exprese QPRTázy, především rostlinných enzymů QPRTázy, mohou být tudíž použity pro provedení předloženého vynálezu.
Mohou existovat četné formy QPRT enzymu tabáku. Četné formy enzymu mohou existovat díky post-kódujícím modifikaci jednotlivého genového produktu nebo vzhledem k četným formám NtWPTl genu.
Podmínky, které povolují jiné DNA sekvence kódující expresi proteinu majícího aktivitu QPRTázy k hybridizaci na DNA SEQ ID č.: 1 nebo na jiné DNA sekvence kódující protein uvedený jako SEQ ID č.: 2, mohou být stanoveny běžným způsobem. Např. hybridizace takových sekvencí může být provedena při méně přísných podmínkách nebo dokonce velmi přísných podmínkách (např. podmínkách uvedených pro přesné promývání 0,3 M NaCl, 0,03 M citrátu sodného, 0,1 % SDS při 60 °C nebo dokonce 70 °C na DNA kódující protein uvedený v textu jako SEQ ID č.: 2 standardní zkouškou hybridizace in šitu). Viz J. Sambrook a spol., Molekulární klonování, Laboratorní manuál (druhé vydání 1989) (Cold Spring Harbor Laboratory)). Obecně, uvedené sekvence budou alespoň z 65 % podobné, 75 % podobné, 80 % podobné, 85 % podobné, 90 % podobné nebo dokonce 95 % podobné nebo více s posloupností uvedenou zde jako SEQ ID č: 1 nebo DNA sekvence kódující proteiny sekvence SEQ ID č.: 2 (Určení sekvenční podobnosti byla provedena využitím dvou sekvencí orientovaných promaximální srovnání; rozdíly v jedné ze dvou srovnávaných posloupností jsou pro maximální srovnání povoleny. Délky rozdílů 10 nebo nižší jsou výhodné, délky rozdílů 5 nebo nižší jsou výhodnější a délky rozdílů 2 nebo nižší jsou ještě výhodnější). Dostupné jsou různé metody hybridizace, které berou v úvahu izolaci cDNA klonů, kterých mRNA úrovně jsou co nejnižší, asi 0,05 % poly(A+)RNA. Viz M. Conkling a spol., Plant Physiol. 93, 1203-1211 (1990). Ve stručnosti, cDNA knihovny jsou prohledány použitím jedno-řetězcových cDNA nukleotidových sond reverzní transkripční mRNA z rostlinné tkáně (např. kořenů a/nebo listů). Nitrocelulózová nebo nylonová membrána je pro účely diferenciálního prohledávání namočena v 5xSSC, umístěna v 96 komorovém sacím kolektoru, 150 pL
-6CZ 297379 B6 kultury ustálené přes noc je přenesené ze vzorové očkovací plotny do každé komory a vakuuje aplikované, dokud všechna tekutina neprostoupila přes filtr. 150 pL denaturačního roztoku (0,5 M NaOH, 1,5 M NaCl) je umístěno v každé komoře použitím složené pipety a ponecháno asi 3 minuty klesnout. Sání je aplikováno, jak je uvedeno výše, a filtr odstraněn a neutralizován v 0,5 M tris-HCl (pH 8,0), 1,5 M NaCl. Tento je následně sušen ve vakuu a inkubován s příslušnou nukleotidovou sondou. Použitím filtrů nylonových membrán a ponecháním vzorové očkovací plotny skladované při teplotě -70 °C v 7 % DMSO, mohou být filtry několikrát prosévány četnými nukleotidovými sondami a odpovídající klony izolovány po několikaletém skladování.
Pojem „gen“, jak je použit v textu, označuje DNA sekvenci, která inkorporuje (1) protisměrné (5') regulační signály zahrnující promotor, (2) kódující oblast specifikující produkt, protein nebo RNA genu, (3) ve směru (3') oblasti zahrnující transkripční zakončení a polyadenylační signály a (4) přičleněné sekvence požadované pro účinnou a specifickou expresi.
DNA sekvence předloženého vynálezu se může základně sestávat ze sekvence poskytnuté v textu vynálezu (SEQ ID č.: 1) nebo ekvivalentních nukleotidových sekvencí představujících alely nebo polymorfní varianty těchto genů, nebo jejich kódujících oblastí.
Použití fráze „podstatná sekvenční podobnost“ v prezentované specifikaci a nárocích označuje, že DNA, RNA nebo amino kyselinové sekvence, které mají nepatrné a nevyplývající sekvenční variace ze skutečných sekvencí popsaných a nárokovaných ve vynálezu jsou považovány za ekvivalentní k sekvencím předloženého vynález. V tomto ohledu „nepatrné a nevyplývající sekvenční variace“ označují, že „podobné“ sekvence (tj. sekvence, které mají podstatnou sekvenční podobnost s DNA, RNA nebo proteiny odhalenými a nárokovanými v textu) budou funkčně rovnocenné k sekvencím popsaným a nárokovaným v předkládaném vynálezu. Funkčně rovnocenné sekvence budou působit podstatně stejným způsobem k produkci podstatně stejných prostředků jako kyselina nukleová a amino kyselinové prostředky popsané a nárokované vynálezem.
DNA sekvence popsané tímto vynálezem mohou být transformovány do rozmanitosti hostitelských buněk. Rozmanitost vhodných hostitelských buněk majících požadovaný růst a vlastnosti ošetření je snadno dostupná v oboru.
Použití fráze „izolované“ nebo „podstatně čisté“ v předkládané specifikaci a nárocích jako modifikátory DNA, RNA, polynukleotidů nebo proteinů označuje, že DNA, RNA, polynukleotidy nebo proteiny takto označené byly separované z jejich in vivo buněčného prostředí úpravou provedenou člověkem.
Pojmy „přirozená DNA sekvence“ nebo „přírodní DNA sekvence“, jak jsou použity v textu, označují DNA sekvenci, která může být izolována z netransgenických buněk nebo tkání. Přirozené DNA sekvence jsou takové, které nebyly pozměněny synteticky, takové jako místně cílené mutageneze. Jakmile jsou identifikované přírodní DNA sekvence, DNA molekuly mající přírodní DNA sekvence mohou být syntetizovány chemicky nebo produkovány použitím rekombinantních DNA procedur, známých v oboru. Jak je použito v textu, přírodní rostlinná RNA sekvence je taková, která může být izolována z netransgenických rostlin buněk nebo tkání. Jak je použito, přírodní tabáková DNA sekvence je ta, která může být izolována z netransgenických tabákových buněk nebo tkání.
DNA konstrukce nebo „transkripční kazety“ přeloženého vynálezu zahrnují, ve směru transkripce 5' k 3', promotor podle diskuse uvedené v textu, DNA sekvenci diskutovanou v textu účinně spojenou s promotorem a volitelně koncovou sekvenci zahrnující koncový signál RNA polymerázy a polyadenylační signál pro polyadenylaci. Všechny z těchto regulačních oblastí by měly být schopné působení v buňkách tkáně určené pro transformaci. V provedení vynálezu může být použit jakýkoliv vhodný koncový signál, jejich příklady zahrnují, ale nejsou tímto seznamem ve svém rozsahu nikterak limitovány, terminátor napolinsyntázy (nos), terminátor oktapinsyntáze (ocs), CaMV terminátor nebo přírodní koncové signály odvozené ze stejného genu jako
-7CZ 297379 B6 transkripční iniciační oblasti nebo odvozené z různých genů. Viz např. Rezian a spol. (1988), uvedené výše a Rodermel a spol.. (1988), uvedeno výše.
Pojem „účinně spojené“, jak je použit v textu, označuje DNA sekvence na jednotlivé DNA molekule, které jsou spojené tak, že působení jedné je ovlivněno druhou. Promotor je takto účinně spojen s DNA, pokud je tento schopný ovlivnit transkripci této DNA (tj. DNA je transkripčně kontrolována promotorem). Promotor je uveden jako „protisměrný“ z DNA, která je obráceně uvedená jako „ve směru“ z promotoru.
Transkripční kazeta může být zajištěna v DNA konstruktu, kteiý také má alespoň jeden replikační systém. Pro snadnější pochopení, je běžné mít replikační systém funkční v Escherichia coli, takové jako ColEl, pSCIOl, pACYC184 nebo podobné. Tímto způsobem může být výsledný konstrukt v každém stavu po každé manipulaci klonován, sekvenčně seřazen a stanovena správnost úpravy. V dodatku nebo místo E. coli replikačního systému může být použito široké spektrum hostitelských replikačních systémů, takových jako replikační systémy P1 inkompatibilních plazmidů, např. pRK290. V dodatku k replikačnímu systému bude často existovat alespoň jeden přítomný signální znak (indikátor), který může být použitelný v jednom nebo více hostitelských systémech, nebo různé signální znaky individuálních hostitelských systémů. Tj. jeden signální znak může být použit pro selekci v prokaryotní hostiteli, zatímco jiný signální znak může být použit pro selekci v eukaryontním hostiteli, především rostlinném hostiteli. Signální znaky mohou být ochranou proti biocidům, takovým jako antibiotika, toxiny, těžké kovy nebo podobné; mohou zajišťovat doplnění přidáním prototropie do auxotrofního hostitele nebo mohou poskytnout patrný fenotyp přes produkci nové sloučeniny v rostlině.
Různé malé části obsahující různé konstrukty, transkripční kazety, signální znaky a podobné mohou být následně zavedeny štěpením restrikčním enzymem vhodného replikačního sytému a zapojením jednotlivého konstruktu nebo dílčí části do dostupného místa. DNA konstrukt může být izolován pro další úpravy následně po ligaci a klonování. Všechny tyto techniky jsou více než postačitelně doloženy příklady v literatuře, např. J. Sambrook a spol., Klonování molekul, Laboratorní manuál, (druhé vydání, 1989), (Cold Spring Harbor Laboratory).
Vektory, které mohou být použity k transformaci rostlinné tkáně konstrukty nukleových kyselin předloženého vynálezu zahrnují jak konstrukty nukleových kyselin předloženého vynálezu zahrnují jak Agnobacterium vektory a balistické vektory, stejně jako vektory vhodné pro DNA- zprostředkovanou transformaci.
Pojem „promotor“ označuje oblast DNA sekvence, která inkorporuje nezbytné signály pro účinnou expresi kódující sekvence. Tyto mohou zahrnovat sekvence, ke kterým se váže RNA polymeráza, ale nejsou těmito typy sekvencí limitovány, a mohou zahrnovat oblasti, ke kterým se váží jiné regulační proteiny, spolu s oblastmi zahrnutými v regulační částí kódovaní proteinu a mohou zahrnovat kódující sekvence.
Promotory použité v provedení předloženého vynálezu mohou představovat konstitutivní aktivní promotory. Dostupná je celá řada konstitutivních aktivních promotorů, které jsou účinné v rostlinách. Výhodným příkladem je Cauloflower Mosaic Virus(CaMV) 35S promotor, který je konstitutivně vyjádřen ve většině rostlinných tkání. V jiném případě, promotor může představovat promotor specifikovaný pro kořeny nebo promotor specifikovaný pro kořeny a kůru, jak je detailněji vysvětleno dále v textu.
Kódující sekvence byly vyjádřeny v transgenických tabákových rostlinách použitím Cauliflowe Mosaid Virus (CaMV) 35S promotoru. Viz např. Comelissen a spol. „Jak RNA úroveň, tak i účinnost kódování jsou u transgenického tabáku redukovány antimediátorovou RNA“, Nukleové kyseliny Res. 17, str. 833^43 (1989); Rezaian a spol.; „Antimediátorové RNA okurkového mozaikovitého viru u transgenických rostlin určené pro kontrolu viru“, Molekulární biologie rostlin 11, str. 463-71 (1988); Rodermel a spol., „Vzájemné působení nukleárních organel.
-8CZ 297379 B6
Nukleární antimediátorový gen potlačuje úrovně enzymu ribulózobifosfát-karboxylóza u transformovaných tabákových rostlin, Cell 55, str. 673-81 (1988); Smith a spol., „Antimediátorová
RNA inhibice exprese genu polygalakturonázy u transgenických rajčat“, Nátuře 334, str. 724-26 (1988); Van der Krol a spol., „Antimediátorový gen chalkonsyntáza a transgenických rostlin potlačující pigmentaci květin“, Nátuře 333, str. 866-69 (1988).
Použití CaMV 35S promotoru pro expresi QPRTázy v transformovaných tabákových buňkách a rostlinách vynálezu je výhodné. Použití CaMV promotoru pro expresi jiných rekombinantních genů v kořenech tabáku byla přesně popsána (Lam a spol, „Místně specifické mutace přeměňují in vitro faktor vazebnosti a mění formu exprese genu transgenických rostlin“, Proč. Nat. Acad. Sci. (Pojednání národní akademie věd) USA 86, str. 7890-94 (1989); Poulsen a spol., „Rozčlenění 5' protisměrných posloupností pro selektivní expresi genu Nicotiana Plumbaginifolia rbcS8B“, Mol. Gen. genet. (Molekulární genová genetika) 214, str. 16-23 (1988)).
Další promotory, které jsou aktivní pouze v kořenových tkáních (promotory specifické v kořenech) jsou také pro metody předloženého vynálezu velmi výhodné. Viz. např. Patent US 5 459 252, od Conkling a spol..; Yamamoto a spol., Rostlinná buňka 3:371 (1991). TobRD2 specifický promotor kořenů-kůry může být také použit. Viz, např. Patent US SN 08/508 786, nyní přístupná, od Conkling a spol., PCT WO 9705261. Všechny patenty citované v textu jsou určeny pro začlenění v textu poznámkami v jejich celistvosti.
