DK170042B1 - Immunmodulerende azaspiraner, farmaceutiske midler, der indeholder dem, samt anvendelse af azaspiranerne til fremstilling af et immunmodulerende middel - Google Patents

Description

DK 170042 Bl

Den foreliggende opfindelse angår ikke-metalholdige spiroger-manium-analoge azaspiraner, et farmaceutisk middel indeholdende en sådan azaspiran og en farmaceutisk acceptabel bærer eller et fortyndingsmiddel og anvendelse af sådanne azaspira-5 ner til fremstilling af immunmodulerende midler til behandling af reumatoid artritis hos et dyr, der har behov derfor.

Geschickter m.fl., US-patent nr. 4.468.393, udstedt den 28. august 1984, beskriver en fremgangsmåde til at behandle artritis under anvendelse af forskellige germaniumholdige spiro-10 germanium-analoge, herunder: .

N- (3-dimethylaminopropyl) -2-aza-8,8-dimethyl-8-germanspiro- [4.5] decan, N- (3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-diethyl-8-germanspiro- [4.5] decan, 15 N- (3-dimethylaminopropyl) -2-aza-8,8-dipropyl-8-germanspiro- [4.5] decan og N- (3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-dibutyl-8-germanspiro- [4.5] decan.

Tenoso m.fl., US-patent nr. 4.654,333, udstedt den 31.marts 20 1987, beskriver en fremgangsmåde til at behandle multipel sklerose, som omfatter administrering til en patient, som lider heraf, af en til behandling af multipel sklerose effektiv mængde af en spirogermanium valgt af gruppen bestående af: N- (3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-dimethyl-8-germanspiro-25 [4:5]decan, N- (3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-diethyl-8-germanspiro-[4:5]decan, 2 DK 170042 B1 N-(3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-dipropyl-8-germanspiro-(4:5]decan og N-(3-dimethylaminopropyl)-2-aza-8,8-dibutyl-8-germanspiro-[4:5]decan.

5 Rice m.fl., J.Heterocycl.Chem. 10 (5), 731-735 (1973), (Rice I), beskriver syntese af N-(3-dimethylaminopropyl)-8,8-dimethyl- 2-azaspiro[4,5]decan, N- (3 -dimethylaminopropyl)-8,8-diethyl- 2- azaspiro[4,5]decan, N-(3-dimethylaminopropyl)-9,9-dimethyl- 3- azaspiro[5,5]undecan og N-(3-dimethylaminopropyl)-9,9-diethyΙ-ΙΟ 3-azaspiro[5,5]undecan. Rice I anfører, at biologisk bedømmelse af disse aminer udviste betydelig hæmning af cancercellevækst i humane cancerceller dyrket i vævskultur. Der er ingen beskrivelse eller antydning i Rice I af, at sådanne aminer har antiartritisk virkning.

15 Rice m.fl., J.Heterocycl.Chem. 10(5), 737-741 (1973),(Rice II), beskriver syntese af N-(2-dimethylaminopropyl)-8,8-dimethyl- 8-sila-2-azaspiro[4,5]decan og N-(3-dimethylaminopropyl)-9,9-dimethyl-9-sila-3-azaspiro[5,5]undecan og anfører endvidere, at biologisk bedømmelse af disse forbindelser viste cytotoksisk 20 virkning over for humane cancerceller dyrket i vævskultur. Der er ingen beskrivelse eller antydning i Rice II af, at sådanne forbindelser har antiartritisk virkning.

Rice m.fl., US-patent nr. 3.256.277, udstedt den 14.juni 1966, (Rice III), beskriver en forbindelse valgt af gruppen bestående 25 af (1) en forbindelse med formlen

Ly" ^n"R

hvori A er en ring med mindst 5 ringatomer, hvoraf alle ringatomerne er carbon med undtagelse af R^, R^ er valgt af gruppen bestående af oxygen og svovl, X er valgt af gruppen bestå 3 DK 170042 B1 ende af mindst én af hydrogen, lavere alkoxy, lavere alkyl, lavere alkenyl, cyklo-lavere alkyl og monocarbocyklisk aryl, B er en mættet ring med 5-6 ringatomer, idet ringatomerne i ringen B, ud over nitrogenatomet, er carbonatomer, Y er 5 valgt af gruppen bestående af alkylen og alkenylen med op til 6 carbonatomer, n er 0 - 1, og R er valgt af gruppen bestående af lavere alkyl, lavere alkenyl, cyklo-lavere alkyl, cyklo-lavere alkenyl, lavere og di-lavere alkyl og alkenyl-amino, mættet heterocyklisk valgt af gruppen bestående af 10 morpholino, piperidino, pyrrolidino, piperazino, tetrahydro-furyl og deres lavere alkyl- og alkenyl-substituerede derivater, monocarbocyklisk aryl, naphthyl, pyridyl, quinolyl, furyl og lavere alkoxy, (2) de ugiftige syreadditionssalte (1) og (3) de ugiftige kvaternære salte af (1).

15 Rice III anfører, at disse forbindelser er karakteristiske ved deres farmakologiske virkning på nervesystemet og det kardio-vaskulære system. Der er ingen beskrivelse eller antydning i Rice III af, at sådanne forbindelser har antiartritisk virkning.

20 Rice m.fl., US-patent nr. 3.282.947, udstedt den 1.november 1966, (Rice IV), beskriver en forbindelse med formlen —OO"·* hvori R og R^ hver er valgt fra en forskellig af gruppen bestående af (a) hydrogen, 25 (b) lavere alkyl, (c) aralkyl valgt af gruppen bestående af pyridyl, lavere alkyl og phenyl-lavere alkyl, 4 DK 170042 B1 (d) di-lavere alkylamino-lavere alkylen eller (e) hydroxy-lavere alkylen.

Rice IV anfører, at disse forbindelser er værdifulde som mellemprodukter, og at de også har ikke-defineret farmakologisk 5 virkning. Der er ingen beskrivelse eller antydning i Rice IV af, at sådanne aminer har antiartritisk virkning.

Rice m.fl., J.Med.Chem.6, 388-402 (1963), (Rice V), beskriver fremstilling af en stor gruppe N-dialkylaminoalkylazaspiro-alkaner og anfører, at kraftig (men udefineret) farmakologisk 10 virkning er blevet iagttaget i gruppen, og at særlig bemærkelsesværdigt er de udtalte væksthæmmende virkninger af visse repræsentanter (f.eks. 3-(3-dimethylaminopropyl) -9-t-butyl-3-aza-spiro[5,5]undecan) på cancerceller i vævskultur og objektive kliniske virkninger i humane cancerceller. Der er ingen be-15 skrivelse eller antydning i Rice V af, at sådanne forbindelser har antiartritisk virkning.

Rice m.fl., J.Heterocycl.Chem. 1(3), 125-127 (1964), (Rice VI), beskriver syntetiske veje til forskellige symmetriske og usymmetriske 3,9-diazaspiro[5,5]undecaner. Der er ingen beskrivel-20 se eller antydning i Rice VI af, at disse forbindelser har nogen biologisk virkning.

Rice m.fl., US-patent nr. 3.825.546, udstedt den 23.juli 1974, (Rice VII), beskriver en forbindelse med strukturformlen

BpOQf hvori R og R er ens eller forskellige alkylgrupper med 1-4

JL M

25 carbonatomer, i 5 DK 170042 B1 X = silicium eller germanium, Φ 1 " A og A er det samme og enten CH2 eller C, n = 0 eller 1, B = CH3, når n er 1, og B er det samme som A, når n er 0, 5 R3 = alkylen eller alkenylen, g = 2-6, når R er alkylen, og 3-4, når R er alkenylen, og 3 3 R^ og Rg er samme eller forskellige lavere alkyler med 1-4 carbonatomer, lavere alkenyler med 3-4 carbonatomer eller cykliseret til dannelse af en heterocyklisk gruppe valgt blandt 10 morpholino, pyrrolidino, piperidino og lavere alkyl (1-4 carbonatomer)-piperazino, hvori det lavere alkyl er bundet til et endestillet nitrogenatom. Rice VII anfører, at de biskvaternære salte af disse forbindelser udviser antihyper-tensiv virkning og er særligt nyttige til blokering af ganglio-15 nisk aktivitet i hunde og andre dyr. Der er ingen beskrivelse eller antydning i Rice VII af, at disse forbindelser har anti-artritisk virkning.

Sanwa KK, europæisk patentansøgning, offentliggørelses-nr.

EO 186.505 A2, offentliggjort den 2.juli 1986, beskriver et 20 middel omfattende en organogermaniumforbindelse repræsenteret ved formlen f^Ge - C - C - COOh| °l-5 V 11 J n n

v R R

hvori n er et tal på 1 eller mere, R er hydrogen, alkyl, -COOH, -COOR', phenyl, O O — C3 6 DK 170042 B1 og R' er en lavere alkylgruppe, og en højmolekylær bærer for farmaceutiske midler.

*

Sanwa KK beskriver, at disse forbindelser ikke har immunitetsaccelererende virkning, men i stedet har immunitets-indstillende 5 eller -regulerende virkning.

DiMartino m.fl., J.Pharmacol.Exp.Therapeut. 236, 103-110 (1986) beskriver evnen hos spirogermanium til at inducere undertrykkerceller.

Badger m.fl., Immunopharmacol. 10, 201-207 (1985) beskriver ud-10 vikling af undertrykkerceller i normale rotter behandlet med spirogermanium.

The Australian National University, PCT-patentansøgning, of-fentliggørelses-nr. WO 85/05031, offentliggjort den 21.november 1985, beskriver en fremgangsmåde til at modulere eller un-15 dertrykke immunreaktionen hos et dyr, som omfatter administration af en effektiv mængde af mindst én amfifil, der er i stand til at reagere på overfladen af en celle til modificering af overfladeegenskaberne deraf, for at hæmme eller modificere genkendelsen af et antigen af den ændrede celle. Fortrinsvis er 20 amfifilen et kationisk overfladeaktivt stof, såsom en dobbelt-kædet kvaternær ammoniumforbindelse.

Geschickter Fund, britisk patent nr. 929.739, offent liggjort den 26.juni 1963, beskriver azaspiranforbindelser med s t nak tur en jC\ /CH2 ‘ CH2\ \(CH2)n-CH2^ 1 2 25 hvori A er en mono- eller bicyklisk carbonring med mindst 5 carbonatomer, X er valgt blandt en eller flere af hydrogen, alkyl og alkoxy, n er 0 eller 1, R1 er en alkylenkæde med 2 - 7 DK 170042 B1 6 carbonatomer eller en alkylenkæde med 2-6 carbonatomer substitueret med en hydroxylgruppe på et carbonatom, der er mindst beta til begge nitrogenatomer, og R2 er dialkyl, hvor hver alkylgruppe har 1-6 carbonatomer, eller en alkylenkæde, 5 der sammen med nitrogenatomet, hvortil den er bundet, danner en morpholin-, piperidin-, pyrrolidin- eller piperazinring, eller et alkylsubstitueret derivat af enhver af disse indeholdende fra 1 til 6 carbonatomer i substituent gruppen, og de ugiftige syreadditionssalte deraf. Geschickter-patentet be-10 skriver også specielt N-(3-dimethylaminopropyl)-9-t-butyl-3-azaspiro[5:5]undecan. Geschickter-patentet beskriver også, at disse forbindelser er nyttige på grund af deres farmakologiske virkning på nervesystemet og det kardiovaskulære system.

