ES2236536T3 - Derivados tetrahidroquinolino para la inhibicion de enfermedades asociadas con la privacion de estrogenos o con una respuesta fisiologica aberrante a estrogenos endogenos. - Google Patents

Abstract

El uso de un compuesto de la fórmula **(Fórmula)** en la que R1 es -H, -OH, -O(alquilo C1-C4), -OCOC6H5, -OCO(alquilo C1-C6) o -OSO2(alquilo C2-C6); R2 y R3 son cada uno de forma independiente -H, -OH, -O(alquilo C1-C4)-OCO C6H5, -OCO(alquilo C1-C6), -OSO2 (alquilo C2-C6) o halo, R4 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino diisopropilamino o 1-hexametilenimino; n es 1, 2 ó 3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de enfermedades asociadas con la privación de estrógeno.

Description

Derivados tetrahidroquinolino para la inhibición de enfermedades asociadas con la privación de estrógenos o con una respuesta fisiológica aberrante a estrógenos endógenos.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere al uso de 1,2,3,4-tetrahidroquinolinas 2-sustituidas y derivados de las mismas para la fabricación de un medicamento para la inhibición de enfermedades asociadas con la privación de estrógenos o con una respuesta fisiológica aberrante a estrógenos endógenos.

La menopausia, la transición en mujeres desde la etapa reproductora de la vida a la no reproductora, se caracteriza por el cese de la menstruación y se produce a una media de edad de cincuenta años. El estado posmenopáusico se caracteriza por cambios en los niveles de las hormonas sexuales circulantes, el más espectacular de los cuales es la reducción de los niveles plasmáticos de 17\beta-estradiol hasta menos del diez por ciento de los valores premenopáusicos. En los estudios clínicos y epidemiológicos se ha mostrado que el estado posmenopáusico es un factor de riesgo importante para una serie de trastornos crónicos, sobre todo osteoporosis y enfermedad cardiovascular. En vista del hecho de que el ciclo de vida actual de las mujeres es de aproximadamente ochenta años, las mujeres pasan aproximadamente un tercio de sus vidas en el estado posmenopáusico. Esto significa que el potencial del estado posmenopáusico para producir efectos crónicos sobre la salud de las mujeres es mayor hoy que cuando comenzó el siglo, cuando la esperanza de vida era considerablemente menor.

La osteoporosis describe un grupo de enfermedades que se caracterizan por una pérdida neta de masa ósea por unidad de volumen. La consecuencia de esta pérdida de masa ósea y la resultante fractura ósea es el fracaso del esqueleto para proporcionar al cuerpo un soporte estructural adecuado. El tejido óseo más vulnerable a los efectos de la osteoporosis posmenopáusica es el hueso trabecular. Este tejido a menudo se denomina hueso esponjoso y se concentra particularmente cerca de los extremos del hueso (próximo a las articulaciones) y en las vértebras de la columna vertebral. El tejido trabecular se caracteriza por pequeñas estructuras osteoides que conectan entre sí, así como con el tejido cortical más sólido y denso que forma la superficie externa y la diáfisis central del hueso. Esta red interconectada de trabéculas proporciona soporte lateral a la estructura cortical externa y es crucial para la resistencia biomecánica de la estructura global.

Después del cese de la menstruación, la mayoría de las mujeres pierden de aproximadamente el 20% a aproximadamente el 60% de la masa ósea en el compartimento trabecular del hueso en de 3 a 6 años. Esta rápida pérdida generalmente se asocia con un incremento de la reabsorción y la formación óseas.

En la osteoporosis posmenopáusica, es principalmente la resorción neta y la pérdida de las trabéculas lo que conduce al fallo y la fractura de los huesos. A la luz de la pérdida de trabéculas en las mujeres posmenopáusicas, no es sorprendente que las fracturas más frecuentes sean las asociadas con los huesos que dependen en gran medida del soporte trabecular, por ejemplo las vértebras, el cuello y los huesos que soportan peso tales como el fémur y el antebrazo. De hecho, la fractura de cadera, las fracturas de Colles y las fracturas vertebrales por aplastamiento son rasgos característicos de la osteoporosis posmenopáusica.

Sólo en Estados Unidos se ha estimado que hay 25 millones de mujeres afectadas por esta enfermedad. Los resultados de la osteoporosis son perjudiciales a nivel personal y también representan una gran pérdida económica debido a su cronicidad y a la necesidad de de soporte extenso a largo plazo (hospitalización y asistencia en casa por profesionales de enfermería). Esto es especialmente cierto en los pacientes más ancianos. Además, aunque en general no se piensa en la osteoporosis como una enfermedad potencialmente mortal, una tasa de mortalidad del 20% al 30% está relacionada con las fracturas de cadera en mujeres ancianas. Un gran porcentaje de esta tasa de mortalidad se puede asociar directamente con la osteoporosis posmenopáusica.

En la actualidad, un procedimiento de aceptación general para el tratamiento de los trastornos que tienen como resultado el estado posmenopáusico a causa de la disminución de los niveles de estrógenos es la terapia sustitutiva de estrógenos. El tratamiento puede tomar la forma de administración de estrógeno sólo en la denominada terapia sustitutiva de estrógeno sin oposición (TSE) o en la forma de la administración conjunta de estrógeno y progestina en un régimen denominado tratamiento hormonal sustitutivo (THS). Sin embargo, existen inconvenientes importantes asociados con la administración crónica de estrógeno en mujeres posmenopáusicas que tienen que ver con los efectos adversos sobre las mamas y el útero. Las mujeres en tratamiento con TSE desarrollan cáncer endometrial con unos índices de tres a seis veces superiores a los que presentan aquellas que no se están tratando después de tres a seis años de uso; tras diez años de TSE, la proporción del riesgo se multiplica por diez.

Para combatir estos efectos perjudiciales de la TSE se emplea la administración conjunta de progestina junto con estrógeno en un tratamiento hormonal sustitutivo (THS) combinado, ya que la progestina actúa limitando la estimulación uterina y, por tanto, reduce el riesgo de padecer cáncer de útero.

A causa de estos inconvenientes sospechados o temidos del tratamiento con estrógeno, la prescripción de la terapia sustitutiva con estrógeno crónico y el cumplimiento del paciente con ella ha sido malo. Se ha estimado que, en EE.UU., entre las mujeres posmenopáusicas a las que se ha prescrito TES o THS, menos del cuarenta por ciento continúa el tratamiento después de un año.

Como consecuencia, existe una necesidad de desarrollar agentes de tratamiento de la posmenopausia que posean el perfil farmacológico ideal: por ejemplo, agentes que producen efectos beneficiosos de estrógeno sobre el esqueleto y el sistema cardiovascular sin producir los efectos adversos del estrógeno sobre las mamas y el útero. Los agentes que poseen tal perfil estrogénico invertirían los efectos de la deficiencia de estrógenos en ciertos tejidos al mismo tiempo que no actuarían o fracasarían en los tejidos en los que el estrógeno produce efectos adversos. El término moduladores selectivos del receptor de estrógeno o "SERM" se ha aplicado a compuestos que poseen este perfil tisular selectivo. Los SERM se definen como compuestos que producen agonismo de estrógeno en uno o más tejidos diana deseados tales como hueso, hígado, etc., junto con antagonismo y/o un agonismo mínimo (es decir, clínicamente significativo) de estrógeno en los tejidos reproductores, tales como las mamas o el útero.

Breve sumario de la invención

La presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula

1

en la que

R^{1} es -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4}), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}) o -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6});

R^{2} y R^{3} son cada uno de forma independiente -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4})-OCO C_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}), -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6}) o halo,

R^{4} es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino diisopropilamino o 1-hexametilenimino;

n es 1, 2 ó 3;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de enfermedades asociadas con la privación de estrógeno.

En una forma de realización alternativa del uso médico de la presente invención, los compuestos de la presente invención se emplean en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones patológicas asociadas con una respuesta fisiológica aberrante a estrógeno endógeno, incluidas la enfermedad fibroide uterina o fibrosis uterina, endometriosis y cánceres dependientes de estrógeno.

Descripción detallada de la invención

Los términos generales usados en la descripción de los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva poseen sus significados habituales. Por ejemplo, "alquilo C_{1}-C_{6}" hace referencia a cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono con restos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo, isohexilo y similares. Asimismo, "alquilo C_{1}-C_{4}" hace referencia a cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 1 a 4 átomos de carbono con restos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo y similares. De igual forma, el término "alcoxi C_{1}-C_{4}" representa un grupo alquilo C1-C4 unido a través de una molécula de oxígeno e incluye restos tales como, por ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi y similares.