QPRTáza rekombinantní DNA molekuly a vektory použité k produkci transformovaných tabákových buněk a rostlin tohoto vynálezu mohou dále obsahovat dominantní volitelný signální gen. Vhodné dominantní volitelné signální znaky pro použití v tabáku zahrnují mimo jiné antibiotické rezistentní geny kódující neomycinfosfotransferázu (NPTII), hygromycinfosfotransferázu (HPT) a chloramfenikolacetyltransferázu (CAT). Jiný dobře známý dominantní volitelný signální znak vhodný pro použití v tabáku představuje genovou mutantu dihydrofolát reduktázy, která kóduje dihydrofolátreduktázu odolnou vůči metotrexáze. DNA vektory obsahující vhodné antibiotické rezistentní geny a odpovídající antibiotika jsou obchodně dostupné.
Transformované tabákové buňky jsou voleny ze sousední četnosti netransformovaných buněk umístěním smíšené četnosti buněk do kultivačního prostředí obsahujícího vhodnou koncentraci antibiotik (nebo jiných sloučenin běžně toxických k tabákovým buňkám), proti kterým je produkt zvoleného dominantního volitelného signálního genu rezistentní. Takto pouze takové tabákové buňky, které byly transformovány, zůstávají na živu a rozmnožující se.
Metody tvorby rekombinantních rostlin předloženého vynálezu, obecně, zahrnují nejdříve zajištění rostlinné buňky schopné regenerace (rostlinná buňka obvykle spočívá ve stkáni schopné regenerace). Rostlinná buňka je následně transformována DNA konstruktem obsahujícím transkripční kazetu předloženého vynálezu (jak je uvedeno v textu) a rekombinantní rostlina je regenerována z transformované rostlinné buňky. Jak je vysvětleno níže, krok transformace je proveden technikami, které jsou v oboru známé, tyto zahrnují, ale nejsou uvedenými příklady limitovány, ostřelování rostlinné buňky mikročásticemi nesoucími transkripční kazetu, infikování buňky Agrobacterium tumefaciens obsahující Tiplazmid nesoucí transkripční kazetu nebo jakoukoliv jinou techniku vhodnou pro produkci transgenické rostliny.
Rada Agrobacterium vektorových systémů použitelných pro provedení předloženého vynálezu je známá. Např. Patent US 4 459 355 popisuje metodu transformace přístupných rostlin, včetně dikotů, Agrobacterium druhem obsahujícím Tiplazmid. Transformace dřevin Agrobacterium vektorem je popsána v Patentu US 4 795 855. Dále Patent US 4 940 838, od Schilperoort a spol., popisuje binární Agrobacterium vektor (tj. vektor, ve které, Agrobacterium obsahuje jeden plazmid mající oblast Tiplazmidu, ale žádnou T oblast, a druhý plazmid mající T oblast, ale žádnou vir oblast) použitelný pro provedení předloženého vynálezu.
-9CZ 297379 B6
Mikročástice nesoucí DNA konstrukt předloženého vynálezu, které mikročástice je vhodná pro transformaci ostřelováním rostlinné buňky, jsou také použitelné pro vytváření transformovaných rostlin předloženého vynálezu. Mikročástice je vhnána do rostlinné buňky k produkci transformované rostlinné buňky a z transformované rostlinné buňky je vytvořena rostlina. Při provádění předloženého vynálezu může být použita jakákoliv vhodná metoda transformace ostřelováním buněk a přístroje. Příklady přístrojů a procedur jsou popsány v Sanford a Wolf, Patent US 4 945 050 a v Christou a spol, Patent US 5 015 580. Pokud je použita procedura transformace ostřelováním, transkripční kazeta může být inkorporována do plazmidu schopného replikace nebo vázání (intergace) v buňce určené pro transformaci. Příklady mikročástic vhodných pro použití v uváděných systémech zahrnují 1 až 5 pm zlaté kulovité částice. DNA konstrukt může být nanesen na mikročástici jakoukoliv vhodnou technikou, takovou jako vysrážením.
Rostlinné druhy mohou být transformovány DNA konstruktem předloženého vynálezu DNAzprostředkovanou transformací protoplastu rostlinné buňky a následnou regenerací rostliny transformovaného protoplastu metodami, které jsou v oboru velmi dobře známé. Fúze takového protoplastu s lipozomy obsahujícími DNA nebo způsobem elektroporace je v oboru známá. (Shillito a spol., „Přímý přenos genu do protoplastu dvouděložných nebo jednoděložných rostlin řadou metod, zahrnujících elektroporaci“. Metody v enzymologii 153, str. 313-36 (1987)).
Termín „transformace“, jak je použit v textu, označuje zavedené exogenní DNA do buněk k produkci transgenických buněk trvale transformovaných exogenní DNA.
Transformované buňky jsou indukovány k regeneraci intaktních tabákových rostlin přes aplikaci kultivačních technik tabákové tkáně a buňky, které jsou v oboru dobře známé. Metoda regenerace rostliny je volena tak, aby byla kompatibilní s metodou transformace. Stálá přítomnost a orientace sekvence QPRTázy u transgenických tabákových rostlin může být ověřena mendelovskou dědičností sekvence QPRTázy, jak je uvedeno ve standardních metodách DNA analýzy aplikovaných na potomstvo vznikající zkontrolovaného křížení. Následně po regeneraci transgenických tabákových rostlin z transformovaných buněk, introdukovaná DNA sekvence je snadno transferovaná do jiných variet tabáku pomocí běžné praxe pěstování rostlin a bez nenáležitého experimentování.
Např. pro analýzu izolace transgenu, generované transformované rostliny (Ro) mohou být pěstovány do stádia zralosti, testovány pro úrovně nikotinu a samoopyleny k produkci Ri rostlin. Procentický podíl Ri rostlin nesoucích transgen je homozygotní vzhledem k transgenu. K identifikaci homozygotních R, rostlin jsou pěstovány transgenické R] rostliny až do stádia zralosti a samoopyleny. Homozygotní R] rostliny budou produkovat R2 potomstvo, ve kterém každá rostlina potomstva nese transgen; potomstvo heterozygotních R] rostlin se bude oddělovat 3:1.
Nikotin slouží jako přírodní pesticid, který napomáhá ochraně tabákových rostlin před napadením škodlivým hmyzem. Proto se může stát žádoucí dodatečná transformace rostlin s nízkým nebo žádným obsahem nikotinu, produkovaných předkládanými metodami, transgeny (takovým jako Bacillus thuringiensis) které dodatečně budou poskytovat ochranu proti hmyzu.
Výhodnými rostlinami vhodnými pro použití v předložených metodách jsou druhy Nicotiana nebo tabáku, včetně N. tabacum, N. rustica a N. glutinosa. Použití mohou být jakékoliv druhy nebo čeledě tabáku. Výhodnými jsou druhy, které již mají nízký obsah nikotinu, takové jako Nicl/Nic2 dvojitý mutant.
Jakákoliv rostlinná tkáň schopná klonového šíření, organogenezí nebo embryogenezí, mohou být transformovány vektorem předloženého vynálezu. Termín „organogeneze“, jak je použit v textu, označuje proces, ve kterém jsou nadzemní části rostlin a kořeny vyvinuty postupně z meristematických středů; termín „embryogeneze“, jak je použit v textu, označuje způsob, kterým jsou společně vyvinuty nadzemní části testu rostliny a kořenové části rostliny současně probíhajícím způsobem (ne následně), jestli ze somatických buněk nebo gamet. Jednotlivá zvolená tkáň se
-10CZ 297379 B6 bude měnit podle systému šíření klonování dostupného pro a nejlépe se hodícího pro individuální druhy určené ke zpracování. Příkladové cílové tkáně zahrnují listy, pyl, klíčky, děložní lístky, hypokotyl, tkáně kalu, existující meristematická tkáň (např. apikální meristém, laterální pupen a kořenový meristém) a indukované meristematické tkáně (např. meristém děložních lístků a meristém hypokotylu).
Rostliny předloženého vynálezu mohou mít různé podoby. Rostliny mohou představovat chiméry transformovaných buněk a netransformovaných buněk; rostliny mohou představovat klonální transformace (např. všechny buňky transformované k obsahu transkripční kazety); rostliny mohou být očkovány transformovanými a netransformovanými tkáněmi (např. transformovaný kořenový svazek naočkovaný na netransformovaných štěp z citrusových plodů). Transformované rostliny mohou být šířeny různými prostředky, takovými jako klonální šíření nebo klasickými technikami pěstování. Např. první generace (nebo TI) transformovaných rostlin může být samoopylena za vzniku homozygotní druhé generace (nebo T2) transformovaných rostlin dále šířené klasickými technikami pěstování. Dominantní volitelný signální znak (takový jako nptll) může být spojen s transkripční kazetou usnadňující pěstování.
Z pohledu výše uvedeného bude jasné, že rostliny, které mohou být využity při praxi přeloženého vynálezu, zahrnují rostliny rodu Nicotiana.
Těm, kteří jsou velmi dobře obeznámeni s metodami rekombinantních DNA, které jsou popsané výše, pochopí, že jeden může použít plnou délku cDNA molekuly QPRTázy nebo plnou délku chromozomálního genu QPRTázy, spojené v antikódujícím směru s vhodně účinně spojenými řídícími sekvencemi pro konstrukci transgenických tabákových buněk a rostlin. (Pracovníci zkušení v oboru budou také chápat, že vhodné řídicí sekvence pro expresi genu v antikódujícím směru zahrnují jakékoliv ze známých eukaryontních kódujících počátečních sekvencí, v dodatku k promotoru a polyadenylačních/transkripčních koncových sekvencí popsaných výše). Uvedené transformované tabákové rostliny jsou charakterizovány zvýšenou úrovní QPRTáz a tudíž i vyšším obsahem nikotinu, než netransformované kontrolní tabákové rostliny.
Mělo by být tudíž jasné, že použití DNA sekvence QPRTázy pro snížení nebo zvýšení úrovní QPRT enzymu a tím také snížení nebo zvýšení obsahu nikotinu u tabákových rostlin spadá do rozsahu předloženého vynálezu.
Podle vyjádření v textu zahrnuje úroda většinu rostlin předloženého vynálezu a stejného rodu, které jsou pěstovány společně na zemědělském poli. Pojem „zemědělské pole“ označuje obvyklý malý pozemek pro skleník. Předložený vynálezu tímto poskytuje metodu produkce úrody rostlin mající pozměněnou aktivitu QPRTázy a tím mající snížené nebo zvýšené úrovně nikotinu porovnáno s podobnou úrodou netransformovaných rostlin stejného druhu a čeledi.
Příklady, které následují, jsou sestaveny pro ilustraci předloženého vynálezu a nejsou nikterak konstruovány ve smyslu jeho omezení.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 znázorňuje biosyntetickou cestu vedoucí k nikotinu. Aktivita enzymu známá jako kontrolovatelná pomocí Nicl a Nic2 představuje QPRTázu (chinolát-fosforibosyl-transferáza) a PMTázu (hnilobná methyl-transferáza).
Obrázek2A uvádí sekvenci nukleové kyseliny NtQPTl cDNA (SEQ ID č.: 1) škodující sekvencí (SEQ ID č.: 3) znázorněnou velkými písmeny.
Obrázek 2B uvádí odvozenou amino kyselinovou sekvenci (SEQ ID č.: 2) QPRTázy tabáku kódovanou NtQPTl cDNA.
-11 CZ 297379 B6
Obrázek 3 srovnává odvozenou NtQPTl amino kyselinovou posloupnost a příslušné sekvence
Rhodospirillum rubrum, Mycobacterium lepře, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, lidské a Saccharomyces cerevisiae.
Obrázek 4 ukazuje výsledky doplnění mutantu Escherichia coli postrádajícího chinolát-fosforibosyl-transferázu (TH265) s NtQPTl cDNA. Buňky byly transformovány expresívním vektorem nesoucím NtQPTl; růst transformovaných TH265 buněk vyjadřujících NtQPTl na minimálním médiu postrádajícím kyselinu nikotinovou ukázal, že NtQPTl kóduje QPRTázu.
Obrázek 5 porovnává úrovně nikotinu a relativně ustálený stav úrovní NtQPTl mRNA v Nicl a Nic2 tabákových mutantech: planý typ Burley 21 (Nicl/Nicl Nic2/Nic2); Nicl Burley 21 (nicl/nicl Nic2/Nic2); Nic2 Burley 21 (Nicl/Nicl nic2/nic2); a Nicl Nic2 Burley 21 (nicl/nicl nic2/nic2). Celé sloupce označují mRNA transkripční úrovně; šrafované sloupce označují úrovně nikotinu.
Obrázek 6 graficky znázorňuje relativní úrovně NtQPTl mRNA za určitou dobu u upravených tabákových rostlin porovnáno s neupravenými kontrolními rostlinami. Celé slupce ukazují mRNA transkripční úrovně; šrafované sloupce označují úrovně nikotinu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Izolování a sekvenční analýza
TobRD2 cDNA (Conkling a spol., Plant Phys. 93, 1203 (1990)) byl podroben sekvenční analýze a je v textu označen jako SEQ ID č.: 1, a odvozená amino kyselinová sekvence jako SEQ ID č.: 2. Odvozená amino kyselinová posloupnost byla odhadnuta jako cytosolický protein. Ačkoliv rostlinné geny QPRTázy nebyly uvedeny, porovnány NtPTl amino kyselinové posloupnosti s GenBank databází (obrázek 3) odhalilo omezené sekvenční podobnosti s jistými bakteriálními a jinými proteiny; aktivita chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) byla ukázána pro S. typhimurium, E. coli a N. tabacum geny. NtQPTl kódující QPRTázu má podobnost k odvození dílčí části peptidu kódované Arabidopsis EST (označení exprese sekvence) sekvencí (Genbank Accession number F20096), která může představovat část genu Arabidopsis QPTáza.
