PL176381B1 - Sposób wytwarzania białka C - Google Patents
Sposób wytwarzania białka CInfo
- Publication number
- PL176381B1 PL176381B1 PL94306291A PL30629194A PL176381B1 PL 176381 B1 PL176381 B1 PL 176381B1 PL 94306291 A PL94306291 A PL 94306291A PL 30629194 A PL30629194 A PL 30629194A PL 176381 B1 PL176381 B1 PL 176381B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- protein
- cells
- cell line
- human
- adenovirus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 title description 4
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 claims description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 26
- 101500025568 Homo sapiens Saposin-D Proteins 0.000 description 24
- 229940100689 human protein c Drugs 0.000 description 24
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 5
- 101710140994 Secreted protein C Proteins 0.000 description 4
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 4
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 3
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000019 pro-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6464—Protein C (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania bialka C w transformowanych adenowirusem rekombinacyj- nych komórkach gospodarza ssaczego, znamienny tym, ze transformowane adenowirusem rekombinacyjne komórki gospodarza ssaczego poddaje sie hodowli w temperaturze od okolo 38°C do okolo 39°C. PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania białka C, w szczególności sposób wytwarzania wysokich poziomów funkcjonalnego, rekombinacyjnego białka C w ssaczych liniach komórkowych.
Wiele białek ulega podczas dojrzewania rozległym modyfikacjom potranslacyjnym. Ludzkie białko C (HPC) jest gamma-karboksylowane, beta-hydroksylowane i glikozylowane podczas albo wkrótce po translacji pierwotnego transkryptu RNA. Wiele linii komórkowych, takich jak linia komórkowa AV12 chomika syryjskiego, nie jest zdolnych do efektywnego przeprowadzania tych modyfikacji potranslacyjnych, w związku z czym cząsteczki białka C wytwarzane w tych limach komórkowych nie są w pełni funkcjonalne. Inne linie komórkowe, takie jak linia komórkowa nerki ludzkiej 293, wytwarzają w pełni funkcjonalne cząsteczki białka C, ale poziomy ekspresji cząsteczek białka C w tych liniach komórkowych są niskie. Sposób według wynalazku pozwala na zwiększenie poziomu produkcji w pełni funkcjonalnego białka C w tych liniach komórkowych, które zwykle nie wytwarzają w pełni funkcjonalnych cząsteczek. Sposób według wynalazku pozwala również na zwiększenie całkowitego poziomu produkcji cząsteczek białka C w tych liniach komórkowych, które zwykle wytwarzają cząsteczki w pełni funkcjonalne. W sposobie według wynalazku wykorzystuje się hodowlę linii komórkowych wytwarzających białko C w temperaturach wyższych od zwykle stosowanej temperatury inkubacji 37°C.
176 381
Dla celów opisu wynalazku zastosowano zdefiniowane poniżej określenia.
Linia komórkowa transformowana adenowirusem - linia komórkowa, w której zachodzi ekspresja produktu genowego El A adenowirusa.
Ludzkie białko C - zymogen ludzkiego białka C i aktywowane ludzkie białko C.
Białko powstające - polipeptyd wytwarzany po translacji transkryptu mRNA przed jakimikolwiek modyfikacjami potranslacyjnymi. Jednakże modyfikacje potranslacyjne takie jak gamma-karboksylowanie reszt kwasu glutaminowego i hydroksylowanie reszt kwasu asparaginowego mogą rozpoczynać się przed zakończeniem translacji białka z transkryptu mRNA.
Aktywność białka C - wszelka właściwość ludzkiego białka C odpowiedzialna za aktywności proteolityczne, amidolityczne, esterolityczne i biologiczne (antykoagulacyjne lub profibrynolityczne). Sposoby badania aktywności antykoagulacyjnej białek są dobrze znane w stanie techniki, patrz na przykład Grinnell i współpr., 1987, Bio/Technology 5: 1189-1192.
Zymogen - nieaktywny enzymatycznie prekursor enzymu proteolitycznego. Stosowane tu określenie zymogen białka C odnosi się do wydzielanych, nieaktywnych form białka C, zarówno jednołańcuchowych jak i dwułańcuchowych.