El término "halo" hace referencia a bromo, cloro, flúor y yodo.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "estereoisómero" hace referencia a un compuesto formado por los mismos átomos unidos por los mismos enlaces pero con diferentes estructuras tridimensionales que no son intercambiables. Las estructuras tridimensionales se denominan configuraciones. Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "enantiómero" hace referencia a dos estereoisómeros cuyas moléculas no son imágenes especulares superponibles una de otra. El término "centro quiral" hace referencia a un átomo de carbono al que están unidos cuatro grupos diferentes. Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "diastereoisómeros" hace referencia a estereoisómeros que no son enantiómeros. Además, dos diastereoisómeros que tienen una configuración diferente en sólo un centro quiral se denominan en la presente memoria descriptiva "epímeros". Los términos "racemato", "mezcla racémica" o "modificación racémica" hacen referencia a una mezcla a partes iguales de enantiómeros.

El término "enriquecimiento enantiomérico", como se usa en la presente memoria descriptiva, hace referencia al incremento en la cantidad de un enantiómero con respecto al otro. Un procedimiento conveniente de expresión del enriquecimiento enantiomérico alcanzado es el concepto de exceso enantiomérico, o "ee", que se encuentra mediante la siguiente ecuación:

ee =\frac{E^{1}-E^{2}}{E^{\underline{1}}+E^{\underline{2}}} \ x \ 100

En la que E^{1} es la cantidad del primer enantiómero y E^{2} es la cantidad del segundo enantiómero. Por tanto, si la proporción inicial entre los dos enantiómeros es de 50:50, como la que se encuentra en una mezcla racémica, y se consigue un enriquecimiento enantiomérico suficiente para producir una proporción final de 70:30, el ee con respecto al primer enantiómero es 40%. Sin embargo, si la proporción final es de 90:10, el ee con respecto al primer enantiómero es 80%. Se prefiere un ee superior a 90%, es más preferible un ee superior al 95% y es especialmente más preferible un ee superior a 99%. Un experto habitual en la técnica determinará con facilidad el enriquecimiento enantiomérico mediante técnicas y procedimientos estándar, tales como cromatografía líquida o gaseosa de alto rendimiento con una columna quiral. La elección de la columna quiral adecuada, el eluyente y las condiciones necesarias para efectuar la separación del par enantiomérico entra dentro del conocimiento de un experto habitual en la técnica. Además, un experto habitual en la técnica puede preparar estereoisómeros y enantiómeros específicos de los compuestos de fórmula I mediante técnicas y procedimientos bien conocidos, tales como los descritos por J. Jacques y col., "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, y e. L. Eliel y S.H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", (Wiley-Interscience 1994), y la solicitud de patente europea nº EP-A-838448, publicada el 29 de abril de 1998. Entre los ejemplos de resoluciones se incluyen técnicas de recristalización o cromatografía
quiral.

Algunos de los compuestos de la presente invención poseen uno o más centros quirales y pueden existir en una variedad de configuraciones estereoisoméricas. Como consecuencia de estos centros quirales, los compuestos de la presente invención se encuentran como racematos, mezclas de enantiómeros y como enantiómeros individuales, así como diastereoisómeros y mezclas de diastereoisómeros. Todos estos racematos enantiómeros y diastereómeros se encuentran dentro del alcance de la presente invención.

En la presente memoria descriptiva los términos "R" y "S" se usan como cono normalmente se emplean en la química orgánica para indicar la configuración específica de un centro quiral con una relación en el sentido de las agujas del reloj de las prioridades de grupo (desde el mayor hasta el segundo menor) cuando se ve a lo largo del enlace hacia el grupo de prioridad menor. El término "S" (siniestra) hace referencia ala configuración de un centro quiral con una relación en sentido contrario a las agujas del reloj de las prioridades de grupo (desde el mayor al segundo menor) cuando se ve a lo largo del enlace hacia el grupo de prioridad menor. La prioridad de los grupos se basa en su número atómico (en orden decreciente del número atómico). En "Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Practice", (J. H. Fletcher, y col., eds., 1974), páginas 103-120, se encuentra una lista parcial de las prioridades y un análisis de la estereoquímica.

La designación "

500

" hace referencia a un enlace que sale hacia fuera del plano de la página.

La designación "

501

" hace referencia a un enlace que sale hacia atrás del plano de la página.

La designación "

502

" hace referencia a un enlace en el que la estereoquímica no está definida.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "estrógeno" incluye compuestos esteroideos con actividad estrogénica tales como, por ejemplo, 17\beta-estradiol, estrona, estrógeno conjugado (Premarin®), estrógeno equino 17a-etinil estradiol, y similares. Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "progestina" incluye compuestos con actividad progestacional tales como, por ejemplo, progesterona, noretilnodrel, nongestrel, acetato de megestrol, noretindrona, y similares.

Entre los compuestos preferidos de esta invención se incluyen compuestos de fórmula I en los que R^{4} es 1-pirrolidinilo o 1-piperidinilo. En otro subgrupo preferido de los compuestos 1-pirrolidinilo o 1-piperidinilo preferidos se incluyen los compuestos en los que R^{1}, R^{2} y R^{3} son, cada uno de forma independiente, -H, -OH o -OCH_{3}.

Entre los compuestos particularmente preferidos de fórmula I se incluyen los que tienen todas las limitaciones mencionadas antes, es decir, compuestos en los que R^{1}, R^{2} y R^{3} son, cada uno de forma independiente, -H, -OH o -OCH_{3}, particularmente en los que R^{1}y R^{2} son -OH y R^{3} es -H o en los que R^{1}, R^{3}son -OH y R^{2} es -H; R^{4} es 1-pirrolidinilo o 1-piperidinilo; y n es 2.

Aunque en la presente invención se pueden usar estas formas ácidas o de base libre de compuestos de fórmula I, se prefiere preparar y usar una forma de sal farmacéuticamente aceptable. Por tanto, los compuestos usados en esta invención forman sales de adición de base o de ácido farmacéuticamente aceptables con una amplia variedad de bases y ácidos orgánicos e inorgánicos, e incluyen las sales fisiológicamente aceptables que a menudo se usan en la química farmacéutica. Tales sales también son parte de esta invención. Entre los ácidos inorgánicos típicos usados para formar tales sales se incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hidrofosfórico y similares. También se pueden usar sales derivadas de ácidos orgánicos, tales como ácidos alifáticos mono y dicarboxílicos, ácidos alcanoicos fenil sustituidos, ácidos hidroxialcanoicos e hidrocialcandioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos. Por tanto, tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, -o-acetoxibenzoato, naftalen-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, b-hidroxibutirato, butin-1,4-dioato, hexin-1,4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinnamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, monohidrógenofosfato, dihidrógenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencenosulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobencenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato, tartrato y similares. Las sales preferidos son las sales clorhidrato y oxalato.

Las bases típicas usadas para formar sales de adición farmacéuticamente aceptables serían las bases inorgánicas tales como hidróxido sódico, hidróxido potásico, carbonatos o bicarbonatos alcalinos, carbonato cálcico, carbonato magnésico y similares. Además, para formas sales de adición se pueden usar bases orgánicas, por ejemplo alquilaminas tales como trietilamina, dimetilamina, i-propilamina y similares.

Normalmente, las sales de adición de base o de ácido farmacéuticamente aceptables se forman mediante la reacción de un compuesto de fórmula I con una cantidad equimolar o en exceso de ácido o de base. Por lo general, los reactivos se combinan en un disolvente mutuo tal como dietiléter o acetato de etilo. La sal normalmente precipita de la solución en aproximadamente una hora a 10 días y se puede aislar mediante filtración o el disolvente se puede extraer por medios convencionales.

Entre los ejemplos específicos de compuestos que se contemplan dentro del alcance de los compuestos de Fórmula I se incluyen, aunque no se limitan a ellos, los siguientes compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables:

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(3-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(3-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-propoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(3-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-propoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-propoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina; y

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-propoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar mediante el uso de procedimientos y técnicas bien conocidas y apreciadas por un experto habitual en la técnica. Por ejemplo, algunos de los compuestos de fórmula (I) se describen en la patente de EE.UU. nº 3.994.902, incorporada en su totalidad en la presente memoria descriptiva como referencia. Como alternativa, en el Esquema A se expone un esquema sintético general para preparar compuestos de fórmula (I), donde todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, se definen previamente.

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Esquema A

2

En el Esquema A, R^{1a}, R^{2a}, R^{3a} son, cada uno de forma independiente, -H, -OH o -OPg, donde Pg es un grupo protector de hidroxi y A es un grupo de activación adecuado definido con más detalle más adelante. En los compuestos de fórmula (1a), (1b), (2), (3), y siguientes, los grupos protectores Pg R^{1a}, R^{2a} y R^{3a} son grupos protectores fenólicos del tipo indicado por T. Greene, y col. en el capítulo 3 de "Protective Groups in Organic Synthesis", segunda edición, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1991, páginas 143-170. Los grupos protectores preferidos son grupos de éter de alquilo, siendo metilo particularmente preferido.

