CZ315794A3 - Process for preparing c protein - Google Patents
Process for preparing c protein Download PDFInfo
- Publication number
- CZ315794A3 CZ315794A3 CZ943157A CZ315794A CZ315794A3 CZ 315794 A3 CZ315794 A3 CZ 315794A3 CZ 943157 A CZ943157 A CZ 943157A CZ 315794 A CZ315794 A CZ 315794A CZ 315794 A3 CZ315794 A3 CZ 315794A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- temperature
- recombinant
- cells
- cell line
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 claims description 28
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims description 27
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims description 27
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 claims description 2
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 claims 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 62
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract description 5
- 101500025568 Homo sapiens Saposin-D Proteins 0.000 description 25
- 229940100689 human protein c Drugs 0.000 description 25
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 24
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 101710140994 Secreted protein C Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 3
- JLPULHDHAOZNQI-AKMCNLDWSA-N [3-hexadecanoyloxy-2-[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienoyl]oxypropyl] 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-AKMCNLDWSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 description 1
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000019 pro-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6464—Protein C (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález spadá do oboru molekulární biologie a především se týká způsobu produkce vysoceúrovněvého funkčního rekombiriantního proteinu C v linii savčích buněk.
Dosavadní stav techniky četné proteiny prodělávají extenzivní posttranslačrií modifikaci v průběhu zrání- Lidský protein C (HPC) se gamma karboxyluje, beta-hydroxyluje a glykosyluje v průběhu translace nebo brzy Po translaci primárního RNA trarisktiptu- Mnohé buněčné linie, například linie buněk AV12 syrského křečka, jsou neschopné účinně zpracovávat tyto posttranslačrií modifikace, a proto molekuly proteinu C, produkované těmito liniemi buněk, nejsou plně funkčníJiné linie buněk, například linie buněk lidské ledviny 293, produkují plně funkční molekuly proteinu C, avšak úrovně exprese molekul proteinu C v těchto buněčnýcvh liniích jsou Poněkud nízké. Vynález se zaměřuje na zvýšení úrovně produkce plně funkčního Proteinu C v takových liniích buněk, které obvykle neprodukují plně funkční molekuly. Vynález se také týká způsobu zvýšení úrovně celkové Produkce molekul Proteinu C v takových liniích buněk, které zpravidla produkují Plně funkční molekuly- Způsoby podle vynálezu se zaměřují na kultivaci buněčných linii, které produkují Protein C za vyšších teplot, než je běžná inkubační teplota 37 C.
P od sta ta v yná1ezu
Podstata způsobu zvýšené produkce proteinu C v aderiovirem transformovaných rekombinantních savčxch hostitelskyoh Luúk-ách spočívá podle vynálezu v tom, že se kultivují, aderiovirem transformované rekombinantní savčí hostitelské buňky za teploty přibližně 33 až přibližně 39 *C. Používané výrazy mají následující význam =
Výrazem linie buněk transformovaných adenovirem se rozumí linie buněk, která expresu je E1A genový produkt aderioviruVýrazem lidský protein C se míní lidský protein C zymogeri a aktivovaný lidský protein C.
Výrazem riascentrií protein se míní polypeptid produkovaný Po translaci mRNA transkriptu před jakoukoliv post trarislační modifikací- Avšak posttranslaění modifikace, jako gamma-karboxylace glutamovových kyselinových zbytků a hydroxylace asparagové kyseliny, může začít před tím, kdy je protein plně trarislatován z mRNA' transkriptu.
Výrazem aktivita proteinu C se vždy míní jakákoliv vlastnost lidského proteinu C, zodpovědná za proteolytickou. amidolytickou, esterolytickou a biologickou (aritikoagulaěrií nebo profibrinolytickou) účinnost. Způsoby zkoušení proteinové antikoagulačrií aktivity jsou v oboru o sobě dobře známy (například Grirmell a kol-, 1987 8io/Techriology 5, str- 1189 až 1192).
Výrazem “zymogeri se vždy míní enzymaticky neaktivní prekursor proteolytického enzymu. Protein C zymogeri se vždy vztahuje na sekretovarié, irtaktivrií formy ať již jedriořetězcového nebo dvouřetězcového proteinu C.
Všecha označení aminokyselin jsou v souhlase se zavedením Amerického úřadu pro Patenty a ochranné známky 37 C.F.R. §
1,822(b)(2)(1990).