Sposób według wynalazku pozwala na zwiększenie wytwarzania białka C w transformowanych adenowirusem rekombinacyjnych komórkach gospodarza ssaczego. Istota sposobu według wynalazku polega na tym, że transformowane adenowirusem komórki gospodarza ssaczego poddaje się hodowli w temperaturze między około 38°C a około 39°C. Istotą wynalazku jest również sposób wytwarzania białka C o zwiększonym poziomie gamma-karboksylowania w transformowanych adenowirusem rekombinacyjnych komórkach gospodarza ssaczego, polegający na tym, że komórki gospodarza poddaje się hodowli w temperaturze między około 38°C a około 39°C.
Do wytwarzania rekombinacyjnego ludzkiego białka C stosowano wiele linii komórkowych. Jednakże, ponieważ cząsteczka ludzkiego białka C ulega rozległym modyfikacjom potranslacyjnym, większość typowych linii komórkowych nie wytwarza w pełni funkcjonalnego białka C, albo jeśli linia komórkowa wytwarza w pełni funkcjonalne białko C, to poziomy ekspresji lub sekrecji pozostają stosunkowo niskie. Na przykład linia komórkowa AV12 chomika syryjskiego generalnie nie jest zdolna do wytwarzania cząsteczek białka C, zawierających wszystkie dziewięć reszt kwasu gamma-karboksyglutaminowego wymaganych dla pełnej aktywności. Z drugiej strony cząsteczki białka C wytwarzane w ludzkich embrionalnych komórkach nerkowych 293 są generalnie w pełni gamma-karboksylowane i betahydroksylowane, a mimo to poziomy produkcji ludzkiego białka C w tych liniach komórkowych są stosunkowo niskie.
Normalnie hodowle komórek ssaczych inkubuje się w 37°C. Gdy transformowaną adenowirusem linię komórkową AV12-664 chomika syryjskiego (ATCC CRL 9595) zawierającą plazmid kodujący gen ludzkiego białka C inkubowano w 37°C, linia komórkowa wytwarzała białko C, które było tylko w 40% do 50% gamma-karboksylowane, czego skutkiem była niska funkcjonalność białka C w surowym medium hodowlanym. Gdy tę samą linię komórkową inkubowano w temperaturze 38,5°C do 39°C, funkcjonalna aktywność antykoagulacyjna wydzielanego białka C w kondycjonowanym medium hodowlanym wzrastała. Szybkość sekrecji białka C z tej linii komórkowej inkubowanej w podwyższonej temperaturze była około 20% do 30% niższa niż szybkość sekrecji w 37°C, chociaż ten spadek szybkości sekrecji jest przesłonięty przez wzrost funkcjonalności wydzielanego białka C.
Ludzkie komórki nerkowe 293 (ATCC CRL 1573) są transformowanymi pierwotnymi embrionalnymi ludzkimi komórkami nerkowymi, które zawierają gen transformujący adenowirusa 5 i w których zachodzi ekspresja tego genu. Komórki te stosowane były do ekspresji kilku ważnych produktów genowych przez wiele różnych laboratoriów zarówno akademickich jak i przemysłowych. Na przykład w patentach USA nr 4 981 952 i 4 992 373 ujawniono stosowanie linii komórkowej 293 do wytwarzania ludzkiego białka C. Linia komórkowa ludzkiej nerki embrionalnej 293 wydziela w pełni gamma-karboksylowane ludzkie białko C po przyłączeniu plazmidu ekspresyjnego kodującego gen ludzkiego białka C. W wyniku hodowli w 37°C linia komórkowa 293 wydzielała rekombinacyjne ludzkie białko C o aktywności właściwej wynoszącej około 350 j/mg. Zwiększanie temperatury wzrostu tych rekombina4
176 381 cyjnych komórek 293 nie powoduje wzrostu funkcjonalności wydzielanego białka C (ponieważ białko C z tej linii komórkowej jest już w pełni gamma-karboksylowane). Jednakże rekombinacyjne komórki 293 namnażane w temperaturze 38°C do 39°C wykazywały wzrost szybkości sekrecji białka C w porównaniu z tymi samymi komórkami namnazanymi w 37°C. Dla celów wynalazku określenie zwiększenie wytwarzania białka C oznacza albo wzrost całkowitego wydzielania białka C albo wzrost funkcjonalności wydzielanego białka C.
