ES2296979T3 - Fluoropirrolidinas como inhibidores de dipeptidil peptidasa. - Google Patents

Fluoropirrolidinas como inhibidores de dipeptidil peptidasa. Download PDF

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Darryl Lynn Mcdougald
Amarjit Sab Randhawa
Steven Michael Reister
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): incluyendo sus sales y solvatos, en donde X es F o H; R1 y R2 son iguales y son cada uno arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y R3 es H o alquilo; donde el término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. El término "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático, que incluye sistemas condensados en los que el anillo(s) puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C1-C6, a través del cual puede estar unido el grupo arilo; el término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillo aromático monocíclico o a un sistema de anillo aromático bicíclico condensado que comprende dos anillos aromáticos, en donde los anillos heteroarilo contienen uno o más átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, en donde los N-óxidos, óxidos de azufre y dióxidos son sustituciones de heteroátomos permisibles, y los anillos pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C1-C6, a través del cual puede estar unido el grupo heteroarilo; "opcionalmente sustituido" denota una sustitución opcional, una o más veces, con acilo; alquilo; alquenilo; alquinilo; alquilsulfonilo; alcoxi; ciano; halógeno; haloalquilo; hidroxi; nitro; arilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilo, que puede además estar sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; arilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; ariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; -R''OR''R4; o -NR4R5; donde para cada caso R'' es alquileno, alquenileno o alquinileno, y R4 y R5 se seleccionan cada uno independientemente entre H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o heteroarilsulfonilo, donde cada aparición de dicho arilo o heteroarilo puede estar sustituida con uno o más acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro, o R4 y R5 pueden combinarse para formar un anillo, que opcionalmente tiene heteroátomos adicionales, que opcionalmente tiene uno o más grados de insaturación y que opcionalmente puede sustituirse adicionalmente con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro.

Description

Fluoropirrolidinas como inhibidores de dipeptidil peptidasa.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que inhiben las dipeptidil peptidasas, tales como II (DPP-II) y IV (DPP-IV), a métodos para su producción y a su utilidad terapéutica.
Antecedentes de la invención
La dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) es una serina proteasa que escinde la post-prolina/alanina que se halla en diversos tejidos del organismo, incluyendo riñones, hígado e intestino. Se cree que la DPP-IV regula la actividad de múltiples péptidos fisiológicamente importantes que incluyen, aunque sin limitarse a ello, GLP1, GIP, GLP2, GRP, péptido intestinal vasoactivo, péptido histidina metionina, PYY, sustancia P, beta-casomorfina, NPY, PACAP38, prolactina, gonadotropina coriónica, aprotinina, péptido del lóbulo intermedio tipo corticotropina, péptido activador de adenilil ciclasa pituitaria, (Tyr)melanostatina, LD78beta(3-70), RANTES, eotaxin procolipasa, enterostatina, vasostatina 1, endomorfina, morficeptina, factor derivado de las células estromales, quimioquina derivada de macrófagos, proteína quimiotáctica de los granulocitos 2 y GHRH/GRF. Como ejemplos del valor terapéutico de la DPP-IV, se cree que la DPP-IV está implicada en una diversidad de enfermedades metabólicas, gastrointestinales, víricas e inflamatorias que incluyen, aunque sin limitación, diabetes, obesidad, hiperlipidemia, trastornos dermatológicos o de las membranas mucosas, psoriasis, malestar intestinal, constipación, trastornos autoinmunitarios tales como encefalomielitis, trastornos mediados por complementos tales como glomerulonefritis, lipodistrofia y daño hístico, enfermedades psicosomáticas, depresivas y neuropsiquiátricas tales como ansiedad, depresión, insomnio, esquizofrenia, epilepsia, espasmos y dolor crónico, infección por VIH, alergias, inflamación, artritis, rechazo a trasplantes, hipertensión arterial, insuficiencia cardíaca congestiva, tumores y abortos inducidos por estrés, por ejemplo abortos murinos mediados por citocinas. Por ejemplo, la DPP-IV, también conocida como CD26, media la activación de las células T y la infección por el VIH (Ohtsuki et al., 2000). Las células T que expresan DPP-IV/CD26 se infectan preferencialmente y disminuyen en individuos infectados con VIH (Ohtsuki et al., 2000). Los inhibidores de DPP-IV han demostrado efectos antinflamatorios en modelos animales de artritis (Tanaka et al, 1997). Además, se ha demostrado que la inhibición de DPP-IV prolonga la supervivencia al trasplante cardíaco (Korom et al., 1997).
Los estudios in vitro sugieren que la expresión de DPP-IV/CD26 se correlaciona con la progresión tumoral de melanomas malignos en la piel (Van den Oord, 1998). Además, se cree que la DPP-IV regula el metabolismo, escindiendo la penúltima prolina/alanina en el extremo amino de polipéptidos (Mentlein, 1999), como los péptidos del tipo glucagón (GLP) y el neuropéptido Y (NPY).
Más específicamente, los GLP ayudan a metabolizar la glucosa y, por ende, la regulación de los GLP probablemente debería ser beneficiosa en el tratamiento de trastornos metabólicos como la diabetes. La diabetes, por ejemplo la diabetes de tipo 2 (también llamada diabetes mellitus no insulino dependiente (NIDDM por sus siglas en inglés) o de inicio en la adultez), produce niveles elevados de glucosa en la sangre debido a las insuficiencias absolutas o relativas de la insulina. La diabetes de tipo 2 es la forma más común de diabetes, que equivale al 90% de los casos, o a aproximadamente 16 millones de estadounidenses. La mayoría de los diabéticos de tipo 2 producen cantidades variables, algunas veces normales, de insulina, pero tienen anormalidades en las células hepáticas y musculares que se resisten a sus acciones. La insulina se une a los receptores de las células, pero la glucosa no penetra, una condición que se conoce como resistencia a la insulina. Muchos diabéticos de tipo 2 parecen ser incapaces de segregar suficiente insulina para superar la resistencia a la insulina. El GLP-1 potencia la secreción de insulina. Por lo tanto, la regulación de GLP-1 se correlaciona con una regulación de la secreción de insulina. Además, el GLP-1 disminuye la producción de glucosa, el vaciamiento gástrico y la ingesta de alimentos (Deacon et al., 1995). Asimismo, el GLP-2 mantiene la integridad del epitelio de la mucosa intestinal a través de efectos en la movilidad gástrica, la absorción de nutrientes, proliferación y apoptosis de células de la cripta, y la permeabilidad intestinal (Drucker, 2001).
Los inhibidores de DPP-IV conservan la función del GLP-1 por un plazo más largo (Balka, 1999). Por lo tanto, los inhibidores de DPP-IV pueden promover saciedad, adelgazamiento y los efectos antidiabéticos del GLP-1 (Deacon et al., 1995; Holst y Deacon, 1998). Por ejemplo, la inhibición de DPP-IV con el compuesto conocido NVP-DPP728 aumenta las concentraciones en plasma de GLP-1 (2-36 amida) y mejora la tolerancia a la glucosa oral en ratas Zucker obesas. Véase, Diabetologia 42: 1324-1331). El GLP-1 administrado tanto por vía subcutánea como intravenosa se degrada rápidamente desde el extremo NH_{2} en pacientes diabéticos de tipo II y en sujetos sanos. Véase, Diabetes 44:1126, 1995.
Además, los inhibidores de DPP-IV conservan el GLP-2 por períodos de tiempo más largos y, en consecuencia, pueden ser útiles para tratar insuficiencias intestinales y trastornos de las membranas mucosas (Hartmann B et al., 2000). Augustyns et al. Eur. J. Med Chem., 1997, 32, 301-309 describen ciertas pirrolididas y sus relaciones estructura-actividad como inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV.
Si bien la DPP-IV es la proteasa predominante que regula el recambio de GLP, se puede observar una especificidad como inhibidor o sustrato similar con las proteasas relacionadas. Las serina proteasas relacionadas incluyen, aunque sin limitarse a ello, dipeptidil peptidasa-II (DPP-II), dipeptidil peptidasa IV beta, dipeptidil peptidasa 8, dipeptidil peptidasa 9, aminopeptidasa P, proteína activadora de fibroblastos alfa (seprasa), prolil tripeptidil peptidasa, prolil oligopeptidasa (endoproteinasa Pro-C), atractina (dipeptidil-aminopeptidasa soluble), acilaminoacil-peptidasa (N-acilpéptido hidrolasa; fMet aminopeptidasa) y Pro-X carboxipeptidasa lisosómica (angiotensinasa C, prolil carboxipeptidasa). Las metalopeptidasas que escinden la prolina que pueden compartir especificidad como inhibidor o sustrato similar a la DPP-IV incluyen la membrana Pro-X carboxipeptidasa (carboxipeptidasa P), enzima convertidora de angiotensina (Peptidil-dipeptidasa A multipeptidasa), colagenasa 1 (colagenasa intersticial; metaloproteinasa de matriz 1; MMP-1; Mcol-A), ADAM 10 (alfa-secretasa, desintegrina metaloproteinasa asociada a la mielina), neprilisina (atriopeptidasa; CALLA; CD10; endopeptidasa 24.11; encefalinasa), macrófago elastasa (metaloelastasa; metaloproteinasa de matriz 12; MMP-12], Matrilisina (metaloproteinasa de matriz 7; MMP-7) y neurolisina (endopeptidasa 24.16; endopeptidasa microsómica; oligopeptidasa mitocondrial). Véase http://merops.iapc.bbsrc.ac.uk/.
Además, más allá de las serina peptidasas mamíferas y de las metalopeptidasas que escinden prolina, otras proteasas no mamíferas pueden compartir especificidad como inhibidor o sustrato similar a la DPP-IV. Los ejemplos no limitativos de dichas serina proteasas no mamíferas incluyen prolil aminopeptidasa (prolil iminopeptidasa), prolil endopeptidasa de tipo serina específica de IgA 1 (IgA proteasa, Neisseria. Haemophilus), dipeptidil aminopeptidasa A (STE13) (Saccharomyces cerevisiae), dipeptidil aminopeptidasa B (hongo), homólogo de prolil oligopeptidasa (Pyrococcus sp.), oligopeptidasa B (proteinasa alcalina de Escherichia coli II, proteasa II), dipeptidil aminopeptidasa. B1 (Pseudomonas sp.), dipeptidil-peptidasa IV (bacteria), dipeptidil aminopeptidasa (Aureobacterium), dipeptidil-peptidasa IV (insecto), dipeptidil-peptidasa V, alergeno Tri t 4 (Trichophyton tonsurans), alanil DPP segregado (Aspergillus oryzae), peptidasa II-mes (Prosopis velutina) y serina proteasa bamboo (Pleioblastus hindsii). Los ejemplos no limitativos de dichas metalopeptidasas que escinden prolina no mamíferas incluyen penicilolisina (metaloendopeptidasa de ácido fúngico), peptidil-dipeptidasa específica de prolina (Streptomyces), coccolisina (gelatinasa, Enterococcus faecalis), aminopeptidasa Ey, (yema de huevo de gallina) (apdE g.p.; Gallus gallus domesticus), gametolisina (proteasa degradante de la pared celular Chlamydomonas) y también metaloproteasas que escinden prolina de veneno de serpiente. Véase http://merops.iapc.bbsrc.ac.uk/ para mayor referencia.
La dipeptidil peptidasa II (DPP II) es una serina proteasa localizada en los lisosomas de las células, y se cree que está implicada en la degradación lisosómica y el recambio de las proteínas. El orden de expresión de la DPP-II es riñón >> testículo > o = corazón > cerebro > o = pulmón > bazo > músculo esquelético > o = hígado (Araki H et al., J Biochem (Tokio) 2001, 129:279-88). Esta expresión sugiere una posible utilidad en trastornos del riñón o trastornos asociados con los lisosomas. Los estudios de especificidad de sustrato indicaron que la DPP-II purificada hidroliza específicamente residuos alanina o prolina a pH ácido (4,5-5,5). La DPP-II tiene una homología de secuencia significativa y una especificidad de sustrato para la prolina dipeptidasa y la prolil carboxipeptidasa de células estables, lo que sugiere posibles funciones de superposición entre estas proteasas (Araki H et al., J Biochem (Tokio) 2001, 129:279-88).
La presente invención incluye nuevos inhibidores de DPP-II y/o DPP-IV, como también métodos para su uso terapéutico y métodos para su producción. Aunque sin limitación, se cree que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de una diversidad de enfermedades metabólicas, gastrointestinales, víricas e inflamatorias que incluyen, aunque sin limitarse a ello, diabetes, obesidad, hiperlipidemia, trastornos dermatológicos o de las membranas mucosas, psoriasis, malestar intestinal, constipación, trastornos autoinmunitarios tales como encefalomielitis, trastornos mediados por complementos como glomerulonefritis, lipodistrofia, y daño hístico, enfermedades psicosomáticas, depresivas y neuropsiquiátricas tales como ansiedad, depresión, esquizofrenia, epilepsia, espasmos y dolor crónico, infección por VIH, alergias, inflamación, artritis, rechazo a trasplantes, hipertensión arterial, insuficiencia cardíaca congestiva, tumores y abortos inducidos por estrés, por ejemplo, abortos murinos mediados por citocinas.
En comparación con otros inhibidores de dipeptidil peptidasa, los compuestos de la presente invención proporcionan mejor estabilidad, potencia, duración de la acción y/o perfiles de seguridad/toxicidad.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I):
1
incluyendo sus sales y solvatos, en donde
X es F o H;
R^{1} y R^{2} son iguales y son cada uno arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y
R^{3} es H o alquilo;
donde el término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución.
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El término "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático, que incluye sistemas condensados en los que el anillo(s) puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede estar unido el grupo arilo;
el término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillo aromático monocíclico o a un sistema de anillo aromático bicíclico condensado que comprende dos anillos aromáticos, en donde los anillos heteroarilo contienen uno o más átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, en donde los N-óxidos, óxidos de azufre y dióxidos son sustituciones de heteroátomos permisibles, y los anillos pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede estar unido el grupo heteroarilo; "opcionalmente sustituido" denota una sustitución opcional, una o más veces, con acilo; alquilo; alquenilo; alquinilo; alquilsulfonilo; alcoxi; ciano; halógeno; haloalquilo; hidroxi; nitro; arilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilo, que puede además estar sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; arilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; ariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; -R'OR'R^{4}; o -NR^{4}R^{5}; donde para cada caso R' es alquileno, alquenileno o alquinileno, y R^{4} y R^{5} se seleccionan cada uno independientemente entre H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o heteroarilsulfonilo, donde cada aparición de dicho arilo o heteroarilo puede estar sustituida con uno o más acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro, o R^{4} y R^{5} pueden combinarse para formar un anillo, que opcionalmente tiene heteroátomos adicionales, que opcionalmente tiene uno o más grados de insaturación y que opcionalmente puede sustituirse adicionalmente con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro.
Si bien no es limitativo, los sustituyentes opcionales preferidos incluyen uno o más de alquilo, alcoxi, ariloxi, halógeno, haloalquilo, ciano, alquilsulfonilo o arilo. Más preferiblemente, los sustituyentes opcionales incluyen uno o más de alquilo C_{1}-C_{6}, alcoxi C_{1}-C_{6}, fenoxi, benzoxi, flúor, cloro, haloalquilo C_{1}-C_{6}, ciano, alquilsulfonilo C_{1}-C_{6}, fenilo, o bencilo.
En una realización, R^{1} y R^{2} son cada uno arilo, y R^{3} es H. Preferiblemente, cada arilo es fenilo. Más preferiblemente, cada fenilo está sustituido con halógeno. Más preferiblemente, cada halógeno es flúor, más preferiblemente 4-flúor.
En una realización, preferiblemente el grupo NH_{2} representado está en la posición cis a la cabeza del nitrilo representado. En otra realización, preferiblemente el grupo NH_{2} representado está en la posición trans a la cabeza del nitrilo representado.
Preferiblemente, X es H. Preferiblemente, el F representado está en la posición cis al nitrilo representado.
Los compuestos particularmente preferidos de la presente invención incluyen:
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2 
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Los compuestos particularmente preferidos se seleccionan entre:
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo;
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo.
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Otro aspecto de la presente invención incluye formulaciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de la presente invención. Preferiblemente, la formulación farmacéutica incluye además un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la presente invención incluye el uso de un compuesto de la presente invención en la elaboración de un medicamento para la inhibición de una proteasa que escinde la post prolina/alanina. Preferiblemente, la proteasa que escinde la post-prolina/alanina es una serina proteasa. Más preferiblemente, la serina proteasa es una dipeptidil peptidasa. Más preferiblemente, la dipeptidil peptidasa es DPP-II o DPP-IV.
Otro aspecto de la presente invención incluye el uso de un compuesto de la presente invención en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos metabólicos, trastornos gastrointestinales, trastornos víricos, trastornos inflamatorios, diabetes, obesidad, hiperlipidemia, trastornos dermatológicos o de las membranas mucosas, psoriasis, malestar intestinal, constipación, trastornos autoinmunitarios, encefalomielitis, trastornos mediados por complementos, glomerulonefritis, lipodistrofia, daño hístico, trastornos psicosomáticos, depresivos y neuropsiquiátricos, infección por VIH, alergias, inflamación, artritis, rechazo a trasplantes, hipertensión arterial, insuficiencia cardíaca congestiva, tumores y abortos inducidos por estrés. Preferiblemente, el medicamento es para el tratamiento o la profilaxis de la diabetes.
Otro aspecto de la presente invención incluye un compuesto de la presente invención para uso como una sustancia terapéutica activa.
Descripción detallada de la realización preferida
El término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Los ejemplos de "alquilo" incluyen, pero sin limitarse a ellos, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, n-pentilo, isobutilo y similares.
Tal como se usa en toda la memoria, el número preferido de átomos de carbono estará representado, por ejemplo, por la frase "alquilo C_{x}-C_{y}" que se refiere a un grupo alquilo, según se define en esta memoria, que contiene el número especificado de átomos de carbono. Se aplicará también terminología similar para otros intervalos preferidos.
El término "alquileno" se refiere a un radical hidrocarbonado alifático de cadena recta o ramificada divalente que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Un ejemplo de "alquileno" incluye, sin limitación, metileno, a saber, -CH_{2}-.
El término "alquenilo" se refiere a un hidrocarburo alifático de cadena recta o ramificada, que contiene uno o más dobles enlaces carbono a carbono que pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Los ejemplos incluyen, aunque sin limitación, vinilo y similares.
Tal como se emplea en esta memoria, el término "alquenileno" se refiere a un radical hidrocarbonado alifático de cadena recta o ramificada divalente, que contiene uno o más dobles enlaces carbono a carbono, que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Un ejemplo de "alquenileno" incluye, sin limitación, vinileno, a saber, -CH=CH-.
Tal como se emplea en esta memoria, el término "alquinilo" se refiere a un hidrocarburo alifático recto o ramificado que contiene uno o más triples enlaces, que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Los ejemplos de "alquinilo", tal como se emplea en esta memoria, incluyen, sin limitación, etinilo y similares.
Tal como se emplea en esta memoria, el término "alquinileno" se refiere a un radical hidrocarbonado alifático de cadena recta o ramificada divalente, que contiene por lo menos un triple enlace carbono a carbono, que puede además estar sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución. Un ejemplo de "alquinileno" incluye, sin limitación, etinileno, a saber, -C\equivC-.
El término "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático, tal como un sistema de anillo benceno opcionalmente sustituido, como fenilo. El término abarca sistemas condensados en los que uno o más anillos benceno opcionalmente sustituidos forman, por ejemplo, sistemas de anillo antraceno, fenantreno o naftaleno. El término incluye anillo(s) opcionalmente sustituido(s), permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, tal como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede unirse el grupo arilo. Los ejemplos de grupos "arilo" incluyen, aunque sin limitación, fenilo, bencilo, 2-naftilo, 1-naftilo, bifenilo, como también sus derivados sustituidos.