Vynález se týká způsobu zvyšování produkce proteinu C v rekombiriaritrií hostující buňce transformované adenovirem. Způsob zahrnuje kultivaci adenovirem transformované rekombinaritrií savčí hostující buňky při teplotě přibližně 38 až přibližně 39 ’C. Vynález se také týká způsobu zvyšování produkce funkčního proteinu C v adenovirem trarisformované rekombinaritrií savčí hostující buňce zahrnující kultivaci hostující buňky při teplotě přibližně 38 až Přibližně 39 C.
Pro produkci rekominaritríího lidského Proteinu C se použilo mnoho buněčných linií. Jelikož však molekuly lidského Proteinu C Podléhají extenzivní, post trarislační modifikaci, většina linií běžných buněk bud neprodukuje plně funkční Protein C nebo Pokud je Plně funkční protein C produkován linií buněk, hladina exprese r»ebo-sekrece zůstává poměrně nízkáNormálně se kultury savčích buněk irikubuji při teplotě 37 “C. Jestliže se při teplotě 37 -*C irikubuje adenovirem transformovaná buněčná line syrského křečka AV12-664 (ATCC CR|_ 9595), obsahující plasmid kódující, gen lidského proteinu C, produkuje linie buněk protein C, který Je Jen ze 40 až 50 % plně gamma-karboxylován, což vede k nízké funkčnosti proteinu C v surovém kultivačním prostředí. Jestliže se stejná linie buněk inkubuje při teplotě 38,5 až 39 “C, funkční aritikoagulační aktivita sekretovaného proteinu C v kondicionovaném kultivační prostředí vzroste- Míra sekrece proteinu C z této linie buněk, irikubované při zvýšené teplotě, je přibližně o 20 až 30 % riižSÍ než míra sekrece Při teplotě 37 *C, avšak tento pokles míry sekrece je vyvážen zvýšením funkčnosti sekretovaného proteinu C.
Buňky lidské ledviny 293 (ATCC CRl 1573) se transformují Primárně embryonálními lidskými ledvinovými buňkami, které obsahují a expresují tranformující gen adenoviru 5. Těchto buněk se Používá k expresi některých důležitých genových produktů a byly Použity v četných různých laboratořích jak výzkumných tak průmyslových. Například Yan (americký patetriový spis číslo 4 981952) a Bang a kol- (americký patetriový spis číslo 4 992373) popisují Použití linie buněk 293 k produkci lidského proteinu C: Linie buněk 293 lidské embryonální ledviny sekretuje plně gamma-karboxylovariý lidský protein C při uchovávání exprese plasmidu kódujícího gen lidského proteinu C. Při kultivaci při teplotě 37 C tato linie buněk 293 sekretuje rekombiriantní lidský protein C se specifickou aktivitou Přibližně 350 J/mg. Zvýšení růstu teploty těchto rekombinaritních buněk 293 nevede ke zvýšení funkčnosti sektretovaného Proteinu C (jelikož poroteiri C z této linie buněk je již plně gamma-karbrjxylován) - Avšak rekombiriantní buňky 293, rostoucí při teplotě 38 až 39 C vykazují vzrůst míry sekrece proteinu C ve srovnání se stejnými buňkami, rostoucími při teplotě 37 C. Pro účely vynálezu se vzrůstem produkce proteinu C vždy míní bud vzrůst celkové sekrece proteinu C buněčnou řadou nebo vzrůst funkčnosti tohoto sekretovaného Proteinu C.
----- Pracovníkům v oboru je jasné, že vynález není omezen na použití aderiovirem transformované buněčné linie lidské zárodečné ledviny nebo aderiovirem transformované buněčné linie syrského křečka AV12-664. Pro produkci liského proteinu C jsou dostupné četné linie savčích buněk. Například HepG2 linií buněk je linie buněk lidských Jater, které se Používá Pro produkci lidkého proteinu C. Linie buněk BHK (Baby Hamster Kidney ledvina zárodku křečka), SA7 linie buněk, SV20 linie buněk, FAZA linie buněk a MK2 linie buněk se rovněž Použilo k produkci lidského proteinu C. Jakkoliv ne všechny linie buněk shora uvedené Jsou aderiovirem transformovanými liniemi buněk, je pracovníkům v oboru jasné, že mnohé linie savčích buněk se mohou transf armovat aderiovirem k vytvoření specifických aderiovirem transformovaných linií buněk, kterých se může Používat při způsobu podle vynálezuPřipomíná se rovněž, že způsob podle vynálezu není omezen toliko na teplotu 38 *C a 39 C. Mnohé savčí fermeritace se provádějí při teplotě 37 *C, jakkoliv se zjistilo, že fermantační teplota přibližně 38 ‘C vede k vyšší Produkci proteinu C v případě aderiovirem transf armovaných buněk. V mnoha takových f ermeritačriích nádobách a teplých místnostech může teplota kolísat až o 0,5 C, Přičemž výrazem přibližně se zde vždy míní teplota v rozsahu ± 0,5 *C uvedené teploty- Proto se výrazem přibližně 38 'C míní teplota 37,5 až 38,5 *C. Kromě toho se výrazem přibližně 39 “C míní teplota 38,5 až 39,5 “C. Většina savčích buněk, již dobře neroste, když teplota dosáhne 40 *C. Výhodnými jsou pro způsob podle vynálezu teploty přibližně 38 až přibližně 39 *C, přičemž nejvýhrjdnější teplotou podle vynálezu je irikubačrií teplota adenovirem transformované buněčné linie 39 C.