Dla specjalisty zrozumiałe będzie, że wynalazek nie jest ograniczony do stosowania transformowanych adenowirusem linii komórkowych ludzkiej nerki embrionalnej lub transformowanej adenowirusem linii komórkowej chomika syryjskiego AV12-664. Do wytwarzania ludzkiego białka C dostępnych jest wiele ssaczych linii komórkowych. Do wytwarzania ludzkiego białka C stosowano na przykład linię komórkową ludzkiej wątroby HepG2. Do wytwarzania ludzkiego białka C stosowano również linię komórkową BHK (nerki noworodków chomików), linię komórkową SA7, linię komórkową SV 20, linię komórkową FAZA i linię komórkową MK2. Chociaż nie wszystkie z wymienionych w poprzednim zdaniu linii komórkowych są liniami komórkowymi transformowanymi adenowirusem, dla specjalisty zrozumiałe będzie, że wiele ssaczych linii komórkowych może być transformowanych adenowirusem w celu wytworzenia specyficznej linii komórkowej transformowanej adenowirusem, która następnie może być wykorzystana w sposobie według wynalazku.
Należy również rozumieć, że sposób według wynalazku nie jest ograniczony tylko do temperatur 38°C i 37°C. Większość fermentacji ssaczych przeprowadza się w 37°C, jednakże stwierdzono, że temperatura fermentacji około 38°C prowadzi do wyższej produkcji białka C w komórkach transformowanych adenowirusem. W związku z tym, że temperatury wielu zbiorników fermentacyjnych i cieplarni mogą fluktuować aż o 0,5°C, określenie około należy rozumieć jako temperaturę w granicach 0,5°C temperatury wymienionej. Zatem określenie około 38°C rozciąga się na temperatury 37,5°C do 38,5°C. Ponadto określenie około 39°C rozciąga się na temperatury od 38,5°C do 39,5°C. Większość komórek ssaczych nie wzrasta dobrze po osiągnięciu temperatury inkubacji około 40°C. Korzystne temperatury dla sposobu według wynalazku zawarte są w zakresie od około 38°C do około 39°C, jakkolwiek w najkorzystniejszej postaci sposobu według wynalazku temperatura inkubacji transformowanej adenowirusem linii komórkowej wynosi około 37°C.
Specjalista uzna także, że sposób według wynalazku pozwala na łatwiejszą selekcję tych klonów, w których zachodzi ekspresja wysokich poziomów białka C. Na przykład w miarę wzrostu poziomu białka C wydzielanego z linii komórkowej oznaczanie cząsteczki w surowym medium jest łatwiejsze, a zatem łatwiej jest wyselekcjonować klon, w którym poziom ekspresji pożądanego produktu jest najwyższy. Średni wzrost poziomów ekspresji dla klonów izolowanych w 39°C zawarty był w zakresie od około 69% do 93% w porównaniu z klonami izolowanymi w 37°C.
Poniższe przykłady przedstawiono w celu zilustrowania sposobu według wynalazku i nie należy ich interpretować jako ograniczenia wynalazku.
Przykład I. Wytwarzanie białka C w komórkach 293.
Rekombinacyjne ludzkie białko C (rHPC) wytwarzano w komórkach nerki ludzkiej 293 za pomocą technik znanych specjalistom, takich jak techniki przedstawione w opisie patentowym USA nr 4 981 952. Gen kodujący ludzkie białko C został ujawniony w opisie patentowym USA nr 4 775 624. Do ekspresji ludzkiego białka C w komórkach 293 użyto plazmidu pLPC, ujawnionego w opisie patentowym USA nr 4 992 373. Konstrukcja plazmidu pLPC jest również opisana w publikacji patentu europejskiego nr 445 939 oraz w artykule Grinnella i współpr. wBio/Technology 5: 1189-1192 (1987). W skrócie plazmid pLPC transfekowano do komórek 293, następnie stabilne transformanty identyfikowano i namnażano. Klonom wykazującym najwyższy poziom ekspresji nadano różne oznaczenia (na przykład CC35 i CC31-1) i namnażano w standardowych warunkach hodowli komórkowych. Alternatywnie, do stworzenia trwale transformowanej linii komórkowej GT-21 użyto plazmidu pGTC. Konstrukcja plazmidu pGTC została ujawniona w publikacji patentu europejskiego nr 445 939. Po wzroście w 37°C ludzkie białko C może być wydzielone z płynu hodowlanego za pomocą technik opisanych w opisie patentowym USA nr 4 981 952. Tak wytworzone ludzkie białko C
176 381 może być użyte w nieaktywowanej formie zymogenu lub może być aktywowane za pomocą procedur dobrze znanych specjalistom. Te same klony namnażano również w tych samych warunkach w 39°C. Rezultaty przedstawiono w tabeli 1.
