CZ304591B6 - Fotosenzibilizátor a způsob jeho přípravy - Google Patents
Fotosenzibilizátor a způsob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304591B6 CZ304591B6 CZ2003-2940A CZ20032940A CZ304591B6 CZ 304591 B6 CZ304591 B6 CZ 304591B6 CZ 20032940 A CZ20032940 A CZ 20032940A CZ 304591 B6 CZ304591 B6 CZ 304591B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- solution
- chlorine
- photosensitizer
- added
- filtered
- Prior art date
Links
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 title claims abstract description 169
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 32
- BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N purpurin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1 BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 50
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 15
- -1 alkali metal salt Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 235000016425 Arthrospira platensis Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 240000002900 Arthrospira platensis Species 0.000 claims abstract description 5
- SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N chlorin Chemical compound C\1=C/2\N/C(=C\C3=N/C(=C\C=4NC(/C=C\5/C=CC/1=N/5)=CC=4)/C=C3)/CC\2 SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229940082787 spirulina Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 108
- 235000017168 chlorine Nutrition 0.000 claims description 87
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 79
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 76
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 76
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 73
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 63
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 26
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 17
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 16
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 125000001309 chloro group Chemical class Cl* 0.000 claims description 13
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 claims description 11
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 10
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 claims description 10
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 6
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 4
- SLMWNIYULHWWHD-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-one;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)=O.CCCCCC SLMWNIYULHWWHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- OYINILBBZAQBEV-UWJYYQICSA-N (17s,18s)-18-(2-carboxyethyl)-20-(carboxymethyl)-12-ethenyl-7-ethyl-3,8,13,17-tetramethyl-17,18,22,23-tetrahydroporphyrin-2-carboxylic acid Chemical compound N1C2=C(C)C(C=C)=C1C=C(N1)C(C)=C(CC)C1=CC(C(C)=C1C(O)=O)=NC1=C(CC(O)=O)C([C@@H](CCC(O)=O)[C@@H]1C)=NC1=C2 OYINILBBZAQBEV-UWJYYQICSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001189 phytyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@](C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@](C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 claims 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims 1
- COWCVGUYIYQWPC-MRZQNBKKSA-N purpurin 18 Chemical compound N1C(C=C2C(=C(CC)C(C=C3C(=C4C(=C5C(=O)OC4=O)N3)C)=N2)C)=C(C=C)C(C)=C1C=C1C(C)C(CCC(=O)OCC(/C)=C/CCC(C)CCCC(C)CCCC(C)CC)C5=N1 COWCVGUYIYQWPC-MRZQNBKKSA-N 0.000 abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 43
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 25
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 25
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 25
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 14
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 10
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 10
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 9
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 9
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N n-Octanol Natural products CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-[2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl]amino]acetate Chemical compound C=1C=CC=C(OC(C)=O)C=1CN(CC(=O)OC)CCN(CC(=O)OC)CC1=CC=CC=C1OC(C)=O OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 4
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 4
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 4
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 3
- YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N Diazomethane Chemical compound C=[N+]=[N-] YXHKONLOYHBTNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 3
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 3
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- NSFSLUUZQIAOOX-LDCXZXNSSA-N pheophorbide a Chemical compound N1C(C=C2[C@H]([C@H](CCC(O)=O)C(=N2)C2=C3NC(=C4)C(C)=C3C(=O)[C@@H]2C(=O)OC)C)=C(C)C(C=C)=C1C=C1C(C)=C(CC)C4=N1 NSFSLUUZQIAOOX-LDCXZXNSSA-N 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036326 tumor accumulation Effects 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 1-[(2r,4s,5s)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H]([14CH2]O)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 0.000 description 2
- 206010051814 Eschar Diseases 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 150000004035 chlorins Chemical class 0.000 description 2
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000333 eschar Toxicity 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 150000002678 macrocyclic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- CWPDRBAWZYJDEH-YFKPBYRVSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoyl chloride Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(Cl)=O CWPDRBAWZYJDEH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000001707 (E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-en-1-ol Substances 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NZDXSXLYLMHYJA-UHFFFAOYSA-M 4-[(1,3-dimethylimidazol-1-ium-2-yl)diazenyl]-n,n-dimethylaniline;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=[N+](C)C=CN1C NZDXSXLYLMHYJA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- HWOYUZFPNXLWQP-UHFFFAOYSA-N Cc1c2ccc(n2)c(C)c2ccc([nH]2)c(C)c2ccc(n2)c(C)c2ccc1[nH]2 Chemical compound Cc1c2ccc(n2)c(C)c2ccc([nH]2)c(C)c2ccc(n2)c(C)c2ccc1[nH]2 HWOYUZFPNXLWQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001077673 Mylon Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N Phytol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C=CO BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001609 Poly(3,4-ethylenedioxythiophene) Polymers 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofarnesol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)=CCO HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZNMXOKPQPNMY-UHFFFAOYSA-N [Mg].[Cl] Chemical class [Mg].[Cl] QGZNMXOKPQPNMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N all-rac-phytol Natural products CC(C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)=CCO BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N 0.000 description 1
- PSNPEOOEWZZFPJ-UHFFFAOYSA-N alumane;yttrium Chemical compound [AlH3].[Y] PSNPEOOEWZZFPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001804 chlorine Chemical class 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- BGTOWKSIORTVQH-HOSYLAQJSA-N cyclopentanone Chemical group O=[13C]1CCCC1 BGTOWKSIORTVQH-HOSYLAQJSA-N 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- LGAILEFNHXWAJP-BMEPFDOTSA-N macrocycle Chemical group N([C@H]1[C@@H](C)CC)C(=O)C(N=2)=CSC=2CNC(=O)C(=C(O2)C)N=C2[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)C2=CSC1=N2 LGAILEFNHXWAJP-BMEPFDOTSA-N 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N n-propyl alcohol Natural products CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- CQIKWXUXPNUNDV-AXRVZGOCSA-N pheophytin a Chemical compound N1C(C=C2[C@H]([C@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)C(=N2)C2=C3NC(=C4)C(C)=C3C(=O)[C@@H]2C(=O)OC)C)=C(C)C(C=C)=C1C=C1C(C)=C(CC)C4=N1 CQIKWXUXPNUNDV-AXRVZGOCSA-N 0.000 description 1
- 230000002186 photoactivation Effects 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000017983 photosensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000434 photosensitization Toxicity 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N phytol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC\C(C)=C\CO BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000018040 scab formation Effects 0.000 description 1
- 206010039667 schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydroxy-[[phosphonatomethyl(phosphonomethyl)amino]methyl]phosphinate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)(=O)CN(CP(O)([O-])=O)CP([O-])([O-])=O SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/409—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having four such rings, e.g. porphine derivatives, bilirubin, biliverdine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Light Receiving Elements (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Fotosenzibilizátory ve formě směsi obsahující chlorin ve formě soli alkalického kovu. Chlorin obsahuje 80 až 90 % chlorinu e.sub.6.n., 5 až 20 % purpurinu 5 a do zbytku purpurin 18 - chlorin p.sub.6.n.. Způsob výroby uvedeného fotosenzibilizátoru z Spirulina biomasy.
Description
Fotosenzibilizátor a způsob jeho přípravy
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká medicíny, zvláště oblasti fotodynamické terapie (PDT) s použitím biologicky aktivních sloučenin.
Dosavadní stav techniky
Fotosenzibilizátor (PS) jsou používané jako terapeutická činidla při PDT a jako fluorescentní značkovače při fotodynamických diagnostikách (PDD).
Tetrasodná sůl mono-L-aspartilchlorinu „Npe6“ je známá jako PS (patent US 4 977 177):
Tento PS je účinný při PDT.
Jeho nevýhody jsou: náročnost výroby, příliš velká rychlost akumulace v nádoru a dynamika exkrece, která snižuje dobu účinné expozice nádoru a následně nízká akumulace v maligním útvaru (nádoru) kvůli vysoké hydrofilitě, což aktivuje jen několik možných způsobů ničení nádoru při PDT způsobu, jmenovitě jde jen o účinek na cévy.
Trisodná sůl lysilchlorinu p6 „LCP“ je známá jako PS (patent US 5 330 741):
- 1 CZ 304591 B6
Tento PS je účinný při PDT.
Jeho nevýhody jsou: náročnost výroby a skutečnost, že se jedná o směs dvou monoamidů na 5 pozici 13 a 15 v poměru 10:1, což může vést k nejasné biologické distribuci a vylučování.
Sodná sůl feoforbidu a je známá jako PS (patent US 5 378 835):
Tento PS je přednostně akumulován v nádorech a je účinný jako PDT.
Jeho nevýhoda je náklonnost k oxidaci (chemicky stabilní) při skladování jako roztok, nedostatečná rozpustnost ve vodě po skladování ve formě pevné látky, hydrofobnost a následně pomalé vylučování z organizmu, což vede k prodloužené fotosensitivitě kůže.
Chlorin e6 deriváty jsou také známé jako PS (patent US 5 002 962):
-2CZ 304591 B6
kde R je hydrofobní uhlovodíkový substituent, nasycený nebo nenasycený, přímý nebo větvený, obsahující 4 až 25 atomů uhlíku.
PS, kde R je hexyl, je „tropič“ pro maligní nádory a je účinné činidlo pro PDT.
Jeho nevýhody jsou: náročnost výroby a čištění, vysoká hydrofobnost a následně pomalá akumulace v nádoru a nízká stálost vodného roztoku medicínských přípravků při skladování.
Je známý způsob přípravy PS, jmenovitě směs chlorinůjako solí alkalických kovů, určených pro medicínskou praxi. Tento způsob obsahuje následující kroky: rostlinná biomasa je extrahována směsí 2:1 až 8:1 uhlovodíku obsahujícího 6 až 12 atomů uhlíku a alkoholu obsahujícího 2 až 10 atomů uhlíku, výsledný chlorofylový roztok je odpařován při atmosférickém tlaku, je přidán alkohol s menším počtem atomů uhlíku než alkohol použitý pro extrakci, uhlovodík je úplně oddestilován za atmosférického tlaku, je pomalu (postupně) přidán zásaditý roztok alkoholu při teplotě varu alkoholu, ale menší než 120 °C, dokud pH je 11,5 až 11,8, směs je ochlazena, inkubována 4 hodiny, filtrována, extrahována uhlovodíkem obsahujícím 6 až 12 atomů uhlíku, alkoholová fáze obsahující hořečnaté komplexy chlorinů je oddělena, alkohol je odpařen za atmosférického tlaku, je přidána kyselina chlorovodíková pokud pH dosáhne 3,5, směs je inkubována do konce srážení chlorinů, precipitát je rozpuštěn v methanolu, je přidán alkalický roztok alkoholu na pH 8,5, PS roztok je filtrován vakuově odpařen (patent US 3 102 891).
Nevýhody tohoto způsobu jsou: použití vysoké teploty při odstranění rozpouštědla z extraktu, použití alkoholů, hlavně methanolu, což vede k alomerizaci E exocyklů a vzniku násobných oxidačních produktů feofytinů a feoforbidů (K. Hyvarinem, J. Helaja, P. Kurchen, I. Kipelainen, Ρ. H. Hynninen. H-l a C-13 NMR spektra methanolových alomerizačních produktů 13(2)—(R)— chlorofylu a. Magnetic Resonance in Chemistry 33, 8, 646 až 656 (1996)), což vede ke komplexní směsi, jejíž složení je nedefinované a těžko reprodukovatelné.
Známý způsob výroby PS, jmenovitě sodné soli chlorinů e6, obsahuje následující kroky: N roztok NaOH je přidán k roztoku chlorin-e6-trimethyletheru v tetrahydrofuranu, směs je míchána dva dny při teplotě místnosti pod dusíkem, je přidána voda ke směsi, organické rozpouštědlo je extrahováno methylenchloridem, stopy methylenchloridu jsou odstraněné probubláváním dusíku roztokem soli chlorinů e6 (patent US 5 002 962).
Nevýhody tohoto způsobu jsou: nízká dostupnost dostatečného množství počátečního chlorm-e6-trimethyletheru, dlouhá doba výroby PS z důvodu chemické inertnosti esterového radikálu na 13. pozici tetrapyrrolového makrocyklu a nestabilita medicinální formy PS při skladování jako vodný roztok z důvodu neúplné saponifikaci esterové skupiny na 13. pozici makrocyklu.
-3CZ 304591 B6
Známý způsob přípravy PS, jmenovitě „LCP“ fotosenzibilizátoru pro fotodynamickou terapii (trisodná sůl lysylchlorinu pf) zahrnuje následující kroky „biomasa“ je třikrát extrahována acetonem, filtrována nebo centrifugována, extrakt je odpařen, přidána kyselina pro odstranění hořečnatých iontů z molekuly chlorofylu a pro hydrolýzu fytylové esterové skupiny je přidáván methanol za současné esterifikace, k reakční směsi je přidána voda, derivát feoforbidu a je extrahován methylenchloridem, extrakt je neutralizován, promyt vodou, odpařen, chromatograficky čištěn přes oxid hliníku, methylfeoforbid a vykrystalizovaný ze směsi methylenchlorid - methanol reaguje se silnou anorganickou bázi v přítomnosti kyslíku v pyridinu -diethyletheru - n-propanolu, k reakční směsi je přidána voda, vodná fáze je okyselena na pH 4 „nestabilní chlorin“ je extrahován methylenchloridem, extrakt odpařen, „nestabilní chlorin“ je rozpuštěn v tetrahydrofuranu, roztok odpařen, postup je opakován, dokud se zastaví nárůst absorpce na 700 nm, výsledný purpurin 18 je rozpuštěn v tetrahydrofuranu, esterifikovaný diazomethanem, methylester purpurinu 18 je smíchán svodným roztokem lysinu v methylenchloridu v přítomnosti pyridinu, směs je míchána 12 hodin při teplotě místnosti, rozpouštědlo je odstraněno za vysokého vakua, výsledný surový produkt je čištěn na reversní fázi pomocí HPLC, rozpouštědlo je odstraněno lyoíylizací, PS je rozpuštěn v fosfátovém pufru za vzniku injekčního roztoku pro PDT, je přidán 0,lN roztok NaOH, pH je upraveno na fyziologickou hodnotu 7,35 pomocí 0,lN HCl a roztok je filtrován přes mikroporézní filtr (patent US 5 330 741).