Pracovníkům v oboru je také zřejmé, že způsob podle vynálezu umožňuje jednou až několikrát snadnější selekci takových klenů, které expresují vysoké úrovně proteinu C. Například když hladina sekrece proteinu C z linie buněk vzroste, jsou snadnější, zkoušky na molekulu v surovém prostředí. proto je snadnější selekci-· klonu, který expresuje nejvySšl hladinu žádaného produktu- Střední vzrůst hladiny exprese pro klony izolované při teplotě 39 “C jsou přibližně 69 až 93 % ve srovnáni s klony Izolovanými při teplotě 37 *C.
Následujíc! Příklady praktického provedeni vynález Pouze objasňuji, nijak jej však neomezujiPříklady provedeni
Přiklad 1
Produkce liského Proteinu C v 293 buňkách
Rekombinaritní lidský protein C (rHPC = recombinarit humar» protein C) se produkuje v buňkách 293 lidské ledviny o sobě známým způsobem pracovníkům v oboru, například způsobem, který popsal Yari (americký patetnový spis číslo 4 981952). Gen, kódující lidský protein C, popsal Bang a kol- (americký Patetnový spis číslo 4 775624). Plasmidem, používaným pro expresi lidského Proteinu C v 293 buňkách je plasmid PL.PC, který popsal Bang a kol. (americký patetnový spis Číslo 4 992373), Konstrukce plasmidu
PLPC je rovněž popsána v evropské zveřejněné přihlášce vynálezu číslo 0 445939 a také ji. popsal Grinnel a kol. (Bio/Technology 5, str- 1189 až 1 192, 1987). Stručně řečeno se plasmid pl_PC transfektuje do 293 buněk, pak se identifikují stabilní transformanty a subkultivují se- Kolny, které vykazují nejvyšší hladinu exprese se různě označí (například CC35 a CC31-1) a nechávají se růst za standardních podmínek pro kultivaci buněk. Nebo se plasmidu pGTC používá k vytvoření stabilně transformované linie buněk GT-21. Konstrukce Plasmidu pGTC je PoPsária v evropské zveřejněné Přihlášce vynálezu číslo 0 445 939. Po růstu při teplotě 37 C se lidský protein C může oddělit od kultivační, kapaliny způsoben, který Popsal Yan (americký patetnový spis číslo 4 981952). Takto produkovaného lidského proteinu C se může Použít v neaktivované zymogenové formě nebo se může aktivovat o sobě známými způsoby pracovníkům v oboru- Stejné klony se také nechají růst. za stejných podmínek při teplotě 39 C. Výsledky J ,.i: v násl cdu j ťo)' tabulce 1 .
Tabulka I
| Vliv rů | stové teploty na | mriožs t ví p roteinu | C sekretovarié 293 |
| buňkami | |||
| Klon | ng/106/den/@37 ”C | ng/106/deri/@39 C | Procentový vzrůst |
| CC35 | 395 | 663 | 68 |
| CC35 | 425 | 664 | 56 |
| GT-21 | 237 | 747 | 215 |
| CC31-1 | 1164 | 2361 | 103 |
| CC35 | 824 | 1227 | 49 |
| CC35 | 2100 | 3906 | 86 |
I když buňky rostou za různé hustoty buněk, poskytuji různou hladinu exprese na buňku (například CC35), přičemž se však pozoruje vzrůst sekrece při teplotě 39 ’C.