Tabela 1
Wpływ temperatury wzrostu na ilość białka C wydzielanego z komórek 293
| Klon | ng/106/dzień @ 37°C | ng/106/dzień @ 39°C | Procent wzrostu |
| CC35 | 395 | 663 | 68 |
| CC35 | 425 | 664 | 56 |
| GT-21 | 237 | 747 | 215 |
| CC31-1 | 1164 | 2361 | 103 |
| CC35 | 824 | 1227 | 49 |
| CC35 | 2100 | 3906 | 86 |
Nawet gdy komórki namnażano przy zmieniających się gęstościach komórek, uzyskując w ten sposób różne poziomy ekspresji na komórkę (na przykład CC35), ciągle obserwowano wzrost procentu wydzielania w 39°C.
Przykład II. Wytwarzanie ludzkiego białka C w komórkach AV12-664.
Ludzkie białko C wytwarzano przy użyciu plazmidu pLPC zgodnie z opisem przedstawionym w przykładzie I, stosując zamiast embrionalnych komórek nerki ludzkiej 293 komórki chomika syryjskiego AV12-664. Funkcjonalną aktywność antykoagulacyjną mierzono za pomocą techniki Grinnella i współpr., Bio/Technology 5: 1189-1192 (1987). Rezultaty przedstawiono w tabeli 2.
Tabela 2
Wpływ temperatury wzrostu na funkcjonalną aktywność antykoagulacyjną ludzkiego białka C wytwarzanego w komórkach AV12
| Temperatura | Jednostki/miligram |
| 37°C | 216 ±62 |
| 39°C | 460 ± 19 |
176 381
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 2,00 zł.
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania białka C w transformowanych, adenowirusem rekombinacyjnych komórkach gospodarza ssaczego, znamienny tym, ze transformowane adenowirusem rekombinacyjne komórki gospodarza ssaczego poddaje się hodowli w temperaturze od około 38°C do około 39°C.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako rekombinacyjną komórkę gospodarza ssaczego stosuje się komórkę 293.
- 3. ' Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że inkubację prowadzi się w temperaturze około 38°C.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że inkubację prowadzi się w temperaturze około 39°C.
- 5. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że inkubację prowadzi się w temperaturze około 38°C.
- 6. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że inkubację prowadzi się w temperaturze około 38,5°C.
- 7. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że inkubację prowadzi się w temperaturze około 39°C.
- 8. Sposób wytwarzania rekombinacyjnego białka C o zwiększonym poziomie gammakarboksylowania, znamienny tym, że rekombinacyjnie wytworzone białko C poddaje się hodowli w rekombinacyjnych komórkach gospodarza AV12 w temperaturze między około 38°C a około 39°C.
- 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że rekombinacyjną komórkę gospodarza AV12 poddaje się hodowli w temperaturze około 38°C.