Nevýhody tohoto způsobu jsou: nízká reprodukovatelnost, náročnost (použití vysokého vakua, krystalizace, kolonová chromatografie a HPLC, dlouhá reakční doba s lysinem), použití vysoce toxických a hořlavých činidel (diazomethan, pyridin, methanol, tetrahydrofuran, diethylether). Tyto nevýhody činí způsob nevhodný pro farmaceutický průmysl. Mimoto je výsledný ve vodě rozpustný produkt stabilní jenom 24 hodin při 4 °C v temnu ve formě vodného roztoku a v pevné formě je stabilní jenom 4 měsíce při 4 °C v temnu, zatímco podle farmakologických požadavků by měl být stabilní alespoň 6 měsíců (Leach M. W., Higgins R. J., Boggan J. E., Lee S.-J., Autry S., Smith K. M. Effectiveness of a Lysylchlorin p6/Chlorin p6 mixture in Photodynamic Therapy of the Subcutaneous 9L Glioma in the Rat. Cancer Research 1992, 52, 1235 až 1239). Dále z hlediska chemického složení tento PS představuje směs monoamidů na pozici 13 a 15 v přibližném poměru 10:1, což může vést k nejasnému biologickému rozdělení a vylučování z organismu.
Podstata vynálezu
Cílem předkládaného vynálezu je získat PS, který je charakterizován snadnou přípravou a čištěním, vyváženou hydrofilitou a hydrofóbností a následně optimální rychlosti akumulace v nádoru a vylučováním z nádoru a celého organismu, a také vysokou stabilitou medicínských vodných roztoků.
Cíl je dosažen výrobou PS, který obsahuje chlorin ve formě soli alkalického kovu, chlorin se skládá zchlorinu e6 (13-karboxy-17-[2-karboxyethyl]-15-karboxymethyl-17,18-íra«s-dihydro-3-vinyl-8-ethyl-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce I
-4CZ 304591 B6
o obsahu 80 až 90 %, purpurinu 5 (13-karboxy-17-[2-karboxyethyl]-15-fbrmyl-17,18-7ra«s dihydro-3-vinyl-8-ethyl-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce II
(Π), o obsahu 5 až 20 % a purpurinu 18-chlorinu p6 (13-karboxy-l 7-[2-karboxyethyl]-15-karboxy 17,18-/ram-dihydro-3-vinyl-8-ethyl-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce III
-5CZ 304591 B6
(ΠΙ), do chybějícího zbytku, takže uvedené složky tvoří směs, sodík a draslík může být použit jako alkalický kov.
Cílem vynálezu je také dosáhnout vysoké reprodukce způsobu výroby PS, jeho jednoduchosti, chemické stability medicínské formy PS ne menší než 1 rok, stejně jako dosáhnout maxima fyzikálně chemických a biologických vlastností PS, které určují účinnost PS při PDT a také se vyhnout použití toxických činidel.
Podstata navrhovaného způsobu výroby PS je následující: Spirulina biomasaje zpracována s acetonem, dokud se nevyextrahuje všechen chlorofyl, biomasa je filtrována nebo centrifugována, extrakt je zpracován s kyselinou, čímž se odstraní hořčík z molekuly chlorofylu, extrakt je neutralizován a vysrážený feofytin a je zfiltrován, pak hydrolyzován ve směsi kyselina chlorovodíková-aceton-hexan, 6 až 16 ml acetonu, 0,6 až 6 ml hexanu a 5 až 10 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové je použito na 1 g surového feoíytinu a, směs je zahřívána na 40 až 60 °C a míchána 20 minut až 1 hodinu, pak je přidán hexan (6 až 16 ml) a organická fáze je promyta směsi acetonu a kyseliny chlorovodíkové (2 až 10:1), vodná fáze je promyta hexanem, vodná fáze obsahující feoforbid a je neutralizována přebytkem vodného roztoku citrátu sodného (tri-, di-, mono-substituovaného), vysrážený feoforbid a je zfiltrován, promyt vodou, rekrystalizován ze směsi aceton-voda, sušen vzduchem do konstantní hmotnosti, pak rozpuštěn v acetonu, přidána silná anorganická báze ve formě vodného roztoku o koncentraci 0,005 až 1,0 %, roztok míchán při 30 až 60 °C po dobu 5 až 30 minut, přidán další objem silné anorganické báze za vzniku vodného roztoku o koncentraci 1 až 50 %, směs je zahřívána při 40 až 60 °C po dobu 20 až 90 minut, neutralizována zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, sraženina chlorinu e6 je odstraněna centrifugací, promyta destilovanou vodou až zmizí kyselá reakce, je získán 55 až 80% chlorin e6, ten je rekrystalizován z acetonu proto, aby se oddělily tetrapyrroly, chlorin e6 je zfiltrován a promyt destilovanou vodou, zahříván v utěsněné nádobě při teplotě 40 až 100 °C podobu 1 hodiny až 30 dnů, ochlazen a je přidán silný roztok báze, dokud pH není v rozmezí 7,5 až 8,5, pak je roztok upraven apyrogenní vodou pro injekční použití za vzniku roztoku fotosenzibilizátoro koncentraci 6,5 až 7,5 % hmotnostních.
Dále ve způsobu výroby PS po kroku přidání silného roztoku báze, dokud pH není v rozmezí 7,5 až 8,5, může být směs gelové filtrována za vzniku chlorinu e6 o obsahu 80 až 90 %, purpurinu 5 do 5 až 20 % a purinu 18 do zbytku, pak je přidán zředěný roztok kyselin chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, roztok je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 6,5 až 7,5 % hmotnostních, takže je získán „Kapalný extrakt chlorinů“.
-6CZ 304591 B6
Dále ve způsobu výroby PS po kroku gelové filtrace může být přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugo vána, jsou přidané pomocné látky povolené RF State Pharmacopeia, dokud pH je 7,5 až 8,5, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 0,1 až 1 % hmotnostní, pak jsou odfiltrované baktérie.
Dále ve způsobu výroby PS po kroku gelové filtrace může být přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugována, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 6,5 až 7,5 % hmotnostní, „Kapalný extrakt chlorinů“ je dispergován v gelovém substrátu podle následujícího poměru: 0,5 až 12 % hmotnostních „Kapalný extrakt chlorinů“, 5 až 20 % hmotnostních dimethylsulfoxid, zbytek voda, pomocné látky schválené od RF State Pharmacopeia a gelový substrát.
Dále ve způsobu výroby PS po kroku gelové filtrace může být přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugována, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 6,5 až 7,5 % hmotnostní, a výsledný „Kapalný extrakt chlorinů“ je rozpuštěn v dimethylsulfoxidu podle následujícího poměru: 0,5 až 12 % hmotnostních „Kapalný extrakt chlorinů“ a zbytek dimethylsulfoxid.
Tento způsob je proveden při použití standardního laboratorního vybavení: biomasa je zpracována v 10 až 501 hliníkových nádobách vybavených mechanickým míchadlem, biomasa je filtrována přes 5 až 201 „nutch“ filtry s olejovou vakuovou pumpou a vymrazovací pastí s kapalným dusíkem, biomasa je centrifugo vána v chlazené centrifuze s 41 ky větami a rotační rychlostí 6 000 ot/min, extrakt je okyselen ve skleněných 20-ti litrových nádobách, vysrážený feofytin a je filtrován přes 5 až 201 „nutch“ filtry s olejovou vakuovou pumpou a vymrazovací pastí s kapalným dusíkem, pak je hydrolyzován v 0,1 až 0,51 baňce s kulatým dnem a třemi hrdly vybavené míchadlem, zpětným chladičem a dávkovacím otvorem s uzávěrem, roztoky jsou promývány v 21 nálevkách, neutralizovány v 2 až 41 chemických baňkách, feoforbid a je filtrován přes 5 až 201 „nutch“ filtry s olejovou vakuovou pumpou a vymrazovací pastí s kapalným dusíkem, rekiystalizován v 0,25 až 11 chemických baňkách s plochým dnem, rozpuštěn v acetonu a podroben reakci se silnou anorganickou bází v 0,5 až 2,01 baňkách s kulatým dnem a třemi hrdly vybavené míchadlem, zpětným chladičem a dávkovacím otvorem s uzávěrem, sraženina chlorinů e(, je centrifugována v chlazené centrifuze s čtyřmi 0,51 kyvetami a rotační rychlostí 6000 ot/min, chlorinů e6 je rekrystalizován v 2 až 51 chemických baňkách s plochým dnem, filtrován přes 1 až 21 „nutch“ filtry s olejovou vakuovou pumpou a vymrazovací pastí s kapalným dusíkem, zahříván v 0,05 až 0,11 baňkách s kulatým dnem, podroben reakci se silnou anorganickou bází a upraven v 0,1 až 1,01 chemických kádinkách s použitím standardního pH-metru a spektrofotometru, směs je gelové filtrována na koloně o průměru 50 až 10 mm a o výšce 100 až 150 mm, bakterie jsou odfiltrovány přes standardní 0,22 pm mikroporézní filtr typu Millipore, „Kapalný extrakt chlorinů“ je dispergován v gelovém substrátu za použití nožového nebo kulového homogenizátoru, dále jsou použity pro přípravu vzorků a roztoků 0,01 až 101 kónické baňky s uzávěrem, 0,005 až 21 válce, 0,05 až 21 kádinky, 201 láhve, váhy s rozsahem 1 až 1000 g a magnetické míchadla, 51 buňky s kulatým dnem s termometrem a přímým vodním chladičem jsou používány pro regeneraci acetonu a hexanu, rotační vakuová odparka je používána pro rychlé odstranění rozpouštědel při nízké teplotě.
Podle způsobu výroby PS je koncentrovaný roztok kyseliny chlorovodíkové považován jako nasycený vodný roztok chlorovodíku při teplotě 20 °C, který obyčejně obsahuje 36 až 37 % chlorovodíku.
Při kroku přechodu feofytinu a na feoforbid a je rozsah objemu hexanu a acetonu (6 až 16 ml acetonu a 0,6 až 6 ml hexanu) vysvětlen tím, že při použití menších objemů není dosaženo úplného rozpuštění feoíytinu a jestliže jsou objemy větší, roztok není dostatečně koncentrovaný
-7CZ 304591 B6 pro rychlou hydrolýzu. Rozsah objemu kyseliny chlorovodíkové (5 až 10 ml) je vysvětlen tím, že při použití menších objemů klesá výtěžek feoforbidu a a jestliže je objem větší, reakční selektivita klesá z důvodu vzniku současného produktu pyrofeoforbidu a. Teplotní rozsah 40 až 60 °C je vysvětlen tím, že při menší době klesá výtěžek feoforbidu a a jestliže je teplota větší, reakční selektivita klesá z důvodu vzniku současného produktu pyrofeoforbidu a. Reakční doba 20 min až 1 h je vysvětlena tím, že při menší době klesá výtěžek feoforbidu a a jestliže je reakční doba větší, reakční selektivita klesá z důvodu vzniku současného produktu pyrofeoforbidu a. Objem přidávaného hexanu (6 až 16 ml) je vysvětlen tím, že menší objem je nedostatečný pro oddělení fytolu z reakční směsi a použití většího množství hexanu není racionální.
Při kroku čištění feoforbidu oje organická fáze promyta směsí acetonu a koncentrované kyseliny chlorovodíkové vpoměru2:l až 10:1. Jestliže je poměr menší než 2:1 tvoří se vločkovitá sraženina těžce odstranitelná z vodné fáze obsahující cílový feoforbid a. Jestliže je poměr větší než 10:1 vodná fáze se stává přesycenou acetonem a přechází do ní příměsi zhexanové fáze, obsahující cílový feoforbid a.
Při kroku přechodu feofytinu a na chlorin e6 je koncentrace silné báze v rozmezí 0,05 až 1,00%, nižší hodnota je minimum pro otevření cyklopentanonového kruhu feoforbidu a (kruh) a při vyšší koncentraci než 1% probíhá alomerizace (oxidace) E kruhu za vzniku „nestabilního chlorinu“ místo požadovaného chlorinu ee, a následným vznikem purpurinu 18 a dále chlorinu p6.
Podle způsobu se přidává další objem silné anorganické báze ve formě vodného roztoku o koncentraci 1 až 50%. Jestliže je koncentrace menší než 1%, dochází k nekompletní saponifikací esterové skupiny na pozici 13 nebo 15. Jestliže je koncentrace větší než 50%, mohou se v některých případech otevřít tetrapyrrolové makrocykly.