Příklad 2
Produkce liského Proteinu C v AV12-664 buňkách
Lidský protein C se produkuje za použití placmidu PLPC v podstatě způsobem, který je popsán v příkladu 1 s tou výjimkou, že se Použijí AVI 2-664 buňky syrského křečka místo 293 buněk lidské embryonální ledviny. Funkční antikoagulační aktivita se měří způsobem, který popsal Grinnell a kol., (Bio/TechnoloSy 5, str1189 až 1192, 1987). Výsledky jsou v následující tabulce II.
Tabulka II
Vliv růstu teploty na funkční antikoagulační aktivity lidského Proteinu C, Produkovaného AV12-664 buňkami Teplota ’C 39 C
Jednotky/mg 216 ± 62 460 ± 19
Průmyslová.....využitelnost
Způsob produkce vysokých hladin funkčních rekombinantních Proteinů v adenovirem trarisformovaných savčích buňkách Inkubací buněk, schopných produkovat rekombiriantní proteiny, při teplotě přibližně 38 až přibližně 39 *C umožňuje vyšší hladiny exprese proteinu jako celku v některých liniích buněk a vyšší hladiny funkčního proteinu v ostatních liniích buněk.
6 l< 7 ‘ , 01? CG
Claims (1)
- PATENTOVĚ NÁROK Y i____ ί C (| 1 j Q1. Způsobu zvýšené produkce proteinu C v adenovirem transfórI t mávaných rekombiriaritriich savčích hostitelských buňkách v y z ij ač u J i c í s -e t i m , že kultivuje, adenovirem transformovaná r ekombinaritrií savčí hostitelská buňka za teploty přibližné 38 až Přibližně 39 *C.2. Způsob podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že r ekombinaritrií savčí hostitelskou buňkou je 293 buňka -
3. Způsob podle nároku 1, vyznačuj í c í s e t í m, že irikubačrií teplota je přibližně 38 C. 4. Způsob že irikubačrií Podle nároku 1, v y z n teplota je přibližně 39 a č u j “C. ící s e tím, 5. Způsob že. irikubačrií Podle nároku 2, v y z n teplota je přibližně 36 a č u j C . í c. í s e t í m, 6 - Způsob že irikubačrií podle nároku 2, v y z n teplota je Přibližně 38 a č u j ,5 *C. í c í s e t í m, 7 - Způsob že. irikubačrií Podle nároku 2, v y z n teplota je Přibližně 39 a č u j “C . í c í s e t í m, 8. Způsobu zvýšení hladiny gamma-karboxylace rekombinantriě produkované molekuly proteinu C v y z n a č u j í c í s e t í m , že se kultivuje rekombinantné produkovaná molekula proteinu C v rekombinantní AV12 hostující buňce za teploty přibi l žně 38 až Přibližné 39 ‘C,9. Způsob Podle nároku 8, v y z n a c u j í o i s e t. í m, že se r ekombinaritrií AVI 2 hostu jí cl buňka kultivuje Při. teplotěPřibližné 3 8 C.10. Způsob podle nároku 3, vyznačuj í c í s e t i m, že se rekombinantní AV12 hostující buňka kultivuje při teplotě přibližně 39 *C. _ . . . V
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/168,035 US5618714A (en) | 1993-12-15 | 1993-12-15 | Methods for producing protein C |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ315794A3 true CZ315794A3 (en) | 1995-10-18 |
Family
ID=22609820
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ943157A CZ315794A3 (en) | 1993-12-15 | 1994-12-14 | Process for preparing c protein |
| CZ20012322A CZ290724B6 (cs) | 1993-12-15 | 2001-06-22 | Způsob zvýąení hladiny gama-karboxylace proteinu C |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20012322A CZ290724B6 (cs) | 1993-12-15 | 2001-06-22 | Způsob zvýąení hladiny gama-karboxylace proteinu C |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5618714A (cs) |
| EP (1) | EP0658626B1 (cs) |
| JP (1) | JP3662614B2 (cs) |
| KR (1) | KR950018454A (cs) |
| CN (1) | CN1107887A (cs) |
| AT (1) | ATE196165T1 (cs) |
| AU (1) | AU687914B2 (cs) |
| BR (1) | BR9404991A (cs) |
| CA (1) | CA2138101A1 (cs) |
| CO (1) | CO4340654A1 (cs) |
| CZ (2) | CZ315794A3 (cs) |
| DE (1) | DE69425809T2 (cs) |
| DK (1) | DK0658626T3 (cs) |
| ES (1) | ES2149244T3 (cs) |
| FI (1) | FI106385B (cs) |
| GR (1) | GR3034909T3 (cs) |
| HU (1) | HU219508B (cs) |
| IL (1) | IL111983A0 (cs) |
| NO (1) | NO944846L (cs) |
| NZ (1) | NZ270140A (cs) |
| PE (1) | PE42695A1 (cs) |
| PL (1) | PL176381B1 (cs) |
| PT (1) | PT658626E (cs) |