En el Esquema A, etapa 1, la 2-fenilquinolina de fórmula (2) puede prepararse mediante la reacción de la quinolina sustituida con R^{1a} de fórmula (1a) con un fenil litio sustituido con R^{2a}, R^{3a} o N-óxido de quinolina (1b) R^{1a} sustituido con un haluro de fenil magnesio sustituido con R^{2a}, R^{3a} en condiciones de Grignard. La reacción de Grignard y las reacciones que usan compuestos de organolitio son del tipo indicado por Gilman y col., J. Am. Chem. Soc. 68, 2017 (1946); Gilman y Gainer, J. Am. Chem. Soc. 69, 887 (1947); y Comins, D. L., Brown, J. D., Tetrahedron Lett. 27, 4549 (1986).

Por ejemplo, el N-óxido de quinolina R^{1a} sustituido (1b) reacciona con cloroformiato de metilo a un intervalo de temperatura de aproximadamente -90ºC a aproximadamente -50ºC, más preferentemente a aproximadamente -78ºC. Normalmente la reacción se lleva a cabo en condiciones anhidras en un disolvente orgánico aprótico adecuado tal como tetrahidrofurano anhidro. Preferiblemente, el N-óxido de quinolina R^{1a} sustituido (1b) y el cloroformiato de metilo se encuentran presentes en la zona de reacción en una cantidad aproximadamente equimolar. Un ligero exceso de cualquiera de los reactivos no es perjudicial para la reacción. Se deja progresar la reacción durante un periodo de tiempo variable de aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 5 horas. A continuación se añade una cantidad sustancialmente equimolar de haluro de fenil magnesio R^{2a}, R^{3a} sustituido. Después, la reacción se inactiva con una fuente de protones tal como, por ejemplo, bicarbonato sódico o metanol. Se elimina el disolvente y la mezcla resultante se extrae, se concentra y se purifica según técnicas bien conocidas en la materia.

Las quinolinas R^{1a} sustituidas adecuadas de fórmula (1a) y los adecuados N-óxidos de quinolina R^{1a} sustituidos (1b) están disponibles comercialmente o se preparan mediante técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica.

Además, los fenil litios R^{2a}, R^{3a} sustituidos adecuados y los haluros de fenil magnesio R^{2a}, R^{3a} sustituidos están disponibles comercialmente o se preparan mediante técnicas bien conocidas en la materia. Por ejemplo, una solución del fenil R^{2a}, R^{3a} sustituido adecuado reacciona con un compuesto de organolitio tal como n-butillitio o t-butillito, más preferentemente t-butillitio, durante un periodo de tiempo variable de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 30 minutos y más preferentemente de aproximadamente 15 minutos; a un intervalo de temperatura de aproximadamente -90ºC a aproximadamente -50ºC, más preferentemente de aproximadamente -78ºC. El compuesto de organolitio estará presente en la cantidad de aproximadamente 1,0 a 1,1 equivalentes por cada mol de fenil R^{2a},R^{3a} sustituido utilizado, y más preferentemente estará presente en una cantidad aproximadamente equimolar. Normalmente, la reacción se lleva a cabo en condiciones anhidras en un disolvente orgánico aprótico adecuado tal como tetrahidrofurano.

En el Esquema A, etapa 2, la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) se prepara mediante la reducción de 2-fenilquinolina de fórmula (2). Por ejemplo, se disuelve 2-fenilquinolina de fórmula (2) en un disolvente alcohólico adecuado, tal como etanol absoluto. Después se añade sodio metálico y la reacción se deja enfriar hasta la temperatura ambiente. A continuación la mezcla de reacción se puede diluir con agua y extraer con un disolvente orgánico adecuado, tal como cloruro de metileno, acetato de etilo o cloroformo. Los extractos combinados pueden después lavarse con agua y salmuera, la capa orgánica se separa y se seca y el disolvente se evapora al vacío para proporcionar la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) que se puede usar sin más purificación.

Como alternativa, se puede alcanzar la reducción de 2-fenilquinolina de fórmula (2) usando borohidruro sódico en etanol con cloruro de níquel como catalizador, en un procedimiento descrito de forma análoga por Nose y Kudo, Chem. Pharm. Bull, 36, 1529 (1988).

En el Esquema A, etapa 3, la 1,2,3,4-tetrahidroquinolina 1,2-disustituida de la fórmula (5) se puede preparar mediante la arilación de la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) con el derivado benzoílo sustituido del compuesto (4).

Por ejemplo, la 1,2,3,4-tetrahidroquinolina 2-disustituida de fórmula (5) puede prepararse mediante la arilación de la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) con el derivado haluro sustituido del compuesto (4) según los procedimientos indicados en Hartwig, J. F. y col., "Room Temperature Palladium-Catalized Amination of Aryl Bromides and Chlorides and Extended Scope of Aromatic Bond Formation with a Commercial Ligand", J. Org. Chem. 64, 5575-5580 (1999).

Los compuestos adecuados de fórmula (4) se pueden preparar como se ha descrito de forma análoga en la publicación de la solicitud de PCT internacional nº WO 98/48793, publicada el 5 de noviembre de 1998, cuya descripción se incorpora en la presente memoria descriptiva como referencia.

En los compuesto de fórmula (4), el grupo activador, A, se selecciona de los grupos bien conocidos en la técnica para activar compuestos con el propósito de llevar a cabo reacciones de acoplamiento e incluyen haluros tales como el cloruro, el bromuro o el yoduro.

Cuando en R^{1}, R^{2} y/o R^{3} se desea un grupo -OC(O)(alquilo C_{1}-C_{6}) o -OC(O)C_{6}H, un compuesto mono, di o trihidroxi de fórmula I reacciona con un agente tal como cloruro, bromuro, cianuro de acilo, o azida, o con un anhídrido o anhídrido mixto adecuado. Las reacciones se llevan a cabo de forma conveniente en un disolvente básico tal como piridina, lutidina, quinolina o isoquinolina, o en un disolvente de amina terciaria tal como trietilamina, tributilamina, metilpiperidina y similares. La reacción también se puede llevar a cabo en un disolvente inerte tal como acetato de etilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, dimetoxietano, acetonitrilo, acetona, metil etil cetona, y similares, al que se ha añadido al menos un equivalente de un secuestrante de ácidos, tal como una amina terciaria. Si se desea se puede usar catalizadores de la acilación, tal como 4-dimetilaminopiridina o 4-pirrolidinopiridina; Véase, por ejemplo, Haslam y col., Tetrahedron, 36: 2409-2433 (1980).

Las reacciones de acilación que proporcionan los grupos R^{1}, R^{2} y/o R^{3} mencionados anteriormente se llevan a cabo a temperaturas moderadas en el intervalo de aproximadamente -25ºC a aproximadamente 100ºC, con frecuencia en una atmósfera inerte tal como gas nitrógeno. Sin embargo, normalmente la temperatura ambiente es adecuada para la reacción.

Tales acilaciones del grupo hidroxi también se pueden llevar a cabo mediante reacciones catalizadas con ácido de los ácidos carboxílicos adecuados en disolventes orgánicos inertes o puros. Se usan catalizadores ácidos tales como ácido sulfúrico, ácido polifosfórico, ácido metanosulfónico y similares.

Los grupos R^{1}, R^{2} y/o R^{3} mencionados anteriormente también pueden proporcionarse mediante la formación de un éster activo del ácido adecuado, tales como los ésteres formados por tales reactivos conocidos como diciclohexilcarbodiimida, acilimidazoles, nitrofenoles, pentaclorofenol, N-hidroxisuccinimida y 1-hidroxi-benzotriazol. Véase, por ejemplo, Bull. Chem. Soc. Japan. 38: 1979 (1965) y Chem. Ber., 788 y 2024 (1970).

Cuando se desea un compuesto en el que R^{1}, R^{2} y/o R^{3} sean -OSO_{2}(alquilo C_{4}-C_{6}), el compuesto de partida adecuado mono-, di- o trihidroxi reacciona con, por ejemplo, un derivado del ácido sulfónico adecuado tal como cloruro, bromuro de sulfonilo o sal amónica de sulfonilo, como indican King y Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97: 2566-2567 (1975). El compuesto mono-, di- o trihidroxi también puede reaccionar con el anhídrido sulfónico adecuado. Tales reacciones se llevan a cabo en condiciones tales como las que se han explicado antes en el análisis de la reacción con haluros ácidos y similares.

Se pueden preparar compuestos de fórmula I de forma que R^{1}, R^{2} y/o R^{3} son grupos protectores biológicos diferentes o, preferentemente, el mismo grupo protector biológico. Entre los grupos protectores se incluyen -CH_{3}, -C(O)C(CH_{3})_{3}, -C(O)C_{6}H_{5} y -SO_{2}(CH_{2})_{3}CH_{3}.

Ejemplos

Todas las reacciones se llevan a cabo en una atmósfera de nitrógeno. Todos los disolventes son de grado ACS y se usan como se suministran. Todos los reactivos están disponibles comercialmente y se usan sin más purificación a menos que se indique lo contrario. Los datos de LCMS se registran en una Hewlett Packard serie 1100 a 35ºC. El procedimiento usado es 5% de acetonitrilo -95% de agua (TFA al 0,05%) a 95% de acetonitrilo-5% de agua (TFA al 0,05%) en dos minutos y mantener durante tres minutos en una columna Waters Symmetry C18.2.1x50 mm. Los espectros de RMN ^{1}H se registran a 400 MHz en un espectrómetro Varian 400 en CDCl_{3} (\delta 7,26) a menos que se indique otra cosa.

Preparación 1

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-quinolina

3

Un matraz de fondo redondo de 500 ml se carga con 6-metoxi-quinolina-N-óxido (8 g, 0,04566 mol) y se introduce en atmósfera de nitrógeno. A continuación el sólido se disuelve en THF anhidro (100 ml) y se enfría hasta -78ºC con un baño de hielo seco/acetona, tras lo cual algo del sólido disuelto comienza a precipitar. Desde un embudo de adición se añade, gota a gota, metilcloroformiato (4,4 ml, 0,05694 mol). El baño se elimina 10 minutos después de la adición y se reemplaza tras 20 minutos. Después se realiza una adición gota a gota de bromuro de anisilmagnesio 0,5M (112 ml, 0,0560 mol). El baño se retira después de la adición y la reacción se deja calentar hasta la temperatura ambiente. La reacción se inactiva con solución de bicarbonato sódico al 5%. El THF se elimina al vacío y la mezcla resultante se diluye con agua y se extrae con cloruro de metileno. Se recogen los extractos y se secan con sulfato sódico anhidro y se concentran. El producto puro se purifica mediante cromatografía ultrarrápida (2-5% EtOAc/diclorometano) para dar 6,30 g (52%) del producto deseado. RMN ^{1}H: \delta 8,03-8,11 (m, 4H), 7,78 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,37 (dd, J= 9 Hz, 3 Hz, 1H), 7,03-7,07 (m, 3H), 3,94 (s, 1H), 3,88 (s, 1H). LCMS: 2,188 min, 266 (M+).

Preparación 2

6-metoxi-2-fenil-quinolina

4

El compuesto 6-metoxi-2-fenil quinolina se prepara de un modo análogo al de la Preparación 1 usando bromuro de fenil magnesio. RMN ^{1}H: \delta 8,07-8,15 (m, 4H), 7,84 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,50-7,54 (m, 2H), 7,42-7,46 (m, 1H), 7,39 (dd, J= 9 Hz, 3 Hz, 1H), 7,10 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H).

Preparación 3

6-metoxi-2-(4-metoxifenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

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5

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Un matraz de fondo redondo de 500 ml se carga con el compuesto de la Preparación 1 (3 g, 0,01131 mol) y etanol absoluto (150 ml). La mezcla se introduce en atmósfera de nitrógeno y se lleva a reflujo. Se añaden pellas de metal sódico se añaden periódicamente hasta que la TLC (30% EtOAc/hexanos) revela que ya no queda material de partida. La reacción se envía hasta la temperatura ambiente, se diluye con agua y se extrae con cloruro de metileno. Después se lavan los extractos combinados con agua y salmuera. La fase orgánica se separa y se seca con sulfato sódico anhidro. El disolvente se elimina al vacío para dar 3,05 g (100%) de un aceite de color oro. No es necesario purificar. RMN ^{1}H: \delta 7,32 (app. d, J= 8,4 Hz, 2H), 6,89 (app. d, J= 8,8 Hz, 2H), 6,61-6,65 (m, 2H), 6,49 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,31 (dd, J= 10 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,90-2,99 (m, 1H), 2,73 (dt, J= 16,4 Hz, 4,6 Hz, 1H), 2,04-2,10 (m, 1H), 1,91-2,01 (m, 1H).

Preparación 4

6-metoxi-2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

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6

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El compuesto 6-metoxi-2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina se de un modo análogo al de la Preparación 3 usando 6-metoxi-2-fenil-quinolina. RMN ^{1}H: \delta 7,28-7,43 (m, 5H), 6,63-6,67 (m, 2H), 6,52 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,38 (dd, J= 9,0 Hz, 3,0 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,91-3,00 (m, 1H), 2,74 (dt, J= 16,8 Hz, 4,6 Hz, 1H), 2,09-2,15 (m, 1H), 1,95-2,05 (m, 1).

Preparación 5

6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)quinolina

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7

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A una solución de 6-metoxiquinolina-N-óxido (175 mg, 1,0 mmol) en THF (3 ml) a temperatura ambiente se añade metil cloroformiato (77 \mul, 1,0 mmol). La mezcla se enfría hasta 0ºC y bromuro de 3-metoxifenilmagnesio (2 ml de 1M, 2 mmol) se añade gota a gota. La mezcla se agita durante 16 horas mientras se calienta hasta la temperatura ambiente. El disolvente se elimina al vacío y el residuo resultante se reparte entre agua y CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se lava con agua y salmuera, se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra. La cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexanos al 0-20%) da 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-quinolina (123 mg, rendimiento del 46%).

RMN ^{1}H: \delta 3,90 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 6,97 (app. d, 1H), 7,08 (s, 2H), 7,38 (m, 2H), 7,65 (d, 1H), 7,71 (app., s, 1H), 7,81 (d, 1H), 8,10 (m, 2H).

Preparación 6

6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

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8

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A una solución agitada de 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)quinolina (96 mg, 0,36 mmol) en EtOH (3 ml) a 0ºC se añade NiCl_{2}6H_{2}O (86 mg, 0,36 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 30 minutos antes de la adición de NaBH_{4} (55 mg, 1,45 mmol). La mezcla se agita durante 16 horas mientras se calienta hasta la temperatura ambiente. Después se añade una porción adicional de NaBH_{4} (50 mg) y se continúa agitando durante 3 horas. El disolvente se elimina al vacío y el residuo resultante se reparte entre agua y CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se lava con agua y salmuera, se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra. La cromatografía ultrarrápida (EtOAc/hexanos al 0-50%) da 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina.

RMN ^{1}H: \delta 1,95 (m, 1H), 2,08 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), 2,2,90 (m, 2H), 3,7s (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 4,34 (dd, 1H), 6,50 (d, 2H), 6,71 (m, 2H), 6,81 (dd, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,25 (m, 1H).

Ejemplo 1 6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

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9

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Un matraz de fondo redondo de 50 ml se carga con el compuesto de la Preparación 3 (103,8 mg, 0,3854 mmol), 1-[2-(4-bromo-fenoxi)-etil]-piperidina (128,0 mg, 0,4504 mmol; Publ. Se Solicitud Internl. PCT nº WO 98/48793, publicada el 5 de noviembre de 1998), t-butóxido sódico (58,1 mg, 0,6045 mmol), acetato de paladio (II) (10,1 mg, 0,04499 mmol) y tolueno seco (15 ml). De una jeringa de 1 ml de insulina se añaden varias gotas de tri-t-butilfosfina. A intervalos de una hora se hacen dos más adiciones de acetato de paladio (II) (24,7 mg, 0,1100 mmol; 17,6 mg, 0,07840 mmol). Después de cada adición de paladio se añaden varias gotas de tri-t-butilfosfina. La cantidad total añadida es 24,7 mg (0,1221 mmol). La reacción se sigue de LC/MS. La reacción se filtra mediante sílice con 0-10% de MeOH/diclorometano. El filtrado se concentra y el producto bruto se purifica mediante cromatografía ultrarrápida (1-5% de MeOH/diclorometano) hasta obtener 90,3 mg (49,6%) en forma de un aceite. Se encuentran algunas impurezas desconocidas. El producto se usa sin más purificación. RMN ^{1}H parcial: \delta 7,16 (app. d, J= 8,4 Hz), 7,01 (app. d, J= 8,8 Hz, 2H), 6,74-6,79 (m, 4H), 6,53-6,62 (m, 3H), 4,72 (t, J= 4,5 Hz, 1H), 4,11 (t, J= 6 Hz, 2 H), 3,75 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 2,18-2,27 (m, 1H), 2,04-2,12 (m, 1H). LCMS: 2,637 min, 473 (M+).

Ejemplo 2 6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

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10

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El compuesto 6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina se prepara de forma análoga al del ejemplo 1 usando 1-[2-(4-bromo-fenoxi)-etil]-pirrolidina (Public. De Solici. Internal. PCT nº WO98/48793, publicada el 5 de noviembre de 1998). RMN ^{1}Hl: \delta 7,17 (app. d, J= 8,4 Hz), 7,04 (app. d, J= 8,4 Hz, 2H), 6,79-6,81 (m, 4H), 6,58-6,64 (m, 3H), 4,74 (sa, 1H), 4,18 (sa, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,05 (sa, 2H), 2,85 (sa, 4H), 2,19-2,27 (m, 1H), 2,05-2,17 (m, 1H), 1,91 (sa, 6H). LCMS: 2,447 min, 459 (M+).

Ejemplo 3 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

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Un matraz de fondo redondo de 25 ml se carga con el compuesto del Ejemplo 1 (90,3 mg, 0,1911) y diclorometano (10 ml). La solución se introduce en atmósfera de nitrógeno y se enfría hasta 0ºC antes de añadir tribromuro de boro 1,0M en diclorometano (0,90 ml, 0,90 mmol). La reacción se sigue de LC/MS hasta su finalización. La reacción se inactiva con metanol y se preadsorbe en gel de sílice. Después mediante cromatografía ultrarrápida se aísla el producto puro (MeOH(diclorometano 1-10%). El producto se somete de nuevo a cromatografía mediante preadsorción y cromatografía ultrarrápida (100% de acetona). El sólido resultante se cristaliza en cloroformo para dar 20,7 mg (24,4%) del producto deseado. RMN ^{1}H [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 6,99 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 7,09 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 6,80 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 6,65 (d, J= 8,8 Hz, 2H), 6,36-6,45 (m, 3H), 4,65 (t, J= 4,6 Hz, 1H), 4,08 (t, J= 6 Hz, 2H), 2,83 (app. s, 2H), 2,45-2,70 (m, 6H), 2,12-2,23 (m, 1H), 2,00-2,12 (m, 1H), 1,67 (m, 4H), 1,50 (sa, 2H). LCMS: 2,177 min, 445 (M+).

Ejemplo 4 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

12

El compuesto 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol se prepara de forma análoga al del ejemplo 3 usando el compuesto del Ejemplo 2. El producto se purifica mediante fase inversa y se obtiene en forma de la sal TFA. RMN ^{1}H [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 7,02-7,08 (m, 4H), 6,88 (app. d, J= 6,8 Hz, 2H), 6,65 (app. d, J= 6,8 Hz, 2H), 6,46-6,49 (m, 2H), 6,39-6,40 (m, 1H), 4,67 (t, J= 5,2 Hz, 1H), 4,25 (t, J= 5 Hz, 2H), 3,66-3,74 (m, 2H), 3,60 (t, J= 5 Hz, 2H), 3,16-3,22 (m, 2H), 2,62-2,72 (m, 1H), 2,50-2,58 (m, 1H), 2,16-2,22 (m, 3H), 2,02-2,09 (m, 3H). LCMS: 2,119 min, 431 (M+).

Procedimiento de la prueba biológica Procedimiento de la preparación general Ensayo de unión a ER

El ensayo de unión por competición se procesa en un tampón con Hepes 50 mM, a pH 7,5, EDTA 1,5 mM, NaCl 150 mM, glicerol al 10%, 1 mg/ml de ovoalbúmina y DTT 5 mM, usando 0,025 \muCi por pocillo de ^{3}H-estradiol (NEN \cdotNET517 a 118 Ci/mmol, 1 mCi/ml), 10 ng/pocillo de receptor ERAlfa o ERbeta (PanVera). Los compuestos en competición se añaden a 10 concentraciones diferentes. La unión inespecífica se determina en presencia de 17-B-estradiol 1 \muM. La reacción de unión (140 \mul) se incuba durante 4 horas a temperatura ambiente, después, a cada reacción se añaden 70 \mul de tampón DCC frío (el tampón DCC contiene por 50 ml de tampón de ensayo 0,75 g de carbón vegetal (Sigma) y 0,25 g de dextrano (Pharmacia)). Las placas se mezclan 8 minutos en un agitador orbital a 4ºC. Después, las placas se centrifugan a 3.000 rpm a 4ºC durante 10 minutos. Una alícuota de 120 \mul de la mezcla se transfiere a otra placa de fondo plano de 96 pocillos (Costar) y a cada pocillo se añaden 175 \mul de líquido de centelleo Wallac Optiphase "Hisafe 3". Las placas se sellan y se agitan enérgicamente en un agitador orbital. Después de una incubación de 2,5 horas, las placas se leen en un contador Wallac Microbeta. Los datos se usan para calcular la CI_{50} y el % de inhibición a 10 \muM. La K_{d} para ^{3}H-estradiol se determina mediante unión por saturación a los receptores ER alfa y ER beta. Los valores de CI_{50} para los compuestos se convierten en K_{i} usando la ecuación de Cheng-Prusoff y la K_{d} se determina mediante ensayo de unión por saturación.

Ensayo de la fosfatasa alcalina de Ishikawa

Células tumorales endometriales humanas de Ishikawa se mantienen en MEM (medio mínimo esencial, con sales de Earle y L-glutamina, Gibco BRL, Gaithersburg, MD), complementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) (V/V), (Gibco BRL). Un día antes del ensayo el medio de crecimiento se cambia a medio de ensayo, DMEM/F-12 (3:1) (medio Eagle modificado de Dulbecco: mezcla de nutrientes F-12, mezcla 3:1, sin rojo fenol, Gibco BRL) complementado con suero bovino fetal al 5% destilado en carbón recubierto con dextrano (DCC-FBS) (Hyclone, Logen, UT), L-glutamina (2 mM), MEM piruvato sódico (1 mM), HEPES (N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[ácido 2-etanosulfónico] 2 mM), todo de Gibco BRL). Después de una incubación durante la noche, las células ishikawa se lavan con suero salino tamponado con fosfato de Dulbecco (1X) (D-PBS) sin Ca^{2+} ni Mg^{2+} (Gibco BRL) y se tripsiniza mediante una incubación de 3 minutos con 0,25% de Tripsina/EDTA, sin rojo fenol (Gibco BRL). Las células se resuspenden en medio de ensayo y se ajustan a 250.000 células/ml. Aproximadamente 25.000 células en 100 \mul de medio se añaden a placas de microcultivo de fondo plano de 96 pocillos (Costar 3596) y se incuban a 37ºC en una incubadora humidificado con 5% de CO_{2} durante 24 horas. Al día siguiente, se prepara diluciones seriadas de los compuestos en medio de ensayo (a 6 veces la concentración final en el ensayo). El ensayo se procesa en modo doble, modos agonista y antagonista. Para el modo agonista, las placas reciben 25 \mul/pocillo de medio de ensayo seguido por 25 \mul/pocillo de los compuestos diluidos (a 6x las concentraciones finales). Después de una incubación adicional de 48 horas a 37ºC en una incubadora humidificada con 5% de CO_{2}, el medio se aspira de los pocillos y a cada microcultivo se añaden 100 \mul de medio de ensayo fresco. Se preparan diluciones seriadas de compuestos y se añaden a las células como se ha descrito antes. Después de una incubación adicional de 72 horas a 37ºC en una incubadora humidificada con 5% de CO_{2}, el ensayo se inactiva mediante la eliminación del medio y el lavado de las placas dos veces en suero salino tamponado con fosfato de Dulbecco (1X) (D-PBS) (Gibco BRL). Las placas se secan durante 5 minutos y se congelan a -70ºC durante al menos 1 hora. A continuación las placas se extraen del congelador y se dejan descongelar a temperatura ambiente. A cada pocillo se añaden 100 \mul de 1-Setp™ PNPP (Pierce Chemical Company, Rockford, IL). Después de una incubación de 20 minutos, las placas se leen en un espectrofotómetro a 405 nm. Los datos se ajustan a una interpolación lineal para derivar valores CE_{50} (para el modo agonista) o CI_{50} (para el modo antagonista). Para el modo agonista el % de eficacia para cada compuesto se calcula frente a la respuesta a Tamoxifen. Para el modo antagonista, el % de eficacia para cada compuesto se calcula frente a E2 (1 nM) solo.

Ensayo de proliferación con células MCF-7

Células de adenocarcinoma de mama MCF-7 (ATCC HTB 22) se mantienen en MEM (medio mínimo esencial, sin rojo fenol, Gibco BRL) complementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) (V/V), L-glutamina (2 mM), piruvato sódico (1 mM), HEPES ((N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[ácido 2-etanosulfónico] 10 mM), aminoácidos no esenciales (0,1 mM) y Penicilina Estreptomicina (1X). Siete días antes del ensayo, las células MCF-7 se cambian a un medio de ensayo que es igual que el medio de mantenimiento excepto que está complementado con suero bovino fetal al 10% destilado en carbón recubierto con dextrano (DCC-FBS) en lugar del 10% de FBS. Las células MCF-7 se extraen de los matraces usando 10X de EDTA tripsina (sin rojo fenol, Gibco BRL) y se diluyen a 1X en (HBSS sin Ca++/Mg++ (sin rojo fenol). Las células se ajustan a 80.000 células/ml en medio de ensayo. A cada pocillo de placas de centelleo Cytostar T (Amersham) se añaden aproximadamente 8.000 células (100 \mul) y se incuban a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5% durante 24 horas para permitir la adherencia celular y el equilibrio tras la transferencia. Se preparan diluciones seriadas de los fármacos en medio de ensayo a la concentración final 4x deseada). Una alícuota de 50 \mul de las diluciones del fármaco (a la concentración final 4x del ensayo) se transfiere a pocillos por duplicado, seguido por 50 \mul de medio de ensayo para el modo agonista o 50 \mul de 40 pM de E2 para el modo antagonista hasta un volumen final de 200 \mul. Para cada una de las placas del modo agonista se determina un nivel basal (medio) y un nivel de estimulación máxima (con E2 1 \muM). Para cada una de las placas del modo antagonista se determina un nivel basal (medio) y un control con E2 (10 pM). Después de 48 horas adicionales a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5%, a cada pocillo se le añaden 20 \mul de medio de ensayo con 0,01 \muCi de timidina-^{14}C (52 mCi/mmol, 50 \muVi/\mul, Amersham). Las placas se incuban durante la noche en la misma incubadora y después se realiza el recuento en un contador Wallac Microbeta. Se hace la media de los datos para calcular una CI_{50} y el % de inhibición @ 1 \muM para el modo antagonista. Para el modo agonista se calcula una CE_{50} y el porcentaje de máxima estimulación con E2 y la concentración de estimulación máxima.

TABLA

13

Procedimiento general para la preparación de ratas

Se obtienen ratas hembra Sprague Dawley (peso de 200 a 225 g) de setenta y cinco días de edad (a menos que se indique lo contrario) procedentes de Charles River Laboratories (Portage, MI). Se somete a los animales a una ovariectomía bilateral (OVX) o se exponen a un procedimiento quirúrgico simulado en los Charles River Laboratories, y después de una semana se envían. Una vez que han llegado se introducen en jaulas colgadas de metal en grupos de 3 ó 4 por jaula y con acceso libre a agua y alimentos (con un contenido de calcio de aproximadamente 0,5%) durante una semana. La temperatura ambiente se mantiene a 22,2ºC \pm 1,7ºC con una humedad relativa media del 40%. El fotoperiodo en la habitación fue de 12 horas de luz de 12 horas de oscuridad.

Régimen de dosificación: tras una semana de periodo de aclimatación (por tanto, dos semanas después de la OVX) se inicia la dosificación diaria con un compuesto de fórmula (I) ("F-I"). El 17\alpha-etinil estradiol o F-I se administra por vía oral , a menos que se indique otra cosa, en forma de una suspensión en carboximetilcelulosa al 1% o disuelta en 20% de ciclodextrina. Los animales reciben la dosis diaria durante 4 días. Tras el régimen de dosificación, los animales se pesan y se anestesian con ketamina: mezcla de Xilazina (2:1, v:v) y se extrae una muestra de sangre mediante punción cardíaca. A continuación los animales se sacrifican mediante asfixia con CO2, se extrae el útero a través de una incisión en la línea media y se determina el peso húmedo del útero. El 17-\alpha-etinil estradiol se obtiene de Sigma Chemical Co., St. Louis, MO.

Ensayo de la eosinófilo peroxidasa (EPO) en útero

Los úteros de los animales anteriores se guardan a 4ºC hasta el momento del análisis enzimático. A continuación los úteros se homogeneizan en 50 volúmenes de tampón Tris 50 mM (pH 8,0) con Triton X-100 al 0,005%. Después de la adición de 0,01% de peróxido de hidrógeno y O-fenilendiamina 10 mM (concentraciones finales) en tampón Tris, se monitoriza el incremento de la absorbancia durante un minuto a 450 nm. La presencia de eosinófilos en el útero es una indicación de actividad estrogénica de un compuesto. La velocidad máxima de un intervalo de 15 segundos se determina sobre la porción lineal inicial de la curva de reacción.

Procedimiento para comprobar la inhibición de la pérdida ósea (osteoporosis)

Después del procedimiento general de preparación descrito antes, las ratas se tratan diariamente durante treinta y cinco días (6 ratas por grupo de tratamiento) y se sacrifican por asfixia con dióxido de carbono tras 36 días. El periodo de tiempo de treinta y cinco días es suficiente para permitir una reducción máxima de la densidad ósea, medida como se describe en la presente memoria descriptiva. En el momento del sacrificio se extraen los úteros, se liberan de tejido residual y se retiran los contenidos líquidos antes de determinar el peso húmedo con el fin de confirmar la deficiencia de estrógenos asociada con la ovariectomía completa. El peso uterino se reduce de forma habitual aproximadamente un 75% como respuesta a la ovariectomía. Después se introducen los úteros en formalina tamponada neutra al 10% para permitir el posterior análisis histológico.

Los fémures derechos se escinden y digitalizan y analizan con rayos X generados mediante un programa de análisis de imagen (imagen NIH) en la metáfisis distal. El aspecto proximal de las tibias de estos animales también se somete a tomografía computerizada cuantitativa. De acuerdo con los procedimientos anteriores, el F-O o etinil estradiol (EE_{2}) e hidroxipropil \beta-ciclodextrina se administran por vía oral a los animales de prueba. El F-I también es útil combinado con estrógeno o progestina.

Procedimientos de prueba de fibrosis uterina

Prueba 1: entre 3 y 20 mujeres con fibrosis uterina reciben F-I. La cantidad de compuesto administrado es de 0,1 a 1000 mg/día y el periodo de administración es de 3 meses. Las mujeres se someten a observación durante el periodo de administración y hasta 3 meses después del cese de la administración, para determinar los efectos sobre la fibrosis uterina.

Prueba 2: Se usa el mismo procedimiento que en la prueba 1, a excepción de que el periodo de administración es de 6 meses.

Prueba 3: Se usa el mismo procedimiento que en la prueba 1, a excepción de que el periodo de administración es de 1 año.

Prueba 4: Se usa estimulación prolongada con estrógeno para inducir leiomiomata en cobayas hembra sexualmente maduras. Los animales reciben dosis de estradiol mediante inyección 3-5 veces a la semana durante 2-4 meses o hasta que aparece el tumor, El tratamiento consistente en F-I o vehículo se administra diariamente durante 3-16 semanas y después se sacrifica a los animales y se extraen los úteros y se analizan para determinar la regresión del tumor.

Prueba 5: Se implanta tejido de leiomiomas humanos en la cavidad peritoneal y/o el miometrio uterino de ratones defectivos hembra, castradas sexualmente maduras. Se suministra estrógeno exógeno para inducir crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células tumorales recogidas se cultivan in vitro antes de la implantación. El tratamiento consistente en F-I o vehículo se suministra mediante lavado gástrico diariamente durante 3-16 semanas y los implantes se extraen y se miden para determinar crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, los úteros se recogen para valorar el estado del órgano.

Prueba 6: El tejido de tumores fibroides de útero humano se recoge y mantiene, in vitro, como cultivos primarios no transformados. Las muestras quirúrgicas se pasan a través de una malla o tamiz estéril o, como alternativa, se separan del tejido adyacente para producir una única suspensión celular. Las células se mantienen en medios con 10% de suero y antibiótico. Se determinan los índices de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Las células se analizan para determinar su capacidad para producir el componente complementario C3 y su respuesta a factores de crecimiento y la hormona de crecimiento. Los cultivos in vitro se valoran para determinar su respuesta proliferativa tras el tratamiento con progestinas, GnRH, F-I y vehículo. Los niveles de receptores de hormonas esteroideas se valoran semanalmente para determinar si se mantienen o no las características importantes de las células. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

Prueba 7: La capacidad de F-I para inhibir la proliferación estimulada mediante estrógeno de líneas celulares ELT derivadas de leiomioma se mide sustancialmente como describen Fuchs-Young y col. en "Inhibition of Estrogen-Stimulated Growth of Uterine Leiomyomas by Selective Estrogen Receptor Modulators"; Mol. Car., 17(3): 151-159 (1996), cuyas enseñanzas se incorporan en la presente memoria descriptiva como referencia.

Procedimientos para comprobar la presencia de endometriosis

Prueba 1: Como animales de prueba se usan de doce a treinta ratas hembra adultas de cepa CD. Se dividen en tres grupos de números iguales. Se monitoriza el ciclo del estro de todos los animales. El día del proestro cada hembra se somete a cirugía. Se extrae la trompa derecha del útero de las hembras de cada grupo, se seccionan en pequeños cuadrados y los cuadrados se suturan sin apretar en varios puntos adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Además, se extraen los ovarios de las hembras pertenecientes al grupo 2. El día después de la cirugía, los animales del los grupos 1 y 2 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 14 días, mientras que los animales del grupo 3 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de F-I por kilogramo de peso corporal durante el mismo tiempo, Después de 14 días de tratamiento, se sacrifica a cada hembra y se extraen los explantes, las adrenales, el resto del útero y los ovarios, cuando sea aplicable, y se preparan para su estudio histológico. Se pesan los ovarios y las adrenales.

Prueba 2: Como animales de prueba se usan de doce a treinta ratas hembra adultas de cepa CD. Se dividen en dos grupos iguales. Se monitoriza el ciclo del estro de todos los animales. El día del proestro cada hembra se somete a cirugía. Se extrae la trompa izquierda del útero de las hembras de cada grupo, se seccionan en pequeños cuadrados y los cuadrados se suturan sin apretar en varios puntos adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Aproximadamente 50 días después de la cirugía, los animales asignados al grupo 1 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de F-I por kilogramo de peso corporal durante el mismo tiempo, Después de 21 días de tratamiento, se sacrifica a cada hembra y los explantes endometriales y las adrenales se extraen y se pesan. Los explantes se miden como indicación de crecimiento. Se monitorizan los ciclos del estro.

Prueba 3: Se usan autografías de tejido endometrial para inducir endometriosis en ratas y/o conejos. Animales hembra en madurez reproductora se someten a ooforectomía bilateral y se suministra estrógeno exógeno, con lo que se proporciona un nivel específico y constante de hormona. En el peritoneo de 5-150 animales se implanta tejido endometrial autólogo y se suministra estrógeno para inducir el crecimiento del tejido explantado. El tratamiento consistente en un compuesto de la presente invención se suministra por lavado gástrico diariamente durante 3-16 semanas y se extraen los implantes y se miden para determinar crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, la trompa intacta del útero se recoge para valorar el estado del endometrio.

Prueba 4: Se implanta tejido de lesiones endometriales humanas en el peritoneo de ratones defectivos hembra, castradas, sexualmente maduras. Se suministra estrógeno exógeno para inducir crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células endometriales recogidas se cultivan in vitro antes de la implantación. El tratamiento consistente en F-I se suministra por lavado gástrico diariamente durante 3-16 semanas y se extraen los implantes y se miden para determinar crecimiento o regresión. En el momento del sacrificio, los úteros se recogen para valorar el estado del endometrio intacto.

Prueba 5: Se recoge tejido de lesiones de endometrio humano y se mantiene in vitro en forma de cultivos primarios no transformados. Las muestras quirúrgicas se pasan a través de una malla o tamiz estéril o, como alternativa, se separan del tejido adyacente para producir una única suspensión celular. Las células se mantienen en medio con 10% de suero y antibiótico. Se determinan las tasas de crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno. Las células se analizan para determinar su capacidad para producir el componente complementario C3 y su respuesta a factores de crecimiento y a la hormona de crecimiento Los cultivos in vitro se analizan para determinar su respuesta proliferativa tras el tratamiento con progestinas, GnRH, F-I y vehículo. Los niveles de receptores de hormona esteroidea se valoran semanalmente para determinar si las características celulares importantes se mantienen in vitro. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

Uso del compuesto de fórmula (I) junto con estrógeno

Mujeres en periodo peri y posmenopáusico a menudo se someten a terapia hormonal sustitutiva (HRT) para combatir las consecuencias negativas asociadas con el descenso del estrógeno endógeno circulante, por ejemplo para tratar los sofocos. Sin embargo, la HRT se ha asociado con un aumento de los riesgos de sufrir ciertos cánceres, incluidos el cáncer de útero y el cáncer de mama. El F-I puede usarse junto con la HRT pata inhibir estos riesgos.

Prevención del cáncer de mama

Esta invención también se refiere a la administración de F-I a un recipiente con riesgo de desarrollar de novo cáncer de mama. El término "de novo", como se usa en la presente memoria descriptiva, quiere decir la ausencia de transformación o metamorfosis de las células de mama normales en células cancerosas o malignas en primer lugar. Tal transformación se puede producir en etapas en las mismas células o en las hijas mediante un proceso de evolución o puede ocurrir en un único momento central. Este proceso de novo contrasta con la metástasis, la colonización o la diseminación de células malignas o ya transformadas desde el sitio principal del tumor hacia nuevas localizaciones.

Una persona sin un riesgo concreto de desarrollar cáncer de mama es una que pueda desarrollar cáncer de mama de novo, sin signos ni sospecha del potencial de la enfermedad por encima del riesgo normal y a quien nunca se le ha diagnosticado la enfermedad. El mayor factor de riesgo que contribuye al desarrollo de carcinoma de mama es la existencia de antecedentes personales de sufrir la enfermedad, o una aparición anterior de la enfermedad, incluso si está en remisión sin que existan signos de su presencia. Otro factor de riesgo es la existencia de antecedentes familiares de la enfermedad.

La inducción de tumores mamarios en ratas mediante la administración del carcinógeno N-nitroso-N-metilurea es un modelo animal bien aceptado para el estudio del cáncer de mama y se ha encontrado que es adecuado para analizar el efecto de agentes quimiopreventivos.

En dos estudios distintos, ratas hembra Sprague-Dawley de 55 días de edad reciben una dosis intravenosa (Estudio 1) o intraperitoneal (Estudio 2) de 50 mg de N-nitroso-N-metilurea por kilogramo de peso corporal una semana antes de alimentarlas con acceso libre a una dieta en la que se mezclan cantidades variables de F-I, base (Z)-2-[4-(1,2-difenil-1-butenil)fenoxi]-N,N-dimetiletanaima (base tamoxifen) o control.

En el Estudio 1, las dosis de dieta de 60 mg/kg de dieta y de 20 mg/kg de dieta se pasan a dosis aproximadamente comparables de 3 y 1 mg/kg de peso corporal para los animales de prueba.

En el Estudio 2, las dosis de dieta de 20, 6, 2 y 0,6 mg/kg de dieta se pasan a dosis aproximadamente comparables de 1, 0,3, 0,1 y 0,03 mg/kg de peso corporal para los animales de prueba.

Las ratas se someten a observación para determinar los signos de toxicidad y se pesan y palpan una vez a la semana en busca de formación de tumor. Después de trece semanas (Estudio 1) o de dieciocho semanas (Estudio 2) se sacrifica a los animales y se confirman los tumores y se pesan durante la autopsia.

Procedimientos terapéuticos de uso y dosificaciones

La presente invención también proporciona el uso de compuestos de fórmula I para la inhibición de la enfermedad asociada con la privación de estrógeno y la inhibición de una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante al estrógeno endógeno y opcionalmente comprende administrar a un paciente una cantidad eficaz de estrógeno o progestina. Estos usos son particularmente útiles para tratar la osteoporosis y reducir los niveles de colesterol el suero porque el paciente recibirá los beneficios de cada agente farmacéutico mientras que los compuestos de la presente invención inhibirían los efectos secundarios indeseables del estrógeno y la progestina. La actividad de estos tratamientos combinados en cualquiera de las pruebas en la etapa posmenopáusica, más adelante, indica que los tratamientos de combinación son útiles para aliviar los síntomas de la posmenopausia en mujeres.

En el mercado existen disponibles varias formas de estrógeno y progestina. Entre los agentes con base de estrógeno se incluyen, por ejemplo, etinil estrógeno (0,01-0,03 mg/día), mestranol (0,05-0,15 mg/día) y hormonas estrogénicas conjugadas tales como Premarin® (Wyeth-Ayerst; 0,3-2,5 mg/día). Entre los agentes con base de progestina se incluyen, por ejemplo, medroxiprogesterona tal como Provera® (Upjohn; 2,5-10 mg/día), noretilnodrel (1,0-10,0 mg/día) y nonetinfrona (0,5-2,0 mg/día). Un compuesto con base de estrógeno preferido es Premarin®, y noretilnodrel y nonetinfrona son los agentes con base de progestina preferidos.

El procedimiento de administración de cada uno de los agentes con base de estrógeno y de progestina es consistente con el que se conoce en la técnica. Para la mayoría de los procedimientos de la presente invención, los compuestos de Formula I se administran de forma continua de 1 a 3 veces al día. Sin embargo, el tratamiento cíclico puede ser especialmente útil en el tratamiento de la endometriosis o puede usarse de forma aguda durante los ataques dolorosos de la enfermedad. En el caso de la reestenosis, el tratamiento puede limitarse a intervalos cortos (1-6 meses) tras procedimientos médicos tales como la angioplastia.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "paciente"se refiere a un animal de sangre caliente o a un mamífero que necesite la inhibición de una enfermedad asociada con la privación de estrógeno o que necesite la inhibición de una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante a estrógeno endógeno. Debe entenderse que cobayas, perros, gatos, ratas, ratones, hámsteres y primates, incluidos seres humanos, son ejemplos de pacientes dentro del alcance del significado del término. Entre los pacientes preferidos se incluyen seres humanos. Entre los pacientes más preferidos se incluyen seres humanos del sexo femenino en etapa posmenopáusica.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, se define el término "inhibir" para que incluya prevenir, prohibir, restringir y ralentizar, parar o invertir la progresión d, o la gravedad, y mantener bajo control y/o tratar las características existentes. El presente procedimiento incluye tratamiento terapéutico y/o profiláctico, según sea adecuado.