Pak je reakční směs míchána při 30 až 60 °C po dobu 5 až 30 min, menší teplota podporuje alomerizační reakci na E kruhu a vyšší teplota dekompozici chlorinu ¢( na chlorin e4. Při přídavku dalšího objemu silné anorganické báze v teplotním rozmezí 40 až 60 °C a době 20 až 90 min, kratší doba a teplota neumožní hydrolýzu esteru v pozici 15 a při vyšší teplotě a delším času vzniká více chlorinu e4.
Když chlorin e6 přechází do „Kapalného extraktu chlorinů“, nastává oxidace a následný termolytický proces dehydratace a dekarboxylace PS s oxidací methylenové skupiny v pozici 15 v puri-
Když chlorin e6 přechází do „Kapalného extraktu chlorinů“, je použití teploty nižší než 40 °C neekonomické. Použití teploty vyšší než 100 °C vede ke zvýšení rozkladu.
Trvání reakce menší než 1 hodiny vyžaduje teplotu nad 100 °C nebo vede k látce s nižší biologickou aktivitou.
-8CZ 304591 B6
Trvání reakce delší než 30 dní je doprovázeno ireverzibilní změnou (rozkladem) látky.
Optimální reakční teplota je 45 až 70 °C (obr. 1).
Optimální reakční doba je 2 až 9 dní při 70 °C (obr. 2) nebo 1 až 48 hodin při 100 °C (obr. 3), vedoucí k 5 až 20 % purpurinu 5 v příměsi.
Směs obsahující 5 až 20 % purpurinu 5 až 80 až 95 % chlorinu e6 v aktivním činidle (PS) je vhodná pro výrobu medicínské ve vodě rozpustné injekční formy. Jestliže směs obsahuje více než 20 % purpurinu 5, rozpustnost ve vodě je horší, nepříjemně ovlivňuje stabilitu medicínských forem při skladování a zhoršuje možnost filtrace přes mikroporézní filtry. Poslední vlastnost je nutná pro sterilizaci medicínských forem, protože tetrapyrrolové medicínské formy nemohou být sterilizované zahříváním nebo UV zářením kvůli nežádoucím chemickým změnám.
až 95 % chlorinu e6 ve směsi je nutné pro udržení purpurinu 5 ve formě rozpustné ve vodě.
Rozsah pH vychází z toho, že jeho nižší hodnota - pH 7,5-je nižší limit rozpustnosti chlorinů ve vodě při koncentraci vhodné pro farmaceutické použití, bez přídavku rozpouštěcích činidel. Horní limit - pH 8,5 - je horní limit biologické tolerance hydroxidových iontů [OH-].
Rozsah koncentrace chlorinu e6 vychází z použití technologických způsobů centrifugace nebo filtrace při oddělení sraženiny chlorinu ee, tyto způsoby získají produkt v tomto koncentračním rozmezí.
Přehled obrázků na výkresech
Vynález je představován obrázky, kde obr. 1 se týká způsobu a ukazuje tvorbu purpurinu 5 v závislosti na teplotě při inkubaci 30 dní, obr. 2 ukazuje závislost obsahu purpurinu 2 na době inkubace při teplotě 70 °C, obr. 3 ukazuje závislost obsahu purpurinu 5 na době inkubace při teplotě 100 °C, obr. 4 ukazuje farmakokinetiku „Kapalného extraktu chlorinů“ použitých jako medicínský přípravek „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání („Photochlorin“) na myších s nádorem při intravenózním podání při dávce 20 mg/kg, obr. 5a ukazuje přítomnost metabolitu chlorinu e6 (vzorec I), jmenovitě purpurinu 5 (vzorec II), v krvi a křivka označena jako „1“ odpovídá PS v 0,01M borátovém pufru o pH 9,18 a křivka označená jako „2“ odpovídá PS v krvi. obr. 5b potvrzuje metabolismus chlorinu e6 (vzorec I) na purpurinu 5 (vzorec II) v játrech, obr. 6 ukazuje PMR spektrum „Kapalného extraktu chlorinů“ získaného v příkladu 2, obr. 7 ukazuje hmotnostní spektrum „Kapalného extraktu chlorinů“ získaného v příkladu 2, spektrum bylo naměřeno v ethanolu při koncentraci 5 mkg/ml, obr. 9 ukazuje PMR spektrum chlorinu e6, obr. 10 ukazuje hmotnostní spektrum chlorinu e6, obr. 11 ukazuje viditelné absorpční spektrum chlorinu e6, spektrum bylo naměřeno v ethanolu při koncentraci chlorinu e6 15 mkg/ml (Sore pruh - 5 mkg/ml), obr. 12 ukazuje PMR spektrum purpurinu 5, obr. 13 ukazuje hmotnostní spektrum purpurinu 5, obr. 14 ukazuje viditelné absorpční spektrum purpurinu 5, spektrum bylo naměřeno v ethanolu při koncentraci purpurinu 5 15 mkg/ml (Sore pruh - 5 mkg/ml), obr. 15 ukazuje PMR spektrum dimethylesteru purpurinu 5, obr. 16 ukazuje hmotnostní spektrum dimethylesteru purpurinu 5, obr. 17 ukazuje viditelné absorpční spektrum dimethylesteru purpurinu 5, spektrum bylo naměřeno v ethanolu při koncentraci dimethylesteru purpurinu 5 15 mkg/ml („Sore“ pruh - 5 mkg/ml).
PS je znázorněn v příkladu 1, příklady provedení způsobů jsou uvedené v příkladu 2,3 speciální případy provedení jsou znázorněné v příkladech 4 až 9.
Chemicky PS obsahuje tři cyklické pyrroly přírodního chlorinu (s hydrogenovaným D kruhem) - chlorin e6 (vzorec I), purpurin 5 (vzorec II, příklad 10) a purpurin 18, který postupně se přeměňuje na chlorin p6 v alkalickém prostředí (při skladování) (vzorec III).
-9CZ 304591 B6
Fyzikálně chemicky PS má schopnost absorbovat světlo ve viditelném spektru, což vede k PS fotoaktivaci a následné relaxaci excitovaného stavu s přeměnou energie na molekulární kyslík a organické substráty rozpuštěné v tkáních. Tento přenos vede k oxidaci a vzniku volných radikálů v biologických tkáních a jejich poškození a následné destrukci (nekrózy). Nejvíce perforovaná excitační délka je dlouhovlnná délka (tab. 1), protože penetrační energie světla v biologických tkáních vzrůstá s rostoucí vlnovou délkou. Proto je PS schopný poškodit biologický objekt do hloubky 10 mm po excitaci světlem o vlnové délce 654 až 670 nm.
Farmaceuticky je PS „Kapalný extrakt chlorinů“ (extrakty jsou považované za kapalné, jestliže účinná koncentrace činidla je menší než 20 %). Daný přípravek je považovaný za extrakt proto, že je nutné jej extrahovat z biomasy za použití organických rozpouštědel.
Tabulka 1
Pozice absorpčních maxim a molekulární extinkce absorpčních hodnot pro dlouhovlnné světlo „Kapalného extraktu chlorinů“ v různých mediích.
| PS | \nax> nm e, MÝní1 (0,01M borátový pufr, pH9,18) | Amax, nm e, (0,01M borátový pufr s 1% lidským sérovým albuminem, pH 7,2) | \nax, nm e, M^cnť1 (ethanol) |
| „Kapalný extrakt chlorinů“ | 654,5 (28270) | 662(34200) | 662(34230) |
Sloučenina vzorce II má schopnost se akumulovat selektivně v maligní neoplazmě a infekčních ohniskách, ale je slabě rozpustná ve vodě a sloučenina vzorce I spolu s uvedenou fotodynamickou účinností je rozpouštěcí činidlo pro sloučeninu vzorce II.
Farmakologicky (obr. 4, příklad 11) je dosaženo unikátních farmakokinetických parametrů tak, že v organismu se PS vzorce I pomalu mění na PS vzorce II, tento proces drží koncentraci PS vzorce II na konstantní hladině od okamžiku zavedení do organismu do momentu exkrece z nádoru, během doby dostatečné pro účinnou PDT. Po zavedení uvedeného PS do organismu myší s nádorem přechází do krevního řečiště, a kvůli krevnímu oběhu hlavně pro sloučeninu vzorce I je dosažena vysoká a stabilní PS koncentrace 0,27 až 0,32 μΜ, dostatečná pro účinnou PDT v rozmezí 0,5 až 4 hodiny, během prvních 3 hodin po podání v okolí nádoru. Během této doby je dosažen vysoký konstrukt kvůli přítomnosti 5 až 20 % sloučeniny vzorce II v přípravku, tato sloučenina má schopnost akumulace v nádoru s vysokým kontrastem, maximum akumulace spadá do okamžiku 3 hodin po PS zavedení do organismu zvířete (index kontrastuje 14,5 pro kůži a 2,9 pro svaly). Během této doby sloučenina vzorce I se mění na sloučeninu vzorce II v organismu, poskytující vysokou stabilní PS koncentraci v okolí nádoru v intervalu 3 až 5 hodin po injekčním podání, tato koncentrace se postupně zmenšuje, zůstává terapeuticky účinná 18 hodin po injekčním podání. Pak sloučenina vzorce II disociuje v organismu na netoxické produkty, které jsou vyloučené játry.
Transformace chlorinů eň vzorce 1 na purpurin 5 vzorce II je potvrzena fluorescenčními spektry vzorků orgánů a tkání experimentálních zvířat, (obr. 5). Při přidání „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání“ („Photochlorin“) do krevního homogenátu (obr. 5a, (1)) o koncentraci 10 μΜ s následnou spektrofotometrickou analýzou je pozorována změna fluorescenčního spektra ve formě 1,2-násobného rozšíření a maximum fluorescenční intenzity je posunuto do dlouho- 10CZ 304591 B6 vinné oblasti o 8 nm. Při přidání „Photochlorin“ v menší koncentraci (c = 1 μΜ), není pozorován posun ani rozšíření, což ukazuje na účinek dávky na metabolickou přeměnu (obr. 5a, (2)).
Obr. 5a (3) ukazuje analýzu krevního homogenátů obdrženého 3 hodiny po podání „Photochlorin“ myším. Nejvíce významný parametr je l,5násobně rozšířené spektrum a posun maxima do dlouhovlnné oblasti o 4 nm, což indikuje směs „Photochlorin“ a metabolitu v analyzovaném krevním vzorku.
Po přidání „Photochlorin“ o koncentraci 10 μΜ do testovací zkumavky s jatemím homogenátem (obr. 5b (1)) je změna spektrální charakteristiky vyjádřena hlavně v posunu maxima fluorescenční intenzity do dlouhodobé oblasti o 9 nm. Rozšíření spektra není pozorováno.
Obdobný obrázek je pozorován při přidání „Photochlorin“ o menší koncentraci 1 μΜ (obr. 5b (2))Když je jatemí homogenát získaný 3 hodiny po podání přípravku zvířatům analyzován, spektrofotometrický záznam vzorkuje podobný předchozím dvěma (obr. 5b, (3)).
Tedy získané data ukazují na přítomnost metabolitu „Photochlorin“ v jatemím homogenátů.
Akumulace purpurinu 5 v nádorech experimentálních zvířat, optimální pro fotodynamický účinek vzhledem k selektivitě je pozorována v časovém intervalu 3 až 18 hodin po intravenózním nebo intraperitoneálním podání. V případě, kdy je nutné mít také chloriny v krevním oběhu, je ozařovací optimum v čase 0,5 až 4 hodiny po intravenózním podání. Obecně pro provedení PDT s „Kapalným extraktem chlorinů“ je interval mezi podáním přípravku a ozářením od 0,5 do 18 hodin.
Biologický účinek medicínské formy „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání“ („Photochlorin“) obsahující 0,5% bezvodý „Kapalný extrakt chlorinů“ je odhadován in vitro a in vivo.
PS rovnováha vzhledem k amfífílicitě je potvrzena standardním experimentem in vivo (Kessel D. Biochemistry, 1977, 16, 3443 až 3449) (Tab. 2, Příklad 12) PS rozdělovači koeficient v 1-oktanol/fosfátový pufr, pH 7,4 (Cd) je 1,40, to znamená, že nárokovaný PS je dobře rozpustný ve vodné i lipofilní fázi a potvrzuje lipofilitu PS, která dovoluje této sloučenině být přenesena z vody do komplexů transportních proteinů a lipoproteinů, prochází rychle do buněk difúzí přes plazmatickou membránu. Po ozáření laserem sloučenina uložena touto cestou uvolňuje atomární kyslík uvnitř buňky a zabíjí ji.
PS protinádorový účinek vzhledem k různým typům rakovinových buněk je potvrzen výsledky získanými v in vitro experimentech ve kterých byly použity 3 linie nádorových buněk: potkaní feochromocytom PC 12, potkaní Gasserův ganglion neurinoma RGGN1 a potkaní hepatom 27 (Hep 27) (Tab. 2, příklad 13).
Následující způsoby jsou používány pro studium cytofototoxického (po ozáření laserem) a biologického „tmavého“ účinku v závislosti na dávce:
1. MTT test dovoluje definovat přesně počet žijících buněk po jejich PS ošetření a laserovém ozáření pro počítání cytotoxických a cytofototoxických indexů PS. Ty samé testy dovolují odhadnout závislost cytotoxického a biologického „tmavého“ účinku PS (A.V. Reshetnickov, G. V. Ponomarev, A. V. Ivanov, O. Y. Abakumova, T. A. Tsvetkova, A. V. Karmenyan, A. G. Rebeko, R. P. Baum. Novel drug form of chlorin eé//In Optical Methods for Tumor Treatment and Detection: Mechanisms and Techniques in Photodynamic Therapy, IX. T. J. Dougherty, ed., Vol. 3909, 124 až 129 (200)).