Příklad 2: In-situ hydridizace
Pro určení prostorového rozložení TobRD2 mRNA transkriptů v různých tkáních kořenů, byla u netransformovaných rostlin uskutečněna in sítu hybridizace. In sítu hybridizace kódující části řetězce TobRD2 na TobRD2 mRNA v kořenové tkáni byla provedena použitím technik, které byly popsány v Meyerowitz, Plant Mol. Biol. Rep. 5,242 (1987) a Smith a spol., Plant Mol. Biol. Repl 5,237 (1987). Sedm dní staré tabákové (Nicotinia tabuacum) kořenové sazenice byly ustáleny v glutaraldehydu tlumeném fosfátem, uložené v Paraplast Plus (Monoject lne., St. Louis, MO) a rozděleny na tloušťku 8 mm k získání příčných stejně jako podélných bloků. Kódující TobRD2 transkripty syntetizované in vitro s přítomností 35S-ATP, byly použity jako nukleotidové sondy. Označená RNA byla hydrolýzována alkalickou úpravou k získání 100 až 200 základní průměrné délky média před použitím.
Hybridizace byly prováděny v 50 % formamidu po dobu 16 hodin při teplotě 42 °C s průměrným 5 χ 106 počtem odčítacích impulzů za minutu (cpm) označené RNA na mililitr hybridizačního roztoku. Destičky se vyvinuly následně po aplikaci požadovaných vlivů a tyto byly zviditelněny pod světlými a tmavých poli mikroskopu. Hybridizační signál byl lokalizován v rohovité vrstvě buněk kořenů (výsledky nebyly znázorněny). Porovnání jak světlých, tak i tmavých obrazů polí
- 12CZ 297379 B6 stejných částí lokalizovalo TobRD2 transkripty parenchymatických buněk vnější kůry kořenů.
V epidermu nebo stele nebyl viditelný žádný hybridizační signál.
Příklad 3: TobRD2 MRNA Úrovně u Nicl a Nic2 tabákových mutantech a vzájemný vztah k úrovním nikotinu
Ustálený stav mRNA úrovně na TobRD2 byl zkoušen vNicl a Nic2 mutantních tabákových rostlinách. Nicl a Nic2 jsou pro regulaci aktivity chinolát-fosforibosyl-transferázy a aktivity hnilobné methyl-transferázy známé a jsou ko-dominantními regulátory produkce nikotinu. Prezentované výsledky jsou ilustrované na obrázku 5A a 5B, ukazujícím že TobRD2 exprese je regulována Nicl aNic2.
RNA byla izolována z kořenů planého typu Burley 21 tabákových rostlin (Nicl/Nicl Nic2/Nic2); kořenů Nicl - Burley 21 (nicl/nicl Nic2/Nic2); kořenů Nic2 - Burley 21 (Nicl/Nicl nic2/nic2); a kořenů Nicl-Nic2-Burley 21 (nicl/nicl nic2/nic2).
Čtyři Burley 21 tabákové řady (nic) byly pěstovány po dobu jednoho měsíce v půdě ze semene a přemístěny do hydroponických komor v provzdušněném živném roztoku ve skleníku na dobu jeden měsíc. Tyto řady byly izogenní, kromě dvou loci s nízkým obsahem nikotinu a měly genotypy Nicl/Nicl Nic2/Nic2, Nicl/Nicl nic2/nic2, nicl/nicl Nic2/Nic2, nicl/nicl nic2/nic2. Kořeny byly sklizeny z asi 20 rostlin pro každý genotyp a upraveny pro izolaci RNA. Celková RNA (Ipg) z každého genotypu byla podrobena elektroforézi přes 1 % gel agarózy obsahující 1,1 M formaldehydu a transferována do nylonové membrány podle Sambrook a spol. (1989). Membrány byly hybridizovány s 32P-označenými TobRD2 cDNA malými částmi. Relativní intenzity TobRD2 transkriptů byly měřeny využitím denzitometrie. Obrázek 5 (celé sloupce) ilustruje relativní transkripční úrovně (porovnáno k Nicl/Nicl Nic2/Nic2) pro každý ze čtyř genotypů. Relativní obsah nikotinu (porovnáno v Nicl/Nicl Nic2/Nic2) čtyř genotypů je znázorněn šrafovanými sloupci.
Obrázek 5 graficky porovnává relativně ustálený stav TobRD2 mRNA úrovně, využitím úrovně zjištěné u planého typu Burley 21 (Nicl/Nicl Nic2/Nic2) jako referenční (kontrolního) množství. TobRD úrovně mRNA vNicl/Nic2 dvojitých mutantech byly přibližně 25 % úrovní planého typu tabáku. Obrázek 5B dále porovnává relativní úrovně nikotinu v blízkosti izogenní řadě tabáku studované v tomto příkladu (celé sloupce označují TobRD2 transkripční úrovně; šrafované sloupce označují úrovně nikotinu). Existují těsné vzájemné vztahy mezi úrovněmi nikotinu a TobRD2 transkripčními úrovněmi.
Příklad 4: Vliv nanášení na TobRD2 mRA úrovně
V oboru je známé, že odstranění horní části květu tabákové rostliny (vrchní úprava) zvyšuje růst kořenů a zvyšuje obsah nikotinu v listech rostliny. Vrchní úprava rostlin je obvyklou praxí pěstování tabáku pro obchodní účely a optimální čas pro vrchní úpravu dané tabákové úrody při známých podmínkách pěstování může být snadno určeno odborným pracovníkem.
Tabákové rostliny (N. tabacum SRÍ) byly pěstovány v půdě ze semene po dobu 1 měsíce a přeneseny do nádob obsahujících písek. Rostliny byly pěstovány ve skleníku další dva měsíce, pokud nezačaly nasazovat květy. Horní části květů a dva uzly byly ze čtyř řad rostlin odstraněny (vrchní úprava). Kořenová část byla z každé rostliny po udaném čase sklizena a nahromaděna pro extrakci RNA. Kontrolní rostliny nebyly podrobeny vrchní úpravě. Celková RNA (1 pg) každého časového bodu byla podrobena elektroforéze přes 1 % genu agarózy obsahujícího 1,1 M formaldehydu a transformována na nylonovou membránu podle Sambrook a spol., (1989). Membrány byly hybridizovány 32P-označenými TobRD2 cDNA malými částmi. Relativní intenzity TobRD2 transkriptů byly měřeny využitím denzitometrie. Obrázek 6 ilustruje relativní transkripční úrovně
- 13 CZ 297379 B6 (porovnáno s nulovou hodnotou času) pro každý časový úsek s vrchní úpravou (celé sloupce) nebo bez vrchní úpravy (šrafované sloupce).
Relativní úrovně TobRD2 byly stanoveny v kořenové tkáni po 24 hodinách; výsledky jsou znázorněny na obrázku 6 (celé sloupce udávají TobRD2 transkripční úrovně v rostlin s vrchní úpravou; šrafované sloupce udávají TobRD2 transkripční úrovně u kontrolních rostlin bez povrchové úpravy). Během šesti hodin po provedení vrchní úpravy tabákových rostlin se mRNA úrovně pro TobRD zvýšily přibližně osm-krát u rostlin s vrchní úpravou; po stejnou dobu nebylo zjištěno žádné zvýšení u kontrolních rostlin).
Příklad 5: Doplnění bakteriálního mutantu postrádajícího QPRTázu DNA sekvencí SEQ ID
č.: 1
Escherichia coli druh TH265 představuje mutant postrádající chinolát-fosforibosyl-transferázu (nadC-j a tudíž nemůže růst v prostředí postrádajícím kyseliny nikotinové.
TH265 buňky byly transformovány expresívním vektorem (pWSlól) obsahujícím DNA sekvenci SEQ ID č.: 1 nebo transformovány expresívním vektorem (pKK.233), pouze. Růst transformovaných bakterií byl porovnáván s růstem TH265 (pKK.233) transformovaného typu a s růstem netransformovaného TH265 nadC- mutanta. Růst byl porovnán na minimálním médiu molekulární elektronikou (postrádajícím kyseliny nikotinovou) a na minimálním médiu s dodanou kyselinou nikotinovou také molekulární elektronikou.
E. coli druh s QPTáza mutací (nadC), TH265, byl poskytnu způsobem podle Dr.K.T. Hughes (Hughes a spol., J. Bact. 175:479 (1993). Buňky byly udržovány na LB médiu a způsobilé buňky připraveny podle popisu od Sambrook a spol. (1989). Expresívní plazmid byl vytvořen v pKK2233 (Brosius, 1984) a TobRD2 cDNA klonovanou pod kontrolou Tac promotoru. Výsledný plazmid, pWSlól, byl transformován do Th265 buněk. Transformované buňky byly následně očkovány na minimální médium (Vogel a Bonner, 1956) agarové plotny bez nebo s využitím kyseliny nikotinové (0,0002 %) jako suplementu. TH265 buňky samotné a TH265 transformované s pKK223 byly očkovány na podobných deskách za účelem použití jako kontrolního vzorku.
Výsledky jsou znázorněny na obrázku 4. Pouze TH265 transformované DNA sekvencí SEQ ID č.: 1 rostla v prostředí postrádajícím kyselinu nikotinovou. Tyto výsledky ukazují, že exprese DNA sekvence SEQ ID č. 1: v TH265 bakteriálních buňkách dodává NacC+ fenotyp k těmto buňkám, potvrzující, že tato sekvence kóduje QPRTázu. TobRD2 název byl tudíž pozměněn na NtQPTl.
Příklad 6: Transformace tabákových rostlin
DNA sekvence SEQ ID č.: 1, orientace proti směruje účinně připojena k rostlinnému promotoru (CaMV 35S nebo TobRD2 specifického promotoru kořene-kůra) k produkci dvou různých DNA kazet: CaMV35S promotor/kódující SEQ ID č. 1: a TobRD2 promotor/kódující SEQ ID č.: 1.
Planý typ tabáku a tabák s nízkým obsahem nikotinu jsou vybrány pro transformaci, např. planý typ Burley 21 tabák (Nicl+/Nic2+) a homozygotní nicl-/nic2- Burley 21. Většina tabákových rostlinných buněk každé řady jsou transformovány použitím každé DNA kazety. Transformace je provedena použitím Agrobacterium vektoru, např. Agrobacterium-Vmámího vektoru nesoucího Ti-okrajové sekvence a nptll gen (dodávající odolnost proti kanamycinu a kontrolované nos promotorem (nptlPj).
- 14CZ 297379 B6
Transformované buňky jsou vybrané a regenerované na transgenické tabákové rostliny (Rq). Rq rostliny jsou pěstovány dozralého stádia a testovány pro úrovně nikotinu; podskupina transformovaných tabákových rostlin ukázala výrazně nižší úrovně nikotinu v porovnání k netransformovaným kontrolním rostlinám.
Ro rostliny jsou následně samoopyleny a v R] potomstvu je analyzováno vyštěpení transgenu. R| potomstva jsou pěstovány do zralého stádia a samoopylena; vyštěpení transgenu mezi R2 potomstvem označuje, které Ri rostliny jsou homozygotní pro transgen.
SEKVENCE (1) Obecné informace (i) Žadatel: Conkling, Mark A
Mendu, Nandini
Song, Wen (ii) Název vynálezu:
(iii) Počet sekvencí: 4 (iv) Korespondenční adresa:
(A) Adresa: Kenneth Sibley, Seli Seltzer Park & Gibson (B) Ulice: Post Office Drawer 34009 (C) Město: Charlotte (D) Stát: North Carolina (E) Země: USA (F) Kód: 28234 (v) Údaje o počítačovém systému (A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-Dos/S-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0. Verze #1.30 (vi) Běžné údaje o aplikaci:
(A) Číslo aplikace:
(B) Datum podání:
(C) Klasifikace:
(viii) Informace o zástupei/zmocnění:
(A) Jméno: Sibley, Kenneth D.