- 10. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że rekombinacyjną komórkę gospodarza AV12 poddaje się hodowli w temperaturze około 39°C.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/168,035 US5618714A (en) | 1993-12-15 | 1993-12-15 | Methods for producing protein C |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL306291A1 PL306291A1 (en) | 1995-06-26 |
| PL176381B1 true PL176381B1 (pl) | 1999-05-31 |
Family
ID=22609820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94306291A PL176381B1 (pl) | 1993-12-15 | 1994-12-15 | Sposób wytwarzania białka C |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5618714A (pl) |
| EP (1) | EP0658626B1 (pl) |
| JP (1) | JP3662614B2 (pl) |
| KR (1) | KR950018454A (pl) |
| CN (1) | CN1107887A (pl) |
| AT (1) | ATE196165T1 (pl) |
| AU (1) | AU687914B2 (pl) |
| BR (1) | BR9404991A (pl) |
| CA (1) | CA2138101A1 (pl) |
| CO (1) | CO4340654A1 (pl) |
| CZ (2) | CZ315794A3 (pl) |
| DE (1) | DE69425809T2 (pl) |
| DK (1) | DK0658626T3 (pl) |
| ES (1) | ES2149244T3 (pl) |
| FI (1) | FI106385B (pl) |
| GR (1) | GR3034909T3 (pl) |
| HU (1) | HU219508B (pl) |
| IL (1) | IL111983A0 (pl) |
| NO (1) | NO944846L (pl) |
| NZ (1) | NZ270140A (pl) |
| PE (1) | PE42695A1 (pl) |
| PL (1) | PL176381B1 (pl) |
| PT (1) | PT658626E (pl) |
| RU (1) | RU2110574C1 (pl) |
| SI (1) | SI0658626T1 (pl) |
| UA (1) | UA26870C2 (pl) |
| YU (1) | YU73494A (pl) |
| ZA (1) | ZA949981B (pl) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19724543A1 (de) * | 1997-06-11 | 1998-12-17 | Philips Patentverwaltung | Wechsler-Gerät für Informationsplatten |
| WO2002069232A2 (en) | 2001-02-19 | 2002-09-06 | Merck Patent Gmbh | Method for identification of t-cell epitopes and use for preparing molecules with reeduced immunogenicity |
| ATE386824T1 (de) | 2002-03-29 | 2008-03-15 | Merck & Co Inc | Verfahren zur virusproduktion |
| US20070142272A1 (en) * | 2003-01-24 | 2007-06-21 | Zlokovic Berislav V | Neuroprotective activity of activated protein c independent of its anticoagulant activity |
| JP2008507561A (ja) * | 2004-07-23 | 2008-03-13 | ザ ユニバーシティ オブ ロチェスター | 活性化プロテインｃによる、脳内のプラスミノゲン活性化因子の不都合な作用の阻害 |
| US20090148458A1 (en) * | 2005-06-23 | 2009-06-11 | The University Of British Columbia | Coagulation factor iii polymorphisms associated with prediction of subject outcome and response to therapy |
| CA2654761A1 (en) * | 2006-06-09 | 2007-12-13 | The University Of British Columbia | Interferon gamma polymorphisms as indicators of subject outcome in critically ill subjects |
| US20110171200A1 (en) * | 2008-01-15 | 2011-07-14 | Walley Keith R | Protein c rs2069915 as a response predictor to survival and administration of activated protein c or protein c-like compound |
| WO2012068519A2 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Sirius Genomics Inc. | Markers associated with response to activated protein c administration, and uses thereof |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4775624A (en) * | 1985-02-08 | 1988-10-04 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for expression of human protein C |
| US4968626A (en) * | 1985-08-15 | 1990-11-06 | Board Of Reagents Of The University Of Washington | DNA sequence coding for protein C |
| US4959318A (en) * | 1985-06-27 | 1990-09-25 | Zymogenetics, Inc. | Expression of protein C |
| EP0245949B1 (en) * | 1986-04-09 | 1997-10-29 | Eli Lilly And Company | A method of using eukaryotic expression vectors comprising the bk virus enhancer |
| AU8339187A (en) * | 1986-11-17 | 1988-06-16 | New England Medical Center Hospitals, Inc., The | Enhancing gamma-carboxylation of recombinant vitamin k-dependent proteins |
| US4992373A (en) * | 1987-12-04 | 1991-02-12 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for direct expression of activated human protein C |
| ZA889497B (en) * | 1987-12-28 | 1990-08-29 | Lilly Co Eli | Vectors and compounds for expression of zymogen forms of human protein c |
| JPH0246296A (ja) * | 1988-08-09 | 1990-02-15 | Hoechst Japan Ltd | 雑種プロテインｃ及びその製造方法 |
| US4981952A (en) * | 1988-10-04 | 1991-01-01 | Eli Lilly And Company | Method for the purification of vitamin K-dependent proteins |
| CA1332049C (en) * | 1988-10-07 | 1994-09-20 | Eli Lilly And Company | Eukaryotic expression |
| DK0485504T3 (da) * | 1989-08-11 | 1994-04-18 | Zymogenetics Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af aktiveret protein C ved celledyrkning |
