ES2292130T3

ES2292130T3 - Pirido(2,3-d)pirimidin-7-onas pirrolil-sustituidas y derivados de las mismas como agentes terapeuticos.

Info

Publication number: ES2292130T3
Application number: ES05733676T
Authority: ES
Inventors: Michelle M. Pfizer Global R&D BRUENDL; Rocco D. Pfizer Global R&D Gogliotti; A.P. Pfizer Global R&D Goodman; Gregory Pfizer Global R&D Reichard
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 2004-05-04
Filing date: 2005-04-22
Publication date: 2008-03-01
Anticipated expiration: 2025-04-22
Also published as: DE602005002562T2; JP2007536370A; BRPI0510560A; EP1749004A1; ATE373659T1; EP1749004B1; CA2563669A1; WO2005105801A1; MXPA06012829A; DE602005002562D1; US20080255162A1

Abstract

Un compuesto de Fórmula I: (Ver fórmula) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que: R 4 se selecciona entre el grupo constituido por: metilo, etilo, CF3, CH2F, CHF2 y CH2OH; R 5 es H o metilo; J está ausente o es un alquileno C1-C6; R 8 se selecciona entre el grupo constituido por: un alquilo C1-C6, un cicloalquilo C3-C8, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros y un fenilo; R 6 se selecciona entre el grupo constituido por: H, halo, un fenilo y un alquilo C1-C3; R 2 es... (Ver fórmula)

Description

Pirido[2,3-d]pirimidin-7-onas pirrolil-sustituidas y derivados de las mismas como agentes terapéuticos.

Antecedentes de la invención

Las fosfoinosítido-3-quinasas (PI3K) son una familia de quinasas lipídicas que fosforilan fosfoinositoles en el grupo 3'-OH para generar PI-3-P (fosfatidilinositol-3-fosfato), PI-3,4-P_{2} y PI-3,4,5-P_{3}. Una clase de PI3K se estimulan mediante factores de crecimiento. Una clase separada de PI3K se activa mediante receptores acoplados a proteínas G e incluyen PI3K\gamma. Las PI3K estimuladas por factores de crecimiento (por ejemplo, PI3K\alpha), se han implicado en proliferación celular y cáncer. Se ha demostrado que PI3K\gamma está implicada en cascadas de señalización. Por ejemplo, PI3K\gamma se activa en respuesta a ligandos tales como C_{5}a, fMLP, ADP, y IL-8. Además, PI3K\gamma se ha implicado en enfermedades inmunes (Hirsch y col. Science 2000; 287:1049-1053). Los macrófagos que tienen anulada PI3K\gamma muestran una respuesta quimiotáctica reducida y una capacidad reducida para luchar contra la inflamación (Hirsch y col., 2000, supra). Además, PI3K\gamma se ha implicado también en enfermedades trombolíticas (por ejemplo, tromboembolia, enfermedades isquémicas, ataques al corazón, y apoplejía) (Hirsch y col. FASEB J. 2000; 15(11): 2019-2021; y Hirsch y col. FASEB J., 9 de julio de 2001; 10.1096/fj,00-0810fje (citado en el presente documento como Hirsch y col., 2001).

Se buscan inhibidores de PI3K para el tratamiento de enfermedades humanas (véanse por ejemplo, los documentos WO 01/81346; WO 01/53266; WO 01/83456; y WO 2004/007491). Hay una necesidad de compuestos adicionales que puedan inhibir PI3K para usar como agentes farmacéuticos.

Sumario de la invención

En un aspecto, la presente invención proporciona piridopirimidinas de fórmula I:

1

o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas;

R^{4} se selecciona entre el grupo constituido por:

metilo, etilo, CF_{3}, CH_{2}F, CHF_{2}, y CH_{2}OH;

R^{5} es H o metilo;

J está ausente o es un alquileno C_{1}-C_{6};

R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un alquilo C_{1}-C_{6}, un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros, y un fenilo;

en la que R^{6} se selecciona entre el grupo constituido por: H, halo, un fenilo, y un alquilo C_{1}-C_{3};

en la que R^{2} es:

2

o

3

R^{10} es un alquilo C_{1}-C_{6} o H;

R^{12} es un alquilo C_{1}-C_{6}, o un alquileno C_{1}-C_{3}-R^{13},

R^{13} es un piridinilo o un fenilo; y

R^{14} es un alquilo C_{1}-C_{6} o H.

En ciertas realizaciones de Fórmula I, R^{4} es un metilo, R^{5} es H, y R^{2} es:

4

- un compuesto de fórmula II:

5

En ciertas realizaciones de Fórmula II, R^{12} es un alquileno C_{1}-C_{3}-R^{13}. En ciertas realizaciones de Fórmula II, R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}. Un ejemplo de un compuesto de fórmula II donde R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6} es: ácido 4-(4,8-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico. En otras realizaciones de Fórmula II, R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros, y fenilo. Los ejemplos de un compuesto de fórmula II donde R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros, y fenilo incluyen, aunque sin limitación:

éster etílico del ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-piridin-3-ilmetil-1H-pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-
pirrol-2-carboxílico; y

éster etílico del ácido 1-bencil-4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1H-pirrol-2-carboxílico.

En otras realizaciones de Fórmula II, R^{12} es un alquilo C_{1}-C_{6} y R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}, un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros, o un fenilo. Ejemplos de tales compuestos incluyen, aunque sin limitación:

éster metílico del ácido 4-(6-cloro-8-etil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-[6-bromo-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-
pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-(6-cloro-8-etil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-(8-ciclohexil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-[6-fluoro-8-(4-metoxi-ciclohexil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-[6-fluoro-4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-ilmetil)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-[8-(2-ciclopropil-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-(8-ciclobutil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-[6-bromo-8-(4-metoxi-bencil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-
pirrol-2-carboxílico;

éster metílico del ácido 4-(8-ciclopropil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico;

ácido 4-[6-fluoro-8-(4-metoxi-ciclohexil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-
1H-pirrol-2-carboxílico; y

ácido 4-[8-ciclohexil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico.

En ciertas realizaciones de Fórmula I, R^{6} es metilo, y R^{4} es un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y R^{2} es:

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6

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- un compuesto de fórmula III:

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En ciertas realizaciones de Fórmula III, R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}, un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros, o un fenilo.

En ciertas realizaciones de Fórmulas I, II, o III, R^{6} es halo. En otras realizaciones de Fórmulas I, II, o III, R^{6} es H. En otras realizaciones más de Fórmulas I, II, o III, R^{6} es fenilo. En todavía otras realizaciones más de Fórmulas I, II, o III, R^{6} es un alquilo C_{1}-C_{3}.

En otro aspecto, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de una cualquiera de las Fórmulas I-III y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, estas composiciones son útiles en el tratamiento de una enfermedad mediada por PI3K. Los compuestos de la invención se pueden combinar también en una composición farmacéutica que también comprenden compuestos que son útiles para el tratamiento de cáncer, una enfermedad trombolítica, enfermedad cardiaca, apoplejía, una enfermedad inflamatoria tal como artritis reumatoide, u otra enfermedad mediada por PI3K.

En ciertas realizaciones, la enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por: artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis soriática, soriasis, enfermedades inflamatorias, y enfermedades autoinmunes. En otras realizaciones, la enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por: enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, apoplejía, infarto de miocardio, angina de pecho inestable, tromboembolia, embolia pulmonar, enfermedades trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusiones trombóticas periféricas, y enfermedad arterial coronaria. En otras realizaciones más, la enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por: cáncer, cáncer de colon, glioblastoma, carcinoma endometrial, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma pulmonar de células escamosas, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer ovárico, cáncer cervical, y leucemia. En todavía otra realización, la enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por: diabetes de tipo II. En otras realizaciones más, la enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por: enfermedades respiratorias, bronquitis, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica. En ciertas realizaciones, el sujeto es un ser humano.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno en mamíferos, en el que el trastorno se selecciona de cáncer, cáncer de mama, glioblastoma, carcinoma endometrial, carcinoma hepatocelular, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma pulmonar de células escamosas, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de cuello de útero, leucemia, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide en mamíferos, así como el uso de un compuesto de Fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedad pulmonar obstructiva crónica en mamíferos.

Definiciones

Una "enfermedad mediada por PI3K" se caracteriza por la participación de una o más PI3K o una fosfatasa PI3P, (por ejemplo, PTEN (homólogo de tensina y fosfatasa eliminado del cromosoma Diez), etc.) en el comienzo, manifestación de uno o más síntomas o marcadores de enfermedades, gravedad, o progresión de una enfermedad. Enfermedades mediadas por PI3K incluyen, aunque sin limitación: artritis reumatoide, espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis soriática, soriasis, enfermedades inflamatorias, fibrosis pulmonar, enfermedades autoinmunes, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, apoplejía, infarto de miocardio, angina de pecho inestable, tromboembolia, embolia pulmonar, enfermedades trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusiones trombóticas periféricas, enfermedad arterial coronaria, cáncer, cáncer de mama, glioblastoma, carcinoma endometrial, carcinoma hepatocelular, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma pulmonar de células escamosas, glioma, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de cuello de útero, leucemia, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos, diabetes de tipo II, enfermedades respiratorias, bronquitis, asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica.

Una PI3K es una enzima que es capaz de fosforilar el grupo 3'-OH de un fosfoinositol para generar PI3P. Las PI3K incluyen, aunque sin limitación, PI3K\alpha, PI3K\beta, PI3K\gamma, y PI3K\delta. Una PI3K comprende típicamente al menos una subunidad catalítica (por ejemplo, p110\gamma), y puede comprender adicionalmente una subunidad reguladora (por ejemplo, p101, etc.).

El término "grupo alquilo" o "alquilo" incluye radicales de cadenas de carbono ramificadas y lineales. El término "alquileno" se refiere a un dirradical de un alcano no sustituido o sustituido. Por ejemplo, un "alquilo C_{1-6}" es un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo C_{1}-C_{6} de cadena lineal incluyen, aunque sin limitación, metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, y n-hexilo. Los ejemplos de grupos alquilo de cadena ramificada incluyen, aunque sin limitación, isopropilo, terc-butilo, isobutilo, etc. Ejemplos de grupos alquileno incluyen, aunque sin limitación, -CH_{2}-, -CH_{2}-CH_{2}-, -CH_{2}-CH(CH_{3})-CH_{2}-, y -(CH_{2})_{1-3}. Los grupos alquileno pueden estar sustituidos con grupos como se expone más adelante para alquilo.

El término alquilo incluye tanto "alquilos no sustituidos" como "alquilos sustituidos," el último de los cuales se refiere a restos alquilo que tienen sustituyentes que reemplazan un hidrógeno en uno o más carbonos del armazón de hidrocarburos. Tales sustituyentes se seleccionan independientemente del grupo constituido por: halo, I, Br, Cl, F, -OH, -COOH, trifluorometilo, -NH_{2}, -OCF_{3}, y O-alquilo C_{1}-C_{3}.

Los grupos alquilo así sustituidos típicos son 2,3-dicloropentilo, 3-hidroxi-5-carboxihexilo, 2-aminopropilo, pentaclorobutilo, trifluorometilo, metoxietilo, 3-hidroxipentilo, 4-clorobutilo, 1,2-dimetil-propilo, y pentafluoroetilo.

"Halo" incluye fluoro, cloro, bromo, y yodo.

El término "cicloalquilo C_{3}-C_{8}" se refiere a un grupo cicloalquilo que contiene de 3 a 8 carbonos. Así, el término "cicloalquilo C_{3}-C_{8}" abarca grupos cicloalquilo monocíclicos que contienen de 3 a 8 carbonos y grupos cicloalquilo bicíclicos que contienen 7 u 8 carbonos. Ejemplos de "cicloalquilos C_{3}-C_{8}" incluyen, aunque sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, y biciclo[2.2.1]heptilo; el grupo cicloalquilo puede contener opcionalmente 1 ó 2 enlaces dobles (es decir, un cicloalquilenilo) incluyendo, pero no limitado a, ciclopentenilo, ciclohexenilo, y cicloheptenilo. Un "cicloalquilo C_{3}-C_{8}" puede estar sustituido con 1 ó 2 grupos independientemente seleccionados de -OH, alquilo C_{1}-C_{4} (por ejemplo, metilo) y -O-alquilo C_{1}-C_{4} (por ejemplo, metoxi). Ejemplos de grupos cicloalquilo sustituidos incluyen, aunque sin limitación, metil-ciclopropilo, dimetil-ciclohexilo, 2-metil-ciclohexilo, 3-metil-ciclohexilo, 3,5-dimetil-ciclohexilo, y 4-metil-ciclohexilo.