(B) Číslo registrace: 31,665 (C) Referenční/jednací číslo: 5051-338P (ix) Telekomunikační informace:
(A) Telefon: 919-420-2200 (B) Telefax: 919-881-3175 (2) Informace o SEQ ID č.: 1 (i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 1399 párů bází (B) Typ: kyselina nukleová
- 15 CZ 297379 B6 (C) Typ řetězce: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (ix) Vlastnosti:
(A) Jména/Klíč. CDS (B) Umístění: 52..1104 (xi) Popis sekvence: SEQ ID č.: 1
CAAAAACTAT THCCACAAA ATTCATTTCA CAACCCCCCC AAAAAAAAAC C ATG TTT 57 Met Phe
AGA GCT ATT CCT TTC ACT GCT ACA GTG CAT CCT TAT GCA ATT ACA GCT105
Arg Ala Ile Pro Phe Thr Ala Thr Val His Pro Tyr Ala Ile Thr Ala
1015
CCA AGG TTG GTG GTG AAA ATG TCA GCA ATA GCC ACC AAG AAT ACA AGA153
Pro Nrg Leu Val Val Lys Met Ser Ala Ile Ala Thr Lys Asn ThrArg
2530
GTG GAG TCA HA GAG GTG AAA CCA CCA GCA CAC CCA ACT TAT GAT TTA201
Val Glu Ser Leu Glu Val Lys Pro Pro Ala His Pro Thr Tyr AspLeu
40 4550
AAG GAA GTT ATG AAA CTT GCA CTC TCT GAA GAT GCT GGG AAT TTA GGA249
Lys Glu Val Met Lys Leu Ala Leu Ser Glu Asp Ala Gly Asn LeuGly
6065
GAT GTG ACT TGT AAG GCG ACA ATT CCT CTT GAT ATG GAA TCC GAT GCT297
Asp Val Thr Cys Lys Ala Thr Ile Pro Leu Asp Met Glu Ser AspAla
7580
CAT TTT CTA GCA AAG GAA GAC GGG ATC ATA GCA GGA ATT GCA CH GCT345
His Phe Leu Ala Lys Glu Asp Gly Ile Ile Ala Gly Ile Ala LeuAla
9095
GAG ATG ATA HC GCG GAA GH GAT CCT TCA HA AAG GTG GAG TGG TAT393
Glu Met Ile Phe Ala Glu Val Asp Pro Ser Leu Lys Val Glu TrpTyr
100 105 110
GTA AAT GAT GGC GAT AAA Gn CAT AAA GGC HG AAA TH GGC AAA GTA441
Val Asn Asp Gly Asp Lys Val His Lys Gly Leu Lys Phe Gly LysVal
115 120 125130
CAA GGA AAC GCT TAC AAC ΑΠ GH ATA GCT GAG AGG GH Gn CTC AAT489
Gin Gly Asn Ala Tyr Asn Ile Val Ile Ala Glu Arg Val Val LeuAsn
135 140145
ΤΠ ATG CAA AGA ATG AGT. GGA ATA GCT ACA CTA ACT AAG GAA ATG GCA537
Phe Met Gin Arg Met Ser Gly Ile Ala Thr Leu Thr Lys Glu HetAla
150 155160
GAT GCT GCA CAC CCT GCT TAC ATC nG GAG ACT AGG AAA ACT GCT CCT585
Asp Ala Ala His Pro Ala Tyr Ile Leu Glu Thr Arg Lys Thr AlaPro
165 170175
- 16CZ 297379 B6
GGA TTA CGT TTG GTG GAT AAA TGG GCG GTA TTG ATC GGT GGG GGG AAG 633
Gly Leu Arg Leu Val Asp Lys Trp Ala Val Leu Ile Gly Gly Gly Lys
180 185 190
AAT CAC AGA ATG GGC TTA TTT GAT ATG GTA ATG ATA AAA GAC AAT CAC681
Asn His Arg Met Gly Leu Phe Asp Met Val Met Ile Lys Asp Asn His
195 200 205210
ATA TCT GCT GCT GGA GGT GTC GGC AAA GCT CTA AAA TCT GTG GAT CAG729
Ile Ser Ala Ala Gly Gly Val Gly Lys Ala Leu Lys Ser Val Asp Gin
215 220225
TAT KG GAG CAA AAT AAA CTT CAA ATA GGG GTT GAG GTT GAA ACC AGG777
Tyr Leu Glu Gin Asn Lys Leu Gin Ile Gly Val Glu Val Glu Thr Arg
230 235240
ACA ATT GAA GAA GTA CGT GAG GTT CTA GAC TAT GCA TCT CAA ACA AAG825
Thr Ile Glu Glu Val Arg Glu Val Leu Asp Tyr Ala Ser Gin Thr Lys
245 250255
ACT TCG TTG ACT AGG ATA ATG CTG GAC AAT ATG GTT GTT CCA TTA TCT873
Thr Ser Leu Thr Arg Ile Met Leu Asp Asn Met Val Val Pro LeuSer
260 265270
AAC GGA GAT ATT GAT GTA TCC ATG CTT AAG GAG GCT GTA GAA TTG ATC921
Asn Gly Asp Ile Asp Val Ser Met Leu Lys Glu Ala Val Glu LeuIle
275 280 285290
AAT GGG AGG TTT GAT ACG GAG GCT TCA GGA AAT GTT ACC CTT GAA ACA969
Asn Gly Arg Phe Asp Thr Glu Ala Ser Gly Asn Val Thr Leu GluThr
295 300305
GTA CAC AAG ATT GGA CAA ACT GGT GTT ACC TAC ATT TCT AGT GGT GCC1017
Val His Lys Ile Gly Gin Thr Gly Val Thr Tyr Ile Ser Ser GlyAla
310 315320
CTG ACG CAT TCC GTG AAA GCA CTT GAC ATT TCC CTG AAG ATC GAT ACA1065
Leu Thr His Ser Val Lys Ala Leu Asp Ile Ser Leu Lys Ile AspThr
325 330335
GAG CTC GCC CIT GAA GTT GGA AGG CGT ACA AAA CGA GCA TGAGCGCCAT1114
Glu Leu Ala Leu Glu Val Gly Arg Arg Thr Lys Arg Ala
340 345350
TACTTCTGCT ATAGGGTTGG AGTAAAAGCA GCTGAATAGC TGAAAGGTGC AAATAAGAAT1174
CATTTTACTA GTTGTCAAAC AAAAGATCCT TCACTGTGTA ATCAAACAAA AAGATGTAAA1234
TTGCTGGAAT ATCTCAGATG GCTCT1TTCC AACCTTATTG CTTGAGTTGG TAATTTCATT1294
ATAGCTTTGT TTrCATGTTT CATGGAATTT GTTACAATGA AAATACTTGA TTTATAAGTT1354
TGGTGTATGT AAAATTCTGT GTTACTTCAA ATATTTTGAG ATGTT1399 (2) Informace o SEQ ID č.: 2 (i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 351 amino kyselin (B) Typ: amino kyselina (C) Topologie: lineární ío (ii) Typ molekuly: protein
- 17CZ 297379 B6 (ix) Popis sekvence: SEQ ID č.: 2
| Met | Phe | Arg | Ala | Ile | Pro | Phe | Thr | Ala | Thr Val | His | Pro | Tyr Ala | Ile |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
| Thr | Ala | Pro | Arg | Leu | Val | Val | Lys | Met | Ser Ala | Ile | Ala | Thr Lys | Asn |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||
| Thr | Arg | Val | Glu | Ser | Leu | Glu | Val | Lys | Pro Pro | Ala | His | Pro Thr | Tyr |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||
| Asp | Leu | Lys | Glu | Val | Met | Lys | Leu | Ala | Leu Ser | Glu | Asp | Ala Gly | Asn |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||
| Leu | Gly | Asp | Val | Thr | Cys | Lys | Ala | Thr | Ile Pfo- | Leu | Asp | Met Glu | Ser |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
| Asp | Ala | His | Phe | Leu | Ala | Lys | Glu | Asp | Gly Ile | Ile | Ala | Gly Ile | Ala |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||
| Leu | Ala | Glu | Met | Ile | Phe | Ala | Glu | Val | Asp Pro | Ser | Leu | Lys Val | Glu |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||
| Trp | Tyr | Val | Asn | Asp | Gly | Asp | Lys | Val | His Lys | Gly | Leu | Lys Phe | Gly |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||
| Lys | Val | Gin | Gly | Asn | Ala | Tyr | Asn | Ile | Val Ile | Ala | Glu | Arg Val | Val |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||
| Leu | Asn | Phe | Met | Gin | Arg | Met | Ser | Gly | Ile Ala | Thr | Leu | Thr Lys | Glu |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
| Met | Ala | Asp | Ala | Ala | His | Pro | Ala | Tyr | Ile Leu | Glu | Thr | Arg Lys | Thr |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||
| Ala | Pro | Gly | Leu | Arg | Leu | Val | Asp | Lys | Trp Ala | Val | Leu | Ile Gly | Gly |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||
| Gly | Lys | Asn | His | Arg | Met | Gly | Leu | Phe | Asp Met | Val | Met | Ile Lys | Asp |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||
| Asn | His | Ile | Ser | Ala | Ala | Gly | Gly | Val | Gly Lys | Ala | Leu | Lys Ser | Val |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||
| Asp | Gin | Tyr | Leu | Glu | Gin | Asn | Lys | Leu | Gin Ile | Gly | Val | Glu Val | Glu |
| 225 | 230 | 235 | 240 |
-18CZ 297379 B6
| Thr | Arg | Thr | lle | Glu | Glu | Val | Arg | Glu | Val | Leu | Asp | Tyr | Ala | Ser | Gin |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Thr | Lys | Thr | Ser | Leu | Thr | Arg | lle | Met | Leu | Asp | Asn | Met | Val | Val | Pro |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Leu | Ser | Asn | Gly | Asp | lle | Asp | Vůl | Ser | Met | Leu | Lys | Glu | Ala | Val | Glu |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Leu | lle | Asn | Gly | Arg | Phe | Asp | Thr | Glu | Ala | Ser | Gly | Asn | Val | Thr | Leu |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Glu | Thr | Val | His | Lys | lle | Gly | Gin | Thr | Gly | Val | Thr | Tyr | lle | Ser | Ser |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Gly | Ala | Leu | Thr | His | Ser | Val | Lys | Ala | Leu | Asp | lle | Ser | Leu | Lys | lle |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Asp | Thr | Glu | Leu | Ala | Leu | Glu | Val | Gly | Arg | Arg | Thr | Lys | Arg | Ala | |
| 340 | 345 | 350 |
(2) Informace o SEQ ID č.: 3 (i) Charakteristiky sekvence:
(A) Délka: 1053 párů bází (B) Typ: kyselina nukleová (C) Typ řetězce: jednoduchý (D) Topologie: lineární (ii) Typ molekuly: cDNA (ix) Popis sekvence: SEQ ID č.: 3
ATGTTTAGAG CTATTCCTTT CACTGCTACA GTGCATCCTT ATGCAATTAC AGCTCCAAGG60
TTGGTGGTGA AAATGTCAGC AATAGCCACC AAGAATACAA GAGTGGAGTC ATTAGAGGTG120
AAACCACCAG CACACCCAAC TTATGATTTA AAGGAAGKA TGAAACTTGC ACTCTCTGAA180
GATGCTGGGA ATTTAGGAGA TGTGACHGT AAGGCGACAA nCCTCTTGA TATGGAATCC240
GATGCTCATT TTCTAGCAM GGAAGACGGG ATCATAGCAG GAATTGCACT TGCTGAGATG300
ATATTCGCGG AAGTTGATCC TTCAITAAAG GTGGAGTGGT ATGTAAATGA TGGCGATAAA360
GTTCATAAAG GCTTGAAATT TGGCAAAGTA CAAGGAAACG CTTACAACAT TGTTATAGCT420
GAGAGGGHG TTCTCAATTT TATGCAAAGA ATGAGTGGAA TAGCTACACT AACTAAGGAA480
ATGGCAGATG CTGCACACCC TGCTTACATC TTGGAGACTA GGAAAACTGC TCCTGGATTA540
CGTTTGGTGG ATAAATGGGC GGTATTGATC GGTGGGGGGA AGAATCACAG AATGGGCTTA600
-19CZ 297379 B6
TTTGATATGG TAATGATAAA AGACAATCAC ATATCTGCTG CTGGAGGTGT CGGCAAAGCT660
CTAAAATCTG TGGATCAGTA TTTGGAGCAA AATAAACTTC AAATAGGGGT TGAGGTTGAA720
ACCAGGACAA TTGAAGAAGT ACGTGAGGTT CTAGACTATG CATCTCAAAC AAAGACTTCG780
TTGACTAGGA TAATGCTGGA CAATATGGTT GTTCCATTAT CTAACGGAGA TATTGATGTA840
TCCATGCTTA AGGAGGCTGT AGAATTGATC AATGGGAGGT TTGATACGGA GGCTTCAGGA900
AATGTTACCC TTGAAACAGT ACACAAGATT GGACAAACTG GTGTTACCTA CATTTCTAGT960
GGTGCCCTGA CGCATTCCGT GAAAGCACTF GACATTTCCC TGAAGATCGA TACAGAGCTC1020
GCCCTTGAAG HGGAAGGCG TACAAAACGA GCA1053
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (44)
1. Izolovaná DNA molekula obsahující sekvenci volenou ze skupiny zahrnující:
(a) SEQIDč.:l (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c) uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
2. DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' promotor účinný v rostlinné buňce a molekulu DNA podle nároku 1 umístěnou ve směru od uvedeného promotoru a účinně s tímto spojenou.
3. DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' rostlinný promotor a molekulu DNA podle nároku 1 umístěnou ve směru uvedeného promotoru a účinně s tímto spojenou, uvedená část DNA má orientaci proti směru.
4. DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' promotor účinný v rostlinné buňce a DNA mající nukleotidovou sekvenci SEQ ID č.: 1 kódující enzym rostlinné chinolát-fosforibosyl-transferázy, uvedená DNA je účinně spojená s uvedeným promotorem.
5. DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' promotor účinný v rostlinné buňce a DNA mající nukleotidovou sekvenci SEQ ID č.: 1 kódující enzym rostlinné chinolát-fosforibosyl-transferázy, uvedená DNA má orientaci po směru a účinně spojená s uvedeným promotorem.
6. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, kde promotor je konstitutivně aktivní v rostlinných buňkách.
7. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, kde promotor je selektivně aktivní v buňkách rostlinné kořenové tkáně.
8. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, kde jeho promotor je selektivně aktivní v buňkách rostlinné tkáně kůry kořenů.
-20CZ 297379 B6
9. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, kde konstrukt dále obsahuje plazmid.
10. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, přičemž tento je přenášen rostlinným transformačním vektorem.
11. DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5, přičemž tento je přenášen rostlinným transformačním vektorem, přičemž rostlinný transformační vektor představuje Agrobacterium tumefaciens vektor.
12. Rostlinná buňka obsahující DNA konstrukt podle nároků 2, 3, 4 nebo 5.
13. Transgenická rostlina obsahující rostlinné buňky podle nároku 12.
14. Izolovaný peptid obsahující aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2.
15. Izolovaný peptid kódovaný DNA sekvencí volenou ze skupiny zahrnující:
(a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle bodu (a) výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl -transferázu a (c) DNA sekvence, které se liší od DNA bodu podle (a) nebo (b) výše díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforybosyl-transferázu.