- 11 CZ 304591 B6
2. Stanovení počtu buněk po obarvení jedné vrstvy krystalovou violetí na konci pokusu. Tato metoda je méně náročná a levnější než MTT-test a také dovoluje počítat cytotoxické a cytofototoxické indexy PS (A. E. Medvedev et al., Biomed. Science, 1990, 1, 261), aleje méně přesná, protože krystalová violeť barví také mrtvé buňky.
3. Srovnávací genotoxický a genofototoxický účinek PS je odhadován podle stupně inhibice DNA syntézy v buňkách. DNA syntéza je stanovená podle hladiny zabudování 14C thymidinu do DNA za použití standardních radiometrických metod (O.Y. Abakumova, et al., J. Neural. Transm. 3, 52, 87 (1998)).
Všechny tři studované linie buněk jsou vysoce citlivé k laserovému ozáření po PS podání (data MTT-testu). Podle citlivosti k laserovému ozáření je pořadí buněčných linií následující RGGNl>PC12>Hep27.
PC účinek v 5 μΜ koncentraci na buňky v temnotě byl 96,5 až 86,2 % pro PC-12, 103,7 až 93,0 % pro RGGN1 a 109,7 až 87,9 % pro Hep27 (MTT-test -krystalová violeť). Za stejných podmínek je syntéza DNA u PC-12 buněk beze změny a je redukována o 21,2 % a 22,2 % v Hep27 a RGGN1 buňkách. Pozorovaný pokles počtu RGGN1 a Hep27 buněk při účinku 5 μΜ PS na buňky v temnu je pravděpodobně způsobený indukci buněčné proliferace pomocí PS. Obecně je za temna typičtější pro PS cytotoxický účinek než proliferační účinek.
Buněčná smrt je pozorována po ozáření laserem v buňkách ošetřených PS. Dávková závislost cytofototoxického účinku přípravku je detekována a dovoluje počítat EC5o, tj. stanovit koncentraci PS způsobující smrt 50 % buněk. Tyto data jsou obsažené v tabulce 2. Je nutné poznamenat, že PS s EC50 menším než 20 μΜ je považován za dostatečný pro potlačení růstu nádoru.
DNA syntéza v PC-12 buňkách je silně snížena (96,5% pokles ve srovnání s kontrolou) při stanovení genofototoxicity po ošetření buněk 5μΜ PS a ozáření laserem. Stimulace DNA syntézy po ozáření laserem je pozorována při nízké koncentraci PS u Hep27 a RGGN1 buněk, tato syntéza je významně redukována v přítomnosti 5 μΜ RC. Pozorovaná stimulace DNA syntézy může být vysvětlena tím, že transformované jatemí a gliové buňky, které přežijí při nízké koncentraci PS, mají vysokou schopnost syntetizovat DNA a regenerovat populaci.
PS je tedy vysoce cytofototoxický přípravek pro různé typy nádorových buněk. Při vysoké koncentraci (> 5 μΜ) je střední inhibitor nádorového růstu dokonce bez ozáření.
PS toxické vlastnosti byly studovány v in vivo pokusech (příklad 14). Průměrná LD50 je 210,53 ± 22,2 mg/kg, hmotnostní koeficient je brán v úvahu, a dávka způsobující smrt 10 % experimentálních zvířat (LD10) je 169,87 mg/kg. Tyto pokusy dovolují považovat PS jako „Málo toxickou látku“.
PS biodistribuce byla studována vin vivo pokusu (příklad 11). Následující mechanismy distribuce sloučenin byly pozorovány, když se PS podal intraperitoneálně myším s T39 embryokarcinomem naočkovaným na sval zadní nohy. Po injekčním podání se PS dostává do krve a pak je redistribuován do orgánů a tkání zvířat (Tab. 3).
Jak je patrné z tabulky 3, maximum akumulace v nádoru (0,70 μΜ) je dosaženo po pěti hodinách po intraperitoneálním podání v dávce 40 mg/kg aje stálé po dlouhou dobu (18 až 24 hodin). Koncentrace v nádoru 18 hodin po podání je 0,48 μΜ, což je l,5krát méně než absolutní akumulační maximum při vysoké selektivitě akumulace. Poměr nádor/sval je 32 a nádor/kůže 44.
Akumulační maximum v nádoru (0,32 μΜ) je dosaženo za půl hodiny po intravenózním podání dávky 20 mg/kg aje také stálé po dlouhou dobu (do pěti hodin). Maximální kontrast akumulace
- 12CZ 304591 B6 po intravenózním podání je dosažen za tři hodiny a tato hodnota činí 3 pro nádor/sval a 4 pro nádor/sval. PS je vyloučen organismem z 98 % za den.
Tabulka 2
Lipofilní koeficient a in vitro účinek „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání“ („Photochlorin“).
| Testy, buněčné linie | Cytotoxicita („temná“ toxicita), % ke kontrole při 5 μΜ | Fototoxicita, EC5o, μΜ1 | (Cd) |
| MTTtest, PC-12 | 96,5 | 1,8 | |
| MTT test, RGGN1 | 103,7 | 1,8 | |
| MTT test, Hep27 | 109,7 | 3,9 | |
| Test s krystalovou violeti, PC-12 | 86,2 | 1,5 | |
| Test s krystalovou violetí, RGGN1 | 93,0 | 1,8 | 1,4 |
| Test s krystalovou violeti, Hep27 | 87,9 | 4,7 | |
| Genotoxicita, PC-12 | 104,7 | 3,5 % ke kontrole při 5μΜ | |
| Genotoxicita, RGGN1 | 77,8 | 133,2 % ke kontrole při 5μΜ | |
| Genotoxicita, Hep27 | 78,8 | 100,7 % ke kontrole při 5μΜ |
1 Mimo genofototoxicitu
Výsledky účinku přípravku odhadnuté při PDT nádoru v in vivo pokusech na myších (příklad 15) dovolují říci, že „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání“ („Photochlorin“) a(„Radachlorin, 0,05% gel) mají zvýšenou fotodynamickou aktivitu.
„Kapalný extrakt chlorinů“, medicínský přípravek obsahující sodné soli chlorinů (nebo soli chlorinů a jiných silných anorganických bází), je používán pro výrobu medicínských prostředků, pomocí přídavků různých pomocných látek povolených RF statě Pharmacopoeia: uhličitan sodný, sacharóza, glukóza, škrob, stearát hořečnatý, polyvinylpyrrolidony, polyglukany, methylglukamin, izotonický roztok, dimethylsulfoxid, gelové a emulgační látky, atd. (příklady 4 až 9).
Masti, mazání, gely a olejové přípravky jsou používané pro vnější použití, tyto formy obsahují substráty, povolené RF statě Pharmacopoeia, 5 až 20 % dimethylsulfoxidu a 0,5 až 12 % „Kapalného extraktu chlorinů“, nebo 0,8 až 14 % „Kapalného extrakt chlorinů“ a 86 až 99,2 % dimethylsulfoxidu (příklady 8, 9).
Rozsah koncentrace dimethylsulfoxidu v kombinaci se substrátem je vysvětlován tak, že průnik látky do tkáně je nízký při koncentraci menší než 5%, a to snižuje PDT účinnost. Jestliže koncentrace dimethylsulfoxidu je vyšší než 20%, medicínské formy na jiných bázích ztrácejí stabilitu při uskladnění. Rozsah koncentrace látky je vysvětlován tak, že jestliže koncentrace účinné látky je menší než 0,5 %, koncentrace látky v tkáni je nedostatečná pro účinnou PDT. Jestliže koncentrace účinné látky je vyšší než 12 %, tkáň ztrácí propustnost pro světlo, vše je absorbováno ve vrchní vrstvě tkáně a vede ke spálení při nízké účinnost PDT procedury.
- 13CZ 304591 B6
Tabulka 3. Hlavní farmakokinetické parametry
| PS | Absolutní akumulační maximum, orgán- gM-hodina | Akumulační maximum v nádoru-gM- hodina | Poměr nádor/kůže při akumulačním maximum v nádoru | Poměr nádor/svaly při akumulačním maximum v nádoru |
| Fotochlorin, intravenózně, 20 mg/kg | tenké střevo - 4,0-0,5 | 0,32 - 0,5 | 6,4 | 1,6 |
| Fotochlorin, intraperitoneálně, 20 mg/kg | krev - 5,2 - 0,5 | 0,70 - 5 | 3,9 | 3,0 |
| PS | Akumulace v nádoru při kontrastním maximu, gM-hodina | Poměr nádor/kůže při kontrastním maximu | Poměr nádor/svaly při konstantním maximu | Vylučování, %-hodiny |
| Fotochlorin, intravenózně, 20 mg/kg | 0,29-3 | 14,5 | 2,9 | 98-24 |
| Fotochlorin, intraperitoneálně, 20 mg/kg | 0,48-18 | 44,0 | 32,0 | 98-24 |
Expozice látkou na kůži před ozářením je 0,5 až 24 hodin při externím použití. Látka nemá čas proniknout do tkáně v dostatečné hloubce v čase menším než 0,5 hodin. Jestliže časový interval je větší než 24 hodin, není již dosaženo absolutního akumulačního maxima vlivem redistribuce a vylučování. Mimoto dlouhodobé expozice externích medicínských přípravků na kůži jsou z klinického pohledu nevhodné.
Přípravek je používán pro intravenózní podávání ve formě 0,1 až 1% roztoku v jakémkoliv médiu povoleném podle RF State Pharmacopoeia (apyrogenní voda pro injekční podávání, dimethylsulfoxid, roztok solanky, atd.) Použití roztoku s koncentrací látky nižší než 0,1% je iracionální při pohledu na množství kapaliny zavedené do organismu. Použití roztoku s koncentrací větší než 1% je nemožné z důvodu nízké filtrovatelnosti takového roztoku při sterilizaci přes antibakteriální filtr.
Polovodičový laserový diodový modul pro fotodynamickou terapii ML-62-62-SP vyrobený podle ZAO „MYLON“ (Saint Petersburg) a OOO „SIGM PLUS“ (Moskva) je použit při aktivaci PS „Kapalný extrakt chlorinů“. Tento modul má následující výchozí data (Certifikát ruského ministerstva zdravotnictví, Reg. č. 29/10-679-96):
- výkon 2,5 až 3 W v paprsku 200 mikronů s otvorem 0,22.
- vysoce intenzivní laserové diody společností „Polaroid“ (USA) a OOO „SIGM PLUS“ s maximální ozařovací vlnovou délkou 662 ± 3 nm.
- 14CZ 304591 B6
Moduly s nižším výkonem (s nižším počtem diod) s maximální ozařovací vlnovou délkou 662 ± 3 nm mohou být použity pro aktivaci PS látky, mohou být také použity pevné lasery s druhým harmonickým ytrium-hliníkovým krystalem YAG:Nd3+ s maximální ozařovací vlnovou délkou 670 nm.
Rozsah přijaté energie je od 30 do 3000 J. Při světelné dávce menší než 30 J se PDT procedura stává značně dlouhá, protože skenování se může provádět jen na extrémně malé ploše, aby se dosáhlo optimálního výsledku, při světelných dávkách vyšších než 3000 J a nejvíce se vyskytující velikosti nádoru v klinické praxi je pozorováno poškození zdravé tkáně a následné prodloužení regenerační periody.
Povrchová hustota přijímané energie se liší od 50 do 2500 J/cm2. Při dávce nižší než 50 J/cm2 není pozorován žádný účinek. Při dávce vyšší než 2500 J/cm2 je pozorováno poškození zdravé tkáně a následné prodloužení regenerační periody.
Rozsah vlnových délek záření je spojen s technickou charakteristikou používaných laserů (662 ± 3 nm), posun preparačního absorpčního maxima závisí na polaritě média (654 až 662 nm) a obsahu purpurinu 5 v látce (5 až 20 %, polovina šířky dlouhovlnného absorpčního pásu při 663 až 670 nm) (tab. 1).
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Popis fyzikálně chemických vlastností PS
PS představuje hustou černou hmotu, která získává zelený nádech v tenké vrstvě, se zápachem řas.
Pro potvrzení autenticity PS vlastností „Kapalného extraktu chlorinů“ je 7,5% extrakt intenzívně míchán, část extraktu (1 mg) je rozpuštěna v 10 ml medicínském nebo nejčistším rektifikovaném ethanolu, 95%, a optická hustota je měřena při 662 nm (D). Hodnota je 0,23. Molekulární extinkce e (M 'cm“1) je vypočítána podle vzorce e = D*597/(0,004). Výsledná hodnota by měla být v intervalu 33 300 až 35 100. Po substituci, e = 0,23*597/(0,004) = 34 328. Proto „Kapalný extrakt chlorinů“ obsahuje 7,5 % PS.
PS roztok v ethanolu má žlutozelenou barvu. Roztok získá rubínově-červenou barvu při průchodu paprsků s medicínské modré lampy MDS 220-75 (technické specifikace 16.535.376-79) přes roztok v místě chráněném před světlem.
Pro kvantitativní stanovení „Kapalného extraktu chlorinů“ je tento intenzívně míchán, část extraktu (1 mg) je rozpuštěna v 10 ml medicínském nebo nejčistším rektifikovaném ethanolu, 95%, a optická hustota je měřena při 662 nm (D). Hodnota je 2,15. Obsah PS je vypočítán podle vzorce c,% = (D*597*10*100)/(34230*5). Výsledná hodnota by měla odpovídat specifikované. Po dosažení, c,% = (2,15*597*10*100)/(34230*5) = 7, % (odpovídá specifikované).