Un "heterocicloalquilo de 5 miembros" es un anillo de cicloalquilo monocíclico, de 5 miembros estable que tiene de 2 a 4 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por: 1 O; 1 S; 1 N; 2 N; 1 S y 1 N; 1 S, y 2 N; 1 O y 1 N; y 1 O y 2 N, en los que cuando están presentes dos átomos de O o un átomo de O y un átomo de S en un anillo, los dos átomos de O o un átomo de O y un átomo de S no están unidos directamente el uno al otro, respectivamente. Los ejemplos ilustrativos de heterocicloalquilos de 5 miembros estables incluyen tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, dihidrotienilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo, imidazolinilo, isoxazolidinilo, pirrolidinilo, 2-pirrolinilo, y 3-pirrolinilo.

Un "heterocicloalquilo de 6 miembros" es un anillo cicloalquilo monocíclico, de 6 miembros estable que tiene de 3 a 5 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por: 1 O; 2 O; 1 S; 2 S; 1 N; 2 N; 3 N; 1 S, 1 O, y 1 N; 1 S y 1 N; 1 S y 2 N; 1 S y 1 O; 1 S y 2 O; 1 O y 1 N; y 1 O y 2 N, en los que cuando dos átomos de O o un átomo de O y un átomo de S están presentes, los dos átomos de O o un átomo de O y un átomo de S no están unidos directamente el uno al otro, respectivamente. Ejemplos ilustrativos de heterocicloalquilos de 6 miembros estables incluyen tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, 1,4-ditianilo, hexahidropirimidina, morfolinilo, piperazinilo, piperidinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, tetrahidrotiopiranilo, 1,1-dioxo-hexahidro-1\lambda^{6}-tiopiranilo, 1,1-dioxo-1\lambda^{6}-tiomorfolinilo, tiomorfolinilo, tioxanilo, y 1,3,5-tritianilo.

Se incluyen dentro del término "heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros" anillos de 5 miembros que tienen un doble enlace carbono-carbono o un doble enlace carbono-nitrógeno en el anillo (por ejemplo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, etc.) y anillos de 6 miembros que tienen un doble enlace carbono-carbono o un doble enlace carbono-nitrógeno en el anillo (por ejemplo, dihidro-2H-piranilo, 1,2,3,4-tetrahidropiridina, 3,4-dihidro-2H-[1,4]oxazina, etc.).

"Heterocicloalquilos de 5 ó 6 miembros" pueden estar no sustituidos o sustituidos con grupos tales como aquellos expuestos anteriormente para cicloalquilos C_{3}-C_{8}, donde sea posible, y con un grupo oxo o tio-oxo en un átomo de anillo de carbono.

A menos que se indique otra cosa, los heterocicloalquilos precedentes pueden estar unidos a través de C o de N cuando sea posible y lo cual da como resultado la creación de una estructura estable. Por ejemplo, piperidinilo puede ser piperidin-1-ilo (unido a través del N) o piperidin-4-ilo (unido a través de C).

El término "fenilo" se refiere a grupos fenilo no sustituidos y sustituidos. Un grupo fenilo puede estar sustituido con 4 sustituyentes halo, o con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo constituido por: halo, I, Br, Cl, F, -CH_{2}OH, -OH, -COOH, trifluorometilo, -NH_{2}, -C(O)NH_{2}, -OCF_{3}, -O-alquilo C_{1}-C_{3}, alquilo C_{1}-C_{3}, -O-alquilo C_{1}-C_{3}, -OCF_{3}, -O-fenilo, -O-alquilen C_{1}-C_{3}-fenilo, y un cicloalquilo C_{5}-C_{6}, en el que el -O-alquilo C_{1}-C_{3}, alquilo C_{1}-C_{3}, -O-alquilo C_{1}-C_{3}, -O-fenilo, y el cicloalquilo C_{5}-C_{6} pueden estar opcionalmente sustituidos con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados de halo, bencilo, y -OH.

Los grupos fenilo sustituidos típicos incluyen, aunque sin limitación, 3-benciloxi-fenilo, 3-clorofenilo, 2,6-dibromofenilo, 2,4,6-tribromofenilo, 2,6-diclorofenilo, 4-trifluorometilfenilo, 3-metil-fenilo, 4-metil-fenilo, 3,5-dimetil-fenilo, 3,4,5-trimetoxi-fenilo, 3,5-dimetoxi-fenilo, 3,4-dimetoxi-fenilo, 3-metoxi-fenilo, 4-metoxi-fenilo, 3,5-difluoro-fenilo, 4-cloro-fenilo, 3-trifluorometil-fenilo, 3,5-dicloro-fenilo, 2-metoxi-5-metil-fenilo, 2-fluoro-5-metil-fenilo, 4-cloro-2-trifluorometil-fenilo, y similares.

Un "heteroarilo de 5 miembros" es un radical de anillo aromático, monocíclico, de 5 miembros estable que tiene de 1 a 4 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionado a partir del grupo constituido por: 1 O; 1 S; 1 N; 2 N; 3 N; 4 N; 1 S y 1 N; 1 S y 2 N; 1 O y 1 N; y 1 O y 2 N. Ejemplos ilustrativos de heteroarilo de 5 miembros estable incluyen, aunque sin limitación, furanilo, 2-furanilo, 3-furanilo, imidazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, piridinilo, 2-, 3-, o 4-piridinilo, pirimidinilo, 2-, 4-, o 5-pirimidinilo, pirazolilo, pirrolilo, 2- o 3-pirrolilo, pirazinilo, piridazinilo, 3- o 4-piridazinilo, 2-pirazinilo, tienilo, 2-tienilo, 3-tienilo, tetrazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, triazinilo y triazolilo.

Un "heteroarilo de 6 miembros" es un radical de anillo aromático, monocíclico, de 6 miembros estable que tiene de 3 a 5 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por: 1 N; 2 N; y 3 N. Ejemplos ilustrativos de heteroarilo de 6 miembros estables incluyen piridin-2-ilo, piridin-4-ilo, pirimidin-2-ilo, piridazin-4-ilo, y pirazin-2-ilo.

Un heteroarilo puede incluir también sistemas de anillo sustituidos en carbonos de anillo con uno o más grupos funcionales -OH (los cuales pueden tautomerizar para dar un grupo C=O de anillo) y/o sustituidos en un átomo de azufre de anillo con 1 ó 2 átomos de oxígeno para dar grupos S=O, o grupos SO_{2}, respectivamente.

Los átomos de carbono del anillo en un heteroarilo de 5 ó 6 miembros pueden estar sustituidos opcionalmente donde sea posible con uno o dos grupos seleccionados de NH_{2}, hidroxi, alquilo C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-SO_{2}-NH-, alquil C_{1}-C_{6}-(C=O)-, alquil C_{1}-C_{6}-NH-(C=O)-, y alquil C_{1}-C_{6}-SO_{2}-.

Los átomos de nitrógeno del anillo en heteroarilo de 5 a 6 miembros pueden estar opcionalmente sustituidos donde sea posible con un H_{2}N(C=O)-, o con un alquilo C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-(C=O)-, alquil C_{1}-C_{6}-NH-(C=O)-, [alquil C_{1}-C_{6}]_{2}
-N-(C=O)-, o alquil C_{1}-C_{6}-O(C=O)-.

Algunos de los compuestos en la presente invención pueden existir como estereoisómeros, incluyendo enantiómeros, diastereómeros, e isómeros geométricos. Los isómeros geométricos incluyen compuestos de la presente invención que tienen grupos alquenilo, los cuales pueden existir como conformaciones entgegen o zusammen, caso en el cual todas las formas geométricas de los mismos, tanto entgegen como zusammen, cis y trans, y mezclas de los mismos, están dentro del alcance de la presente invención. Algunos compuestos de la presente invención tienen grupos cicloalquilo, los cuales pueden estar sustituidos en más de un átomo de carbono, caso en el cual todas las formas geométricas de los mismos, tanto cis como trans, y mezclas de los mismos, están dentro del alcance de la presente invención. Todas estas formas, incluyendo (R), (S), epímeros, diastereómeros, cis, trans, syn, anti, (E), (Z), solvatos (que incluyen hidratos), tautómeros, y mezclas de los mismos, están contempladas en los compuestos de la presente invención.

Descripción detallada de la invención I. Introducción

La presente invención se refiere a piridopirimidinas de Fórmulas I-III, en las que R^{2}, R^{4}, R^{5}, R^{6}, R^{8} y J tienen cualquiera de los valores definidos para los mismos en la memoria descriptiva, y sales farmacéuticamente aceptables de las mismas, que son útiles como agentes en el tratamiento de enfermedades y afecciones, que incluyen enfermedades inflamatorias, enfermedades cardiovasculares, y cánceres. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de Fórmulas I-III.

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II. Preparación de compuestos

Los compuestos de la presente invención (por ejemplo, compuestos de Fórmula I) se pueden preparar aplicando metodología de síntesis conocida en la técnica y metodología de síntesis destacada en los esquemas expuestos a continuación.

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Esquema 1a

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8

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En el Esquema 1a, se hace reaccionar la tiourea en diclorometano con 2 (por ejemplo, 1,1-(dimetoxi-etil)-dimetil-amina) para producir la tiourea 3 (por ejemplo, (1-dimetilamino-etilideno)-tiourea). 3 se alquila después con yodometano (MeI) en THF (tetrahidrofurano) para proporcionar la 2-metil-isotiourea 4 (por ejemplo, 1-(1-dimetilamino-etilideno)-2-metil-isotiourea). La isotiourea 4 en un disolvente de hidrocarburo clorado (por ejemplo, diclorometano) se trata con éster etílico de ácido clorocarbonil-acético, seguido por una amina terciaria tal como trietilamina para proporcionar la pirimidina 5 (por ejemplo, éster etílico del ácido 4-hidroxi-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico).

5 en diclorometano se hace reaccionar con cloruro de oxalilo y una cantidad catalítica de DMF (dimetilformamida) para proporcionar 6 (por ejemplo, éster etílico del ácido 4-cloro-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico). El grupo cloro de 6 se desplaza después con una amina (NH_{2}-J-R^{8}) en la presencia de trietilamina en un disolvente tal como diclorometano para proporcionar 7 (por ejemplo, éster etílico del ácido 4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-carboxílico). Se puede usar una amplia diversidad de aminas (NH_{2}-J-R^{8}) que incluyen, aunque sin limitación: cicloheptilamina, ciclopentilamina, ciclohexilamina, metilamina, y 2-ciclopropil-etilamina.

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Esquema 1b

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9

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En el Esquema 1b, 8 (por ejemplo, éster etílico del ácido 4,4,4-trifluoro-3-oxo-butírico) se trató con 2-metil-isotiourea en un disolvente tal como diclorometano para proporcionar 9 (por ejemplo, 2-metilsulfanil-6-trifluorometil-pirimidin-4-ol). 9 en un disolvente tal como diclorometano se cloró después con cloruro de oxalilo y una cantidad catalítica de DMF para proporcionar 10 (por ejemplo, 4-cloro-2-metilsulfanil-6-trifluorometil-pirimidina).

El grupo de cloro de 10 se desplazó después con una amina, NH_{2}-J-R^{8}, para generar 11 (por ejemplo, metil-(2-metilsulfanil-6-trifluorometil-pirimidin-4-il)-amina). 11 se bromó después con bromo en ácido acético para proporcionar 12 (por ejemplo, (5-bromo-2-metilsulfanil-6-trifluorometil-pirimidin-4-il)-metil-amina). El grupo bromo de 12 se puede convertir después al éster 7a (por ejemplo, éster metílico del ácido 4-metilamino-2-metilsulfanil-6-trifluorometil-pirimidin-5-carboxílico) usando un catalizador de paladio con CO_{2}(g), en metanol.

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Esquema 2

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10

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En Esquema 2, 7 (o 7a) en THF se puede reducir con un hidruro tal como hidruro de litio aluminio (LAH) para proporcionar el alcohol 14 (por ejemplo, (4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-il)-metanol). 14 se puede oxidar después en cloroformo usando un dióxido metálico tal como dióxido de manganeso (MnO_{2}) para proporcionar 16 (por ejemplo, 4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-carbaldehído).

16 se hace reaccionar después bien con un fosforano estabilizado, un éster de fosfonato (por ejemplo, (Et-O)_{2}-P(O)-CH(R^{6})-COOEt, donde R^{6} es Br, Cl, F, o H) en presencia de una base, o un reactivo de Wittig adecuado alternativo o un reactivo de Horner-Emmons-Wadsworth adecuado alternativo para proporcionar el éster insaturado correspondiente 18 (por ejemplo, éster etílico del ácido 3-(4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-il)-acrílico). Por ejemplo, la transformación de 16 a 18 se puede llevar a cabo en un disolvente tal como THF con éster etílico del ácido etoxifosfinoil-acético tratado con hidruro de sodio o con 2-fluoro-2-fosfonoacetato de trietilo tratado con hidruro de sodio.

El tratamiento de 18 en DMF con una amina terciaria tal como 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) o 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), con una cantidad catalítica de terc-butóxido de potasio lleva a cabo el cierre del anillo para proporcionar 20 (por ejemplo, 8-cicloheptil-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona).

El grupo metiltio de una 2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 8 (por ejemplo, 4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona) en diclorometano o cloroformo se oxida después al derivado metilsulfinilo correspondiente usando una oxaziridina adecuada (por ejemplo, oxaziridina de Davis ((1S)-(+)-(10-alcanforsulfonil)oxaziridina); o 3-fenil-2-(fenilsulfonil)-1,2-oxaziridina, etc.), dimetildioxirano, o mCPBA (ácido 3-cloroperoxibenzoico) en un disolvente tal como cloroformo o diclorometano para proporcionar 22 (por ejemplo, 8-cicloheptil-4-metil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona). El grupo metilsulfinilo de 22 se desplaza después con un amino-pirrol 23 (R^{2}-NH_{2}) (por ejemplo, éster etílico del ácido 4-amino-1-bencil-1H-pirrol-2-carboxílico, etc.) en acetonitrilo para producir la 8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona 24 (por ejemplo, éster etílico del ácido 1-bencil-4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1H-pirrol-2-carboxílico). Se puede usar una diversidad de compuestos de R^{2}-NH_{2}, que incluyen pero no se limitan: a éster etílico del ácido 4-amino-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico, éster etílico del ácido 4-amino-1-piridin-3-ilmetil-1H-pirrol-2-carboxílico, éster etílico del ácido 4-amino-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico, éster metílico del ácido 4-amino-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico, y éster etílico del ácido 4-amino-1-isopropil-1H-pirrol-2-carboxílico. Se puede requerir una etapa de desprotección subsiguiente y/o etapa de saponificación subsiguiente dependiendo de la naturaleza de los sustituyentes tales como R^{2} o R^{8}. Por ejemplo, se puede hidrolizar un grupo éster al ácido correspondiente con una base adecuada (por ejemplo, NaOH, LiOH). El Esquema 3 representa un ejemplo de un esquema de reacción de desprotección.

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Esquema 3

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11

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En ciertas realizaciones, los grupos protectores en restos tales como R^{2} o R^{8} se usan durante la síntesis de compuestos de la presente invención. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que hay amplia diversidad de grupos protectores que se pueden usar en síntesis orgánicas (véase por ejemplo, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª ed., (John Wiley & Sons, Inc., 1991)). Por ejemplo, en el Esquema 3, una piridopirimidina 25 en DMF se hace reaccionar con resina BEMP (2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetil-perhidro-1,3,2-diazafosforina) mantenida en poliestireno y un compuesto Br-J-R^{8}-TBDMS (por ejemplo, (3-bromo-propoxi)-terc-butil-dimetil-silano) para producir 26. Se conocen en la técnica grupos protectores para hidroxilos tales como el grupo protector de tipo sililéter grupo t-butil-dimetilsililo (TBDMS) éter (véase por ejemplo, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª ed., (John Wiley & Sons, Inc., 1991)). El grupo sililéter de 26 se puede eliminar después mediante hidrólisis ácida tal como una resina unida a polímero de fluoruro de hidrógeno-piridina (35-40% HF) para proporcionar 27.

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Esquema 4

12

En el Esquema 4, el grupo metilsulfanilo 30 se puede oxidar a un grupo metilsulfinilo usando un oxirano tal como dimetildioxirano, en un disolvente tal como cloruro de metileno, o una oxaziridina y después se hace reaccionar con una amina R^{2}-NH_{2} en acetonitrilo o con DCM (4-(dicianometileno)-2-metil-6-(4-dimetilaminoestiril)-4H-pirano), y PS-morfolina, (poliestireno-morfolina), en un disolvente tal como DMF para proporcionar 32. 32 se puede hacer reaccionar después con R^{8}-J-I e hidruro de sodio en DMF o con PS-BEMP (poliestireno-2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetil-perhidro-1,3,2-diazafosforina) y R^{8}-J-X (donde X es I, Br, o Cl) en DMF para proporcionar 24. 32 (o 30) se puede también hacer reaccionar bajo condiciones de Mitsunobu (por ejemplo, con DEAD (azodicarboxilato de dietilo)) y PPh_{3} (trifenilfosfina) en un disolvente tal como tetrahidrofurano (THF) con R^{8}-OH para proporcionar 24, o 34, respectivamente.

Esquema 5

13

En el Esquema 5, se broma 40 con N-bromosuccinimida (NBS) en DMF para producir 41. Alternativamente, 40 se puede clorar con N-clorosuccinimida (NCS) para proporcionar el análogo de cloro de 41. 41 se trata después con dimetildioxirano como en el Esquema 2 para proporcionar 42, el cual se hace reaccionar a su vez con 23 como en el Esquema 2 para generar 43. 43 se puede hacer reaccionar después como en el Esquema 4 con R^{8}-J-I o R^{8}-J-X para proporcionar 44 (véase el Esquema 6).

Esquema 6

14

En el Esquema 6, el grupo bromo de 44 se puede reducir en un disolvente tal como una mezcla de THF:metanol (1:1), con trietilamina y Pd(OH)_{2} al 10%/C y bajo gas hidrógeno (por ejemplo, 344738 pascales (50 p.s.i.)) para proporcionar 50.

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Esquema 7

15

El aldehído 16 se puede hacer reaccionar con un compuesto organometálico tal como bromuro de metilmagnesio para proporcionar el alcohol alquilado 51. Esta función de alcohol se puede oxidar después a la cetona 52 con un reactivo oxidante tal como dióxido de manganeso. 52 se puede convertir adicionalmente a compuestos de fórmula 53 de acuerdo con la misma metodología que en el esquema 2.

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Esquema 8

16

Cuando un compuesto de fórmula 7 contiene un grupo R^{4} con enlaces C-H tal como metilo, 7b, el enlace C-H es ácido y se puede abstraer con un fuerte reactivo alquillitio tal como n-butillitio en THF, a temperaturas frías (por ejemplo, -78ºC) y alquilarse con un yoduro de alquilo tal como yoduro de metilo para dar 7c. 7c se puede usar después como en el Esquema 2.

Esquema 9

17

En el Esquema 9, 54 se puede acoplar a un compuesto de ácido bórico R^{6}-B(OH)_{2} (por ejemplo, ácido fenilbórico), o un reactivo de estaño orgánico tal como trimetil-estaño R^{6}, donde R^{6} es un grupo fenilo, para generar 24b (véase generalmente, Miyaura y Suzuki, (1995) Chem. Rev. 95: 2457-2483). Estas reacciones se pueden llevar a cabo usando un catalizador de paladio basado en fosfina tal como tetraquis(trifenilfosfina)paladio (Pd(Ph_{3})_{4}) en un disolvente adecuado (por ejemplo, bicarbonato sódico acuoso, metanol, y tolueno (1:1:1)). Los ácidos bóricos están comercialmente disponibles a partir de vendedores tales como Sigma-Aldrich Corp., San Luis, MO, EE.UU. Alternativamente, 20, donde R^{6} es Br, puede acoplarse a un derivado de ácido bórico seguido por oxidación del grupo metilsulfanilo a un grupo metilsulfinilo como en el Esquema 2, seguido de desplazamiento del grupo metilsulfinilo para proporcionar 24b.

Esquema 10

18

En el Esquema 10, la posición C-6 de 56 (por ejemplo, éster metílico del ácido 4-[6-bromo-8-(4-metoxi-bencil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico) se puede alquilar con un reactivo de estaño orgánico tal como tetrametil-estaño o tetraetil-estaño, en la presencia de yoduro de cobre y PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} en un disolvente tal como DMF para generar 24c (por ejemplo, éster metílico del ácido 4-[8-(4-metoxi-bencil)-4,6-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico).

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III. Evaluación de compuestos

Los compuestos de la presente invención (por ejemplo, compuestos de Fórmulas I-III y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos) se pueden someter a ensayos para evaluar su capacidad para inhibir una PI3K. Ejemplos de estos ensayos se presentan más adelante e incluyen ensayos in vitro e in vivo de actividad PI3K.

En ciertas realizaciones de la presente invención son compuestos que inhiben selectivamente una o más PI3K según se comparan con una o más enzimas incluyendo, pero no limitadas a, una proteínquinasa dependiente de nucleótido cíclico, PDGF, una tirosina quinasa, una MAP quinasa, una MAP quinasa quinasa, una MEKK, una proteínquinasa dependiente de ciclina (por ejemplo, CDK2/ciclina A). En otras realizaciones de la invención están compuestos que inhiben selectivamente una PI3K según se compara con otras PI3K. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, compuestos de la presente invención muestran la capacidad para inhibir selectivamente PI3K\gamma según se compara con PI3K\alpha o PI3K\beta. Un compuesto inhibe selectivamente una primera enzima según se compara con una segunda enzima, cuando la CI_{50} del compuesto para la primera enzima es menor que la CI_{50} del compuesto para el segundo compuesto. La CI_{50} se puede medir, por ejemplo, en un ensayo PI3K in vitro.

En las realizaciones preferidas actualmente, los compuestos de la presente invención se pueden valorar en su capacidad para inhibir la actividad de PI3K en un ensayo in vitro o un ensayo in vivo (véase más adelante).

Los ensayos de PI3K se llevan a cabo en la presencia o ausencia de un compuesto inhibidor de PI3K, y la cantidad de actividad enzimática se compara para una determinación de actividad inhibidora del compuesto inhibidor de PI3K.

A las muestras que no contienen un compuesto inhibidor de PI3K se les asigna un valor de actividad de PI3K relativo de 100. La inhibición de actividad de PI3K se logra cuando la actividad de PI3K en presencia de un compuesto inhibidor de PI3K es menor que la de la muestra control (es decir, sin compuesto inhibidor). La CI_{50} de un compuesto es la concentración de compuesto que presenta 50% de la actividad de la muestra control. En ciertas realizaciones, los compuestos de la presente invención tienen una CI_{50} de menos de aproximadamente 100 \muM. En otras realizaciones, los compuestos de la presente invención tienen una CI_{50} de aproximadamente 1 \muM o menos. En otras realizaciones más, los compuestos de la presente invención tienen una CI_{50} de aproximadamente 200 nM o menos.

Se han descrito ensayos de PI3K\gamma en la técnica (véase por ejemplo, Leopoldt y col. J. Biol. Chem., 1998; 273: 7024-7029). Típicamente, una muestra que contiene un complejo de proteína p101 y proteína p110\gamma se combina con proteínas G\beta y G\gamma (por ejemplo, subunidades \beta_{1}/\gamma_{2} de proteína G). Se añade después a la mezcla ATP marcado radiactivamente (por ejemplo, \gamma-^{32}P-ATP). Los sustratos lipídicos se forman creando micelas lipídicas que contienen PIP_{2}. Las reacciones se inician después añadiendo las mezclas de enzimas y lípidos y se detienen con la adición de H_{3}PO_{4}. Los productos lipídicos se transfieren después a una placa de filtro de fibra de vidrio, y se lavan con H_{3}PO_{4} varias veces. La presencia de producto lipídico radiactivo (PIP_{3}) se puede medir usando procedimientos radiométricos que se conocen bien en la técnica.

La actividad de PI3K reguladas por factor de crecimiento se puede medir también usando un ensayo de quinasa lipídica. Por ejemplo, PI3K\alpha se puede someter a ensayo usando muestras que contienen una subunidad reguladora y una subunidad catalítica. Un péptido activador (por ejemplo, péptido pY, SynPep Corp.) se añade a la muestra con ATP marcado radiactivamente. Las micelas lipídicas que contienen PIP_{2} se añaden después a la muestra para empezar la reacción. Las reacciones se tratan y analizan como se describe para el ensayo de PI3K\gamma recién descrito. Se pueden llevar a cabo también ensayos usando extractos celulares (Susa y col. J. Biol. Chem., 1992; 267: 22951-22956).

Los compuestos de la presente invención (por ejemplo, compuestos de Fórmulas I-III y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos) se pueden someter a ensayo sobre su capacidad para disminuir marcadores cuantitativos o cualitativos de procesos tales como inflamación. Se describen más adelante ejemplos de modelos animales de artritis que se pueden usar para someter a ensayo la capacidad de un compuesto de la presente invención para tratar artritis reumatoide.

Ensayo de artritis inducida por pared celular de estreptococos (SCW)

La artritis se induce como se describe por Schwab, y col., (1991) Infection and Immunity 59:4436-4442 con modificaciones menores. Las ratas típicamente reciben aproximadamente 6 \mug de SCW sonicada (en 10 \mul de PBS de Dulbecco (DPBS)) mediante una inyección intraarticular dentro de la articulación tibiotalar derecha en el día 0. En el día 21, se puede iniciar una reacción de hipersensibilidad de tipo retardado por SCW sistémica con aproximadamente 100 \mug de SCW (250 \mul) administrados intravenosamente. Para estudios de compuesto oral, se pueden suspender compuestos en un vehículo apropiado (por ejemplo, hidroxipropil-metilcelulosa al 0,5%/Tween 80 al 0,2%), sonicarse, y administrarse dos veces diariamente (volumen de 10 ml/kg) comenzando 1 hora antes de la iniciación de la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado mediante inyección intravenosa de SCW. Los compuestos se administran típicamente en cantidades entre 10 y 500 mg/kg de peso corporal/día, tales como 20, 30, 60, 100, 200, y 300 mg/kg/día. Las medidas de edema se obtienen determinando los volúmenes basales de la zarpa trasera sensibilizada antes de reactivación en el día 21, y comparándolos con volúmenes en puntos temporales subsiguientes tales como días 22, 23, 24, y 25. La pletismografía de desplazamiento de mercurio es un procedimiento que se puede usar para someter a ensayo el volumen de la zarpa de un animal.

Para medir dolor, las ratas se sitúan en un dispositivo que mide la cantidad de presión situada en cada zarpa trasera. La diferencia promedio entre las zarpas artríticas y las zarpas normales es un procedimiento usado para medir dolor. Además, los niveles de citoquinas inflamatorias se pueden medir en material que se ha lavado de las articulaciones artríticas de un animal y comparado con los niveles de una articulación no artrítica o niveles de articulación no artrítica típicos.

Ensayo de artritis inducida por colágeno

La artritis inducida por colágeno de tipo II (CIA) en ratones es un modelo experimental de artritis reumatoide (véase por ejemplo, Stuart y col. (1984) Annual Rev. Immunol. 2: 199-218; Wooley (1988) Meth. Enzymol. 162: 361-373). La enfermedad se induce típicamente mediante inmunización de ratones DBA/1 con 100 \mug de colágeno de tipo II ("CII") (por ejemplo, colágeno de tipo II bovino o de pollo), administrados intradérmicamente en la base de la cola en coadyudvante completo de Freund.

Se desarrolla una artritis progresiva e inflamatoria en la mayoría de los ratones inmunizados, caracterizada por incrementos en la anchura de la zarpa de hasta el 100%. Se puede administrar un compuesto de ensayo a ratones en un intervalo de cantidades, tales como 20, 60, 100, y 200 mg/kg de peso corporal/día. La duración de la prueba puede ser de varias semanas a unos pocos meses, tal como 40, 60, u 80 días. Se puede usar un índice de puntuación clínica para valorar progresión de la enfermedad desde eritema y edema (etapa 1), distorsión de la articulación (etapa 2), hasta anquilosis de la articulación (etapa 3). La enfermedad puede afectar a una o todas las zarpas en un animal, dando como resultado una puntuación posible total de 12 para cada ratón. La histopatología de una articulación artrítica revela generalmente sinovitis, formación de pannus, y erosiones de hueso y cartílago. Todas las cepas de ratones que son susceptibles a CIA son respondedoras de alta producción de anticuerpos al colágeno de tipo II, y hay una marcada respuesta celular a CII.

La dosificación de un compuesto de ensayo se lleva a cabo usualmente bien profilácticamente (durante 10 semanas) o terapéuticamente (durante 10 días cuando la enfermedad se observa por primera vez). Los ratones se examinan típicamente diariamente respecto al desarrollo de artritis y se asigna a menudo una puntuación clínica. El suero puede también recuperarse de cada animal en diversos puntos temporales para medidas de anticuerpos o citoquinas (según se requiera). En el final del estudio los ratones se pueden someter a eutanasia y se asigna una puntuación de histopatología cuantitativa.

Ensayo de artritis inducida por anticuerpos monoclonales

Otro modelo experimental de artritis reumatoide implica inyectar anticuerpos contra epitopes de colágeno de tipo II dentro de un ratón para inducir artritis en unos pocos días (véase por ejemplo, Burkhardt y col. (2002) Arthritis & Rheumatism 46: 2339-2348; Terato y col. (1992) J. Immunol. 148: 2103-2108). Para usar en este modelo están disponibles comercialmente cócteles de cuatro anticuerpos (Arthrogen-CIA® Monoclonal Antibody Cocktail, CHEMICON International, Inc., Temecula, CA). Este modelo no requiere cepa de ratones DBA/1. Un compuesto de ensayo se puede administrar a ratones una o más veces en un intervalo de cantidades, tales como 20, 60, 100, y 200 mg/kg de peso corporal/día en cualquier momento durante el estudio. La hinchazón de tobillo y zarpa se mide típicamente cuantitativamente o cualitativamente como puntos finales así como histología. Además, se puede recuperar suero a partir de cada animal en diversos puntos temporales para medida de anticuerpos o citoquinas.

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IV. Sales y solvatos farmacéuticamente aceptables

Los compuestos a usar en la presente invención pueden existir en formas no solvatadas así como en formas solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas, incluyendo las formas hidratadas, son equivalentes a formas no solvatadas y se pretende que esten abarcadas dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención (por ejemplo, compuestos de Fórmulas I-III) son capaces de formar adicionalmente ambas sales farmacéuticamente aceptables, que incluyen aunque sin limitación sales de adición de ácidos y/o de bases. Sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) incluyen las sales de adición de ácidos y/o de bases (incluyendo disales) de los mismos. Ejemplos de sales adecuadas se pueden encontrar por ejemplo en Stahl y Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH, Weinheim, Alemania (2002); y Berge y col., "Pharmaceutical Salts," J. of Pharmaceutical Science, 1977; 66:1-19.

Las sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmulas I-III incluyen sales no tóxicas derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromhídrico, yodhídrico, fosforoso, y similares, así como las sales derivadas de ácidos orgánicos, tales como ácidos mono y dicarboxílicos alifáticos, ácidos alcanoicos fenil-sustituidos, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos alcanodioicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos, etc. Tales sales incluyen así sales acetato, aspartato, benzoato, besilato (bencenosulfonato), bicarbonato/carbonato, bisulfato, caprilato, camsilato (alcanforsulfonato), clorobenzoato, citrato, edisilato (1,2-etanodisulfonato), dihidrogenofosfato, dinitrobenzoato, esilato (etanosulfonato), fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isobutirato, monohidrogenofosfato, isetionato, D-lactato, L-lactato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato (metanosulfonato), metafosfato, metilbenzoato, metilsulfato, 2-napsilato (2-naftalenosulfonato), nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmoato, fenilacetato, fosfato, ftalato, propionato, pirofosfato, pirosulfato, sacarato, sebacato, estearato, suberato, succinato sulfato, sulfito, D-tartrato, L-tartrato, tosilato (toluenosulfonato), y xinafoato, y similares de compuestos de Fórmulas I-III. Además se consideran las sales de aminoácidos tales como arginato, gluconato, galacturonato, y similares.

Las sales de adición de ácidos de los compuestos básicos se pueden preparar poniendo en contacto la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir la sal en la manera convencional. La forma de base libre se puede regenerar poniendo en contacto la forma de sal con una base y aislando la base libre en la manera convencional. Las formas de base libre difieren algo de sus respectivas formas de sal en ciertas propiedades físicas tales como solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a su base libre respectiva para los propósitos de la presente invención.

Las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables se pueden formar con metales o aminas, tales como hidróxidos de metales alcalinos o alcalinotérreos, o de aminas orgánicas. Ejemplos de metales usados como cationes son aluminio, calcio, magnesio, potasio, sodio, y similares. Ejemplos de aminas adecuadas incluyen arginina, colina, cloroprocaína, N,N'-dibenciletilenodiamina, dietilamina, dietanolamina, diolamina, etilenodiamina (etano-1,2-diamina), glicina, lisina, meglumina, N-metilglucamina, olamina, procaína (benzatina), y trometamina.

Las sales de adición de bases de compuestos ácidos se pueden preparar poniendo en contacto la forma ácida libre con una cantidad suficiente de la base deseada para producir la sal en la manera convencional. La forma de ácido libre se puede regenerar poniendo en contacto la forma sal con un ácido y aislando el ácido libre en una manera convencional. Las formas de ácido libre difieren algo de sus formas de sal respectivas en ciertas propiedades físicas tales como solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás las sales son equivalentes a su ácido libre respectivo para propósitos de la presente invención.

V. Composiciones farmacéuticas y procedimientos de administración

Esta invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmulas I-III, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo conjuntamente con un vehículo, diluyente, o excipiente farmacéuticamente aceptable para ello. La frase "composición farmacéutica" se refiere a una composición adecuada para administración en uso médico o veterinario. La frase "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, suficiente para inhibir, parar, o permitir una mejora en la enfermedad que se está tratando cuando se administra solo o en conjunción con otro agente farmacéutico o tratamiento en un sujeto particular o población sujeto. Por ejemplo en un ser humano u otro mamífero, se puede determinar experimentalmente una cantidad terapéuticamente efectiva en un laboratorio o centro clínico, para la enfermedad y el sujeto particulares que se están tratando.

Debería entenderse que la determinación de formas de dosificación, cantidades de dosificación, y vías de administración apropiadas está dentro del nivel de habilidad normal en las técnicas farmacéuticas y médicas, y se describe a continuación.

Un compuesto de la presente invención se puede formular como una composición farmacéutica en forma de un jarabe, un elixir, una suspensión, un polvo, un gránulo, un comprimido, una cápsula, una pastilla, un trocisco, una solución acuosa, una crema, un ungüento, una loción, un gel, una emulsión, etc. Preferiblemente, un compuesto de la presente invención causará un decrecimiento en síntomas o indicios de enfermedad asociados con una enfermedad mediada por PI3K según se mide cuantitativamente o cualitativamente.

Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos de la presente invención, los vehículos farmacéuticamente aceptables pueden ser bien sólidos o bien líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, píldoras, cápsulas, sellos, supositorios, y gránulos dispersables. Un vehículo sólido puede ser una o más sustancias las cuales pueden actuar también como diluyentes, agentes aromatizantes, aglutinantes, conservantes, agentes disgregantes de comprimidos, o un material encapsulador.

En polvos, el vehículo es un sólido finamente dividido el cual está en una mezcla con el componente activo finamente dividido. En comprimidos, el componente activo se mezcla con el vehículo que tiene las necesarias propiedades de unión en proporciones adecuadas y se compacta en la forma y tamaño deseados.

Los polvos y comprimidos contienen del 1% al 95% (p/p) del compuesto activo. En ciertas realizaciones, el compuesto activo varía del 5% al 70% (p/p). Vehículos adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, y similares. El término "preparación" pretende incluir la formulación del compuesto activo con material encapsulador como un vehículo que proporciona una cápsula en la cual el componente activo con o sin otros vehículos, está rodeado por un vehículo, el cual está así en asociación con él. De forma similar, se incluyen sellos y pastillas. Se pueden usar comprimidos, polvos, cápsulas, píldoras, sellos, y pastillas como formas de dosificación sólidas adecuadas para administración oral.

Para preparar supositorios, se mezcla primero una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao, y el componente activo se dispersa homogéneamente en ésta, como mediante agitación. La mezcla homogénea fundida se vierte después dentro de moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar, y de este modo solidificar.

Las preparaciones de forma líquida incluyen soluciones, suspensiones, y emulsiones, por ejemplo, soluciones en agua o en agua/propilenglicol. Para inyección parenteral, las preparaciones líquidas se pueden formular en solución en una solución de polietilenglicol acuosa.

Las soluciones acuosas adecuadas para uso oral se pueden preparar disolviendo el componente activo en agua y añadiendo agentes colorantes, aromatizantes, estabilizadores, y espesantes adecuados según se desee. Las suspensiones acuosas adecuadas para uso oral se pueden hacer dispersando el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, tal como cauchos, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y otros agentes de suspensión bien conocidos naturales o sintéticos.

También se incluyen preparaciones en forma sólida que se pretenden convertir, poco antes del uso, en preparaciones en forma líquida para administración oral. Tales formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones, y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, además del componente activo, colorantes, aromatizantes, estabilizantes, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizadores, y similares.

La preparación farmacéutica está preferiblemente en forma de dosificación unitaria. En tal forma la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, conteniendo el envase cantidades discretas de preparación, tales como comprimidos, cápsulas, y polvos envasados en viales o ampollas. Además, la forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula, comprimido, sello, o pastilla en sí misma, o puede ser el número apropiado de cualquiera de éstos en forma envasada.

La cantidad de componente activo en una preparación de dosificación unitaria puede variarse o ajustarse de 0,1 mg a 1000 mg, preferiblemente de 1,0 mg a 100 mg, o del 1% al 95% (p/p) de una dosis unitaria, de acuerdo con la aplicación particular y la potencia del componente activo. La composición puede, si se desea, contener también otros agentes terapéuticos compatibles.

Los vehículos farmacéuticamente aceptables se determinan en parte por la composición particular que se administra, así como por el procedimiento particular usado para administrar la composición. De acuerdo con ello, hay una amplia diversidad de formulaciones adecuadas de composiciones farmacéuticas de la presente invención (véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20ª edición, Gennaro y col. Eds., Lippincott Williams and Wilkins, 2000).

Un compuesto de la presente invención, solo o en combinación con otros componentes adecuados, se puede fabricar en formulaciones de aerosol adecuadas (es decir, se puede "nebulizar") para administrarse por medio de inhalación. Las formulaciones de aerosol se pueden situar en propulsores aceptables presurizados, tales como diclorodifluorometano, nitrogeno propano, y similares.

Las formulaciones adecuadas para administración parenteral, tales como, por ejemplo, por vías intravenosa, intramuscular, intradérmica y subcutánea, incluyen soluciones de inyección estéril isotónica, acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, tampones, sustancias bacteriostáticas, y solutos que vuelven a la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión, solubilizadores, agentes espesantes, estabilizadores, y conservantes. En la práctica de esta invención, se pueden administrar las composiciones, por ejemplo, mediante infusión intravenosa, oralmente, tópicamente, intraperitonealmente, intravesicalmente o intratecalmente. Las formulaciones de compuestos pueden estar presentes en contenedores sellados de dosis unitaria o de multidosis, tales como ampollas y viales. Las soluciones y suspensiones de inyección se pueden preparar a partir de polvos, gránulos, y comprimidos estériles de la clase previamente descrita.

La dosis administrada a un sujeto, en el contexto de la presente invención debería ser suficiente para efectuar una respuesta terapéutica beneficiosa en el sujeto a lo largo del tiempo. El término "sujeto" se refiere a un miembro de la clase Mamíferos. Ejemplos de mamíferos incluyen, sin limitación, seres humanos, primates, chimpancés, roedores, ratones, ratas, conejos, caballos, ganado, perros, gatos, ovejas y vacas.

La dosis se determinará por la eficacia del compuesto en particular empleado y la afección del sujeto, así como el peso corporal o el área de superficie del sujeto a tratarse. El tamaño de la dosis también se determinará por la existencia, naturaleza y extensión de cualesquiera efectos secundarios adversos que acompañan la administración de un compuesto en particular en un sujeto en particular. En la determinación de la cantidad efectiva del compuesto a administrarse en el tratamiento o profilaxis de la enfermedad que se está tratando, el médico puede evaluar factores tales como los niveles que circulan en plasma del compuesto, toxicidades del compuesto, y/o la progresión de la enfermedad, etc. En general, la dosis equivalente de un compuesto es de aproximadamente 1 \mug/kg a 100 mg/kg para un sujeto típico. Se conocen muchos procedimientos de administración diferentes por aquellos expertos en la técnica.

Para administración, los compuestos de la presente invención se pueden administrar a una velocidad determinada mediante factores que pueden incluir, aunque sin limitación, el perfil farmacocinético del compuesto, fármacos contraindicados, y los efectos secundarios del compuesto a diversas concentraciones, según se aplica a la masa y a la salud general del sujeto. La administración se puede llevar a cabo por medio de dosis única o dosis divididas.

Los ejemplos de una formulación de comprimido, parenteral, y de parche típicas incluyen los siguientes:

Ejemplo 1 de formulación del comprimido

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Los compuestos de la presente invención (por ejemplo, un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) se pueden mezclar con la lactosa y el almidón de maíz (para mezclar) y combinar hasta uniformidad hasta un polvo. El almidón de maíz (para pasta) se suspende en 6 ml de agua y se calienta con agitación para formar una pasta. La pasta se añade al polvo mezclado, y la mezcla se granula. Los gránulos húmedos se hacen pasar a través de una malla dura del Nº.: 8 y se secan a 50ºC. La mezcla se lubricó con estearato de magnesio al 1% y se comprimió en un comprimido. Los comprimidos se administraron a un paciente a la velocidad de 1 a 4 cada día para el tratamiento de una enfermedad mediada por PI3K.

Ejemplo 1 de formulación de solución parenteral

En una solución de 700 ml de propilenglicol y 200 ml de agua para inyección se pueden añadir 20,0 g de un compuesto de la presente invención. La mezcla se agita, y el pH se ajusta a 5,5 con ácido clorhídrico. El volumen se ajusta a 1000 ml con agua para inyección. La solución se esteriliza, se carga en ampollas de 5 ml, conteniendo cada una 2,0 ml (40 mg de compuesto de la invención), y se sella bajo nitrógeno. La solución se administra mediante inyección a un sujeto que sufre de una enfermedad mediada por PI3K y en necesidad de tratamiento.

Ejemplo 1 de formulación de parche

Diez miligramos de un compuesto de la presente invención se pueden mezclar con 1 ml de propilenglicol y 2 mg de adhesivo polimérico de base acrílica que contiene un agente de entrecruzamiento resinoso. La mezcla se aplica a un soporte impermeable (30 cm^{2}) y se aplica a la parte superior de la espalda de un paciente para tratamiento de liberación sostenida de una enfermedad mediada por PI3K.

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VI. Procedimientos para tratar enfermedades mediadas por PI3K

Los compuestos de la presente invención y composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente invención se pueden administrar a un sujeto que sufre de una enfermedad mediada por PI3K. Las enfermedades mediadas por PI3K se pueden tratar profilácticamente, de forma precisa, y de forma crónica usando compuestos de la presente invención, dependiendo de la naturaleza de la enfermedad. Típicamente, el huésped o sujeto en cada uno de estos procedimientos es humano, aunque otros mamíferos se pueden beneficiar también de la administración de un compuesto de la presente invención.

En aplicaciones terapéuticas, los compuestos de la presente invención se pueden preparar y administrar en una amplia diversidad de formas de dosificación orales y parenterales. El término "administración" se refiere al procedimiento de poner en contacto un compuesto con un sujeto. Así, los compuestos de la presente invención se pueden administrar mediante inyección, es decir, por vía intravenosa, intramuscular, intracutánea, subcutánea, intraduodenal, parenteral, o intraperitoneal. Además, los compuestos descritos en el presente documento se pueden administrar mediante inhalación, por ejemplo, por vía intranasal. Adicionalmente, los compuestos de la presente invención se pueden administrar por vía transdérmica, tópica, por medio de implantación, transdérmica, tópica, y por medio de implantación. En ciertas realizaciones, los compuestos de la presente invención se administran oralmente. Los compuestos se pueden administrar también por vía rectal, bucal, intravaginal, ocular, auditiva, o mediante insuflación.

Los compuestos utilizados en el procedimiento farmacéutico de la invención se pueden administrar a la dosificación inicial de aproximadamente 0,001 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg diariamente. En ciertas realizaciones, el intervalo de dosificación diaria es de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg. Las dosificaciones, sin embargo, se pueden variar dependiendo de los requerimientos del sujeto, la gravedad de la enfermedad que se está tratando, y el compuesto que se está empleando. La determinación de la dosificación apropiada para una situación particular está dentro de la habilidad del médico. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas, las cuales son menores que la dosis óptima del compuesto. Posteriormente, la dosificación se incrementa mediante incrementos pequeños hasta que se alcanza el efecto óptimo bajo las circunstancias. Por conveniencia, la dosificación diaria total se puede dividir y administrar por partes durante el día, si se desea. El término "tratamiento" incluye la disminución o alivio preciso, crónico, o profiláctico de al menos un síntoma o característica asociado con o causado por la enfermedad que se está tratando. Por ejemplo, el tratamiento puede incluir la disminución de varios síntomas de una enfermedad, la inhibición de la progresión patológica de una enfermedad, o la erradicación completa de una enfermedad. Los compuestos de la presente invención se pueden coadministrar a un sujeto. El término "coadministrado" significa la administración de dos o más agentes farmacéuticos o tratamientos (por ejemplo, tratamiento con radiación) diferentes que se administran a un sujeto mediante combinación en la misma composición farmacéutica o composiciones farmacéuticas separadas. Así la coadministración implica administración al mismo tiempo de una composición farmacéutica única que comprende dos o más agentes farmacéuticos o administración de dos o más composiciones diferentes al mismo sujeto al mismo tiempo o a tiempos diferentes. Por ejemplo, un sujeto a quien se administra una primera dosificación que comprende un compuesto de la presente invención a las 8 de la mañana y después se administra un segundo agente terapéutico 1-12 horas después, por ejemplo, a las 6 de la tarde, de ese mismo día se le ha coadministrado un compuesto de la presente invención y el segundo agente terapéutico. Alternativamente, por ejemplo, un sujeto se le podría administrar una dosificación única que comprende un compuesto de la presente invención y un segundo agente terapéutico a las 8 a.m. y entonces se le ha coadministrado un compuesto de la presente invención y el segundo agente terapéutico.

Así, compuestos de la invención se pueden coadministrar también con compuestos que son útiles para el tratamiento de cáncer (por ejemplo, fármacos citotóxicos tales como TAXOL®, taxotere, GLEEVEC® (Mesilato de Imatinib), adriamicina, daunomicina, cisplatino, etopósido, un alcaloide de vinca, vinblastina, vincristina, metotrexato, o adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, y alcaloides, tales como vincristina, inhibidores de farnesiltransferasa, endostatina y angiostatina, inhibidores de VEGF, y antimetabolitos tales como metotrexato. Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con un derivado de taxano, un complejo de coordinación de platino, un análogo de nucleósido, una antraciclina, un inhibidor de topoisomerasa, o un inhibidor de aromatasa). Los tratamientos de radiación se pueden coadministrar también con un compuesto de la presente invención para el tratamiento de cánceres.

Los compuestos de la invención se pueden coadministrar también con compuestos que son útiles para el tratamiento de una enfermedad trombolítica, enfermedad cardiaca, apoplejía, etc., (por ejemplo, aspirina, estreptoquinasa, activador de plasminógeno tisular, uroquinasa, anticoagulantes, fármacos antiplaquetarios (por ejemplo, PLAVIX®; bisulfato de clopidogrel), una estatina (por ejemplo, LIPITOR® (calcio atorvastatina), ZOCOR® (simvastatina), CRESTOR® (rosuvastatina), etc.), un beta bloqueante (por ejemplo, Atenolol), NORVASC® (besilato de amlodipina), y un inhibidor de ACE (por ejemplo, Accupril® (clorhidrato de quinaprilo), lisinoprilo, etc.).

Los compuestos de la invención se pueden coadministrar también para el tratamiento de hipertensión con compuestos tales como inhibidores de ACE, agentes que disminuyen lípidos tales como estatinas, LIPITOR® (calcio atorvastatina), bloqueantes de canales de calcio tales como NORVASC® (besilato de amlodipina). Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con fibratos, beta-bloqueantes, inhibidores de NEPI, antagonistas del receptor de angiotensina-2 e inhibidores de agregación plaquetaria.

Para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, que incluyen artritis reumatoide, los compuestos de la invención se pueden coadministrar con agentes tales como inhibidores de TNF-\alpha tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF\alpha (tales como REMICADE®, CDP-870 y HUMIRA^{TM} (adalimumab) y moléculas de fusión receptor de TNF-inmunoglobulina (tales como ENBREL®), inhibidores de IL-1, antagonistas del receptor o IL-1R\alpha soluble (por ejemplo KINERET^{TM} o inhibidores de ICE), agentes antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), piroxicam, diclofenaco, naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno ibuprofeno, fenamatos, ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas, fenilbutazona, aspirina, inhibidores de COX-2 (tales como CELEBREX® (celecoxib), BEXTRA® (valdecoxib) y etoricoxib, inhibidores de metaloproteasa (preferiblemente inhibidores selectivos de MMP-13), NEURONTIN®, pregabalina, metotrexato a dosis bajas, leflunomida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina u oro parenteral u oral.

Los compuestos de la invención se pueden coadministrar con agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de osteoartritis. Los agentes adecuados para usarse en combinación incluyen agentes antiinflamatorios no esteroideos estándar (NSAID en adelante en este documento) tales como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos tales como naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, ketoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, inhibidores de COX-2 tales como celecoxib, valdecoxib, y etoricoxib, analgésicos y terapias intraarticulares tales como corticosteroides y ácidos hialurónicos tales como hyalgan y synvisc.

Los compuestos de la invención se pueden coadministrar también con agentes antivirales tales como Viracept, AZT, aciclovir y famciclovir, y compuestos antisépticos tales como Valant.

Los compuestos de la presente invención se pueden coadministrar adicionalmente con agentes del SNC tales como antidepresivos (tal como sertralina), fármacos antiparkinsonianos (tales como deprenilo, L-Dopa, Requip, Mirapex, inhibidores de MAOB tales como selegina y rasagilina, inhibidores de comP tales como Tasmar, inhibidores de A-2, inhibidores de recaptación de dopamina, antagonistas de NMDA, agonistas de nicotina, agonistas de dopamina e inhibidores de óxido nítrico sintasa neuronal), NEURONTIN®, pregabalina, y fármacos anti-Alzheimer tales como ARICEPT®, tacrina, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención se pueden coadministrar adicionalmente con agentes de osteoporosis tales como EVISTA® (clorhidrato de raloxifeno) droloxifeno, lasofoxifeno o FOSAMAX® y agentes inmunosupresores tales como FK-506 y rapamicina.

Ejemplos

Intermedio 1

1-(1-Dimetilamino-etiliden)-2-metil-isotiourea

Se añadió (1,1-dimetoxi-etil)-dimetil-amina (1,9 ml, 13 mmol) a una solución de diclorometano (10 ml) y tiourea (0,761 g, 10 mmol). La reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, luego se enfrió y se eliminó el diclorometano a presión reducida dando un sólido naranja. El sólido se trituró con éter etílico caliente y se secó. Este intermedio se agitó en una mezcla 1:1 de THF (tetrahidrofurano)/MeI (10 ml) durante 18 horas a temperatura ambiente. La suspensión se filtró y se aclaró con éter etílico proporcionando el compuesto del título como un sólido incoloro, 2,54 g. RMN deH (DMSO): 9,15 (s ancho,1H), 8,80 (s,1H), 3,18 (s, 3H), 3,08 (s,3H) 2,35 (s,3H), 2,23 (s,3H).

Intermedio 2

Éster etílico del ácido 4-Hidroxi-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico

Se añadió éster etílico del ácido clorocarbonil-acético (1,54 ml, 12 mmol) a una suspensión del Intermedio 1 (2,86 g, 10 mmol) en diclorometano (50 ml) a temperatura ambiente. Después se agitó la reacción durante cuatro horas dando una suspensión naranja, ésta se enfrió hasta 0ºC y se añadió trietilamina (3,34 ml, 24 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. La mezcla se vertió entonces en diclorometano y se lavó sucesivamente con ácido sulfúrico al 10%, agua y salmuera. La fase orgánica se secó seguidamente sobre sulfato de magnesio y se eliminó el diclorometano a presión reducida dando un sólido amarillo, 2,12 g. El producto bruto se cristalizó en diclorometano/hexanos proporcionando el compuesto del título como un sólido amarillo claro, 1,05 g. RMN deH (CDCl_{3}): 4,41 (c,2H), 2,59 (s,3H), 2,57 (s,3H), 1,41 (t,3H).

Intermedio 3

Éster etílico del ácido 4-cloro-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico

Se añadió cloruro de oxalilo (11,47 ml, 131,4 mmol) y una cantidad catalítica de DMF (N,N-dimetilformamida) a una solución de diclorometano (250 ml) y el Intermedio 2 (15,0 g, 65,7 mmol). Inmediatamente se formó un precipitado y se desprendió cierta cantidad de gas. La mezcla se destiló dos veces con diclorometano proporcionando el compuesto del título. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}) 4,42 (c, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,48 (s, 3H), 1,39 (t, 3H). MS (M+1): 247.

Intermedio 4

Éster etílico del ácido 4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-carboxílico

Se añadieron trietilamina (1,73 ml, 12,3 mmol) y cicloheptilamina (0,58 ml, 4,51 mmol) a una solución de diclorometano (15 ml) y el Intermedio 3 (1,02 g, 4,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua y diclorometano y se añadió ácido clorhídrico 1,0 N (8,0 ml), se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se eliminó el diclorometano a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un aceite marrón, 1,13 g. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 4,32 (c, 2H), 4,25 (s ancho, 1H), 2,50 (m, 6H), 1,98 (m, 1H), 1,60 (m, 10H), 1,40 (t, 3H). MS (M+1): 324.

Intermedio 5

4-Cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-il)-metanol

Se añadió hidruro de litio y aluminio (0,117 g, 3,1 mmol) a una solución de THF (40 ml) y el Intermedio 4 (1,0 g, 3,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora y se controló por TLC (cromatografía en capa fina) (acetato de etilo al 10%/diclorometano). La reacción se inactivó con hidróxido sódico al 2%, se filtró y el THF se eliminó a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un sólido naranja, 0,854 g. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 5,87 (d, 1H), 4,60 (s, 2H), 4,18 (s ancho, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 1,97 (m, 1H), 1,70-1,40 (m, 10H). MS (M+1) (282).

Intermedio 6

4-Cicloheptilamino-6-metil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carbaldehído

Se añadió dióxido de manganeso (2,11 g, 24 mmol) a una solución de cloroformo (30 ml) y el Intermedio 5 (0,854 g, 3,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. El dióxido de manganeso se separó por filtración y el filtrado se concentró proporcionando el compuesto del título como un sólido incoloro, 0,721 g. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 10,18 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 4,30 (m, 1H), 2,58 (s, 3H), 2,50 (s, 3H), 1,97 (m, 1H), 1,70-1,50 (m, 10H). MS (M+1): 280.

Intermedio 7

Éster etílico del ácido 3-(4-cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-il)-acrílico

Se añadió hidruro sódico (0,083 g, 3,45 mmol) a una solución de THF (10 ml) y éster etílico del ácido etoxifosfinoil-acético (0,715 ml, 3,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos, luego se añadió el Intermedio 6 (0,838 g, 3,0 mmol) en THF (15 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante varias horas y se controló por TLC (9:1 hexanos/éter etílico). La TLC mostró en su mayor parte material de partida, no obstante un análisis de espectrometría de masas reveló en su mayoría producto. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en agua. Se añadió a la mezcla acetato de etilo, que se lavó después sucesivamente una vez con agua, bicarbonato y luego salmuera. La solución se secó seguidamente sobre sulfato de magnesio y el acetato de etilo se eliminó a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un aceite incoloro, 1,07 g. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 7,61 (d, 1H), 6,18 (d, 1H), 5,10 (s, 1H), 4,30 (c, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,4,55 (s, 3H), 4,18 (s, 3H), 2,00 (m, 1H), 1,70-1,47 (m, 10H), 1,35 (t, 3H). MS (M+1): 350.

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Intermedio 8

8-Cicloheptil-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Se añadieron DBU (1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno) (0,410 ml, 2,70 mmol) y una cantidad catalítica de terc-butóxido potásico a una solución de DMF (4 ml) y el Intermedio 7 (0,860 g, 2,46 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 150ºC durante 24 horas, luego se enfrió hasta temperatura ambiente durante 72 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua y luego se acidificó hasta pH=4 con 1 equivalente de ácido sulfúrico al 10%. La reacción se extrajo con acetato de etilo y luego se lavó sucesivamente con agua y salmuera. La mezcla se secó seguidamente con sulfato de magnesio y luego se eliminó el acetato de etilo a presión reducida proporcionando el compuesto del título como un aceite naranja, 0,590 g. RMN de ^{1}H (CDCl_{3}): 7,73 (d, 1H), 6,58 (d ancho, 1H), 5,78-5,40 (s ancho, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,53 (m, 3H), 1,90-1,50 (M, 11H). MS (M+1): 304.

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Intermedio 9

8-Cicloheptil-4-metil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

Se añadió oxaziridina de Davis (533 mg, 1,1 equiv) a una solución de Intermedio 8 (590 mg, 2,0 mmol) en cloroformo (15 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El análisis por capa fina en este punto indicó que la reacción casi se había completado. El disolvente se eliminó parcialmente a presión reducida y la mezcla de reacción se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con acetato de etilo y luego metanol al 10% en acetato de etilo proporcionando el compuesto del título como una espuma incolora, 400 mg. RMN de ^{1}H : 7,81 (d, 1H), 6,78 (d ancho, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,81 (s, 3H), 2,52 (m, 1H), 1,90-1,50 (m, 11H). MS (M+1): 320.

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Ejemplo 1 Éster metílico del ácido 4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

Se calentó hasta 120ºC durante 18 horas dejando que el disolvente se eliminara por destilación una mezcla del Intermedio 9 (0,4 g, 1,25 mmol), éster metílico del ácido 4-amino-1-metilpirrol-2-carboxílico \cdot HCl (0,475 g, 2,5 mmol), trietilamina (0,348 ml, 2,5 mmol) y acetonitrilo (4 ml). El residuo se disolvió en acetato de etilo, se extrajo con HCl 1N, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice usando THF/hexano como fase móvil proporcionando el compuesto del título. Rendimiento: 0,25 g, 48%.

Los compuestos del título de los Ejemplos 2-8 se sintetizaron de una forma análoga al Ejemplo 1.

Ejemplo 2 Éster etílico del ácido 4-(4,8-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 3 Éster metílico del ácido 4-(8-ciclopropil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 4 Éster metílico del ácido 4-(8-ciclobutil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 5 Éster metílico del ácido 1-metil-4-[4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-il)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 6 Éster metílico del ácido 4-(8-ciclohexil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 7 Éster etílico del ácido 1-bencil-4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 8 Éster metílico del ácido 4-[8-(2-ciclopropil-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

Los compuestos del título de los Ejemplos 9 a 13 se sintetizaron de una forma análoga al Ejemplo 1 reemplazando éster etílico del ácido etoxifosfinoil-acético por 2-fluoro-2-fosfonoacetato de trietilo.

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Ejemplo 9 Éster metílico del ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 10 Éster metílico del ácido 4-[6-fluoro-4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-ilmetil)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 11 Éster metílico del ácido 4-[6-fluoro-8-(4-metoxi-ciclohexil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 12 Éster etílico del ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-piridin-3-ilmetil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 13 Éster etílico del ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico

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Intermedio 10

Éster etílico del ácido 4-cicloheptilamino-6-etil-2-metilsulfanil-pirimidin-5-carboxílico

Se enfrió hasta 0ºC una solución de diisopropil amina (3,25 ml, 23,2 mmol) en THF (90 ml) y se trató gota a gota con n-BuLi (15,2 ml, 1,6 M, 24 mmol). La solución se calentó hasta temperatura ambiente durante 0,5 horas y luego se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota a la mezcla una solución de éster etílico del ácido cicloheptilamino-6-metil-2-metil-sulfanil-pirimidin-5-carboxílico (3,0 g, 9,28 mmol) en THF (30 ml) y la solución se agitó durante 2 horas a -78ºC. Se añadió yoduro de metilo (0,186 ml, 3 mmol) a la reacción y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se extrajo con HCl 1N. La solución se secó, se concentró a presión reducida y el residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice (Hexano/Acetato de Etilo) proporcionando 2,7 g del compuesto del título (86%). RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO-D6): \delta ppm 1,1 (t, J = 7,4 Hz, 3 H) 1,3 (t, J = 7,1 Hz, 3 H) 1,5 (m, 2 H) 1,5 (m, 8 H) 1,9 (m, 2 H) 2,5 (s,3 H) 2,8 (m, 2 H) 4,2 (m, 1 H) 4,3 (c, J = 7,1 Hz, 2 H)

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Intermedio 11

8-Cicloheptil-4-etil-2-metilsulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona

El Intermedio 11 se sintetizó a partir del Intermedio 10 de una forma análoga a la síntesis del Intermedio 9. RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO-D6): \delta ppm 1,2 (t, J = 7,6 Hz, 3 H) 1,5 (m, 3 H) 1,6-1,8 (m, 12 H) 2,9 (s, 3 H) 3,1 (c, J = 7,6 Hz, 3 H) 6,8 (m, 1 H) 7,5 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) 8,2 (d, J = 9,8 Hz, 1 H)

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Ejemplo 14 Éster metílico del ácido 4-(8-cicloheptil-4-etil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título se sintetizó a partir del Intermedio 11 de una forma análoga a la síntesis del Ejemplo 1 a partir del Intermedio 9.

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Ejemplo 15 Ácido 4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 1 (0,25 g, 0,6 mmol) se disolvió en etanol (20 ml) y se trató con NaOH 1N (10 ml) y se dejó agitando durante 18 horas. La mezcla se calentó a reflujo durante 3 horas, se enfrió, el disolvente se eliminó a presión reducida y luego se diluyó con agua. El pH de la solución se acidificó mediante la adición de HCl y el sólido resultante se separó por filtración. El sólido se lavó con agua y se secó proporcionando 0,2 g del compuesto del título (84%).

Los compuestos del título de los Ejemplos 16 a 28 se sintetizaron de una forma análoga al Ejemplo 15.

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Ejemplo 16 Ácido 4-(4,8-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 17 Ácido 1-metil-4-[4-metil-8-(3-metil-ciclohexil)-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 18 Ácido 4-(8-ciclopropil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico.

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Ejemplo 19 Ácido 1-metil-4-[4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-il)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 20 Ácido 4-(8-cicloheptil-4-etil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 21 Ácido 4-(8-ciclobutil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 22 Ácido 4-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-isopropil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 23 Ácido [3-(8-cicloheptil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-pirrol-1-il]-acético

Los compuestos del título de los Ejemplos 24 a 28 se sintetizaron de una forma análoga al Ejemplo 15 reemplazando éster etílico del ácido etoxifosfinoil-acético por 2-fluoro-2-fosfonoacetato de trietilo.

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Ejemplo 24 Ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 25 Ácido 4-[6-fluoro-4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-il)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 26 Ácido 4-[6-fluoro-4-metil-7-oxo-8-(tetrahidro-piran-4-ilmetil)-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 27 Ácido 4-[6-fluoro-8-(4-metoxi-ciclohexil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 28 Ácido 4-(8-ciclopentil-6-fluoro-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H- pirrol-2-carboxílico

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Ejemplo 29 Éster metílico del ácido 4-(6-cloro-8-ciclopentil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

Se añadió N-clorosuccinimida (1,81 g, 13,55 mmol) a una solución de 8-ciclopentil-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (2,5 g, 9,08 mmol) en 36 ml de DMF (N,N-dimetilformamida). La mezcla de reacción se agitó durante 30 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua y acetato de etilo. La fase orgánica se recogió y la fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se eliminó el acetato de etilo a presión reducida dando 4,9 g de sólido. El producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0% hasta acetato de etilo al 40%/hexano al 60% y proporcionó 1,00 g de 6-cloro-8-ciclopentil-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona como un sólido naranja. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta \betappm 1,70 (m, 2 H) 1,89 (m, 2 H) 2,10 (m, 2 H) 2,31 (m, 2 H) 2,61 (s, 3 H) 2,67 (s, 3 H) 6,06 (tt, J = 8,91, 8,74 Hz, 1 H) 7,95 (s, 1 H). MS (M+1): 310,1.

Se añadió M-CPBA (ácido m-cloroperoxibenzoico: 0,760 g, 3,39 mmol) a una solución de 6-cloro-8-ciclopentil-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (1,00 g, 3,22 mmol) en cloroformo (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos y se controló por HPLC. La reacción se inactivó con carbonato sódico saturado y se recogió la fase orgánica. La fase orgánica se extrajo dos veces con una solución de carbonato sódico saturado y luego una vez con salmuera. La mezcla se secó seguidamente con sulfato de magnesio y el cloroformo se eliminó a presión reducida dando 6-cloro-8-ciclopentil-4-metil-2-metanosulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,970 g como un sólido amarillo apagado). RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta ppm 1,69 (m, 2 H) 1,95 (m, 2 H) 2,14 (m, 2 H) 2,24 (m, 2 H) 2,84 (s, 3 H) 2,97 (s, 3 H) 6,08 (m, 1 H) 8,07 (s, 1 H). MS (M+1): 326,1.

Se añadieron trietil amina (0,29 ml, 2,09 mmol) y clorhidrato del éster metílico del ácido 4-amino-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (0,38 g, 2,00 mmol) a una solución de 6-cloro-8-ciclopentil-4-metil-2-metanosulfinil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,325 g, 1,00 mmol) en acetonitrilo (3 ml) y DMF (5 gotas). La reacción se calentó a 120ºC durante 2 días, luego se enfrió y se eliminó el acetonitrilo a presión reducida dando 1 g de un sólido bruto. El producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de hexanos al 100% hasta acetato de etilo al 100%. Para eliminar más impurezas se recogió el compuesto en éter, se filtró y se secó dando 45 mg del compuesto del título. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta ppm 1,64 (m, 2 H) 1,87 (m, 2 H) 2,06 (m, 2H) 2,34 (m, 2 H) 2,60 (s, 3 H) 3,82 (s, 3H) 3,94 (s, 3 H) 6,00 (m, 1 H) 6,94 (m, 1 H) 7,15 (m, 1H) 7,88 (s, 1 H). MS (M+1): 416,1.

Ejemplo 30 Éster metílico del ácido 4-(6-cloro-8-etil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 30 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 29.

Ejemplo 31 Ácido 4-(6-cloro-8-etil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 31 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 29, seguido por una etapa de hidrólisis del éster como la llevada a cabo en el Ejemplo 15.

Ejemplo 32 Ácido 4-[6-bromo-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 32 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 31, reemplazando N-clorosuccinimida por N-bromosuccinimida.

Ejemplo 33 Ácido 4-[6-bromo-8-(4-metoxi-bencil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H- pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 33 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 32.

Ejemplo 34 Éster metílico del ácido 4-[6-(3-benciloxi-fenil)-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

Se añadieron tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,089 g, 0,077 mmol) y carbonato sódico saturado (3,6 ml) y ácido 3-benciloxi-fenil-bórico (0,485 g, 2,12 mmol) a una solución de 6-bromo-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,665 g, 1,93 mmol) en metanol (3,6 ml) y tolueno (3,6 ml). La mezcla de reacción se calentó a 110ºC durante 19 horas. El producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 0% hasta acetato de etilo al 50%/hexano al 50% dando 0,705 g, 82% de rendimiento, del compuesto del título como un sólido amarillo. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta ppm 2,63 (s, 3 H) 2,68 (s, 3 H) 3,39 (m, 3 H) 3,76 (t, J = 6,20 Hz, 2 H) 4,76 (t, J = 6,22 Hz, 2 H) 5,12 (s, 2 H) 7,01 (cd, J = 8,06, 2,44, 0,98 Hz, 1 H) 7,27 (t, J = 1,71 Hz, 1 H) 7,33 (m, 2 H) 7,38 (m, 3 H) 7,46 (m, 2 H) 7,83 (s, 1 H). MS (M+1): 448,1.

Se añadió M-CPBA (ácido m-cloroperoxibenzoico: 0,375 g, 1,67 mmol) a una solución de 6-(3-benciloxi-fenil)-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-2-metilsulfanil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,705 g, 1,52 mmol) en cloroformo (15 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 h y se controló por HPLC. La reacción se inactivó con carbonato sódico saturado y se recogió la fase orgánica. La fase orgánica se extrajo dos veces con una solución de carbonato sódico saturado y luego una vez con salmuera. La mezcla se secó con sulfato de magnesio dando 0,666 g de producto. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta ppm 2,92 (s, 3 H) 2,92 (s, 3 H) 3,31 (s, 3 H) 3,73 (td, J = 5,68, 1,83 Hz, 2 H) 4,75 (c, J = 5,62 Hz, 2 H) 5,06 (s, 2 H) 7,00 (cd, J = 8,30, 2,68, 0,98 Hz, 1 H) 7,21 (m, 1 H) 7,28 (m, 2 H) 7,34 (m, 3 H) 7,40 (m, 2 H) 7,87 (s, 1 H). MS (M+1): 464,1.

Se añadieron trietil amina (0,225 ml, 1,62 mmol) y clorhidrato del éster metílico del ácido 4-amino-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (0,248 g, 1,3 mmol) a una solución de 6-(3-benciloxi-fenil)-2-metanosulfinil-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-8H-pirido[2,3-d]pirimidin-7-ona (0,300 g, 0,647 mmol) en acetonitrilo (2 ml) y DMF (1 ml). La reacción se calentó a 135ºC durante 24 h y luego a 120ºC durante 65 h, luego se enfrió y se eliminó el acetonitrilo a presión reducida dando un sólido bruto. El producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice con diclorometano y luego con THF al 20%/diclorometano al 80% dando 40 mg del compuesto del título como un sólido amarillo. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta ppm 2,55 (s, 3 H) 3,35 (s, 3 H) 3,72 (t, J = 6,83 Hz, 2 H) 3,77 (s, 3 H) 3,90 (s, 3 H) 4,66 (m, 2 H) 5,06 (s, 2 H) 6,74 (d, J = 1,95 Hz, 1 H) 6,92 (cd, J = 8,30, 2,68, 0,98 Hz, 1 H) 7,00 (m, 1 H) 7,19 (s, 2 H) 7,21 (t, J = 1,22 Hz, 1 H) 7,27 (m, 2 H) 7,32 (m, 2 H) 7,40 (m, 1 H) 7,74 (s, 1 H).

MS (M+1): 554,1.

Ejemplo 35 Ácido 4-[6-(3-benciloxi-fenil)-8-(4-fluoro-bencil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 35 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 34, seguido por una etapa de hidrólisis del éster como la llevada a cabo en el Ejemplo 15.

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Ejemplo 36 Ácido 4-[8-(4-metoxi-bencil)-4,6-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2- carboxílico

Se añadieron yoduro de cobre (6 mg, 0,0555 mmol), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (0,019 g, 0,0278 mmol) y tetrametil estaño (0,103 ml, 0,740 mmol) a una solución de éster metílico del ácido 4-[6-bromo-8-(4-metoxi-bencil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (0,190 g, 0,370 mmol) en DMF (4 ml). La mezcla de reacción se calentó a 100ºC durante 17,5 horas. El producto bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de acetato de etilo al 40%/hexanos al 60% hasta acetato de etilo al 60%/hexano al 40% y dio (0,050 g, 30% de rendimiento) del éster metílico del ácido 4-[8-(4-metoxi-bencil)-4,6-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico como un sólido. RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta ppm 2,15 (d, J = 1,22 Hz, 3 H) 2,53 (s, 3 H) 3,68 (s, 3 H) 3,74 (s, 3 H) 3,76 (s, 3 H) 5,50 (s, 2 H) 6,72 (s, 1 H) 6,73 (m, 2 H) 6,83 (s, 1 H) 7,26 (m, 2 H) 7,52 (d, J = 1,22 Hz, 1 H). MS (M+1): 448,1.

Se añadió una solución de hidróxido sódico 1M (0,22 ml, 0,218 mmol) a una solución de éster metílico del ácido 4-[8-(4-metoxi-bencil)-4,6-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (0,049 g, 0,109 mmol) en etanol (15 ml) y THF (15 ml). La mezcla de reacción se mantuvo a reflujo durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se eliminó el disolvente a presión reducida. El residuo se vertió en agua y se añadió ácido clorhídrico 1M hasta que se alcanzó un pH de 5. La mezcla de reacción se filtró y la torta del filtro se lavó con agua. El sólido se secó a vacío dando 0,39 g, 83% de rendimiento. RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO-D6): \delta ppm 2,09 (s, 3 H) 2,55 (s, 3 H) 3,66 (s, 3 H) 3,70 (s, 3 H) 5,49 (s, 2 H) 6,77 (s, 1 H) 6,81 (d, J = 8,78 Hz, 2 H) 7,11 (m, 2 H) 7,33 (m, 1 H) 7,89 (s, 1 H). MS (M-1): 432,1.

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Ejemplo 38 Ácido 4-[8-ciclohexil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico

El compuesto del título del Ejemplo 38 se sintetizó de una forma análoga al Ejemplo 15.

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Intermedio 12

Éster etílico del ácido 4-amino-1-bencil-1H-pirrol-2-carboxílico

Se trató una solución de 4-nitropirrol-2-carboxilato de etilo (4,0 g, 21,7 mmol) en DMF (70 ml) en varias porciones con NaH (0,57 g, 23,9 mmol) y se dejó agitando durante un período de 20 minutos. La mezcla se trató con bromuro de bencilo (3,09 ml, 26 mmol), se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo, se extrajo con NaOH 1N y HCl 1N, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta sequedad proporcionando éster etílico del ácido 4-nitro-1-bencil-1H-pirrol-2-carboxílico (5,2 g). El producto bruto (2,5 g, 9 mmol) se disolvió seguidamente en THF/metanol (50 ml/50 ml) y se trató con Níquel Raney (0,5 g) a una presión de hidrógeno gas de 3,516 x 10^{5} Pa. La mezcla se agitó hasta que se interrumpió la absorción de hidrógeno y luego se separó el catalizador de Níquel Raney por filtración y se eliminó el disolvente a presión reducida proporcionando el compuesto del título, 2,2 g. RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO-D6): \delta ppm 1,2 (t, J = 7,1 Hz, 3 H) 4,1 (c, J = 7,1 Hz, 2 H) 5,4 (s, 2 H) 6,3 (s, 1 H) 6,5 (s, 1 H) 7,0 (d, J = 6,8 Hz, 2 H) 7,2 (m, 1 H) 7,3 (d, J = 7,6 Hz, 2 H).

TABLA 1

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Ejemplo biológico 1

Protocolo de Expresión y Purificación de la proteína PI3K\gamma

Se infectaron conjuntamente células Spodtera frugiperda, cultivadas en medio ESF921, con baculovirus que expresa una proteína p101 marcada con glu y baculovirus que expresa una proteína p110\gamma marcada con HA, en una relación 3:1 de baculovirus p101 a baculovirus p110\gamma. Se cultivaron células Sf9 hasta 1 \times 10^{7} células totales/ml en biorreactores de 10 l y se recolectaron 48-72 horas después de la infección. Las muestras de las células infectadas se ensayaron luego para determinar la expresión de p101/p110\gamma PI3 quinasa por procedimientos de inmunoprecipitación y por análisis de transferencia Western (véase a continuación).

Para purificar PI3K\gamma, se vertieron sobre sedimentos celulares congelados con agitación 4 volúmenes de tampón de lisis hipotónico a temperatura ambiente (MgCl_{2} 1 mM, DTT 1 mM, EGTA 5 mM, Pefabloc 1 mM, aprotinina 0,5 \muM, leupeptina 5 \muM, pepstatina 2 \muM, E64 5 \muM, pH 8) por gramo de pasta celular, luego se lisaron en una bomba de nitrógeno a 2,758 x 10^{6} Pa (599HC T316, Parr Instrument Co, Moline, IL). Se añadió NaCl a 150 mM, y se añadió colato sódico hasta 1% y se mezcló durante otros 45 minutos. Los lisados se aclararon por centrifugación durante 25 minutos a 14.000 rpm. Los lisados se cargaron entonces sobre microesferas de Sepharose proteína G unida a anti-glu (Covance Research Products, Richmond, CA) usando 20 ml de resina/50 g de pasta celular. La columna se lavó con 15 volúmenes de tampón de lavado (DTT 1 mM, EGTA 0,2 mM, Pefabloc 1 mM, aprotinina 0,5 \muM, leupeptina 5 \muM, pepstatina 2 \muM, E64 5 \muM, NaCl 150 mM, colato sódico al 1%, pH 8). PI3K\gamma eluyó con 6 volúmenes de columna de tampón de lavado que contenía 100 \mug/ml de un péptido que compite por la unión del marcador glu. Las fracciones de columna con la proteína eluida (determinada tomando lecturas de la DO_{280}) se recogieron y dializaron en EGTA 0,2 mM, DTT 1 mM, Pefabloc 1 mM, leupeptina 5 \muM, colato sódico al 0,5%, NaCl 150 mM y glicerol al 50%, pH 8. Las fracciones se almacenaron a -80ºC hasta su uso posterior.

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Ejemplo biológico 2

Expresión de subunidades de proteína G

Se infectaron conjuntamente células Spodtera frugiperda con baculovirus que expresa una proteína G \beta_{1} marcada con glu y baculovuris que expresa una proteína G \beta_{2} en una relación 1:1 de baculovirus de proteína G \beta_{1} marcada con glu a baculovirus de proteína G \beta_{2}. Se cultivan células Sf9 en biorreactores de 10 l y se recolectan 48-72 horas después de la infección. Se ensayaron muestras de células infectadas para determinar la expresión de proteína G \beta_{1}/\beta_{2} por análisis de transferencia Western, como se describe más adelante. Los lisados celulares se homogeneizaron y cargaron en una columna de microesferas marcadas con glu como en el Ejemplo Biológico 1 y se extrajeron por completo fuera de la columna con un péptido glu y se procesaron como se describe en el Ejemplo Biológico 1.

Ejemplo biológico 3

Análisis por transferencia Western

Las muestras de proteína se desarrollaron en un gel de Tris al 8%-glicina y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa 45 \muM. Las transferencias se bloquearon entonces con albúmina sérica bovina al 5% (BSA) y ovoalbúmina al 5% en TBST (Tris 50 mM, NaCl 200 mM, Tween 20 al 0,1%, pH 7,4) durante una hora a temperatura ambiente y se incubaron durante la noche a 4ºC con anticuerpo primario diluido 1:1000 en TBST con BSA al 0,5%. Los anticuerpos primarios para las subunidades p110\gamma, p110\alpha, p110\beta, p85\alpha, proteína G \beta_{1} y proteína G \gamma_{2} se adquirieron de Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA. Los anticuerpos de la subunidad p101 se desarrollaron en Research Genetics, Inc., Huntsville, AL basándose en un antígeno del péptido p101.

Después de la incubación con el anticuerpo primario, las transferencias se lavaron en TBST y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente con conjugado anticuerpo anti-conejo de cabra-HPR de conejo (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, código de producto 170-6515), diluido 1:10.000 en TBST con BSA al 0,5%. Los anticuerpos se detectaron con reactivos de detección ECL^{TM} (Amersham Biosciences Corp., Piscataway, New Jersey) y se cuantificaron en un escáner Kodak ISO400F.

Ejemplo biológico 4

Inmunoprecipitación

Se descongelaron 100 \mul de pasta celular del Ejemplo Biológico 1 ó 2 y se lisaron en hielo con 400 \mul de tampón de lisis hipotónico (tris 25 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, Pefabloc 1 mM, leupeptina 5 \muM, E-64 (Roche) 5 \muM, Nonidet P40 al 1%, pH 7,5-8). El lisado se incubó durante 2 horas a temperatura ambiente con microesferas marcadas con glu (Covance Research Products, Cambridge, Inglaterra, código de producto AFC-115P). Las microesferas se lavaron tres veces en tampón de lavado (Tris 20 mM, pH 7,8-8, NaCl 150 mM, NP40 al 0,5%) y la proteína eluyó desprendiéndose de las microesferas calentando en tampón de muestra 2x (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA, código de producto LC1676).

Ejemplo biológico 5

Ensayo de quinasa PI3K\gamma In Vitro

Se ensayaron las propiedades inhibidoras de los compuestos de la Tabla 1 en un ensayo de PI3K in vitro. En una placa de polipropileno de 96 pocillos, se habían añadido a cada pocillo 2 \mul de 50 veces la concentración final deseada del compuesto en DMSO. Se combinaron en el tampón de ensayo (HEPES 30 mM, NaCl 100 mM, EGTA 1 mM y DTT 1 mM) subunidades recombinantes purificadas de proteína p101/p110\gamma (0,03 \mug; \sim2,7 nM) y de proteína G \beta_{1}/\gamma_{2} (0,09 \mug; \sim57,7 nM) para cada reacción. Se añadieron ATP y [\gamma-^{32}P-ATP] (0,09 \muCi) a esta mezcla de modo que la concentración final de ATP en la reacción fue 20 \muM. Se formaron micelas lipídicas por sonicación de fosfatidilinositol-4,5-difosfato (PIP_{2}), fosfatidiletanolamina (PE) y colato sódico en el tampón de ensayo durante 10 minutos, añadiendo MgCl_{2} e incubando en hielo durante 20 minutos, para concentraciones finales de PIP_{2} 25 \muM, PE 300 \muM, colato sódico al 0,02% y MgCl_{2} 10 mM en la reacción. Las reacciones se iniciaron añadiendo volúmenes iguales de mezcla de lípido y enzima en un volumen total de 50 \mul, dejando desarrollarse durante 20 minutos a temperatura ambiente y se detuvo con 100 \mul de H_{3}PO_{4} 75 mM. El producto lipídico se transfirió a una placa de filtro de fibra de vidrio y se lavó con H_{3}PO_{4} 75 mM varias veces. Se midió la presencia de producto lipídico radiactivo (PIP_{3}) mediante la adición de mezcla Wallac Optiphase a cada pocillo y realizando el recuento en un lector de placas Wallac 1450 Trilux (PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA 02118). En la Tabla 2 se indica la CI_{50} para cada compuesto ensayado en \muM:

TABLA 2

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Ejemplo biológico 6

Ensayo de quinasa CDK2/ciclina A In Vitro

Se ensayaron las propiedades inhibidoras de los compuestos de los Ejemplos 19, 24 y 31 en un ensayo in vitro CDK2/ciclina A a 10 \muM de cada uno de los compuestos en DMSO. Se ensayó CDK2/ciclina A (5-20 mU diluida en HEPES 50 mM pH 7,5, DTT 1 mM, Brij35 al 0,02%, NaCl 100 mM) frente a Histona H1 en un volumen final de 25,5 \mul que contenía Hepes 50 mM pH 7,5, DTT 1 mM, Brij35 al 0,02%, NaCl 100 mM, Histona H1 (1 mg/ml), acetato de magnesio 10 mM y [^{33}P-\gamma-ATP] 0,02 mM (500-1000 cpm/pmol) y se incubó durante 30 min a temperatura ambiente. Los ensayos se detuvieron mediante la adición de 5 \mul de ácido ortofosfórico 0,5 M (3%) y luego se recolectaron en placas Unifilter P81 y se lavaron con ácido ortofosfórico 50 mM. El recuento de las placas de filtro se realizó después en un contador de centelleo.

Los resultados de la Tabla 3 se expresan como porcentaje de los controles con DMSO solo (media de muestras por duplicado \pm la desviación típica de la media).

TABLA 3

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Se sobreentiende que los ejemplos y realizaciones descritos en la presente memoria tienen fines únicamente ilustrativos y que las personas especialistas en la técnica pensarán diversas modificaciones o cambios a la vista de los mismos y que estarán dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

1. Un compuesto de Fórmula I:

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o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; en la que:

R^{4} se selecciona entre el grupo constituido por:

: metilo, etilo, CF_{3}, CH_{2}F, CHF_{2} y CH_{2}OH;

R^{5} es H o metilo;

J está ausente o es un alquileno C_{1}-C_{6};

R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un alquilo C_{1}-C_{6}, un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros y un fenilo;

R^{6} se selecciona entre el grupo constituido por: H, halo, un fenilo y un alquilo C_{1}-C_{3};

R^{2} es:

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o

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R^{10} es un alquilo C_{1}-C_{6} o H;

R^{12} es un alquilo C_{1}-C_{6} o un alquilen C_{1}-C_{3}-R^{13},

R^{13} es un piridinilo o un fenilo; y

R^{14} es un alquilo C_{1}-C_{6} o H.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{4} es un metilo, R^{5} es H, y R^{2} es:

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3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R^{12} es un alquilen C_{1}-C_{3}-R^{13} y R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}.

4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que dicho compuesto es ácido 4-(4,8-dimetil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-(1-fenil-etil)-1H-pirrol-2-carboxílico.

5. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R^{12} es un alquilen C_{1}-C_{3}-R^{13} y R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros y fenilo.

6. El compuesto de la reivindicación 5, en el que dicho compuesto se selecciona entre el grupo constituido por:

7. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R^{12} es un alquilo C_{1}-C_{6} y R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}.

8. El compuesto de la reivindicación 7, en el que dicho compuesto se selecciona entre el grupo constituido por:

ácido 4-[6-bromo-8-(2-metoxi-etil)-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino]-1-metil-1H-
pirrol-2-carboxílico; y

ácido 4-(6-cloro-8-etil-4-metil-7-oxo-7,8-dihidro-pirido[2,3-d]pirimidin-2-ilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico.

9. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R^{12} es un alquilo C_{1}-C_{6} y R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros y fenilo.

10. El compuesto de la reivindicación 9, en el que dicho compuesto se selecciona entre el grupo constituido por:

11. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{4} es metilo, y R^{2} es:

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12. El compuesto de la reivindicación 11, en el que R^{8} es un alquilo C_{1}-C_{6}.

13. El compuesto de la reivindicación 11, en el que R^{8} se selecciona entre el grupo constituido por: un cicloalquilo C_{3}-C_{8}, un heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros, un heteroarilo de 5 ó 6 miembros y fenilo.

14. Uso de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad mediada por PI3K, donde dicha enfermedad mediada por PI3K se selecciona entre el grupo constituido por:

enfermedades respiratorias, bronquitis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, hipertensión, trombosis venosa profunda, apoplejía, infarto de miocardio, angina inestable, tromboembolia, embolia pulmonar, enfermedades trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusiones trombóticas periféricas, enfermedad de las arterias coronarias, cáncer, cáncer de mama, glioblastoma, carcinoma endometrial, carcinoma hepatocelular, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de pulmón de células escamosas, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer cervical, leucemia, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos y diabetes tipo II.

15. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno en mamíferos, seleccionándose el trastorno entre cáncer, cáncer de mama, glioblastoma, carcinoma endometrial, carcinoma hepatocelular, cáncer de colon, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células renales, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de pulmón de células escamosas, glioma, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer cervical, leucemia, linfoma celular, trastornos linfoproliferativos.

16. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de artritis reumatoide en mamíferos.

17. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad pulmonar obstructiva crónica en mamíferos.