Con el término "privación de estrógeno" se quiere implicar el estado en el que no hay un nivel óptimo de estrógeno. Este nivel varía de un tejido a otro según la función del tejido. Por tanto, en algunos casos, la privación de estrógeno puede ser la ausencia total de estrógeno, mientras que en otros casos la privación puede implicar niveles de estrógeno que son demasiado bajos para la función adecuada del tejido. En las mujeres, las dos causas más habituales de privación de estrógeno son la menopausia y la ovariectomía, aunque hay otros trastornos que pueden ser causantes. La privación de estrógeno puede conducir a alteraciones en las que se incluyen osteoporosis y efectos cardiovasculares tales como hiperlipidemia, proliferación de células de músculo liso aórticas (reestenosis), disminución de la producción de óxido nítrico (hipertensión) y descenso de la producción de la enzima PAI-1 (inhibidor 1 del activador de plasminógeno), es decir trombosis.

La reducción o atenuación de otras enfermedades asociadas con la menopausia, tales como la incontinencia urinaria, la sequedad vaginal, el incremento de la incidencia de enfermedades autoinmunitarias y la pérdida de tono de la piel, también puede alcanzarse mediante la administración de compuestos de Fórmula I.

Además de su utilidad en el tratamiento de trastornos asociados con la privación de estrógeno tras la menopausia, los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento de estados mórbidos asociados con una respuesta inadecuada al estrógeno endógeno en tejidos tanto antes como después de la menopausia.

Un ejemplo de un estado patológico asociado con respuestas celulares anómalas a estrógeno endógeno en tejidos es el cáncer de mama dependiente de estrógeno. Las células de los tumores mamarios dependientes de estrógeno proliferan en presencia de estrógeno y el tratamiento de esta enfermedad ha consistido en detener toda la acción estrogénica en estas células.

Otra enfermedad dependiente de estrógeno es la fibrosis uterina (enfermedad fibroide uterina). Esencialmente, la fibrosis uterina es un trastorno en el que existe un depósito de tejido fibroide en la pared del útero. Este trastorno es una causa de dismenorrea e infertilidad en mujeres. La causa exacta de este trastorno no se conoce bien pero los signos sugieren que es una respuesta inadecuada del tejido fibroide al estrógeno. EL tratamiento más frecuente de la fibrosis uterina implica la realización de procedimientos quirúrgicos costosos y a menudo una fuente de complicaciones tales como la formación de adherencias abdominales e infecciones.

Otra enfermedad más es esta categoría es la endometriosis, un trastorno de dismenorrea grave, que se acompaña de dolor intenso, hemorragia en las masas endometriales o la cavidad peritoneal y a menudo conduce a infertilidad. Ka causa de los síntomas de este trastorno parecen ser crecimientos endometriales ectópicos localizados en tejidos inadecuados que responden de forma inadecuada al control hormonal.

Como se usa en la presente memoria descriptiva, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" quiere decir una cantidad de compuesto de la presente invención que es capaz de aliviar los síntomas de los diversos trastornos patológicos descritos en la presente. La dosis específica de un compuesto administrado según esta invención se determinará, por supuesto, por las circunstancias particulares que rodean el caso, incluidos, por ejemplo, el compuesto administrado, la vía de administración, el estado de salud del paciente y el trastorno patológico que se está tratando, Una dosis diaria típica para uso humano contendrá un nivel de dosificación inocuo de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 600 mg/día de un compuesto de la presente invención. En general, las dosis diarias preferidas serán de aproximadamente 15 mg a aproximadamente 300 mg/día. El intervalo de dosis más preferido puede constituid 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg y 100 mg, administrados de una a tres veces al día.

Los compuestos de la invención se pueden administrar mediante una variedad de vías, incluidas las vías oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Preferentemente, estos compuestos se formulan antes de la administración, cuya selección la decidirá el médico que atiende al paciente. Por tanto, otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que contiene opcionalmente una cantidad eficaz de estrógeno o progestina, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El total de ingredientes activos en tales formulaciones comprende de 0,1% a 99,9% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se quiere decir el vehículo, diluyente, los excipientes y la sal deben ser compatibles con otros ingredientes de la formulación, y que no es nocivo para el receptor del mismo.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar mediante procedimientos conocidos en la técnica usando ingredientes bien conocidos y disponibles con facilidad. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I, con o sin un compuesto de estrógeno o progestina, se pueden formular con excipientes, diluyentes o vehículos habituales, y formarse en comprimidos, cápsulas, suspensiones, polvos y similares. Entre los ejemplos de excipientes, diluyentes y vehículos que son adecuados para tales formulaciones se incluyen los siguientes: cargas y agentes de extensión tales como almidón, azúcares, manitol y derivados silícicos; ligantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina y polivinil pirrolidona; agentes hidratantes tales como glicerol; agentes disgregantes tales como carbonato cálcico y bicarbonato sódico; agentes para retardar la disolución tales como parafina; aceleradores de la resorción tales como compuestos de amonio cuaternarios; agentes de superficie activa tales como alcohol cetílico, monoestearato de glicerol; vehículos de adsorción tales como caolín y bentonita; y lubricantes tales como talco, estearato cálcico y de magnesio, y polietilenglicoles sólidos.

Los compuestos también se pueden formular como elixires o soluciones para administración oral conveniente o como soluciones adecuadas para administración parenteral, por ejemplo, por las vías intramuscular, subcutánea o intravenosa. Además, los compuestos se ajustan bien como formas de dosificación de liberación sostenida y similares. Las formulaciones pueden estar constituidas de forma que liberen el ingrediente activo sólo o preferentemente en un punto fisiológico concreto, posiblemente durante un periodo de tiempo. Los recubrimientos, cubiertas y matrices protectoras pueden estar formadas por, por ejemplo, sustancias poliméricas o ceras.

En general, los compuestos de fórmula I, solos o en combinación con un agente farmacéutico de la presente invención, se administrarán en una formulación conveniente.

Claims (22)

1. El uso de un compuesto de la fórmula

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14

en la que

R^{1} es -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4}), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}) o -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6});

R^{2} y R^{3} son cada uno de forma independiente -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4})-OCO C_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}), -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6}) o halo,

R^{4} es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino diisopropilamino o 1-hexametilenimino;

n es 1, 2 ó 3;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de enfermedades asociadas con la privación de estrógeno.

2. Uso según la Reivindicación 1, en el que n es 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 ó 2, en el que R^{1} es -OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 3, en el que R^{4} es 1-piperidinilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, en el que R^{2} o R^{3} es -OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Uso según la Reivindicación 1, en el que el compuesto de fórmula I es:

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol; o una sal farmacéutica-
mente aceptable de los mismos.

7. Uso según la Reivindicación 1, en el que dicho compuesto de fórmula I es 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. Uso según la Reivindicación 1, en el que dicho compuesto de fórmula I es 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el síntoma de privación de estrógeno es la pérdida ósea.

10. Uso según la Reivindicación 9, en el que dicha pérdida ósea es osteoporosis.

11. El uso de un compuesto de la formula

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en el que

R^{1} es -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4}), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}) o -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6});

R^{2} y R^{3} son cada uno de forma independiente -H, -OH, -O(alquilo C_{1}-C_{4})-OCO C_{6}H_{5}, -OCO(alquilo C_{1}-C_{6}), -OSO_{2}(alquilo C_{2}-C_{6}) o halo,

R^{4} es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino diisopropilamino o 1-hexametilenimino;

n es 1, 2 ó 3;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para la inhibición de una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante al estrógeno endógeno.

12. Uso según la Reivindicación 11, en el que n es 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

13. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 11 ó 12, en el que R^{1} es -OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

14. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 11 a 13, en el que R^{4} es 1-piperidinilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

15. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 11 a 14, en el que uno de R^{2} o R^{3} es -OH, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

16. Uso según la Reivindicación 11, en el que el compuesto de fórmula I es:

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolina;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol;

1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol; o una sal farmacéutica-
mente aceptable de los mismos.

17. Uso según la Reivindicación 11, en el que dicho compuesto de fórmula I es 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

18. Uso según la Reivindicación 11, en el que dicho compuesto de fórmula I es 1-(4-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-fenil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

19. Uso según cualquiera de las Reivindicaciones 11 a 18, en el que dicha enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante a estrógeno endógeno es cáncer dependiente de estrógeno.

20. Uso según la Reivindicación 19, en el que dicho cáncer es cáncer de mama.

21. Uso según las Reivindicaciones 11 a 18, en el que dicha enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante a estrógeno endógeno es endometriosis.

22. Uso según las Reivindicaciones 11 a 18, en el que dicha enfermedad asociada con una respuesta fisiológica aberrante a estrógeno endógeno es fibrosis uterina.