Pro další analýzu je přidána do 100 mg „Kapalného extraktu chlorinů“ zředěná kyselina chlorovodíková, dokud se PS nevysráží, sraženina je zfiltrována, sušena ve vakuu přes oxid fosforečný po 12 hodin a PMR, hmotnostní spektrum a absorpční spektrum je změřeno ve vlnovém rozsahu 360 až 720 nm.
PS PMR spektrum (Obr. 6): (v DMSO-D6, koncentrovaný roztok): 9,64, 9,55, 9,52, 9,39, 8,90, 8,79 (s, meso-H chlorinů e6 a purpurinu 5), 8,09, 8,04, 7,97, 7,92 (2d, CH=CH2 chlorinů e6
- 15CZ 304591 B6 apurpurinu 5), 6,84 (s, γ-meso-CHO purpurinu 5), 6,37, 6,32, 6,13, 6,10 (2d, CH=CH2), 5,43 (2s, y-meso-CH2COOH), 4,60 (m, 7-H), 4,45 (m, 8-H), 3,80, 3,56 (qx2, 4-CH2CH3), 3,75, 3,64, 3,51, 3,46, 3,29, 3,23 (c, jaderný CH3 chlorinu a purpurinu 5), 2,38, 2,32 (2m, 7-CH2CH2COOH), 2,71, 2,20 (2m, 7-CH2CH2COOH), 1,76 (d, 8-CH3), 1,72 (t, 4-CH2CH3), -1,63,-1,91 (2s, 2NH)ppm.
PS hmotnostní spektrum (obr. 7): tj., M+ (%), 596 (16,0), 566 (9,40), 508 (100,0), 494 (7,3), 447 (9,4), 435 (50,6), 421 (12,8), 405 (6,9), 254 (7,4).
PS viditelné absorpční spektrum λ (e) (ethanol), 386 (22 310), 406 (113 040), 506 (14 870), 536 (8 925), 608 (7 437), 662 (34 220).
Podle NMR spektra látka obsahuje 80 % chlorinu e6, 15 % purpurinu 5 a 5 % purpurinu 18 (vedlejší signály na 9,25, 9,10, 8,71, 7,84, 3,55, 3,32, 3,04 ppm), což odpovídá patentované směsi. Podle hmotnostního spektra jsou obsažené píky molekulových iontů 596 chlorinu e6 a 566 purpurinu 5. V absorpčním spektru je pás o 662 nm s absorpční hodnotou, která dobře odpovídá molekulární extinkci etalonu PS (34 230).
Proto studovaný vzorek je „Kapalný extrakt chlorinů“, 7,5%.
Příklad 2
Výroba PS jako „Kapalného extraktu chlorinů“, 6,5%.
Spirulina biomasa (2 kg) je zpracována s aceton (3x21), dokud se nevyextrahuje všechen chlorofyl, biomasa je filtrována, extrakt je zpracován s kyselinou chlorovodíkovou (30 ml), čímž se odstraní hořčík z molekuly chlorofylu, extrakt je neutralizován a vysrážený feofytin a (8 g) je zfiltrován, pak hydrolyzován ve směsi kyselina chlorovodíková-aceton-hexan, pro tento účel je feofytin a rozpuštěn ve směsi 50 ml acetonu, 5 ml hexanu a 40 ml kyseliny chlorovodíkové (37%), směs je zahřívána na 40 °C a míchána 1 hodinu, pak je přidán hexan (50 ml) a organická fáze je promyta směsí acetonu a kyseliny chlorovodíkové (2:1, 3x50 ml), vodná fáze je promyta hexanem (5x40 ml), vodná fáze obsahující feoforbid a je neutralizována přebytkem vodného roztoku citrátu sodného (tri-, di- nebo mono-substituovaného), vysrážený feoforbid a je zfiltrován, promyt vodou (3x50 ml), rekrystalizován ze směsi aceton-voda, sušen vzduchem do konstantní hmotnosti (výtěžek feoforbidu a je 4,2 g, 7,1 mM, 77%), pak je feoforbid a (2,7 g,
4.56 nM) rozpuštěn v acetonu (100 ml), je přidána silná anorganická báze ve formě vodného roztoku (0,05%, 25 ml), roztok míchán 60 °C po dobu 5 minut, přidán další objem silné anorganické báze ve formě vodného roztoku (20%, 25 ml), směs je zahřívána na 40 °C po dobu 90 minut, neutralizována zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (2%, kolem 250 ml), sraženina chlorinu Q(, je odstraněna centrifugací, promyta destilovanou vodou (5x 10 ml) až zmizí kyselá reakce, je získáno 1,85 g (2,96 mM, 65%) chlorinu e6, ten je rekrystalizován z acetonu proto, aby se oddělily tetrapyrroly, chlorin eft je zfiltrován a promyt třikrát destilovanou vodou, zahříván v utěsněné nádobě při teplotě 40 °C po dobu 30 dnů, ochlazen a je přidán 1% roztok hydroxidu sodného, dokud pH není 7,5, výsledný PS obsahuje 15 % purpurinu 5, 80 % chlorinu e6 a 5 % purpurinu 18 (chlorin p6), pak je roztok upraven destilovanou vodou za vzniku roztoku fotosenzibilizátoru o koncentraci 6,5 % hmotnostních, což je 14,2 g (50%) PS ve formě 6,5% „Kapalného extraktu chlorinů“.
Výsledné PMR spektrum „Kapalného extraktu chlorinů“ (obr. 6): (v DMSO-D6, koncentrovaný roztok): 9,64, 9,55, 9,52, 9,39, 8,90, 8,79 (s, meso-H chlorinu e6 a purpurinu 5), 8,09, 8,04, 7,97, 7,92 (2d, CH=CH2 chlorinu e6 a purpurinu 5), 6,84 (s, γ-meso-CHO purpurinu 5), 6,37, 6,32, 6,13, 6,10 (2d, CH=CH2), 5,43 (2s, y-meso-CH2COOH), 4,60 (m, 7-H), 4,45 (m, 8-H), 3,80,
3.56 (qx2, 4-CH2CH3), 3,75, 3,64, 3,51, 3,46, 3,29, 3,23 (c, jaderný CH3 chlorinu e6 a purpurinu
-16CZ 304591 B6
5), 2,38, 2,32 (2m, 7-CH2CH2COOH), 2,71, 2,20 (2m, 7-CH2CH2COOH), 1,76 (d, 8-CH3), 1,72 (t, 4-CH2CH3), -1,63, -1,91 (2s, 2NH) ppm.
Látka obsahuje 80 % chlorinů e6, 15 % purpurinu 5 a 5 % purpurinu 18 (chlorin p6) (signály na 9,25, 9,10, 8,71, 7,84, 3,55, 3,32, 3,04 ppm).
Výsledné hmotnostní spektrum (obr. 7): tj., M+ (%), 596 (16,0), 566 (9,40), 508 (100,0), 494 (7,3), 447 (9,4), 435 (50,6), 421 (12,8), 405 (6,9), 254 (7,4).
Viditelné absorpční spektrum (obr. 8): λ (e) (ethanol), 386 (22 320), 406 (113 110), 506 (14 880), 536 (8 930), 608 (7 440), 662 (34 230).
Příklad 3
Výroba PS jako „Kapalného extraktu chlorinů“, 6,5%.
Spirulina biomasa (2 kg) je zpracována s aceton (3x21), dokud se nevyextrahuje všechen chlorofyl, biomasa je filtrována, extrakt je zpracován s kyselinou chlorovodíkovou (30 ml), čímž se odstraní hořčík z molekuly chlorofylu, extrakt je neutralizován a vysrážený feofytin a (8 g) je zfiltrován, pak hydrolyzován ve směsi kyselina chlorovodíková-aceton-hexan, pro tento účel je feofytin a rozpuštěn ve směsi 100 ml acetonu, 50 ml hexanu a 80 ml kyseliny chlorovodíkové (37%), směs je zahřívána na 60 °C a míchána 20 minut, pak je přidán hexan (100 ml) a organická fáze je promyta směsí acetonu a kyseliny chlorovodíkové (5:1, 3x50 ml), vodná fáze je promyta hexanem (5x40 ml), vodná fáze obsahující feoforbid a je neutralizována přebytkem vodného roztoku citrátu sodného (tri-, di- nebo mono-substituováného), vysrážený feoforbid a je zfiltrován, promyt vodou (3x50 ml), rekrystalizován ze směsi aceton-voda, sušen vzduchem do konstantní hmotnosti (výtěžek je 3,8 g, 6,4 mM, 67%), pak je feoforbid a (2,7 g, 4,56 nM) rozpuštěn v acetonu (100 ml), je přidána silná anorganická báze ve formě vodného roztoku (1%, 25 ml), roztok míchán při 30 °C po dobu 30 minut, přidán další objem silné anorganické báze ve formě vodného roztoku (20%, 25 ml), směs je zahřívána na 60 °C po dobu 20 minut, neutralizována zředěnou kyselinou chlorovodíkovou (2%, kolem 250 ml), sraženina chlorinů e6 je odstraněna centrifugací, promyta destilovanou vodou (5x 10 ml) až zmizí kyselá reakce, je získáno 1,67 g (2,67 mM, 55%) chlorinů e6, ten je rekrystalizován z acetonu proto, aby se oddělily tetrapyrroly, chlorin e6 je zfiltrován a promyt třikrát destilovanou vodou, zahříván v utěsněné nádobě při teplotě 100 °C po dobu 1 hodiny, ochlazen a je přidán 1% roztok hydroxidu draselného, dokud pH není 8,5, výsledný PS obsahuje 2 % purpurinu 5, 82 % chlorinů e6 a 16 % purpurinu 18 (chlorin p6), pak je roztok upraven destilovanou vodou za vzniku roztoku fotosenzibilizátoru o koncentraci 7,5 % hmotnostních, což je 11,1 g (50%) PS ve formě 7,5% pasty.
Výsledné spektrum látky je podobné těm, jež se získaly v příkladu 2 a představují superpozici spekter cholinu e6 (obr. 9 až 11) a purpurinu 5 (obr. 12 až 14).
Příklad 4
Speciální případ výroby PS - výroba „Kapalného extraktu chlorinů“, 7,5%.
PS obsahující obsahuje 2 % purpurinu 5, 82 % chlorinů e6 a 16 % purpurinu 18 (chlorin p«) ve formě 7,5% pasty popsané v předcházejícím příkladu je gelově filtrován na Sephadex G10 koloně o průměru 50 mm a výšce 100 mm za použití 1% roztoku hydroxidu draselného jako eluentu, dokud se dosáhne obsahu chlorinů e6 90 %, purpurinu 5 do 5 % a purpurinu 18 5 %. Pak je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, PS je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 7,5 % hmotnostních, což dává 6,8 g „Kapalného extraktu chlorinů“ 7,5%. Elektronové spektrum produktu viz obr. 8.
- 17CZ 304591 B6
Příklad 5
Speciální případ výroby PS - výroba medicínské formy „Radochlorinu, 0,1% roztoku pro injekční podání“.
Po gelové filtraci je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku PS popsaného v příkladu 4, dokud je PS vysrážený, sraženina je zfiltrována, je přidán koncentrovaný roztok hydroxidu sodného v apyrogenní vodě pro injekční podání, dokud pH není 7,5, PS je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 0,1 % hmotnostních, a bakterie jsou zfiltrovány za použití antibakteriálního „Millipore“ mikroporézního filtru s 0,22 pm póry. Výtěžek je 500 ml roztoku. Elektronové spektrum produktu viz. obr. 8.
Příklad 6
Speciální případ výroby PS - výroba medicínské formy „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Po gelové filtraci je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku PS popsaného v příkladu 4, dokud je PS vysrážený, sraženina je zfiltrována, je přidán koncentrovaný roztok hydroxidu draselného, dokud není pH 7, pak je k roztoku přidán N-methyl-D-glukamin, dokud není pH 8,5 pod kontrolou pH metru, PS je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 0,5 % hmotnostních, a bakterie jsou zfiltrovány za použití antibakteriálního „Millipore“ mikroporézního filtru s 0,22 pm póry. Výtěžek je 100 ml roztoku. Elektronové spektrum produktu viz. obr. 8.
Příklad 7
Speciální případ výroby PS - výroba medicínské formy „Radachlorinu, 1% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Po gelové filtraci je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku PS popsaného v příkladu 4, dokud je PS vysrážený, sraženina je zfiltrována, je přidán koncentrovaný roztok hydroxidu sodného, dokud není pH 8,5, PS je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 1,0 % hmotnostních, a bakterie jsou zfiltrovány za použití antibakteriálního „Millipore“ mikroporézního filtru s 0,22 pm póry. Výtěžek je 50 ml roztoku. Elektronové spektrum produktu viz. obr. 8.
Příklad 8
Speciální případ výroby PS - výroba medicínské formy „Radachlorinu gelu“ („Photochlorin“).
Po gelové filtraci je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku PS popsaného v příkladu 4, dokud je PS vysrážený, sraženina je centrifugována, je přidána apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 6,5 % hmotnostních, a jsou provedené následující možnosti:
Varianta (a). 0,3g Pemulen TRI nebo Carbopol 2020 (BF Goodrich, UK) jsou přidáno do 75 ml vody a 5g dimethylsulfoxidu při teplotě místnosti a směs je míchána 15 minut až 8 hodin. Vodný alkalický roztok je přidán, dokud není pH 5. Gel je resuspendován doplněním „Kapalného extraktu chlorinů“, 6,5% vodou za vzniku 0,05% koncentrace chlorinu e6 ve výsledném gelu, gel je vakuován 5 minut pod tlakem 10 až 50 mm Hg. Výtěžek je 100 g gelu.