16. Způsob výroby transformované rostlinné buňky mající sníženou produkci chinolátfosforibosyl-transferázy (QPRTázy), vyznačující se tím, že se:
transformuje typ rostlinné buňky, o kterém je známo, že produkuje chinolát-fosforybosyl-transferázu, exogenním DNA konstruktem, který ve směru 5'—3' zahrnuje promotor účinný v rostlinné buňce a heterologní DNA účinně spojenou s promotorem, k produkci transformované rostlinné buňky/buněk, a transformovaná rostlinná buňka má sníženou produkci chinolát-fosforibosyltransferázy ve srovnání s netransformovanou rostlinnou buňkou; a kde heterologní DNA zahrnuje nejméně 20 nukleotidů z nukleotidové sekvence volené ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA sekvenci podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že heterologní DNA má orientaci proti směru.
18. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že heterologní DNA má orientaci po směru.
19. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedená rostlinná buňka je z rostliny Nicotiana tabacum.
20. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že dále zahrnuje regeneraci rostliny z uvedené transformované rostlinné buňky.
21. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedený promotor je konstitutivně aktivní.
-21 CZ 297379 B6
22. Způsob podle nároku 16, vyznačující aktivní v buňkách rostlinné kořenové tkáně.
23. Způsob podle nároku 16, vyznačující aktivní k buňkám rostlinné tkáně kořenové kůry.
se tím, že uvedený promotor je selektivně se tím, že uvedený promotor je selektivně
24. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedený krok transformace je proveden ostřelováním uvedené rostlinné buňky mikročásticemi nesoucími uvedený DNA konstrukt.
25. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedený krok transformace je proveden infikováním uvedené rostlinné buňky s Agrobacterium tumefaciens obsahujícím Tiplazmid nesoucí uvedený DNA konstrukt.
26. Způsob produkce osiva transgenického tabáku, vyznačující se tím, že zahrnuje sběr osiva z transgenické tabákové rostliny produkované způsobem podle nároku 20.
27. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že transformovaná rostlinná buňka má exprimovanou endogenní mediátorovou RNA chinolát-fosforibosyl-transferázy a heterologní DNA je komplementární k uvedené mediátorové RNA chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRT mRNA) exprimované v uvedené rostlinné buňce v oblasti volené z:
(a) 5'-netranslatované sekvence uvedené QPRT mRNA, (b) 3'-netranslatované sekvence uvedené QPRT mRNA a (c) translatované oblasti uvedené QPRT mRNA.
28. Způsob podle nároku 27, vyzn aču j ící se tím, že heterologní DNA ke komplementární alespoň k 15 nukleotidům uvedené mediátorové RNA chinolát-fosforibosyl-transferázy exprimované v uvedené rostlinné buňce.
29. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že heterologní DNA je komplementární alespoň k 200 nukleotidům uvedené mediátorové RNA chinolát-fosforibosyl-transferázy exprimované v uvedené rostlinné buňce.
30. Způsob podle nároku 16, v y z n a č u j í c í se tím, že heterologní DNA obsahuje sekvenci kódující chinolát-fosforibosyl-transferázu volenou z DNA sekvencí podle nároku 1.
31. Transgenická rostlina rodu Nicotiana mající sníženou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) oproti netransformované kontrolní rostlině, uvedená transgenická rostlina obsahuje transgenické rostlinné buňky obsahující:
exogenní DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' promotor účinný v uvedené rostlinné buňce a heterologní DNA účinně spojenou s uvedeným promotorem;
uvedená rostlina projevuje sníženou produkci QPRTázy ve srovnání s netransformovanou kontrolní rostlinou, a heterologní DNA zahrnuje nejméně 15 nukleotidů ze sekvence volené ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
32 Transgenická rostlina podle nároku 31, kde heterologní DNA má orientaci proti směru.
33. Transgenická rostlina podle nároku 31, kde že heterologní DNA má orientaci po směru.
-22CZ 297379 B6
34. Transgenická rostlina rodu Nicotiana mající sníženou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTáza) oproti netransformované kontrolní rostlině, kdy uvedená transgenická rostlina představuje potomstvo rostlin podle nároku 31.
35. Osivo transgenické rostliny rodu Nicotiana mající sníženou produkci chinolát-fosforibosyltransferázy (QPRTáza) oproti netransformované kontrolní rostlině, kdy uvedená transgenická rostlina je rostlinou podle nároku 31 nebo jejím potomstvem.
36. Způsob snížení exprese genu chinolát-fosforibosyl-transferázy v rostlinné buňce, vyznačující se tím, že se:
pěstuje rostlinná buňka transformovaná tak, aby obsahovala heterologní DNA, kdy transkribované vlákno heterologní DNA je komplementární k mediátorové RNA chinolát-fosforibosyl-transferázy endogenní v rostlinné buňce, čímž transkripce komplementárního vlákna snižuje expresi genu chinolát-fosforibosylu; heterologní DNA zahrnuje nejméně 15 nukleotidů ze sekvence volené ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
37. Způsob produkce transgenické tabákové rostliny se sníženou úrovní nikotinu v listech, vyznačující se tím, že se transformuje tabáková rostlinná buňka molekulou heterologní DNA obsahující nejméně 30 nukleotidů z DNA sekvence volené ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 a (b) DNA sekvence kódující enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 k získání transformované tabákové buňky, a z transformované buňky tabákové rostliny se vypěstuje transgenická tabáková rostlina se sníženou úrovní nikotinu v listech.
38. Způsob přípravy transformované rostlinné buňky mající zvýšenou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTázy), vyznačující se tím, že se:
transformuje rostlinná buňka, která produkuje chinolát-fosforibosyl-transferázu exogenním DNA konstruktem, který obsahuje ve směru 5-3' promotor účinný v rostlinné buňce a heterologní DNA sekvenci kódující chinolát-fosforibosyl-transferázu k produkci transformované rostlinné buňky/buněk, uvedená transformovaná rostlinná buňka má zvýšenou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy ve srovnání s netransformovanou rostlinnou buňkou, kde heterologní DNA sekvence je vybíraná ze skupiny skládající se z (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
39. Transgenická rostlina rodu Nicotiana mající zvýšenou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTázy) oproti netransformované kontrolní rostlině, uvedená transgenická rostlina obsahuje transformované rostlinné buňky obsahující:
exogenní DNA konstrukt obsahující ve směru 5' k 3' promotor účinný v uvedené rostlinné buňce a heterologní DNA sekvenci kódující enzym rostlinné chinolát-fosforibosyl-transferázy, uvedená DNA je účinně spojená s uvedeným promotorem;
-23 CZ 297379 B6 uvedená rostlina má zvýšenou produkci QPRTázy ve srovnání s netransformovanou kontrolní rostlinou a heterologní DNA sekvence je volená ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
40. Transgenická rostlina rodu Nicotiana mající zvýšenou produkci chinolát-fosforibosyl-transferázy (QPRTázy) oproti netransformované kontrolní rostlině, kdy uvedená transgenická rostlina je potomstvem rostliny podle nároku 39.
41. Způsob zvýšení exprese genu chinolát-fosforibosyl-transferázy v rostlinné buňce, vyznačující se tím, že pěstuje rostlinná buňka transformovaná tak, aby obsahovala heterologní DNA, kde heterologní DNA kóduje enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu a je volená ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID č.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
42. Způsob podle nároku 41,vyznačující se tím, že uvedená transformovaná rostlinná buňka je získána způsobem zahrnujícím:
začlenění konstruktu obsahujícího ve směru transkripce promotor funkční v uvedené rostlinné buňce DNA sekvenci kódující chinolát-fosforibosyl-transferázu funkční v uvedené rostlinné buňce do genomu hostitelské rostlinné buňky, uvedená DNA sekvence je účinně spojená s uvedeným promotorem a transkripční koncovou oblastí funkční v uvedené buňce, čímž je získána transformovaná rostlinná buňka.
43. Způsob produkce tabákové rostliny se zvýšenou úrovní nikotinu v listech uvedené tabákové rostliny, vyznačující se tím, že se:
pěstuje tabáková rostlina nebo její rostlinné potomstvo, kdy uvedená rostlina obsahuje buňky obsahující exogenní DNA konstrukt zahrnující transkripční iniciační oblast funkční v uvedené tabákové rostlině a heterologní DNA sekvenci účinně spojenou s uvedenou transkripční iniciační oblastí, kdy uvedená heterologní DNA sekvence kóduje enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu funkční v uvedených buňkách a kde heterologní DNA sekvence je volená ze skupiny zahrnující (a) SEQ ID ě.: 1 (b) DNA sekvence, které kódují enzym mající aminokyselinovou sekvenci SEQ ID č.: 2 (c) DNA sekvence, které hybridizují na izolovanou DNA podle (a) nebo (b) uvedenou výše a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu; a (d) DNA sekvence, které se liší od DNA podle (a), (b) nebo (c), uvedených výše, díky degeneraci genetického kódu, a které kódují enzym chinolát-fosforibosyl-transferázu.
44. Tabákový výrobek, vyznačující se tím, že je vyrobený z tabákové rostliny podle kteréhokoli z nároků 31 až 34, 40 nebo 41.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4947197P | 1997-06-12 | 1997-06-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ367799A3 CZ367799A3 (cs) | 2000-04-12 |
| CZ297379B6 true CZ297379B6 (cs) | 2006-11-15 |
Family
ID=21960004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0367799A CZ297379B6 (cs) | 1997-06-12 | 1998-06-10 | Izolovaná DNA molekula, DNA konstrukt, rostlinná bunka a transgenická rostlina, peptid, zpusob prípravy transgenické rostlinné bunky, osivo transgenické rostliny, zpusob produkce tabákové rostliny a zpusob snízení a zvýsení exprese genu |
Country Status (37)
| Country | Link |
|---|---|
| US (9) | US6586661B1 (cs) |
| EP (3) | EP1457563B1 (cs) |
| JP (4) | JP4095678B2 (cs) |
| KR (1) | KR100365969B1 (cs) |
| CN (2) | CN100482799C (cs) |
| AP (1) | AP1169A (cs) |
| AT (1) | ATE262039T1 (cs) |
| AU (1) | AU748514B2 (cs) |
| BG (1) | BG64319B1 (cs) |
| BR (1) | BRPI9810870B1 (cs) |
| CA (2) | CA2484366A1 (cs) |
| CU (1) | CU23174A3 (cs) |
| CZ (1) | CZ297379B6 (cs) |
| DE (2) | DE69822463T2 (cs) |
| DK (1) | DK0991766T3 (cs) |
| EA (2) | EA004652B1 (cs) |
| EE (1) | EE04595B1 (cs) |
| ES (1) | ES2154624T3 (cs) |
| GE (1) | GEP20032871B (cs) |
| GR (1) | GR20010300003T1 (cs) |
| HU (1) | HU225888B1 (cs) |
| ID (1) | ID29311A (cs) |
| IL (3) | IL132184A0 (cs) |
| LT (1) | LT4706B (cs) |
| LV (1) | LV12507B (cs) |
| NO (1) | NO324872B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ500963A (cs) |
| OA (1) | OA11219A (cs) |
| PL (1) | PL201266B1 (cs) |
| PT (1) | PT991766E (cs) |
| RO (1) | RO121968B1 (cs) |
| RS (1) | RS49677B (cs) |
| SI (1) | SI20215B (cs) |
| SK (1) | SK161899A3 (cs) |
| TR (1) | TR199902728T2 (cs) |
| UA (1) | UA72187C2 (cs) |
| WO (1) | WO1998056923A1 (cs) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6586661B1 (en) | 1997-06-12 | 2003-07-01 | North Carolina State University | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression by transformation with a tobacco quinolate phosphoribosyl transferase nucleic acid |
| US20100251425A9 (en) * | 1998-05-15 | 2010-09-30 | University Of Central Florida | Expression of human interferon in transgenic chloroplasts |
| DE19926216A1 (de) * | 1999-06-09 | 2001-02-22 | Metallgesellschaft Ag | Verfahren zur Herstellung von Bariumsulfat, Bariumsulfat und Verwendung des Bariumsulfats |
| EP1724355A3 (en) * | 2000-08-30 | 2007-05-23 | North Carolina State University | Transgenic plants containing molecular decoys that alter protein content therein |
| JP2004533807A (ja) * | 2000-11-07 | 2004-11-11 | ノース・キャロライナ・ステイト・ユニヴァーシティ | プトレッシン−ｎ−メチルトランスフェラーゼプロモーター |
| DE10055870A1 (de) | 2000-11-10 | 2002-05-29 | Degussa | Neue für das nadC-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
| AU2002228901A1 (en) | 2000-11-10 | 2002-05-21 | Vector Tobacco (Bermuda) Ltd. | Method and product for removing carcinogens from tobacco smoke |
| CN1288248C (zh) * | 2001-06-06 | 2006-12-06 | 二十二世纪有限责任公司 | 烟草生物质的用途 |
| CA2449920A1 (en) * | 2001-06-08 | 2002-12-19 | Vector Tobacco Ltd. | Modifying nicotine and nitrosamine levels in tobacco |
| US20060157072A1 (en) * | 2001-06-08 | 2006-07-20 | Anthony Albino | Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine |
| WO2005103296A2 (en) * | 2004-03-30 | 2005-11-03 | Vector Tobacco, Ltd. | Global gene expression analysis of human bronchial epithelial cells exposed to cigarette smoke, smoke condensates, or components thereof |
| US6730832B1 (en) | 2001-09-10 | 2004-05-04 | Luis Mayan Dominguez | High threonine producing lines of Nicotiana tobacum and methods for producing |
| WO2003041521A2 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-22 | Vector Tobacco Inc. | Method and composition for mentholation of charcoal filtered cigarettes |