Den foreliggende opfindelse angår azaspiraner med formlen •i /-ΥΊ /’ 15 \r4

Formel (I) hvori n er 3-7, m er 1 eller 2, R-L og R2 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet alkyl og cykloalkyl, forudsat at det 20 samlede antal carbonatomer indeholdt i R-^ og R2 tilsammen er 4-10, eller Rx og R2 er forbundet til dannelse af en alkylen-gruppe indeholdende 3-7 carbonatomer, R2 og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller R3 og 25 R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, forudsat at når R-]_ og R2 er CH3CH2, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat, at når R-j_ er H, R2 er (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n 30 andet end 3, og endvidere forudsat, at når R2 er H, R^ er ((^3)30, R3 og R4 er CH3, og m er 2, er n andet end 3, 8 DK 170042 B1 eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat deraf.

Opfindelsen angår også azaspiraner med.formlen /R3 /—/R3 (k-(chJ -n R4 eller R R, 8 6

Formel (II) hvor n er 3-7, 5 m er 1 eller 2, Rη, Rg, R5 og Rg er det samme eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og methyl, r3 °9 r4 er det samme eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, 10 eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat deraf.

s

Opfindelsen angår et farmaceutisk middel omfattende en farma-15 ceutisk acceptabel bærer eller et fortyndingsmiddel og en effektiv mængde af en forbindelse med formlen 9 DK 170042 B1 /3 2 2m \(CH2)5---\ \

Formel (I) hvori n, m, R-^ R2, R3 og R4 har de ovennævnte betydninger, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat deraf.

Opfindelsen angår også et farmaceutisk middel omfattende et 5 farmaceutisk acceptabelt bærerstof eller fortyndingsmiddel og en effektiv mængde af en forbindelse med formlen II.

Opfindelsen åbner mulighed for en fremgangsmåde til at behandle et dyr, der har behov for immunmodulering, ved administrering af en effektiv mængde af en forbindelse med formlen I 10 eller formlen II eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat til et sådant dyr.

Foretrukne forbindelser med formlen I og formlen II er anført i tabel 1 nedenfor. Særligt foretrukket er forbindelse nr. 02 i tabel 1.

15 Farmaceutisk acceptable salte og deres fremstilling er velkendt for fagfolk. Foretrukne farmaceutisk acceptable salte af forbindelser med formlen I og formlen II indbefatter, men er ikke begrænset til, hydrochlorid, dihydrochlorid, citrat, maleat, lactat, hydrobromid og sulfat. Dihydrochloridsaltet 20 foretrækkes især.

Forbindelserne med formlen I .og II kan danne hydrater eller solvater. Det er kendt for fagfolk, at ladede forbindelser danner hydratiserede former, når de lyofiliseres med vand, eller danner solvatiserede former, når de koncentreres i en 10 DK 170042 B1 opløsning med et passende organisk opløsningsmiddel.

Forbindelser med formlen I og formlen II kan fremstilles ved de fremgangsmåder, der er beskrevet i nedenstående eksempler.

Alle forbindelser med formlen I og formlen II er nyttige til 5 behandling af et dyr, herunder mennesker, som har behov for immunmodulering. Den immunmodulerende virkning blev fastslået ved anvendelse af den adjuvant-inducerede artritis-prøve i rotter, som er opsummeret i tabel 1, og/eller en prøve til måling af undertrykkercelle-aktivitet, der er opsummeret i tabel 10 2.

DK 170042 B1 11 TABEL 1.

Aktivitet af forbindelser med formlen 1 og formlen II i den adj uvant-inducerede artritis-prøve: *4

Formel (I)

r- ^ irP”(CH2>”'C

J^CH2>n-\R JkJ

eller 4 R2 R6 Formel (II) 5^· g,) ro n 1^2 02 1 3 CHjOLOL CHjCHjCH, CH, CH3 1.33 30 03 1 3 æ^åLhåu æ^ai^a^ ch3 ch3 0.88 30 04 1 3 æ(o££o2 æ3(CH^cH2 ch3 ch3 0.41 .30 03 1 3 (CHjkd&C (CHjJjCHSj CH3 CH3 0.97 30 06 2 3 CHjOijCHj CHjCHjCHj CHj · 0¾ 0.90 30 07 i 3 σξαξαζ chcHjCHj η h 1.52 30 08 1 3 CHjCHjCK, CHjCHjCHj CHS H 1.02 30 09 l 3 CHjC^dyCH CH3 CH, CH3 127 30 10 1 3 CH, CHjOWCHOCH CHj CH, 2.84 60 11 1 3 CHjCH; CHjtcSjHdii CHj CH, 1.13 13 12 1 3 CHjiCHjJjCHj CHjCHj CH3 CH, 400 30 13 1 3 H CH,(a^),CHj 0¾ CH, 0.78 30 14 1 3 H cyclbhexyl 0¾ CH* 0.98 30 16 1 3 (CHOjC H CH, 0¾ 0.90 30 17 1 3 ÆCTUO^CHjCH^Hr CH, CH, 1.70 60 18 I 3 (¾¾¾ Sj&jCHj (¾¾ CHjCH, 1.42 30 19 l 3 QiCHjQij CHjCHjCHi -C^CHjkCH^ 1.89 30 20 i 4 σςαί,σξ chjCHjCh, ch3 ch, 0.43 30 21 1 5 caaqaij ch3chjCh2 ch, ch3 0.82 30 22 l 6 (3{zC&iP£ CHjdijCHj CH, CH3 1.28 30 23 1 7 CHjCHjCHi CHjCHjCH, CH, CH, 1.57 30 24 1 3 Spiroedimaaufl CH, - CH, 0.76 30 23 1 3 Adaratnan CH, CH, 0-33 30 26 1 3 BicVflo(3J.l)nofi»n-9- CH, CH, 0.92 30 27 l 3 CHjCHjCH, CH,CH2CH2 -CH2(CH2)2CH2- 1.03 30 28 1 6 CHjCHjCHj CH,CH2CH2 -Oi2(CH2)2CHr .63 30 29 l 6 CHjCHjCH, CH,CH2CHj -CH^CH^CHr n.t.

•30 1 3 CHjCH, CHjCHj n.c.

31 l 3 CHjCHj CHjCHj -QQpi^O{T “.t.

32 1 3 CHjCH2 CHjCH2 CHjCH, CH,CHj b.c.

12 DK 170042 B1 n.t. = ikke prøvet.

a) φ - forbindelse nr. Forbindelserne med numrene 02-14, 16- i 23 og 27-32 hører til forbindelser med formlen I.

b) AA rotte % højre pote-hæmning (dag 16) i forhold til 5 spirogermanium ' ' .

c) Dosis (mg/kg).

d) Prøveudvikling/modifikation:

Adjuvant-artritis frembringes ved en enkelt intradermal injektion af 0,75 mg M.butyricum suspenderet i hvid paraf-10 finolie (lys N.F.) i en (venstre) bagpotes trædepude. Den injicerede pote bliver inflammeret (forøger rumfanget) og når maksimal størrelse på 3 - 5 dage (primær læsion). Dyrene udviser et fald i legemsvægtforøgelsen i denne første periode. Adjuvant-artritis (sekundær læsion) forekommer 15 efter en forsinkelse på ca. 10 dage og er karakteristisk ved inflammation af de ikke-injicerede steder (højre bagpote) , fald i legemsvægt og yderligere stigning i rumfanget af den injicerede bagpote.

Forsøgsforbindelserne administreres dagligt, begyndende på 20 dagen for adjuvant-injektionen, i enten 17 dage eksklusive dag 4, 5, 11 og 12, i 11 på hinanden følgende dage eller i 17 på hinanden følgende dage. Lægemiddelvirkningen på den primære læsion (venstre pote, dag 3) og den sekundære læsion (højre bagpote, dag 16) bestemmes ved at sammenligne 25 poterumfang af den behandlede gruppe med en kontrol-artritis- gruppe (bærer). Bagpoterumfang måles ved at neddykke poten i et kviksølvs- eller vandreservoir og registrere den deraf følgende fortrængning.

e) Definition af signifikant aktivitet: 30 En forbindelse anses for at have antiartritisk aktivitet, hvis den fremkalder et statistisk signifikant (p < 0,05) fald på tredive procent (30%) eller mere i de inflammerede 13 DK 170042 B1 bagpoterumfang, og/eller den artritiske bedømmelse af de behandlede grupper sammenlignes med artritis-kontroller. Niveauet af signifikant forskel mellem behandlede grupper og kontrolgrupper bestemmes ved Student "t"-prøven.

5 Legemsvægtændringer fra dag 0 sammenlignes også statistisk med den artritiske kontrolgruppe. % hæmning af en forbindelse med formlen I og formlen II på dag 16 (højre pote) divideres med spirogermanium-aktivitet på dag 16 for at få en relativ aktivitetsprofil. Bemærk: I nogle af for- 10 søgene blev forbindelse nr. 2 fra tabel 1 anvendt som stan dard i stedet for spirogermanium (SG). Forbindelse nr. 2 er 1,35 gange bedre end SG i AA rottemodellen. Alle forbindelsesaktiviteter blev derfor normaliseret til SG ved at multiplicere med denne faktor.

TABEL 2.

15 Undertrykkercelle-aktivitet med forbindelser med formlen I og c) formlen II : S )

Forbindelse Undertrykkercelle- nr. Dosis aktivitet b) 2 30 mg/kg 172 3 30 mg/kg 176 20 4 7,5 mg/kg 118 5 30 mg/kg 162 6 30 mg/kg 158 7 30 mg/kg 217 8 15 mg/kg 67 25 9 30 mg/kg 132 10 30 mg/kg 112 11 15 mg/kg 139 12 15 mg/kg 172 13 15 mg/kg 96 (forts.) 14 DK 170042 B1

Forbindelse Undertrykkercelle- nr. Dosis aktivitet b) 14 n.t.

16 n.t.

5 17 n.t.