| IL97312A (en) * | 1990-02-23 | 1999-01-26 | Lilly Co Eli | A method of generating a polypeptide in an eukaryotic vector AND recombinant surrogate cell containing an enhanced transcriptional control unit based on the primary late adenovirus coefficient |
| AU1180692A (en) * | 1991-01-29 | 1992-08-27 | Teijin Limited | Human protein c expression vector |
-
1993
- 1993-12-15 US US08/168,035 patent/US5618714A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-12-14 AT AT94309314T patent/ATE196165T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 CZ CZ943157A patent/CZ315794A3/cs unknown
- 1994-12-14 PT PT94309314T patent/PT658626E/pt unknown
- 1994-12-14 HU HU9403600A patent/HU219508B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-14 RU RU94043769A patent/RU2110574C1/ru active
- 1994-12-14 KR KR1019940034085A patent/KR950018454A/ko not_active Ceased
- 1994-12-14 BR BR9404991A patent/BR9404991A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 NZ NZ270140A patent/NZ270140A/en unknown
- 1994-12-14 YU YU73494A patent/YU73494A/sh unknown
- 1994-12-14 ZA ZA949981A patent/ZA949981B/xx unknown
- 1994-12-14 NO NO944846A patent/NO944846L/no not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 AU AU80452/94A patent/AU687914B2/en not_active Ceased
- 1994-12-14 CA CA002138101A patent/CA2138101A1/en not_active Abandoned
- 1994-12-14 CO CO94056544A patent/CO4340654A1/es unknown
- 1994-12-14 ES ES94309314T patent/ES2149244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 UA UA94129175A patent/UA26870C2/uk unknown
- 1994-12-14 EP EP94309314A patent/EP0658626B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 DK DK94309314T patent/DK0658626T3/da active
- 1994-12-14 FI FI945877A patent/FI106385B/fi active
- 1994-12-14 DE DE69425809T patent/DE69425809T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-14 PE PE1994257065A patent/PE42695A1/es not_active Application Discontinuation
- 1994-12-14 IL IL11198394A patent/IL111983A0/xx unknown
- 1994-12-14 SI SI9430347T patent/SI0658626T1/xx unknown
- 1994-12-15 CN CN94119106A patent/CN1107887A/zh active Pending
- 1994-12-15 JP JP31160994A patent/JP3662614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-15 PL PL94306291A patent/PL176381B1/pl unknown
-
2000
- 2000-11-24 GR GR20000402615T patent/GR3034909T3/el not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-22 CZ CZ20012322A patent/CZ290724B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lijnen et al. | Strategies for the improvement of thrombolytic agents | |
| US5270178A (en) | Vectors and compounds for expression of zymogen forms of human protein C | |
| NO311299B1 (no) | Protein C derivater, rekombinant DNA molekyl, kodende dette samt fremgangsmåte for fremstilling av proteinene | |
| PL176381B1 (pl) | Sposób wytwarzania białka C | |
| EP2292748B1 (en) | Method for producing gamma-carboxylated proteins | |
| Rodgers et al. | Characterization of the interaction between factor Xa and bovine aortic endothelial cells | |
| EP1405912A1 (en) | Genetically modified ecarin and process for producing the same | |
| Griffiths et al. | Production of tissue plasminogen activators from animal cells | |
| US8377676B2 (en) | Mutated nucleotide sequences of batroxobin, mutated α factor secretion signal sequence and processes for preparing batroxobin using the same | |
| US20040197858A1 (en) | Process for producing human thrombin by gene modification technique | |
| US20130330808A1 (en) | Novel process for the purification of tissue plasminogen activator | |
| US9243237B2 (en) | Method for mass production of factor VII/VIIA | |
| Cederholm‐Williams | Molecular biology of plasminogen activators and recombinant DNA progress | |
| EP0420502B1 (en) | A new plasminogen activator derivative and a method for its manufacture | |
| AU2008202374B2 (en) | Genetically modified ecarin and process for producing the same | |
| Kalyan et al. | Construction and expression of a hybrid plasminogen activator gene with sequences from non-protease region of tissue-type plasminogen activator (t-PA) and protease region of urokinase (u-PA) | |
| KR100279301B1 (ko) | 사람의단일사슬유로키나제형프라스미노겐활성인자를생산하는재조합cho세포주 | |
| CA2610391A1 (en) | A method for optimized production of a recombinant form of tissue plasminogen activator | |
| EP0445464A2 (en) | A new plasminogen activator derivative and a method for its manufacture | |
| HK1155475B (en) | Method for producing gamma-carboxylated proteins | |
| JP2005278550A (ja) | ２本鎖組織プラスミノーゲンアクチベーターの製造法 |