| AU2002361809A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-09 | Vector Tobacco Inc. | Method and compositions for imparting cooling effect to tobacco products |
| EP1455608B1 (en) * | 2001-12-19 | 2006-10-11 | Vector Tobacco Ltd. | Method and composition for mentholation of cigarettes |
| AU2003230833A1 (en) * | 2002-04-09 | 2003-10-27 | Vector Tobacco Ltd. | Tobacco having reduced nicotine and nitrosamines |
| AU2004266694A1 (en) | 2003-08-19 | 2005-03-03 | 22Nd Century Limited, Llc | Reduced-exposure tobacco products |
| US7920906B2 (en) | 2005-03-10 | 2011-04-05 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data for sensor calibration |
| EP1684603A2 (en) * | 2003-10-02 | 2006-08-02 | Vector Tobacco Ltd. | Tobacco product labeling system |
| US9247900B2 (en) | 2004-07-13 | 2016-02-02 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| US7538071B2 (en) | 2003-11-21 | 2009-05-26 | Carl Berger | Methods of reducing the nicotine content of tobacco plants and tobacco plants obtained thereby |
| US8792955B2 (en) | 2004-05-03 | 2014-07-29 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US8989833B2 (en) | 2004-07-13 | 2015-03-24 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| AU2012203977B2 (en) * | 2005-02-28 | 2015-01-29 | 22Nd Century Limited, Llc | Reducing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| KR101413122B1 (ko) | 2005-02-28 | 2014-07-18 | 22엔디 센츄리 리미티드, 엘엘씨 | 식물의 니코틴 알칼로이드 수준의 감소 |
| AU2006247739A1 (en) | 2005-05-11 | 2006-11-23 | Vector Tobacco Inc. | Reduced risk tobacco products and methods of making same |
| FR2889003A1 (fr) * | 2005-07-22 | 2007-01-26 | St Microelectronics Sa | Adaptation automatique d'une source video a un recepteur |
| CA2656430C (en) | 2006-06-19 | 2014-08-05 | Jonathan E. Page | Nucleic acid encoding n-methylputrescine oxidase and uses thereof |
| WO2007072224A2 (en) | 2006-09-13 | 2007-06-28 | Nara Institute Of Science And Technology | Increasing levels of nicotinic alkaloids |
| US9551003B2 (en) * | 2006-09-13 | 2017-01-24 | 22Nd Century Limited, Llc | Increasing levels of nicotinic alkaloids in plants |
| US9102948B2 (en) | 2006-11-17 | 2015-08-11 | 22Nd Century Limited, Llc | Regulating alkaloids |
| US9106606B1 (en) | 2007-02-05 | 2015-08-11 | F5 Networks, Inc. | Method, intermediate device and computer program code for maintaining persistency |
| CN110872589A (zh) | 2007-05-25 | 2020-03-10 | 22世纪有限责任公司 | 编码调节生物碱合成之转录因子的核酸序列及其在改良植物代谢中的应用 |
| US20100206317A1 (en) * | 2007-09-28 | 2010-08-19 | Vector Tobacco, Inc. | Reduced risk tobacco products and use thereof |
| EP2559766B1 (en) * | 2007-12-13 | 2017-10-18 | Philip Morris Products S.A. | Plants modified for reduced cadmium transport, derivative products, and related methods |
| CA2781332C (en) | 2009-11-19 | 2018-09-04 | National University Corporation Okayama University | System for increasing gene expression and vector comprising the system |
| CN102781494B (zh) | 2009-12-11 | 2015-04-01 | 泰尔茂比司特公司 | 具有防护提取端口和光学控制的血液分离系统 |
| EP2537929B1 (en) | 2010-02-17 | 2017-04-12 | Japan Tobacco, Inc. | Plant component regulation factor, and use thereof |
| US9862923B2 (en) | 2010-03-26 | 2018-01-09 | Philip Morris Usa Inc. | Cultured tobacco cells as a matrix for consumable products |
| EP2565265A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-06 | Philip Morris Products S.A. | Isopropylmalate synthase from Nicotiana tabacum and methods and uses thereof |
| US8716571B2 (en) | 2011-09-21 | 2014-05-06 | Reynolds Technologies, Inc. | Tobacco having reduced amounts of amino acids and methods for producing such lines |
| US9137958B2 (en) | 2012-02-08 | 2015-09-22 | Reynolds Technologies, Inc. | Tobacco having altered amounts of environmental contaminants |
| AP2015008563A0 (en) * | 2012-12-21 | 2015-06-30 | Philip Morris Products Sa | Tobacco specific nitrosamine reduction in plants |
| CN103173488B (zh) * | 2013-03-14 | 2014-09-03 | 浙江省农业科学院 | 新的融合标签进行水稻转基因快速筛选的方法 |
| US10375910B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-08-13 | Altria Client Services Llc | Development of tobacco varieties with no or significantly reduced anatabine content |
| US20180291388A1 (en) * | 2015-05-05 | 2018-10-11 | North Carolina State University | Methods and compositions for reducing the tobacco specific nitrosamine nnk in tobacco |
| US10405571B2 (en) | 2015-06-26 | 2019-09-10 | Altria Client Services Llc | Compositions and methods for producing tobacco plants and products having altered alkaloid levels |
| EP3480314A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-08 | Philip Morris Products S.A. | Regulation of alkaloid content |
| US20200035118A1 (en) | 2018-07-27 | 2020-01-30 | Joseph Pandolfino | Methods and products to facilitate smokers switching to a tobacco heating product or e-cigarettes |
| US10897925B2 (en) | 2018-07-27 | 2021-01-26 | Joseph Pandolfino | Articles and formulations for smoking products and vaporizers |
| JP2022552261A (ja) * | 2019-10-10 | 2022-12-15 | アルトリア クライアント サーヴィシーズ リミテッド ライアビリティ カンパニー | 変化したアルカロイドレベルを有するタバコ植物およびタバコ製品を作製するためのｑｐｔ操作に基づく組成物および方法 |
| CN113528537A (zh) * | 2021-08-11 | 2021-10-22 | 云南省烟草农业科学研究院 | 一种降低烟叶烟碱含量的NtQPT2基因突变体及其应用 |
| CN116983432A (zh) * | 2023-07-07 | 2023-11-03 | 深圳先进技术研究院 | 用于治疗类风湿性关节炎的药物 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993005646A1 (en) * | 1991-09-13 | 1993-04-01 | Technology Management Services, S.A. | Reduction of nicotine levels in tobacco |
| WO1994028142A1 (en) * | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Philip Morris Products Inc. | Putrescine n-methyltransferase, recombinant dna molecules encoding putrescine n-methyltransferase, and transgenic tobacco plants with decreased alkaloid content |
Family Cites Families (214)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US254285A (en) | 1882-02-28 | David w | ||
| US299541A (en) | 1884-06-03 | heae-n | ||
| US38123A (en) * | 1863-04-07 | Improvement in harvesters | ||
| US819751A (en) * | 1905-01-04 | 1906-05-08 | Giuseppe Gianoli | Process of charging silk. |
| US2479526A (en) | 1940-12-11 | 1949-08-16 | Wurton Machine Company | Apparatus for curing green tobacco |
| US2728803A (en) * | 1951-12-28 | 1955-12-27 | Standard Oil Co | Separation of ethylbenzene from other c8 aromatic hydrocarbons by extraction with hf-bf3 |
| US2728603A (en) | 1954-12-13 | 1955-12-27 | James H Stagg | Lawn and garden sprinkler |
| DE1917552U (de) | 1964-01-31 | 1965-06-10 | Fritz Tautenhahn | Flaechig-ornamentales gitterwerk. |
| US3693631A (en) | 1971-04-28 | 1972-09-26 | Reynolds Leasing Corp | Tobacco expansion process |
| US3840025A (en) | 1972-08-14 | 1974-10-08 | Industrial Nucleonics Corp | Tobacco moisture control system and method |
| US3905123A (en) | 1973-10-15 | 1975-09-16 | Industrial Nucleonics Corp | Method and apparatus for controlling a tobacco dryer |
| US4319587A (en) | 1975-06-09 | 1982-03-16 | Irving S. Moser | Smoking article |
| DE2531285C2 (de) | 1975-07-12 | 1982-10-28 | Deutsche Benkert Gmbh & Co Kg, 4690 Herne | Filterzigarette |
| US4192323A (en) | 1977-09-21 | 1980-03-11 | Gas-Fired Products, Inc. | Apparatus and method for automatically controlling curing conditions in a tobacco curing barn |
| US4557280A (en) | 1978-06-15 | 1985-12-10 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Process for reduction of nitrate and nicotine content of tobacco by microbial treatment |
| US4243056A (en) | 1979-01-12 | 1981-01-06 | Philip Morris Incorporated | Method for uniform incorporation of additives into tobacco |
| FR2478958A1 (fr) | 1980-04-01 | 1981-10-02 | Decoufle | Dispositif d'alimentation en encre des appareils d'imprimerie pour machines a confectionner les cigarettes |
| US4499911A (en) | 1980-12-09 | 1985-02-19 | Johnson William H | Energy efficient curing and drying system |
| GB2092149B (en) * | 1981-02-03 | 1985-01-03 | Searle & Co | Imidazoline hydrazone and hydrazine derivatives production thereof and use in medicine |
| US4459355A (en) | 1982-07-12 | 1984-07-10 | International Paper Company | Method for transforming plant cells |
| US4762785A (en) | 1982-08-12 | 1988-08-09 | Calgene, Inc. | Novel method and compositions for introducting alien DNA in vivo |
| NL8203963A (nl) | 1982-10-14 | 1984-05-01 | Naarden International Nv | Werkwijze voor het aromatiseren van droog plantaardig materiaal. |
| EP0320500B1 (en) | 1983-01-13 | 2004-11-17 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Non-oncogenic ti plasmid vector system and recombinant DNA molecules for the introduction of expressible genes into plant cell genomes |
| US6051757A (en) | 1983-01-14 | 2000-04-18 | Washington University | Regeneration of plants containing genetically engineered T-DNA |
| EP0131624B1 (en) | 1983-01-17 | 1992-09-16 | Monsanto Company | Plasmids for transforming plant cells |
| US6174724B1 (en) | 1983-01-17 | 2001-01-16 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| US5034322A (en) | 1983-01-17 | 1991-07-23 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| SU1582990A3 (ru) | 1983-01-17 | 1990-07-30 | Монсанто Компани (Фирма) | Способ получени трасформированных клеток двудольных растений |
| US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
| EP0131623B2 (en) | 1983-01-17 | 1999-07-28 | Monsanto Company | Chimeric genes suitable for expression in plant cells |
| NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
| NL8300699A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; werkwijze voor het produceren van agrobacterium tumefaciens bacterien; stabiele cointegraat plasmiden; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
| US4751348A (en) | 1983-07-16 | 1988-06-14 | Cold Spring Harbor Laboratory | Nicotiana plants with both altered polyamine levels and flower structures and method for obtaining these plants |
| US4766855A (en) * | 1983-07-20 | 1988-08-30 | Cummins Engine Co., Inc. | Plasma jet ignition apparatus |
| DE3486053T3 (de) | 1983-10-20 | 2004-01-08 | The Research Foundation Of State University Of New York | Regulierung von Gen-Expression durch Translationshemmung unter Verwendung von m-RNS hinderndem Komplementär-RNS. |
| US5190931A (en) | 1983-10-20 | 1993-03-02 | The Research Foundation Of State University Of New York | Regulation of gene expression by employing translational inhibition of MRNA utilizing interfering complementary MRNA |
| US5208149A (en) | 1983-10-20 | 1993-05-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures |
| US5272065A (en) | 1983-10-20 | 1993-12-21 | Research Foundation Of State University Of New York | Regulation of gene expression by employing translational inhibition of MRNA utilizing interfering complementary MRNA |
| US4885248A (en) | 1984-02-15 | 1989-12-05 | Lubrizol Genetics, Inc. | Transfer vector |
| US4771002A (en) | 1984-02-24 | 1988-09-13 | Lubrizol Genetics, Inc. | Transcription in plants and bacteria |
| US5149645A (en) | 1984-06-04 | 1992-09-22 | Rijksuniversiteit Leiden | Process for introducing foreign DNA into the genome of plants |
| NL8401780A (nl) | 1984-06-04 | 1986-01-02 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van planten. |
| US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
| US5036006A (en) | 1984-11-13 | 1991-07-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
| US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
| DE3587548T2 (de) | 1984-12-28 | 1993-12-23 | Bayer Ag | Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann. |
| US6281410B1 (en) | 1986-07-31 | 2001-08-28 | Calgene Llc | Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes |
| US4943674A (en) | 1987-05-26 | 1990-07-24 | Calgene, Inc. | Fruit specific transcriptional factors |
| US5753475A (en) | 1985-01-17 | 1998-05-19 | Calgene, Inc. | Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes |
| US6617496B1 (en) | 1985-10-16 | 2003-09-09 | Monsanto Company | Effecting virus resistance in plants through the use of negative strand RNAs |
| NL8502948A (nl) | 1985-10-29 | 1987-05-18 | Rijksuniversiteit Leiden En Pr | Werkwijze voor het inbouwen van "vreemd dna" in het genoom van dicotyle planten. |
| US4795855A (en) | 1985-11-14 | 1989-01-03 | Joanne Fillatti | Transformation and foreign gene expression with woody species |
| GB8529851D0 (en) | 1985-12-04 | 1986-01-15 | Rothmans Of Pall Mall | Linear layered cigarette |
| US5453566A (en) | 1986-03-28 | 1995-09-26 | Calgene, Inc. | Antisense regulation of gene expression in plant/cells |
| US5107065A (en) | 1986-03-28 | 1992-04-21 | Calgene, Inc. | Anti-sense regulation of gene expression in plant cells |
| NZ219472A (en) | 1986-03-28 | 1990-08-28 | Calgene Inc | Regulation of phenotype in plant cells using dsdna constructs |
| US4700725A (en) | 1986-04-17 | 1987-10-20 | Philip Morris Incorporated | Adjustable filter cigarette |
| US4699158A (en) | 1986-04-17 | 1987-10-13 | Philip Morris Incorporated | Adjustable filter cigarette with tactile indicator |
| DE3661587D1 (en) | 1986-04-23 | 1989-02-09 | Reynolds Tobacco Gmbh | Process for treating tobacco and similar organic materials |
| US4766911A (en) | 1986-06-23 | 1988-08-30 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Method for tracing smoking articles |