18 30 mg/kg 201 19 30 mg/kg 241 20 30 mg/kg 178 21 30 mg/kg 177 10 22 15 mg/kg 141 23 30 mg/kg 146 24 30 mg/kg 84 25 30 mg/kg 52 26 30 mg/kg 7 15 27 30 mg/kg 139 28 30 mg/kg 24 29 30 mgAg 22 30 30 mg/kg 77 31 30 mg/kg 64 20 32 30 mg/kg 83 n.t. = ikke prøvet.

a) Se forbindelsens struktur i tabel 1.

b) Undertrykkercelle-aktivitet beregnes på følgende måde: Der udvikles en kurve over % undertrykkelse (afhængigt varia- 25 bel) som funktion af den naturlige logaritme til antallet af undertrykkerceller (uafhængigt variabel), og arealet under kurven (AUC) repræsenteret ved datapunkterne på denne kurve blev bestemt via trapezformlen. Trapezformlen giver AUC ved hjælp af opsummering af arealerne af trapezerne, 15 DK 170042 B1 hvis toppunkter er beliggende ved naboværdier af den uafhængigt variable og de tilsvarende værdier af den afhængigt variable. Alle data blev normaliseret til spiro-germanium (SG). I nogle forsøg blev forbindelse nr. 2 i 5 tabel 1 anvendt som standard i stedet for spirogermanium.

Forbindelse nr. 2 er 1,72 gange bedre end SG ved under-trykkercelle-prøven. Alle forbindelsesaktiviteter blev derfor normaliseret til SG ved at multiplicere med denne faktor (dvs. SG = 100, forbindelse nr. 2 = 172).

10 c) Prøven anvendt til forbindelserne med formlen I og formlen II for evne til udvikling af undertrykkerceller er den, der er beskrevet af Badger m.fl., Immunopharmacology, 10, 201-207 (1985), i korthed følgende:

Indavlede Lewis hanrotter blev fremskaffet fra Charles River 15 Breeding Laboratories (Wilmington, MA, USA). Rotterne blev holdt på vand og et rutine-rottefoder og blev anvendt i en alder af 6 - 8 uger (160 - 180 gram). I ethvert givet forsøg blev der kun anvendt rotter af samme alder, stamme og køn. Concanavalin A (Con A) blev fremskaffet fra Pharmacia 20 Fine Chemicals (Piscataway, NJ) og opløst i RPMI-1640 (Flow

Laboratories, Rockville, MD), der blev suppleret med penicillin, streptomycin og L-glutamin (Grand Island Biological Co., Grand Island, NY) og med 10% varmeinaktiveret (56°C, 30 minutter) kalvefosterserum. Dette medium vil herefter 25 blive omtalt som RPMI-10. Til in vivo behandling blev for bindelser opløst i 0,5% traganth og administreret oralt én gang om dagen. Miltceller fra dyr behandlet med forbindelser med formlen I og formlen II blev etableret i RPMI-10 i g en mængde af 5 x 10 /ml. Co-kultur-forsøg til bestemmelse 30 af undertrykkerceller blev udført ved først at tilsætte va rierende antal formodede undertrykkerceller (0,15 til 5 5 x 10 ) til mikrotiterplader med 96 rundbundede fordybninger (Linbro, Flow Labs.) i 100 /ul RPMI-10. Disse celler 16 DK 170042 B1 blev så bestrålet (2000 rad) i en gammacelle 40 med en 137Cs kilde. Til disse kulturer blev sat 5 x 10^ normale 5 celler og en optimal koncentration af Con A (5 /ig/ml), og det endelige rumfang blev indstillet til 200 yul. Cellekulturer blev inkuberet i 72 timer ved 37°C i en 5% C02~ atmosfære og pulseret med 0,5 yuCi [%]thymidin (specifik aktivitet 1,9 Ci/mmol, Schwarz/Mann, Orangeburg, NY) i de 10 sidste 16 timers dyrkning. Cellerne blev høstet på en au tomatisk multipel prøvehøster, og celle-forbundet radioaktivitet blev talt i en Beckman væskescintillationstæller. Undertrykkende aktivitet bestemmes ved at sammenligne cpm af co-kulturer indeholdende ubehandlede celler med dem, 15 der indeholder behandlede celler, ved Student's t-test.

Tabel 2 ovenfor viser aktiviteten af flere forbindelser med formlen I og formlen II til udvikling af undertrykkerceller in vivo. Ved "udvikling af undertrykkerceller" menes, at forbin-20 delsen inducerer en undertrykkercelle-agtig aktivitet, f.eks.

en celle, der er i stand til at undertrykke immunfunktionen af en normal celle i en in vitro co-kultur-prøve, såsom den ifølge Rich & Pierce, J.Exp.Med. 137, 649 (1973). Miltcellerne fra behandlede dyr blev etableret i varierende koncentrationer med 25 normale celler. Disse undertrykkerceller er også i stand til at hæmme blandede lymfocytreaktioner, antistofsyntese og hyper-sensitivitetsreaktioner af den forhalede type.

En forbindelse med formlen I eller formlen II administreres i 30 sædvanlig doseringsform fremstillet ved at forene en terapeutisk effektiv mængde (dvs. en effektiv immunomodulerende mængde) af en forbindelse med formlen I eller formlen II ("aktiv 35 17 DK 170042 B1 bestanddel") med standard-farmaceutiske bærerstoffer eller fortyndingsmidler på sædvanlige måder. Disse måder kan indebære blanding, granulering og sammentrykning eller opløsning af bestanddelene efter behov til det ønskede præpa-5 rat.

Den anvendte farmaceutiske basrer kan f.eks. være enten et fast stof eller en væske. Eksempler på faste bærere er lactose, terra alba, saccharose, talk, gelatine, agar, pectin, akaciegummi, magnesiumstearat, stearinsyre og lignende. . Eksempler 10 på flydende bærere er sirup, jordnøddeolie, olivenolie, vand og lignende. Ligeledes kan bæreren eller fortyndingsmidlet indbefatte et forhalende materiale af velkendt art, f.eks. glycerylmonostearat eller glyceryldistearat, alene eller sammen med en voksart, ethylcellulose, hydroxypropylmethyl-15 cellulose, methylmethacrylat og lignende.

Mange forskellige farmaceutiske former kan anvendes. Hvis der f.eks. anvendes en fast basrer, kan præparatet tabletteres, anbringes i en hård gelatinekapsel i pulverform eller pilleform eller i form af en pastil eller sugetablet. Mæng-20 den af fast bærer vil variere meget, men vil fortrinsvis være fra ca. 25 mg til ca. 1 g. Hvis der anvendes en flydende bærer, vil præparatet være i form af en sirup, emulsion, blød gelatinekapsel, steril injicerbar opløsning eller suspension i en ampul eller flaske eller en ikke-vandig væskesuspension.

25 por at få en stabil vandopløselig dosisform opløses et farmaceutisk acceptabelt salt af en forbindelse med formlen I eller formlen II i en vandig opløsning af en organisk eller uorganisk syre, såsom en 0,3 M opløsning af ravsyre eller, fortrinsvis, citronsyre. Hvis en opløselig saltform ikke står 30 til rådighed, opløses forbindelsen med formlen I eller formlen II i et egnet medopløsningsmiddel eller kombinationer der af. Eksempler på sådanne egnede medopløsningsmidler indbefat- 18 DK 170042 B1 ter, men er ikke begrænset til, alkohol, propylenglycol, poly-ethylenglycol 300, polysorbat 80, glycerin og lignende i koncentrationer, der ligger fra 0 til 60% af det samlede rumfang.

Fortrinsvis vil hver parenteral enhedsdosis indeholde den ak-5 ti ve bestanddel i en mængde fra ca. 0,1 mg til ca. 500 mg.

Fortrinsvis vil hver oral enhedsdosis indeholde den aktive bestanddel i en mængde.fra ca. 1 mg til ca. 1000 mg.

Forbindelserne med formlen I og formlen II er alle aktive som immunmodulerende midler i dyr, herunder mennesker, der har be-10 hov for immunmodulering, når disse forbindelser administreres til dyrene som omtalt ovenfor. Ved udtrykket "immunmodulerende middel" menes, at hver af forbindelserne med formlen I eller formlen II er i stand til at inducere immunundertrykkelse via induktion af undertrykkercelle-15 agtig aktivitet (som påvist ved deres aktivitet ved under- trykkercelle-prøven, der er beskrevet i tabel 2) og/eller via frembringelse af et statistisk signifikant fald i inflammationen af den af immunsystemreaktionen formidlede sekundære læsion i den adjuvant-inducerede artritis-prøve (se tabel 1). 20 Indikationer for terapi under anvendelse af et immunmodulerende middel indbefatter, men er ikke begrænset til, behandling af følgende sygdomstilstande: reumatoid artritis, systemisk lupuserythematosis, 25 multipel sklerose, akut afstødning af transplantation/podning, myasthenia gravis, progressiv systemisk sklerose, multipel myeloma, 30 atopisk dermatitis, hyperimmunoglobin E, hepatitis B-antigen negativ kronisk aktiv hepatitis, 19 DK 170042 B1

Hashimoto's thyroiditis, familiær middelhavsfeber,

Grave's sygdom, autoimmun hæmolytisk anasmi, 5 primær biliær cirrhosis, inflammatorisk tarmsygdom.

Opfindelsen angår også brug af en forbindelse med formlen I eller formlen II eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat deraf til fremstilling af et immunmodule-10 rende middel til behandling af et dyr, der har behov for immun-modulering, herunder mennesker og andre pattedyr- Ved udtrykket "behandling” menes profylaktisk eller terapeutisk terapi. Forbindelsen med formlen I eller formlen II administreres til et dyr, der har behov for immunmodulerende behandling, i en mængde, 15 der er tilstrækkelig til at frembringe denne immunmodulering i terapeutisk eller profylaktisk grad. Denne forbindelse med formlen I eller formlen II kan administreres til dyret i en sædvanlig doseringsform, der fremstilles ved at forene forbindelsen med formlen I eller formlen II med et sædvanligt farma-20 ceutisk acceptabelt bærerstof eller fortyndingsmiddel ifølge kendt teknik. Det vil erkendes af fagfolk, at formen og karakteren af den farmaceutisk acceptable bærer eller fortyndingsmidlet dikteres af den mængde aktiv bestanddel, som det kombineres med, administrationsvejen og andre velkendte variable.

25 Administrationsvejen for forbindelsen med formlen I eller formlen II kan være oral, parenteral, ved inhalation eller topisk. Udtrykket "parenteral" som anvendt i den foreliggende beskrivelse indbefatter intravenøs, intramuskulær, subkutan, rektal, vaginal eller intraperitoneal administration. De subkutane og 30 intramuskulære former for parenteral administration foretrækkes i almindelighed. Det daglige parenterale doseringsniveau for en forbindelse vil fortrinsvis være fra ca. 0,1 mg til ca.

1000 mg pr. dag. Det daglige orale doseringsniveau vil for- 20 DK 170042 B1 trinsvis være fra ca. 1 rag til ca. 2000 mg.

Forbindelserne med formlen I og formlen II kan også administreres ved inhalation. Ved "inhalation" menes intranasal eller oral inhalationsadministration. Passende doseringsformer til 5 sådan administration, såsom aerosolpræparater eller et inhalationsapparat, der giver en afmålt dosis, kan fremstilles ved sædvanlig teknik. Den foretrukne daglige dosering af en forbindelse med formlen I eller formlen II administreret ved inhalation er fra ca. 10 mg til ca. 100 mg pr. dag.