| RU (1) | RU2110574C1 (cs) |
| SI (1) | SI0658626T1 (cs) |
| UA (1) | UA26870C2 (cs) |
| YU (1) | YU73494A (cs) |
| ZA (1) | ZA949981B (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19724543A1 (de) * | 1997-06-11 | 1998-12-17 | Philips Patentverwaltung | Wechsler-Gerät für Informationsplatten |
| WO2002069232A2 (en) | 2001-02-19 | 2002-09-06 | Merck Patent Gmbh | Method for identification of t-cell epitopes and use for preparing molecules with reeduced immunogenicity |
| ATE386824T1 (de) | 2002-03-29 | 2008-03-15 | Merck & Co Inc | Verfahren zur virusproduktion |
| US20070142272A1 (en) * | 2003-01-24 | 2007-06-21 | Zlokovic Berislav V | Neuroprotective activity of activated protein c independent of its anticoagulant activity |
| JP2008507561A (ja) * | 2004-07-23 | 2008-03-13 | ザ ユニバーシティ オブ ロチェスター | 活性化プロテインｃによる、脳内のプラスミノゲン活性化因子の不都合な作用の阻害 |
| US20090148458A1 (en) * | 2005-06-23 | 2009-06-11 | The University Of British Columbia | Coagulation factor iii polymorphisms associated with prediction of subject outcome and response to therapy |
| CA2654761A1 (en) * | 2006-06-09 | 2007-12-13 | The University Of British Columbia | Interferon gamma polymorphisms as indicators of subject outcome in critically ill subjects |
| US20110171200A1 (en) * | 2008-01-15 | 2011-07-14 | Walley Keith R | Protein c rs2069915 as a response predictor to survival and administration of activated protein c or protein c-like compound |
| WO2012068519A2 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Sirius Genomics Inc. | Markers associated with response to activated protein c administration, and uses thereof |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4775624A (en) * | 1985-02-08 | 1988-10-04 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for expression of human protein C |
| US4968626A (en) * | 1985-08-15 | 1990-11-06 | Board Of Reagents Of The University Of Washington | DNA sequence coding for protein C |
| US4959318A (en) * | 1985-06-27 | 1990-09-25 | Zymogenetics, Inc. | Expression of protein C |
| EP0245949B1 (en) * | 1986-04-09 | 1997-10-29 | Eli Lilly And Company | A method of using eukaryotic expression vectors comprising the bk virus enhancer |
| AU8339187A (en) * | 1986-11-17 | 1988-06-16 | New England Medical Center Hospitals, Inc., The | Enhancing gamma-carboxylation of recombinant vitamin k-dependent proteins |
| US4992373A (en) * | 1987-12-04 | 1991-02-12 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for direct expression of activated human protein C |
| ZA889497B (en) * | 1987-12-28 | 1990-08-29 | Lilly Co Eli | Vectors and compounds for expression of zymogen forms of human protein c |
| JPH0246296A (ja) * | 1988-08-09 | 1990-02-15 | Hoechst Japan Ltd | 雑種プロテインｃ及びその製造方法 |
| US4981952A (en) * | 1988-10-04 | 1991-01-01 | Eli Lilly And Company | Method for the purification of vitamin K-dependent proteins |
| CA1332049C (en) * | 1988-10-07 | 1994-09-20 | Eli Lilly And Company | Eukaryotic expression |
| DK0485504T3 (da) * | 1989-08-11 | 1994-04-18 | Zymogenetics Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af aktiveret protein C ved celledyrkning |
| IL97312A (en) * | 1990-02-23 | 1999-01-26 | Lilly Co Eli | A method of generating a polypeptide in an eukaryotic vector AND recombinant surrogate cell containing an enhanced transcriptional control unit based on the primary late adenovirus coefficient |
| AU1180692A (en) * | 1991-01-29 | 1992-08-27 | Teijin Limited | Human protein c expression vector |
-
1993
- 1993-12-15 US US08/168,035 patent/US5618714A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-12-14 AT AT94309314T patent/ATE196165T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 CZ CZ943157A patent/CZ315794A3/cs unknown
- 1994-12-14 PT PT94309314T patent/PT658626E/pt unknown
- 1994-12-14 HU HU9403600A patent/HU219508B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 RU RU94043769A patent/RU2110574C1/ru active