| US4962028A (en) | 1986-07-09 | 1990-10-09 | Dna Plant Technology Corporation | Plant promotors |
| US5229292A (en) | 1986-07-28 | 1993-07-20 | Stine Seed Farm, Inc. | Biological control of insects using pseudomonas strains transformed with bacillus thuringiensis insect toxingene |
| EP0265556A1 (en) | 1986-10-31 | 1988-05-04 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Stable binary agrobacterium vectors and their use |
| US5268463A (en) | 1986-11-11 | 1993-12-07 | Jefferson Richard A | Plant promoter α-glucuronidase gene construct |
| US5015580A (en) | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
| US4835162A (en) | 1987-02-12 | 1989-05-30 | Abood Leo G | Agonists and antagonists to nicotine as smoking deterents |
| US4966916A (en) | 1987-02-12 | 1990-10-30 | Abood Leo G | Agonists and antagonists to nicotine as smoking deterrents |
| US5356799A (en) | 1988-02-03 | 1994-10-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Antisense gene systems of pollination control for hybrid seed production |
| US5922602A (en) | 1988-02-26 | 1999-07-13 | Biosource Technologies, Inc. | Cytoplasmic inhibition of gene expression |
| US5179022A (en) | 1988-02-29 | 1993-01-12 | E. I. Du Pont De Nemours & Co. | Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues in a non-lethal manner |
| US4954442A (en) | 1988-08-31 | 1990-09-04 | Purdue Research Foundation | Opine enhancement of vir gene induction |
| US5023179A (en) | 1988-11-14 | 1991-06-11 | Eric Lam | Promoter enhancer element for gene expression in plant roots |
| GB8827592D0 (en) | 1988-11-25 | 1988-12-29 | Taniguchi T | Improvements in & relating to regulation of expression |
| US5223419A (en) | 1989-03-14 | 1993-06-29 | The Rockefeller University | Alteration of gene expression in plants |
| US4990607A (en) | 1989-03-14 | 1991-02-05 | The Rockefeller University | Alteration of gene expression in plants |
| US5034323A (en) | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| US5231020A (en) | 1989-03-30 | 1993-07-27 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| GB8916213D0 (en) | 1989-07-14 | 1989-08-31 | Ici Plc | Dna constructs,cells and plants derived therefrom |
| US5665543A (en) | 1989-07-18 | 1997-09-09 | Oncogene Science, Inc. | Method of discovering chemicals capable of functioning as gene expression modulators |
| US5776502A (en) | 1989-07-18 | 1998-07-07 | Oncogene Science, Inc. | Methods of transcriptionally modulating gene expression |
| AU660405B2 (en) | 1989-07-18 | 1995-06-29 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Method of transcriptionally modulating gene expression and of discovering chemicals capable of functioning as gene expression modulators |
| US6203976B1 (en) | 1989-07-18 | 2001-03-20 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods of preparing compositions comprising chemicals capable of transcriptional modulation |
| US5580722A (en) | 1989-07-18 | 1996-12-03 | Oncogene Science, Inc. | Methods of determining chemicals that modulate transcriptionally expression of genes associated with cardiovascular disease |
| US5501967A (en) | 1989-07-26 | 1996-03-26 | Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden | Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants |
| NL8901931A (nl) | 1989-07-26 | 1991-02-18 | Mogen International N V En Rij | Werkwijze voor het plaatsgericht introduceren van vreemd dna in het genoom van planten. |
| US5097025A (en) | 1989-08-01 | 1992-03-17 | The Rockefeller University | Plant promoters |
| US5062434A (en) | 1989-09-22 | 1991-11-05 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Cigarette paper |
| GB8923716D0 (en) | 1989-10-20 | 1989-12-06 | Ici Plc | Dna,constructs,cells and plants derived therefrom |
| US5177308A (en) | 1989-11-29 | 1993-01-05 | Agracetus | Insecticidal toxins in plants |
| ATE130371T1 (de) | 1989-12-19 | 1995-12-15 | Ciba Geigy Ag | Verfahren und vorrichtung zur genetischen transformation von zellen. |
| JPH0673478B2 (ja) * | 1990-01-11 | 1994-09-21 | 旭化成工業株式会社 | Ｌ―カルニチンの高感度測定法および測定用組成物 |
| WO1991011535A1 (en) | 1990-01-30 | 1991-08-08 | Childrens Hospital Of Los Angeles | Inhibition of transcription by double-stranded oligonucleotides |
| CA2036935A1 (en) | 1990-02-26 | 1991-08-27 | Paul Christou | Plant transformation process with early identification of germ line transformation events |
| GB9005945D0 (en) | 1990-03-16 | 1990-05-09 | Cambridge Advanced Tech | Plant promoter |
| WO1991014790A1 (en) | 1990-03-27 | 1991-10-03 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Inhibitors of transcription activation activity of papillomaviruses |
| US5109876A (en) | 1990-04-19 | 1992-05-05 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Cigarette paper and cigarette incorporating same |
| US5204253A (en) | 1990-05-29 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and apparatus for introducing biological substances into living cells |
| US5932782A (en) | 1990-11-14 | 1999-08-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles |
| US5668295A (en) | 1990-11-14 | 1997-09-16 | Philip Morris Incorporated | Protein involved in nicotine synthesis, DNA encoding, and use of sense and antisense DNAs corresponding thereto to affect nicotine content in transgenic tobacco cells and plants |
| US5260205A (en) | 1990-11-14 | 1993-11-09 | Philip Morris Incorporated | Method of purifying putrescine N-methyltransferase from tobacco plant extract with a polyamine |
| US5035252A (en) | 1990-12-14 | 1991-07-30 | Mondre Steven J | Nicotine-containing dental floss |
| US5459252A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-17 | North Carolina State University | Root specific gene promoter |
| JPH04265569A (ja) * | 1991-02-19 | 1992-09-21 | Canon Inc | 音声信号記録装置及び再生装置 |
| CA2108144A1 (en) | 1991-03-06 | 1992-09-07 | Jack A. Roth | Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression |
| CA2106386A1 (en) | 1991-04-18 | 1992-10-19 | Barbara C. F. Chu | Oligodeoxynucleotides and oligonucleotides useful as decoys for proteins which selectively bind to defined dna sequences |
| FR2675803B1 (fr) | 1991-04-25 | 1996-09-06 | Genset Sa | Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications. |
| GB9109063D0 (en) | 1991-04-26 | 1991-06-12 | Ici Plc | Modification of lignin synthesis in plants |
| WO1993000546A1 (en) | 1991-06-20 | 1993-01-07 | Reinforced Plastics/Composites Pty Ltd | A connecting system |
| DK0593618T3 (da) | 1991-06-27 | 1998-11-23 | Genelabs Tech Inc | Screeningsassay til påvisning af DNA-bindende molekyler |
| GB9304200D0 (en) | 1993-03-02 | 1993-04-21 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US5994629A (en) | 1991-08-28 | 1999-11-30 | Novartis Ag | Positive selection |
| DK152291D0 (da) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | Danisco | Fremgangsmaade og kemiske forbindelser |
| AU3584993A (en) | 1992-01-27 | 1993-09-01 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Methods and compositions for neutralizing intracellular nucleic acid-binding protein biological activity in a cell, including methods and compositions useful to regulate gene function |
| EP0628082B1 (en) | 1992-02-26 | 2001-05-16 | Zeneca Mogen B.V. | Agrobacterium strains capable of site-specific recombination |
| AU678154B2 (en) | 1992-04-02 | 1997-05-22 | Sembiosys Genetics Inc. | Oil-body protein cis-elements as regulatory signals |
| US5780051A (en) | 1992-04-02 | 1998-07-14 | Dynagen, Inc. | Methods and articles of manufacture for nicotine cessation and monitoring nicotine use |
| US5626152A (en) | 1992-08-26 | 1997-05-06 | Molins Plc | Cigarette making machine |
| US5469871A (en) | 1992-09-17 | 1995-11-28 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Cigarette and method of making same |
| DE69327809T2 (de) | 1992-11-27 | 2000-10-12 | Voxel, Laguna Hills | Verfahren und vorrichtung zur herstellung von hologrammen |
| WO1994012015A1 (en) | 1992-11-30 | 1994-06-09 | Chua Nam Hai | Expression motifs that confer tissue- and developmental-specific expression in plants |
| IL108367A0 (en) | 1993-01-27 | 1994-04-12 | Hektoen Inst For Medical Resea | Antisense polynzcleotide inhibition of human growth factor-sensitive cancer cells |
| ES2161245T3 (es) | 1993-05-13 | 2001-12-01 | Aventis Cropscience Nv | Gen marcador. |
| US5540242A (en) | 1993-07-07 | 1996-07-30 | Brown & Williamson Tobacco Corporation | Cigarette paper having reduced sidestream properties |
| US5377697A (en) | 1993-08-27 | 1995-01-03 | Hoechst Celanese Corporation | Cigarette filter test apparatus and associated method for measuring filter hot collapse and tobacco consumption |
| US5810020A (en) | 1993-09-07 | 1998-09-22 | Osmotek, Inc. | Process for removing nitrogen-containing anions and tobacco-specific nitrosamines from tobacco products |
| PT732929E (pt) | 1993-10-29 | 2008-08-26 | Brigham & Womens Hospital | Utilização terapêutica de ''engodos'' de elementos cis in vivo |
| US6399376B1 (en) | 1993-11-05 | 2002-06-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of vascular cell adhesive molecule expression through oligonucleotide interactions |
| US5731179A (en) | 1993-12-08 | 1998-03-24 | Japan Tobacco Inc. | Method for introducing two T-DNAS into plants and vectors therefor |
| US5394894A (en) | 1994-02-22 | 1995-03-07 | Zade; Ismail Y. | Method and apparatus for elimination of smoking |
| US5858774A (en) | 1994-05-12 | 1999-01-12 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antisense DNA constructs for expression of hybrid MRNAs driven by inducible, tissue-specific promoters |
| ES2081257B1 (es) | 1994-05-12 | 1996-07-16 | Sagrera Jorge Martinez | Instalacion y procedimiento para el curado de tabaco. |
| US5750870A (en) | 1994-06-17 | 1998-05-12 | Agritope, Inc. | Plant genetic transformation methods and transgenic plants |
| JP3235934B2 (ja) | 1994-08-04 | 2001-12-04 | 三菱レイヨン株式会社 | ロドコッカス属細菌由来カナマイシン耐性遺伝子 |
| IT1275697B1 (it) | 1994-12-20 | 1997-10-17 | Olmo Giancarlo Dell | Metodo per stampare direttamente su carta microincisioni di ologrammi,chinogrammi,reticoli di diffrazione o microincisioni |
| US5733744A (en) | 1995-01-13 | 1998-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Binary BAC vector |
| WO1996029418A1 (en) | 1995-03-22 | 1996-09-26 | Novo Nordisk A/S | Introduction of dna into bacillus strains by conjugation |
| CA2216148A1 (en) | 1995-03-30 | 1996-10-03 | Toshiharu Ohba | Plant promoter and method for gene expression using said promoter |
| ES2285712T3 (es) | 1995-05-12 | 2007-11-16 | Anges Mg, Inc. | Medicamento para la terapia y profilaxis de varias enfermedades relacionadas con nf-kappa b. |
| US5837876A (en) * | 1995-07-28 | 1998-11-17 | North Carolina State University | Root cortex specific gene promoter |
| GB9517263D0 (en) | 1995-08-23 | 1995-10-25 | Cancer Res Campaign Tech | Expression systems |
| US6051409A (en) | 1995-09-25 | 2000-04-18 | Novartis Finance Corporation | Method for achieving integration of exogenous DNA delivered by non-biological means to plant cells |
| BR9610738A (pt) | 1995-09-25 | 1999-07-13 | Novartis Ag | Integração aperfeiçoada de dna exógeno transferido para as células eucarióticas |
| US6198827B1 (en) * | 1995-12-26 | 2001-03-06 | Rocktron Corporation | 5-2-5 Matrix system |
| US5693512A (en) | 1996-03-01 | 1997-12-02 | The Ohio State Research Foundation | Method for transforming plant tissue by sonication |
| EP0927044A4 (en) | 1996-04-16 | 1999-09-08 | Immusol Inc | DEFINED TARGET VIRAL VECTORS |
| US5851804A (en) | 1996-05-06 | 1998-12-22 | Apollon, Inc. | Chimeric kanamycin resistance gene |
| US5713376A (en) | 1996-05-13 | 1998-02-03 | Berger; Carl | Non-addictive tobacco products |
| EP1011729B1 (en) | 1996-05-20 | 2008-01-09 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Oligonucleotides which specifically bind retroviral nucleocapsid proteins |
| US6022863A (en) | 1996-05-21 | 2000-02-08 | Yale University | Regulation of gene expression |
| US5834236A (en) | 1996-06-27 | 1998-11-10 | The Salk Institute For Biological Studies | AATT repeat transcription enhancer element |
| US6135121A (en) | 1996-06-28 | 2000-10-24 | Regent Court Technologies | Tobacco products having reduced nitrosamine content |
| USRE38123E1 (en) | 1996-06-28 | 2003-05-27 | Regent Court Technologies, Llc. | Tobacco products having reduced nitrosamine content |
| US5845647A (en) | 1996-06-28 | 1998-12-08 | Regent Court Technologies | Tobacco and related products |
| US5803081A (en) | 1996-06-28 | 1998-09-08 | Regent Court Technologies | Tobacco and related products |
| US6037525A (en) | 1996-08-01 | 2000-03-14 | North Carolina State University | Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells |
| US5830318A (en) | 1996-10-25 | 1998-11-03 | Schweitzer-Mauduit International, Inc. | High opacity tipping paper |
| US5929306A (en) | 1996-11-15 | 1999-07-27 | University Of Kentucky Research Foundation | KYRT1, a disarmed version of a highly tumorigenic Agrobacterium tumefaciens strain identified as Chry5 |