10 Forbindelserne med formlen I og formlen II kan også administreres topisk.

Mængden af en forbindelse med formlen I eller formlen II (i det følgende omtalt som den aktive bestanddel), som kræves til terapeutisk virkning ved topisk administration, vil na-15 turligvis variere med den valgte forbindelse, karakteren og alvoren af inflammationstilstanden og dyret,· som behandles, og er i sidste ende lægens afgørelse. En egnet immunmodule-rende dosis af en forbindelse med formlen I eller formlen II er fra 1,5 pg til 500 mg base pr. kg legemsvægt til topisk. admini-20 stration, og den mest foretrukne dosis er fra 1 ;ug til 50 mg pr. kg legemsvægt, f.eks. fra 5 jug til 25 mg pr. kg, administreret to eller tre gange om dagen. Til påføring på huden kan fra 1 ^ug til flere mg aktiv bestanddel påføres pr. gang, fortrinsvis fra 10 jug til 100 ;ug pr. gang.

25 Ved "topisk administration" menes ikke-systemisk administration, og den indbefatter anvendelse af en forbindelse med formlen I eller formlen II eksternt på epidermis, i mundhulen og inddrypning af en sådan forbindelse i øret, øjet og næsen, og hvor forbindelsen ikke i betydelig grad kommer ind i blod-30 banen. Ved "systemisk administration" menes oral, intravenøs, intraperitoneal og intramuskulær administration.

21 DK 170042 B1

Det er muligt at administrere en aktiv bestanddel alene som det rå kemikalium, men det foretrækkes, at det findes som et farmaceutisk præparat. Den aktive bestanddel kan til topisk administration omfatte fra 0,001% til 10% w/w, f.eks. fra 1 5 til 2 vægt% af præparatet, omend den kan omfatte så meget som 10% w/w, men fortrinsvis ikke over 5% w/w og mere foretrukket fra 0,1% til 1% w/w af præparatet.

De topiske præparater ifølge opfindelsen, både til veterinær brug og til human medicinsk brug, omfatter en aktiv bestand-10 del sammen med et eller flere acceptable bærerstoffer og even-tuelt andre terapeutiske bestanddele. Bæreren skal være acceptabel i den forstand, at den er forenelig med de andre bestanddele af præparatet og ikke er skadelig for modtageren.

Præparater, der er egnet til topisk administration, indbefatter 15 flydende eller halvflydende præparater, der er egnet til gennemtrængning af huden til det sted, hvor behandling kræves, såsom: linimenter, lotioner, cremer, salver eller pasta er samt dråber, der er egnet til administration til øjet, øret eller næsen.

20 Dråber ifølge opfindelsen kan omfatte sterile vandige eller olieagtige opløsninger eller suspensioner og kan fremstilles ved at opløse den aktive bestanddel i en egnet vandig opløsning af et baktericidt og/eller fungicidt middel og/eller eventuelle andre egnede konserveringsmidler, fortrinsvis indbefattende et 25 overfladeaktivt middel. Den fremkomne opløsning kan så klares ved filtrering, overføres til en egnet beholder, som derefter tillukkes og steriliseres ved autoklavering eller holdes på 90 - 100°C i 1/2 time. Alternativt kan opløsningen steriliseres ved filtrering og overføres til beholderen ved en aseptisk 30 teknik. Eksempler på baktericide og fungicide midler, der er egnet til anvendelse i dråber, er phenylmercurinitrat eller -acetat (0,002%), benzalkoniumchlorid (0,01%) og chlorhexidin- 22 DK 170042 B1 acetat (0,01%). Egnede opløsningsmidler til fremstilling af en olieagtig opløsning indbefatter glycerin, fortyndet alkohol og propylenglycol.

Lotioner ifølge opfindelsen indbefatter dem, der er egnet til 5 påføring på huden eller øjet. En øjenlotion kan omfatte en steril vandig opløsning, der eventuelt indeholder et baktericid, og kan fremstilles ved fremgangsmåder svarende til dem til fremstilling af dråber. Lotioner eller linimenter til påføring på huden kan også indeholde et middel til at fremskynde 10 tørring og afkøle huden, såsom en alkohol eller acetone, og/el-ler et fugtighedsbindende middel, f.eks. glycerin, eller en olie såsom ricinusolie eller arachisolie.

Cremer, salver eller pastaer ifølge opfindelsen er halvfaste præparater af den aktive bestanddel til ekstern anvendelse.

15 De kan fremstilles ved at blande den aktive bestanddel i findelt form eller pulveriseret form, alene eller i opløsning eller suspension i en vandig eller ikke-vandig væske, ved hjælp af et passende maskineri, med en fedtagtig eller ikke-fedtagtig grundmasse. Grundmassen kan omfatte hydrocarboner 20 såsom hård, blød eller flydende paraffin, glycerin, bivoks, en metalsæbe, et slimagtigt middel, en olie af naturlig oprindelse såsom mandelolie, majsolie, arachisolie, ricinusolie eller olivenolie, uldfedt eller dets derivater eller en fedtsyre såsom stearinsyre eller oliesyre, sammen med en al-25 kohol, f.eks. propylenglycol eller makrogoler. Præparatet kan indeholde ethvert egnet overfladeaktivt middel såsom et anionisk, kationisk eller ikke-ionisk overfladeaktivt stof, f.eks. sorbitanestere eller polyoxyethylenderivater deraf. Suspenderingsmidler såsom naturlige gummier, cellulosederiva-30 ter eller uorganiske materialer såsom siliciumdioxider og andre bestanddele såsom lanolin kan også inkluderes.

Det vil forstås af fagfolk , at den optimale mængde og afstanden mellem de enkelte doser af forbindelsen med formlen I eller 23 DK 170042 B1 formlen II bestemmes af karakteren og omfanget af den tilstand, som behandles, formen, vejen og administrationsstedet og det særlige dyr, som behandles, og at disse optima kan bestemmes ved sædvanlig teknik. Det vil også forstås af fag-5 folk, at det optimale forløb af behandlingen, dvs. antallet af doser af forbindelsen med formlen I eller formlen II, der gives om dagen i et bestemt antal dage, kan fastsættes af fagfolk under anvendelse af sædvanlige prøver til bestemmelse af behandlings forløbet.

10 De følgende eksempler belyser opfindelsen, idet dog eksemplerne 1-7, 13, 15 og 17-20 angår fremstilling af mellemprodukter, medens eksemplerne 8-12 angår fremstilling af en kendt forbindelse.

EKSEMPLER.

15 I. PRÆPARATEKSEMPLER.

Eksempel A - Kapselpræparat.

Et farmaceutisk middel ifølge opfindelsen i form af en kapsel fremstilles ved at fylde en standard hård gelatinekapsel i to dele med 50 mg af en forbindelse med formlen I eller formlen II 20 i pulverform, 110 mg lactose, 32 mg talk og 8 mg magnesium-stearat.

Eksempel B - Injicerbart parenteralt middel.

Et farmaceutisk middel ifølge opfindelsen i en form egnet til administration ved injektion fremstilles ved at omrøre 1,5 vægt% 25 af en forbindelse med formlen I eller formlen II i 10 rumfangs% 24 DK 170042 B1 propylenglycol og vand. Opløsningen steriliseres ved filtrering.

Eksempel C - Salvepræparat.

Forbindelse med formlen I eller formlen II, 1,0 g.

5 Hvid blød paraffin til 100,0 g.

Forbindelsen med formlen I eller formlen II dispergeres i et lille rumfang af bæreren og inkorporeres gradvis i hovedmassen af bæreren til fremstilling af et jævnt homogent produkt. Sammentrykkelige metaltuber fyldes så med dispersionen.

10 Eksempel D - Topisk cremepræparat.

Forbindelse med formlen I eller formlen II, 1,0 g.

"Polawax" GP 200, 20,0 g.

Vandfri lanolin, 2,0 g.

Hvid bivoks, 2,5 g.

15 Methylhydroxybenzoat, 0,1 g.

Destilleret vand til 100,0 g.

"Polawax", bivoks og lanolin opvarmes sammen til 60°C. En opløsning af methylhydroxybenzoat tilsættes, og homogenisering opnås ved anvendelse af hurtigtgående omrøring. Temperaturen 20 får lov at falde til 50°C. Forbindelsen med formlen I eller formlen II tilsættes så og dispergeres grundigt, og midlet får lov at afkøle under langsomtgående omrøring.

Eksempel E - Topisk lotionspræparat.

*

Forbindelse med formlen I eller formlen II, 1,0 g.

25 Sorbitanmonolaurat, 0,6 g.

Polysorbat 20, 0,6 g.

25 DK 170042 B1

Cetostearylalkohol, 1,2 g.

Glycerin, 6,0 g.

Methylhydroxybenzoat, 0,2 g.

Renset vand B.P. til 100,00 ml.

5 Methylhydroxybenzoat og glycerin opløses i 70 ml af vandet ved 75°C. Sorbitanmonolaurat, polysorbat 20 og cetostearylalkohol sammensmeltes ved 75°C og sættes til den vandige opløsning.

Den fremkomne emulsion homogeniseres, får lov at afkøle under stadig omrøring, og forbindelsen med formlen I eller formlen 10 II tilsættes som en suspension i det resterende vand. Hele suspensionen omrøres, indtil den er homogeniseret.

Eksempel F - Øjendråber.

Forbindelse med formlen I eller formlen II, 0,5 g. Methylhydroxybenzoat, 0,01 g.

15 Propylhydroxybenzoat, 0,04 g.

Renset vand B.P. til 100,00 ml (B.P. = britisk farmakopé).

Methyl- og propylhydroxybenzoat opløses i 70 ml renset vand ved 75°C, og den fremkomne opløsning får lov at afkøle. Forbindelsen med formlen I eller formlen II tilsættes så, og op-20 løsningen steriliseres ved filtrering gennem et membranfilter (0,22 ιομ m porestørrelse) og pakkes aseptisk i egnede sterile beholdere.

Eksempel G - Middel til administration ved inhalation.

Til en aerosolbeholder med en kapacitet på 15 - 20 ml: Bland 25 10 mg .af en forbindelse med formlen I eller formlen II med 0,2-0,2% af et smøremiddel, såsom polysorbat 85 eller oliesyre, og disperger denne blanding i et drivmiddel, f.eks. freon, fortrinsvis i en kombination af (1,2-dichlortetrafluorethan) og difluorchlormethan, og anbring i en passende aerosolbeholder 26 DK 170042 B1 egnet til enten intranasal eller oral inhalation.

Eksempel H - Middel til administration ved inhalation.

Til en aerosolbeholder med en kapacitet på 15 - 20 ml: Opløs 10 mg af en forbindelse med formlen I eller formlen II i etha-5 nol (6-8 ml), tilsæt 0,1 - 0,2% af et smøremiddel, såsom polysorbat 85 eller oliesyre, og disperger i et drivmiddel, f.eks. freon, fortrinsvis i en karbination af (1,2-dichlortetra-fluorethan) og difluorchlormethan, og anbring i en passende aerosolbeholder egnet til enten intranasal eller oral inhala-10 tion.

II. SYNTESEEKSEMPLER.

I de følgende eksempler er temperaturen i °C. Elementæranalyser og smeltepunkter af forbindelserne med formlen I og formlen II, fremstillet ved fremgangsmåden i de følgende syn-15 teseeksempler, er anført i tabellerne 3 og 4.

Natriumhydrid, trimethylsulfoxoniumjodid, methylvinylketon, ethylcyanoacetat, morpholin, lithiumaluminiumhydrid, bortri-fluoridetherat, heptan-4-on, nonan-5-on, undecan-6-on, 4-(1,1-dimethylethyl)cyklohexanon, 4-cyklohexylcyklohexanon, valer-20 aldehyd, allylbromid, dodecanal, 2,3-dimethylvaleraldehyd, 2- ethylbutyraldehyd, 2-ethylhexanal, adamantanon, bicyklo(3.3.1)-nonan-9-on, 3-dimethylaminopropylamin, 3-diethylaminopropyl-amin, diisobutylamin, 2,6-dimethylheptan-4-on, cykloheptanon, eddikesyreanhydrid, Triton B og 3-methylaminopropylamin blev 25 købt fra Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wisconsin, USA).

3-(l-piperidin)propylamin blev syntetiseret ved lithiumaluminiumhydrid- reduktion af 1-piperidinpropionitril (Aldrich Chemicals, Milwaukee, Wisconsin, USA).

27 DK 170042 B1 4-dimethylaminobutylamin og 6-dimethylaminohexylamin blev købt fra Pfaltz & Bauer (Waterbury, Connecticut, USA). 5- dimethylaminopentylamin og 7-dimethylaminoheptylamin blev købt fra Karl Industries (Aurora, Ohio, USA).

5 3-aminopropanitril .og 3-(l-pyrrolidin)propylamin blev købt fra Alfa Chemicals (Danvers, Massachusetts, USA). 6-(l-piperidin)hexylamin blev fremstillet i to trin ved alkylering af 6-broinhexylamin (Aldrich Chemicals) med piperidin og påfølgende lithiumaluminiumhydrid-reduktion. 6-(1-pyrrolidin)-10 hexylamin blev fremstillet på lignende måde af den nødvendige bromnitril og pyrrolidin.

AFSNIT 1: Syntese af 4,4-disubstituerede cyklohexanoner.

Skema 1 viser den almene syntese af 4,4-disubstituerede cyklohexanoner gående ud fra enten en i handelen værende keton 15 eller a,a-disubstitueret aldehyd.

Skema 1;

VKCH^rO)! Q BF3OEt2 R. O

R2 NaH,DMSO benzen r{ \

Triton BO O

methylvinylketon II II

tert-butanol ^ · <S

eller ethylacetat methylvinylketon ^ H2S04 (kat.) Rj R2 Ri ^ 28 DK 170042 B1

Eksempel 1-5 nedenfor beskriver specifikt syntesen af 4,4-dipropylcyklohexanon ud fra heptan-4-on, men denne metode er blevet anvendt til at fremstille følgende cyklohexanoner 5 gående ud fra de anførte i handelen værende ketoner:

Keton: Cyklohexanon: 2,6-dimethylhepten-4-on 4,4-bis(2-methylpropyl)- nonan-5-on 4,4-dibutyl- undecan-6-on 4,4-dipentyl- 10 cykloheptanon spiro[5,6]dodecan-3-on 2-adamantanon spiro- (cyklohexan-1,2 *-tricyklo-[3.3.1.1^'^]decan-4-on I de følgende tilfælde var de a,a-disubstituerede aldehyder 15 til rådighed, og de 4,4-disubstituerede cyklohexanoner blev syntetiseret:

Aldehyd: Cyklohexanon: 2-ethylbutyraldehyd 4,4-diethyl- 2-ethylhexanal 4-butyl-4-ethyl- 20 2,3-dimethylvaleraldehyd 4-methyl-4- (1-methylpropyl)-

En anden vej, der giver bedre udbytte, specielt til syntese af 2-propylpentanal, er beskrevet i skema 2. Fremgangsmåden er vist i eksempel 5 og 6.

Skema 2: + toluen I I I tilbagesvaling, H “'n.A, -¾0 29 DK 170042 B1 1) allylbranid y j I acetonitril \ w\ 3*0* · >—' ) 10¾ Pd/C /

EtOAc V—^ H-<

O

Eksempel 1: 2-propyl-l,2-epoxypentan.

Dimethylsulfoxid (1 1/mol) blev langsomt sat til en mekanisk omrørt blanding af natriumhydrid (1,1 ækvivalenter) og tri-methylsulfoxoniumjodid (1 ækvivalent) under en indifferent 5 atmosfære. Der skete kraftig hydrogenudvikling, og efter afslutning af gasudviklingen blev heptan-4-on (0,4 ækvivalenter) tilsat, og reaktionsblandingen blev opvarmet til 75°C i 3 - 24 timer. Reaktionsblandingen blev hældt i vand (3-5 rumfang) og ekstraheret med ethylacetat. Den organiske ekstrakt blev 10 tørret med magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af det ønskede produkt (85% udbytte), der blev anvendt uden yderligere rensning.

Eksempel 2: 2-propylpentanal.

Til en kraftigt omrørt opløsning af 2-propyl-l,2-epoxypentan 15 (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 1, i ben zen afkølet til 0°C blev sat en opløsning af bortrifluorid-etherat (0,5 ækvivalenter) i benzen. Reaktionsblandingen blev omrørt i 1 minut og reaktionen standset ved tilsætning af vand.

30 DK 170042 B1

Efter adskillelse af faserne blev den organiske fase vasket med mættet vandig natriumbicarbonat og vand, tørret med magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af en farveløs olie. Olien blev destilleret til dannelse af det 5 ønskede produkt som en farveløs olie, 75% udbytte, kogepunkt 60 - 63°C/0,1 mm.

Eksempel 3: 4,4-dipropylcyklohex-2-enon.

Metode 1: Til en opløsning af en base (Triton B, 0,05 ækviva lenter) i tert-butanol blev der samtidig fra adskilte skille-10 tragter sat 2-propylpentanal (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 2, og methylvinylketon (1,2 ækvivalenter) i løbet af 1 time, således at temperaturen holdtes under 15°C. Til reaktionsblandingen blev derefter sat koncentreret saltsyre (0,02 - 0,2 ækvivalenter), og opløsningen blev koncentre-15 ret til en viskos olie. Olien blev opløst i ethylacetat og vasket to gange med 0,5 M natriumhydroxidopløsning. Den organiske fase blev tørret over magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af det ønskede produkt efter kuglerørsdestillation, kogepunkt 75 - 80°C/0,05 mm, udbytte 20 - 35%.

20 Metode 2: Til en opløsning af 2-propylpentanal (1 ækvivalent) og methylvinylketon (1 ækvivalent) i benzen (400 ml/mol) blev sat koncentreret svovlsyre (3 ml/mol). Reaktionsblandingen blev opvarmet under tilbagesvaling under anvendelse af en Dean-Stark vandlås. Tilbagesvaling blev fortsat i 3 - 5 timer, og 25 der blev ikke iagttaget yderligere udskillelse af vand. Den sorte reaktionsblanding blev afkølet til stuetemperatur og vasket med mættet natriumbicarbonat. Den organiske fase blev tørret med magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af en mørkebrun olie. Olien blev kuglerørsdestille-30 ret til dannelse af det ønskede produkt som en farveløs olie, kogepunkt 75 - 85°C/0,075 mm, udbytte 65 - 75%.

31 DK 170042 B1

Eksempel 4: 4,4-dipropylcyklohexanon.

Til en suspension af 10% palladium-på-carbon (0,1 askvi valent) i ethylacetat blev sat 4,4-dipropylcyklohex-2-enon, fremstillet som beskrevet i eksempel 3. Reaktionsblandingen blev hy- 2 5 drogeneret ved 300N/m hydrogen i et Parr hydrogenerings- apparat ved stuetemperatur, indtil hydrogenoptagelsen var ophørt (0,5 - 5 timer). Katalysatoren blev fjernet ved filtrering gennem Celite, og filtratet blev koncentreret til dannelse af det ønskede produkt som en farveløs olie. Produktet blev 10 anvendt uden yderligere rensning. Udbytte 98%.

Eksempel 5: 2-propylpent-4-enal.

Toluen, valeraldehyd (1 ækvivalent) og diisobutylamin (1 ækvivalent) blev forenet og opvarmet under tilbagesvaling under anvendelse af en Dean-Stark vandlås. Opvarmning blev fortsat, 15 indtil vand ophørte med at blive opsamlet i låsen (1 ækvivalent vand blev opsamlet). Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur, og toluen blev fjernet under reduceret tryk. Til den farveløse remanens blev der sat acetonitril (500 ml/mol), efterfulgt af allylbromid (1,5 ækvivalenter).

20 Reaktionsblandingen blev opvarmet til tilbagesvaling i 16 - 24 timer.

Reaktionsblandingen blev behandlet med en stødpudeopløsning ( eddikesyre (60 ml)/natriumacetat (30 g)/vand (300 ml)/mol) og opvarmet til tilbagesvaling i 5 timer. Den klare orangebrune opløsning blev afkølet til stuetemperatur, og ethylacetat 25 (300 ml/mol) og saltvand (150 ml/mol) blev tilsat. Den orga niske fase blev derpå vasket med 10% vandig saltsyre, vand, mættet vandig natriumbicarbonatopløsning og saltvand. Den organiske ekstrakt blev tørret over magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af en brun olie. Olien blev un- 32 DK 170042 B1 derkastet brudt destillation til dannelse af det ønskede produkt, kogepunkt 68 - 73°C/30 mm, udbytte 50%.

Eksempel 6: 2-propylpentanal.

En Parr hydrogeneringsflaske blev fyldt med 10% palladium-på- 5 carbon (0,1 ækvivalent) og ethylacetat. En opløsning af 2- propylpent-4-enal, fremstillet som i eksempel 5, i ethylacetat 2 blev tilsat. Blandingen blev hydrogeneret ved 300N/m hydrogen i et Parr hydrogeneringsapparat ved stuetemperatur, indtil hydrogenoptagelse ophørte. Katalysatoren blev fjernet ved 10 filtrering gennem Celite. Filtratet blev koncentreret til dannelse af det ønskede produkt som en farveløs olie. Produktet blev anvendt uden yderligere rensning.

AFSNIT 1A: Syntese af 4-substituerede cyklohexanoner.

Syntesen af 4-decylcyklohexenon er beskrevet i eksempel 7. På 15 lignende måde kunne andre ligekædede, forgrenede eller cykliske α-substituerede aldehyder omdannes til 4-substituerede cyklohexanoner .

Eksempel 7: Syntese af 4-decylcyklohexanon.

En blanding af kaliumcarbonat (1 ækvivalent) og morpholin (3,3 20 ækvivalenter) blev afkølet til -5°C under en indifferent atmosfære, og dodecanal (1 ækvivalent) blev tilsat dråbevis i løbet af 30 minutter. Reaktionsblandingen fik lov at opvarme til stuetemperatur, og omrøring blev fortsat i 3 - 6 timer. Tilsætning af ether efterfulgt af filtrering og koncentration 25 gav rå morpholin-enamin. Remanensen blev destilleret til dannelse af det ønskede produkt, kogepunkt 103 - 108°C/0,07 mm, udbytte 74%.

DK 170042 Bl 33

Under en indifferent atmosfære blev ovennævnte morpholin-enamin (1 ækvivalent) og methylvinylketon (1,05 ækvivalenter) forenet og omrørt natten over ved stuetemperatur. En stødpudeopløsning ( natriumacetat (70 g)/eddikesyre (700 ml)/ethanol (525 ml)/ 5 vand (175 ml)/mol) blev tilsat, og opløsningen blev opvarmet under tilbagesvaling i 4 - 6 timer. De flygtige komponenter blev fjernet under reduceret tryk, og den tykke brune olieremanens blev skilt mellem ethylacetat og vand. Den organiske fase blev vasket med vand og saltvand, tørret over magnesium-10 sulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af en lysebrun viskos olie. Olien blev kuglerørsdestilleret til dannelse af det ønskede produkt som en farveløs viskos olie, kogepunkt 122 - 135°C/0,22 mm, udbytte 40%.

Cyklohexenonen, syntetiseret ovenfor, blev hydrogeneret på lig-15 nende måde som beskrevet i eksempel 6 til dannelse af 4-decyl-cyklohexanon. Produktet blev anvendt uden yderligere rensning.

AFSNIT 2: Forbindelser med formlen I, hvori m er 1, og og --------- B er andet end H.

Skema 3 viser den almene syntese af azaspiran-analogene med 20 formlen I, hvori mer 1, og R^ er andet end H, og n, R^ og R2 er som ovenfor defineret, gående ud fra de ønskede substituerede cyklohexanoner.

Skema 3t 0 NC^OOOEt NCCHiCOOEt^ KCN w eddikesyre I \ EiOH 9f° /\ natriumacetat

R> ** A

34 DK 170042 B1 cooh

L .COOH p / 1 - O

HQ/HOAC/H2O AcgO W R1\/ ^ RaA-/y-0 /n o

Ri r2 — :¾

^vC

0/2HQ r3

Eksempel 8-12 nedenfor beskriver syntesen af det kendte 2-(3-dimethyl-aminopropyl)-8,8-diethyl-2-azaspiro[4,5]decan-dihydrochlorid ud fra 4,4-diethylcyklohexanon. På lignende måde blev følgende cykliske ketoner bragt til at reagere til dannelse af ana-5 loge derivater af forbindelser med formlen X, herunder: 4.4- dipropylcyklohexanon, 414-dibutylcyklohexanon, 4.4- dipentylcyklohexanon, 4.4- bis(2-methylpropyl)cyklohexanon, 10 4-ethyl-4-butylcyklohexanon, 4-methyl-4-(1-methylpropyl)cyklohexanon, 4-cyklohexylcyklohexanon, 4-decylcyklohexanon, 4- (1,1-dimethylethyl)cyklohexanon.

15 Eksempel 11 beskriver reaktionen af et anhydrid med dimethyl-aminopropylamin til dannelse af det ønskede imid.

På lignende måde er 4,4-dipropylcyklohexan-l-carboxy-l-eddike-syreanhydrid blevet kondenseret med: 35 DK 170042 B1 4- dimethylaminobutylarnin, 5- dimethylaminopentylamin, 6- dimethylaminohexylamin, 7- dimethylaminoheptylamin, 5 3-diethylaminopropylamin, 3- (1-piperidin)propylamin, 6- (1-piperidin)hexylamin, 3- (1-pyrrolidin)propylamin, 6-(1-pyrrolidin)hexylamin, 10 og derefter reduceret som beskrevet i eksempel 12 til dannelse af det ønskede produkt efter hydrochloriddannelse.

På lignende måde kan ethvert anhydrid afledt af den ønskede substituerede cyklohexanon bringes til at reagere med enhver af de ovenfor nævnte aminer og derpå bringes til at reagere som 15 i eksempel 12 til dannelse af den ønskede azaspiran-analog.

Eksempel 8: Ethyl-a-cyano-a-(4,4-diethylcyklohexyliden)acetat.

Til en opløsning af 4,4-diethylcyklohexanon (1 askvi valent) i toluen blev sat ethyicyanoacetat (1 ækvivalent), eddikesyre (0,2 ækvivalenter) og ammoniumacetat (0,1 ækvivalent). Blandin-20 gen blev opvarmet til tilbagesvaling under anvendelse af et

Dean-Stark apparat til opsamling af vand, som azeotropisk blev fjernet fra reaktionen. Efter opsamling af 1 ækvivalent vand blev reaktionsblandingen afkølet og vasket med vand og mættet vandig natriumbicarbonatopløsning. Den organiske fase blev tørret over 25 magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret. Remanensen blev renset ved destillation under anvendelse af et kuglerørsapparat til dannelse af det ønskede produkt som en farveløs olie, kogepunkt 92 - 98°C/0,15 mm, udbytte 80 - 95%.

36 DK 170042 B1

Eksempel 9: 4,4-diethylcyklohexan-l-carboxy -1-eddikesyre.

Til en opløsning af ethyl-a-cyano-a-(4,4-diethylcyklohexyliden)-acetat (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet ovenfor, i ethanol blev sat en opløsning af kaliumcyanid (1,15 ækvivalen-5 ter) i vand. Reaktionsblandingen blev opvarmet til 50 - 85°C i 3 - 9 timer og derefter koncentreret til tørhed. Remanensen blev behandlet med saltsyre og ekstraheret med ethylacetat. De forenede organiske ekstrakter blev tørret over magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret. Remanensen blev opløst i en blanding 10 af eddikesyre/saltsyre/vand (4,5 liter/2 liter/0,2 liter mol) og opvarmet til tilbagesvaling i 2 - 5 dage. Flygtige stoffer blev fjernet under reduceret tryk, og den faste rest blev skilt mellem vand og ethylacetat. Den organiske ekstrakt blev tørret med magnesiumsulfat, filtreret og koncentreret til dannelse 15 af den ønskede disyre som et hvidt fast stof. Omkrystallisation af ethylacetat gav et hvidt krystallinsk fast stof, smeltepunkt 150 - 152°C, udbytte 75 - 85%.

Eksempel 10: 4,4-diethylcyklohexan-l-carboxy-l-eddikesyre- ----------— anhydrid.

20 4,4-diethylcyklohexan-l-carboxy-1-eddikesyre (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 9, blev opløst i eddikesyre-anhydrid og opvarmet under tilbagesvaling i 1 - 6 timer. Overskud af eddikesyreanhydrid blev fjernet ved destillation under reduceret tryk, og remanensen blev omkrystalliseret af hexaner.

25 Smeltepunkt 91 - 93°C, 90 - 95% udbytte.

NOTE: I de tilfælde, hvor substituenterne på 4-stillingen af udgangs-cyklohexanonen ikke er identiske, blev de geometrisk isomere anhydrider adskilt ved kromatografi på et Waters 500 prep-system under anvendelse af hexan/ 30 ethylacetat-blandinger som eluent.

37 DK 170042 B1

Eksempel 11: 2-(3-dimethylaminopropyl)-8,8-diethyl-2-azaspiro- ------------ [4,5]decan-l,3-dion.

Til en opløsning af 4,4-diethylcyklohexan-l-carboxy-l-eddike-syreanhydrid (1 ækvivalent) i toluen blev sat 3-dimethylamino-5 propylamin (1r05 ækvivalenter), og reaktionsblandingen blev opvarmet til tilbagesvaling under anvendelse af en Dean-Stark lås. Efter opsamling af vand (1 ækvivalent) i låsen blev reaktionsblandingen afkølet til stuetemperatur, og opløsningsmidlet blev fjernet under reduceret tryk. Remanensen blev an-10 vendt direkte uden yderligere rensning.

Eksempel 12: 2-(3-dimethylaminopropyl)-8,8-diethyl-2-azaspiro- ------------ (4,5]decan-dihydrochlorid.

Til en blanding af lithiumaluminiumhydrid (4 ækvivalenter) i diethylether blev dråbevis sat en opløsning af 2-(3-dimethyl-15 aminopropyl)-8,8-diethyl-2-azaspiro[4,5Itlecan-l,3-dion (1 ækvi valent) , fremstillet som beskrevet i eksempel 11, i diethyl-ether. Reaktionsblandingen blev omrørt i 2 - 6 timer efter endt tilsætning. Overskud af hydrid blev mættet med natrium-sulfatdecahydrat, og den fremkomne blanding blev filtreret, og 20 filtratet blev koncentreret til dannelse af den ønskede amin som en farveløs olie, udbytte 90 - 95%.

Olien blev opløst i et minimum af vandfri ethanol, og en afkølet opløsning af hydrogenchlorid i ethanol blev tilsat. Efter tilsætning af et stort rumfang ether dannedes et hvidt 25 bundfald, som blev isoleret ved filtrering. Det hvide faste stof blev omkrystalliseret af ethanol. Smeltepunkt 298 - 299°C (dekomponering), udbytte 90%.

AFSNIT 3: Forbindelser med formlen I, hvori m er 1, og R^ --------- og er H.

30 Skema 4 viser den almene syntese af azaspiran-analogene med DK 170042 Bl 38 formlen I, hvori m er 1, og R^ er H, og n, R^ og R2 er som ovenfor defineret, ud fra passende substituerede cyklo-hexanoner.

Skema 4: :>opr χγζ»

DLiAUfr *l\/ /H

DHOÆtOH ^ Rj'N-/V-N

0,2 HG ^ 'H

5 Eksempel 13 og 14 beskriver syntesen af 2-(3-aminopropyl)-8f8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]decan-dihydrochlorid ud fra 4,4-di-propylcyklohexan-l-carboxy-l-eddikesyreanhydrid.

På lignende måde kan passende substituerede cyklohexanoner og anhydriderne afledt deraf, som er beskrevet tidligere, brin- 10 ges til at reagere med io-aminoalkylnitriler (n = 4 - 7) som i eksempel 13 og 14 til syntese af de ønskede azaspiraner, hvori R0 = R, = H.

3 4

Eksempel 13: 2-(2-cyanoethyl)-8,8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]- ------------ decan-1,3-dion.