-18CZ 304591 B6
Varianta (b). 5 g dimethylsulfoxidu a „Kapalný extrakt chlorinů“, 6,5% je přidán do 70 ml vody za vzniku 0,05 koncentrace chlorinu e6 ve výsledném gelu, pak je přidáno 15 g Aculyn 33 A (ISP, USA). Látka je míchána do homogenizace a je přidán vodný alkalický roztok, dokud není pH 5. Gel je vakuován 5 minut pod tlakem 10 až 50 mm Hg. Výtěžek je 100 g gelu.
Po gelové filtraci je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku PS popsaného v příkladu 4, dokud je PS vysrážený, sraženina je centrifugována, je přidána apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 6,5 % hmotnostních, a jsou provedené následující možnosti:
Varianta (c). 0,7g Pemulen TRI nebo Carbopol 2020 (BF Goodrich, UK) jsou přidáni do 60 ml vody a 20 g dimethylsulfoxidu při teplotě místnosti a směs je míchána 15 minut až 8 hodin. Vodný triethanolaminový roztok je přidán, dokud není pH 8,5. Gel je resuspendován doplněním „Kapalného extraktu chlorinů“, 7,5% vodou za vzniku 1,0% koncentrace chlorinu e6 ve výsledném gelu, gel je vakuován 5 minut pod tlakem 10 až 50 mm Hg. Výtěžek je 100 g gelu.
Varianta (d). 20 g dimethylsulfoxidu a „Kapalný extrakt chlorinů“, 7,5% je přidán do 55 ml vody za vzniku 1,0% koncentrace chlorinu e6 ve výsledném gelu, pak je přidáno 15 g Aculyn 33A (ISP, USA). Látka je míchána do homogenizace a je přidán vodný triethanolaminový roztok, dokud není pH 8,5. Gel je vakuován 5 minut pod tlakem 10 až 50 mm Hg. Výtěžek je 100 g gelu.
Příklad 9
Speciální případ výroby PS - výroba medicínské formy „Radachlorinu dimethylsulfoxidového roztoku pro vnější použití“.
Varianta (a). Po gelové filtraci v příkladu 4 je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku, dokud je PS vysrážený, sraženina je zfiltrována, je přidána apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 7,5 % hmotnostních, a 14 g výsledného „Kapalného extraktu chlorinů“ je přidáno do 86 g dimethylsulfoxidu při teplotě místnosti za vzniku výsledného roztoku 1,0% chlorinu e6, ten je míchán do homogenity. Výtěžek je 100 g roztoku.
Varianta (b). Po gelové filtraci v příkladu 4 je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové do roztoku, dokud je PS vysrážený, sraženina je zfiltrována, je přidána apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 7,5 % hmotnostních, a 0,8 g výsledného „Kapalného extraktu chlorinů“ je přidáno do 99,2 g dimethylsulfoxidu při teplotě místnosti za vzniku výsledného roztoku 0,05% chlorinu e6, a ten je míchán, dokud je homogenní. Výtěžek je 100 g roztoku.
Příklad 10
Pro identifikaci purpurinu 5 je reakční směs z příkladu 2 gelově zfiltrována na koloně Sephadex G10 za použití 1% roztoku N-methyl-D-glukaminu jako eluentu za vzniku tří frakcí, první a druhá obsahující purpurin 5. Tyto frakce jsou neutralizovány, sraženina je zfiltrována, rozpuštěna ve směsi chloroform-methanol 1:1a esterifikována diazomethanem. Směs je promyta vodou, organická fáze je odstraněna, sušena přes bezvodý síran hořečnatý, koncentrována odpařením ve vakuu a chromatograficky čištěna na silikagelu Merck, Kieselgel, 0,04 až 0,063, poslední frakce (nejméně mobilní) je sebrána. Je-li to nutné, výsledný dimethylester purpurinu 5 (10,1% počítáno na suchou reakční hmotu po esterifikaci) je chromatograficky čištěn opakovaně.
PMR spektrum (obr. 15): (DMSO-D6, koncentrovaný roztok): 9,64, 9,46, 8,82 (s, meso-H), 6,82 (s, γ-meso-CHO), 6,34, 6,31, 6,19, 6,16 (2d, -CH=CH2) 4,54 (m, 7-H), 4,46 (m, 8-H), 3,61 (q, 4-CH2CH3), 4,20, 3,81, 3,57, 3,53, 3,47 (5s, -COOCH3 a jaderný -CH3), 2,38, 2,35
-19CZ 304591 B6 (2m, 7-CH2CH2COOH), 2,68, 1,85 (2m, 7-CH2CH2COOH), 1,73 (d, 8-CH3), 1,70 (t, 4-CH2CH3) ppm.
Hmotnostní spektrum (obr. 16): tj., M+ (%), 594 (8,6), 566 (100), 505 (5,1), 491 (9,8), 475 (8,2), 463 (1,7), 447 (1,4), 433 (1,7), 262 (5,0).
Viditelné absorpční spektrum (obr. 17): λ (e) (ethanol), 408 (117 200), 501 (11 380), 542 (9,830), 617 (6 720), 668 (35 200).
Dimethylester purpurinu 5 je rozpuštěn v acetonu a je přidána koncentrovaná kyselina chlorovodíková (37%) v poměru 1:2. Směs je míchána 2 hodiny při 25 °C, neutralizována, purpurin 5 je zfiltrován, promyt vodou, rozpuštěn v 10 % roztoku N-methyl-D-glukaminu a gelově zfiltrována na koloně Sephadex G10 za použití 1% roztoku N-methyl-D-glukaminu jako eluentu, druhá frakce je sebrána, neutralizována, sraženina je zfiltrována, promyta vodou, sušena přes oxid fosforečný do konstantní hmotnosti za vzniku purpurinu 5 (5,2 % v přepočtu na suchou reakční hmotu získanou po esterifikaci).
PMR spektrum (obr. 12): (DMSO-D6, koncentrovaný roztok): 9,55, 9,39, 8,79 (s, meso-H), 8,09, 8,04, 7,97, 7,92 (2d, -CH=CH2), 6,84 (s, γ-meso-CHO), 6,37, 6,33, 6,13, 6,10 (2d, -CH=CH2) 4,60 (m, 7-H), 4,45 (m, 8-H), 3,55 (q, 4-CH2CH3), 3,75, 3,46, 3,23 (s, jaderný -CH3), 2,38, 2,32 (2m, 7-CH2CH2COOH), 2,71, 2,20 (2m, 7-CH2CH2COOH), 1,76 (d, 8-CH3), 1,72 (t, 4-CH2CH3) ppm.
Hmotnostní spektrum (obr. 13): tj., M+ (%), 566 (8,2), 494 (100,0), 447 (9,1), 435 (49,6), 421 (12,7), 405 (6,6), 254(7,1).
Viditelné absorpční spektrum (obr. 14): λ (e) (ethanol), 408 (116 900), 501 (11 320), 540 (9 790), 615 (6 710), 665 (35 090).
Příklad 11
Studium farmakokinetiky a metabolismu medicínské formy „Kapalného extraktu chlorinů“ a „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
769,2 mg/kg 0,65% „Kapalného extraktu chlorinů“ z příkladu 2 (50 mg/kg v přepočtu na bezvodé chloriny) bylo podáno intraperitoneálně myším linie Balb/c. Myši byly obětovány 3 hodiny po podání (každá skupina obsahovala 3 myši). Játra, ledviny, slezina, plíce, tenké střevo, nádor, okolní svalová tkáň, stejně jako krev, moč, výměšky z tlustého střeva (100 mg), vše bylo homogenizováno v skleněném homogenizátoru s přídavkem 4 ml roztoku solanky. Pro vyšetření biologických kapalin (krev, moč) bylo použito 0,1 ml každé tekutiny a přidáno k ní 4 ml roztoku solanky. Výsledný homogenát byl studován na „Perkin-Elmer spektrofluorimetru (MPFA4A model).
Studium medicínské formy „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) bylo provedeno podobně v homogenátu orgánů a tkání myší, kterým bylo podáno 50 mg/kg přípravku, myši byly obětovány 3 hodiny po podání.
V obou případech je vidět posun fluorescenčního maxima v tkáních jater, tenkého střeva, sleziny a ledvin na 670 nm (o 10 až 12 nm ve srovnání s 0,01M roztokem borátového pufru, pH 9,2, a 5 až 6 nm ve srovnání s roztokem 0,01M borátového pufru, pH 9,2, s 1% lidským sérovým albuminem), což indikuje metabolismus „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) (obr. 5).
-20CZ 304591 B6
Ve fluorescenční spektru tento jev vypadá jinak než jednoduché rozšíření spektra a posun k delším vlnovým délkám kvůli účinku hydrofobity média (například po hydrofobních interakcích s proteiny, lipoproteiny). Posun maxima intenzity je pozorován bez nebo s malým rozšířením pásu, což je typické pro tvorbu nové látky. Fluorescenční spektra purpurinu 5 v0,01M borátovém pufru, pH 9,2, s 1% lidským sérovým albuminem jsou charakterizované přítomnosti pásu na 670 nm.
V krvi, plicní tkáni, stejně jako v kůži a nádoru je pozorováno rozšíření spektra 1,4 až 1,5 násobně při vlnové délce 669 nm, což indikuje přítomnost „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) (jeho komplex s proteiny) a metabolické směsi v homogenátu.
Jestliže je „Radachlorin, 0,5% roztok pro injekční podání“ („Photochlorin“) přidán přímo do zkumavek s homogenáty zvířecích tkání v koncentraci 0,5 až 1,0 μΜ, je v krvi, tenkém střevě, játrech a plících detekován metabolit „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) (posun do dlouhovlnné oblasti bez rozšíření spektra) a jenom v homogenátu kůže je malé, l,15krát zvýšení spektrální šířky, což indikuje přítomnost směsi metabolitů „Photochlorinu“ ve vzorku.
Jestliže je koncentrace „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) v homogenátech orgánu zvýšena na 5 až 10 μΜ, je prakticky ve všech vzorcích nalezena přítomnost směsi chlorinu e<, a purpurinu 5 (posun do dlouhovlnné oblasti při 1,15 až 1,05 násobném zvýšení šířky spektra).
Je tedy možné považovat vznik metabolitů „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) po přidání do homogenátu závisí na koncentraci přípravku a účinku enzymů homogenizované tkáně.
Tyto pokusy jasně ukazují konversi chlorinu e6 na purpurin 5 v in vivo a ex vivo podmínkách. Tato konverse je podobná konversi chlorinu e6 na purpurin 5 při zahřívání.
Příklad 12
Rozdělovači koeficient mezi n-oktanol a fosfátový pufr, pH 7,4.
300 ml n-oktanolu a 300 ml fosfátového pufru, pH 7,4 bylo třepáno 20 sekund a centrifugováno 10 minut při 10 000 ot/min. 0,1 ml PS alikvotu s PS koncentraci 5 mg/ml bylo rozpuštěno v připraveném pufru (2 ml) a n-oktanolu (8 ml), absorpční maxima stanovená při 406 nm).
Byly získány hodnoty D°c a Db„ kde o je n-oktanol a b je fosfátový pufr, c je kontrola. Rovnováha rozdělení mezi n-oktanol a fosfátový pufr je dosažena třepáním 2 ml fosfátového pufru a 8 ml n-oktanolu s 0,1 ml PS po 20 sekund při 20 °C s následnou centrifugací 10 minut při 10 000 ot/min. Optická hustota každé fáze je měřena při 406 nm a dává hodnoty Do a Db, kde oje n-oktanol a bje fosfátový pufr.
Cd je počítána podle rovnice:
Cd - (D° V° D°c V°c)/(Da V* Dée Véc), kde V° je objem oktanolové fáze použity pro rovnovážné stanovení (8 ml), V°c objem oktanolu nasycený vodou použity pro kontrolní stanovení alikvotní absorpce (8 ml), V* objem pufru použity pro rovnovážné stanovení (2 ml), Nbc objem pufru nasycený oktanolem použity pro kontrolní stanovení alikvotní absorpce (2 ml). Pokus byl proveden třikrát a získané výsledky Cd byly zprůměrovány.
Výsledná hodnota je 1,4 ± 0,3.
-21 CZ 304591 B6
Příklad 13
Stanovení in vitro fototoxicity (biologické aktivity) a cytotoxicity (buněčné toxicity) medicínské formy metabolitů „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Pro tuto práci byly použity laminámí box „Flow Lab“ (UK), CO2 inkubátor „Flov Lab“ (UK), multisken „Bio-Tek Instruments“ (USA), média a séra „PanEco“ (Rusko).
Projeden pokus jsou buňky jedné linie přeneseny do misky se 48 komůrkami, jedny pro laserové ozařování, jedny pro “temný“ pokus. Další den je přípravek přidán a buňky na misce jsou termostatovány v černém papíře. Byla studována koncentrace přípravku 0,5, 2,0 a 5,0 μΜ. Tři hodiny po podání přípravku byly buňky ozářené laserem, expoziční dávka 50 J/cm2, a za 39 hodin byl proveden MTT-test stejně jako inkubace s 14C-thymidinem pro stanovení DNA syntézy („temné“ misky byla také testovány). Ve všech případech je horní část misky použita pro MTT-test a spodní část pro měření DNA syntézy a počtu buněk po obarvení krystalovou violetí.
Data prezentována v tabulce 2 jsou průměrem 4 paralelních pokusů.
Příklad 14
In vivo studie toxických vlastností medicínských forem „Kapalného extraktu chlorinů“ a „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Toxicita byla studována po intravenózním podání PS laboratorní bílé myši váhy 19 až 21 g (chované v Russian Academy of Medial Sciences, Krukovo). Zvířata byla držena pod standardními podmínkami ve viváriu a krmena podle nařízení ministerstva zdravotnictví SSSR zákon č. 1179 z 10. 10. 1983 „O povolení specifikací krmení pro laboratorní zvířata ve zdravotnických organizacích“. Toxicita je stanovená podle úmrtí zvířat jak letální dávka úhynu 50 % jedinců - LD50. Výpočet byl proveden podle statistických metod doporučených State Pharmacopoeia, edice XI (1,3). Na základě hodnoty LD50 je studovaná látka zařazena do odpovídající třídy toxicity podle Elodge a Stemer. Intoxikační reakce během experimentu jsou rovněž zaznamenané.
myší (6 samců a 6 samic) bylo použito pro každou testovanou dávku PS. Následující dávky byly použity pro stanovení PS LD50: 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275 mg/kg. Roztok s koncentrací PS 5 mg/ml byl podán myším intravenózně, dávka závisela na podaném objemu roztoku PS.
Výsledná hodnota LD50 je 210,53 ± 22,2 mg/kg, LD10 je 169,87 mg/kg.
Příklad 15
In vivo biologická účinnost medicínské formy „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Fotodynamická aktivita „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“) byla studována na myších linie Balb/c s T36 embryokarcinomem naočkovaným na sval zadní nohy. Myši vážily 20 až 21 g. Ozařovací procedura byla provedena pomocí diodového laseru ML-662SP a to dva týdny po naočkování nádoru. Kůže v ozařované oblasti byla oholena před procedurou.
Přípravek byl podán intraperitoneálně v dávce 40 mg/kg, což odpovídá dostatečné terapeutické dávce. Po provedení ozáření byly myši uspány etherem. Elmotnost nádoru v kontrolní a experimentální skupině v čase pokusu byla od 0,9 do 1 g. Ozáření bylo provedeno 5 až 6 hodin po
-22CZ 304591 B6 podání PS. Každé zvíře, mimo kontrolu, bylo ozářeno jednou, pak bylo pozorováno měsíc o proceduře, plocha nekrózy nádoru a obecné fyziologické stavy byly zaznamenány.
Průměrná hustota expoziční dávky záření byla 150 až 300 J/cm2
Nej lepší výsledky ve formě celkové nekrózy nádoru, tvorby strupu v prvním týdnu po PDT a odloupnutí strupu za 1,5 měsíce po PDT byly pozorovány ve skupině, která obdržena dávku záření 300 J/cm2.
Příklad 16
Léčení nádoru kůže basálních buněk za použití medicínské formy „Radachlorinu, 0,5% roztoku pro injekční podání“ („Photochlorin“).
Nádor kůže basálních buněk byl diagnozován pomocí cytologického vyšetření. Přípravek byl podán po kapkách intravenózně tak, aby byla podána dávka 0,7mg/kg pacientovy hmotnosti po zředění 100 ml 0,9% sterilního roztoku NaCl. Za 2 až 3 hodiny bylo provedeno ozáření nádoru pomocí diodového laseru ML-662-SP s vlnovou délkou 662 nm a dávkou 50 J/cm2 bez anestézie. Žádné nežádoucí nebyly registrovány během podání přípravku a laserového ozařování. Dvě hodiny po ozařování se vytvořilo temně hnědé ohnisko se zarudlým okrajem 1 až 2 cm v místě nádoru. Ke konci prvního dne se tvoří nekrózy v místě nádoru ve formě suchých hnědých krust (eschar). Za dva až tři týdny krusta odpadla a za další dva týdny se objevila celková epitelizace poškození kůže v místě nádoru s dobrým kosmetickým účinkem.
Příklad 17
Léčení nádoru kůže basálních buněk za použití medicínské formy „Radachlorinu, 0,05 gelu“.
Nádor kůže basálních buněk byl diagnozován pomocí cytologického vyšetření. Gel byl nanesen v tenké vrstvě na nádor, bylo-li to možné, zdravá kůže byla nedotčena. Za 20 až 30 minut bylo provedeno ozáření nádoru pomocí diodového laseru ML-662-SP („Mylon-Sigm Plus“, Rusko) s vlnovou délkou 662 nm. Hustota expoziční dávky činila 2500 J/cm2. Dvě hodiny po ozařování se vytvořilo temně hnědé ohnisko se zarudlým okrajem 1 až 2 cm v místě nádoru. Během prvního týdne se tvoří nekrózy v místě nádoru ve formě suchých hnědých krust (eschar). Za dva týdny krusta odpadla a za další dva týdny se objevila celková epitelizace poškození kůže v místě nádoru s dobrým kosmetickým účinkem.
Příklad 18
Odstranění tetování za použití medicínské formy „Radachlorinu, 0,5% roztoku v dimethylsulfoxidu pro vnější použití“.
Roztok byl aplikován na ubrousek a ten byl položen přes tetování, překryt černým papírem nebo tenkou hliníkovou fólií a upevněn po dobu 30 minut. Přebytek roztoku byl odstraněn z povrchu pomocí vaty namočené v alkoholu. Procedura byla provedena pomocí diodového laseru ML662-SP („Mylon-Sigm Plus“, Rusko) s vlnovou délkou 662 nm., ozáření bylo provedeno podél vzoru bez zasažení okolní tkáně. Hustota expoziční dávky činila 120 J/cm2. Hodinu po ozařování kůže zrudla a v místě tetování svědila. Na konci druhého dne se vytvořil temně hnědý obrázek se zarudlým okrajem 1 mm. Za dva týdny se vytvořila nekróza v místě tetování ve formě suché tmavé hnědé krusty. O dva týdny později se odstranila krusta spolu s tetováním. Při menší dávce světla postup je bez nekrózy, ale je v tomto případě nutné opakovat postup. Měkká růžová tkáň se
-23CZ 304591 B6 tvoří v místě tetování za 6 týdnů jako výsledek PDT, tato tkáň se trochu liší od okolní kůže, je pozorován dobrý kosmetický účinek.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY ίο 1. Fotosenzibilizátor obsahující chlorin ve formě soli alkalického kovu, vyznačený t í m , že chlorin se skládá z chlorinů e6 (13-karboxy-17-[2-karboxyethyl]-15-karboxymethyl17,18-/ra«.s-dihydro-3-vinyl-8-ethy 1-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce I o obsahu 80 až 90 %, purpurinu 5 (13-karboxy-17-[2-karboxyethyl]-15-formy-17,18-/ra«s-dihydro-3-vinyl-8-ethyl-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce II (II), o obsahu 5 až 20 % a purpurinu 18 - chlorinů p6 (13-karboxy-17-[2-karboxyethyl]-15karboxy-17,18-/ra«.s-dihydro-3-vinyl-8-ethyl-2,7,12,18-tetramethylporfyrin), vzorce III-24CZ 304591 B6 do chybějícího zbytku, tak že uvedené složky tvoří směs.
- 2. Fotosenzibilizátor podle nároku 1, vyznačující se tím, že sodík je použit jako alkalický kov.
- 3. Fotosenzibilizátor podle nároku 1, vyznačující se tím, že draslík je použit jako alkalický kov.
- 4. Způsob výroby fotosenzibilizátoru, vyznačující se tím, že Spirulina biomasa je zpracována s acetonem, dokud se nevyextrahuje všechen chlorofyl a, biomasa je filtrována nebo centrifugována, extrakt je zpracován s kyselinou, čímž se odstraní hořčík z molekuly chlorofylu a hydrolyzuje s fýtylová esterová skupina a výsledný feoforbid a derivát reaguje se silnou anorganickou bází, vyznačený tím, že po zpracování extraktu s kyselinou kvůli odstranění hořčíku z molekuly chlorofylu je extrakt neutralizován a vysrážený feofytin a je zfiltrován, pak hydrolyzován ve směsi kyselina chlorovodíková aceton-hexan, 6 až 16 ml acetonu, 0,6 až 6 ml hexanu a 5 až 10 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové je použito na 1 g surového feofytinu a, směs je zahřívána na 40 až 60 °C a míchána 20 minut až 1 hodinu, pak je přidán hexan 6 až 16 ml, a organická fáze je promyta směsí acetonu a kyseliny chlorovodíkové 2 až 10:1, vodná fáze je promyta hexanem, vodná fáze obsahující feoforbid a je neutralizována přebytkem vodného roztoku citrátu sodného, tri-, di-, mono-substituovaného, vysrážený feoforbid aje zfiltrován, promyt vodou, rekrystalizován ze směsi aceton-voda, sušen vzduchem do konstantní hmotnosti, pak rozpuštěn v acetonu, je přidána silná anorganická báze ve formě vodného roztoku o koncentraci 0,005 až 1,0 %, roztok míchán při 30 až 60 °C po dobu 5 až 30 minut, přidán další objem silné anorganické báze za vzniku vodného roztoku o koncentraci 1 až 50 %, směs je zahřívána při 40 až 60 °C po dobu 20 až 90 minut, neutralizována zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, sraženina chlorinů e6 je odstraněna centrifugací, promyta destilovanou vodou až zmizí kyselá reakce, je získán 55 až 80% chlorin e6, ten je rekrystalizován z acetonu proto, aby se oddělily tetrapyrroly, chlorin e6 je zfiltrován a promyt destilovanou vodou, zahříván v utěsněné nádobě při teplotě 40 až 100 °C po dobu 1 hodiny až 30 dnů, ochlazen aje přidán silný roztok báze, dokud pH není v rozmezí 7,5 až 8,5, pak je roztok upraven apyrogenní vodou pro injekční použití za vzniku roztoku fotosenzibilizátoru o koncentraci 6,5 až 7,5 % hmotnostních.
- 5. Způsob výroby fotosenzibilizátoru podle nároku 4, vyznačující se tím, že po kroku přidání silného roztoku báze, dokud pH není v rozmezí 7,5 až 8,5, je směs gelově filtrována za vzniku chlorinů e6 o obsahu 80 až 90 %, purpurinu 5 do 5 až 20 % a purinu 18 do zbytku, pak je přidán zředěný roztok kyselin chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, roztok je upraven apyrogenní vodou pro injekční použití na koncentraci fotosenzibilizátoru 6,5 až 7,5 % hmotnostních, takže je získán „Kapalný extrakt chlorinů“.
- 6. Způsob výroby fotosenzibilizátoru podle nároku 5, vyznačující se tím, že po kroku gelové filtrace je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibili-25CZ 304591 B6 zátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugována jsou přidané pomocné látky povolené RF State Pharmacopeia, dokud pH je 7,5 až 8,5, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 0,1 až 1 % hmotnostní, pak jsou odfiltrované baktérie.
- 7. Způsob výroby fotosenzibilizátoru podle nároku 5, vyznačující se tím, že po kroku gelové filtrace je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugována, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 6,5 až 7,5 % hmotnostní, „Kapalný extrakt chlorinů“ je dispergován v gelovém substrátu podle následujícího poměru: 0,5 až 12 % hmotnostních „Kapalný extrakt chlorinů“, 5 až 20 % hmotnostních dimethylsulfoxid, zbytek voda, pomocné látky schválené od RF State Pharmacopeia a gelový substrát.
- 8. Způsob výroby fotosenzibilizátoru podle nároku 5, vyznačující se tím, že po kroku gelové filtrace je přidán zředěný roztok kyseliny chlorovodíkové, dokud je fotosenzibilizátor vysrážený, pak je sraženina odfiltrována nebo centrifugována, je přidána apyrogenní voda pro injekční použití tak, že koncentrace fotosenzibilizátoru je 6,5 až 7,5 % hmotnostní, a výsledný „Kapalný extrakt chlorinů“ je rozpuštěn v dimethylsulfoxidu podle následujícího poměru: 0,5 až 12 % hmotnostních „Kapalný extrakt chlorinů“ a zbytek dimethylsulfoxid.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001108397/14A RU2183956C1 (ru) | 2001-03-30 | 2001-03-30 | Фотосенсибилизатор и способ его получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20032940A3 CZ20032940A3 (cs) | 2004-04-14 |
| CZ304591B6 true CZ304591B6 (cs) | 2014-07-23 |
Family
ID=20247772
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003-2940A CZ304591B6 (cs) | 2001-03-30 | 2001-10-04 | Fotosenzibilizátor a způsob jeho přípravy |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6969765B2 (cs) |
| EP (1) | EP1380295B1 (cs) |
| KR (1) | KR100628548B1 (cs) |
| CN (1) | CN1250294C (cs) |
| AT (1) | ATE426403T1 (cs) |
| AU (1) | AU2002212867B2 (cs) |
| BG (1) | BG108534A (cs) |
| BR (1) | BR0116952A (cs) |
| CA (1) | CA2440650C (cs) |
| CZ (1) | CZ304591B6 (cs) |
| DE (1) | DE60138141D1 (cs) |
| GB (1) | GB2389531B (cs) |
| HR (1) | HRP20030876B1 (cs) |
| HU (1) | HU227756B1 (cs) |
| MX (1) | MXPA03008925A (cs) |
| NO (1) | NO327751B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ528237A (cs) |
| PL (1) | PL206902B1 (cs) |
| RU (1) | RU2183956C1 (cs) |
| SI (1) | SI1380295T1 (cs) |
| SK (1) | SK287784B6 (cs) |
| WO (1) | WO2002078694A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200308407B (cs) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2228750C1 (ru) * | 2002-09-13 | 2004-05-20 | Мещерякова Аделия Леонидовна | Способ получения хлорина е6 |
| RU2228775C1 (ru) * | 2002-10-01 | 2004-05-20 | Общество с ограниченной ответственностью "РАДА-ФАРМА" | Способ фотодинамического лечения острого и хронического гнойного гайморита |
| WO2004110438A1 (en) * | 2003-06-17 | 2004-12-23 | Peter Timofeevich Petrov | Agent for photodynamic diagnosis and therapy of oncological diseases |
| RU2244533C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-20 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ электрохимической деструкции, хирургического удаления и фотодинамической профилактики рецидивов внутриглазных новообразований в среде перфторорганического соединения (варианты) |
| RU2243755C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-10 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ хирургической электрохимической деструкции и фотодинамического лечения внутриглазных новообразований |
| RU2243753C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-10 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ хирургического фотодинамического лечения хориоидальных гемангиом |
| RU2244532C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-20 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ хирургического фотодинамического лечения субретинальных неоваскулярных мембран (варианты) |
| RU2244531C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-20 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им.акад. С.Н.Федорова | Способ электрохимической деструкции, хирургического удаления и фотодинамической профилактики рецидивов внутриглазных новообразований (варианты) |
| RU2243748C1 (ru) * | 2003-07-01 | 2005-01-10 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ хирургического удаления и фотодинамической профилактики рецидивов субретинальных неоваскулярных мембран |
| CA2437638A1 (en) * | 2003-08-20 | 2005-02-20 | John Robert North | Photodynamic therapy |
| GB0323358D0 (en) * | 2003-10-06 | 2003-11-05 | Green Grass Design Ltd | Novel compounds and processes |
| RU2256446C1 (ru) * | 2003-10-22 | 2005-07-20 | Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова | Способ профилактики метастазов после хирургического удаления внутриглазных новообразований |
| PL368213A1 (en) * | 2004-05-25 | 2005-11-28 | ADAMED Sp.z o.o. | New coupling, method for its fabrication and its application |
| US8349335B2 (en) * | 2006-11-03 | 2013-01-08 | Gwangju Institute Of Science And Technology | Methods for preparing chlorophyll a and chlorin e6 |
| RU2345803C2 (ru) * | 2006-11-30 | 2009-02-10 | Закрытое Акционерное Общество "Исследовательские лаборатории "РАДА-ФАРМА" | Способ фотоиммунотерапии фотосенсибилизатором, активируемым волновой энергией вне организма человека |
| KR100808630B1 (ko) * | 2006-12-28 | 2008-02-29 | 광주과학기술원 | 클로린 화합물을 포함하는 경구투여용 항종양 조성물 |
| RU2330037C1 (ru) * | 2006-12-28 | 2008-07-27 | Гелий Васильевич Пономарев | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛОРИНА e6 |
| CN100496516C (zh) * | 2007-12-03 | 2009-06-10 | 贵州圣济堂制药有限公司 | 一种螺旋藻组合物及其制备方法与应用 |
| RU2367434C1 (ru) * | 2008-04-22 | 2009-09-20 | Виктор Александрович Борисов | Фотосенсибилизатор и способ его получения |
| RU2428175C2 (ru) * | 2008-06-02 | 2011-09-10 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Способ получения парентерального фармацевтического раствора |
| KR100896327B1 (ko) * | 2008-09-09 | 2009-05-07 | 다이아텍코리아 주식회사 | 스피루리나로부터 클로로필 ａ 및 클로린을 제조하는 방법 |
| KR100918810B1 (ko) | 2009-04-29 | 2009-09-25 | 다이아텍코리아 주식회사 | 클로린 ｅ６-엽산 결합 화합물을 함유하는 암 치료용 약학적 조성물 |
| JP2011518890A (ja) | 2009-04-29 | 2011-06-30 | ドイアテクフ コリア シーオー．，エルティーディー． | 新規のクロリンｅ６−葉酸結合化合物、その製造方法、およびそれを含有する癌治療用薬学的組成物 |
| ES2354096B1 (es) * | 2009-07-27 | 2012-02-23 | Nuevas Tecnologias Cientificas, S.A. | Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. |
| KR100950441B1 (ko) * | 2009-09-30 | 2010-04-02 | 주식회사 아큐텍 | 스피루리나로부터 클로로필 ａ 및 포토디타진을 제조하는 방법 |
| RU2428981C1 (ru) * | 2010-03-31 | 2011-09-20 | Анатолий Юрьевич Барышников | Средство для фотодинамической терапии, способ получения предлагаемого средства и способ проведения фотодинамической терапии с использованием предлагаемого средства |
| RU2490273C1 (ru) * | 2012-02-27 | 2013-08-20 | Оскар Иосифович Койфман | Способ получения метилфеофорбида (а) |
| PL2931728T3 (pl) * | 2012-12-14 | 2020-11-02 | Rmw Cho Group Limited | Pochodna chloryny przydatna w terapii fotodynamicznej i diagnostyce |
| RU2523380C1 (ru) * | 2013-05-21 | 2014-07-20 | Общество с ограниченной ответственностью "ГЕЛИОХЛОРИН" | Фотосенсибилизатор и способ его получения |
| CN105777760A (zh) * | 2014-12-23 | 2016-07-20 | 深圳市中兴扬帆生物工程有限公司 | 四间-羟基苯基二氢卟酚原料药的保存方法 |
| CN106349736A (zh) * | 2016-08-05 | 2017-01-25 | 雷春生 | 一种纯有机光敏染料的制备方法 |
| KR102357787B1 (ko) * | 2016-12-14 | 2022-02-03 | 동성제약주식회사 | 고순도 트리소듐 클로린 e6(trisodium Chlorin e6)와 PVP (polyvinylpyrrolidone)의 복합체 제조 방법과 Chlorin e6의 제조 방법 |
| RU2670087C1 (ru) * | 2018-01-29 | 2018-10-18 | Михаил Александрович Грин | Фотосенсибилизатор для лечения рака предстательной железы и способ его получения |
| RU2691754C1 (ru) * | 2018-11-15 | 2019-06-18 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского" | ПРОИЗВОДНОЕ ЦИНКОВОГО МЕТАЛЛОКОМПЛЕКСА ХЛОРИНА-e6 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ |
| CN112521392A (zh) * | 2019-09-18 | 2021-03-19 | 康俄(上海)医疗科技有限公司 | 一种二氢卟吩e6的纯化方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5216012A (en) * | 1986-01-02 | 1993-06-01 | University Of Toledo | Production and use of purpurins, chlorins and purpurin- and chlorin-containing compositions |
| RU2152790C1 (ru) * | 1999-05-12 | 2000-07-20 | Мещерякова Аделия Леонидовна | Средство для фотодинамической диагностики и терапии онкологических заболеваний |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3102891A (en) | 1959-11-16 | 1963-09-03 | Elmer A Allen | New porphyrinic and chlorophyllic compositions and process therefor |
| US4977177A (en) | 1985-04-30 | 1990-12-11 | Nippon Petrochemicals Company, Ltd. | Tetrapyrrole polyaminomonocarboxylic acid therapeutic agents |
| ATE87826T1 (de) * | 1986-01-02 | 1993-04-15 | Univ Toledo | Herstellung und verwendung von purpurinen, chlorinen und purpurin und chlorin enthaltenden zubereitungen. |
| US5534506A (en) * | 1986-01-02 | 1996-07-09 | University Of Toledo | Use of purpurins, chlorins and purpurin- and chlorin-containing compositions |
| US5002962A (en) | 1988-07-20 | 1991-03-26 | Health Research, Inc. | Photosensitizing agents |
| JP2963178B2 (ja) | 1990-09-27 | 1999-10-12 | 株式会社エス・エル・ティ・ジャパン | 水溶性フェオホーバイドａの製造方法 |
| US5330741A (en) * | 1992-02-24 | 1994-07-19 | The Regents Of The University Of California | Long-wavelength water soluble chlorin photosensitizers useful for photodynamic therapy and diagnosis of tumors |
| US5807881A (en) * | 1992-05-27 | 1998-09-15 | Quadra Logic Technologies, Inc. | Method for selectively reducing activated leukocyte cell population |
| RU2054476C1 (ru) * | 1993-07-14 | 1996-02-20 | Мещерякова Аделия Леонидовна | Способ получения 18-карбокси-20-(карбоксиметил)-8-этенил-13-этил-2,3-дигидро-3,7-12,17-тетраметил-21н, 23нпорфин-2-пропионовой кислоты или ее солей |
| IL116126A0 (en) * | 1995-11-24 | 1996-01-31 | Yeda Res & Dev | Process for the preparation of bacteriochlorophyllis some novel compounds of this type and pharmaceutical compositions comprising them |
| GB9700396D0 (en) * | 1997-01-10 | 1997-02-26 | Photocure As | Photochemotherapeutic compositions |
-
2001
- 2001-03-30 RU RU2001108397/14A patent/RU2183956C1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 CA CA002440650A patent/CA2440650C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-04 NZ NZ528237A patent/NZ528237A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 CZ CZ2003-2940A patent/CZ304591B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 EP EP01981209A patent/EP1380295B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-04 DE DE60138141T patent/DE60138141D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-04 HR HR20030876A patent/HRP20030876B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 HU HU0400298A patent/HU227756B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 PL PL365102A patent/PL206902B1/pl unknown
- 2001-10-04 US US10/473,445 patent/US6969765B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-04 SK SK1348-2003A patent/SK287784B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 WO PCT/RU2001/000399 patent/WO2002078694A1/ru not_active Ceased
- 2001-10-04 BR BR0116952-1A patent/BR0116952A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 GB GB0321726A patent/GB2389531B/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-04 SI SI200130919T patent/SI1380295T1/sl unknown
- 2001-10-04 MX MXPA03008925A patent/MXPA03008925A/es active IP Right Grant
- 2001-10-04 AT AT01981209T patent/ATE426403T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-10-04 AU AU2002212867A patent/AU2002212867B2/en not_active Ceased
- 2001-10-04 KR KR1020037012876A patent/KR100628548B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-04 CN CNB018230938A patent/CN1250294C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-09-29 NO NO20034344A patent/NO327751B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-10-29 ZA ZA2003/08407A patent/ZA200308407B/en unknown
-
2004
- 2004-01-16 BG BG108534A patent/BG108534A/bg unknown
-
2005
- 2005-06-30 US US11/171,076 patent/US7550587B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5216012A (en) * | 1986-01-02 | 1993-06-01 | University Of Toledo | Production and use of purpurins, chlorins and purpurin- and chlorin-containing compositions |
| RU2152790C1 (ru) * | 1999-05-12 | 2000-07-20 | Мещерякова Аделия Леонидовна | Средство для фотодинамической диагностики и терапии онкологических заболеваний |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ304591B6 (cs) | Fotosenzibilizátor a způsob jeho přípravy | |
| ES2450136T3 (es) | Proceso para la preparaci�n de clorinas y sus usos farmace�ticos | |
| AU771292B2 (en) | Palladium-substituted bacteriochlorophyll derivatives and use thereof | |
| JPS625924A (ja) | 新規なテトラピロ−ルポリアミノモノカルボン酸医薬用組成物 | |
| TWI736577B (zh) | ５-胺基乙醯丙酸和其衍生物的鹽 | |
| CN111925369B (zh) | 一类β-咔啉氰基呋喃衍生物及其制备方法与应用 | |
| JPS625912A (ja) | 新規なテトラピロ−ル医薬用組成物 | |
| Zhang et al. | Photodynamic efficiency of a chlorophyll-a derivative in vitro and in vivo | |
| CN117126156A (zh) | 一种苯并硒二唑衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN116425732B (zh) | 一种具有线粒体靶向功能的光可控释放no并开启光动力效果的光敏剂及其制备方法和应用 | |
| CN114409687B (zh) | 一种可在肿瘤内切换光治疗模式的光敏药物及其制备方法和应用 | |
| EP1250339B1 (en) | Porphyrins and related compounds | |
| JP2004512270A (ja) | ジヒドロポルフィリンの誘導体とその使用 | |
| CN106083872B (zh) | 紫红素-18醚类衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN112263566A (zh) | 白蛋白结合型缺氧氧化双响应性复合纳米粒、制备方法及用途 | |
| CN117362332B (zh) | 一种具有i型光敏反应和光热协同效应的二元酞菁及其制备和应用 | |
| RU2576025C1 (ru) | Способ получения композиции для фотодинамической терапии в форме фосфолипидных наночастиц на основе глюкаминовой соли хлорина е6, мальтозы и фосфатидилхолина | |
| JP7323259B2 (ja) | 高ヒペリシン含有ヒペリシン－ｐｖｐ複合体 | |
| CN120383617A (zh) | 光敏剂化合物、化疗药物前药及其应用 | |
| CN115806566A (zh) | 一种用于克服肿瘤氧异质性分布的硝基还原酶激活的多功能分子前药的制备方法及其应用 | |
| CN120309558A (zh) | 一种基于吩噻嗪细胞膜靶向光敏剂及其制备方法和应用 | |
| EA036853B1 (ru) | Фармацевтическая композиция |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20161004 |