| US6202649B1 (en) | 1996-12-02 | 2001-03-20 | Regent Court Technologies | Method of treating tobacco to reduce nitrosamine content, and products produced thereby |
| US6096947A (en) | 1997-01-14 | 2000-08-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for improving transformation efficiency |
| WO1998032843A2 (en) | 1997-01-28 | 1998-07-30 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and method for modulation of alkaloid biosynthesis and flower formation in plants |
| US6166032A (en) | 1997-02-07 | 2000-12-26 | Synapse Pharmaceuticals International, Inc. | Method for controlling tobacco use and alleviating withdrawal symptoms due to cessation of tobacco use |
| ES1036967Y (es) * | 1997-04-15 | 1998-05-01 | Techpack Espana S L | Cazoleta perfeccionada para estuche de lapiz de labios. |
| US6163521A (en) * | 1997-04-16 | 2000-12-19 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Disk having read-only and read-write areas |
| US6020989A (en) * | 1997-05-14 | 2000-02-01 | Affinity Co., Ltd. | Laminated bodies and windows using them |
| US6586661B1 (en) | 1997-06-12 | 2003-07-01 | North Carolina State University | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression by transformation with a tobacco quinolate phosphoribosyl transferase nucleic acid |
| AR015873A1 (es) | 1997-06-13 | 2001-05-30 | Shell Int Research | Un proceso para producir material vegetal modificado geneticamente que comprende una o mas secuencias de adn de interes establemente incorporadas |
| US6020969A (en) | 1997-07-11 | 2000-02-01 | Philip Morris Incorporated | Cigarette making machine including band inspection |
| US6391547B1 (en) | 1997-09-09 | 2002-05-21 | Center For The Application Of Molecular Biology To International Agriculture | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| US6641996B1 (en) | 1997-09-09 | 2003-11-04 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| CA2301707A1 (en) | 1997-08-25 | 1999-03-04 | Nunhems Zaden B.V. | Improved agrobacterium-mediated transformation of plants |
| ZA988332B (en) | 1997-09-12 | 1999-03-23 | Performance Plants Inc | In planta transformation of plants |
| CA2248622A1 (en) | 1997-09-23 | 1999-03-23 | Joe Celeste | Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues |
| JP2001518520A (ja) | 1997-10-03 | 2001-10-16 | キャリー メディカル コーポレイション | ニコチンレセプターアンタゴニストおよび抗抑うつ薬または抗不安薬を含有するニコチン嗜癖を治療する組成物 |
| US6077992A (en) | 1997-10-24 | 2000-06-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Binary viral expression system in plants |
| WO1999025821A1 (en) | 1997-11-18 | 1999-05-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for genetic modification of plants |
| US6060310A (en) | 1997-11-24 | 2000-05-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Transcription factor decoy and tumor growth inhibitor |
| US6153811A (en) | 1997-12-22 | 2000-11-28 | Dekalb Genetics Corporation | Method for reduction of transgene copy number |
| US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
| US6265538B1 (en) * | 1998-02-27 | 2001-07-24 | The Regents Of The University Of California | Inhibitor of the inflammatory response induced by the TNFA and IL-1 |
| CN101818145A (zh) | 1998-03-20 | 2010-09-01 | 联邦科学和工业研究组织 | 控制基因表达 |
| JP3444191B2 (ja) | 1998-03-31 | 2003-09-08 | 日本製紙株式会社 | フェニルプロパノイド生合成経路を制御する転写因子 |
| CN1202246C (zh) | 1998-04-08 | 2005-05-18 | 联邦科学和工业研究组织 | 获得修饰表型的方法和措施 |
| US6136799A (en) | 1998-04-08 | 2000-10-24 | Abbott Laboratories | Cosolvent formulations |
| US5938017A (en) | 1998-05-04 | 1999-08-17 | Wik; Dennis O. | Article for assisting persons to quit smoking and method for same |
| AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
| JP2002516869A (ja) | 1998-06-05 | 2002-06-11 | レジェンド コート テクノロジーズ | モノアミンオキシダーゼ（ｍａｏ）阻害剤とその使用 |
| US6271031B1 (en) | 1998-08-12 | 2001-08-07 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Quinolinate metabolism enzymes |
| AU5796099A (en) | 1998-08-31 | 2000-03-21 | Monsanto Company | A new method of identifying non-host plant disease resistance genes |
| CA2344700C (en) | 1998-10-01 | 2005-03-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method of plant transformation |
| DE19847767A1 (de) | 1998-10-16 | 2000-04-20 | Decoufle Sarl | Anordnung zum Zuführen von fließfähiger Druckfarbe zu einem Druckwerk für einen Zigarettenpapierstreifen |
| DE19852757A1 (de) | 1998-11-16 | 2000-05-18 | Eth Zuerich Zuerich | Promotoren zur Genexpression in Wurzeln von Pflanzen |
| AU776046B2 (en) | 1998-12-22 | 2004-08-26 | Dow Agrosciences Llc | Transgenic plants and methods for production thereof |
| JP2002533090A (ja) | 1998-12-23 | 2002-10-08 | ザ、サミュアル、ラバツ、ノゥブル、ファウンデイシャン、インク | 植物形質転換法 |
| HU228627B1 (hu) | 1999-04-19 | 2013-04-29 | Rhobio | Növényi transzformációs eljárás |
| AU4991500A (en) | 1999-05-06 | 2000-11-21 | Michael Timko | Regulation of gene expression in tobacco for manipulation of plant growth and secondary metabolism |
| US6603061B1 (en) | 1999-07-29 | 2003-08-05 | Monsanto Company | Agrobacterium-mediated plant transformation method |
| US6314964B1 (en) | 1999-09-15 | 2001-11-13 | Schweitzer-Mauduit International, Inc. | Cigarette paper containing carbon fibers for improved ash characteristics |
| ATE538205T1 (de) | 1999-11-29 | 2012-01-15 | Midwest Oilseeds Inc | Verfahren, medien und vorrichtung zur einführung von molekülen in pflanzenzellen und bakterien mittels aerosolstrahlen |
| ATE447036T1 (de) | 1999-12-16 | 2009-11-15 | Cropdesign Nv | Optimisierter t-dna transfer und entsprechende vektoren |
| AU2625501A (en) | 1999-12-30 | 2001-07-16 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Compositions and methods for gene silencing |
| WO2001051630A1 (en) | 2000-01-07 | 2001-07-19 | Baylor University | Antisense compositions and methods |
| EP1272630A2 (en) | 2000-03-16 | 2003-01-08 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
| AU2001253255A1 (en) | 2000-04-07 | 2001-10-23 | Large Scale Biology Corporation | Compositions and methods for inhibiting gene expression |
| WO2002002807A2 (en) | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Epigenomics Ag | Diagnosis of diseases associated with cell signalling |
| EP1724355A3 (en) | 2000-08-30 | 2007-05-23 | North Carolina State University | Transgenic plants containing molecular decoys that alter protein content therein |
| JP2004533807A (ja) | 2000-11-07 | 2004-11-11 | ノース・キャロライナ・ステイト・ユニヴァーシティ | プトレッシン−ｎ−メチルトランスフェラーゼプロモーター |
| CN1288248C (zh) | 2001-06-06 | 2006-12-06 | 二十二世纪有限责任公司 | 烟草生物质的用途 |
| US20060157072A1 (en) | 2001-06-08 | 2006-07-20 | Anthony Albino | Method of reducing the harmful effects of orally or transdermally delivered nicotine |
| CA2449920A1 (en) | 2001-06-08 | 2002-12-19 | Vector Tobacco Ltd. | Modifying nicotine and nitrosamine levels in tobacco |
| US6557560B2 (en) | 2001-06-18 | 2003-05-06 | Ctc Canada Inc. | Cigarette making machine |
| AU2004266694A1 (en) | 2003-08-19 | 2005-03-03 | 22Nd Century Limited, Llc | Reduced-exposure tobacco products |
| KR101413122B1 (ko) | 2005-02-28 | 2014-07-18 | 22엔디 센츄리 리미티드, 엘엘씨 | 식물의 니코틴 알칼로이드 수준의 감소 |
| CA2656430C (en) | 2006-06-19 | 2014-08-05 | Jonathan E. Page | Nucleic acid encoding n-methylputrescine oxidase and uses thereof |
| BRPI0717355B1 (pt) | 2006-10-13 | 2018-01-16 | North Carolina State University | Método para obtenção de uma planta transgênica de nicotina, método para obtenção de uma semente; construto de ácido nucléico recombinante; método de redução da conversão de nicotina em nornicotina em uma planta de nicotina |
-
1998
- 1998-02-10 US US09/021,286 patent/US6586661B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 WO PCT/US1998/011893 patent/WO1998056923A1/en not_active Ceased
- 1998-06-10 CZ CZ0367799A patent/CZ297379B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 EA EA200000007A patent/EA004652B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 IL IL13218498A patent/IL132184A0/xx unknown
- 1998-06-10 HU HU0003767A patent/HU225888B1/hu unknown
- 1998-06-10 JP JP50307599A patent/JP4095678B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 EA EA200400186A patent/EA009898B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 PT PT98926456T patent/PT991766E/pt unknown
- 1998-06-10 GE GEAP19985122A patent/GEP20032871B/en unknown
- 1998-06-10 TR TR1999/02728T patent/TR199902728T2/xx unknown
- 1998-06-10 NZ NZ500963A patent/NZ500963A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 AT AT98926456T patent/ATE262039T1/de active
- 1998-06-10 CN CNB988053705A patent/CN100482799C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 CA CA002484366A patent/CA2484366A1/en not_active Abandoned
- 1998-06-10 ID IDW991260A patent/ID29311A/id unknown
- 1998-06-10 EE EEP199900575A patent/EE04595B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 SI SI9820033A patent/SI20215B/sl not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 RS YUP-648/99A patent/RS49677B/sr unknown
- 1998-06-10 PL PL337442A patent/PL201266B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 EP EP04004192A patent/EP1457563B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 EP EP98926456A patent/EP0991766B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 CA CA2287776A patent/CA2287776C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 DE DE69822463T patent/DE69822463T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 CN CNB2004100641115A patent/CN1304576C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 EP EP04004191A patent/EP1457562B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 DE DE0991766T patent/DE991766T1/de active Pending
- 1998-06-10 ES ES98926456T patent/ES2154624T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-10 SK SK1618-99A patent/SK161899A3/sk unknown
- 1998-06-10 DK DK98926456T patent/DK0991766T3/da active
- 1998-06-10 RO RO99-01306A patent/RO121968B1/ro unknown
- 1998-06-10 BR BRPI9810870-0A patent/BRPI9810870B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-10 AP APAP/P/1999/001680A patent/AP1169A/en active
- 1998-06-10 AU AU78291/98A patent/AU748514B2/en not_active Expired
- 1998-06-10 KR KR1019997011675A patent/KR100365969B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1998-10-06 UA UA99126735A patent/UA72187C2/uk unknown
-
1999
- 1999-10-03 IL IL132184A patent/IL132184A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-29 US US09/431,976 patent/US6423520B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-16 BG BG103886A patent/BG64319B1/bg unknown
- 1999-11-24 OA OA9900257A patent/OA11219A/en unknown
- 1999-11-26 CU CU1999206A patent/CU23174A3/es unknown
- 1999-12-10 LT LT99-142A patent/LT4706B/lt not_active IP Right Cessation
- 1999-12-13 NO NO19996169A patent/NO324872B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-12-13 LV LVP-99-174A patent/LV12507B/en unknown
-
2001
- 2001-06-29 GR GR20010300003T patent/GR20010300003T1/el unknown
- 2001-09-24 US US09/963,340 patent/US7605308B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-01-31 US US10/356,076 patent/US7304220B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-30 US US10/748,789 patent/US7408098B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-05-25 JP JP2004155034A patent/JP4288206B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-05-03 US US11/416,887 patent/US7795509B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-03 US US11/416,574 patent/US7645925B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-03 US US11/416,568 patent/US7425670B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-05-04 US US11/417,682 patent/US20070011774A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-01-08 JP JP2008001397A patent/JP4459271B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2008-06-16 IL IL192232A patent/IL192232A0/en unknown
-
2009
- 2009-02-27 JP JP2009046336A patent/JP2009112316A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993005646A1 (en) * | 1991-09-13 | 1993-04-01 | Technology Management Services, S.A. | Reduction of nicotine levels in tobacco |
| WO1994028142A1 (en) * | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Philip Morris Products Inc. | Putrescine n-methyltransferase, recombinant dna molecules encoding putrescine n-methyltransferase, and transgenic tobacco plants with decreased alkaloid content |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Conkling, M.A. , Cheng, C.L. , Yamamoto, Y.T. and Goodman, H.M.: Isolation of transcriptionally regulated root-specific genes from tobacco. Plant Physiol., 93, 1203-1211,1990 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0991766B1 (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| AU2004203879B2 (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| AU2002300895B2 (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| HK1027379B (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression | |
| HK1069411B (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression in tobacco plants | |
| HK1065066B (en) | Increase of quinolate phosphoribosyl transferase expression in plants | |
| MXPA99011625A (en) | Regulation of quinolate phosphoribosyl transferase expression |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20180610 |