- 1994-12-14 KR KR1019940034085A patent/KR950018454A/ko not_active Ceased
- 1994-12-14 BR BR9404991A patent/BR9404991A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 NZ NZ270140A patent/NZ270140A/en unknown
- 1994-12-14 YU YU73494A patent/YU73494A/sh unknown
- 1994-12-14 ZA ZA949981A patent/ZA949981B/xx unknown
- 1994-12-14 NO NO944846A patent/NO944846L/no not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 AU AU80452/94A patent/AU687914B2/en not_active Ceased
- 1994-12-14 CA CA002138101A patent/CA2138101A1/en not_active Abandoned
- 1994-12-14 CO CO94056544A patent/CO4340654A1/es unknown
- 1994-12-14 ES ES94309314T patent/ES2149244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 UA UA94129175A patent/UA26870C2/uk unknown
- 1994-12-14 EP EP94309314A patent/EP0658626B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DK DK94309314T patent/DK0658626T3/da active
- 1994-12-14 FI FI945877A patent/FI106385B/fi active
- 1994-12-14 DE DE69425809T patent/DE69425809T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PE PE1994257065A patent/PE42695A1/es not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 IL IL11198394A patent/IL111983A0/xx unknown
- 1994-12-14 SI SI9430347T patent/SI0658626T1/xx unknown
- 1994-12-15 CN CN94119106A patent/CN1107887A/zh active Pending
- 1994-12-15 JP JP31160994A patent/JP3662614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-15 PL PL94306291A patent/PL176381B1/pl unknown
-
2000
- 2000-11-24 GR GR20000402615T patent/GR3034909T3/el not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-22 CZ CZ20012322A patent/CZ290724B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Butler | Animal cell culture and technology | |
| Butler | Animal cell cultures: recent achievements and perspectives in the production of biopharmaceuticals | |
| US5510261A (en) | Method of controlling the degradation of glycoprotein oligosaccharides produced by cultured Chinese hamster ovary cells | |
| US8697440B2 (en) | Compositions and methods for producing gamma-carboxylated proteins | |
| Pitts et al. | Specificity of junctional communication between animal cells | |
| Kingston et al. | Amplification using CHO cell expression vectors | |
| CN110317790A (zh) | 一种分离和体外培养人胰腺癌组织类器官的方法 | |
| JPH0135638B2 (cs) | ||
| CZ315794A3 (en) | Process for preparing c protein | |
| JPH05103678A (ja) | チモーゲン型ヒトプロテインｃの発現のためのベクターおよび化合物 | |
| KR20080002949A (ko) | 감마 카르복실화를 필요로 하는 단백질 생산용 벡터를포함하는 호스트 세포 | |
| Vatandoost et al. | Efficient expression of functional human coagulation factor IX in stably-transfected Drosophila melanogaster S2 cells; comparison with the mammalian CHO system | |
| Rowland et al. | A baculoviral system for the production of human β-glucocerebrosidase enables atomic resolution analysis | |
| CA1054085A (en) | Urokinase production | |
| RU2259212C2 (ru) | Способ получения фармацевтически активных рекомбинантных белков | |
| US3930944A (en) | Urokinase production | |
| CN104726407A (zh) | 一种利用器官培养以增加成年神经组织中神经干细胞收获率的方法 | |
| Pörtner et al. | Perfusion-microcarrier cultivation of rCHO-cells in serum-free medium for production of human renin | |
| RU2469093C2 (ru) | ЭКСПРЕССИОННАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pCID-PROC, КОДИРУЮЩАЯ ПРОТЕИН С ЧЕЛОВЕКА, И КЛЕТОЧНАЯ ЛИНИЯ DG-CID-PROC-1, ПРОДУЦИРУЮЩАЯ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПРОТЕИН С ЧЕЛОВЕКА | |
| CN105745325A (zh) | 用于大量生产人凝血因子vii衍生物的方法 | |
| Yang et al. | Potential treatment of liver-related disorders with in vitro expanded human liver precursors | |
| Yoshigaki et al. | Gene transfer to primary culture of parotid acinar cells | |
| Singh et al. | Statistical Optimization of Aspartase Production from Aeromonas media NFB-5 in a Stirred Tank Reactor | |
| LEE et al. | 373-1, Kusong-Dong, Yusong-Gu, Daejon 305-701, Korea | |
| JP2013009623A (ja) | 無細胞系タンパク質合成系に関する迅速化法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |