DK172462B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat Download PDFInfo
- Publication number
- DK172462B1 DK172462B1 DK198404398A DK439884A DK172462B1 DK 172462 B1 DK172462 B1 DK 172462B1 DK 198404398 A DK198404398 A DK 198404398A DK 439884 A DK439884 A DK 439884A DK 172462 B1 DK172462 B1 DK 172462B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- insulin
- basic
- formula
- neutral
- naturally occurring
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
2 DK PR 172462 B1
Det er den foreliggende opfindelses formål at angive en fremgangsmåde, ved hvilken der på enkel måde kan fremstilles de mængder af basisk modificerede insulinderivater, der er nødvendige til en terapeutisk anvendelse i de hidtil 5 ukendte galeniske præparater.
Med den i det følgende beskrevne fremgangsmåde ifølge opfindelsen opnås formålet ved enzymkatalyseret omdannelse af billigt biosyntetisk insulin, såsom humaninsulin eller svineinsulin, til de ønskede produkter under anvendelse af 10 et egnet peptid.
I de senere år er forskellige kemiske og enzymatiske fremgangsmåder blevet kendt (Biochem. J. 211 (1983) 671-676, US patentskrift nr. 3.903.068, nr. 3.276.961 og nr. 4.320.197, GB patentskrift nr. 2.069.502 og EP-A-56.951) , 15 ved hjælp af hvilke man kan omdanne f.eks. svineinsulin.
Ved den i EP-A-56.951 beskrevne fremgangsmåde kan man fremstille humaninsulin eller derivater deraf ud fra svineinsulin eller derivater deraf ved omsætning med et overskud af en threoninester i nærværelse af trypsin eller et trypsinlig-20 nende enzym ved bestemte pH-værdier og eventuelt efterfølgende esterspaltning. Trypsin og trypsinlignende enzymer er såkaldte endopeptidaser, som i peptidkæder angriber ved carboxylenden af basiske aminosyregrupper.
EP-A-85.516 og EP-A-45.187 angår lignende fremgangs-25 måder til ombytning af B30-aminosyren i insuliner med en anden aminosyre eller et af dennes derivater, i første række med det formål at fremstille humaninsulin ud fra svineinsulin. Ved disse fremgangsmåder ombyttes B30-aminosyren i det / hver gang foreliggende udgangsinsulin enzymatisk roed en 30 anden aminosyre eller et af dennes derivater. De til denne ombytningsreaktion (transpeptidering) anvendte enzymer (som det her særligt foretrukne enzym carboxypeptidase Y) er såkaldte exopeptidaser, som nedbryder peptidkæder fra den C-terminale ende. Når der til transpeptideringen anvendes 35 aminosyrederivater, skal produkterne til slut endnu afderi-vatiseres.
3 DK PR 172462 B1
Derudover er der også blevet foreslået fremgangsmåder, der tillader omdannelsen af egnede præproinsulinderivater og mellemprodukt-insuliner, til f.eks. humaninsulin, se DE offentliggørelsesskrift nr. 3.209.184.
5 Det har nu overraskende vist sig, at selektive trans- amideringer på lysin-resten i stilling B29 i insulin selv med peptider, der indeholder Arg henholdsvis Arg-Arg, og på trods af Arg i stilling B22 i insulinet, forløber med høje udbytter. Dette gælder også for proinsuliner (Lys-Arg-AO) 10 og analoge.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat med formlen (I) 15 Λ1 j—S-S—j A21
H-fGly’ A^J&ede Asn]-OH
-1-:--1---- , .
S f w
S S
B2_j____]_B29 20 R-] Val ~ B-Kæde Lys[-R30-R3i 4 DK PR 172462 B1 med formlen (I), 1 hvilken R1 betyder H eller Phe, r3 0 betyder resten af en genetisk kodelig L-aminosyre, og R31 betyder OH eller en beskyttelsesgruppe for carb-5 oxyfunktionen, med et peptid med formlen H-R30-R31 (III) i hvilken 10 a) R30 står resten af en neutral, naturligt forekommende L-aminosyre, og R31 står for en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med basisk karakter, bestående af op til 3 oc-aminosyrer, hvis endestillede carboxyfunktion er fri, eller 15 b) R30 står for resten af en basisk, naturligt forekom mende L-aminosyre, og R31 står for en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med neutral eller basisk karakter, bestående af op til 3 α-aminosyrer, hvis endestillede carboxyfunktion er fri, i 2 0 nærværelse af en trypsin lignende endopeptidase i vand, eventuelt under tilsætning af et egnet organisk opløsningsmiddel, ved en pH-værdi under insulinernes isoelektriske punkt, fortrinsvis under en pH-værdi på 5,4, og fraspalter eventuelt indførte beskyttelsesgrupper.
25 På overraskende måde lykkes transpeptideringen af udgangsinsulinerne med peptiderne med formlen III (med endestillet fri carboxyfunktion) i kommercielt tilstrækkeligt omfang kun i nærværelse af trypsinlignede endopeptidaser, som enzymer, men derimod ikke i nærværelse af trypsin.
30 Især fremstilles der sådanne forbindelser med formlen (I) , hvor R1 står for Η-Phe og/eller R30 står for Ala, Thr eller Ser. Fortrinsvis fremstilles der forbindelser, hvor A-kæden og kæden (B2-30) udviser sekvensen for humaninsulinet.
35 Ved den her omhandlede fremgangsmåde kan der f.eks.
fremstilles 5 DK PR 172462 B1
Des-PheB1-svineinsulin-ArgB31-OH Des-PheB1-humaninsulin-ArgB31-OH Des-PheB1-svineinsulin-ArgB31-ArgB32-OH Des-PheB1-humaninsulin-ArgB31-ArgB32-OH 5 Des-ThrB30-humaninsulin-ValB30-AlaB31-ArgB32-OH Humaninsulin-LysB3 3-0H Humaninsulin-D-ArgB31-0H Humaninsulin-D-ArgB31-ArgB32-OH Human insu1in-ArgB3 2-D-ArgB3 2-OH 10 Humaninsulin-LysB31-ArgB32-OH Humaninsulin-ArgB31-LysB32-OH Humaninsulin-ValB31-ArgB31-OH Humaninsul in-Va 1B3 ^--Arg03 ^--Arg03 3 -OH Human insulin-LysB31-ArgB3 2-Arg03 3-OH 15 Humaninsulin-OrnB31-OH
Humaninsulin-LeuB31-citB32-OH Des-Thr03 0-humaninsulin-ArgB3 °-Arg03 i-OH Des-Thr03°-humaninsulin-Lys030-AlaB31-ArgB32-OH, men især 20 Humaninsulin-ArgB31-OH og
Humaninsulin-ArgB31-ArgB32-OH.
Genetisk kodelige L-aminosyrer er følgende: Giv.
Ala, £er, £kr, Val, LgM, Hg, Asp, Asn, £lu, Gin. Cvs. Met.
Arg, Lys, His, lyr, gfce, Trp, ΕΧΏ. (neutrale aminosyrer er 2 5 understreget) .
Ved en neutral, naturligt forekommende aminosyre forstås især Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asn, Gin,
Cys, Met, Tyr, Phe, Pro eller Hyp. Ved en basisk, naturligt ^ forekommende aminosyre forstås især Arg, Lys, Hyl, Orn, Cit 30 eller His.
Som insuliner kan anvendes alle naturligt isolerede insuliner med Lys (B29), fortrinsvis dog insulin fra svin og mennesker.
Des-PheB1-insuliner som udgangsforbindelser til frem-35 gangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse kendes f.eks. fra DE-PS nr. 2.005.658 eller EP-A nr. 46.979.
6 DK PR 172462 B1 I betragtning som peptider eller aminosyrederivater, der kan anvendes til den enzymkatalyserede reaktion, kommer først og fremmest alle eventuelt i sidekæden, men ikke ved carboxylenden beskyttede di-, tri- og tetrapeptider med 5 Gly, L- eller D-aminosyrer som N-endestillet gruppe.
Urethanbeskyttelsesgrupper for €-aminofunktionen i Lys eller Orn er f.eks. Fmoc, Fcboc, Z, Boc, Ddz, Βροσ, Z (N02), Pyoc, Dobz, Moc, Mboc, Iboc, Adoc, Adpoc, Msc eller Pioc, fortrinsvis Z eller Boc. Fjernelsen af disse aminobe- 10 skyttelsesgrupper sker med syrer, baser eller reduktivt, jf. Kontakte Merck 3/79, side 14 ff.
Beskyttelsesgrupper for guanidinogruppen i arginin er f.eks. Adoc, Tosyl, Boc, Z, mesitylen-2-sulfonyl (Mts). Fraspaltningen kan ske hydrolytisk eller hydrogenolytisk, 15 jf. Kontakte Merck 1/80, side 23,30.
OH-sidefunktionen i Thr eller Ser kan blokeres på kendt måde med ether- eller acylbeskyttelsesgrupper, f.eks.
(C^—Cg)-alkyl, fortrinsvis tert.butyl, eller (C^-Cg)-alkano-yl.
20 Valget af beskyttelsesgrupper og syntestategien be stemmes af arten af aminosyrerne.
Som foretrukne dipeptider kan anvendes sådanne, hvor en N-endestillet alanyl- eller threonylrest er knyttet til en L-/D-arginin- eller L-/D-lysinrest.
25 De ovennævnte peptider syntetiseres ifølge standard fremgangsmåder, som de f.eks. er beskrevet i "The Peptides Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1, Major Methods of Peptide Bond Formation, Part A", udgivet af E. Gross, J. Meier-" hofer, Academic Press N.Y. (1979).
30 Til den her omhandlede fremgangsmåde egner sig sådanne endopeptidaser, der fra litteraturen kendes som trypsinlig-nende, dvs. sådanne, der specifikt spalter peptidbindinger ved carboxyenden i basiske aminosyrer, jf. f.eks. EP-A nr.
17.938.
35 De til den enzymatiske omsætning anvendte peptider anvendes fortrinsvis i et molært overskud på 40-150 gange, 7 DK PR 172462 B1 beregnet på insulinkomponenterne. Som enzym-substrat-forhold kan der anvendes et vægtforhold mellem enzym og insulinkomponent på fortrinsvis 1:5 til 1:20, især 1:10.
For at bringe peptider, der udviser ringe vandopløse-5 lighed, til reaktion kan der til den ellers vandige reak-! tionsopløsning sættes et egnet, med vand blandbart, organisk opløsningsmiddel, såsom methanol, dimethylformamid eller dioxan, indtil homogen opløsning.
Vandindholdet i reaktionsblandingen bør imidlertid 10 ikke synke til under 50% af blandingen af vand og organisk opløsningsmiddel, således at udbytteformindskende denaturering af insulinkomponent og/eller enzymet undertrykkes.
De pH-værdier, ved hvilke den enzymatiske reaktion gennemføres, ligger almindeligvis mellem 4 og 5, fortrinsvis 15 ved ca. 4,5. Ved højere pH-værdier reduceres udbytterne af de foretrukne transamideringsreaktioner i stilling Lys®29 som følge af uønsket proteolytisk spaltning ved Arg®22,
Alle ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede eller fremstillelige insulinderivater har det til fæl-20 les, at de(n) yderligere positive ladning(er), der befinder sig på overfladen af molekylet, giver molekylet et isoelek-trisk punkt, der er forskudt ind i neutralområdet. Alt efter derivatet måles isoelektriske punkter på 5,8 til ca. 8,5, især 6,2 til 8,2, ved den isoelektriske fokusering. Dermed 25 er derivaterne i neutralområdet mindre opløselige end nativt insulin eller proinsulin, der har deres isoelektriske punkt og dermed området for maksimal uopløselighed ved en pH-værdi på 5,4, medens de i neutralområdet normalt foreligger opløst.
” Opløselighedsegenskaberne af insulin og proinsulin 30 kan i området over det isoelektriske punkt, dvs. i det terapeutisk særligt interessante neutralområde, påvirkes ved tilsætning af zinkioner. Zink virker derved som depotprincip på den måde, at det stabiliserer insulins hexamere tilstand samt dets krystallisationstendens. Disse aggregater opløses 35 igen i subkutant væv.
Et yderligere gængst depotprincip er krystallisationen 8 DK PR 172462 B1 af insulin eller proinsulin som kompleks med et basisk protein, f.eks. globin eller protamin.
Ved anvendelse af proinsulin i oplosning eller i forbindelse med et af ovennævnte depotprincipper kræves en 5 yderligere proteolytisk nedbrydning for at frigøre nativt, fuldstændigt virksomt insulin. Intakt proinsulin har kun ca. 1/8 af den biologiske virkning af insulin, idet, således som man forestiller sig det, en del af den biologisk aktive overfladeregion, receptor-bindingsregionen, er maskeret af 10 det i proinsulin tilstedeværende C-peptid. I betragtning som proinsulin til diabetesterapien kommer ganske vist kun homologt proinsulin, altså kun sådant med human sekvens, jf. DE-A nr. 3.232.036. Heterologt proinsulin er i besiddelse af en signifikant immunogenitet. I denne sammenhæng er det 15 bemærkelsesværdigt, at også humane proinsuliner kan udvise variationer i C-peptiddelen.
Insulin-Arg®3°-OH og andre insulinderivater, hvis C-endegruppe i B-kæden bærer en organisk gruppe med basisk karakter, udviser i modsætning til proinsulin en næsten 20 lige så stor biologisk aktivitet som nativt insulin.
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede eller fremstillelige basisk modificerede insulinderivater er egnede til anvendelse i lægemidler til behandling af diabetes mellitus.
25 De her omhandlede lægemidler udgør nye forsinkelses principper, der kan bringes til virkning uden depothjælpestoffer, såsom zink eller protaminsulfat. Depotvirkningen går tilbage til et iboende, proteinkemisk betinget, fysio-" logisk princip, dvs. tungtopløseligheden af insulinderivatet 30 ved dets isoelektriske punkt. Dets genopløsning under fysiologiske betingelser opnås muligvis ved fraspaltning af de yderligere basiske grupper, der alt efter typen af derivat kommer i stand ved tryptisk eller trypsinlignende og/eller carboxypeptidase B- eller carboxypeptidase B-lignende og/el-35 ler esteraseaktivitet. De i hvert enkelt tilfælde fraspaltede grupper er enten rent fysiologiske metaboliter, såsom amino- 9 DK PR 172462 B1 syrer, eller let metaboliserbare, fysiologisk acceptable stoffer.
Insulinderivaterne er også som regel ikke mere immunogene end det tilsvarende insulin selv, i modsætning til 5 mellemprodukter beskrevne i litteraturen, der endnu indeholder dele af det heterologe C-peptid.
De her omhandlede lægemidler indeholder som aktiv forbindelse ét eller flere af de hidtil ukendte insulinderivater med formlen (I).
10 De har fortrinsvis en pH-værdi mellem 2,5 og 8,5, de indeholder et egnet isotonimiddel, et egnet konserveringsmiddel og eventuelt en egnet puffer for et pH-værdi-område mellem 5,0 og 8,5.
En typisk anvendelsesform af de beskrevne derivater 15 udgør præparater, der under det isoelektriske punkt foreligger som opløsninger i et fysiologisk acceptabelt bærestof.
Derved kan pH-værdien af opløsningen typisk andrage 5,0, og den er altså tydeligt højere end pH-værdien af de sure gammeldags insuliner, typisk pH-værdi 3. En mere neutral injek-20 tionsopløsning frembyder under visse omstændigheder tydelige fordele med hensyn til deres fordragelighed.
En yderligere typisk anvendelsesform er suspensioner ud fra amorfe eller krystallinske bundfald af de beskrevne derivater i et fysiologisk acceptabelt bærestof med ca.
25 neutral pH-værdi.
Det er imidlertid også muligt at forstærke den i derivaterne iboende tungtopløselighed i det fysiologiske pH-værdi-område gennem yderligere depotprincipper, såsom ved tilsætning af zink eller protaminsulfat. Den tilsatte 30 zinkmængde kan derved andrage indtil 100 /xg Zn2+/100 insulinenheder, typisk ca. 50 μς Zn2+/100 insulinenheder. Prot-aminmængden kan andrage mellem 0,28 og 0,6 mg pr. 100 enheder, beregnet på protaminsulfat. på denne måde kan der fremstilles præparater med særlig lang virkning, for hvilke 35 der i fremtiden vil være bredere anvendelse end hidtil, eftersom netop en basal mængde insulin forekommer terapeutisk DK PR 172462 B1 10 fordelagtig. Dette er allerede nu en erkendelse fra terapien med insulindoseringsapparater.
Som fysiologisk acceptabelt og med insulinderivatet fordrageligt bærestofmedium egner sig en steril, vandig 5 opløsning, der gøres isotonisk over for blod på kendt måde, f.eks. med glycerol, kogsalt eller glucose, og som derudover også indeholder et af de gængse konserveringsmidler, f.eks. phenol, m-cresol eller p-hydroxybenzoesyreester. Bærestof-mediet kan endvidere indeholde et pufferstof, f.eks. natrium-10 acetat, natriumcitrat eller natriumphosphat. Til indstilling af pH-værdien anvendes fortyndede syrer, typisk HC1, eller fortyndede baser, typisk NaOH.
I de her omhandlede lægemidler kan insulinderivaterne også anvendes som alkalimetal- eller ammoniumsalte. En vil-15 kårlig andel af ét eller flere insulinderivater med formlen (I) eller et insulinderivat med formlen (I) kan i en blanding af flere af disse insulinderivater uafhængigt af hinanden foreligge i henholdsvis opløst, amorf og/eller krystallinsk form.
20 Det er ofte fordelagtigt at sætte en egnet mængde af et egnet stabiliseringsmiddel til det her omhandlede præparat, der hindrer udfældningen af protein ved termisk-mekanisk belastning ved kontakt med forskellige materialer. Sådanne stabilisatorer kendes f.eks. fra EP-A-18.609, DE-offentlig-25 gørelsesskrift 3.240.177 eller WO-83/00288.
Ved de her omhandlede lægemidler, der også kan indeholde et af de kendte forsinkelsesprincipper, såsom prot-aminsulfat, globin eller zink, i egnede mængder, kan et Λ sådant forsinkelsesprincip anvendes i kombination med den 30 samlede mængde aktiv forbindelse eller med dele deraf eller med ét eller flere insulinderivater med formlen (I) i en blanding. Et middel kan indeholde forskellige insulinderivater med formlen (I) i kombination med flere forskellige hjælpestoffer, der har forsinkede virkning.
35 Med de her omhandlede basisk modificerede insulinderi vater med formlen (I) kan der opnås mangfoldige og meget 11 DK PR 172462 B1 fint afstemmelige virkningskarakteristika; dermed bør ifølge de indledningsvise bemærkninger være forbundet fremskridt, især med henblik på diabetiske senkomplikationer.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan gennemføres 5 analogt med de følgende sammenligningseksempler (der ikke er omfattet af kravene).
EKSEMPEL 1 6 g svineinsulin opløses i 20 ml vand og 5 ml iseddike 10 sammen med 37 g H-Thr-Arg(Adoc)2“0But*Hac og indstilles med iseddike på en pH-værdi på 4,6. Efter afkøling til 0°C sættes 0,6 g trypsin opløst i 2 ml vand til opløsningen. Reaktionen holdes i 24 timer ved 4-10°C. Derefter udfældes reaktionsproduktet humaninsulin-B31-Arg(Adoc)2-OBut ved tilsætning af 15 200 ml methanol eller acetone og fracentrifugeres. Den klare remanens oparbejdes til genudvinding af dipeptidderivatet.
Bundfaldet vaskes endnu en gang med en blanding af methanol og ether og tørres i vakuum. Ved hjælp af HPLC måles 47% produkt i råblandingen." Fraskillelsen og rensningen 20 af HI-ArgB31(Adoc)2“0But sker på kiselgel, som beskrevet i EP-A-82 359.
Hi-Arg®310H opnås ved behandling i 1 time med tri-fluoreddikesyre og efterfølgende udfældning.
25 EKSEMPEL 2 600 mg svineinsulin opløses i 2 ml H2O, 0,8 ml DMF og 0,5 ml eddikesyre sammen med 12,6 g Hac*Thr*Arg(Adoc)2_ -Arg (Adoc) 2 OBut og afkøles til 0°C. Til blandingen sættes 60 mg trypsin opløst i 0,2 ml vand. Efter 24 timer kan be-30 stemmes 40% HI-ArgB31-(Adoc)2~ArgB32(Adoc)2-0But i en prøve ved hjælp af HPLC.
EKSEMPEL 3 60 ml svineinsulin opløses i 0,5 ml vand, 0,2 ml di-35 methylformamid og 0,1 ml eddikesyre sammen med 676 mg Hac*2 HCl+Thr(But)-D-Arg(Adoc)2~0But. pH-Værdien indstilles på 12 DK PR 172462 B1 5,0 med triethylamin, og 6 mg trypsin, opløst i 0,1 ml vand, tilsættes. Efter 24 timer kan der ved hjælp af HPLC bestemmes 34% af reaktionsproduktet HI-(B30)-(But)-D-ArgB31-ArgB32-(Adoc)2-OBut.
5 EKSEMPEL 4 6 g humaninsulin opløses i 20 ml vand og 5 ml eddikesyre sammen med 48 g HCL*Hac*Thr(But)*Arg(Adoc)2-0But og omsættes som beskrevet i eksempel l med 0,6 g trypsin.
10 Omsætningsgrad efter 16 timer: 35%.
EKSEMPEL. .5 85 mg proinsulin fra svin opløses med 4 83 mg Hac· HCL-Thr(But)-Arg(Adoc)2“0But i 0,5 ml H20 og 0,3 ml eddike-15 syre. pH-Værdien indstilles på 5,0, og 8 mg trypsin, opløst i 0,1 ml vand, tilsættes. Omsætningsgrad efer 24 timer: 37%.
EKSEMPEL 6 85 mg proinsulin fra svin omsættes med 1,2 g Hac*Thr-20 -Arg(Adoc)2-Arg(Adoc)2“0But som beskrevet i eksempel 5. Omsætningsgrad ved hjælp af HPLC: 33%.
25 // 30
Claims (5)
- 5 13 DK PR 172462 B1 PATENT K .R1 V l. Fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat med formlen (I) Al_pS - S-|_A21 H-iQlv A-Kæde ^ ftsnl-OH s S (I) s s B2_I__I _B29 R1 Val_B-Kade_Lys -r3Q-r31 i hvilken15 R1 betyder H eller H-Phe, a) R30 står for resten af en neutral, naturligt forekommende L-aminosyre, og R31 står for en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med basisk karakter, bestående af op til 3 α-aminosyrer, hvis 20 endestillede carboxyfunktion er fri, eller b) R30 står for resten af en basisk, naturligt forekommende L-aminosyre, og R31 står for en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med neutral eller basisk karakter, bestående af op til 3 a-25 aminosyrer, hvis endestillede carboxyfunktion er fri, og som udviser et isoelektrisk punkt over 5,8, kendete g-n e t ved, at man omsætter et insulin med formlen (I) , i hvilken v R1 betyder H eller H-Phe, 30 r30 betyder resten af en genetisk kodelig L-aminosyre, og R3* betyder OH eller en beskyttelsesgruppe for carboxyfunk-tionen, med et peptid med formlen H-R30-R31 (III) i hvilken 35 14 DK PR 172462 B1 a) R30 står for resten af en neutral, naturligt forekommende L-aminosyre, og R31 står en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med basisk karakter, bestående af op til 3 α-aminosyrer, 5 hvis endestillede carboxyfunktion er fri, eller b) R30 står for resten af en basisk, naturligt forekommende L-aminosyre, og R31 står for en fysiologisk acceptabel organisk gruppe med neutral eller basisk karakter, bestående af op til 3 at-10 aminosyrer, hvis endestillede carboxyfunktion er fri, i nærværelse af en trypsinlignende endopeptidase i vand, eventuelt under tilsætning af et egnet organisk opløsningsmiddel, ved en pH-værdi under insulinernes isoelektriske punkt og fraspalter i sidekæderne eventuelt indførte beskyttelsesgrup-15 per.
- 2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved,at der fremstilles insulinderivater med formlen (I), i hvilken R1 står for H-Phe.
- 3. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1 eller 2, 20 kendetegnet ved, at der fremstilles insulinderivater med formlen (I), i hvilken resten R30 er resten af en naturligt forekommende L-aminosyre Ala, Thr eller Ser.
- 4. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af kravene 1-3, kendetegnet ved, at der fremstilles insulin- 25 derivater med formlen (I) , i hvilken A-kæden og kæden (B2-30) udviser sekvensen for humaninsulin.
- -- 5. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af kravene 1-4, kendetegnet ved,at der fremstilles humaninsulin-" -ArgB31-OH eller humaninsulin-ArgB31-ArgB32-OH. 30
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19833333640 DE3333640A1 (de) | 1983-09-17 | 1983-09-17 | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten, deren b-kette c-terminal verlaengert ist, neue basisch modifizierte insulin-derivate diese enthaltende mittel und ihre verwendung |
| DE3333640 | 1983-09-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK439884D0 DK439884D0 (da) | 1984-09-14 |
| DK439884A DK439884A (da) | 1985-03-18 |
| DK172462B1 true DK172462B1 (da) | 1998-08-31 |
Family
ID=6209365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198404398A DK172462B1 (da) | 1983-09-17 | 1984-09-14 | Fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5015728A (da) |
| EP (1) | EP0140084B1 (da) |
| JP (1) | JPH0691834B2 (da) |
| KR (1) | KR850002282A (da) |
| AT (1) | ATE53590T1 (da) |
| AU (1) | AU577801B2 (da) |
| CA (1) | CA1246478A (da) |
| DE (2) | DE3333640A1 (da) |
| DK (1) | DK172462B1 (da) |
| ES (1) | ES535916A0 (da) |
| FI (1) | FI82838C (da) |
| GR (1) | GR80366B (da) |
| HU (1) | HU194282B (da) |
| IL (1) | IL72966A (da) |
| NO (1) | NO843664L (da) |
| NZ (1) | NZ209545A (da) |
| PH (1) | PH22422A (da) |
| PT (1) | PT79201B (da) |
| ZA (1) | ZA847258B (da) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327928A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-21 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten |
| DE3334407A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | In position b 30 modifizierte insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DK347086D0 (da) * | 1986-07-21 | 1986-07-21 | Novo Industri As | Novel peptides |
| DK113585D0 (da) * | 1985-03-12 | 1985-03-12 | Novo Industri As | Nye peptider |
| FI882921A0 (fi) * | 1986-10-20 | 1988-06-17 | Novo Industri As | Protaminzink-insulinpreparat. |
| DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3936876A1 (de) * | 1989-11-06 | 1991-05-23 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| DK0622376T3 (da) * | 1993-04-27 | 2001-11-12 | Hoechst Ag | Amorfe monosfæriske former af insulinderivater |
| US6444641B1 (en) | 1997-10-24 | 2002-09-03 | Eli Lilly Company | Fatty acid-acylated insulin analogs |
| US6323311B1 (en) | 1999-09-22 | 2001-11-27 | University Of Utah Research Foundation | Synthesis of insulin derivatives |
| PL374949A1 (en) * | 2001-12-20 | 2005-11-14 | Eli Lilly And Company | Insulin molecule having protracted time action |
| US20060217290A1 (en) * | 2003-04-29 | 2006-09-28 | Kohn Wayne D | Insulin analogs having protracted time action |
| DE102006031955A1 (de) * | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Insulinanaloga mit dibasischem B-Kettenende |
| DE102006031962A1 (de) | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Amidiertes Insulin Glargin |
| CN102256618A (zh) | 2008-10-17 | 2011-11-23 | 赛诺菲-安万特德国有限公司 | 胰岛素和glp-1激动剂的组合 |
| PL2451437T3 (pl) | 2009-07-06 | 2017-05-31 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Wodne preparaty insuliny zawierające metioninę |
| NZ599847A (en) | 2009-11-13 | 2013-09-27 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist and methionine |
| TR201809460T4 (tr) | 2009-11-13 | 2018-07-23 | Sanofi Aventis Deutschland | Bir GLP- 1-agonisti, bir insülin ve metiyonin içeren farmasötik bileşim. |
| WO2012028172A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Use of ave0010 for the manufacture of a medicament for the treatment of diabetes mellitus type 2 |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| AR087693A1 (es) | 2011-08-29 | 2014-04-09 | Sanofi Aventis Deutschland | Combinacion farmaceutica para uso en el control glucemico en pacientes con diabetes de tipo 2 |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| PE20171622A1 (es) | 2014-12-12 | 2017-11-02 | Sanofi Aventis Deutschland | Formulacion de relacion fija de insulina glargina/lixisenatida |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EG10440A (en) * | 1970-02-07 | 1977-09-30 | Hoechst Ag | Process for the preparation of des-phenylalamin b1-insuli |
| DE2460753A1 (de) * | 1974-12-21 | 1976-06-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von humaninsulin |
| JPS55138393A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | Semisynthesis of insulin |
| JPS55138391A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | New synthetic method of peptide derivative |
| DK146482C (da) * | 1979-04-13 | 1986-10-06 | Shionogi & Co | Fremgangsmaade til fremstilling af et b30-threonin-insulin |
| DK319780A (da) * | 1980-07-24 | 1982-01-25 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyren i insuliner |
| DE3033127A1 (de) * | 1980-09-03 | 1982-04-08 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue analoga des insulins |
| DE3101382A1 (de) * | 1981-01-17 | 1982-09-02 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "verfahren zur herstellung von humanisulin oder dessen derivaten aus schweineinsulin oder dessen derivaten" |
| DK149824C (da) * | 1982-01-22 | 1987-03-16 | Carlsberg Biotechnology Ltd | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyrer i insuliner |
| DE3209184A1 (de) * | 1982-03-13 | 1983-09-15 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur umwandlung von praeproinsulinanaloga zu insulinen |
| NL8201650A (nl) * | 1982-04-21 | 1983-11-16 | Akzo Nv | Semisynthetische bereiding van humane insuline. |
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327928A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-21 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten |
| DE3334407A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | In position b 30 modifizierte insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
-
1983
- 1983-09-17 DE DE19833333640 patent/DE3333640A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-03-17 PH PH31214A patent/PH22422A/en unknown
- 1984-09-10 HU HU843416A patent/HU194282B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-09-11 DE DE8484110813T patent/DE3482470D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-11 AT AT84110813T patent/ATE53590T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-09-11 EP EP84110813A patent/EP0140084B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-09-13 FI FI843593A patent/FI82838C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-09-13 CA CA000463076A patent/CA1246478A/en not_active Expired
- 1984-09-13 JP JP59190727A patent/JPH0691834B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-14 ZA ZA847258A patent/ZA847258B/xx unknown
- 1984-09-14 DK DK198404398A patent/DK172462B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-09-14 NO NO843664A patent/NO843664L/no unknown
- 1984-09-14 AU AU33072/84A patent/AU577801B2/en not_active Ceased
- 1984-09-14 ES ES535916A patent/ES535916A0/es active Granted
- 1984-09-14 NZ NZ209545A patent/NZ209545A/xx unknown
- 1984-09-14 GR GR80366A patent/GR80366B/el unknown
- 1984-09-14 PT PT79201A patent/PT79201B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-09-15 KR KR1019840005641A patent/KR850002282A/ko not_active Withdrawn
- 1984-09-17 IL IL72966A patent/IL72966A/xx not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-03-23 US US07/172,236 patent/US5015728A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ209545A (en) | 1989-02-24 |
| FI843593A0 (fi) | 1984-09-13 |
| DK439884D0 (da) | 1984-09-14 |
| HU194282B (en) | 1988-01-28 |
| NO843664L (no) | 1985-03-18 |
| JPS6094998A (ja) | 1985-05-28 |
| IL72966A (en) | 1989-08-15 |
| FI843593L (fi) | 1985-03-18 |
| ES8600218A1 (es) | 1985-10-01 |
| FI82838C (fi) | 1991-04-25 |
| JPH0691834B2 (ja) | 1994-11-16 |
| HUT36144A (en) | 1985-08-28 |
| ZA847258B (en) | 1985-05-29 |
| DE3482470D1 (de) | 1990-07-19 |
| ATE53590T1 (de) | 1990-06-15 |
| PT79201B (de) | 1986-09-10 |
| AU577801B2 (en) | 1988-10-06 |
| EP0140084A1 (de) | 1985-05-08 |
| AU3307284A (en) | 1985-03-21 |
| DE3333640A1 (de) | 1985-04-25 |
| KR850002282A (ko) | 1985-05-10 |
| CA1246478A (en) | 1988-12-13 |
| FI82838B (fi) | 1991-01-15 |
| US5015728A (en) | 1991-05-14 |
| GR80366B (en) | 1985-01-11 |
| IL72966A0 (en) | 1984-12-31 |
| EP0140084B1 (de) | 1990-06-13 |
| PT79201A (de) | 1984-10-01 |
| ES535916A0 (es) | 1985-10-01 |
| DK439884A (da) | 1985-03-18 |
| PH22422A (en) | 1988-09-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK172462B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et insulinderivat | |
| US4701440A (en) | Insulin derivatives, processes for their preparation and their use, and pharmaceutical agents for the treatment of diabetes mellitus | |
| US6908897B2 (en) | Covalently bridged insulin dimers | |
| DK172456B1 (da) | Lægemidler indeholdende insulinderivater til behandling af diabetes mellitus | |
| RU2205836C2 (ru) | Усовершенствованный способ получения предшественника инсулина с правильно соединенными цистиновыми мостиками | |
| JP3129722B2 (ja) | 新規インスリン誘導体 | |
| US5491216A (en) | Tri-arginine insulins | |
| AU617291B2 (en) | Method of chain combination | |
| US5354900A (en) | An H-ANP peptide, pharmaceutical composition and method of use | |
| KR880001107B1 (ko) | 인체 인슐린 및 그의 유도체의 제조방법 | |
| JP3131215B2 (ja) | 新規インスリン誘導体 | |
| PL210437B1 (pl) | Sposób wytwarzania związków insuliny | |
| HU206375B (en) | Process for producing biologically active, stable somatotropins and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| FI79853B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av insulinderivat. | |
| BRPI0520622B1 (pt) | Processo para o preparo de conjugados de insulina | |
| US5049545A (en) | Insulin derivatives, a process for their preparation, and their use | |
| DK172632B1 (da) | Lægemiddel til behandling af diabetes mellitus og anvendelse af insulinderivater til fremstilling af et sådant lægemiddel | |
| KR920005659B1 (ko) | 인슐린 유도체의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |