ES2259376T3

ES2259376T3 - 1,2,3,4-tetrahidroquinolinas 2-sustituidas y sus derivados, composiciones y procedimientos.

Info

Publication number: ES2259376T3
Application number: ES02746308T
Authority: ES
Inventors: Owen Brendan Wallace
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2001-05-22
Filing date: 2002-05-09
Publication date: 2006-10-01
Anticipated expiration: 2022-05-09
Also published as: US20040215018A1; EP1395563A1; EP1395563B1; WO2002094788A1; ATE321754T1; US7056931B2; DE60210283T2; DE60210283D1; JP2004531562A

Abstract

La presente invención se refiere a 1,2,3,4-tetrahidroquinolinas 2-sustituidas y a los derivados de las mismas, a las composiciones que contienen esos compuestos, a su uso como moduladores selectivos del receptor del estrógeno y a su uso en la inhibición de la pérdida ósea, la enfermedad cardiovascular y el carcinoma de pecho y útero.

Description

1,2,3,4-tetrahidroquinolinas 2-sustituidas y sus derivados, composiciones y procedimientos.

Antecedentes de la invención

La menopausia, la transición en la mujer de la etapa reproductiva a la etapa no reproductiva de su vida, se caracteriza por el cese de la menstruación y tiene lugar a una edad media de cincuenta años. El estado postmenopáusico se caracteriza por cambios en los niveles de las hormonas sexuales circulantes, siendo el más drástico la reducción en los niveles del plasma del 17\beta-estradiol a menos del diez por ciento de los valores premenopáusicos. Estudios clínicos y epidemiológicos han demostrado que el estado postmenopáusico es un factor de riesgo importante para un número de trastornos crónicos, en particular, para la osteoporosis y la enfermedad cardiovascular. En vista del hecho de que la vida actual de la mujer es de aproximadamente ochenta años, las mujeres pasan aproximadamente un tercio de sus vidas en el estado postmenopáusico. Esto significa que el potencial para los efectos crónicos del estado postmenopáusico en la salud de la mujer es mayor hoy que a finales de siglo, cuando la esperanza de vida era considerablemente
menor.

La osteoporosis describe un grupo de enfermedades que se caracterizan por la pérdida neta de masa ósea por volumen unitario. La consecuencia de esta pérdida de masa ósea y la fractura ósea resultante es el fracaso del esqueleto por proporcionar un soporte estructural adecuado para el cuerpo. El tejido óseo más vulnerable a los efectos de la osteoporosis postmenopáusica es el hueso trabecular. Este tejido se denomina habitualmente hueso esponjoso o de cancellous y se encuentra particularmente concentrado cerca de los extremos del hueso (cerca de las articulaciones) y en las vértebras de la espina dorsal. El tejido trabecular se caracteriza por pequeñas estructuras osteoides que están interconectadas entre sí, así como por el tejido cortical denso y más sólido que forma las superficie exterior y el eje central del hueso. Esta red interconectada de trabéculos proporciona un soporte lateral para la estructura cortical externa y es de importancia fundamental para la resistencia biomecánica de la estructura global.

Tras el cese de la menstruación, la mayoría de las mujeres pierden del aproximadamente 20% al aproximadamente 60% de masa ósea del compartimento trabecular del hueso en un período de 3 a 6 años. Esta pérdida rápida está generalmente asociada con un aumento de la resorción y la formación ósea. Sin embargo, el ciclo de resorción es más dominante y el resultado es una pérdida neta de masa ósea.

En la osteoporosis postmenopáusica, es principalmente la resorción neta y la pérdida de los trabéculos lo que conduce a un fallo y una fractura del hueso. A la luz de la pérdida de trabéculos en las mujeres postmenopáusicas, no es sorprendente que las fracturas más comunes sean aquéllas asociadas con los huesos que son muy dependientes del soporte trabecular, por ejemplo, las vértebras, el cuello, y los huesos que soportan peso tales como el fémur y el antebrazo. De hecho, la fractura de cadera, las fracturas de Colles y las fracturas por aplastamiento vertebral son características de la osteoporosis postmenopáusica.

Se estima que, sólo en Estados Unidos, hay 25 millones de mujeres que están aquejadas de esta enfermedad. Los resultados de la osteoporosis son personalmente dañinos y también son responsables de una gran pérdida económica debido a su cronicidad y a la necesidad de asistencia extensiva y a largo plazo (hospitalización y atención del personal sanitario a domicilio). Esto es especialmente cierto en el caso de los pacientes de mayor edad. Adicionalmente, aunque la osteoporosis no es considerada en general como una condición que suponga una amenaza para la vida, del 20% al 30% de la tasa de mortalidad de las mujeres ancianas está relacionada con las fracturas de cadera. Un amplio porcentaje de esta tasa de mortalidad puede estar directamente asociado con la osteoporosis postmenopáusica.

La enfermedad cardiovascular es la primera causa de mortalidad entre mujeres. En comparación con los hombres, las mujeres premenopáusicas están relativamente protegidas de la enfermedad cardiovascular; sin embargo, esta protección se va perdiendo gradualmente tras la menopausia. La naturaleza de la capacidad del estrógeno para regular los lípidos en el suero sanguíneo no se comprende bien, pero las pruebas indican que el estrógeno puede regular los receptores de los lípidos de baja densidad (LDL, Low Density Lipid) en el hígado, que actúan para eliminar el exceso de colesterol. Adicionalmente, el estrógeno parece tener algún efecto en la biosíntesis del colesterol, así como otos efectos beneficiosos sobre la salud cardiovascular.

En la actualidad, un procedimiento generalmente aceptado para tratar los trastornos resultantes del descenso de los niveles de estrógeno en el estado postmenopáusico es la terapia de reemplazo de estrógeno. La terapia puede consistir en administrar sólo estrógeno en la denominada terapia de reemplazo estrogénico sin oposición (TRE) o en coadministrar estrógeno y progestina en el denominado régimen de terapia de reemplazo hormonal (TRH). Sin embargo, existen responsabilidades importantes asociadas con la administración crónica de estrógeno en mujeres postmenopáusicas que tienen que ver con efectos adversos en el pecho y el útero. Las mujeres sometidas a una TRE desarrollan cáncer endometrial en índices de tres a seis veces superiores que las no usuarias de esta terapia tras tres a seis años de uso; tras diez años de uso de la TRE, el índice de riesgo aumenta hasta 10 veces más.

Para combatir este efecto perjudicial de la TRE, se emplea la coadministración de progestina junto con estrógeno en una terapia de reemplazo hormonal combinada (TRH), pues la progestina actúa para limitar la estimulación uterina, reduciendo así el riesgo de padecer cáncer uterino.

Debido a estas responsabilidades conocidas y sospechadas o temidas de la terapia estrogénica, la prescripción de y la conformidad de las pacientes con la terapia crónica de reemplazo estrogénico ha sido pobre. Se ha estimado que, en Estados Unidos, de las mujeres postmenopáusicas a las que se recetó una terapia TRE o TRH, menos del cuarenta por ciento continúan la terapia durante más de un año.

Por consiguiente, existe una necesidad de desarrollar agentes de terapia postmenopáusica que posean el perfil farmacológico ideal: por ejemplo, agentes que produzcan los efectos beneficiosos del estrógeno en el tejido esquelético y el sistema cardiovascular sin producir los efectos negativos del estrógeno en el pecho y el útero. Los agentes que poseyeran tal perfil estrogénico invertirían los efectos de la deficiencia de estrógeno en ciertos tejidos, mientras que al mismo tiempo, evitarían o no actuarían en los tejidos en los que el estrógeno produce efectos negativos. Se ha aplicado el término de moduladores selectivos del receptor estrogénico o MSRE a los compuestos que poseen este perfil selectivo sobre los tejidos. Los MSRE son definidos como compuestos que producen agonismo estrogénico en uno o más tejidos diana deseados tales como hueso, hígado, etc., junto con antagonismo estrogénico y/o agonismo mínimo (i.e., clínicamente insignificante) en tejidos reproductivos tales como el pecho o el útero.

Breve resumen de la invención

La presente invención proporciona un compuesto de fórmula

1

en la que:

R^{1} es -H, -OH, O(alquilo(C_{1-4})), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo(C_{1-6})) o -OSO_{2}(alquilo(C_{2-6}));

R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente -H, -OH, O(alquilo(C_{1-4})), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo(C_{1-6})) o OSO_{2}(alquilo(C_{2-6})) o halo;

R^{4} es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidinilo, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropilamino o 1-hexametileneimino;

n es 1, 2 ó 3;

X es -C(O)- o -CH_{2}-; e

Y es -O-, -S-, -NH-, NMe- o -CH_{2}-;

o un enantiómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una segunda realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), solo o en combinación con estrógeno o progestina, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otra realización, la presente invención proporciona procedimientos médicos de empleo de los compuestos de la presente invención para calmar los síntomas de la privación de estrógeno, incluyendo la pérdida ósea, por ejemplo, la osteoporosis; la enfermedad cardiovascular, por ejemplo, la hipertensión y la trombosis; y descender el colesterol del suero sanguíneo.

En una realización alternativa del procedimiento médico de la presente invención, los compuestos de la presente invención son empleados en el tratamiento de condiciones de enfermedad asociadas con una respuesta fisiológica anómala al estrógeno endógeno incluyendo la enfermedad fibroide uterino o la fibrosis uterina, la endometriosis y los cánceres estrógeno-dependientes.

Descripción detallada de la invención

Los términos generales usados en la descripción de los compuestos descritos en la presente memoria llevan los significados habituales. Por ejemplo, "alquilo(C_{1-6})" se refiere a cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono que incluyen restos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo, isohexilo y similares. Asimismo, "alquilo(C_{1-4})" se refiere a cadenas alifáticas lineales o ramificadas de 1 a 4 átomos de carbono que incluyen restos tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, n-butilo y similares. De manera similar, el término "alcoxilo(C_{1-4})" representa un grupo alquilo(C_{1-4}) unido mediante una molécula de oxígeno e incluye restos tales como, por ejemplo, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo y similares.

El término "NMe" se refiere a metilamino.

El término "halo" se refiere a bromo, cloro, flúor y yodo.

Como se usa en la presente memoria, el término "estereoisómero" se refiere a un compuesto formado por los mismos átomos enlazados por los mismos enlaces, pero que tiene estructuras tridimensionales diferentes que no son intercambiables. Las estructuras tridimensionales son denominadas configuraciones. Como se usa en la presente memoria, el término "enantiómero" se refiere a dos estereoisómeros cuyas moléculas son imágenes especulares no superponibles entre sí. El término "centro quiral" se refiere a un átomo de carbono al que están unidos cuatro grupos diferentes. Como se usa en la presente memoria, el término "diastereómeros" se refiere a los estereoisómeros que no son enantiómeros. Además, dos diastereómeros que tienen una configuración diferente en sólo un centro quiral son denominados en a presente memoria "epímeros". Los términos "racemato", "mezcla racémica" o "modificación racémica" se refieren a una mezcla de partes iguales de enantiómeros.

El término "enriquecimiento enantiomérico" como se usa en la presente memoria se refiere al aumento en la cantidad de un enantiómero en comparación con el otro. Un procedimiento convencional para expresar el enriquecimiento enantiomérico alcanzado es el concepto de exceso enantiomérico o "ee", que se obtiene usando la siguiente ecuación:

ee = \frac{E^{1} - E^{2}}{E^{1} + E^{2}} \ x \ 100

en la que E^{1} es la cantidad del primer enantiómero y E^{2} es la cantidad del segundo enantiómero. Por lo tanto, si la proporción inicial de los dos enantiómeros es de 50:50, tal como está presente en una mezcla racémica, y se alcanza un enriquecimiento enantiomérico suficiente para producir una proporción final de 70:30, el ee con respecto al primer enantiómero es del 40%. Sin embargo, si la proporción final es de 90:10, el ee con respecto al primer enantiómero es del 80%. Se prefiere un ee mayor del 90%, prefiriéndose más un ee mayor del 95% y siendo especialmente preferido un ee de más del 99%. Cualquier experto en la técnica determina fácilmente el enriquecimiento enantiomérico usando técnicas y procedimientos estándar, tales como cromatografía de gases o cromatografía líquida de alta resolución con una columna quiral. La elección de la columna quiral apropiada, el eluente y las condiciones necesarias para realizar la separación del par enantiomérico forma parte del conocimiento de cualquier experto en la técnica. Además, cualquier persona con un conocimiento medio de la técnica puede preparar los estereoisómeros y enantiómeros específicos de los compuestos de fórmula I utilizando técnicas y procedimientos conocidos, tales como los revelados por J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 y E. L. Eliel y S. H. Wilen, "Stereochemistry of Organic Compounds", (Wiley-Interscience 1994), y la solicitud de patente europea nº: EP-A-838448, publicada el 29 de abril de 1998. Los ejemplos de resoluciones incluyen técnicas de recristalización o de cromatografía quiral.

Algunos de los compuestos de la presente invención tienen uno o más centros quirales y pueden existir en una variedad de configuraciones estereoisoméricas. Como consecuencia de estos centros quirales, los compuestos de la presente invención ocurren como racematos, mezclas de enantiómeros y como enantiómeros individuales, además de cómo diastereómeros y mezclas de diastereómeros. Todos tales racematos, enantiómeros y diastereómeros pertenecen al alcance de la presente invención.

Los términos "R" y "S" son usados en la presente memoria como se usan comúnmente en Química Orgánica para indicar configuraciones específicas de un centro quiral. El término "R" (rectus) se refiere a aquella configuración de un centro quiral con una relación en el sentido de las agujas del reloj de las prioridades de los grupos (de la más alta a la segunda más baja) si se observa a lo largo del enlace hacia el grupo de prioridad más baja. El término "S" (sinister) se refiere a aquella configuración de un centro quiral con una relación en el sentido contrario a las agujas del reloj de las prioridades de los grupos (de la más alta a la segunda más baja) si se observa a lo largo del enlace hacia el grupo de prioridad más baja. La prioridad de los grupos se basa en su número atómico (números atómicos en orden decreciente). En "Nomenclature of Organic Compounds: Principles and Practice", (J. H. Fletcher, et al., eds., 1974) en las páginas 103-120, hay una lista parcial de prioridades y un tratado sobre la estereoquímica.

La designación "

2

" se refiere a un enlace que sobresale hacia delante fuera del plano de la página.

La designación "

3

" se refiere a un enlace que sobresale hacia atrás fuera del plano de la página.

La designación "

4

" se refiere a un enlace en el que la estereoquímica no está definida.

Como se usa en la presente memoria, el término "estrógeno" incluye compuestos esteroidales que tienen actividad estrogénica tales como, por ejemplo, 17\beta-estradiol, estrona, estrógeno conjugado (Premarin®), 17a-etinil estradiol de estrógeno equino y similares. Como se usa en la presente memoria, el término "progestina" incluye compuestos que tienen actividad progestacional tales como, por ejemplo, progesterona, noretilnodrel, nongestrel, acetato de megestrol, noretindrona y similares.

Los compuestos preferidos de esta invención incluyen compuestos de fórmula I en la que Y es -O-.

Ciertos grupos R^{3} y R^{4} también demuestran características preferibles. Por ejemplo, se prefieren aquellos compuestos de fórmula I en la que R^{4} es 1-pirrolidinilo, 1-hexametileneimino o 1-piperidinilo. Otro subgrupo preferido de los compuestos preferidos de 1-pirrolidinilo, 1-hexametileneimino o 1-piperidinilo incluye aquellos compuestos en los que R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente -H, -OH o -OCH_{3}.

Los compuestos particularmente preferidos de fórmula I incluyen aquéllos que tienen todas las limitaciones anteriormente mencionadas, es decir, los compuestos en los que Y es -O-; R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente -H, -OH o -OCH_{3}, particularmente, en los que R^{1} y R^{2} son -OH y R^{3} es -H, o en los que R^{1} y R^{3} son -OH y R^{2} es -H; y R^{4} es 1-pirrolidinilo o 1-piperidinilo.

Aunque se pueden usar las formas ácidas o de base libre de los compuestos de fórmula I en los procedimientos de la presente invención, es preferible preparar y usar una forma de sal farmacéuticamente aceptable. Por lo tanto, los compuestos usados en los procedimientos de esta invención forman sales de adición ácida o básica farmacéuticamente aceptables con una amplia variedad de ácidos y bases orgánicos e inorgánicos, e incluyen la sales fisiológicamente aceptables que se usan habitualmente en la Química Farmacéutica. Tales sales también forman parte de esta invención. Los ácidos inorgánicos típicos usados para formar tales sales incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofosfórico y similares. También se pueden usar sales derivadas de ácidos orgánicos tales como ácidos mono- y dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanoicos fenil-sustituidos, ácidos hidroxialcanoicos e hidroxialcanodioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos. Tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen, de ese modo, acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftalen-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, b-hidroxibutirato, butin-1,4-dioato, hexin-1,4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinnamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, monohidrogenfosfato, dihidrogenfosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencenosulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobencenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenosulfonato, tartarato y similares. Las sales preferidas son sales de clorhidrato y oxalato.

Las bases típicas usadas para formar las sales de adición farmacéuticamente aceptables serían bases inorgánicas, tales como, hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, carbonatos o bicarbonatos alcalinos, carbonato de calcio, carbonato de magnesio y similares. Adicionalmente, se pueden utilizar bases orgánicas para formar sales de adición, p. ej., alquilaminas, tales como, trietilamina, dimetilamina, i-propilamina y similares.

Las sales de adición ácida o básica farmacéuticamente aceptables, normalmente, se forman haciendo reaccionar un compuesto de fórmula I con una cantidad equimolar o en exceso de ácido o base. Generalmente, los reactivos son combinados en un disolvente mutuo tal como éter de dietilo o acetato de etilo. La sal normalmente precipita fuera de la solución en el transcurso de aproximadamente una hora a 10 días, y puede ser aislada mediante filtración, o el disolvente puede ser separado mediante procedimientos convencionales.

Los ejemplos específicos de compuestos que se consideran dentro del alcance de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, los siguiente compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables:

[6-metoxi-2-(4-metoxifenil)-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona;

(6-metoxi-2-fenil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il)-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona;

[6-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona;

(6-hidroxi-2-fenil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il)-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona;

6-metoxi-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina;

2-(4-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol;

2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol;

6-metoxi-2-(4-metoxifenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina;

6-metoxi-2-(3-metoxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina; y

2-(3-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol; y

2-(4-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol.

Los compuestos de fórmula (I) pueden ser preparados utilizando procedimientos y técnicas conocidos y apreciados por cualquier experto en la técnica. En el esquema A, se expone un esquema sintético general para preparar los compuestos de fórmula (I) en la que X es -C(O)- e Y es -O-, en el que todos los sustituyentes, a no ser que se indique lo contrario, son como se definen anteriormente.

Esquema A

5

En el esquema A, R^{1a}, R^{2a} y R^{3a} es cada uno independientemente -H, -OH o -OPg, siendo Pg un grupo protector de hidroxilos; y A es un grupo de activación adecuado definido de forma más completa a continuación. En los compuestos de fórmula (1a), (1b), (2), (3) y siguientes, los grupos protectores Pg de R^{1a}, R^{2a} y R^{3a} son grupos protectores fenólicos del tipo enseñado por T. Greene et al., en el capítulo 3 de "Protective Groups in Organic Synthesis", Segunda edición, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1991, pp. 143-170. Los grupos protectores preferidos son los grupos de alquiléter, con metilo siendo particularmente preferido.

En el esquema A, etapa 1, la 2-fenilquinolina de fórmula (2) puede ser preparada bien haciendo reaccionar quinolina R^{1a}-sustituida de fórmula (1a) con fenil litio R^{2a}, R^{3a} -sustituido o quinolin-N-óxido R^{1a}-sustituido (1b) con haluro de fenilmagnesio R^{2a}, R^{3a} -sustituido bajo condiciones de Grignard. La reacción de Grignard y las reacciones en las que se usan compuestos de organolitio son del tipo enseñado por Gilman et al., J. Am. Chem. Soc. 68, 2017 (1946); Gilman y Gainer, J. Am. Chem. Soc. 69, 887 (1947); y Comins, D.L., Brown, J.D., Tetrahedron Lett. 27, 4549 (1986).

Por ejemplo, se hace reaccionar el quinolin-N-óxido R^{1a}-sustituido (1b) con cloroformiato de metilo en un intervalo de temperatura de aproximadamente -90ºC a aproximadamente -50ºC, más preferiblemente, a aproximadamente -78ºC. La reacción es normalmente llevada a cabo en condiciones anhidras en un disolvente orgánico aprótico adecuado tal como tetrahidrofurano anhidro. El quinolin-N-óxido R^{1a}-sustituido (1b) y el cloroformiato de metilo están preferiblemente presentes en la zona de reacción en una cantidad aproximadamente equimolar. Un ligero exceso de cualquiera de los reactivos no es perjudicial para la reacción. Se deja continuar la reacción durante un período de tiempo que varía de aproximadamente 20 minutos a aproximadamente 5 horas. Entonces se añade una cantidad sustancialmente equimolar de haluro de fenilmagnesio R^{2a}, R^{3a} -sustituido. Luego se detiene la reacción con una fuente de protones tal como, por ejemplo, bicarbonato de sodio o metanol. Se separa el disolvente, y la mezcla resultante es extraída, concentrada y purificada según técnicas conocidas en la técnica.

Las quinolinas R^{1a}-sustituidas apropiadas de fórmula (1a) y los quinolin-N-óxidos R^{1a}-sustituidos (1b) apropiados están comercialmente disponibles o se preparan mediante técnicas y procedimientos conocidos en la técnica.

Además, los fenil litios R^{2a}, R^{3a} -sustituidos y los haluros de fenilmagnesio R^{2a}, R^{3a} -sustituidos están comercialmente disponibles o se preparan mediante técnicas conocidas en la técnica. Por ejemplo, se hace reaccionar una solución de fenilo R^{2a}, R^{3a} -sustituido con un compuesto de organolitio tal como n-butilitio o t-butilitio, más preferiblemente, t-butilitio, durante un período de tiempo que varía de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 30 minutos y, más preferiblemente, durante aproximadamente 15 minutos; a un intervalo de temperatura de aproximadamente -90ºC a aproximadamente -50ºC, más preferiblemente, a aproximadamente -78ºC. El compuesto de organolitio estará presente en la cantidad de aproximadamente 1,0 a 1,1 equivalentes por cada mol de fenilo R^{2a}, R^{3a} -sustituido utilizado y, más preferiblemente, estará presente en una cantidad aproximadamente equimolar. Las reacciones son normalmente llevadas a cabo en condiciones anhidras en un disolvente orgánico aprótico adecuado tal como tretrahidrofurano.

En el esquema A, etapa 2, la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) es preparada reduciendo 2-fenilquinolina de fórmula (2). Por ejemplo, se disuelve 2-fenilquinolina de fórmula (2) en un disolvente alcohólico adecuado, tal como etanol absoluto. Luego se añade metal de sodio y se deja enfriar la reacción hasta la temperatura ambiente. Luego se puede diluir la mezcla de reacción con agua y extraerla con un disolvente orgánico adecuado, tal como cloruro de metileno, acetato de etilo o cloroformo. Entonces se pueden lavar los extractos combinados con agua y agua salada, separar y secar la capa orgánica, para evaporar el disolvente al vacío hasta proporcionar 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) que puede ser usada sin purificación adicional.

Alternativamente, se puede lograr la reducción de 2-fenilquinolina de fórmula (2) usando borohidruro de sodio en etanol con catalizador de cloruro de níquel, en un procedimiento descrito análogamente por Nose y Kudo, Chem. Pharm. Bull. 36, 1529 (1988).

En el esquema A, etapa 3, la 1,2-disustituida-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (5) puede ser preparada mediante la amidación de la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) con el derivado de benzoilo sustituido del compuesto (4).

Por ejemplo, se hace reaccionar 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) con de 1 a 1,1 equivalentes molares de un derivado ácido apropiado de estructura (4) como su haluro, anhídrido o anhídrido mixto. La reacción es llevada a cabo en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, diclorometano, acetona, acetato de etilo, tolueno o éter de dietilo. La reacción es llevada a cabo en presencia de una base, tal como N-metilmorfolina, carbonato de sodio, trietilamina, N,N-diisopropiletilamina, carbonato de potasio o bicarbonato de sodio. Generalmente, la reacción se lleva a cabo a temperaturas de -78ºC a la temperatura ambiente. Generalmente, las reacciones requieren de 1 a 24 horas. El producto (5) puede ser aislado y purificado mediante técnicas conocidas en la técnica, tales como extracción, evaporación, trituración, cromatografía y recristalización.

Los compuestos apropiados de fórmula (4) pueden ser preparados como se describe en la presente memoria a partir de su derivado de ácido benzoico apropiado como se expone de forma análoga en la patente estadounidense nº: 5.962.475, cuya revelación se incorpora por la presente por referencia. En la patente estadounidense nº: 4.418.068, la patente estadounidense nº: 5.631.369 y la patente estadounidense nº: 5.852.193, cuyas revelaciones se incorporan por la presente por referencia, se exponen derivados de ácido benzoico apropiados de los compuestos de fórmula (4).

En los compuestos de fórmula (4), el grupo de activación, A, se selecciona de los grupos conocidos en la técnica por activar ácidos con el propósito de llevar a cabo reacciones de amidación e incluyen haluros ácidos tales como fluoruro, cloruro y bromuro; anhídridos ácidos mixtos con ácidos alcanoicos(C_{1-6}), ácidos alquilsulfónicos(C_{1-6}), ácidos arilsulfónicos, ácidos alquilsulfónicos(C_{1-6}), ácidos alcanoicos(C_{1-6}) perfluorados, alquilcarbonatos(C_{1-6}), arilcarbonatos y similares. Los compuestos preferidos de fórmula (4) son aquéllos en los que A es halógeno, más preferiblemente, cloro.

En la patente estadounidense nº: 5.962.475 se describe de forma análoga un esquema sintético general para preparar compuestos de fórmula (I) en la que X es -C(O)- e Y es -S-, -CH_{2}-, -NH- o -NMe-, que se expone además en el esquema B, en el que todos los sustituyentes, a no ser que se indique lo contrario, son como se definen anteriormente.

Esquema B

6

El grupo saliente, L, de los compuestos de fórmula (6) se selecciona entre aquellos grupos conocidos en la técnica por participar en reacciones de sustitución aromática nucleófila (véase J. March, "Advanced Organic Chemistry", 3ª edición, John Wiley & Sons, Nueva York, 1985, p. 587. Los grupos salientes adecuados incluyen flúor, cloro, bromo, nitro, (alquil inferior)fenilsulfonilo, (alquil inferior)sulfonilo, fenilsulfonilo, azido, trialquilamonio, fenoxilo, alcoxilo, tioalcoxilo y amino.

Para los propósitos de la presente invención, los grupos salientes preferidos incluyen flúor, cloro, bromo, nitro, (alquil inferior)fenilsulfonilo y alquilsulfonilo inferior, con flúor, bromo y nitro como los más preferidos.

En los compuestos de fórmula (6), el grupo de activación, A, es como se define anteriormente para los compuestos de fórmula (4) del esquema A.

En el esquema B, etapa 1, el 1,2-(fenil L-sustituido)-1,2,3,4-tetrahidrofurano (7) puede ser preparado mediante la amidación de la 2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina de fórmula (3) con el derivado de benzoilo activado de fórmula (6) según el procedimiento expuesto en el esquema A, etapa 3.

En el esquema B, etapa 2, se hace reaccionar posteriormente el producto resultante de la reacción de amidación, (7), con un compuesto de fórmula (8) en el que R^{4} y n tienen los significados atribuidos anteriormente. En el caso en el que Y' es -SH en los compuestos de fórmula (8a), la reacción entre (7) y (8a) es llevada a cabo mezclando los dos reactivos en presencia de una base fuerte en un disolvente aprótico polar. Las bases fuertes adecuadas incluyen alquilitio, amidas de metales alcalinos o hidruros metálicos tales como hidruro de litio, de potasio o de sodio, o hidruro de litio y aluminio o hidruro de sodio y aluminio.

Los disolventes apróticos polares adecuados incluyen N,N-dimetilformamida, N-metil pirrolidinona, N,N'-dimetilpropilurea, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano y similares.

Alternativamente, el compuesto de sulfhidrilo, (8a), puede ser convertido por separado en el anión correspondiente haciéndolo reaccionar con una base fuerte en un disolvente aprótico polar, y haciendo reaccionar posteriormente el anión resultante con el compuesto (7).

En el caso en el que Y' es -NH_{2}, como en el compuesto (8b), las condiciones de reacción preferidas suponen la reacción de (7) con (8b) en dimetilsulfóxido en presencia de la 18-corona-6 del reactivo de transferencia de fases y fluoruro de potasio al 37% absorbido sobre alúmina a una temperatura de aproximadamente 120ºC.

Tras la reacción de acilación entre los compuestos (3) y (4) del esquema A, etapa 3, o entre los compuestos (7) y (8) del esquema B, etapa 2, se pueden separar los grupos protectores de los productos resultantes, (5) o (9), mediante procedimientos enseñados en la técnica para producir los análogos desprotegidos de los mismos (para los reactivos y las condiciones de reacción de desprotección, véase T. Greene, et al. anteriormente citado y las referencias citadas en la presente memoria). En el caso en que R^{1a}, R^{2a} y/o R^{3a} son el grupo protector preferido, metilo, la separación de desprotección de los grupos metilo puede ser llevada a cabo bien mediante el uso de un etanotiolato de metal alcalino (véase G. I. Fetruell, et al., Tetrahedron Letters, 1327 (1970); ídem. Aust. J. Chem., 25: 1719 (1972) y A. S. Kende, et al., Tetrahedron Letters, 22: 1779 (1981) o mediante el uso de bien tribromuro de boro en cloruro de metileno a una temperatura de entre aproximadamente -80ºC a 20ºC durante un período de 6-12 horas (J. F. W. McOmie et al., Org. Syn., Coll. Volumen V, 412 (1973)) o BBr_{3}\cdotS(CH_{3})_{2} en cloruro de etileno a una temperatura de aproximadamente 80ºC a 85ºC (P. G. Williard, et al., Tetrahedron Letters, 21: 3731 (1981)).

Los compuestos de la presente invención en los que X es -CH_{2}- son preparados según el procedimiento expuesto en el esquema C. En el esquema C, todos los sustituyentes, a no ser que se indique otra cosa, son como se definen anteriormente.

Esquema C

7

Los compuestos de la presente invención en los que X es -CH_{2}- son preparados mediante la disolución de compuestos de fórmulas (5) o (9) en un disolvente apropiado, preferiblemente, tetrahidrofurano anhidro, y la reacción con un agente reductor, tal como, por ejemplo, hidruro de litio y aluminio bajo un gas inerte tal como nitrógeno. El producto reducido (10) puede ser aislado y purificado mediante técnicas conocidas en el arte, tales como extracción, evaporación, trituración, cromatografía y recristalización.

Cuando se desea un grupo -OC(O)(alquilo(C_{1-6})) o -OC(O)C_{6}H_{5} en R^{1}, R^{2} y/o R^{3}, se hace reaccionar un compuesto mono-, di- o trihidroxílico de fórmula I con un agente tal como cloruro de acilo, bromuro, cianuro o azida, o con un anhídrido apropiado o un anhídrido mixto. Las reacciones son convenientemente llevadas a cabo en un disolvente básico tal como piridina, lutidina, quinolina o isoquinolina, o en un disolvente de amina terciaria tal como trietilamina, tributilamina, metilpiperidina y similares. La reacción también puede ser llevada a cabo en un disolvente inerte tal como acetato de etilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, dimetoxietano, acetonitrilo, acetona, metiletilcetona y similares, al que se ha añadido al menos un equivalente de un ácido barredor, tal como una amina terciaria. Si se desea, se pueden usar catalizadores de acilación tales como 4-dimetilaminopiridina o 4-pirrolidinopiridina. Véase, p. ej., Haslam, et al., Tetrahedron, 36: 2409-2433 (1980).

Las reacciones de acilación que proporcionan los grupos R^{1}, R^{2} y/o R^{3} anteriormente mencionados son llevadas a cabo a temperaturas moderadas en el intervalo de aproximadamente -25ºC a aproximadamente 100ºC, frecuentemente, bajo una atmósfera inerte tal como gas de nitrógeno. Sin embargo, la temperatura ambiente es habitualmente adecuada para la reacción.

Tales acilaciones del grupo hidroxilo también pueden ser realizadas mediante reacciones catalizadas por ácidos de los ácidos carboxílicos apropiados en disolventes orgánicos inertes o solos. Se usan catalizadores ácidos tales como ácido sulfúrico, ácido polifosfórico, ácido metanosulfónico y similares.

También se pueden proporcionar los grupos R^{1}, R^{2} y/o R^{3} anteriormente mencionados mediante la formación de un éster activo del ácido apropiado, tal como los ésteres formados por tales reactivos conocidos como diciclohexilcarbodiimida, acilimidazolas, nitrofenoles, pentaclorofenol, N-hidroxisuccinimida y 1-hidroxi-benzotriazol. Véase, p. ej., Bull. Chem. Soc. Japan, 38: 1979 (1965) y Chem. Ber., 788 y 2024 (1970).

Cuando se desea un compuesto en el que R^{1}, R^{2} y/o R^{3} son -OSO_{2}(alquilo(C_{4-6})), se hace reaccionar el compuesto mono-, di- o trihidroxílico inicial con, por ejemplo, un derivado del ácido sulfónico apropiado tal como un cloruro de sulfonilo, bromuro o sal de sulfonilamonio, según lo enseñado por King y Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97: 2566-2567 (1975). El compuesto mono-, di- y trihidroxílico también puede hacerse reaccionar con el anhídrido sulfónico apropiado. Tales reacciones son llevadas a cabo bajo condiciones tales como las explicadas anteriormente en el tratado de la reacción con haluros ácidos y similares.

Los compuestos de fórmula I pueden ser preparados tal que R^{1}, R^{2} y/o R^{3} sean grupos protectores biológicos distintos o, preferiblemente, el mismo grupo protector biológico. Los grupos protectores preferidos incluyen -CH_{3},
-C(O)C(CH_{3})_{3}, -C(O)C_{6}H_{5} y -SO_{2}(CH_{2})_{3}CH_{3}.

Ejemplos

Todas las reacciones son llevadas a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno. Todos los disolventes son de grado ACS y son usados como se suministran. Todos los reactivos están comercialmente disponibles y son usados sin purificación adicional a no ser que se indique lo contrario. Los datos de EM y CL están registrados en una serie Hewlett Packard 1100 a 35ºC. El procedimiento usado es acetonitrilo al 5% - agua al 95% (TFA al 0,05%) a acetonitrilo al 95% - agua al 5% (TFA al 0,05%) durante dos minutos, manteniendo durante 3 minutos en una columna de 2,1 x 50 mm de C18 de Waters Symmetry. Los espectros de ^{1}H-RMN son registrados a 400 MHz en un espectrómetro Varian 400 en CDCl_{3} (\delta 7,26) a no ser que se indique otra cosa.

Preparación 1

6-Metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-quinolina

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8

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Se carga un matraz de fondo redondo de 500 ml con quinolin-N-óxido de 6-metoxilo (8 g, 0,04566 moles) y se coloca bajo nitrógeno. Entonces se disuelve el sólido en THF anhidro (100 ml) y se enfría hasta -78ºC con un baño de hielo seco/acetona, con lo que parte del sólido disuelto comienza a precipitar. Desde un embudo de adición, se añade gota a gota metilcloroformiato (4,4 ml; 0,05694 moles). Se separa el baño 10 minutos después de la adición y se vuelve a colocar tras 20 minutos. Entonces se realiza una adición en gotas de bromuro de anisilmagnesio 0,5 M (112 ml; 0,0560 moles). Se separa el baño tras la adición y se deja calentar la reacción hasta la temperatura ambiente. Se detiene la reacción con una solución de bicarbonato de sodio al 5%. Se separa el THF al vacío y se diluye la mezcla resultante con agua, para extraerla con cloruro de metileno. Se recogen los extractos, se secan con sulfato de sodio anhidro y se concentran. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía por desorción súbita (EtOAc/diclorometano al 2-5%) hasta producir 6,30 g (52%) del producto deseado. ^{1}H-RMN: \delta 8,03-8,11 (m, 4H); 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,37 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz, 1H); 7,03-7,07 (m, 3H); 3,94 (s, 1H); 3,88 (s, 1H). CL/EM: 2,188 min, 266 (M+).

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Preparación 2

6-Metoxi-2-fenil-quinolina

9

La 6-Metoxi-2-fenil-quinolina es preparada de una manera análoga a la de la preparación 1, usando bromuro de fenilmagnesio. ^{1}H-RMN: \delta 8,07-8,15 (m, 4H); 7,84 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,50-7,54 (m, 2H); 7,42-7,46 (m, 1H); 7,39 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz, 1H); 7,10 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 3,95 (s, 3H).

Preparación 3

6-Metoxi-2-(4-metoxifenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

10

Se carga un matraz de fondo redondo de 500 ml con el compuesto de la preparación 1 (3 g; 0,01131 moles) y etanol absoluto (150 ml). Se coloca la mezcla bajo nitrógeno y se lleva a reflujo. Se añaden pellas de metal de sodio periódicamente hasta que no queda nada de material inicial según una CCF (EtOAc/hexanos al 30%). La reacción es enfriada hasta la temperatura ambiente, diluida con agua y extraída con cloruro de metileno. Entonces se lavan los extractos combinados con agua y agua salada. El orgánico es separado y secado con sulfato de sodio anhidro. Se separa el disolvente al vacío hasta producir 3,05 g (100%) de un aceite dorado. No es necesaria una purificación. ^{1}H-RMN: \delta 7,32 (aprox. d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,89 (aprox. d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,61-6,65 (m, 2H); 6,49 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 4,31 (dd, J = 10 Hz, 2,8 Hz, 1H); 3,81 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 2,90-2,99 (m, 1H); 2,73 (dt, J = 16,4 Hz, 4,6 Hz, 1H); 2,04-2,10 (m, 1H); 1,91-2,01 (m, 1H).

Preparación 4

6-Metoxi-2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

11

La 6-Metoxi-2-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina es preparada de una manera análoga a la de la preparación 3, usando 6-Metoxi-2-fenil-quinolina. ^{1}H-RMN: \delta 7,28-7,43 (m, 5H); 6,63-6,67 (m, 2H); 6,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 4,38 (dd, J = 9,0 Hz, 3,0 Hz, 1H); 3,76 (s, 3H); 2,91-3,00 (m, 1H); 2,74 (dt, J = 16,8, Hz, 4,6 Hz, 1H); 2,09-2,15 (m, 1H); 1,95-2,05 (m, 1H).

Preparación 5

Clorhidrato de cloruro de 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoilo

12

Se carga un matraz de fondo redondo de 500 ml con clorhidrato de ácido 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoico, (25 g; 0,08748 moles) y cloruro de tionilo (150 ml; 2,0564 moles). Se lleva la mezcla a reflujo durante 15 minutos con lo que se convierte en una solución clara. Se enfría la reacción hasta la temperatura ambiente y se elimina el exceso de cloruro de tionilo hasta proporcionar una producción cuantitativa del producto deseado. ^{1}H-RMN: \delta 8,08 (aprox. d,
J = 8,8 Hz, 2H); 6,99 (aprox. d, J = 9,2 Hz, 2H); 4,71 (t, J = 4,6 Hz, 2H); 3,65 (d, J = 12 Hz, 2H); 3,43 (cuart., J = 4,6 Hz, 2H); 2,76-2,85 (m, 2H); 2,22-2,32 (m, 2H); 1,87-1,94 (m, 3H); 1,37-1,49 (m, 1H).

Ejemplo 1

[6-Metoxi-2-(4-metoxifenil)-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona

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13

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Se carga un matraz de fondo redondo de 250 ml con el compuesto de la preparación 3 (3,05 g; 0,01132 moles), clorhidrato de cloruro de 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoilo (4,5 g; 0,01479 moles), diclorometano (125 ml) y trietilamina (10 ml, 0,07175). Se coloca la solución agitada bajo nitrógeno y se sigue con CL/EM hasta que no queda material inicial. Se lava la reacción con solución de carbonato de sodio saturado, agua y agua salada. Se separa y se seca la fase orgánica con sulfato de sodio anhidro y se concentra. El producto crudo es purificado mediante cromatografía por desorción súbita (MeOH/diclorometano al 0-5%) hasta producir 5,33 g (92%) del producto deseado. ^{1}H-RMN: \delta 7,21 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,14 (aprox. d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,79 (aprox. d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,70 (aprox. d, J = 8,8 Hz, 4H); 6,50 (dd, J = 8,4 Hz, 2,4 Hz, 1H); 5,62 (aprox. t, J = 7,6 Hz, 1H); 4,06 (t, J = 6 Hz, 2H); 3,75 (s, 3H); 2,74 (t, J = 6 Hz, 2H); 2,57-2,80 (m, 3H); 2,49 (s, 4H); 1,92-2,02 (m, 1H); 1,59 (quint. J = 5,6 Hz, 4H); 1,40-1,46 (m, 2H). CL/EM: 2,247 min, 501 (M+).

Ejemplo 2

[6-Metoxi-2-fenil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona

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14

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Se carga un matraz de fondo redondo de 250 ml con el compuesto de la preparación 4 (3,05 g; 0,01274 moles), clorhidrato de cloruro de 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoilo (4,65 g; 0,01529 moles), diclorometano (100 ml) y trietilamina (10 ml, 0,07175 moles). Se agita la reacción durante toda la noche bajo nitrógeno. La reacción es incompleta. Se añaden clorhidrato de cloruro de 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoilo (3 g; 0,009861 moles) y trietilamina (10 ml, 0,07175 moles), y se somete la reacción a reflujo. Se lava la reacción con solución de carbonato de sodio saturado, agua y agua salada. Se separa y se seca la fase orgánica con sulfato de sodio. Se concentra la solución y se aísla el producto crudo mediante cromatografía por desorción súbita sobre sílice (metanol/diclorometano al 0-5%). El producto contiene \sim33% de metiléster de ácido 4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-benzoico como una impureza inseparable [CL/EM: 1,815 min., 264 (M+)]. El producto es mantenido sin ninguna purificación adicional. ^{1}H-RMN: \delta 7,16-7,27 (m, 7H); 6,70 (aprox. d, J = 8,4 Hz, 4H); 6,51 (dd, J = 8,6 Hz, 2,6 Hz, 1H); 5,66 (t, J = 7 Hz, 1H); 4,07 (t, J = 5,8 Hz, 2H); 3,75 (s, 3H); 2,61-2,81 (m, 5H); 2,50 (s, 4H); 1,94-2,03 (m, 1H); 1,57-1,64 (m, 4H); 1,40-1,49 (m, 2H). CL/EM: 2,253 min, 471 (M+).

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Ejemplo 3

[6-Hidroxi-2-(4-hidroxifenil)-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona

15

Se carga un matraz de fondo redondo de 25 ml con el compuesto del ejemplo 1 (41,3 mg; 0,0824 mmoles) y diclorometano (10 ml). Se enfría la solución hasta 0ºC y se añade tribromuro de boro 1,0 M (0,50 ml; 0,50 mmoles). Se deja calentar la reacción hasta la temperatura ambiente. La reacción es seguida por una CL/EM. Se vuelve a añadir una cantidad igual de tribromuro de boro tras enfriar la reacción hasta 0ºC. Se hace esto tres veces más durante el transcurso de varias horas hasta que la reacción parece completarse por CL/EM. Se neutraliza la reacción con metanol y se elimina el disolvente. Se eleva el residuo en acetato de etilo y se lava con agua. Se extrae el agua varias veces con acetato de etilo. Se concentra el disolvente y se purifica el material mediante CLAR en fase inversa. Se obtiene una cantidad de 10,6 mg como una sal de TFA. ^{1}H-RMN [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,88 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,65-6,78 (m, 4H); 6,30-6,36 (m, 1H); 5,45-5,49 (s amplio, 1H); 4,33 (t, J = 4,6 Hz, 2H); 3,60 (d, J = 12,4 Hz, 2H); 3,53 (t, J = 4,6 Hz, 2H); 3,00-3,10 (m, 2H); 2,60-2,80 (m, 4H); 1,70-2,00 (m, 5H); 1,45-1,60 (m, 1H). CL/EM: 2,131 min, 473 (M+).

Ejemplo 4

[6-Hidroxi-2-fenil-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il]-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)fenil]metanona

16

Se añade tribromuro de boro (0,20 ml; 0,20 mmoles) en gotas a una solución del compuesto del ejemplo 2 (10 mg; 0,02125 mmoles) en diclorometano (1 ml) a temperatura ambiente. Se agita la reacción durante 30 minutos tras lo que una CCF muestra que no queda nada de material inicial. Se diluye la mezcla con diclorometano y se leva con una solución de bicarbonato de sodio saturado, agua y agua salada. Entonces se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtra y se concentra. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía por desorción súbita (acetato de etilo al 100%) hasta producir 7,9 mg (81%) de producto. ^{1}H-RMN: \delta 7,13-7,27 (m, 7H); 6,52-6,60 (m, 4H); 6,24 (dd, J = 10 Hz, 2 Hz, 1H); 5,61 (t, J = 9 Hz, 1H); 4,00-4,10 (m, 2H); 2,76-2,83 (m, 1H); 2,43-2,74 (m, 8H); 1,82-1,93 (m amplio, 1H); 1,58-1,67 (m amplio, 4H); 1,39-1,49 (m amplio, 2H). CL/EM: 2,321 min, 457 (M+).

Ejemplo 5

Clorhidrato de 6-Metoxi-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

17

Se carga un matraz de fondo redondo de 250 ml con el compuesto el ejemplo 1 (5,22 g; 0,01043 moles) en 75 ml de THF anhidro seguido por la adición de LiAlH_{4}(0,80 g; 0,02108). Se lleva entonces la mezcla de reacción a reflujo durante 15 minutos. CL/EM confirma el consumo del material inicial. Se enfría la reacción y se detiene con hielo. Se separan lo sólidos mediante filtración y se concentra el filtrado. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía por desorción súbita (MeOH/diclorometano al 0-5%). Se recogen las eluciones de producto y se elimina el disolvente al vacío hasta producir un aceite. Se eleva el aceite en éter y se añade un exceso de HCl 1,0 M en éter. La sal de clorhidrato del producto precipita, y se recoge mediante filtración. Se lava el sólido con éter y hexanos. Se obtiene una cantidad de 1,5571 g (30,7%). ^{1}H-RMN [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 6,60-7,53 (m amplio, 11H); 4,60-4,23 (m, 2H); 4,40 (s, 2H); 3,84 (s, 6H); 3,58-3,64 (m, 6H); 3,09 (t, J = 12 Hz; 4H); 2,40-2,61 (s amplio, 1H); 1,80-2,01 (m, 5H); 1,50-1,60 (m, 1H). CL/EM: 2,421 min, 487 (M+).

Ejemplo 6

18

El clorhidrato de 6-Metoxi-2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina se prepara de una manera análoga al del ejemplo 5 usando el compuesto del ejemplo 2. ^{1}H-RMN [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 6,50-7,90 (m amplio, 12H); 4,40 (t, J = 4,8 Hz; 2H); 3,68-4,00 (s amplio, 2H); 3,56-3,64 (m, 6H); 3,30 (s, 3H); 3,08 (t, J = 11 Hz; 4H); 2,35-2,74 (s amplio, 1H); 1,80-1,98 (m, 5H); 1,30-1,60 (m, 1H). CL/EM: 2,446 min, 457 (M+).

Ejemplo 7

2-(4-Hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

19

Se carga un matraz de fondo redondo de 100 con el compuesto del ejemplo 5 (1,5571 g; 0,003200 moles) y 30 ml de diclorometano. Se coloca la solución bajo nitrógeno y se enfría hasta 0ºC antes de añadir tribromuro de boro (1,5 ml; 0,01587 moles). La reacción es seguida por una CL/EM hasta que se completa. Se detiene la reacción con metanol y una solución de bicarbonato de sodio saturado, y se extrae con metanol al 1% en diclorometano. Se secan los extractos con sulfato de sodio anhidro y se someten a una preadsorción sobre gel de sílice. Entonces se purifica el material mediante cromatografía por desorción súbita (metanol/diclorometano al 0-5%). Se elimina el sólido hasta proporcionar un sólido rojo/naranja. Se lava el sólido con acetonitrilo lo que eliminó gran parte del color rojo. Se obtiene una cantidad de 704,2 mg (50%). ^{1}H-RMN [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 7,09 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,98 (m, J = 8,8 Hz, 2H); 6,82 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,69 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,38-6,45 (m, 3H); 4,45-4,50 (m, 2H); 4,02-4,10 (m, 3H); 2,76 (t, J = 5,6 Hz; 2H); 2,52-2,55 (m, 6H); 2,11-2,19 (m, 1H); 1,95-2,01 (m, 1H); 1,63 (quint, J = 5,6 Hz; 4H); 1,48 (aprox. d, J = 4,8 Hz; 2H). CL/EM: 2,032 min, 459 (M+).

Ejemplo 8

2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

20

El 2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol es preparado de una manera análoga al del ejemplo 7, usando el compuesto del ejemplo 6. ^{1}H-RMN [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 7,25-7,28 (m, 2H); 7,16-7,21 (m, 3H); 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,83 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,41-6,46 (m, 3H); 4,50-4,56 (m, 2H); 4,03-4,10 (m, 3H); 3,28-3,31 (m, 1H); 2,45-2,55 (m, 6H); 2,17-2,25 (m, 1H); 2,01-2,06 (m, 1H); 2,76 (t, J = 5,6 Hz; 2H); 1,63 (quint, J = 5,7 Hz, 4H); 1,48 (aprox. d, J = 4,8 Hz; 2H). CL/EM: 2,287 min, 443 (M+).

Preparación 6

1-(4-Benciloxi-bencil)-6-metoxi-2-(4-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

21

Se carga un matraz de fondo redondo de 50 ml con el compuesto de la preparación 3 (165,0 mg; 0,6126 mmoles), cloruro de 4-benciloxibencilo (299,0 mg; 1,285 mmoles) y THF anhidro (15 ml) y se coloca bajo nitrógeno. A esta solución, se añade base de fosfacina-P_{4} t-butilo 1,0 M (0,55 ml de 1 M/hexanos; 0,55 mmoles). Se comprueba la reacción mediante CCF (diclorometano) tras dos horas. No hay nada de material inicial. La reacción es preadsorbida sobre sílice y el producto es aislado mediante cromatografía por desorción súbita (diclorometano/hexanos 50-75%) hasta producir 287,3 mg (> 100%) de producto con algunas impurezas menores. ^{1}H-RMN: \delta 7,36-7,44 (m, 5H); 7,12 (aprox. t, J = 8,8 Hz, 4H); 6,90 (aprox. d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,83 (aprox. d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,61-6,40 (m, 2H); 6,49 (d, J = 9,6 Hz, 1H); 5,03 (s, 2H); 4,54-4,58 (m, 2H); 4,14 (d, 16,8 Hz; 1H); 3,79 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 2,60-2,64 (m, 2H); 2,19-2,27 (m, 1H); 2,01-2,06 (m, 1H). CL/EM: 3,406 min, 466 (M+).

Preparación 7

4-[6-Metoxi-2-(4-metoxifenil)-3,4-dihidro-2H-quinolin-1-il-metil]fenol

22

Se carga un matraz de fondo redondo de 25 ml con el compuesto de la preparación 6 (287,3 mg; 0,6125 mmoles) en acetato de etilo (10 ml), y se añade Pd/C al 10% (86 mg; 0,0808 mmoles). Se aplica una aspersión de nitrógeno durante 10 minutos a la mezcla. Luego se aplican aspersiones periódicas de gas de hidrógeno a la mezcla y se mantiene a una presión constante con un balón relleno de hidrógeno. La reacción es seguida durante 3 horas por CL/EM. Luego se filtra la reacción a través de Celite. Se elimina el disolvente del filtrado hasta dejar 57,1 mg (24,8%) del producto deseado crudo como un aceite. El producto es mantenido sin purificación. ^{1}H-RMN: \delta 7,08 (t, J = 9 Hz, 4H); 6,83 (d,
J = 8,4 Hz, 2H); 6,75 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 6,65 (s, 2H); 6,40-6,60 (m, 1H); 4,72 (s, 1H); 4,42-4,68 (m, 2H); 3,79 (s, 3H);
3,60-3,80 (m amplio, 3H); 2,60-2,65 (m, 2H); 2,20-2,30 (m, 1H); 2,00-2,05 (m, 1H). CL/EM: 2,888 min, 376 (M+).

Ejemplo 9

6-Metoxi-2-(4-metoxifenil)-1-[4-(2-pirrolidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

23

Se carga un matraz de fondo redondo de 50 ml con el compuesto de la preparación 7 (57,1 mg; 0,1521 mmoles), clorhidrato de 1-(2-cloroetil)-pirrolidina (85,2 mg; 0,5009 mmoles), tetrahidrofurano anhidro (20 ml) y base de fosfazina-p4 t-butilo 1,0 M. Se coloca esta mezcla de reacción bajo nitrógeno y se calienta a reflujo durante 4 horas. Entonces se deja agitando la reacción a temperatura ambiente durante toda la noche (14 horas). Se calienta la reacción a reflujo durante otras dos horas. Se somete la mezcla de reacción a una preadsorción sobre sílice y se separa el producto mediante cromatografía por desorción súbita (diclorometano/hexanos al 5-10%) hasta dejar un aceite contaminado con alguna impureza desconocida. Se mantiene el material sin purificación adicional. ^{1}H-RMN parcial: \delta 7,07-7,10 (m, 4H); 6,81-6,84 (m, 4H); 6,61-6,62 (m, 2H); 6,45-6,48 (m, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,72 (3H). CL/EM: 2,462 min,
473 (M+).

Ejemplo 10

2-(4-Hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

24

En un matraz de fondo redondo de 50 ml, se disuelve el compuesto del ejemplo 9 en diclorometano (15 ml) y se añade tribromuro de boro 1,0 M (0,80 ml; 0,80 mmoles). Tras media hora, se añade más tribromuro de boro (0,30 ml; 0,30 mmoles). La reacción es seguida por CL/EM hasta que no queda presente nada de material inicial. Entonces se detiene la reacción con metanol. La mezcla es luego preadsorbida sobre gel de sílice y separada mediante cromatografía por desorción súbita (metanol/diclorometano al 10-20%) dos veces. Finalmente, se realiza una tercera purificación mediante cromatografía por desorción súbita (acetona, metanol/diclorometano al 20%). El producto es luego purificado mediante cromatografía en fase inversa hasta proporcionar 16,2 mg como la sal de TFA. ^{1}H-RMN parcial [CD_{3}OD (\delta 3,30)]: \delta 7,16 (d, J = 8 Hz, 2H); 6,97-7,01 (m, 2H); 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,70 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 6,38-6,49 (m, 3); 4,48-4,52 (m, 2H); 4,29 (t, J = 4,8 Hz, 2H); 4,02-4,07 (m, 1H); 3,65-3,77 (m, 2H); 3,63 (t, J = 4,8 Hz, 2H); 3,15-3,23 (m, 2H); 2,57-2,62 (m, 2H); 2,00-2,10 (m, 3H); 2,10-2,30 (m, 3H). CL/EM: 2,084 min,
445 (M+).

Preparación 8

6-Metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-quinolina

25

Se añade cloroformiato de metilo (77 uL; 1,0 mmoles) a una solución de 6-metoxiquinolin-N-óxido (175 mg; 1,0 mmoles) en THF (3 ml) a temperatura ambiente. Se enfría la mezcla hasta 0ºC y se añade gota a gota bromuro de 3-metoxifenilmagnesio (2 ml de 1 M; 2 mmoles). Se agita la mezcla durante 16 h mientras que se calienta hasta la temperatura ambiente. Se elimina el disolvente al vacío, y se divide el residuo resultante entre agua y CH_{2}Cl_{2}. Se lava la fase orgánica con agua y agua salada, se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra. Una cromatografía por desorción súbita (EtOAc/hexanos al 0-20%) produce 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-quinolina (123 mg; producción
del 46%).

^{1}H-RMN: \delta 3,90 (s, 3H); 3,92 (s, 3H); 6,97 (aprox. d, 1H); 7,08 (s, 2H); 7,38 (m, 2H); 7,65 (d, 1H); 7,71 (aprox. s, 1H); 7,81 (d, 1H); 8,10 (m, 2H).

Preparación 9

6-Metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

26

Se añade NiCl_{2}.6H_{2}O (86 mg; 0,36 mmoles) a una solución agitada de 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-quinolina (96 mg; 0,36 mmoles) en EtOH (3 ml) a 0ºC. Se agita la mezcla de reacción durante 30 min antes de la adición de NaBH_{4} (55 mg; 1,45 mmoles). Se agita la mezcla durante 16 h mientras que se calienta hasta la temperatura ambiente. Entonces se añade una porción adicional de NaBH_{4} (50 mg) y se continúa agitando durante 3 h. Se elimina el disolvente al vacío, y se divide el residuo resultante entre agua y CH_{2}Cl_{2}. Se lava la fase orgánica con agua y agua salada, se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra. Una cromatografía por desorción súbita (EtOAc/hexanos al 0-50%) produce 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina.

^{1}H-RMN: \delta 1,95 (m, 1H); 2,08 (m, 1H); 2,71 (m, 1H); 2,90 (m, 2H); 3,7 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 4,34 (dd, 1H); 6,50 (d, 2H); 6,71 (m, 2H); 6,81 (dd, 1H); 6,95 (m, 2H); 7,25 (m, 1H).

Ejemplo 11

6-Metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina

\vskip1.000000\baselineskip

27

\vskip1.000000\baselineskip

Se añade clorhidrato de 1-[2-(4-clorometil-fenoxi)-etil]piperidina a una solución de 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (20 mg; 0,074 mmoles) en THF (1,5 ml) a temperatura ambiente (publicación de solicitud internacional vía PCT nº: WO 99/19293) (43 mg; 0,149 mmoles) seguido por base P1 de fosfaceno (150 mg). Entonces se calienta la mezcla hasta 60ºC durante 18 h. Se carga entonces el producto crudo sobre una columna de gel de sílice y se eluye con EtOAc/hexanos al 0-100% hasta producir 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina, que está contaminada con un subproducto no identificado.

^{1}H-RMN parcial: \delta 1,44 (br. m); 1,63 (br. m, 4H); 2,51 (br. m); 3,72 (s, 3H); 3,75 (s, 3H); 4,08 (m); 4,58 (m); 6,50 (d); 6,63 (m); 6,73 (s); 6,78 (d); 6,84 (d); 6,88 (d); 7,10 (d); 7,2-7,3 (m).

Ejemplo 12

2-(3-Hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol

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28

\vskip1.000000\baselineskip

Se añade AlCl_{3} (25 mg) seguido por propanotiol (50 uL) a una solución de 6-metoxi-2-(3-metoxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolina (18 mg; 0,037 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} a temperatura ambiente. Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se detiene con MeOH. Se carga entonces el producto sobre una columna de gel se sílice y se eluye con MeOH/EtOAc al 0-30% hasta producir 33 mg de producto. El producto es entonces purificado en mayor profundidad mediante CLAR prep. en fase inversa hasta proporcionar la sal de trifluoroacetato de 2-(3-hidroxi-fenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)-bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol (9,8 mg; producción del 46%).

^{1}H-RMN (CD_{3}OD): \delta 1,50 (br. m, 1H); 1,80 (br. m, 3H); 1,92 (br. m, 2H); 2,08 (br. m, 1H); 2,22 (br. m, 1H); 2,58 (br. s, 2H); 3,03 (br. t, 2H); 3,5-3,6 (m, 4H); 4,08 (br. d, 1H); 4,25 (m, 2H); 4,50 (br. m, 2H); 6,40 (s, 2H); 4,7 (s, 1H); 6,65 (m, 3H); 6,90 (d, 2H); 7,09 (t, 1H); 7,16 (d, 2H). CL/EM: 2,17 min, m/z = 459 (M+H)^{+}.

Procedimiento de análisis biológico Procedimiento de preparación general Ensayo de unión a receptores de estrógeno (RE)

El ensayo de unión en competición es ejecutado en un tampón que contiene Hepes 50 mM, pH 7,5, EDTA 1,5 mM; NaCl 150 mM; glicerol al 10%, 1 mg/ml de ovalbúmina y DTT 5 mM, usando 0,025 \muCi por pozo de ^{3}H-Estradiol (NEN #NET517 a 118 Ci/mmol, 1 mCi/ml) 10 ng/pozo de receptor de estrógeno alfa o de estrógeno beta (Pan Vera). Los compuestos competentes son añadidos a 10 concentraciones diferentes. Se determina una unión inespecífica en presencia de 1 \muM de 17-B Estradiol. La reacción de unión (140 \mul) es incubada durante 4 horas a temperatura ambiente, luego se añaden 70 \mul de tampón de DCC frío a cada reacción (el tampón de DCC contiene por cada 50 ml de tampón de ensayo, 0,75 g de carbón vegetal (Sigma) y 0,25 g de dextrano (Pharmacia)). Las placas son mezcladas durante 8 minutos en un agitador orbital a 4ºC. Entonces las placas son centrifugadas a 3.000 rpm a 4ºC durante 10 minutos. Se transfiere un alícuota de 120 \mul de la mezcla a otra placa de fondo plano blanca de 96 pozos (Costar) y se añaden 175 \mul de fluido de centelleo "Hisafe 3" de Wallac Optiphase a cada pozo. Se sellan y se agitan vigorosamente las placas en un agitador orbital. Tras una incubación de 2,5 horas, se leen las placas en un contador Wallac Microbeta. Los datos son usados para calcular una CI_{50} y el % de inhibición a 10 \muM. Se determina la K_{d} para el ^{3}H-Estradiol mediante unión por saturación a receptores de estrógeno alfa y de estrógeno beta. Los valores de CI_{50} para los compuestos son convertidos en K_{i} usando la ecuación de Cheng-Prusoff y la K_{d} determinada mediante el ensayo de unión por saturación.

Ensayo de la fosfatasa alcalina de Ishikawa

Se mantienen células de tumor endometrial humano de Ishikawa en MEM (medio esencial mínimo, con sales de Earle y L-Glutamina, Gibco BRL, Gaithersburg, MD), complementado con suero bovino fetal al 10% (FBS, Fetal Bovine Serum) (V/V), (Gibco BRL). Un día antes del ensayo, el medio de cultivo es cambiado a un medio de ensayo, DMEM/F-12 (3:1) (Medio de Eagle modificado de Dulbecco: Mezcla F-12 de nutrientes, libre de rojo de fenol, Gibco BRL) complementado con suero bovino fetal despojado de carbón vegetal revestido de dextrano al 5% (DCC-FBS, Dextran-Coated Charcoal-stripped Fetal Bovine Serum) (Hyclone, Logen, UT), L-Glutamina (2 Mm), piruvato de sodio en MEM (1 mM),; HEPES (N-[2-hidroxietil]piperazina-N'-[2-ácido etanosulfónico] 2 Mm) todo de Gibco BRL). Tras una noche en incubación, se aclaran las células de Ishikawa con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (x 1) (D-PBS) sin Ca^{+2} y Mg^{+2} (Gibco BRL) y se tripsiniza en una incubación de 3 minutos con Tripsina/EDTA al 0,25%, libre de rojo de fenol (Gibco BRL). Se resuspenden las células en medio de ensayo y se ajustan hasta 250.000 células/ml. Se añaden aproximadamente 25.000 células en un medio de 100 ul a la placa de microcultivo de 96 pocos con fondo plano (Costar 3596) y se incuba a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5% durante 24 horas. Al día siguiente, se preparan diluciones seriadas de los compuestos en medio de ensayo (a 6 veces la concentración final del ensayo). Se ejecuta el ensayo de un modo dual, en modo agonista y antagonista. Para el modo agonista, las placas reciben 25 \mul/pozo de medio de ensayo seguidos por 25 \mul/pozo de compuestos diluidos (a 6 veces las concentraciones finales). Para el modo antagonista, las placas reciben 25 \mul/pozo de E_{2} 6 nM (\beta-Estradiol, Sigma, St. Louis, MO) seguidos por 25 \mul/pozo de compuestos diluidos (a 6 veces las concentraciones finales). Tras 48 horas más de incubación a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5%, se aspira el medio de los pozos y se añaden 100 \mul de medio de ensayo fresco a cada microcultivo. Se prepararan diluciones en serie de los compuestos y se añaden a las células como se describe anteriormente. Tras una incubación de 72 horas más a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5%, se detiene el ensayo eliminando el medio y aclarando las placas dos veces con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (x 1) (D-PBS) (Gibco BRL). Se secan las placas durante 5 min y se congelan a -70ºC durante al menos 1 hora. Entonces se sacan las placas del congelador y se dejan descongelar a la temperatura ambiente. Se añaden 100 \mul de PNP 1-Step® (Pierce Chemical Company, Rockford, IL) a cada pozo. Tras una incubación de 20 minutos, se leen las placas en un espectrofotómetro a 405 nm. Se ajustan los datos a una interpolación lineal para derivar los valores de la CE_{50} (para el modo agonista) o de la CI_{50} (para el modo antagonista). Para el modo agonista, se calcula el % de eficacia para cada compuesto frente a la respuesta al Tamoxifén. Para el modo antagonista, se calcula el % de eficacia de cada compuesto frente a E2 (1 nM) solo.

Ensayo de proliferación de células MCF-7

Se mantienen células de adenocarcinoma de pecho MCF-7 (ATCC HTB 22) en MEM (medio esencial mínimo, libre de rojo de fenol, Gibco BRL) complementado con suero bovino fetal al 10% (FBS) (V/V), L-glutamina (2 mM), piruvato de sodio (1 mM), HEPES ((N-[[2-hidroxietil]piperazina-N'-[2-ácido etanosulfónico] 10 Mm}, aminoácidos no esenciales (0,1 mM) y penicilina-estreptomicina (x 1). Siete días antes del ensayo, se cambian las células MCF-7 a un medio de ensayo que es igual que el medio de mantenimiento a excepción de que está complementado con medio de ensayo de suero bovino fetal despojado de carbón vegetal revestido de dextrano al 10% (DCC-FBS) en lugar del FBS al 10%. Se separan las células MCF-7 de los matraces usando EDTA-tripsina x 10 (libre de rojo de fenol, Gibco BRL) y se diluyen en HBSS libre de Ca++/Mg++ (libre de rojo de fenol) x 1. Se ajustan las células hasta 80.000 células/ml en medio de ensayo. Se añaden aproximadamente 8.000 células (100 \mul) en cada pozo en placas de centelleo Cytostar T de 96 pozos (Amersham) y se incuban a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5% durante 24 horas para permitir la adherencia de las células y el equilibrio tras la transferencia. Se preparan diluciones en serie de los fármacos en medio de ensayo a 4 veces la concentración final deseada. Se transfiere un alícuota de 50 \mul de las diluciones de los fármacos (a 4 veces la concentración de ensayo final) a pozos por duplicado seguido por 50 \mul de medio de ensayo para el modo agonista o 50 \mul de 40 pM de E_{2} para el modo antagonista hasta un volumen final de 200 \mul. Para cada una de las placas agonistas, se determina un nivel basal (medio) y un nivel estimulado máximo (con 1 \muM de E_{2}). Para cada una de las placas antagonistas, se determina un nivel basal (medio) y un control de E_{2} (10 pM) solo. Tras otras 48 horas a 37ºC en una incubadora humidificada con CO_{2} al 5%, se añaden 20 \mul de medio de ensayo que contenía 0,01 \muCi de ^{14}C-timidina (52 mCi/mmol; 50 \muCi/ul, Amersham) a cada pozo. Se incuban las placas durante toda la noche en la misma incubadora y luego se cuentan en un contador Wallac Microbeta. Se hace la media de los datos para calcular una CI_{50} y un % de inhibición a 1 \muM para el modo antagonista. Para el modo agonista, se calcula una CE_{50} y el porcentaje de estimulación máxima de E_{2} y la concentración de estimulación máxima.

Compuesto	K_{i}	K_{i}	CI_{50}	CE_{50}	% de eficacia	CI_{50}	% de
(Nº de Ej.)	(ER\alpha)	(ER\beta)	(MCF7)	Ishikawa	agonista		eficacia
1	A*	A	B^{t}	22,9	18		18
2	A	A	B		-5		28
3ª	87,8	1155,1	989	239,21	29		17
4	28,9	376,3	618	84,77	44	667	47
7	0,4	4,4	477	219,09	28		17
8	1,3	4,1	532	28,38	31	716	63
10	1,1	4,9	68	33,5	18	553	40
12ª	0,6	5,9	385	142,41	29	892	31
*A significa una unión <50% a 10 microMolar
^{t}B \hskip0,09cm significa una unión <50% a 1 microMolar
^{a}\hskip0,23cm significa sal de ácido trifluoroacético (TFA)

Procedimiento general de preparación de las ratas

Se adquieren ratas Sprague Dawley hembras de setenta y cinco días de vida (a no ser que se indique algo distinto) en Charles River Laboratories (Portage, MI) (rango de peso de 200 a 225 g). Los animales son bien ovariectomizados bilateralmente (OVX) o expuestos a un procedimiento quirúrgico de Sham en los laboratorios Charles River, para ser luego enviados tras una semana. Al llegar, son metidos en jaulas metálicas colgantes en grupos de 3 ó 4 por jaula y tienen un acceso ad libitum a los alimentos (contenido de calcio de aproximadamente del 0,5%) y a agua durante una semana. La temperatura de la habitación se mantiene a 22,2 \pm 1,7ºC con una humedad relativa mínima del 40%. El fotoperíodo de la habitación fue de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Colección de tejidos del régimen posológico: Tras un período de aclimatación de una semana (por lo tanto, dos semanas después de la OVX) se inicia una dosificación diaria con un compuesto de fórmula (I) ("F-I"). Se administra oralmente 17\alpha-etinil estradiol o F-I, a no ser que se indique otra cosa, como una suspensión en carboximetilcelulosa al 1% o disuelto en ciclodextrina al 20%. Los animales son dosificados diariamente durante 4 días. Tras el régimen posológico, los animales fueron pesado y anestesiados con una mezcla de ketamina:xilazina (2:1; v:v), recogiéndose una muestra sanguínea mediante una puntura cardiaca. Entonces se sacrifican los animales por asfixia con CO_{2}, se les extirpa el útero mediante una incisión de media línea y se determina el peso del útero en húmedo. El 17\alpha-etinil estradiol es adquirido en Sigma Chemical Co., St Louis, MO.

Enfermedad cardiovascular/Hiperlipidemia

Se dejan coagular la muestras de sangre anteriores a temperatura ambiente durante 2 horas, y se obtiene suero tras una centrifugación de 10 minutos a 3.000 rpm. Se determina el colesterol del suero usando un análisis del colesterol de alto rendimiento de Boehringer Mannheim Diagnostics. Brevemente, se oxida el colesterol a colest-4-en-3-ona y peróxido de hidrógeno. Luego se hace reaccionar el peróxido de hidrógeno con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidasa para producir un tinte de imina de p-quinona, que es leído espectrofotométricamente a 500 nm. Entonces se calcula la concentración de colesterol frente a una curva estándar. El análisis completo se automatiza usando una estación de trabajo automática de BioMek.