15 Til en opløsning af 4,4-dipropylcyklohexan-l-carboxy-l-eddike-syreanhydrid (1 ækvivalent), fremstillet analogt med 4,4-di-ethylderivatet fremstillet i eksempel 10, blev sat 3-amino- 39 DK 170042 B1 propannitril (1,1 ækvivalent) og toluen. Reaktionsblandingen blev opvarmet til tilbagesvaling under anvendelse af en Dean-Stark lås. Efter opsamling af vand (1 ækvivalent) blev reaktionsblandingen afkølet til stuetemperatur, og opløsnings-5 midlet blev fjernet under reduceret tryk. Remanensen blev renset ved søjlekromatografi (hexan/ethylacetat (2/1)) til dannelse af et hvidt fast stof, smeltepunkt 117 - 117,5°C, udbytte 95%.

Eksempel 14: 2-(3-aminopropyl)-8,8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]- 10 ------------ decan-dihydrochlorid.

Til en blanding af lithiumaluminiumhydrid (4 ækvivalenter) i diethylether blev dråbevis sat en opløsning af 2-(2-cyanoethyl)- 8,8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]decan-1,3-dion (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 13, i diethylether. Reaktions-15 blandingen blev omrørt i 2 - 4 timer efter endt tilsætning.

Overskud af hydrid blev mættet med natriumsulfatdecahydrat, og den fremkomne blanding blev filtreret, og filtratet blev koncentreret. Den fremkomne væske blev renset ved præparativ væskekromatografi (silicagel, 2,5% ammoniumhydroxid i methanol) 20 til dannelse af den ønskede amin som en farveløs olie, udbytte 73%.

Olien blev opløst i en minimal mængde vandfri ethanol, og en opløsning af hydrogenchlorid i ethanol blev tilsat. Opløsningen blev koncentreret til dannelse af et hvidt fast stof, smelte-25 punkt 245 - 249°C (dekomponering), udbytte 95%.

AFSNIT 4: Forbindelser med formlen I, hvori m er 1, og R3 er ----—--- andet end H, og R^ er H.

Skema 5 viser den almene syntese af azaspiran-analogene med formlen I, hvori m er 1, den ene af R^ og R^ er H, medens den 30 anden er andet end H, og n, R^ og R2 er som ovenfor defineret, ud fra passende substituerede cyklohexanoner.

40 DK 170042 B1

Skema 5:

RlY ν/γ0 H2N(CH2)nNR3R4 R'\T V/V° r, O O K4 > *>OG /- 2) HO/EtOH K2 V \ 0,2 HQ nR4

Eksempel 15 og 16 beskriver syntesen af 2-(3-methylaminopropyl)- 8,8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]decan-dihydrochlorid ud fra 4,4-dipropylcyklohexan-l-carboxy-l-eddikesyreanhydrid.

På lignende måde kan de passende substituerede cyklohexanoner, 5 der er beskrevet tidligere, og anhydrider afledt deraf bringes til at reagere som beskrevet i eksempel 15 og 16 med io-alkyl-aminoalkylaminer (n = 4 - 8) til dannelse af azaspiranderivater, hvori Rg = alkyl, og.R^ = H.

Eksempel 15: 2-(3-methylaminopropyl)-8,8-dipropyl-2-azaspiro- 10 ------------ [4,5]decan-1,3-dion.

Til en opløsning af toluen og 4,4-dipropylcyklohexan-l-carboxy-1-eddikesyreanhydrid (1 ækvivalent) blev sat 3-methylaminopropyl-amin (1,05 ækvivalenter). Reaktionsblandingen blev opvarmet til tilbagesvaling under anvendelse af en Dean-Stark lås.

15 Efter opsamling af vand (1 ækvivalent) blev reaktionsblandingen afkølet til stuetemperatur og koncentreret under reduceret tryk. Remanensen blev anvendt uden yderligere rensning.

41 DK 170042 B1

Eksempel 16: 2- (3-methylaminopropyl)-8,8-dipropyl-2-azaspiro- ------------ [4 f 5]decan-dihydrochlorid.

Til en blanding af lithiumaluminiumhydrid (4 ækvivalenter) i diethylether blev dråbevis sat en opløsning af 2-(3-methylamino-5 propyl)-8,8-dipropyl-2-azaspiro[4,5]decan-1,3-dion (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 15, i diethylether. Reaktionen blev oparbejdet som i eksempel 14. Produktet blev renset ved søjlekromatografi (silicagel, 0,5% ammoniumhydroxid i methanol) til dannelse af en farveløs olie, udbytte 67%.

10 olien blev opløst i et minimum af vandfri ethanol, og en opløsning af hydrogenchlorid i ethanol blev tilsat. Ved afkøling dannedes et hvidt bundfald, som blev isoleret ved filtrering. Smeltepunkt 258 - 260°C (dekomponering), udbytte 84%.

AFSNIT 5: Forbindelser med formlen I, hvori m er 2.

15 skema 6 viser vejen til alkylsubstituerede azaspiro[5,5]undecan-analoge gående ud fra passende substituerede cyklohexanoner.

Skema 6; 0 X)-==- NC o

Rj Rj xx? ^ OH (□

XDCvC

o 2)Ηα ίακα 42 DK 170042 B1

Eksempel 17 - 21 nedenfor beskriver fremstillingen af 3—(3— dimethylamino)propyl-9,9-dipropyl-3-azaspiro[5,5J undecan-dihydrochlorid ud fra 4,4-dipropylcyklohexanon.

På lignende måde kan de passende substituerede cyklohexanoner 5 som beskrevet tidligere (se afsnit 1, 1A og 2) og anhydrider-- ne afledt deraf som beskrevet i dette afsnit bringes til at reagere med: a) dialkylaminoalkylaminer som beskrevet i afsnit 2 i synteseeksemplerne til dannelse af azaspiranderivater, hvori 10 R3 = R4 = alkyl, b) aminoalkylnitriler som beskrevet i afsnit 3 i synteseeksemplerne til dannelse af azaspiranderivater, hvori R^ = R^ =

Hf c) alkylaminoalkylaminer som beskrevet i afsnit 4 i syntese-15 eksemplerne til dannelse af azaspiranderivater, hvori R^ = alkyl, og R4 = H.

Eksempel 17: 9,9-dipropyl-l,5-dicyano-3-azaspiro[5,5]undecan- ----------— 2,4-dion.

Til en opløsning af 4,4-dipropylcyklohexanon (1 ækvivalent) og 20 ethylcyanoacetat (2 ækvivalenter) i ethanol afkølet til 0°C blev sat en mættet alkoholisk ammoniakopløsning. Reaktionsblandingen blev tilproppet og fik lov at reagere ved 0°C i 2-7 dage. Det udfældede ammoniumsalt af dicyanoimidet blev filtreret, presset, vasket med ether og tørret. Det tørrede 25 salt blev opløst i en minimal mængde kogende vand og filtreret varmt. Det varme filtrat blev omrørt og syrnet med koncentreret saltsyre, og efter afkøling blev det udfældede produkt isoleret ved filtrering til dannelse af det Ønskede imid, udbytte 33%.

43 DK 170042 B1

Eksempel 18: 4,4-dipropylcyklohexan-l,l-dieddikesyre.

9,9-dipropyl-l,5-dicyano-3-azaspiro[5,5]undecan-2,4-dion, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge eksempel 17, blev opløst i en opløsning af koncentreret saltsyre/eddikesyre/vand 5 (4/7/1), og opløsningen blev opvarmet under tilbagesvaling i 2-3 dage. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur, og flygtige materialer blev fjernet på roterende fordamper. Remanensen blev skilt mellem vand og ethylacetat. Den organiske fase blev vasket med saltvand, tørret over magnesium-10 sulfat, filtreret og koncentreret til dannelse af den ønskede syre, som blev omkrystalliseret af ethylacetat/hexaner, udbytte 35 - 50%.

Eksempel 19: 4,4-dipropylcyklohexan-l,l-dieddikesyreanhydrid.

4,4-dipropylcyklohexan-l,l-dieddikesyre, fremstillet som be-15 skrevet i eksempel 18, blev opløst i eddikesyreanhydrid og tilbagesvalet i 1 - 6 timer. Overskud af eddikesyreanhydrid blev fjernet ved destillation under reduceret tryk, og remanensen blev omkrystalliseret af hexaner. Smeltepunkt 91 - 93°C, udbytte 90 - 95%.

20 Eksempel 20: 3-(3-dimethylaminopropyl)-9,9-dipropyl-3-azaspiro- ------------ [5,5]undecan-2,4-dion.

Dette imid blev fremstillet af 9,9-dipropylcyklohexan-l,l-dieddikesyreanhydrid (1 ækvivalent), fremstillet som beskrevet i eksempel 19, og 3-dimethylaminopropylamin (1 ask vi valent) 25 på lignende måde som beskrevet i eksempel 11. Produktet, en farveløs olie, blev anvendt uden yderligere rensning.

Eksempel 21: 3-(3-dimethylaminopropyl)-9,9-dipropyl-3-azaspiro- ------------ [5,5]undecan-dihydrochlorid.

44 DK 170042 B1

Aminen blev fremstillet ved lithiumaluminiumhydrid-reduktion af 3-(dimethylamino)propyl-9,9-dipropyl-3-azaspiro[5,5]undecan-2, 4-dion, fremstillet som beskrevet i eksempel 16, på lignen-måde som beskrevet i eksempel 12. Det rå hvide faste stof 5 blev udfældet ved tilsætning af ether og omkrystalliseret af ethanol. Smeltepunkt >320°C (dekomponering), udbytte 85 - 90%.

AFSNIT 6: Syntese af polycykliske azaspiranderivater med form- --------- len II.

2-adamantanon blev omdannet til en 4,4-spirosubstitueret cyklo-10 hexanon som beskrevet i afsnit 1 og derefter omdannet til den ønskede azaspiro-analog under anvendelse af den metode, der er beskrevet i afsnit 2 (eksempel 8 - 12). 329-330°C.

2-adamantanon blev omdannet til det Ønskede azaspiranderivat under anvendelse af metoden beskrevet i afsnit 2 (eksempel 8 -15 12). Smeltepunkt 300 - 302°C.

2-adamantanon kunne også bringes til at reagere som beskrevet i afsnit 5 til dannelse af azaspiranderivater, hvori m = 2.

på lignende måde kunne anhydridet fra 2-adamantanon, syntetiseret enten som beskrevet i afsnit 2 eller afsnit 5, bringes 20 til at reagere med: a) dialkylaminoalkylaminer som beskrevet i afsnit 2 af synteseeksemplerne til dannelse af azaspiranderivater, hvori R3 = R4 = alkyl, b) aminoalkylnitriler som beskrevet i afsnit 3 af syntese-25 eksemplerne til dannelse af derivater, hvori R^ = R^ = H, c) alkylaminoalkylaminer som beskrevet i afsnit 4 af synteseeksemplerne til dannelse af azaspiranderivater, hvori R3 = alkyl, og R^ = H.

45 DK 170042 B1

Bicyklo[3,3,lJnonan-9-on blev bragt til at reagere på lignende måde som i afsnit 2 til dannelse af det ønskede azaspiran-derivat. Smeltepunkt 303 - 304°C. Denne keton kunne også modificeres på lignende måde til 2-adamantanon til dannelse 5 af lignende substituerede diaminderivater.

3,3-dimethylbicyklo[3,3,l]nonan-9-on og 3,3,7,7-tetramethyl-bicyklo[3,3,l]nonan-9-on (fremstillet ifølge Y.Chan, Ph.D. Dissertation, University of Utah (1972)) kunne på lignende måde bringes til at reagere som ovenfor beskrevet for stam-10 systemet.

TABEL 3.

Smeltepunkter (dekomponering) af forbindelser med formlen I og formlen II, fremstillet ved fremgangsmåden i synteseeksemplerne:

Nr.a^ Smp.(°C) Nr.a^ Smp.(°C) 17 305-307 02 299-300 18 252-254 03 299-301 19 285-286 04 301-302 20 266-269 05 297-298 21 274-276 06 245-249 22 259-261 07 258-260 23 245-246 08 295-296 24 329-330 09 296-298 25 308-310 10 289-291 26 323-325 11 303-304 27 284-286 12 306-307 28 287-289 13 297-298 29 293-296 14 326-328 30 271-272 31 275-278 16 334-335 32 240-245 a)

Se strukturen i tabel 1.

46 DK 170042 B1 TABEL 4.

Elementær-analyse af forbindelser med formlen I og formlen II, fremstillet ved fremgangsmåden i synteseeksemplerne:

Beregnet for: Fundet:

Jtolékyl- Ifol----------

Nr. formel vægt C Η N Cl C Η N Cl 10 ___________________ 02 (¼%¾¾ 3815 6197 1U0 7.34 18.59 6173 10.97 7.32 18.42 03 ςΡϊ^Νιαί 4095 64.32 11.32 6.84 1751 64.69 1154 6.82 04 0^%¾¾ 437.6 65.88 1152 6.40 1650 66.04 11.42 6.31 16.39 05 CaH«NÆ, 4095 6452 11.32 6.84 1751 6453 11.32 6.76 1758 06 0,,%¾¾ 353.4 61.17 10.84 7.93 19.30 61.03 10.90 7.83 19.97 07 (¾%¾¾ "367.4 62.11 1057 7.62 19.30 62.06 10.99 7 58 19.33 08 (½%¾¾ 3955 63.78 1151 7.08 17.93 63.68 11.07 7.08 18.12 09 0,,%¾¾ 367.4 62.11 10.97 7.62 1950 62.06 10.98 7.61 1955 10 0,,114,¾¾ 367.4 62.11 10.97 7.62 19.30 61.99 11.01 758 1956 11 C^tyCl* 3815 6197 11.10 754 1859 6192 11.11 750 18.64 12 0¾¾¾ 3815 6197 1U0 754 1859 6188 11.13 7.31 18.63 13 0^%¾¾ 437.6 63.88 1152 6.40 1650 65.89 1152 658 16.17 14 0^4,¾¾ 3795 6351 10.62 758 18.69 6354 10.64 757 18.68 16 0,,%¾¾ 353.4 61.17 10.84 7.93 20.06 61.16 10.86 7.92 19.94 17 CaH4¾¾¼ 3795 6351 10.62 758 18.69 6352 10.67 755 18.70 18 0¾¾¾ 4095 6452 1152 6.84 1751 64.42 1152 6.82 17.39 19 0^%¾¾ 4215 6553 11.00 6.65 16.82 65.42 11.03 6.64 16.89 20 02,%¾¾ 3955 63.78 1151 7.08 17.93 63.64 10.99 6.96 21 022%¾¾ 4095 6452 1152 6.84 1751 6459 1150 6.78 1750 22 0^%¾¾ 423.6 6552 11.42 6.61 16.74 65.05 1159 657 23 0¾%¾¾ 437.6 65.88 1152 6.40 1650 65.91 11.48 657 16.19 24 023%¾¾ 4175 66.17 10.14 6.71 16.98 66.21 10.16 6.67 16.94 25 05%¾¾ 349.4 . 61.88 9.81 8.02 2059 61.30 9.70 7.85 26 0,7%¾¾ 337.4 6052 10.16 850 21.02 6055 10.12 851 27 0^%¾¾ 4075 64.84 10.88 6.87 17.40 64.75 10.89 6.87 17.34 28 0¾¾¾ 449.6 66.79 1151 653 15.77 66.68 1151 650 15.67 29 0¾%¾¾ 463.6 6756 1150 6.04 1559 6759 1159 6.03 15.24 30 £20%¾¾ 3795 6351 10.62 758 18.69 6354 10.65 755 18.65 31 02,%¾¾ 3935 64.10 10.76 7.12 18.02 60.01 10.81 7.10 17.93 32 0¾%¾¾ 3815 6197 11.10 754 1859 6183 11.11 751 1852 30 NOTE: Forbindelserne 03, 20, 22, 25 og 26 blev ikke analyse ret for chloridsammensætning.

35

Claims (12)

1. Azaspiraner med formlen ^)Tyi a \ Formel (1) 5 hvori n er 3-7, m er 1 eller 2, R2 og R2 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet alkyl og cykloalkyl, forudsat at det samlede antal carbonatomer indeholdt i R2 og R2 tilsammen er 4 10 - 10, eller R2 og R2 er forbundet til dannelse af en alkylen- gruppe indeholdende 3-7 carbonatomer, R3 og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet elkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indehol-15 dende 4-7 carbonatomer, forudsat at når R2 og R2 er CH3CH2, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når R2 er H, R2 er (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når R2 er H, R2 er 20 (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 2, er n andet end 3, eller med formlen Κ)ΰ·|αΑ'(’ » DK 170042 B1 R 8 R6 Formel (II) hvori n er 3-7, m er 1 eller 2, R7, Rg, R5 og Rg er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og methyl,

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er valgt blandt: DK 170042 B1 X>OQw< ; »OCLx . zw-γη , ν/ν^-^ίί^Ν( ; srs^ATl ; /WVAw( ; ' „ · /V0OQ ; w^n >A_A.i } " V~X1 Hj,C„—^ N^^NC i »ocu: n w^n : xOOw?, ^Ο0λλλ< « OOQ^< ; XKXl^K i ^OOOwc; DK 170042 B1 »oow. »au*. ooq^q i »au. ooa_0, ^^wvso . °s »ocUq

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er valgt blandt: jQP0^ ’ f-C« v/VNv ; og ÅZ7

5 R3 og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat, eller solvat 10 deraf til fremstilling af et immunmodulerende middel til be- \ handling af dyr.

5 Rg og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller Rg og r4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat 10 deraf.

5. Farmaceutisk middel omfattende en farmaceutisk acceptabel bærer eller et fortyndingsmiddel og en effektiv mængde af en forbindelse med formlen DK 170042 B1 h)On /3 X Formel (I) hvori n er 3-7, 5. er 1 eller 2, Ri og R2 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet alkyl og cykloalkyl, forudsat at det samlede antal carbonatomer indeholdt i Ri og R2 tilsammen er 4 - 10, eller Ri og R2 er forbundet til dannelse af.en alkylen-10 gruppe indeholdende. 3-7 carbonatomer, r3 r4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, 15 forudsat at når Ri og R2 er CH3CH2, R3 og R4 er CH2, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når Ri er H, R2 er (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når R2 er H, Rx er (013)3(2, R3 og R4 er CH3, og m er 2, er n andet end 3, 20 eller med formlen DK 170042 B1 jqOG-'^1«·^3 * R. R* 8 6 Formel (II) hvori n er 3-7, m er 1 eller 2, R7> Rg, R5 og Rg er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og methyl,

5 R3 og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatorner, eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, eller et farmaceutisk acceptabelt salt, hydrat eller solvat 10 deraf.

6. Middel ifølge krav 5, kendetegnet ved, at forbindelsen er: »QOu* *

7. Middel ifølge krav 5, kendetegnet ved, at for bindelsen er valgt blandt: DK 170042 B1 XOCwC, »OCU, 'tocu · N^λΛΛΠ ! αλΛΑΙ^ i ^TV“i /S^OQ>^X ! >^vA_wC » jocu. Q^-\n )ooOLi' wC DK 170042 B1 30CU, »OCLo, · »OCUo, ' oocl< . x>oa VW\Q ; XOCl ^^c:: 20Q,—>Q . »OCLo . °°^0; ^va< · ^OQLw^ DK 170042 B1

8. Middel ifølge krav 5, kendetegnet ved, at forbindelsen er valgt blandt: jQOGVvA ! - ^

9. Anvendelse af en forbindelse med formlen ^/'ΥΊ /3 R2 '---' \ X Formel (I) hvori n er 3-7, 5. er 1 eller 2, R-L og R2 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen, ligekædet eller forgrenet alkyl og cykloalkyl, forudsat at det samlede antal carbonatomer indeholdt i R-j_ og R2 tilsammen er 4 - 10, eller R^ og R2 er forbundet til dannelse af en alkylen-10 gruppe indeholdende 3-7 carbonatomer, R3 og R4 er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og ligekædet alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, eller R3 og R4 er forbundet til dannelse af en alkylengruppe indeholdende 4-7 carbonatomer, 15 forudsat at når R-|_ og R2 er CH3CH2, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når R^ er H, R2 er (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 1 eller 2, er n andet end 3, og endvidere forudsat at når R2 er H, R-j_ er (CH3)3C, R3 og R4 er CH3, og m er 2, er n andet end 3, 20 eller med formlen DK 170042 B1 jQjOS-(CH2ln'\R3 ; > Re · *6 Formel (II) hvori n er 3-7, m er 1 eller 2, R7, Rg/ R5 og Rg er ens eller forskellige og er valgt blandt hydrogen og methyl,

10. Anvendelse ifølge krav 9, kendetegnet ved, at forbindelsen er: XXXI

11. Anvendelse ifølge krav 9, kendetegnet ved, at 15 forbindelsen er valgt blandt: DK 170042 B1 »CXU, J>octx· ^y-νη ' . N^V"Y1 ^^X-Nn^N^ ! ^ „ -ooCLy ·· ΧΓΥΊ ^v ^\A—» A_Λ-ν/vA ; HiiC10 N >20Q^<, Ο^Λ/η >oocu·· xx"^< 50CL<, iOOQ^o. ’ »OQ^. DK 170042 B1 OOCU' »OO-o . , »ocUc. °°°wa. xOQ^o ·. Ό ‘ sAnri ' —'^“Nv^v/nN^ » • X>OOwc ·. XX3Q . s ’ »OQ_< .

12. Anvendelse ifølge krav 9, kendetegnet ved, at forbindelsen er valgt blandt: °9