Ensayo de la peroxidasa eosinófila uterina (EPO)

Se mantienen los úteros anteriores a 4ºC hasta el momento del análisis enzimático. Entonces los úteros son homogenizados en 50 volúmenes de tampón de Tris 50 mM (pH: 8,0) que contenía Triton X-100 al 0,005%. Al realizarse la adición de la peroxidasa de hidrógeno al 0,01% y O-fenilenodiamina 10 mM (concentraciones finales) en tampón de Tris, se monitoriza un aumento de la absorbacia durante un minuto a 450 nm. La presencia de eosonófilos en el útero es una indicación de actividad estrogénica de un compuesto. La velocidad máxima de un intervalo de 15 segundos es determinada sobre una porción lineal inicial de la curva reactiva.

Procedimiento de análisis de la inhibición de pérdida ósea (osteoporosis)

Tras el procedimiento de preparación general anteriormente descrito, las ratas son tratadas diariamente durante treinta y cinco días (6 ratas por grupo de tratamiento) y sacrificadas mediante asfixia con dióxido de carbono al trigésimo sexto día. El período de tiempo de treinta y cinco días es suficiente para permitir la reducción máxima de la densidad ósea, medida como se describe en la presente memoria. En el momento del sacrificio, se extirpan los úteros, se diseccionan libres de tejido extraño y se expulsan los contenidos de fluido antes de determinar el peso en húmedo con el fin de confirmar una deficiencia estrogénica asociada con la ovariectomía completa. El peso uterino es reducido rutinariamente aproximadamente al 75% como respuesta a la ovariectomía. Entonces se colocan los úteros en formalina tamponada neutra al 10% para permitir el análisis histológico posterior.

Se extirpan los fémures derechos, se generan mediante rayos X digitalizados y se analizan mediante un programa de análisis de imágenes (imagen NIH) en las metáfisis distales. También se escanea mediante tomografía programada cuantitativa el aspecto proximal de las tibias de estos animales. Según los procedimientos anteriores, se administra oralmente F-I o etinil estradiol (EE2) en hidroxipropil \beta-ciclodextrina al 20% para analizar los animales. El F-I también es útil en combinación con estrógeno o progestina.

Procedimientos de análisis de la fibrosis uterina

Análisis 1: se administra F-I a entre 3 y 20 mujeres que tienen fibrosis uterina. La cantidad de compuesto administrada es de 0,1 a 1.000 mg/día, y el período de administración es de 3 meses. Las mujeres son observadas durante el período de administración, y hasta 3 meses después de haber interrumpido la administración, en cuanto a los efectos sobre la fibrosis uterina.

Análisis 2: se usa el mismo procedimiento que en el análisis 1, a excepción de que el período de administración es de 6 meses.

Análisis 3: se usa el mismo procedimiento que en el análisis 1, a excepción de que el período de administración es de 1 año.

Análisis 4: se usa una estimulación prolongada con estrógeno para inducir a la aparición de leiomiomas en cerdos de guinea hembra sexualmente maduros. Los animales son dosificados con estradiol de 3-5 veces a la semana por inyección durante 2-4 meses y hasta que aparecen los tumores. Se administra un tratamiento constituido por F-I o vehículo diariamente durante 3-16 semanas y luego los animales son sacrificados, y los úteros, cosechados y analizados en cuanto a la regresión tumoral.

Análisis 5: Se implanta tejido procedente de leiomiomas humanos en la cavidad peritoneal y/o el miometrio uterino de ratones desnudos hembra castrados sexualmente maduros. Se suministra estrógeno exógeno para inducir al crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células tumorales cosechadas son cultivadas in vitro antes de la implantación. Se suministra un tratamiento constituido por F-I o vehículo mediante un lavado gástrico diariamente durante 3-16 horas y se extirpan los implantes para medir el crecimiento de la regresión. En el momento del sacrificio, se cosechan los úteros para evaluar el estado del órgano.

Análisis 6: se cosecha y se mantiene in vitro tejido procedente de tumores fibroides uterinos humanos como cultivos primarios no transformados. Se presionan especimenes quirúrgicos a través de una malla o un tamiz estéril, o alternativamente, se separan del tejido circundante para producir una suspensión monocelular. Las células son mantenidas en medio que contiene suero y antibiótico al 10%. Se determinan las tasas de crecimiento en presencia y en ausencia de estrógeno. Se analizan las células en cuanto a su capacidad para producir componente complementario C3 y su respuesta a los factores de crecimiento y a la hormona de crecimiento. Se evalúan los cultivos in vitro en cuanto a su respuesta proliferativa tras el tratamiento con progestinas, GnRH, F-I y vehículo. Se miden los niveles de receptores de hormona esteroide semanalmente para determinar si se mantienen in vitro características celulares importantes. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

Análisis 7: se mide la capacidad de F-I para inhibir la proliferación estimulada por estrógeno de líneas celulares ELT derivadas de leiomiomas, sustancialmente como se describe en Fuchs-Young, et al., "Inhibition of Estrogen-Stimulated Growth of Uterine Leiomyomas by Selective Estrogen Receptor Modulators", Mol. Car., 17(3): 151-159 (1996), cuyas enseñanzas están incorporadas en la presente memoria por referencia.

Procedimientos de análisis de la endometriosis

Análisis 1: se usan como animales de prueba de doce a trece ratas hembra de cepa CD adultas. Se dividen en tres grupos de igual número. Se monitoriza el ciclo estrual de todos los animales. El día del proestro, se realiza una cirugía en cada animal. Se extirpa la trompa izquierda uterina de todas las hembras de cada grupo, se secciona en pequeños cuadrados y se suturan los cuadrados sin apretar en diversos sitios adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Además, se extirpan los ovarios de las hembras del grupo 2. Al día siguiente de la cirugía, los animales de los grupos 1 y 2 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 14 días, mientras que los animales del grupo 3 recibían inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de F-I por kilogramo de peso corporal durante un período de la misma duración. Tras 14 días de tratamiento, se sacrificaron todas las hembras y se extirparon los explantes endometriales, las glándulas suprarrenales, el resto del útero y los ovarios, según procedía, y se prepararon para un examen histológico. Los ovarios y las glándulas suprarrenales fueron pesados.

Análisis 2: se usan como animales de prueba de doce a trece ratas hembra de cepa CD adultas. Se dividen en dos grupos iguales. Se monitoriza el ciclo estrual de todos los animales. El día del proestro, se realiza una cirugía en cada animal. Se extirpa la trompa izquierda uterina de todas las hembras de cada grupo, se secciona en pequeños cuadrados, y los cuadrados son suturados sin apretar en diversos sitios adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Aproximadamente 50 días después de la cirugía, los animales asignados en el grupo 1 reciben inyecciones intraperitoneales de agua durante 21 días, mientras que los animales del grupo 2 reciben inyecciones intraperitoneales de 1,0 mg de F-I por kilogramo de peso corporal durante un período de la misma duración. Tras 21 días de tratamiento, se sacrificaron todas las hembras y se extirparon y pesaron los explantes endometriales y las glándulas suprarrenales. Los explantes son medidos cono una indicación del crecimiento. Se monitorizan los ciclos estruales.

Análisis 3: se usan autógrafos de tejido endometrial para inducir a una endometriosis en ratas y/o conejos. Los animales hembra en su madurez reproductiva sufren una ooforectomía bilateral, y se suministra estrógeno de forma exógena proporcionando así un nivel específico y constante de hormona. Se realiza un autotransplante de tejido endometrial en el peritoneo de 5-150 animales y se suministra estrógeno para inducir al crecimiento del tejido explantado. Se suministra un tratamiento constituido por un compuesto de la presente invención mediante lavado gástrico diariamente durante 3-16 semanas, y se extirpan los implantes para medir el crecimiento o la regresión. En el momento del sacrificio, se cosecha la trompa intacta del útero para evaluar el estado del endometrio.

Análisis 4: se implanta tejido procedente de lesiones endometriales humanas en el peritoneo de ratones desnudos hembra castrados sexualmente maduros. Se suministra estrógeno de forma exógena para inducir al crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células endometriales cosechadas son cultivadas in vitro antes de la implantación. Se suministra un tratamiento constituido por F-I mediante lavado gástrico diariamente durante 3-16 semanas, y se extirpan los implantes para medir el crecimiento o la regresión. En el momento del sacrificio, se cosechan los úteros para evaluar el estado del endometrio intacto.

Análisis 5: Se cosecha tejido de lesiones endometriales humanas y se mantiene in vitro como cultivos primarios no transformados. Se presionan especimenes quirúrgicos a través de una malla o un tamiz estéril o, alternativamente, se separan del tejido circundante para producir una suspensión monocelular. Las células son mantenidas en medio que contiene suero y antibiótico al 10%. Se determinan las tasas de crecimiento en presencia y en ausencia de estrógeno. Se analizan las células en cuanto a su capacidad para producir componente complementario C3 y a su respuesta a los factores de crecimiento y la hormona de crecimiento. Se evalúan los cultivos in vitro en cuanto a su respuesta proliferativa tras el tratamiento con progestinas, GnRH, F-I y vehículo. Se miden los niveles de los receptores de hormona esteroide semanalmente para determinar si se mantienen in vitro características celulares importantes. Se utiliza tejido de 5-25 pacientes.

Uso del compuesto de fórmula (I) en conjunción con estrógeno

Las mujeres peri- o post-menopáusicas habitualmente se someten a la terapia de reemplazo hormonal (TRH) para combatir las consecuencias negativas asociadas con la caída del estrógeno endógeno circulante, p. ej., para tratar los sofocos. Sin embargo, la TRH ha estado asociada con riesgos cada vez mayores de ciertos cánceres incluyendo el cáncer de útero y de pecho. Se puede emplear F-I en conjunción con la TRH para inhibir estos
riesgos.

Prevención del cáncer de pecho

Esta invención también se refiere a la administración de F-I a un receptor que está en riesgo de desarrollar cáncer de pecho de novo. El término "de novo", como se usa en la presente memoria, significa la falta de transformación o metamorfosis de las células normales del pecho a células cancerígenas o malignas en primer lugar. Tal transformación puede ocurrir por etapas en las mismas células o en las células hijas mediante un proceso evolucionista o puede ocurrir en un único hecho pivotal. Este proceso de novo está en contraste con la metástasis, la colonización o la propagación de células malignas o ya transformadas desde el sitio tumoral primario hacia nuevas localizaciones.

Una persona que no está en particular riesgo de desarrollar un cáncer de pecho es una persona que puede desarrollar el cáncer de pecho de novo, no tiene pruebas ni sospechas del potencial de la enfermedad por encima de un riesgo normal y nunca le ha sido diagnosticada esta enfermedad. El mayor factor de riesgo que contribuye al desarrollo del carcinoma de pecho es la historia personal de padecimiento de la enfermedad o una aparición anterior de la enfermedad, incluso si está en remisión sin ninguna prueba de su presencia. Otro factor de riesgo es la historia familiar de la enfermedad.

La inducción de tumores mamarios en ratas mediante la administración de N-nitroso-N-metilurea cancerígena es un modelo animal ampliamente aceptado para el estudio del cáncer de pecho, y se ha descubierto que es adecuado para analizar el efecto de agentes quimiopreventivos.

En dos estudios separados, ratas Sprague-Dawley hembra de 55 días de vida reciben una dosis intravenosa (estudio 1) o intraperitoneal (estudio 2) de 50 mg de N-nitroso-N-metilurea por kilogramo de peso corporal una semana antes de recibir ad libitum una dieta en la que se mezclan cantidades variables de F-I, base de (Z)-2-[4-(1,2-difenil-1-butenil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamina (base de tamoxifén) o control.

En el estudio 1, las dosis alimenticias de 60 mg/kg de dieta y 20 mg/kg de dieta se traducen en dosis aproximadamente comparables de 3 y 1 mg/kg de peso corporal para los animales de análisis.

En el estudio 2, las dosis alimenticias de 20, 6, 2 y 0,6 mg/kg de dieta se traducen aproximadamente en dosis comparables de 1; 0,3; 0,1 y 0,03 mg/kg de peso corporal para los animales de análisis.

Las ratas son observadas en cuanto a las pruebas de toxicidad, y son pesadas y palpadas para evaluar la formación tumoral una vez a la semana. Los animales son sacrificados tras trece semanas (estudio 1) o dieciocho semanas (estudio 2), y los tumores son confirmados y pesados mediante autopsia.

Procedimientos terapéuticos de uso y dosificaciones

La presente invención también proporciona un procedimiento para inhibir una enfermedad asociada con la privación de estrógeno y un procedimiento para inhibir una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica anómala al estrógeno endógeno que comprende el procedimiento anteriormente mencionado usando compuestos de fórmula I y que, opcionalmente, comprende la administración a un paciente de una cantidad eficaz de estrógeno o progestina. Estos tratamientos son particularmente útiles para tratar la osteoporosis y descender el colesterol del suero sanguíneo, porque el paciente recibirá los beneficios de cada agente farmacéutico mientras que los compuestos de la presente invención inhiben los efectos secundarios no deseado del estrógeno y la progestina. La actividad de estos tratamientos en combinación en cualquiera de los análisis postmenopáusicos, infra, indica que los tratamientos en combinación son útiles para aliviar los síntomas de los síntomas postmenopáusicos en la mujer.

Hay diversas formas de estrógeno y progestina comercialmente disponibles. Los agentes basados en estrógeno incluyen, por ejemplo, estrógeno de etinilo (0,01-0,03 mg/día), mestranol (0,05-0,15 mg/día) y hormonas estrogénicas conjugadas tales como Premarin® (Wyeth-Ayerst; 0,3-2,5 mg/día). Los agentes basados en progestina incluyen, por ejemplo, medroxiprogesterona tal como Provera® (Upjohn; 2,5-10 mg/día), noretilnodrel (1,0-10,0 mg/día) y nonetindrona (0,5-2,0 mg/día). Un compuesto basado en estrógeno preferido es el Premarin®, siendo el noretilnodrel y la noretindrona agentes basados en progestina preferidos.

El procedimiento de administración de cada agente basado en estrógeno o basado en progestina concuerda con el que es conocido en la técnica. Para la mayoría de los procedimientos de la presente invención, los compuestos de fórmula I son administrados de forma continua, de 1 a 3 veces al día. Sin embargo, la terapia cíclica puede ser especialmente útil en el tratamiento de la endometriosis o puede ser usada plenamente durante los ataques de dolor de la enfermedad. En el caso de la restenosis, la terapia puede ser limitada a intervalos cortos (1-6 meses) tras procedimientos médicos tales como la angioplastia.

Como se usa en la presente memoria, el término "paciente" se refiere a un animal de sangre caliente o un mamífero que está en necesidad de inhibir una enfermedad asociada con la privación de estrógeno o en necesidad de inhibir una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica anómala al estrógeno endógeno. Se entiende que los cerdos de guinea, los perros, los gatos, las ratas, los ratones, los hámsteres y los primates, incluyendo a los humanos, son ejemplos de pacientes que pertenecen al alcance del significado del término. Los pacientes preferidos incluyen los humanos. Los pacientes más preferidos incluyen los humanos femeninos postmenopáusicos.

Como se usa en la presente memoria, el término "inhibir" se define para que incluya su significado generalmente aceptado que incluye prevenir, prohibir, contener y ralentizar, detener o invertir la progresión, o la gravedad, y aguantar las características existentes de control y/o tratamiento. El presente procedimiento incluye un tratamiento médico terapéutico y/o profiláctico, según proceda.

El término "privación de estrógeno" pretende implicar la condición en la que está ausente el nivel óptimo de estrógeno. Este nivel varía de un tejido a otro dependiendo de la función del tejido. Por lo tanto, en algunos casos, la privación de estrógeno puede ser la total ausencia de estrógeno, mientras que en otros casos, la privación puede suponer niveles de estrógeno que son demasiado bajos para una función adecuada de los tejidos. En los seres humanos femeninos, las dos causas más comunes de privación estrogénica son la menopausia y la ovariectomía, aunque hay otras condiciones que la pueden causar. La privación estrogénica puede conducir a condiciones que incluyen la osteoporosis y a efectos cardiovasculares tales como la hiperlipidemia, la proliferación de células del músculo liso aórtico (restenosis), la disminución de la producción de óxido nítrico (hipertensión) y la disminución en la producción de enzima PAI-1 (inhibidor del activador del plasminógeno tipo 1), i.e., trombosis.

También se puede conseguir la reducción o la mejoría de otras patologías asociadas con la menopausia tales como la incontinencia urinaria, la sequedad vaginal, el aumento de la incidencia de la enfermedad auto-inmune y la pérdida de tono en la piel, mediante la administración de compuestos de fórmula I.

Además de su utilidad en el tratamiento de condiciones asociadas con la privación de estrógeno tras la menopausia, los compuestos de la presente invención también son útiles en el tratamiento de estados de enfermedad asociados con una respuesta inapropiada al estrógeno endógeno en tejidos tanto antes como después de la menopausia.

Un ejemplo de una condición patológica asociada con las respuestas celulares anormales al estrógeno endógeno en tejidos es el cáncer de pecho estrógeno-dependiente. Las células de los tumores de pecho estrógeno-dependientes proliferan en presencia de estrógeno, y el tratamiento de esta enfermedad ha consistido en detener toda la acción del estrógeno sobre estas células.

Otra patología estrógeno-dependiente es la fibrosis uterina (enfermedad fibroide uterina). Esencialmente, la fibrosis uterina es una condición en la que hay una deposición de tejido fibroide sobre la pared del útero. Esta condición es una causa de la dismenorrea y la infertilidad en la mujer. Se sabe poco de la causa exacta de esta condición, pero las pruebas sugieren que es una respuesta inapropiada del tejido fibroide al estrógeno. El tratamiento más común de la fibrosis uterina implica la realización de procedimientos quirúrgicos tanto costosos como, algunas veces, que suponen una fuente de complicaciones tales como la formación de adhesiones abdominales e infecciones.

Todavía otra enfermedad perteneciente a esta categoría es la endometriosis, una condición de dismenorrea severa, que se acompaña de fuerte dolor, hemorragias en las masas endometriales o en la cavidad peritoneal, que a menudo conduce a la infertilidad. La causa de los síntomas de esta condición parecen ser crecimientos endometriales ectópicos localizados en tejidos inapropiados que responden inadecuadamente al control hormonal.

Como se usa en la presente memoria, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de compuesto de la presente invención que es capaz de calmar los síntomas de las diversas condiciones patológicas descritas en la presente memoria. La dosis específica de un compuesto administrado según esta invención será, por supuesto, determinada por las circunstancias particulares que rodeen el caso, incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la vía de administración, el estado del paciente y la condición patológica que esté siendo tratada. Una dosis diaria típica para uso humano contendrá un nivel de dosificación no tóxico de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 600 mg/día de un compuesto de la presente invención. Las dosis diarias preferidas serán generalmente de aproximadamente 15 mg a aproximadamente 300 mg/día. El intervalo posológico más preferido puede constituir 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg y 100 mg, administrados de una vez a tres veces al día.

Los compuestos de esta invención pueden ser administrados por una variedad de vías incluyendo la vía oral, rectal, percutánea, subcutánea, intravenosa, intramuscular e intranasal. Estos compuestos son preferiblemente formulados antes de la administración, siendo su elección decidida por el médico encargado. Por lo tanto, otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que contiene opcionalmente una cantidad eficaz de estrógeno o progestina, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los ingredientes activos totales en tales formulaciones comprenden del 0,1% al 99,9% en peso de formulación. El término "farmacéuticamente aceptable" quiere significar que el vehículo, diluyente, excipiente y sal debe ser compatible con el resto de ingredientes de la formulación, y no ser perjudiciales para el receptor de los mismos.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser preparadas mediante procedimientos conocidos en la técnica, usando ingredientes conocidos y fácilmente disponibles. Por ejemplo, los compuestos de fórmula I, con o sin compuesto de estrógeno o progestina, pueden ser formulados como excipientes, diluyentes o vehículos comunes, y en forma de comprimidos, cápsulas, suspensiones, polvos y similares. Los ejemplos de excipientes, diluyentes y vehículos que son adecuados para tales formulaciones incluyen los siguientes: rellenos y extendedores tales como almidón, azúcares, manitol y derivados silícicos; agentes aglutinantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina y polivinil-pirrolidona; agentes humectantes tales como glicerol; agentes desintegrantes tales como carbonato de calcio y bicarbonato de sodio; agentes para retardar la disolución tales como la parafina; aceleradores de la resorción tales como los compuestos de amonio cuaternario; agentes tensioactivos tales como alcohol cetílico, monostearato de glicerol; vehículos adsorbentes tales como el caolín y la bentonita; y lubricantes tales como el talco, el estearato de calcio y magnesio y polietilenglicoles sólidos.

Los compuestos también pueden estar formulados como elixires o soluciones para una administración oral conveniente, o como soluciones apropiadas para una administración parenteral, por ejemplo, por vía intramuscular, subcutánea o intravenosa. Adicionalmente, los compuestos son muy apropiados para la formulación como formas de dosificación con liberación sostenida y similares. Las formulaciones pueden estar constituidas de manera que liberen el ingrediente activo sólo o, preferiblemente, en una determinada localización fisiológica, posiblemente, durante un período de tiempo. Las cubiertas, las envolturas y las matrices protectoras pueden estar hechas, por ejemplo, de sustancias poliméricas o ceras.

Los compuestos de fórmula I, solos o en combinación con un agente farmacéutico de la presente invención, serán generalmente administrados en una formulación conveniente.

Claims

1. Un compuesto de fórmula

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en la que:

R^{1} es -H, -OH, O(alquilo(C_{1-4})), -OCOC_{6}H_{5}, -OCO(alquilo(C_{1-6})) o OSO_{2}(alquilo(C_{2-6}));

n es 1, 2 ó 3;

X es -C(O)- o -CH_{2}-; e

Y es -O-, -S-, -NH-, NMe- o -CH_{2}-;

o un enantiómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -CH_{2}- o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es -C(O)- o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un compuesto según la reivindicación 2 ó 3, en el que Y es -O-.

5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que n es 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Un compuesto según la reivindicación 5, en el que R^{1} es -OH o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. Un compuesto según la reivindicación 6, en el que R^{4} es 1-piperidinilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. Un compuesto según la reivindicación 4 ó 6, en el que R^{2} o R^{3} es -OH o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Un compuesto según la reivindicación 7, en el que R^{2} y R^{3} son -H o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado del grupo constituido por:

2-fenil-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol;

2-(3-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol;

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

11. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es 2-(4-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

12. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es 2-(3-hidroxifenil)-1-[4-(2-piperidin-1-il-etoxi)bencil]-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-ol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según las reivindicaciones 1 a 12, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y, opcionalmente, una cantidad eficaz de estrógeno o progestina en combinación con una sal, un diluyente o un excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. Un compuesto de cualquier reivindicación 1 a 12 para su uso como un producto farmacéutico.

15. El uso de un compuesto de cualquier reivindicación 1 a 12 en la preparación de un medicamento para inhibir una enfermedad asociada con la privación de estrógeno.

16. El uso según la reivindicación 15, en el que el síntoma de la privación de estrógeno es la pérdida ósea.

17. El uso según la reivindicación 16, en el que dicha pérdida ósea es osteoporosis.

18. El uso según la reivindicación 15, en el que dicha enfermedad asociada con la privación de estrógeno es una enfermedad cardiovascular.

19. El uso de un compuesto de cualquier reivindicación 1 a 12 en la preparación de un medicamento para inhibir una enfermedad asociada con una respuesta fisiológica anómala al estrógeno endógeno.

20. El uso de la reivindicación 19, en el que dicha enfermedad es un cáncer estrógeno-dependiente.

21. El uso de la reivindicación 20, en el que dicho cáncer es cáncer de pecho.

22. El uso de la reivindicación 19, en el que dicha enfermedad es la endometriosis.

23. El uso de la reivindicación 19, en el que dicha enfermedad es la fibrosis uterina.