El término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillo aromático monocíclico, o a un sistema de anillo aromático bicíclico condensado, que comprende dos o más anillos aromáticos. Estos anillos heteroarilo contienen uno o más átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, en donde los N-óxidos, óxidos de azufre y dióxidos son sustituciones de heteroátomos que se pueden permitir, y los anillos pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grados de sustitución. El término incluye anillo(s) opcionalmente sustituido(s), permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, tal como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede unirse el grupo heteroarilo. Son ejemplos de grupos "heteroarilo", como se usan en este documento, furano, tiofeno, pirrol, imidazol, pirazol, triazol, tetrazol, tiazol, oxazol, isoxazol, oxadiazol, tiadiazol, isotiazol, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, benzofurano, benzotiofeno, indol, indazol y similares.
Tal como se emplea en esta memoria, el término "cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillo hidrocarbonado mono o bicíclico, que puede además estar sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y que opcionalmente incluye un enlazador alquileno a través del cual puede estar unido el cicloalquilo. Los grupos "cicloalquilo" ilustrativos, aunque sin limitación, son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Cuando se sustituyan, una ubicación preferida para el sustituyente en los grupos cicloalquilo de la presente invención es la "posición 1". Para ilustrar, sin limitación, una ubicación preferida para un sustituyente se representa a continuación con el sustituyente denominado "R":
3
El término "cicloalquilo" incluye también sistemas de anillo puente o condensados, como hidrindano, decalina o adamantilo. Para facilidad de referencia, también se incluyen dentro del término los sistemas condensados cicloalquilo/arilo, por ejemplo, un cicloalquilo, tal como ciclohexilo, se condensa con un anillo aromático, tal como un anillo benceno, para formar grupos tales como
4
Tal como se emplea en esta memoria, el término "heterocíclico" o el término "heterociclilo" se refieren a un anillo heterocíclico, preferiblemente de tres a doce miembros, que está saturado o tiene uno o más grados de insaturación. Estos anillos heterocíclicos contienen uno o más heteroátomos, como átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, donde los N-óxidos, óxidos de azufre y dióxidos son sustituciones de heteroátomos permisibles. Tal como se emplean en esta memoria, los grupos heterocíclicos pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grado de sustitución, y también incluyen un enlazador alquileno opcional, tal como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede unirse el grupo heterociclilo. Dicho anillo puede estar opcionalmente condensado con uno o más de otros anillos "heterocíclicos", anillo(s) arilo o anillo(s) cicloalquilo. Los ejemplos de "heterocíclico" incluyen, pero sin limitación, tetrahidrofurano, pirano, 1,4-dioxano, 1,3-dioxano, piperidina, pirrolidina, morfolina, tetrahidrotiopirano, tetrahidrotiofeno y similares.
El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo, según se define en la presente memoria, que está sustituido con por lo menos un halógeno. Los ejemplos no limitativos de grupos "haloalquilo" incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo y t-butilo independientemente sustituidos con uno o más halógenos, p. ej., fluoro, cloro, bromo, y/o yodo. El término "haloalquilo" debe interpretarse que incluye dichos sustituyentes como perfluoroalquilo, por ejemplo, trifluorometilo, CF_{3} y similares.
Como se emplea en esta memoria, el término "haloalcoxi" se refiere al grupo -OR_{a}, en el que R_{a} es haloalquilo, según se define en la presente memoria.
Como se emplea en esta memoria, el término "alcoxi" se refiere al grupo -OR_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se emplea en esta memoria, el término "ariloxi" se refiere al grupo -OR_{b}, en el que R_{b} es arilo, como se define en la presente memoria.
Como ejemplo, y para aplicar en toda la memoria, ya que el término "arilo" incluye grupos arilo opcionalmente sustituidos, el término "ariloxi" incluye grupos ariloxi opcionalmente sustituidos. La sustitución opcional se aplica a todos los términos aplicables definidos en esta memoria. Además, según se definió anteriormente, el término "arilo" incluye grupos arilo unidos a alquileno. Por lo tanto, debe considerarse que los términos tales como "ariloxi" y similares incluyen grupos arilo unidos a alquileno. A modo de ejemplo y no de limitación, un grupo ariloxi puede ser -OR_{b}, donde R_{b} es bencilo.
Como se emplea en esta memoria, el término "heteroariloxi" se refiere al grupo -OR_{b}, en el que R_{b} es heteroarilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "alcoxicarbonilo" se refiere al grupo -C(O)OR_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "ariloxicarbonilo" se refiere al grupo -C(O)OR_{a}, en el que R_{a} es arilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroariloxicarbonilo" se refiere al grupo -C(O)OR_{a}, en el que R_{a} es heteroarilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "alcoxitiocarbonilo" se refiere al grupo -C(O)OR_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "ariloxitiocarbonilo" se refiere al grupo -G(S)OR_{a}, donde R_{a} es arilo, tal como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroariloxitiocarbonilo" se refiere al grupo -C(S)OR_{a}, en el que R_{a} es heteroarilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "oxo" se refiere al grupo =O.
Como se usa en esta memoria, el término "mercapto" se refiere al grupo -SH.
Como se usa en esta memoria, el término "tio" se refiere al grupo -S-.
Como se usa en esta memoria, el término "sulfinilo" se refiere al grupo -S(O)-.
Como se usa en esta memoria, el término "sulfonilo" se refiere al grupo -S(O)_{2}-.
Como se usa en esta memoria, el término "alquiltio" se refiere al grupo -SR_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "ariltio" se refiere al grupo -SR_{b}, en el que R_{b} es arilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroariltio" se refiere al grupo -SR_{b}, en el que R_{b} es heteroarilo, como se define en esta memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "alquilsulfinilo" se refiere al grupo -S(O)R_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "arilsulfinilo" se refiere al grupo -S(O)R_{b}, en el que R_{b} es arilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroarilsulfinilo" se refiere al grupo -S(O)R_{b}, en el que R_{b} es heteroarilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "alquilsulfonilo" se refiere al grupo -S(O)_{2}R_{a}, en el que R_{a} es alquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "cicloalquilsulfonilo" se refiere al grupo -S(O)_{2}R_{a}, en el que R_{a} es cicloalquilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "arilsulfonilo" se refiere al grupo -S(O)2R_{b}, en el que R_{b} es arilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroarilsulfonilo" se refiere al grupo -S(O)2R_{b}, en el que R_{b} es heteroarilo, como se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "aminosulfonilo" se refiere al grupo -S(O)_{2}NH_{2}.
Como se usa en esta memoria, el término "ciano" se refiere al grupo CN.
Como se usa en esta memoria, el término "cianoalquilo" se refiere al grupo -R_{a}CN, en el que R_{a} es un alquileno según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "carboxi" se refiere al grupo -COOH.
Como se usa en esta memoria, el término "carbamoílo" se refiere al sustituyente -C(O)NH_{2}.
Como se usa en esta memoria, el término "alquilcarbamoílo" se refiere al grupo -C(O)N(R_{a})_{2}, en el que un Ra es alquilo y el otro R_{a} es independientemente H o alquilo.
Como se usa en esta memoria, el término "arilcarbamoílo" se refiere al grupo -C(O)N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es arilo y el otro R_{a} es independientemente H o arilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroarilcarbamoílo" se refiere al grupo -C(O)N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es heteroarilo y el otro R_{a} es independientemente H o heteroarilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "carbamoílo" se refiere al grupo -C(S)NH_{2}.
Como se usa en esta memoria, el término "alquiltiocarbamoílo" se refiere al grupo -C(S)N(R_{a})_{2}, en el que un Ra es alquilo y el otro R_{a} es independientemente H o alquilo.
Como se usa en esta memoria, el término "ariltiocarbamoílo" se refiere al grupo -C(S)N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es arilo y el otro R_{a} es independientemente H o arilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroariltiocarbamoílo" se refiere al grupo -C(S)N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es heteroarilo y el otro R_{a} es independientemente H o heteroarilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "amino" se refiere al grupo -NH_{2}.
Como se usa en esta memoria, el término "alquilamino" se refiere al grupo -N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es alquilo y el otro R_{a} es independientemente H o alquilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "cicloalquilamino" se refiere al grupo -N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es cicloalquilo y el otro R_{a} es independientemente H o cicloalquilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "arilamino" se refiere al grupo -N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es arilo y el otro R_{a} es independientemente H o arilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "heteroarilamino" se refiere al grupo -N(R_{a})_{2}, en el que un R_{a} es heteroarilo y el otro R_{a} es independientemente H o heteroarilo, según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "acilo" se refiere al grupo -C(O)R_{a}, en el que R_{a} es alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo, cada uno según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "tioacilo" se refiere al grupo -C(S)R_{a}, en el que R_{a} es alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo, cada uno según se define en la presente memoria.
Como se usa en esta memoria, el término "hidroxi" se refiere al grupo -OH.
Como se usa en esta memoria, el término "hidroxialquilo" se refiere al grupo -R_{a}OH, en el que R_{a} es un alquileno, según se define en la presente memoria.
A su vez, como se usa en toda la memoria, la frase "opcionalmente sustituido" denota una sustitución opcional, una o más veces, como lo definen los términos de la presente memoria, con acilo; alquilo; alquenilo; alquinilo; alquilsulfonilo; alcoxi; ciano; halógeno; haloalquilo; hidroxi; nitro; arilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilo, que puede además estar sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; arilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; ariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; -R'OR'R^{4}; o -NR^{4}R^{5}; donde para cada caso R' es alquileno, alquenileno o alquinileno, y R^{4} y R^{5} se seleccionan cada uno independientemente entre H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o heteroarilsulfonilo, donde cada aparición de dicho arilo o heteroarilo puede estar sustituida con uno o más acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro, o R^{4} y R^{5} pueden combinarse para formar un anillo, que opcionalmente tiene heteroátomos adicionales, que opcionalmente tiene uno o más grados de insaturación y que opcionalmente puede sustituirse adicionalmente con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro.
Los compuestos de la presente invención pueden tener la capacidad de cristalizarse en más de una forma, una característica conocida como polimorfismo. Todas las formas polimorfas ("polimorfismos") están dentro del alcance de la presente invención. Generalmente, el polimorfismo puede ocurrir como respuesta a cambios en la temperatura o la presión o en ambas y también puede ser el resultado de variaciones en el proceso de cristalización. Los polimorfismos se pueden distinguir por varias características físicas conocidas en la técnica tales como modelos de difracción de rayos X, solubilidad y punto de fusión.
Ciertos de los compuestos descritos en este documento pueden contener uno o más centros quirales, o pueden existir de otra manera en forma de estereoisómeros múltiples. El alcance de la presente invención incluye estereoisómeros puros como también mezclas de estereoisómeros, como enantiómeros/diastereómeros purificados o mezclas enantioméricamente/diastereoméricamente enriquecidas. También se incluyen dentro del alcance de la invención los isómeros individuales de los compuestos representados per se, así como cualquier mezcla total o parcialmente equilibrada de los mismos. La presente invención también cubre los isómeros individuales de los compuestos representados por las fórmulas anteriores como mezclas con sus isómeros en los que uno o más centros quirales están invertidos.
Como se observó anteriormente, la presente invención incluye sales y solvatos de los compuestos de la presente invención. Las sales incluyen sales de adición, sales de metal o sales de amonio opcionalmente alquiladas. Los ejemplos de dichas sales incluyen clorhídrica, bromhídrica, yodhídrica, fosfórica, sulfúrica, trifluoroacética, tricloroacética, oxálica, maleica, pirúvica, malónica, succínica, cítrica, mandélica, benzoica, cinámica, metanosulfónica, etanosulfónica, pícrica y similares. Otras sales incluyen litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Incluso otras sales incluyen sal de acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato cálcico, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glucolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidroxinaftoato, isetionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, maleato de monopotasio, mucato, napsilato, nitrato, N-metilglucamina, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, potasio, salicilato, estearato de sodio, subacetato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietyoduro, trimetilamonio y valerato. Se hace referencia también al Journal of Pharmaceutical Science, 1997, 66, 2, con relación a las sales.
Como se usa en esta memoria, el término "solvato" se refiere a un complejo de estequiometría variable formado por un soluto o una sal del mismo y un disolvente. Dichos disolventes, para los fines de la invención, no deben interferir con la actividad biológica del soluto. Los ejemplos de disolventes adecuados incluyen, pero sin limitación, agua, metanol, etanol y ácido acético. Preferiblemente, el disolvente usado es un disolvente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptable adecuados incluyen agua, etanol y ácido acético.
Si bien los compuestos de la presente invención pueden administrarse como el compuesto químico bruto, preferiblemente los compuestos de la presente invención se presentan como un ingrediente activo dentro de una formulación farmacéutica, como se conoce en la técnica. Por consiguiente, la presente invención también incluye una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o su sal o solvato, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Opcionalmente, pueden incluirse también otros ingredientes terapéuticos y/o profilácticos ("activos") en la formulación farmacéutica. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden combinarse con otros agentes antidiabéticos, como uno o más de los siguientes agentes: insulina, inhibidores de \alpha-glucosidasa, biguanidas, secretagogos de insulina o sensibilizantes de insulina. Los ejemplos no limitativos de inhibidores de \alpha-glucosidasa incluyen acarbosa, emiglitato, miglitol y voglibosa. Los ejemplos no limitativos de biguanidas incluyen metformina, buformina y fenformina. Los ejemplos no limitativos de secretagogos de insulina incluyen sulfonilureas; los ejemplos no limitativos de sensibilizantes de insulina incluyen ligandos de los receptores activados por el proliferador de peroxisoma (PPAR), como agonistas de PPAR-\gamma, por ejemplo Actos^{TM} y Avandia^{TM}.
Las formulaciones de la presente invención incluyen aquellas especialmente formuladas para administración por vía oral, bucal, parental, transdérmica, por inhalación, intranasal, transmucosa, por implante o rectal. Entre la diversidad de formas de administración, típicamente se prefiere la administración oral. Para la administración oral, los comprimidos, cápsulas y comprimidos oblongos pueden contener excipientes convencionales tales como aglutinantes, cargas, lubricantes, desintegrantes y/o humectantes. Los ejemplos no limitativos de aglutinantes incluyen jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón o polivinilpirrolidona (PVP). Los ejemplos no limitativos de cargas incluyen, por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa microcristalina, almidón de maíz, fosfato de calcio o sorbitol. Los ejemplos no limitativos de lubricantes incluyen, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice. Los ejemplos no limitativos de desintegrantes incluyen, por ejemplo, almidón de patata o sal sódica de glicolato de almidón. Un ejemplo no limitativo de un humectante incluye laurilsulfato sódico. Los comprimidos se pueden recubrir además de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica.
Alternativamente, los compuestos de la presente invención pueden incorporarse en preparaciones orales líquidas tales como suspensiones, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleaginosos. Además, las formulaciones que contienen dichos compuestos pueden presentarse en forma de producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Las preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales. Los ejemplos no limitativos de dichos aditivos incluyen agentes de suspensión, tales como jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas. Además, agentes emulgentes tales como lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles) tales como aceite de almendra, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol o alcohol etílico. A su vez, pueden incorporarse conservantes, tales como p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido ascórbico a la preparación. Tales preparaciones también se pueden formular como supositorios, por ejemplo, que contienen bases convencionales para supositorios tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Los compuestos de la invención se pueden formular también para la administración parenteral por inyección o infusión continua. Las formulaciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Como alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstituirse con un vehículo adecuado, p. ej. agua estéril apirógena, antes de su uso.
Las formulaciones de acuerdo con la invención también se pueden formular como una preparación de medicamento para liberación lenta. Estas formulaciones de actuación prolongada pueden administrarse mediante implantación, por ejemplo, por vía subcutánea o intramuscular, o mediante inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos de la invención pueden formularse con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados, por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable, o con resinas de intercambio iónico, o como derivados muy poco solubles, por ejemplo, como una sal muy poco soluble.
Las formulaciones farmacéuticas se pueden presentar en formas de dosificación unitaria que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Dicha unidad puede contener determinadas cantidades de un compuesto de la invención, dependiendo de la afección que se esté tratando, la vía de administración, la edad, el peso y el estado del paciente. Los ejemplos de dichas cantidades incluyen la formulación que contiene aproximadamente 0,1 a aproximadamente 99,9% de ingrediente activo. Las formulaciones en dosis unitarias preferidas son las que contienen una dosis predeterminada, como una dosis diaria, o su fracción apropiada, de un ingrediente activo. Dichas formulaciones farmacéuticas pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica.
Como se usa en esta memoria, la expresión "cantidad eficaz" significa aquella cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que desea, por ejemplo, un investigador o médico. Además, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, cuando se compara con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, da como resultado una mejora en el tratamiento, curación, prevención o mejoría de una enfermedad, trastorno, o efecto secundario, o una reducción en el ritmo de avance de una enfermedad o trastorno. La expresión también incluye en su alcance cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.
La cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención dependerá de una serie de factores que incluyen, por ejemplo, la edad y el peso del animal, la condición precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y la vía de administración. La eficacia terapéutica quedará a criterio del médico o veterinario. Una cantidad eficaz de una sal o solvato de la presente invención se puede determinar como una proporción de la cantidad eficaz del compuesto en sí mismo. La dosis puede variar, dependiendo de la inhibición apropiada de DPP-IV para los fines del tratamiento o la profilaxis de una diversidad de enfermedades metabólicas, gastrointestinales, víricas e inflamatorias que incluyen, aunque sin limitarse a ellas, diabetes, obesidad, hiperlipidemia, trastornos dermatológicos o de las membranas mucosas, psoriasis, malestar intestinal, constipación, trastornos autoinmunitarios tales como encefalomielitis, trastornos mediados por complementos tales como glomerulonefritis, lipodistrofia y daño hístico, trastornos psicosomáticos, depresivos y neuropsiquiátricos, infección por VIH, alergias, inflamación, artritis, rechazo a trasplantes, hipertensión arterial, insuficiencia cardíaca congestiva, tumores y abortos inducidos por estrés, por ejemplo abortos mediados por citocinas en murinos.
Cuando un compuesto de la invención se administra en el intervalo de dosificación mencionado anteriormente, no están indicados ni se esperan efectos toxicológicos.
Los siguientes ejemplos ilustran los aspectos de la presente invención, pero no deben interpretarse como limitaciones. Como se usan en este documento, los símbolos y convenciones usados en estos procedimientos, esquemas y ejemplos son coherentes con los usados en la bibliografía científica contemporánea, por ejemplo, el Journal of the American Chemical Society o el Journal of Biological Chemistry. A menos que se indique lo contrario, todos los materiales de partida se obtuvieron de proveedores comerciales y se utilizaron sin más purificación.
Los espectros ^{1}H RMN se registraron en un instrumento Varian VXR-300, un Varian Unity-300, un Varian Unity-400, o un General Electric QE-300. Los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (ppm, unidades \delta). Las constantes de acoplamiento están en unidades de hertzios (Hz). Los patrones de desdoblamiento describen multiplicidades aparentes y se designan como s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuadruplete), m (multiplete), br (ancho).
Los espectros de masas (MS) de baja resolución se registraron en un espectrofotómetro JOEL JMS-AX505HA, JOEL SX-102 o en un SCIEX-APliii; se obtuvieron MS de alta resolución usando un espectrómetro JOEL SX-102A. Todos los espectros de masas se realizaron con métodos de ionización por electronebulización (ESI), ionización química (CI), impacto electrónico (EI) o bombardeo rápido de átomos (FAB). Se obtuvieron espectros de infrarrojo (IR) en un espectrómetro Nicolet 510 FT-IR usando una celda de NaCl de 1 mm. Todas las reacciones se monitorizaron por cromatografía en capa fina sobre placas de gel de sílice de 0,25 mm de E. Merck (60F-254), se visualizaron con luz UV, solución etanólica al 5% de ácido fosfomolíbdico o p-anisaldehído. La cromatografía en columna de resolución instantánea se realizó en gel de sílice (malla 230-400, Merck). Las rotaciones ópticas se obtuvieron usando un polarímetro Perkin Elmer Modelo 241. Los puntos de fusión se determinaron usando un aparato Mel-Temp II y no están corregidos.
Se incluyen los nombres IUPAC para identificar mejor los compuestos de la presente invención. Los nombres IUPAC expuestos en la presente memoria no deberán limitar el alcance de la presente invención en modo alguno.
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Parte experimental
De acuerdo con la presente invención y como se indica a continuación, una realización de los compuestos de la presente invención se puede preparar haciendo reaccionar un compuesto de fórmula II con \alpha- o \beta-amino carboxilatos o con un carboxilato activado con \alpha- o \beta-amino, ambos designados en la presente memoria en general como aminocarboxilatos, bajo condiciones de acoplamiento estándar, por ejemplo, HATU, DMF, base de Hunig.
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5
Más específicamente, se puede hacer reaccionar un compuesto de fórmula II con un aminocarboxilato, donde el aminocarboxilato está adecuadamente protegido, por ejemplo en el \alpha-nitrógeno, con un grupo protector adecuado tal como, por ejemplo, un grupo protector t-butil carboxi.
En una realización alternativa, se puede hacer reaccionar un compuesto de fórmula 11 con un carboxilato activado por amino, como por ejemplo, éster de N-hidroxisuccinimida o cloruro de ácido, donde el carboxilato activado por amino está adecuadamente protegido, por ejemplo, en el \alpha-nitrógeno con un grupo protector adecuado, como por ejemplo un grupo protector t-butil carboxi. La eliminación del grupo protector bajo condiciones adecuadas, como por ejemplo ácido trifluoroacético para la eliminación del t-butil carboxi, genera entonces los compuestos de fórmula (I).
Para más detalles sobre la preparación de aminocarboxilatos para uso en la preparación de los compuestos de la presente invención, se pueden consultar los documentos WO 95/15309 y WO 98/19998, cada uno de los cuales se incorpora a la presente memoria por referencia en relación con la preparación de dichos reaccionantes.
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Intermedio del Ejemplo 1
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4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo A. Hidrocloruro de (2S,4R)-4-hidroxi-2-pirrolidinacarboxilato de metilo
A una solución en MeOH (420 mL) que contenía L-hidroxiprolina (62,67 g, 478 mmol) enfriada en un baño de agua con hielo se le añadió gota a gota cloruro de tionilo (58,6 g, 492,3 mmol). Tras completar la adición, la suspensión se agitó a TA durante 2 h. La mezcla se calentó luego a reflujo durante 6 h, tras las cuales se enfrió hasta TA y se eliminó el disolvente a vacío. El sólido residual se bombeó en alto vacío produciendo 86-03 g (474 mmol, 99% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,62-4,57 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,43 (dd, 1H, J = 12,2, 3-7 Hz), 3,30 (m, 1H), 2,41 (dd, 1H, J = 13,6, 7,6 Hz), 2,19 (m, 1H) ppm.
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B. (2S,4R)-4-Hidroxi-1,2-pirrolidinadicarboxilato de 1-terc-butil-2-metilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (1,4 L) que contenía el compuesto A (88,67 g, 0,49 mol) y dicarbonato de di-t-butilo (109,8 g, 0,50 mol) se le añadió gota a gota, a 0ºC, trietilamina (123,6 g, 1-22 mol) durante 1-5 h. La solución resultante se dejó luego entibiar lentamente hasta TA durante una noche. El disolvente se eliminó entonces a vacío y se añadió Et_{2}O al sólido residual. El sólido se recogió vía filtración a vacío y se lavó abundantemente con Et_{2}O. Al filtrado se le eliminó luego el disolvente a vacío y se disolvió en CH_{2}Cl_{2}. Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y NaHCO_{3} sat., y después se secó sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío produjeron un aceite amarillo claro que, después de bombear en alto vacío durante 15 min., se solidificó. Al sólido resultante se le añadieron 500 mL de hexanos, luego se agitó durante una noche. El sólido se recogió por filtración a vacío y se bombeó en alto vacío, produciendo 104,5 g (0,43 mol, 87% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,37-4,32 (m, 2H), 3,72-3,71 (m, 3H), 3,51 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,02 (m, 1H), 1,42 (m, 9H) ppm.
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C. (2S, 4S)-4-fluoro-1,2-pirrolidinadicarboxilato de 1-terc-butilo-2-metilo
A un matraz de 2 L que contenía el compuesto B (124,25 g, 0,51 mol), en 1,25 L de 1,2-dicloroetano, enfriado hasta -30ºC, se le añadió DAST puro (125 g, 0,78 mol). La reacción se calentó lentamente hasta -10ºC durante 1 h, momento en el cual se eliminó el baño frío. Se siguió agitando a TA durante 24 h y luego la solución oscura se vertió en matraces de 2 L que contenían hielo triturado y NaHCO_{3} sólido. Los matraces se arremolinaron periódicamente y se agitaron hasta que no se observó evolución de CO_{2} (nota: se añadió periódicamente NaHCO_{3} sólido adicional). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío y el aceite oscuro residual se disolvió en 200 mL de EtOAc y luego se añadieron 800 mL de hexanos. A esta solución se le añadieron 100 g de SiO_{2}. Después de agitar durante 30 min, la solución se filtró con SiO_{2} que se estaba lavando con hexanos/EtOAc (4:1, \sim 500 mL). La eliminación del disolvente a vacío y el bombeo en alto vacío durante una noche produjeron 121,81 g (0,40 mol, 97% de rendimiento) del compuesto C como un aceite oscuro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 5,18 (d(br), 1H, J = 5,3 Hz), 4,53 (d, 1/2H, J = 9,7 Hz), 4,40 (d, 1/2H, J = 9,4 Hz), 3,87-3,59 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,51-2,28 (m, 2H), 1,46 (s, 3H, rotámero), 1,41 (s, 6H, rotámero) ppm.
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D. Ácido (2S, 4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-fluoro-2-pirrolidinacarboxílico
A un matraz de 2 L que contenía el compuesto C (121,8 g, 0,49 mol), en 1,1 L de dioxano, se le añadieron 380 mL de H_{2}O seguidos de hidróxido de litio hidratado (103,6 g, 2,46 mol) a TA. La solución resultante se agitó durante 23 h (nota: por TLC, la reacción pareció estar lista después de 5 h.), tras las cuales el volumen de dioxano se eliminó a vacío. El material residual se disolvió en H_{2}O adicional y luego se añadió carbón. Después de agitar durante 15 min, la solución se filtró a través de un lecho de Celite. Al filtrado se le añadió NaCl sólido hasta que ya no se disolvió más. Se enfrió entonces en un baño de agua con hielo y se acidificó con HCl concentrado hasta pH 3 mientras se mantenía la temperatura de la solución entre 5-10ºC. El producto comenzó a precipitar a pH 4 y, tras alcanzar pH 3, el sólido tostado se recogió por filtración a vacío. Después de bombear en alto vacío durante una noche, el sólido se disolvió en CH_{3}CN (1-5 L) y se secó sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y el secado en alto vacío produjeron 92,7 g (0,40 mol, 81% de rendimiento) del compuesto C como un sólido tostado.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,5 (a(br), 1H), 5,22 (d(br), 1H. J = 54 Hz), 4,25 (m, 1H), 3,60-3,43 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 2,20 (m, 1H). 1,33 (m, 9H) ppm.
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E. (2S, 4S)-2-(Aminocarbonil)-4-fluoro-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A un matraz de tres cuellos con 2 L de capacidad, equipado con un agitador impulsado por aire, se le añadió el compuesto D (92,7 g, 0,40 mol), CH_{3}CN (1,1 L), dicarbonato de di-t-butilo (130 g, 0,60 mol) y piridina (32,4 g. 0,41 mol) a TA. Después de agitar durante 20 min., se añadió carbonato de hidrógeno y amonio (47,2 g, 0,60 mol). La reacción se agitó durante 23 h, tras las cuales se eliminó el volumen de CH_{3}CN. El residuo se disolvió luego en CH_{2}Cl_{2} y se lavó con una solución 1:1 de HCl 1M/NaCl sat. La capa acuosa se extrajo después 2X con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío. El sólido tostado se trituró con hexanos (-0,5 L) y se recogió con filtración a vacío. Después de bombear en alto vacío, se obtuvieron 68,75 g (0,30 mol, 74% de rendimiento) del compuesto E como un sólido tostado claro. El filtrado, después de la eliminación del disolvente a vacío, produjo un aceite oscuro que parecía también contener producto adicional por ^{1}H RMN.
^{1}H RMN (ds-DMSO) 400 MHz \delta 7,21 (si(br), 1/2H), 7,14 (s(br), 1/2H), 6-94 (s(br), 1H), 5,19 (d(br), 1H, J = 54 Hz), 4,11 (m, 1H). 3,63-3,47 (m, 2H), 2,38 (m, 1H), 2,11 (m, 1H), 1,39 (s, 3H, rotámero). 1,34 (s, 6H, rotámero) ppm.
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F. (2S, 4S)-2-ciano-4-fluoro-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A un matraz que contenía imidazol (2,93 g, 43,1 mmol) se le añadió piridina (75 g, 0,9 mol, 15 volúmenes en peso a la amida). La solución se enfrió luego hasta 0ºC y, después de agitar durante 10 min, se le añadió BOC-4-fluoroprolina carboxamida (5,0 g, 21,6 mmol) en una porción. La solución se enfrió luego hasta -30ºC (nota: por debajo de esta temperatura se puede producir una solución heterogénea) y se añadió gota a gota POCl_{3} (13,2 g 86,4 mmol) durante 5 minutos. Tras completar la adición, el baño de acetona en hielo seco se reemplazó con un baño de agua con hielo y se siguió agitando a 0ºC durante 1 h, tras lo cual se vertió en una mezcla de hielo triturado, NaCl sólido y EtOAc. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2X). El disolvente se eliminó a vacío (nota: se mantiene el baño en un evaporador rotatorio a < 35ºC) y el residuo se disolvió en EtOAc. Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y HCl 1 M (2X). Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío, produciendo 4,0 g (18,6 mmol, 86% de rendimiento) del compuesto F como un sólido tostado claro.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 5,32 (d(br), 1H, J = 52 Hz), 4,78 (m, 1H), 3,74-3,48 (m, 2H), 2,55-2,40 (m, 2H), 1,52-1,43 (m, 9H) ppm.
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G. 4-Metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo
A una solución en CH_{3}CN (1 L) que contenía el compuesto F (56,62 g, 0,26 mol) se le añadió ácido p-toluenosulfónico hidratado (75,4 g, 0,40 mol) a TA. Después de 24 h, se eliminó el CH_{3}CN a vacío y luego se disolvió el aceite marrón residual en 500 mL de EtOAc. Dentro de 1 min, se precipitó un sólido y la solución se enfrió en un baño de agua con hielo y luego se agitó durante 1 h. El sólido se recogió por filtración a vacío. El sólido recogido se enjuagó con EtoAc (-500 mL) frío (-20ºC) y luego se bombeó en alto vacío durante una noche, produciendo 60,94 g (0,21 mol, 82% de rendimiento) del compuesto G como un sólido tostado claro.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,69 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,23 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 5,52 (dd, 1H, J = 51, 3,4 Hz), 4,96 (dd, 1H, J = 9,8, 3,6 Hz), 3,78 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 2,84-2,63 (m, 2H), 2,36 (s, 3H) ppm.
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Ruta alternativa para el Intermedio del Ejemplo 1
7
4-Metilbencenosulfonato de (2S,4S)4-fluoro4-pirrolidinacarbonitrilo (2S,4R)-2-(aminocarbonil)-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución en THF (420 mL) que contenía BOC-L-hidroxiprolina (30,0 g, 129 mmol) y trietilamina (14,4 g, 141,9 mmol), enfriada hasta -15ºC, se le añadió cloroformiato de etilo (15,4 g, 141,9 mmol) gota a gota. La solución resultante se agitó durante 10 min, tras los cuales se añadieron 80 mL de NH_{4}OH al 28%. La reacción se dejó entibiar lentamente hasta 5ºC durante 2 h, tras las cuales se añadió NH_{4}Cl sat. hasta que todo el sólido blanco se había disuelto. El THF se separó y la capa acuosa se extrajo con THF. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío. El aceite residual se trató con Et_{2}O y una cantidad pequeña de CH_{2}Cl_{2} y MeOH. Después de conservar en el congelador durante 1 h, el sólido blanco resultante se recogió por filtración a vacío, produciendo 22,0 g (95,6 mmol, 74% de rendimiento) del compuesto A.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 7,33-7,29 (d(br). 1H, rotómeros), 6,88-6,80 (d(br), 1H, rotámeros), 4,94 (s(br), 1H). 4,18 (s(br), 1H), 4,04 (m, 1H), 3,35 (m, 1H). 3-21 (m, 1H). 1,99 (m, 1H), 1,77 (m, 1H), 1,36-131 (d, 9H, rotámeros) ppm.
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B. (2S,4R)-2-Ciano-4-hidroxipirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo
A una solución en piridina (180 mL) que contenía el compuesto A (17,89 g, 77,8 mmol), enfriada hasta -20ºC, se le añadió anhídrido trifluoroacético (40,8 g, 194,4 mmol) gota a gota. Tras completar la adición, la reacción se dejó calentar hasta TA. Después de 6 h, la reacción se inactivó con H_{2}O y luego se vertió en EtOAc (aproximadamente 500 mL). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat., HCl 1,0 M y NaOH 2,0 M, y luego se secó sobre MgSO_{4}. Al filtrado se le añadió carbón y, después de agitar durante 10 min, la solución se filtró a través de un lecho de Celite. El disolvente se eliminó a vacío (la temperatura del evaporador rotatorio fue de 34ºC) produciendo 13,21 g (62,3 mmol, 80% de rendimiento) del compuesto B como un aceite anaranjado.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,60 (m, 1H), 4,40 (s(br), 1H), 3,49-3,41 (m, 2H), 2,36-2,34 (m, 2H), 1,51-1,48 (m, 9H, rotómeros)
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C. (2S,4S)-2-Ciano-4-fluoro-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A una solución en 1,2-dicloroetano (300 mL) que contenía el compuesto B (13,21 g, 62,3 mmol), enfriada hasta -30ºC, se le añadió DAST (15,1 g, 93,4 mmol). Después de 30 min, el baño frío se eliminó y se siguió agitando durante 24 h, tras las cuales la reacción se inactivó cautelosamente con NaHCO_{3} sat. La solución se vertió luego en hielo triturado y los compuestos orgánicos se extrajeron con CH_{2}Cl_{2} (2X). Después de un lavado final con NaHSO_{4} sat., los compuestos orgánicos se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío, produciendo 10,86 g (50,7 mmol, 81% de rendimiento) del compuesto C como un semisólido marrón.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 5,32 (d(br), 1H, J = 52 Hz), 4,78 (m, 1H), 3,74-3,48 (m, 2H), 2,55-2,40 (m, 2H), 1,52-1,43 (m, 9H) ppm.
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D. 4-Metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo
A una solución en CH_{3}CN (200 mL) que contenía el compuesto C (10,86 g, 50, 7 mmol) se le añadió ácido p-toluenosulfónico (14,8 g, 78 mmol) a TA. La solución resultante se agitó durante 24 h, tras las cuales se eliminó el CH_{3}CN a vacío. El aceite marrón residual se disolvió en EtOAc (300 mL) y al cabo de un minuto el sólido se separó por precipitación. La solución se enfrió en un baño de hielo durante 2 h y luego el sólido se recogió por filtración a vacío. Luego se lavó con 300 mL de EtOAc frío (-20ºC), produciendo 10,07 g (35,2 mmol, 69% de rendimiento) del compuesto D.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,69 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,23 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 5,52 (dd, 1H, J = 51, 3,4 Hz), 4,96 (dd, 1H, J = 9,8, 3,6 Hz), 3,78 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 2,84-2,63 (m, 2H), 2,36 (s, 3H) ppm.
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Intermedio del Ejemplo 2
8
4-Metilbencenosulfonato de (2S)-4,4-difluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo A. (2S,4S)-2-(Aminocarbonil)-4-hidroxi-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A una solución en THF (420 mL) que contenía BOC-L-hidroxiprolina (30,0 g, 129 mmol) y Et_{3}N (14,4 g, 141,9 mmol), enfriada hasta -15ºC, se le añadió gota a gota cloroformiato de etilo (15,4 g, 141,9 mmol). La solución blanca resultante se agitó a -15ºC durante 30 min, luego se añadieron 80 mL de una solución en NH_{4}OH al 28% con jeringa. Tras completar la adición, se eliminó el baño de hielo y se siguió agitando durante 19 h. La solución homogénea se vertió en NH_{4}Cl sat. y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo con THF y luego se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO_{4}). El disolvente se eliminó a vacío y el semisólido se bombeó en alto vacío durante 2 h. El sólido blanco resultante se recogió por filtración a vacío con Et_{2}O, produciendo 15,86 g (68,9 mmol, 53% de rendimiento) del compuesto A.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 7,34 (s(br), 1H, rotómero), 7,31 (s(br), 1H, rotómero), 6,90 (s(br), 1H, rotómero), 6,82 (s(br), 1H, rotómero), 4,95 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 4,05 (m, 1H), 3,36 (m, 1H), 3,22 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,78 (m, 1H), 1,37 (s, 3H, rotómero), 1,32 (s, 6H, rotómero) ppm.
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B. (2S)-2-(Aminocarbonil)-4-oxo-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (12 mL) que contenía cloruro de oxalilo (607 mg, 4,78 mmol), enfriada hasta -78ºC, se le añadió solución en CH_{2}Cl_{2} (3 mL) que contenía DMSO. Después de 5 min, se añadió gota a gota (2S,4S)-2-(aminocarbonil)-4-hidroxi-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo (1,0 g, 4,35 mmol, según se describió en la etapa E anterior) en una solución CH_{2}Cl_{2}/THF (20 mL/15 mL). Tras completar la adición, la reacción se agitó durante 20 min, tras los cuales se añadió Et_{3}N (2,20 g, 21,7 mmol). Después de 10 min, se eliminó el baño frío y se siguió agitando durante 1 h. La solución se vertió en NaHCO_{3} sat. y los compuestos orgánicos se extrajeron con CH_{2}Cl_{2}. Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío y el aceite amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/MeOH (15:1)), produciendo 560 mg (2,45 mmol, 56% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 7,58 (s(br), 1H), 7,15 (s(br), 1H, rotómero), 7,09 (s(br), 1H, rotómero), 4,51 (d, 1H, J = 9,7 Hz, rotómero), 4,46 (d, 1H, J = 8,8 Hz, rotómero), 3,76-3,64 (m, 2H), 3,02 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,39 (s, 3H, rotómero), 1,37 (s, 6H, rotómero) ppm.
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C. (2S)-2-(Aminocarbonil)-4,4-difluoro-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) que contenía el compuesto B (423 mg, 1,85 mmol), enfriada hasta -70ºC, se le añadió DAST (889 mg, 5,50 mmol). La solución resultante se agitó a -70ºC durante 30 minutos, y después a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se inactivó con NaHCO_{3} sat. y los compuestos orgánicos se extrajeron con CH_{2}Cl_{2}. Después de secar sobre MgSO_{4,} el sólido amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/MeOH (15:1)), produciendo 211 mg (0,84 mmol, 46% de rendimiento) del compuesto C.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,38 (m, 1H), 3,84-3,75 (m, 2H), 2,76 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,44 (s(br), 9H) ppm.
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D. (2S)-2-Ciano-4,4-difluoro-1-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo
A una solución en piridina (20 mL) que contenía el compuesto C (658 mg, 2,63 mmol) e imidazol (358 mg, 5,26 mmol), enfriada hasta -35ºC, se le añadió POCl_{3} (1,61 g, 10,5 mmol). La suspensión resultante se agitó durante 1,5 h, momento en el cual se había calentado hasta 10ºC. La solución se diluyó con EtOAc y luego se lavó tres veces con HCl 1 M. Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío, produciendo 610 g (2,63 mmol, 100% de rendimiento) del compuesto D que se absorbió directamente en E (abajo).
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,88 (s(br), 1H), 3,79-3,72 (m, 2H), 2,87 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 1,50 (s, 9H) ppm.
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E. 4-Metilbencenosulfonato de (2S)-4,4-difluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo
A una solución en CH_{3}CN (15 mL) que contenía el compuesto D (512 mg, 2,21 mmol) se le añadió ácido p-toluenosulfónico hidratado (839 mg, 4,42 mmol) a TA. La solución resultante se agitó durante 2 h, tras las cuales se eliminó el CH_{3}CN a vacío. Al aceite residual se le añadió EtOAc (-10 mL) y éste se eliminó luego a vacío. El sólido resultante se trituró con Et_{2}O y luego se añadió EtOAc. El sólido se recogió por filtración a vacío, produciendo 375 g (1,23 mmol, 56% de rendimiento) del compuesto E como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) \delta 400 MHz \delta 7,70(d,2H,J = 8,2Hz), 7,23(d,2H,J = 7,9Hz), 5,12 (t, 1H, J = 7,9 Hz). 3,91-3,78 (m, 2H), 3,08-2,89 (m, 2H). 2,89 (s, 3H), 2,36 (s, 9H) ppm.
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Ejemplos Ejemplo 1
9
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-4-fluoropirrrolidina-2-carbonitrilo
A DMF (25 mL) seca se le añadieron ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3,3-difenilpropanoico (1,96 g, 6,0 mmol), HATU (2,28 g, 6,0 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (1,05 mL. 6,0 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,31 g, 4,5 mmol) y N,N-diisopropiletilamina adicional (0,703 mL, 4,5 mmol). Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (100 mL), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para dar un sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 1,36 g (3,64 mmol, 81% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,45-8,41 (s(br), 3H), 7,70 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,29-7,26 (m, 3H), 7,24-7,18 (m, 3H), 5,39 (d, 1H, J= 51 Hz), 4,89-4,85 (m, 2H), 4,38 (d, 1H, J = 11,3 Hz), 3,98 (ddd, 1H, J = 38,8, 12,4 & 3,1 Hz), 3,39-3,33 (m, 1H), 2,30-2,18 (m, 2H) ppm.
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Ejemplo 2
10
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido 3,3-bis(4-fluorofenil)-3-hidroxipropanoico
A una solución en THF anhidro (80 mL) de n-butil-litio (46 mL de 2,5 M, 115 mmol), a 0ºC, se le añadió gota a gota diisopropilamina (11,13 g, 115 mmol) y la solución se agitó durante 10 minutos. Manteniendo la solución a 0ºC, se añadió gota a gota ácido acético (2,64 g, 44 mmol) y la mezcla se agitó durante 10 min y luego se calentó a 50ºC. Después de 30 min, se formó un precipitado denso y la solución se dejó enfriar. Se añadió una solución de 4,4'-difluorobenzofenona (9,6 g, 0,044 mol) en THF (60 mL, anhidro) a 0ºC, y la solución se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Se añadieron agua (100 mL) y éter dietílico (100 mL) y la capa acuosa se separó y acidificó con HCl 1M hasta pH 3. Los compuestos orgánicos se extrajeron con acetato de etilo (3 \times 200 mL) y después se secaron sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío proporcionaron un sólido blanco bruto que podría lavarse con CHCl_{3} frío para eliminar indicios de la benzofenona. El sólido se secó en alto vacío para proporcionar 5,63 g (20,2 mmol, 46% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,48-7,39 (m, 4H). 7,19-7,02 (m, 4H), 5,91 (5(br). 1H), 3,25 (s, 2H) ppm.
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B: Ácido 3,3-bis(4-fluorofenil)acrílico
A una solución al 20% de ácido sulfúrico en ácido acético (50 mL, V/V) se le añadió el compuesto A (5,6 g, 20,2 mmol) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a TA. A esta solución se le añadió H_{2}O (500 mL) y los compuestos orgánicos se extrajeron con acetato de etilo (3 X 150 mL) y luego se secaron sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío produjo un sólido blanco. El sólido se secó en alto vacío para proporcionar 4,97 g (19,1 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,27-7,21 (m, 2H), 7,19-7,13 (m, 2H), 7,10-6,95 (m, 4H), 626 (s, 1H) ppm.
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C. Ácido 3,3-bis(4-fluorofenil)propanoico
A una solución del compuesto B (2,5 g, 9,61 mmol) en acetato de etilo (250 mL) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (50% p/p) y se hidrogenó en 1 atmósfera de hidrógeno durante 12 horas. La solución heterogénea se filtró a través de celite y se concentró a vacío para proveer un aceite amarillo. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 2,40 g (9,16 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto C como un aceite amarillo.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,08 (br s, 1H), 7,40-7,30 (m, 4H), 7,15-7,05 (m, 4H), 4,45 (t, 1H, J = 8,1 Hz), 3,05(d, 2H, J = 8,1 Hz) ppm.
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D. (4S,SR)-3-[3,3-Bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-metil-5-fenil-1,3-oxazolidin-2-ona
A una solución en THF (50 mL, anhidra) que contenía el compuesto C (2,0 g, 7,63 mmol) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (1,18 g, 9,16 mmol) y luego la solución se enfrió hasta -78ºC. A esta solución se le añadió cloruro de trimetilacetilo (0,97 g, 8,01 mmol) y la solución se entibió hasta 0ºC durante 1 hora. La mezcla turbia se filtró, y el filtrado se añadió lentamente durante 10 min a una solución de (4S,5R)-(-)-4-metil-5-fenil-2-oxazolidinona litiada a -78ºC, que se preparó por la adición gota a gota de n-butil-litio (3,0 mL de 2,5 M, 7,63 mmol) a una solución en THF (50 mL) de (4S,5R)-(-)-4-metil-5-fenil-2-oxazolidinona (1,35 g, 7,63 mmol) a -78ºC que se había agitado durante 10 min para proporcionar la (4S,5R)-(-)-4-metil-5-fenil-2-oxazolidinona litiada. La mezcla amarilla se entibió hasta 0ºC, se inactivó con H_{2}O (50 mL) y se extrajo con éter dietílico (3 x 250 mL) seguida de secado sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío produjo un sólido blanco. La cromatografía instantánea (gel de sílice, 20% acetato de etilo/hexanos) proporcionó el compuesto D. El sólido blanco se secó en alto vacío proporcionando 2,31 g (5,49 mmol, 72% de rendimiento) como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 7,40-7,25 (m, 9H), 7,18-7,02 (m, 4H), 5,76 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,65 (m, 1H), 4,58 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 3,72 (dd, 1H, J = 16,8, 7,0 Hz) 3,57 (dd, 1H, J = 16,8, 7,0 Hz), 0,58 (d, 3H, J = 6,7 Hz) ppm.
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E. (4S,5R)-3-[(2S)-2-Azido-3,3-bis(4-fluorofenil) propanoil]-4-metil-5-[(1E,3Z)-1-metilhexa-1,3,5-trienil]-1,3-oxazolidin-2-ona
A una solución en THF (50 mL, anhidro) que contenía el compuesto D (2,0 g, 4,75 mmol), a -78ºC, se le añadió gota a gota bis(trimetilsilil)amida de potasio (10,0 mL de solución de tolueno 0,5 M, 4,98 mmol). Después de agitar durante 10 min se añadió azida de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo (trisil azida) (1,84 g, 5,94 mmol) en THF (10 mL, anhidro) en una porción. Después de 3 minutos se añadió ácido acético (1,31 g, 21,8 mmol) a -78ºC y luego la reacción se entibió rápidamente hasta 30ºC y se agitó durante 1 h a esa temperatura, generando una solución amarilla clara. A esta solución se le añadió H_{2}O (100 mL) y los compuestos orgánicos se extrajeron con acetato de etilo (500 mL). Después de lavar con NaHCO_{3} saturado (100 mL) y secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío para producir un aceite amarillo. La cromatografía en columna (acetato de etilo/hexano 1:9) proporcionó el compuesto E como un sólido blanco. La HPLC mostró un solo diastereómero. El sólido blanco se secó en alto vacío para proporcionar 1,71 g (3,70 mmol, 78% de rendimiento) como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,42-7,35 (m, H), 7,25-7,18 (m, H), 7,10-7,06 (m, 2H), 7,05-6,92 (m, 2H), 5,95 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 5,05 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 4,60 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 4,38 (m, 1H), 0,95 (d, 3H, J = 6,8 Hz) ppm.
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F. Ácido (2S)-2-azido-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoico
A una solución en THF/H_{2}O (4:1, 50 mL) del compuesto E (1,5 g, 3,25 mmol), a 0ºC, se le añadió una solución de hidróxido de litio (0,272 g, 6,49 mmol) en peróxido de hidrógeno (1,50 mL de solución al 30% en H_{2}O, 48,75 mmol). La mezcla se agitó a 0ºC durante 1 h y luego se inactivó con Na_{2}SO_{4} (6,3 g, 50 mL de solución 1,0 M en H_{2}O). El THF se eliminó a vacío y la solución se acidificó hasta pH 1 con HCl 6,0 M a 0ºC. Los compuestos orgánicos se extrajeron con acetato de etilo (2 X 200 mL) y después se secaron sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío produjo un sólido claro. La cromatografía en columna (EtOAc/hexanos/ácido acético 50:50:1) proporcionó el compuesto F como un sólido blanco. El sólido se secó en alto vacío para proporcionar 0,78 g (2,60 mmol, 80% de rendimiento) como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,60(s(br), 1H), 7,25-7,10 (m, 4H), 7,10-6,95 (m, 4H), 4,50 (d, 2H, J = 8,6 Hz) ppm.
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G. Ácido (2S)-2-amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoico
A una solución en acetato de etilo (250 mL) del compuesto F (1,5 g, 4,95 mmol) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (10% p/p) y se hidrogenó en 1 atmósfera de hidrógeno durante 12 h. La solución heterogénea se filtró a través de celite (1 g) y se concentró a vacío para proveer un aceite claro. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 1,30 g (4,70 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto G como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 10,2(s(br), 1H), 7,38-7,27(m, 4H), 7,08-6,98 (m, 4H), 4,25 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,95 (d, 1H, J = 8,3 Hz) ppm.
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H. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoico
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) que contenía el compuesto G (1,30 g, 4,69 mmol) se le añadió trietilamina (2,37 g, 23,4 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,23 g, 5,63 mmol). Después de agitar durante 12 h, se añadieron H_{2}O (50 mL) y CH_{2}Cl_{2} (300 mL) y la solución se acidificó hasta pH 3 con HCl 1-0 M. La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío produjo un aceite claro. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 1,68 g (4,4 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto H como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,35-722 (m, 4H), 7-16-6,95 (m, 4H), 4,78 (t, 1H, J = 8,9 Hz), 4,25 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 3,05 (m, 1H), 1,20 (s, 3H), 1,15 (s, 6H) ppm.
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I. (2S,4S)-1-[(2S)-2-(terc-Butoxicarbonil)amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en DMF (25 mL, anhidra) se le añadió el compuesto H (1,0 g, 2,65 mmol) y HATU (1,0 g, 2,65 mmol). A esta solución se le añadió N,N-diisopropiletilamina (0,462 mL, 2,65 mmol) y después de 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (0,619 g, 2,12 mmol) y N,N-diisopropiletilamina adicional (0,37 mL, 2,12 mmol). Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (100 mL). La mezcla gomosa resultante se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) seguido de secado sobre MgSO_{4}. La filtración y eliminación del disolvente a vacío produjo un sólido claro. El aceite se cromatografió sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido blanco. El sólido se secó en alto vacío para proporcionar 815 g (1,72 mmol, 65% de rendimiento) del compuesto I como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,38-7,32 (m, 2H), 7,21-7,15 (m, 2H), 7,12-6,98(m, 4H), 5,15 (d, 1H, J = 51 Hz), 5,03 (d, 1H, J = 8,9 Hz, 4,89 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 4,86 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 3,83 (ddd, 1H, J = 36,8, 12,1, 3,7 Hz), 3,05 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 2,62 (t, 1H, J = 15,3 Hz), 2,25 (m, 1H), 1,38 (s, 9H) ppm.
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J. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
Al compuesto I (0,5 g, 1,05 mmol) se le añadió HCl 4,0 N en 1,4-dioxano (10 mL, 40 mmol) y después de 3 h se añadió éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y después de secar en alto vacío se obtuvo 0,41 g (1,0 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,42 (s(br), 3H), 7,72-7,66 (m, 2H), 7,38-7,32 (m, 2H), 7,25-7,19 (m, 2H), 7,06-7,0 (m, 2H), 5,38 (d, 1H, J = 51 Hz), 4,91 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 4,82 (d, 1H, J = 11,3 Hz), 4,41 (d, 1H, J = 11,3 Hz), 3,86 (ddd, 1H, J = 39,2, 12,4, 3,1 Hz), 3,45 (q, 1H, J = 12,4 Hz), 2,38-2,20 (m, 2H) ppm.
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Ejemplo de referencia 3
11
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-5-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilpentanoil]-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo A. 4-(4-Fluorofenil)-2,2-dimetilbutanal
A un matraz que contenía 4-(4-fluorofenil)-2,2-dimetilbutanonitrilo (véase: Org. Lett. 2000, 2, 3285; Knochel, P. et al. para la preparación de este compuesto) (13,4 g, 70,2 mmol) en 300 mL de tolueno, enfriado hasta -78ºC, se le añadieron 70,2 mL de una solución en tolueno 1,5 M de DIBAL (105,3 mmol). Después de 2,5 h, se añadió gradualmente una solución H_{2}O/THF (250 mL/50 mL) que contenía 17,9 g de acetato de sodio y 17,9 mL de ácido acético. Tras completar la adición se añadieron celite y Et_{2}O, y el matraz se dejo entibiar hasta TA. Después de agitar durante 1 h, la solución heterogénea se filtró a través de un lecho de celite. El celite se enjuagó con Et_{2}O y luego el filtrado se lavó con H_{2}O. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite residual se purificó por cromatografía en columna (5% EtOAc/hexanos) para producir 11,3 g (58,2 mmol, 83% de rendimiento) del compuesto A.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,47 (s, 1H), 7,12-7,10 (m, 2H), 7,09-6,93 (m, 2H), 2,51-2,47 (m, 2H), 1,77-1,72 (m, 2H), 1,12 (s, 6H) ppm.
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B. 5-(4-Fluorofenil)-3,3-dimetil-2-({(1R)-1-fenil-2-[(trimetilsilil)oxi]etil}amino)pentanonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (250 mL) que contenía el compuesto A (9,07 g, 46,8 mmol) se le añadió (R)-fenilglicinol (6,41 g, 46,8 mmol) a TA. La solución resultante se agitó durante 1,5 h, tras las cuales se enfrió hasta 0ºC y se añadió cianuro de trimetilsililo (9,28 g, 93,5 mmol). La solución amarilla se dejó entibiar lentamente hasta TA durante una noche. Luego se inactivó con NaHSO_{4} sat. y la capa orgánica se separó. Los compuestos orgánicos se lavaron con H_{2}O, se secaron (MgSO_{4}) y decoloraron con carbón. Después de filtrar a través de celite, el aceite amarillo se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc (9:1)) proporcionando 11,9 g (28,9 mmol, 62% de rendimiento) del compuesto B como una mezcla 6:1 de diastereómeros.
Diastereómero principal : ^{1}H RMN (COCl_{3}) 400 MHz \delta 7,36-7,29 (m, 5H), 7,11-7,07 (m, 2H). 6,98-6,93 (m, 2H), 4,03 (dd, 1H, J = 9,95, 3,8 Hz), 3,68 (m, 1H), 3,52 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 3,06 (d, 1H). J = 13,4 Hz), 2,44-2,34 (m, 3H), 1,73-1,65 (m, 2H), 1,11 (s, 3H), 1,09 (s, 3H), 0,14 (s, 9H) ppm.
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C. 5-(4-fluorofenil)-2-{[(1R)-2-hidroxi-1-feniletil]amino}-3,3-dimetilpentanonitrilo
A una solución en MeOH (300 mL) que contenía el compuesto B (11,85 g, 28,8 mmol) se le añadió fluoruro de potasio (16,7 g, 287,6 mmol) a TA. La solución se agitó durante 1,5 h, tras las cuales el volumen de MeOH se eliminó a vacío. Se añadieron CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O, y la capa orgánica se separó. Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc (4,1)), produciendo 8,86 g (26,1 mmol, 90% de rendimiento) del compuesto C como una mezcla 6:1 de diastereómeros.
Diastereómero principal ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,38-7,30 (m, 5H), 7,10-7,06 (m, 2H), 6,97-6,92 (m, 2H), 4,06 (dd, 1H, J = 9,5, 4,0 Hz), 3,79 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 3,07 (d, 1H, J = 12,5 Hz), 2,43-2,30 (m, 3H), 1,95 (dd, 1H, J = 7,8, 4,1 Hz), 1,74-1,64 (m, 2H), 1,11(s, 3H), 1,09 (s, 3H) ppm.
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D. 5-(4-Fluorofenil)-3.3-dimetil-2-{[(E)-fenilmetilideno]amino}pentanonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (10 mL)/MeOH (4 ml) que contenía el compuesto C (494 mg, 1,45 mmol), enfriada hasta 0ºC, se le añadió tetraacetato de plomo (838 mg, 1,89 mmol). La solución resultante se agitó durante una noche, momento en el cual se entibió hasta temperatura ambiente. A esta solución se le añadieron 20 mL de un tampón de fosfato a pH 7,2. Después de 30 min, la solución turbia se filtró a través de un lecho de celite, estando el lecho de celite enjuagado abundantemente con CH_{2}Cl_{2}. Al filtrado se le añadió H_{2}O y la capa orgánica se separó. La capa acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} y luego se secaron las capas orgánicas combinadas (MgSO_{4}). El disolvente se eliminó a vacío y el aceite se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc (9:1)) para proporcionar 270 mg (0,88 mmol, 60% de rendimiento) del compuesto D.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,50 (d, 1H, J = 1,4 Hz), 7,81-7,80 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 7,54-7,43 (m, 3H), 7,17-7,13 (m, 3H), 6,99-6,94 (m, 2H), 4,48 (s, 1H), 2,68-2,64 (m, 2H), 1,81-1,74 (m, 2H), 1,19 (s, 3H), 1,15 (s, 3H) ppm.
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E. Hidrocloruro de 5-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilnorvalina
A un matraz que contenía el compuesto D (268 mg, 0-87 mmol) se le añadieron 7 mL de HCl concentrado. La solución se calentó hasta reflujo durante 18 h, tras las cuales se enfrió y se extrajo con Et_{2}O. A la capa acuosa se le eliminó el disolvente a vacío y el sólido oleoso residual se disolvió en Et_{2}O/MeOH y se decoloró con carbón. Después de la nitración y eliminación del disolvente a vacío, el residuo se trituró con Et_{2}O y el disolvente se eliminó a vacío para
proporcionar 180 mg (0,65 mmol, 75% de rendimiento) del compuesto E como un sólido oleoso que se tomó en bruto.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,25-7,20 (m, 2H), 7,01-6,95 (m, 2H), 4,45 (s(br), 1H). 2,67-2,63 (m, 2H), 1,76-1,72 (m, 2H), 1,22-1,13 (m, 6H).
\vskip1.000000\baselineskip
F. N.Terc-butoxicarbonil)-5-(4-fluorofenil)-3,3-dimetitilnorvalina
A una solución en dioxano (5 mL) que contenía el compuesto E (180 mg, 0,65 mmol) se le añadieron 2,5 mL de una solución 2 M de NaOH a TA. A la solución resultante se le añadió luego dicarbonato de di-t-butilo (284 mg, 1,34 mmol). Después de agitar durante una noche, la solución se acidificó con HCl 1,0 M. Los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X), se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (MeOH al 5%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 76 mg (0,22 mmol, 34% de rendimiento) del compuesto F.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,18-7,15 (m, 2H), 6,96-6,92 (m, 2H), 6,62 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,18 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 2,65-2,58 (m, 2H), 1,62-1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,05 (s, 3H), 1,01 (s, 3H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
G. (1S)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidinil}carbonil}-4-(4-fluorofenil)-2,2-dimetilbutilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (4 mL) que contenía el compuesto F (172 mg, 0,51 mmol) se le añadió diisopropiletil amina (98 mg, 0,76 mmol) seguida de HATU (213 mg, 0,56 mmol) a TA. Después de 15 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (153 mg, 0,53 mmol) y diisopropiletil amina (68 mg, 0,53 mmol) en 2 mL de DMF. La reacción se agitó durante la noche, tras lo cual se vertió en EtOAc. Los compuestos orgánicos se lavaron con H_{2}O (2X), NaHCO_{3} sat. y NaHSO_{4} sat. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (MeOH al 2%/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 147 mg del compuesto G que se sometió a purificación adicional por HPLC semi-prep, para proveer 80 mg del compuesto G.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,15-7,12 (m, 2H), 6,96-6,92 (m, 2H), 5,40 (d(br), 1H, J = 52,0 Hz), 5,18 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,31 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 4,11 (s, 1H), 4,03 (m, 1H), 2,70-2,52 (m, 3H), 2,33 (m, 1H), 1,64-1,60 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,11 (s, 3H), 1,09 (s, 3H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
H. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-5-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilpentanoil]-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (4 mL) que contenía el compuesto G (80 mg, 0,18 mmol) se le añadieron 71 \muL de TFA (5 eq). Después de 30 min se añadieron otros 5 eq de TFA seguidos de 10 eq adicionales después de una hora. Tras agitar por un total de 3,5 h, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en EtOAc. Los compuestos orgánicos se lavaron con NaHCO_{3} sat., se secaron (MgSO_{4}) y el volumen de disolvente se eliminó a vacío. Al aceite residual se le añadieron 1,5 mL de dioxano y después 2,0 mL de una solución 4,0 M en dioxano de HCl. El disolvente se eliminó a vacío y se añadió Et_{2}O. El sólido precipitado se recogió por filtración a vacío, produciendo 40 mg (0,11 mmol, 60% de rendimiento) del compuesto H.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,25-7,22 (m, 2H), 7,00-6,95 (m, 2H), 5,46 (d(br), 1H, J = 51,1 Hz), 5,09 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,12 (m, 1H), 4,03 (s, 1H), 3,90 (ddd, 1H, J = 37,6, 12,7, 3,0 Hz), 2,68-2,44 (m, 4H), 1,78-1,73 (m, 2H), 1,21 (s, 6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 4
12
Hidrocloruro de (2S,4R)-1-[(2S)-2-amino-4-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 3-(4-Fluorofenil)-2,2-dimetilpropanonitrilo
A una solución en tolueno (60 mL) que contenía isobutironitrilo (5,0 g, 72,3 mmol), enfriada hasta 0ºC, se le añadieron 152 mL de una solución 0,5 M en tolueno de KHMDS (76,0 mmol). Después de 15 min, se añadió bromuro de 4-fluorobencilo (14,4 g, 76,0 mmol). La solución se entibió lentamente hasta temperatura ambiente durante una noche, momento en el cual se inactivó con H_{2}O. Los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc y se lavaron con NaHSO_{4} sat. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (5% EtOAc/hexanos) para producir 10,05 g (56,8 mmol, 79% de rendimiento) del compuesto A.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,25-7,22 (m, 2H), 7,05-7,00 (m, 2H), 2,78 (s, 2H), 1,34 (s, 6H) ppm.
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B. 3-(4-Fluorofenil)-2,2-dimetilpropanol
A una solución en tolueno (100 mL) que contenía el compuesto A (10,0 g, 56,5 mmol), enfriada hasta -78ºC, se le añadieron 56,5 mL de una solución 1,5 M en tolueno de DIBAL (84,7 mmol). Después de 2,5 h, se añadió una solución H_{2}O/THF (160 mL/40 mL) que contenía acetato de sodio (14,3 g) y ácido acético (14,3 mL) seguida de celite. La solución se agitó durante 1 h y luego se añadió Et_{2}O. La solución se filtró a través de celite que se enjuagó completamente con Et_{2}O. El filtrado se lavó con H_{2}O (2X) y luego con NaHCO_{3} sat. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite residual se purificó por cromatografía en columna (5% EtOAc/hexanos) para proporcionar 9,23 g (51,3 mmol, 91% de rendimiento) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,56 (s, 1H), 7,06-7,03 (m, 2H), 6,97-6,93 (m, 2H), 2,75 (s, 2H), 1,04 (s, 6H) ppm.
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C. 2-Amino-4-(4-Fluorofenil)-3,3-dimetilbutanonitrilo
A una solución en MeOH (32 mL) que contenía el compuesto B (5,0 g, 27,8 mmol) se le añadieron 3,8 mL de NH4OH al 30%, cianuro de potasio (1,9 g, 29,2 mmol) y 15 mL de H_{2}O. A esta solución se le añadió cloruro de amonio (1,64 g, 30,6 mmol) a TA. La solución resultante se agitó durante toda la noche, tras lo cual se calentó hasta 70ºC. Después de 5 h, la solución se enfrió, se diluyó con EtOAc y luego se lavó con H_{2}O (2X) seguido de NaHCO_{3} sat. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (EtOAc/hexanos (1:1)) para producir 3,69 g (17,9 mmol, 64% de rendimiento) del compuesto C.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,17-7,13 (m, 2H), 7,00-6,95 (m, 2H), 3,33 (t, 1H, J = 8,5 Hz), 2,80 (d, 1H, J = 13,4 Hz), 2,61 (d, 1H, J = 13,4 Hz), 1,58-1,57 (m, 2H), 1,03 (s, 3H), 1,02 (s, 3H) ppm.
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D. Ácido 2-amino-4-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutanoico
A un matraz que contenía el compuesto C (3,69 g, 17,9 mmol) se le añadieron 80 mL de HCl concentrado. La solución se calentó luego a reflujo durante 24 horas. La solución heterogénea se enfrió luego en un baño de hielo y el sólido blanco se recogió por filtración a vacío. Después de bombear en alto vacío, se obtuvieron 4,06 g de un polvo blanco. Este material se tomó en bruto.
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E. Ácido 2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-(4-fluorofenil-3,3-dimetilbutanoico
A una solución en dioxano (20 mL) que contenía el compuesto D (2,0 g, 7,66 mmol) se le añadieron 5 mL de H_{2}O y 9,6 mL de una solución acuosa 2,0 M de NaOH. A esta solución se le añadió dicarbonato de di-t-butilo (2,34 g, 10,7 mmol) a TA. Después de agitar durante una noche, la solución heterogénea se vertió en NaHCO_{3} sat. y se lavó con Et_{2}O. La capa de Et_{2}O se lavó con NaHCO_{3} sat. y luego las capas acuosas combinadas se acidificaron con HCl 1,0 M y se extrajeron con EtOAc (2X). Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío para proveer 928 mg (2,86 mmol, 37% de rendimiento) del compuesto E.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,21-7,18 (m, 2H), 7,00-6,95 (m, 2H) 6,74 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 3,98 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 2,68 (d, 1H, J = 13,4 Hz), 2,62 (d, 1H, J = 13,3 Hz), 1,45 (s(br), 9H), 0,93 (s, 3H), 0,92 (s, 3H) ppm.
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F. (1S)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-3-(4-fluorofenil)-2,2-dimetilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto E (928 mg, 2,86 mmol) se le añadió diisopropiletilamina (406 mg, 3,14 mmol) seguida de HATU (1,14 g, 3,00 mmol) a TA. Después de 30 min, se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (857 mg, 3,00 mmol) y diisopropiletilamina (388 mg, 3,00 mmol) en 13 mL de DMF. Después de agitar durante una noche, la solución se vertió en EtOAc y se lavó con H_{2}O (2X), NaHCO_{3} sat. y HCl 1,0 M. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío.
El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (5:4:1)) para proporcionar 273 mg (0,65 mmol, bajo material R_{f}) del (S)-diastereómero según lo determinado por dicroismo circular vibracional y 226 mg de una mezcla del (R)-diastereómero más una impureza desconocida. El (S)-diastereómero se disolvió.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,15-7,11 (m, 2H), 7,01-6,96 (m, 2H), 5,32 (dt, 1H, J = 51,3, 3,3 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,16 (d, 1H, J = 10,1 Hz), 3,91 (m, 1H), 3,68 (dd, 1H, J = 23,6,12,1 Hz), 2,72-2,56 (m, 2H), 2,30 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,08 (s, 3H), 0,95 (s, 3H) ppm.
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G. Hidrocloruro de (2S,4R)-1-[(2S)-2-amino-4-(4-fluorofenil)-3,3-dimetilbutanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (7 mL) que contenía el compuesto F (242 mg, 0,58 mmol) se le añadieron 443 \muL (10 eq) de TFA a TA. Después de 30 min, se añadieron 10 eq adicionales de TFA y después de un total de 3 h, la mezcla de reacción se vertió en NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc, se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío. El aceite residual se disolvió en dioxano (4 mL) y luego se añadieron 4,0 mL de una solución 4,0 M de HCl en dioxano. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se trituró con Et_{2}O. El sólido resultante se recogió por filtración a vacío, produciendo 175 mg (0,46 mmol, 79% de rendimiento) de la sal G.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 722-7,19 (m, 2H), 7,08-7,04 (m, 2H), 5,43 (d(br), 1H, J = 51,1 Hz). 5,09 (d, 1H. J = 9,5 Hz), 4,05 (s. 1H), 3,97-3,74 (m, 2H). 2,82 (d, 1H, J = 13,4 Hz), 2,72 (d, 1H, J = 13,2 Hz), 2,64-2,39 (m, 2H), 1,07 (s, 3H). 1,00 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 5
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13
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2R)-2-amino-3-[(4-metoxibencil)tio]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-metoxibencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (35 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[(4-metoxibencil)tio]-3-metilbutanoico (2,0 g, 5,41 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (1,06 mL, 6,09 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (2,9 g, 7,67 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,29 g, 4,51 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (864 \muL, 4,96 mmol, 1,1 eq) en DMF (12 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat.(aproximadamente 50 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 100 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 1,96 g (4,23 mmol, 78% de rendimiento) del compuesto A como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,29 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,83 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 51,4 Hz), 5,43 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,38 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 4,27 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,80 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 2,72 (t, 1H, 15,5 Hz), 2,37 (m, 1H), 1,47-1,41 (m, 14H) ppm.
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B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(4-metoxibencil)tio]-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (60 mL) que contenía ácido trifluoroacético (8 mL) se le añadió el compuesto A (1,2 g, 2,58 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 897 mg (2,45 mmol, 95% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,31 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,88 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,49 (d, 1H, J = 50,5 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,02-3,52 (m, 8H), 2,65 (t, 1H, J = 15,7 Hz), 2,40 (m, 1H), 1,44 (s, 3H), 1,31 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 6
14
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(3-fenilpropil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (2R)-2-Amino-3-mercapto-3-metilbutanoato de metilo
A una solución en metanol (18 mL, 1,14 M) que contenía L-penicilamina (3,0 g, 20,11 mmol, 1,0 eq) se le añadió cloruro de tionilo (1,5 mL, 20,7 mmol, 1,03 eq). La mezcla resultante se calentó hasta reflujo durante 18 h y el disolvente se eliminó a vacío. Se utilizó el semisólido en la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aislaron 3,28 mg (20,1 mmol, 100% de rendimiento).
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B. (2R)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-8-metilbutanoato de metilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (60 mL) que contenía el compuesto A (3,28 g, 20-1 mmol, 1,0 eq) se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (4,48 g, 20,5 mmol, 1,02 eq) y trietilamina (7,0 mL, 50,3 mmol, 2,5 eq). La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se disolvió en Et_{2}O. El sólido blanco insoluble se filtró y el filtrado se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 5,01 g (19,02 mmol, 95% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 4,26 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,44-1,42 (m, 15H) ppm.
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C. (2R)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(3-fenilpropil)tio]butanoato de metilo
A una solución en CH_{2}CN (20 mL) que contenía el compuesto B (346 mg, 1,31 mmol, 1,0 eq) se le añadió terc-butóxido de sodio (138 mg, 1,44 mmol, 1,1 eq). La mezcla de color amarillo pálido resultante se dejó agitar a TA durante 10 min, tras los cuales se añadió 1-bromo-3-fenilpropano (219 \muL, 1,44 mmol, 1-1 eq). La solución resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los compuestos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se purificó por cromatografía instantánea usando 2:1 hexano/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 376 mg (0,988 mmol, 76% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,30-7,16 (m, 5H), 5,38 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,29 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 3,71 (s, 3H), 2,72 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,58-2,51 (m, 2H), 1,89-1,82 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,36 (d, 6H, J = 8,8 Hz) ppm.
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D. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(3-fenilpropil)tio]butanoico
A una solución en dioxano (7,5 mL)/H_{2}O (2,5 mL) que contenía el compuesto C (376 mg, 0,988 mmol, 1,0 eq) se le añadió hidróxido de litio monohidratado (207 mg, 4,94 mmol, 5,0 eq). La mezcla heterogénea resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los compuestos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc (con AcOH al 0,1%) como la fase móvil. Se aislaron 230 mg (0,626 mmol, 64% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,31-7,16 (m, 5H), 5,51 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,33 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 3,41 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 2,79 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,20-2,13 (m, 2H), 1,47-1,44 (m, 15H) ppm.
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E. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenilpropil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (5 mL) que contenía el compuesto D (230 mg, 0,626 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (123 \muL, 0,705 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (337 mg, 0,887 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (149 mg, 0,522 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (100 \muL, 0,574 mmol, 1,1 eq) en DMF (2 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat.(aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 190 g (0,411 mmol, 79% de rendimiento) del compuesto E como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,28-7,17 (m, 5H), 5,46 (d, 1H, J = 51,4 Hz), 5,37 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,38-4,29 (m, 2H), 4,01 (m, 1H), 2,77-2,58 (m, 5H), 2,35 (m, 1H), 1,92-1,80 (m, 2H), 1,44-1,34 (m, 15H) ppm.
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F. (2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(3-fenilpropil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) que contenía ácido trifluoroacético (1 mL) se le añadió el compuesto E (190 mg, 0,411 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y se extrajo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 134 mg (0,389 mmol, 94% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,23-7,11 (m, 5H), 5,46 (d, 1H, J = 50,4 Hz), 4,98 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 4,04-3,96 (m, 2H), 3,68 (m, 1H), 2,62-2,30 (m, 6H), 1,78-1,71 (m, 2H), 1,29 (d, 6H, J = 9,7 Hz) ppm.
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Ejemplo de referencia 7
15
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(2-feniletil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(2-feniletil)tio]butanoato de metilo
A una solución en CH_{3}CN (50 mL) que contenía (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoato de metilo (como se describió anteriormente) (1,26 g, 4,78 mmol, 1,0 eq) se le añadió terc-butóxido de sodio (597 mg, 6,21 mmol, 1,3 eq). La mezcla de color amarillo pálido resultante se dejó agitar a TA durante 10 min, tras los cuales se añadió (2-bromoetil)benceno (718 \muL, 5,26 mmol, 1,1 eq). La solución resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se purificó por cromatografía instantánea usando 5:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 761 mg (2,07 mmol, 45% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,31-7,19 (m, 5H), 5,36 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 4,33 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 3,71 (s, 3H), 2,83-2,78 (m, 4H), 1,44 (s, 9H), 1,36 (d, 6H, J = 7,5 Hz) ppm.
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B. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(2-feniletil)tio]butanoico
A una solución en dioxano (20 mL)/H_{2}O (7 mL) que contenía el compuesto A (761 mg, 2,07 mmol, 1,0 eq) se le añadió hidróxido de litio monohidratado (434 mg, 10,35 mmol, 5,0 eq). La mezcla heterogénea resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los compuestos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc (con AcOH al 0,1%) como la fase móvil. Se aislaron 502 mg (1,42 mmol, 69% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,31-7,18 (m, 5H), 5,42 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,32 (s(br), 1H), 2,87-2,81 (m, 4H), 1,44 (s, 9H), 1,40 (s, 3H), 1,36 (s, 3H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(2-feniletil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (10 mL) que contenía el compuesto B (502 mg, 1,42 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (278 \muL, 1,59 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (764 mg, 2,01 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (338 mg, 1,18 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (226 \muL, 1,3 mmol, 1,1 eq) en DMF (5 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 361 g (0,803 mmol, 80% de rendimiento) del compuesto C como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,30-7,20 (m, 5H), 5,46 (d, 1H, J = 51,0 Hz), 5,38 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,36-4,25 (m, 2H), 4,06 (m, 1H), 2,87-2,84 (m, 4H), 2,70 (t, 1H, J = 15,0 Hz), 2,35 (m, 1H), 1,41-1,37 (m, 15H) ppm.
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D. (2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(2-feniletil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) que contenía ácido trifluoroacético (2 mL) se le añadió el compuesto C (361 mg, 0,803 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y se extrajo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 223 mg (0,638 mmol, 80% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,20-7,09 (m, 5H), 5,43 (d, 1H, J = 50,5 Hz), 4,94 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,13 (m, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,71 (m, 1H), 2,84-2,70 (m, 4H), 2,59 (t, 1H J = 15,7 Hz), 2,37 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,22 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 8
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16 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2R)-2-amino-3{[3-4-fluorofenil)propil]tio}-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 3-(4-Fluorofenil)propan-1-ol
A una solución en THF (200 mL) que contenía ácido 3-(4-fluorofenil)propanoico (33,6 g, 0,2 mol) se le añadió una solución 1,0 M de LiAIH_{4} en Et_{2}O (200 mL, 0,2 mol) durante un período de 0,5 h. La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción se inactivó lentamente con H_{2}O y la capa acuosa se extrajo (1x) con Et_{2}O. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se utilizó el aceite resultante en la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aislaron 31,4 mg (0,2 mmol, 100% de rendimiento).
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B. 1-(3-Cloropropil)-4-fluorobenceno
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (300 mL) que contenía el compuesto A (31,4 g, 0,2 mol) se le añadió diclorotrifenilfosforano (110 g, 0,33 mol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min y después se concentró a vacío. Se añadieron hexanos (aprox. 200 mL) al residuo y la mezcla heterogénea resultante se agitó a TA durante 30 min. Los sólidos insolubles se filtraron y lavaron con hexanos. El filtrado se concentró a vacío y el aceite blanco se utilizó sin purificación adicional en la siguiente etapa. Se aislaron 33,3 mg (0,193 mmol, 96% de rendimiento).
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C. (2R)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-3-{[3-(4-fluorofenil)propil]tio}-3-metilbutanoato de metilo
A una solución en CH_{3}CN (60 mL) que contenía (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoato de metilo (según se describió anteriormente) (1,51 g, 5,73 mmol, 1,0 eq) se le añadió terc-butóxido de sodio (716 mg, 7,45 mmol, 1,3 eq). La mezcla de color amarillo pálido resultante se dejó agitar a TA durante 10 min, tras los cuales se añadió 1-(3-cloropropil)-4-fluorobenceno (como se describió anteriormente) (1,09 g, 6,3 mmol, 1,1 eq). La solución resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los extractos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío y luego se purificaron por cromatografía instantánea usando 5:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 700 mg (1,75 mmol, 31% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,14-7,10 (m, 2H), 6,98-6,93 (m, 2H), 5,36 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 4,29 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 3,71 (s, 3H), 2,68 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,56-2,49 (m, 2H), 1,86-1,79 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,35 (d, 6H, J = 6,8 Hz) ppm.
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D. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-{[3-(4-fluorofenil)propil]tio}-3-metilbutanoico
A una solución en dioxano (20 mL)/H_{2}O (7 mL) que contenía el compuesto A (700 mg, 1,75 mmol, 1,0 eq) se le añadió hidróxido de litio monohidratado (367 mg, 8,75 mmol, 5,0 eq). La mezcla heterogénea resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La reacción luego se inactivó con una solución en NH_{4}Cl sat., se vertió en H_{2}O y se extrajo (2X) con EtOAc. Los compuestos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío.
Se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc (con AcOH al 0,1%) como la fase móvil. Se aislaron 512 mg (1,33 mmol, 76% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,13-7,10 (m, 2H), 6,99-6,93 (m, 2H), 5,41 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 4,29 (s(br), 1H), 2,68-2,55 (m, 4H), 1,88-1,80 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,39 (s, 3H), 1,36 (s, 3H) ppm.
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E. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-{[3-(4-fluorofenil)propil]tio}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (15 mL) que contenía el compuesto B (512 mg, 1,33 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (261 \muL, 1,5 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (717 mg, 1,89 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S, 4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (317 mg, 1,11 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (213 \muL, 1,22 mmol, 1,1 eq) en DMF (10 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexano/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 420 g (0,872 mmol, 79% de rendimiento) del compuesto C como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,14-7,11 (m, 2H), 6,97-6,92 (m, 2H), 5,47 (d, 1H, J = 50,9 Hz), 5,36 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,42-4,32 (m, 2H), 4,01 (m, 1H), 2,74-2,57 (m, 5H), 2,36 (m, 1H), 1,89-1,76 (m, 2H), 1,41-1,37 (m, 15H) ppm.
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F. (2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-{[3-(4-fluorofenil)propil]tio}-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (30 mL) que contenía ácido trifluoroacético (3 mL) se le añadió el compuesto C (420 mg, 0,872 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 275 mg (0,721 mmol, 83% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto
vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,15-7,10 (m, 2H), 6,96-6,90 (m, 2H), 5,48 (d, 1H, J = 50,9 Hz), 4,99 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,07-3,98 (m, 2H), 3,74 (m, 1H), 2,64-2,32 (m, 6H), 1,80-1,68 (m, 2H), 1,30 (d, 6H, J = 6,6 Hz) ppm.
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Ejemplo de referencia 9
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17 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(4-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-metoxibencil)sulfonil]-2-metilpropilcarba-mato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (25 mL) que contenía (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-metoxibencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo (como se describió anteriormente) (473 mg, 1,017 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (1,76 g, 10,18 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 M (aproximadamente 5 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 400 mg (0,805 mmol, 80% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,35 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,92 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 51,0 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 4,99 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,34-3,98 (m, 4H), 3,81 (s, 3H), 2,73 (t, 1H, J = 15,0 Hz), 2,39 (m, 1H), 1,58 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,42 (s, 9H) ppm.
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B. (2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-[(4-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (40 mL) que contenía ácido trifluoroacético (4 mL) se le añadió el compuesto A (400 mg, 0,805 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 296 mg (0,745 mmol, 93% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que todos los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,28 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 6,92 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,47 (d, 1H, J = 50,6 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,66 (s, 1H), 4,51 (s, 2H), 4,05 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,64 (t, 1H, J = 15,7 Hz), 2,42 (m, 1H), 1,62 (s, 3H), 1,48 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 10
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18 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(4-metoxibencil)sulfinil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-metoxibencil)sulfinil]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en metanol (10 mL) que contenía (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-metoxibencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo (como se describió anteriormente) (660 mg, 1,42 mmol, 1,0 eq) se le añadió una solución en NaIO_{4} (334 mg, 1,56 mmol, 1,1 eq) en H_{2}O (10 mL). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La mezcla heterogénea resultante se repartió entre CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación, se aislaron 600 mg (1,25 mmol, 87% de rendimiento) como una mezcla de diastereómeros.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,27-7,25 (m, 2H), 6,90-6,88 (m, 2H), 5,87 (s(br), 1H), 5,40 (m, 1H), 5,03-4,95 (m, 2H), 4,19-3,66 (m, 7H), 2,65 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 1,49-1,38 (m, 15H) ppm.
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B. (2S,4S)-1-(2R)-2-Amino-3-[(4-metoxibencil)-sulfinil)-3-metilbutanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) que contenía ácido trifluoroacético (5 mL) se le añadió el compuesto A (600 mg, 1,25 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 36 mg (0,965 mmol, 77% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que todos los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto
vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,25-7,21 (m, 2H), 6,93-6,90(m, 2H), 5,42 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,24-3,70 (m, 7H), 2,68-2,31 (m, 2H), 1,52-1,32 (m, 6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 11
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19 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2R)-2-amino-3-metil-3-{[4-(trifluorometil)bencil]tio}butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico
A una solución en THF (300 mL) que contenía L-penicilamina (5,0 g, 33,51 mmol. 1,0 eq) se le añadió hidróxido de potasio (1,88 g, 33,51 mmol, 1,0 eq). La mezcla se enfrió luego hasta 0ºC y se añadió dicarbonato de di-terc-butilo (7,31 g, 33,51 mmol, 1,0 eq). La mezcla agitada resultante se dejó calentar hasta TA y se agitó durante una noche. La reacción se vertió luego en H_{2}O (aprox. 300 mL) y se extrajo (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se utilizó el sólido resultante en la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aislaron 7,68 g (30,80 mmol. 92% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 5,51 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,33 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 1,55 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,41 (s, 3H) ppm.
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B. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-{[4-(trifluorometil)bencil]tio}butanoico
A una solución en CH_{3}CN (40 mL) que contenía el compuesto A (1,0 mg, 4,011 mmol, 1,0 eq) se le añadió terc-butóxido de sodio (810 mg, 8,42 mmol, 2,1 eq). La solución de color amarillo pálido resultante se dejó agitar durante 10 min, tras los cuales se añadió 4-(trifluorometil)bencilbromuro (1,05 g, 4,41 mmol, 1,1 eq). La mezcla resultante se calentó hasta 50ºC y se dejó agitar durante 18 h. La reacción se vertió luego en H_{2}O (aprox. 50 mL) y se extrajo (2X) con EtOAc. Los compuestos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. Se utilizó el sólido en la siguiente etapa sin purificación adicional. Se aislaron 1,45 mg (3,55 mmol, 89% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,55 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 5,39 (s(br), 1H), 4,44 (s(br), 1H), 3,85 (s, 2H), 1,45-1,43 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-Q(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-{[4-(trifluorometil)benciltio}propilcarba-mato de terc-butilo
A una solución en DMF (30 mL) que contenía el compuesto B (1,45 mg, 3,55 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (698 \muL, 4,01 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (1,92 mg, 5,05 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (849 mg, 2,97 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (569 \muL, 3,27 mmol, 1,1 eq) en DMF (25 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat.(aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 682 g (1,35 mmol, 45% de rendimiento) del compuesto C como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,55 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,50 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,49 (d, 1H, J = 50,8 Hz), 5,42 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,03 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,40 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,32 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,88 (s, 2H), 2,74 (t, 1H, J = 15,1 Hz), 2,38 (m, 1H), 1,47 (s, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,41 (s, 3H) ppm.
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D. (2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-metil-3-{[4-(trifluorometil)bencil]tio}butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (70 mL) que contenía ácido trifluoroacético (7 mL) se le añadió el compuesto A (682 mg, 1,35 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida resultante a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 390 mg (0,967 mmol, 72% de rendimiento) de una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,57 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,46 (d, 1H, J = 51,4 Hz), 4,98 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,05-3,53 (m, 5H), 2,62-2,28 (m, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,31 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 12
20
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-2-(1-Vinilciclopentil)etanol]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (1S)-2-[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-2-oxo-1-(1-vinilciclopentil)etilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía ácido [(terc-butoxicarbonil)amino](1-vinilciclopentil)acético racémico (como se describe en Robl, Jeffrey A.; Sulsky, Richard B.; Augeri, David J.; Magnin, David R.; Hamann, Lawrence G.: Betebenner, David A. Preparation of fused cyclopropilpirrolidina-based inhibitors of dipeptidil peptidase IV, WO 200168603A2) (1,07 g, 3,97 mmol) se le añadieron base de Hunig (0,835 mL, 4,37 mmol) y HATU (1,66 g, 4,37 mmol). La solución resultante se agitó durante 15 minutos a TA y luego se añadió gota a gota una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,14 g, 3,97 mmol) y base de Hunig (0,835 mL. 4,37 mmol) en 10 mL de DMF durante 2-3 minutos. La solución resultante se agitó a TA durante 18 h, después se inactivó con H_{2}O. La solución se vertió en H_{2}O y los compuestos orgánicos se extrajeron (2X) con EtOAc. Después de lavar con NaCl sat. y HCl 1,0 N, los compuestos orgánicos se secaron (MgSO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío para proveer un aceite oscuro, que se purificó en gel de sílice usando un sistema Biotage FlashElute, eluyendo en un modo gradiente con hexanos/EtOAc 3:1 a 1:1 para proporcionar 2 productos, diastereoméricos en la posición alfa-amino (C1), en aproximadamente una relación 1:1 (582 mg de diastereómero 1, 628 mg de diastereómero 2, 83% de rendimiento total). Se determinó que el diastereómero de elución más lenta tenía la estereoquímica absoluta (S) en base al análisis de dicroismo circular vibracional del producto final.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 5,92 (dd 1H, J = 10,8, 17,3 Hz), 5,38 (m, 1H), 5,22 (dd, 2 H, J = 10,8, 27,4 Hz), 5,02 (d, 1H, J = 10,3 Hz), 4,23 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,06 (m, 2H), 2,63 (t, 1H, J = 15,5 Hz), 2,40-2,23 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,75-1,52 (m, 6H), 1,43 (m, 1H), 1,37 (s, 9H) ppm.
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B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-2-(1-vinilciclopentil)etanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A un matraz que contenía (1S)-2-[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-2-oxo-1-(1-vinilciclopentil)etilcarbamato de terc-butilo (70 mg, 0,19 mmol) en 1 mL de 1,4-dioxano se le añadieron 2 mL de HCl 4 N en 1,4-dioxano seguidos de 1 mL de HCl 2 N en Et_{2}O. La solución resultante se agitó a TA durante 3 h, tras las cuales el material de partida se había consumido, a juzgar por la TLC. Se añadieron 3 mL de Et_{2}O a la mezcla de reacción seguidos de 3 mL de hexanos. El precipitado color tostado claro resultante se filtró, se trituró con Et_{2}O, se recogió por filtración y se secó a vacío para dar el compuesto B como un sólido color crema (35 mg, 70% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 5,83 (dd, 1H, J = 10,7, 17,6 Hz), 5,36 (dd, 2H, J = 10,7, 27,7 Hz), 5,07 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,16 (m, 2H), 3,79 (m, 1H), 2,63 (t, 1H, J = 16,2 Hz), 2,45 (m, 1H), 1,86-1,58 (m, 7H), 1,36 (M, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 13
21
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-5-(4-metoxifenil)-3,3-dimetilpentanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 4-(4-Metoxifenil)-2,2-dimetilbutanal
A una solución en tolueno (80 mL) que contenía 4-(4-metoxihenil)-2,2-dimetilbutanonitrilo (3,65 g, 18,0 mmol; véase: Knochel, P. et al.,Org. Lett 2000, 2, 3285 para la preparación de este compuesto), enfriada hasta -78ºC, se le añadieron 18,0 mL de una solución 15 M en tolueno de DIBAL (27,0 mmol). Después de 3 h a -78ºC, la reacción se inactivó con una solución H_{2}O/THF (75 mL/15 mL) que contenía acetato de sodio (4,6 g) y ácido acético (4,6 mL) a -78ºC. A esta solución se le añadió celite seguida de Et_{2}O. La solución se dejó entibiar hasta TA, tras lo cual se filtró a través de un lecho de celite. El lecho de celite se enjuagó abundantemente con Et_{2}O y luego el filtrado se lavó con H_{2}O. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc (9:1)) para producir 3,55 g (17,2 mmol, 96% de rendimiento) del compuesto A.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,47 (s, 1H), 7,07 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,81 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 3,78 (s, 3H), 2,48-2,44 (m, 2H), 1,77-1,73 (m, 2H), 1,11 (s, 6H), ppm.
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B. 1,1,1-Tricloro-5-(4-metoxifenil)-3,3-dimetilpentan-2-ol
A una solución en THF (10 mL) que contenía el compuesto A (511 mg, 2,48 mmol) y cloroformo anhidro (311 mg, 2,60 mmol), enfriada hasta -78ºC, se le añadieron gota a gota 2,6 mL de una solución 1,0 M en THF de LiHMDS (2,60 mmol) durante 5 min. La solución resultante se agitó a -78ºC durante 30 min, tras los cuales la reacción se inactivó con H_{2}O. Tras entibiar, los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc y después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío. El aceite amarillo residual se purificó por cromatografía instantánea (10% EtOAc/hexanos) para proporcionar 588 mg (1,81 mmol, 73% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,10 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 6,82 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,05 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 3,78 (s, 3H), 2,95 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 2,64-2,59 (m, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,73 (m, 1H), 1,32 (s, 3H), 1,25 (s, 3H) ppm.
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C. Ácido 2-azido-5-(4-metoxifenil)-3,3-dimetilpentanoico
A una solución en DME (4 mL) que contenía el compuesto B (581 mg, 1,79 mmol) se le añadieron 7 mL de una solución acuosa que contenía azida de sodio (232 mg, 3,58 mmol) e hidróxido de sodio (286 mg, 7,15 mmol) a TA. Después de agitar durante una noche, la solución se vertió en NaOH 2,0 M y los compuestos orgánicos se extrajeron con Et_{2}O. La capa acuosa se acidificó con NaHSO_{4} sat. y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío y el aceite residual se purificó por cromatografía en columna (5% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) para proporcionar 186 mg (0,67 mmol, 37% de rendimiento) del compuesto C.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,09 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,82 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 3,91 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,58-2,52 (m, 2H), 1,71-1,61 (m, 2H), 1,10 (s, 6H) ppm.
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D. (2S,4S)-1-[2-Azido-5-(4-metoxifenil)-3,3-dimetilpentanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en DMF (15 mL) que contenía el compuesto C (696 mg, 2,52 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (358 mg, 2,77 mmol) se le añadió HATU (1,05 g, 2,77 mmol) a TA. Después de 20 min, se añadió una solución en DMF (8 mL) que contenía 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (755 mg, 2,64 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (341 mg, 2,64 mmol). La solución se agitó durante la noche, tras lo cual se diluyó con EtOAc y se lavó con H2O (3X), NaHCO3 sat. y HCl 2,0. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío. El aceite amarillo residual se purificó por cromatografía en columna (inicialmente hexanos/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (6:3:1), luego hexanos/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (3:1:1)) para proporcionar 605 mg (1,62 mmol, 64% de rendimiento) del compuesto D como un sólido blanco que por ^{1}H RMN fue una mezcla 3:2 de diastereómeros. Se disolvió la mezcla diastereomérica.
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E. Hidrocloruro de (2S,45)-1-[(2S)-2-amino-5-(4-metoxifenil)-3,3-dimetilpentanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en EtOH (8 mL) que contenía paladio al 10% sobre carbono (200 mg) se le añadió una solución 1:1 THF/EtOH (10 mL) que contenía el compuesto D (593 mg, 1,59 mmol). La solución se desgaseó 4X y luego se dispuso en un globo de hidrógeno. Después de 6,5 h, la solución se filtró a través de un lecho de celite, enjuagándose abundantemente con CH_{2}Cl_{2}. El disolvente se eliminó a vacío y el sólido residual se purificó por cromatografía en columna (5% NH_{3} metanólico/CH_{2}Cl_{2}) para proveer 251 mg (0,72 mmol) del compuesto E como la base libre. Este material se disolvió luego en 2 mL de CH_{2}Cl_{2} y se añadieron 3,0 mL de una solución 4,0 M en dioxano de HCl. El disolvente se eliminó luego inmediatamente a vacío y el aceite residual se trituró con Et_{2}O. El sólido resultante se recogió por filtración a vacío para producir 231 mg (0,60 mmol) del compuesto E como la sal de hidrocloruro.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,13 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,81 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 5,31 (d(br), 1H, J = 51,1 Hz), 5,09 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,10 (m, 1H), 4,01 (s, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,65-2,42 (m, 4H), 1,76-1,72 (m, 2H), 1,20 (s, 6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 14
22
(2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(3-fenilpropil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenilpropil)sulfonil]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (50 mL) que contenía (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenilpropil)tio]propilcarbamato de terc-butilo (como se describió anteriormente) (830 mg, 1,79 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (3,09 g, 17,9 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 N (aprox. 10 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 800 mg del compuesto A (1,62 mmol, 91% de rendimiento).
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B. (2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(3-fenilpropil)sulfonil]butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) que contenía ácido trifluoroacético (5 mL) se le añadió el compuesto A (800 mg, 1,62 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se convirtió a la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 532 mg del compuesto B como la base libre (1,35 mmol, 83% de rendimiento). Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que todos los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,26-7,13 (m, 5H), 5,48 (d, 1H, J = 50,7 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,63 (s, 1H), 4,02 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 3,20-3,15 (m, 2H), 2,71 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,65-2,33 (m, 2H), 2,09-2,01 (m, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,35 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 15
23
(2S-4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(4-metilbencil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(4-metilbencil)tio]butanoico
A una solución 1,0 N de NaOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (como se describió anteriormente) (1,0 g, 4,01 mmol, 1,0 eq) se le añadió cloruro de 4-metilbencilo (584 \muL, 4,41 mmol, 1,1 eq). La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La mezcla de reacción se vertió luego en un embudo separador y se lavó con Et_{2}O (1X) para eliminar todo cloruro sin reacción. Se añadió HCl concentrado a la capa acuosa hasta alcanzar un pH de 2-3. La capa acuosa se extrajo luego con Et_{2}O (2X). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 1,29 g del compuesto A (3,65 mmol, 91% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,21 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,11 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 5,46 (d (br), 1H, J = 8,5 Hz), 4,40 (s (br), 1H), 3,83 (q, 2H, J = 11,7 Hz), 2,31 (s, 3H), 1,48-1,42 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(4-metilbencil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (1,29 g, 3,65 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (715 \muL, 4,1 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (1,96 g, 5,17 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (869 mg, 3,04 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (582 \muL, 3,34 mmol, 1,1 eq) en DMF (15 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 1,14 g (2,54 mmol, 84% de rendimiento) del compuesto B como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,26 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,10 (d, 2H, J = 7,8 Hz), 5,48 (d, 1H, J = 51,9 Hz), 5,44 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,37 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 4,25 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 3,81 (s, 2H), 2,72 (t, 1H, J = 15,2 Hz), 2,45-2,28 (m, 4H), 1,47-1,41 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil)-2-metil-2-[(4-metilbencil)sulfonil]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (75 mL) que contenía el compuesto B (1,14 g, 2,54 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (3,09 g, 17,9 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 N (aprox. 15 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 1,03 g del compuesto C (2,14 mmol, 84% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,32 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,19 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 5,51 (m, 1H), 5,48 (d, 1H, J = 50,7 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,99 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,32-3,97 (m, 4H), 2,72 (t, 1H, J = 15,7 Hz), 2,46-2,29 (m, 4H), 1,58 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,41 (s, 9H) ppm.
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D. (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(4-metilbencil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) que contenía ácido trifluoroacético (10 mL) se le añadió el compuesto C (1,03 g, 2,14 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 577 mg (1,51 mmol, 71% de rendimiento) de la base libre del compuesto D como una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,38 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,24 (d, 2H, J = 7,7 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 50,7 Hz), 5,12 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,74 (s, 1H), 4,64 (ABq, 2H, J = 19,7, 13,3 Hz), 4,12 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 2,70-2,43 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 1,76 (s, 3H), 1,58 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 16
24
(2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-{[4-(benciloxi)bencilsulfonil}-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-3-{[4-(benciloxi)bencil]tio}-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metilbutanoico
A una solución en NaOH (25 mL) 1,0 N que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (como se describió anteriormente) (500 mg, 2,01 mmol, 1,0 eq) se le añadió cloruro de 4-benciloxibencilo (515 mg, 2,21 mmol, 1,1 eq). La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La mezcla de reacción se vertió luego en un embudo separador y se lavó con Et_{2}O (1X) para eliminar todo cloruro sin reacción. Se añadió HCl concentrado a la capa acuosa hasta alcanzar un pH de 2-3. La capa acuosa se extrajo luego con Et_{2}O (2X). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 700 mg del compuesto A (1,57 mmol, 78% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,42-7,31 (m, 5H), 7,24 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,90 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 5,46 (s(br), 1H), 5,03 (s, 2H), 4,39 (s(br), 1H), 3,81 (q, 2H, J = 11,5 Hz), 1,47-1,41 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-2-{[4-(Benciloxi)bencil]tio}-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (700 mg, 1,57 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (308 \muL, 1,77 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (847 mg, 2,23 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (375 mg, 1,31 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (251 \muL, 1,44 mmol, 1,1 eq) en DMF (10 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 340 mg (0,628 mmol, 48% de rendimiento) del compuesto B como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,42-7,27 (m, 7H), 6,91 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,46 (d, 1H, J = 50,9 Hz), 5,43 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 5,05-5,01 (m, 3H), 4,37 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 4,26 (m, 1H). 4,03 (m, 1H), 3,80 (s, 2H), 2,71 (t, 1H, J = 15,2 Hz), 2,36 (m, 1H), 1,47-1,41 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-2-{[4-(Benciloxi)bencil]sulfonil)}-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (30 mL) que contenía el compuesto B (340 mg, 0,628 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (1,08 g, 6,28 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 N (aprox. 5 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 280 mg del compuesto C (0,488 mmol, 78% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,43-7,32 (m, 7H), 7,00 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,51 (s(br), 1H), 5,48 (d, 1H, J = 50,7 Hz), 5,06-4,97 (m, 4H), 4,34-3,99 (m, 4H), 2,73 (t, 1H, J = 15,2 Hz), 2,38 (m, 1H), 1,59 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,42 (s, 9H) ppm.
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D. (2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-{[4-(benciloxi)bencil]sulfonil}-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (27 mL) que contenía ácido trifluoroacético (3 mL) se le añadió el compuesto C (280 mg, 0,488 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 182 mg (0,385 mmol, 79% de rendimiento) de la base libre del compuesto D como una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que todos los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,44-7,29 (m, 7H), 7,05 (d, 2H, J = 8,8 Hz), 5,56 (d, 1H, J = 50,0 Hz), 5,11-5,09 (m, 3H), 4,72 (s, 1H), 4,61 (ABq, 2H, J = 18,1, 13,5 Hz), 4,13 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 2,70-2,42 (m, 2H), 1,75 (s, 3H), 1,58 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 17
25
(2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-[(4-cianobencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[(4-cianobencil)tio]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de NaOH (25 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (como se describió anteriormente) (500 mg, 2,01 mmol, 1,0 eq) se le añadió bromuro de 4-cianobencilo (433 mg, 2,21 mmol, 1,1 eq). La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La mezcla de reacción se vertió luego en un embudo separador y se lavó con Et_{2}O (1X) para eliminar todo cloruro sin reacción. Se añadió HCl concentrado a la capa acuosa hasta alcanzar un pH de 2-3. La capa acuosa se extrajo luego con Et_{2}O (2X). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 792 mg del compuesto A (1,72 mmol, 86% de
rendimiento).
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B. (1R)-2-[(4-Cianobencil)tio]-1-{[2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (792 mg, 1,72 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (337 \muL, 1,93 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (924 mg, 2,43 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (409 mg, 1,43 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (274 \muL, 1,57 mmol, 1,1 eq) en DMF (10 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 572 mg (1,24 mmol, 87% de rendimiento) del compuesto B como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,59 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,50 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 50,5 Hz), 5,42 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 5,03 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,41-4,30 (m, 2H), 4,04 (m, 1H), 3,88 (s, 2H), 2,75 (t, 1H, J = 15,7 Hz), 2,39 (m, 1H), 1,46-1,41 (m, 15H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
C. (1R)-2-[(4-Cianobencil)sulfonil]-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (50 mL) que contenía el compuesto B (572 mg, 1,24 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (2,14 g, 12,4 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 N (aprox. 5 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 487 mg del compuesto C (0,989 mmol, 80% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,70 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 5,53 (s(br), 1H), 5,51 (d, 1H, J = 50,7 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 4,99 (d, 1H, J = 9,8 Hz), 4,43-4,29 (m, 3H), 4,04 (m, 1H), 2,77 (t, 1H, J = 15,0 Hz), 2,42 (m, 1H), 1,61 (d, 6H, J = 5,8 Hz), 1,44 (s, 9H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
D. (2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-[(4-cianobencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (54 mL) que contenía ácido trifluoroacético (6 mL) se le añadió el compuesto C (487 mg, 0,989 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 285 mg (0,726 mmol, 73% de rendimiento) de la base libre del compuesto D como una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que todos los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,72 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,51 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,49 (d, 1H, J = 50,6 Hz), 5,02 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,72-4,67 (m, 3H), 4,08 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 2,66-2,35 (m, 2H), 1,66 (s, 3H), 1,51 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 18
26
(2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-metil-3-{[4-(metilsulfonil)bencil]sulfonil}butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-{[4-(metilsulfonil)bencil]tio}butanoico
A una solución en NaOH 1,0 N (25 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (como se describió anteriormente) (500 mg, 2,01 mmol, 1,0 eq) se le añadió cloruro de 4-metilsulfonilbencilo (452 mg, 2,21 mmol, 1,1 eq). La mezcla resultante se dejó agitar a TA durante 18 h. La mezcla de reacción se vertió luego en un embudo separador y se lavó con Et_{2}O (1X) para eliminar todo cloruro sin reacción. Se añadió HCl concentrado a la capa acuosa hasta alcanzar un pH de 2-3. La capa acuosa se extrajo luego con Et_{2}O (2X). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 768 mg del compuesto A (1,84 mmol, 92% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,87 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,39 (s(br), 1H), 4,44 (s(br), 1H), 3,88 (s, 2H), 3,03 (s, 3H), 1,46-1,43 (m, 15H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-{[4-(metilsulfonil)bencil]tio}propilcar-bamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (768 mg, 1,84 mmol, 1,2 eq) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (361 \muL, 2,07 mmol, 1,35 eq) seguida de HATU (989 mg, 2,60 mmol, 1,7 eq). La solución ámbar resultante se agitó a TA durante 20 min. A esta solución en agitación se le añadió una solución de 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (438 mg, 1,53 mmol, 1,0 eq) y N,N-diisopropiletilamina (293 \muL, 1,68 mmol, 1,1 eq) en DMF (10 mL). La solución resultante se agitó a TA durante 18 h y luego se inactivó con solución en NaHCO_{3} sat. (aproximadamente 5 mL). La solución turbia se vertió luego en H_{2}O (aprox. 20 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H_{2}O (2X) y salmuera (1X); se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron a vacío. El aceite ámbar resultante se purificó por cromatografía instantánea, usando 1:1 hexanos/EtOAc como la fase móvil. Se aislaron 683 mg (1,33 mmol, 87% de rendimiento) del compuesto B como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,86 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 5,50 (d, 1H, J = 50,9 Hz), 5,43 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 4,43-4,30 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,90 (s, 2H), 3,02 (s, 3H), 2,74 (t, 1H, J = 15,6 Hz), 2,39 (m, 1H), 1,47-1,41 (m, 15H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-{[4-(metilsulfonil)bencil]sulfonil}propil-carbamato de terc-butilo
A una solución en CHCl_{3} (50 mL) que contenía el compuesto B (683 mg, 1,33 mmol, 1,0 eq) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (2,30 g, 13,3 mmol, 10 eq). La mezcla resultante se agitó a TA durante 18 h. La reacción se inactivó luego con NaOH 1,0 N (aprox. 5 mL) y se separaron las capas. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró a vacío. El sólido esponjoso blanco resultante se usó en la siguiente etapa sin más purificación. Se aislaron 581 mg del compuesto C (1,06 mmol, 80% de rendimiento).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,98 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,66 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,53 (s, 1H), 5,51 (d, 1H, J = 50,5 Hz), 5,08 (d, 1H, J = 10,0 Hz), 4,99 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,44-4,32 (m, 2H), 4,03 (m, 1H), 3,06 (s, 3H), 2,77 (t, 1H, J = 16,0 Hz), 2,41 (m, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,60 (s, 3H), 1,43 (s, 9H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
D. (2S,4S)-1-((2R)-2-Amino-3-metil-3-{[4-(metilsulfonil)bencil]sulfonil}butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (63 mL) que contenía ácido trifluoroacético (7 mL) se le añadió el compuesto C (581 mg, 1,06 mmol, 1,0 eq). Se agitó la solución amarilla pálida a temperatura ambiente durante 2 horas, tras las cuales se eliminó el disolvente a vacío. La sal de TFA resultante se transformó en la base libre por adición de solución en NaHCO_{3} sat. y extrayendo la capa acuosa (2X) con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron a vacío. La espuma blanquecina resultante se purificó por cromatografía instantánea usando MeOH al 5% (con NH_{3} al 0,1%) en CH_{2}Cl_{2} como la fase móvil, para proporcionar 296 mg (0,664 mmol, 63% de rendimiento) de la base libre del compuesto D como una espuma blanca. Para formar la sal de HCl, la base libre se disolvió en Et_{2}O y se añadió acetona hasta que los sólidos estuvieron en solución. Se añadió gota a gota HCl 2,0 M en éter hasta que no se formó más precipitado. El precipitado se filtró luego y se lavó varias veces con Et_{2}O. La sal resultante se secó en alto vacío.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,91 (d, 2H, J = 8,1 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 5,49 (d, 1H, J = 50,3 Hz), 5,02 (d, 1H, J = 9,7 Hz), 4,77-4,68 (m, 3H), 4,09 (m, 1H), 3,85 (m, 1H), 3,14 (s, 3H), 2,66-2,36 (m, 2H), 1,67 (s, 3H), 1,53 (s, 3H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia 19
27
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopentil]etanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 1-(4-Fluorobencil)ciclopentanocarbonitrilo
A una solución agitada de bromuro de 4-fluorobencilo (10,0 g, 52,9 mmol) en tolueno (100 mL) se le añadió ciclopentanocarbonitrilo (6,1 mL, 58,2 mmol). La mezcla se agitó completamente y se enfrió hasta 0ºC. Se añadió lentamente una solución 0,5 M de KHMDS en tolueno (159 mL, 79,35 mmol) con un embudo de adición, y la mezcla de reacción se entibió luego hasta TA y se agitó durante 14 horas. Después, la mezcla de reacción se inactivó con HCl 1,0 M hasta pH <7. Las capas se separaron y la capa acuosa se re-extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (10:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 8,61 g (80% de rendimiento) del compuesto A como un líquido amarillo.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,28-7,24 (m, 2H), 7,01 (t, J=8,7 Hz, 2H), 2,84 (s, 2H), 2,07-2,01 (m, 2H), 1,89-1,66 (m, 6H) ppm.
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B. 1-(4-Fluorobencil)ciclopentanocarbaldehído
Una solución agitada del compuesto A (8,61 g, 42,36 mmol) en tolueno (150 mL) se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota hidruro de diisobutilaluminio puro (DIBAL, 11,3 mL, 63,54 mmol) con jeringa y la mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 2 horas. Se añadió cautelosamente una solución de THF (100 mL), agua (30 mL), ácido acético (8 mL) y acetato de sodio (7 g), y la mezcla de reacción se entibió hasta TA y se agitó una hora más. Después de añadir Et_{2}O, la mezcla bifásica se filtró a vacío a través de una almohadilla de Celite, se vertió en un embudo separador y la capa acuosa se separó. La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (10:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 6,55 g (75% de rendimiento) del compuesto B como un líquido amarillo.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,53 (s, 1H), 7,07 (dd, J=8,4, 5,5 Hz, 2H), 6,93 (t, J=8,7 Hz, 2H), 2,88 (s, 2H), 1,93-1,87 (m, 2H), 1,67-1,48 (m, 6H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
C. Amino[1-( 4-fluorobencil)ciclopentil]acetonitrilo
A una solución agitada del compuesto B (6,55 g, 31,76 mmol) en metanol (30 mL) y agua (18 mL) se le añadieron NH_{4}OH (contenido de amoníaco \sim30%, 4,4 mL, 33,35 mmol), KCN (2,17 g, 33,35 mmol) y NH_{4}Cl (1,87 g, 34,94 mmol). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta 70ºC durante 14 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (4:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 5,99 g (81% de rendimiento) del compuesto C como un aceite viscoso incoloro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,23-7,19 (m, 2H), 6,98 (t, J=8,7 Hz, 2H), 3,54 (d, J=3,5 Hz, 1H), 2,97 (d, J=13,6 Hz, 1H), 2,63 (d, J=13,7 Hz, 1H), 2,08 (br s, 2H), 1,75-1,57 (m, 8H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
D. Hidrocloruro de ácido amino[1-(4-fluorobencil)ciclopentil]acético
A una solución agitada del compuesto C (5,99 g, 25,79 mmol) en ácido acético glaciar (20 mL) se le añadió HCl concentrado (100 mL). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta reflujo moderado (130ºC) durante 16 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se concentró a vacío hasta secarse, produciendo un sólido blanco. El sólido se lavó con Et_{2}O en una frita de vidrio por filtración a vacío y se secó en alto vacío para producir 6,33 g (85% de rendimiento) del compuesto D como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CD_{3}OD) 400 MHz \delta 7,30 (dd, J=8,7, 5,4 Hz, 2H), 7,04 (t, J=8,8 Hz, 2H), 3,89 (s, 1H), 2,85-2,76 (m, 2H), 1,79-1,43 (m, 8H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
E. Ácido [(terc-butoxicarbonil)amino][1-(4-fluorobencil)ciclopentil]acético
A una solución agitada del compuesto D (6,33 g, 21,99 mmol) en 1,4-dioxano (100 mL) se le añadió una solución 1,0 M de NaOH en agua (76 mL, 75,57 mmol) seguida de agua (24 mL). La mezcla de reacción se agitó a TA durante varios minutos hasta que todo el material de partida se había disuelto completamente. Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo sólido (BOC_{2}O, 8,25 g, 37,78 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 horas. Se añadió luego lentamente HCl concentrado hasta pH < 7 seguido de dilución con EtOAc. La capa acuosa se separó y luego se re-extrajo con dos porciones de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para producir 7,95 g (90% de rendimiento) del compuesto E como una espuma blanca.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,20 (dd, J=8,6. 5.5 Hz, 2H), 6,96 (t, J=8,7 Hz, 2H), 5,00 (d, J=9,1 Hz, 1H), 4,28 (d, J=9,0 Hz, 1H). 2,72-2,64 (m, 2H), 1,63-1,35 (m, 8H), 1,45 (s, 9H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
F. (1S)-2-{(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-1-[1-(4-fluorobencil)ciclopentil]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
A una solución agitada del compuesto E (1,90 g, 5,41 mmol) en DMF (54 mL) se le añadió 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (1,55 g, 5,41 mmol), HATU (2,06 g, 5,41 mmol) y diisopropiletilamina (2,83 mL, 16,23 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de añadir agua (50 mL), la mezcla de reacción se extrajo con cinco porciones de EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con agua, NH_{4}Cl saturado, NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío. Los dos diastereómeros se separaron por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2:1 hexanos:EtOAc) para proporcionar 586 mg (25% de rendimiento del diastereómero deseado) del compuesto F como un aceite incoloro. El compuesto F fue el más polar (R_{f} inferior) de los dos diastereómeros.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,20-7,16 (m, 2H), 7,00 (t, J=8,7, 2H), 5,22 (br d, J=51,1 Hz, 1H), 5,15 (d, J=5,9 Hz, 1H), 4,93 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,26 (d, J=9,7 Hz, 1H), 3,77-3,63 (m, 1H), 3,28-3,19 (m, 1H), 2,78-2,52 (m, 4H), 2,32-2,11 (m, 2H), 1,73-1,52 (m, 6H), 1,42 (s, 9H) ppm.
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G. (2S,4S)-1-{(2S)-2-Amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopentil]etanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución agitada del compuesto F (586 mg, 1,31 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (13 mL) se le añadió TFA (1,00 mL, 13,1 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 horas. Después de concentrar a vacío, la mezcla de reacción se redisolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (MeOH al 5% (con NH_{3} al 2%) en CH_{2}Cl_{2}) proporcionó 160 mg (35% de rendimiento) del compuesto G como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,21-7,17 (m, 2H), 6,99 (t, J=8,6 Hz, 2H), 5,24 (br d, J=51,1 Hz, 1H), 4,93 (d, J=9,3 Hz, 1H), 3,53-3,40 (m, 1H), 3,34 (s, 1H), 3,29-3,20 (m, 1H), 2,92 (d, J=13,6 Hz, 1H), 2,66 (d, J=13,7 Hz, 1H), 2,63-2,49 (m, 2H), 2,31-1,32 (m, 8H) ppm.
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H. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopentil]etanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución agitada del compuesto G (160 mg, 0,460 mmol) en Et_{2}O (5 mL) se le añadió una solución de HCl 2,0 M en Et_{2}O (1,0 mL). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 minutos, durante los cuales precipitó un sólido blanco. El sólido se recogió por filtración a vacío en una frita de vidrio y se secó durante la noche en alto vacío para dar 139 mg (79% de rendimiento) del compuesto H como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CD_{3}OD) 400 MHz \delta 7,31-7,27 (m, 2H), 7,13 (t, J=8,8 Hz, 2H), 5,30 (br d, J=51,1, 1H), 5,01 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,56-3,43 (m, 1H), 3,20-3,11 (m, 1H), 2,90 (d, J=13,9 Hz, 1H), 2,73 (d, J=14,0 Hz, 1H), 2,60-2,30 (m, 2H), 2,14-1,37 (m, 8H) ppm.
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Ejemplo de referencia 20
28
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2S)-2-amino-2-{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}etanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 1-[4-(Trifluorometil)fenil]ciclopentanocarbonitrilo
A una solución agitada de 4-fluorobenzotrifluoruro (5,0 g, 30,47 mmol) en tolueno (40 mL) se le añadió ciclopentanocarbonitrilo (10,5 mL, 100,55 mmol) seguido de una solución 0,5 M de KHMDS en tolueno (92 mL, 45,71 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 70ºC y se agitó durante 14 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se inactivó con HCl 1 M hasta pH < 7. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (6:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 7,53 g de una mezcla del compuesto A y ciclopentanocarbonitrilo residual. Ya que estos dos compuestos no se separaron fácilmente por cromatografía, esta mezcla se llevó directamente a la siguiente etapa.
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B. 1-[4-(Trifluorometil)fenil]ciclopentanocarbaldehído
Una solución agitada del compuesto A (7,53 g como se describió anteriormente) en tolueno (100 mL) se enfrió hasta -78ºC. Se añadió lentamente una solución de hidruro de diisobutilaluminio 1,5 M en tolueno (DIBAL, 32,0 mL, 47,21 mmol) con jeringa, y la mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 2 horas. Se añadió una solución de THF (100 mL), agua (20 mL), ácido acético (6 mL) y acetato de sodio (6,6 g), y la mezcla de reacción se entibió hasta TA y se agitó una hora más. Después de añadir Et_{2}O, la mezcla bifásica se filtró a vacío a través de una almohadilla de Celite, se vertió en un embudo separador y la capa acuosa se separó. La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (10:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 3,91 g (53% de rendimiento en las últimas dos etapas) del compuesto B como un líquido incoloro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,41 (s, 1H), 7,61 (d, J=8,1 Hz, 2H), 7,38 (d, J=8,2 Hz, 2H), 2,58-2,52 (m, 2H), 1,93-1,65 (m, 6H) ppm.
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C. Amino{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}acetonitrilo
A una solución agitada del compuesto B (3,91 g, 16,14 mmol) en metanol (20 mL) y agua (12 mL) se le añadió NH_{4}OH (contenido de amoníaco \sim30%, 2,20 mL, 16,95 mmol), KCN (1,11 g, 16,95 mmol) y NH_{4}Cl (950 g, 17,76 mmol). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta 70ºC durante 6 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (2:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 2,16 g (50% de rendimiento) del compuesto C como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,63 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,54 (d, J=8,4 Hz, 2H), 3,74 (s, 1H), 2,43-2,36 (m, 1H), 2,32-2,25 (m, 1H), 2,15-2,08 (m, 1H), 2,01-1,93 (m, 1H), 1,85-1,72 (m, 4H), 1,54 (br s, 2H) ppm.
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D. Hidrocloruro del ácido amino{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}acético
A una solución agitada del compuesto C (2,16 g, 8,05 mmol) en ácido acético glaciar (10 mL) se le añadió HCl concentrado (50 mL). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta reflujo moderado (130ºC) durante 16 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se concentró a vacío hasta secarse, produciendo un sólido blanco. El sólido se secó en alto vacío para proporcionar 2,61 g (100% de rendimiento) del compuesto D como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,69 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,60 (d, J=8,4 Hz, 2H), 4,20 (d, J=2,4 Hz, 1H), 2,42-2,34 (m, 2H), 2,27-2,19 (m, 1H). 2,14-2,07 (m, 1H). 1,86-1,79 (m, 2H), 1,61-1,51 (m, 2H) ppm.
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E. Ácido [(terc-butoxicarbonil)amino]{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}acético
A una solución agitada del compuesto D (2,61 g, 8,05 mmol) en 1,4-dioxano (20 mL) y agua (20 mL) se le añadió NaOH sólido (1,08 g, 27,06 mmol). Después de agitar a TA durante varios minutos, se añadió dicarbonato de di-terc-butilo sólido (BOC_{2}O, 3,94 g, 18,04 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 horas. Se añadió luego lentamente HCl concentrado hasta pH < 7 seguido de dilución con EtOAc. La capa acuosa se separó, se saturó con NaCl y luego se re-extrajo con dos porciones de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para producir 3,01 g (86% de rendimiento) del compuesto E como un aceite viscoso incoloro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,55 (d, J=7,8 Hz, 2H), 7,40 (d, J=8,2 Hz, 2H), 4,85 (d, J=8,5 Hz, 1H). 4,55 (d, J=8,5 Hz, 1H), 2,43-1,59 (m, 8H), 1,42 (s, 9H) ppm.
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F. (1S)-2-[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-2-oxo-1-{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}etilcarbamato de terc-butilo
A una solución agitada del compuesto E (1,01 g, 2,61 mmol) en DMF (26 mL) se le añadió 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (747 mg, 2,61 mmol), HATU (993 mg, 2,61 mmol) y diisopropiletilamina (1,40 mL, 7,83 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de añadir agua (20 mL), la mezcla de reacción se extrajo con cinco porciones de EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con agua, NaHSO_{4} 1,0 M, NaHCO_{3} saturado, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (1:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 442 mg (35% de rendimiento) del producto como una mezcla de diastereómeros. La cromatografía sobre gel de sílice adicional (2:1 hexanos:EtOAc) separó los diastereómeros y proporcionó 145 mg del compuesto F como una espuma blanca. El compuesto F fue el más polar (R_{f} inferior) de los dos diastereómeros.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,63 (d, J=8,4 Hz, 2H), 7,56 (d, J=8,6 Hz, 2H), 5,27 (d, J=9,7 Hz, 1H). 5,08 (br d, J=50,9 Hz, 1H), 4,84 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,49 (d, J=9,9 Hz, 1H), 3,63-3,50 (m, 1H), 2,77 (dd, J=23,6, 12,0 Hz, 1H), 2,48 (t, J=15,5 Hz, 1H), 2,25-2,20 (m, 2H), 2,10-2,03 (m, 2H), 1,77-1,71 (m, 2H), 1,52-1,48 (m, 2H), 1,41 (s, 9H) ppm.
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G. (2S,4S)-1-((2S)-2-Amino-2-{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}etanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución agitada del compuesto F (145 mg, 0,30 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3 mL) se le añadió TFA (0,116 mL, 1,50 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 horas. Después de concentrar a vacío, la mezcla de reacción se redisolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (MeOH al 5% (con NH_{3} al 2%) en CH_{2}Cl_{2}) proporcionó 62 mg (54% de rendimiento) del compuesto G como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,62 (d, J=8,2 Hz, 2H), 7,54 (d, J=8,6 Hz, 2H), 5,12 (br d, J=51,1 Hz, 1H), 4,86 (d, J=9,5 Hz, 1H), 3,57 (s, 1H), 3,55-3,42 (m, 1H), 2,97-2,88 (m, 1H), 2,50 (t, J=15,2 Hz, 1H), 2,24-2,10 (m, 5H), 1,99 (br s, 2H), 1,76-1,71 (m, 2H), 1,54-1,41 (m, 2H) ppm.
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H. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2S)-2-amino-2-{1-[4-(trifluorometil)fenil]ciclopentil}etanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
Se añadió éter dietílico (3 mL) a un matraz que contenía el compuesto G (51 mg, 0,133 mmol). Se añadieron algunas gotas de acetona para dejar que la solución se tornara homogénea. Se añadió una solución de HCl 2,0 M en Et_{2}O (1,0 mL) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 5 minutos. El disolvente se eliminó a vacío y el sólido resultante se secó durante la noche en alto vacío para proporcionar 55 mg (98% de rendimiento) del compuesto H como un sólido blanco.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,62 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,58 (d, J=9,0 Hz, 2H), 5,13 (br d, J=51,1 Hz, 1H), 4,86 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,37 (s, 1H), 3,54-3,40 (m, 1H), 2,95-2,86 (m, 1H), 2,44-2,18 (m, 4H), 1,92-1,84 (m, 2H), 1,64-1,58 (m, 2H), 1,33-1,25 (m, 2H) ppm.
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Ejemplo de referencia 21
29
Hidrocloruro de (2S,4S)-1{(2S)-2-amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]etanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 1-(4-Fluorobencil)ciclopropanocarbonitrilo
Una solución agitada de ciclopropanocarbonitrilo (4,3 mL, 58,2 mmol) en tolueno (100 mL) se enfrió hasta 0ºC. Se añadió lentamente una solución 0,5 M de KHMDS en tolueno (159 mL, 79,35 mmol) con un embudo de adición, y la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 30 minutos.
Se añadió luego gota a gota una solución de bromuro de 4-fluorobencilo (10,0 g, 52,9 mmol) en tolueno (20 mL) a 0ºC. La mezcla de reacción se entibió hasta TA y se agitó durante 3 horas. Después, la mezcla de reacción se inactivó con HCl 1,0 M hasta pH <7. Las capas se separaron y la capa acuosa se re-extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (5% EtOAc en hexanos) proporcionó 7,76 g (84% de rendimiento) del compuesto A como un líquido amarillo.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,25-7,22 (m, 2H), 7,03 (t, J=8,7 Hz, 2H), 2,77 (s, 2H), 1,28 (dd, J=7,1, 5,1 Hz, 2H). 0,94 (dd, J=7,1, 5,1 Hz, 2H) ppm.
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B. 1-(4-Fluorobencil)ciclopropanocarbaldehído
Una solución agitada del compuesto A (7,76 g, 44,29 mmol) en tolueno (150 mL) se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota hidruro de diisobutilaluminio puro (DIBAL, 11,8 mL, 66,43 mmol) con jeringa y la mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 2 horas. Se añadió cautelosamente una solución de THF (100 mL), agua (40 mL), ácido acético (8 mL) y acetato de sodio (7,5 g), y la mezcla de reacción se entibió hasta TA y se agitó una hora más. Después de añadir Et_{2}O, la mezcla bifásica se filtró a vacío a través de una almohadilla de Celite, se vertió en un embudo separador y la capa acuosa se separó. La capa orgánica se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (5% EtOAc en hexanos) proporcionó 7,20 g (91% de rendimiento) del compuesto B como un líquido incoloro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,71 (s, 1H), 7,16-7,13 (m, 2H), 6,94 (t, J=8,8 Hz, 2H), 2,96 (s, 2H), 1,20-1,17 (m, 2H), 1,00-0,97 (m, 2H) ppm.
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C. Amino[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]acetonitrilo
A una solución agitada del compuesto B (7,20 g, 40,40 mmol) en metanol (40 mL) y agua (25 mL) se le añadió NH_{4}OH (contenido de amoníaco 30%, 5,51 mL, 42,42 mmol), KCN (2,76 g, 42,42 mmol) y NH_{4}Cl (2,38 g, 44,44 mmol). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta 70ºC durante 14 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (20% EtOAc en hexanos) proporcionó 2,21 g (27% de rendimiento) del compuesto C como un aceite viscoso incoloro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,22-7,19 (m, 2H), 6,98 (t, J=8,6 Hz, 2H), 3,62 (d, J=3,3 Hz, 1H), 3,12 (d, J=14,3 Hz, 1H), 2,56 (d, J=14,3 Hz, 1H), 1,93 (br s, 1H), 1,82 (br s, 1H), 0,78-0,76 (m, 2H), 0,67-0,64 (m, 1H), 0,54-0,51 (m, 1H) ppm.
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D. Hidrocloruro de ácido amino[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]acético
A una solución agitada del compuesto C (2,21 g, 10,82 mmol) en ácido acético glaciar (10 mL) se le añadió HCl concentrado (50 mL). La mezcla de reacción turbia se calentó hasta reflujo moderado (130ºC) durante 16 horas. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se concentró a vacío hasta secarse, produciendo un sólido blanco. El sólido se lavó con Et_{2}O en una frita de vidrio por filtración a vacío y se secó en alto vacío para producir 2,81 g (100% de rendimiento) del compuesto D como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,18 (dd, J=8,8, 5,5 Hz, 2H), 7,01 (t, J=8,8 Hz, 2H), 3,54 (s, 1H), 2,84 (d, J=4,9 Hz, 2H), 0,89-0,84 (m, 1H), 0,70-0,59 (m, 2H), 0,51-0,47 (m, 1H) ppm.
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E. Ácido [(terc-butoxicarbonil)amino][1-(4-fluorobencil)ciclopropil]acético
A una solución agitada del compuesto D (2,81 g, 10,85 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) se le añadió una solución 1,0 M de NaOH en agua (33 mL, 33,03 mmol) seguida de agua (17 mL). La mezcla de reacción se agitó a TA durante varios minutos hasta que todo el material de partida se había disuelto completamente. Se añadió dicarbonato de di-terc-butilo sólido (BOC_{2}O, 3,60 g, 16,52 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante 14 horas. Se añadió luego lentamente HCl concentrado hasta pH < 7 seguido de dilución con EtOAc. La capa acuosa se separó y luego se re-extrajo con dos porciones de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío para producir 4,06 g (112% de rendimiento) del compuesto E como un aceite viscoso amarillo claro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,19-7,15 (m, 2H), 6,95 (t, J=8,7 Hz, 2H), 4,98 (d, J=7,0 Hz, 1H), 3,98 (d, J=7,5 Hz, 1H), 2,85 (d, J=14,5 Hz, 1H), 2,60 (d, J=14,2 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H), 0,79-0,72 (m, 2H), 0,51-0,47 (m, 2H) ppm.
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F. (1S)-2-[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-1-[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo
A una solución agitada del compuesto E (4,06 g, 12,56 mmol) en DMF (125 mL) se le añadió 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (3,60 g, 12,56 mmol), HATU (4,78 g, 12,56 mmol) y diisopropiletilamina (6,60 mL, 37,68 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de añadir agua (125 mL), la mezcla de reacción se extrajo con cuatro porciones de EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con NH_{4}Cl saturado, NaHCO_{3} saturado, agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a vacío. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (1:1 hexanos:EtOAc) proporcionó 1,29 mg (25% de rendimiento) del producto como una mezcla de diastereómeros. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice adicional (2:1 hexanos:EtOAc) separó los diastereómeros y proporcionó 853 mg del compuesto F como una espuma blanca. El compuesto F fue el más polar (R_{f} inferior) de los dos diastereómeros.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,29 (dd, J=8,6, 5,5 Hz, 2H), 7,03 (t, J=8,7 Hz, 2H), 5,15 (d, J=9,3 Hz, 1H), 5,14 (br d, J=51,1 Hz, 1H), 4,76 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,42 (d, J=9,3 Hz, 1H), 3,29-3,16 (m, 1H), 3,15-3,11 (m, 1H), 3,07-2,98 (m, 1H), 2,52 (t, J=15,2 Hz, 1H), 2,24-2,17 (m, 1H), 2,14-2,07 (m, 1H), 1,44 (s, 9H), 0,86-0,76 (m, 2H), 0,56-0,45 (m, 2H) ppm.
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G. (2S,4S)-1-{(2S)-2-Amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]etanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución agitada del compuesto F (853 mg, 2,03 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 mL) se le añadió TFA (1,56 mL, 20,4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 18 horas. Después de concentrar a vacío, la mezcla de reacción se redisolvió en EtOAc y se lavó con NaHCO_{3} saturado, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío. La purificación por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (MeOH al 5% (con NH_{3} al 2%) en CH_{2}Cl_{2}) proporcionó 401 mg (62% de rendimiento) del compuesto G como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,27-7,24 (m, 2H), 7,00 (t, J=8,6 Hz, 2H), 5,17 (br d, J=51,3 Hz, 1H), 4,76 (d, J=9,3 Hz, 1H), 3,48 (s, 1H), 3,32-3,01 (m, 3H), 2,54 (t, J=15,0 Hz, 1H), 2,22-2,05 (m, 2H), 1,74 (br s, 2H), 0,79-0,71 (m, 2H), 0,53-0,39 (m, 2H) ppm.
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H. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-2-[1-(4-fluorobencil)ciclopropil]etanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
Se añadió éter dietílico (8 mL) a un matraz que contenía el compuesto G (401 mg, 1,26 mmol). Se añadió aproximadamente 1 mL de acetona para tornar la solución homogénea. Se añadió una solución de HCl 2,0 M en Et_{2}O (6,0 mL) y la mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó un sólido blanco que se trituró con una porción de la solución de HCl/Et_{2}O. El sólido se recogió por filtración a vacío en una frita de vidrio, se lavó con varias porciones de Et_{2}O y se secó durante la noche en alto vacío para dar 376 mg (84% de rendimiento) del compuesto H como un sólido blanco.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,29-7,23 (m, 2H), 7,07-7,01 (m, 2H), 5,22 (br d, J=50,6 Hz, 1H), 4,82 (d, J=9,1 Hz, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,25-2,92 (m, 3H), 2,28 (t, J=16,0 Hz, 1H), 2,32-2,21 (m, 2H), 1,16-0,43 (m, 4H) ppm.
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Ejemplo de referencia 22
30
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2R)-2-amino-3-(bencilsulfonil)-3-metilbutanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-3-(benciltio)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)aminol-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió bromuro de bencilo (755 mg, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,1 g (81%) del compuesto A como un sólido oleoso puro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,32-7,20 (m, 5H), 5,44 (d (br), 1H, J = 7,2 Hz), 4,38 (d (br), 1H, J = 8,0 Hz), 3,80 (m, 2H), 1,45-1,43 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-2-(Benciltio)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil)-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (1,1 g, 0,0032 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,4 g, 0,0107 mol) se le añadió HATU (1,85 g, 0,0049 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,0 g, 0,0035 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 445 mg (32%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,36-7,18 (m, 5H), 5,37 (d (br), 1H), 5,45 (d (br), 1H, J=51,6 Hz), 5,00 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,35 (d, 1H, J=8,8), 4,27-3,92 (m, 4H), 2,67-2,59 (m, 1H), 2,40-2,23 (m, 1H), 1,46-1,36 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-2-(Bencilsulfonil)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (75 mL) que contenía el compuesto B (445 mg, 0,00102 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (1,8 g 0,0102 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 421 mg del compuesto C bruto (88%). El sólido tostado resultante se usó sin purificación adicional.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2R)-2-amino-3-(bencilsulfonil)-3-metilbutanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (421 mg, 0,00102 mmol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido tostado puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 96 mg del compuesto D.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,49-7,35 (m, 5H), 5,47 (d (br), 1H, J=50,8 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,92-4,59 (m, 3H), 4,15-3,91 (m, 2H), 2,71-2,43 (m, 2H), 1,77 (s, 3H), 1,60 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 23
31
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(3-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[(3-metoxibencil)tio]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió cloruro de 3-metoxibencilo (691 mg, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua (50 mL) y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La capa acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,35 g (91%) del compuesto A.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,19 (dd, 1H, J=7,8 Hz), 6,90 (d, 1H, J=7,2 Hz), 6,86 (s, 1H), 6,76 (dd, 1H, J=8,4 Hz), 5,43 (d (br), 1H, J = 6,4 Hz), 4,39 (d (br), 1H, J = 6,8 Hz), 3,82-3,74 (m, 5H), 1,45-1,35 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(3-metoxibencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 ml) que contenía el compuesto A (1,3 g, 0,0035 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,36 g, 0,0106 mol) se le añadió HATU (2,0 g, 0,0053 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,1 g, 0,0038 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 617 mg (38%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,18 (dd, 1H, J=7,8 Hz), 6,95 (s, 1H,), 6,92 (d (br), 1H, J=2,8), 6,74 (dd, 1H, J=8,2 Hz), 5,41 (d (br), 1H, J = 8,8 Hz), 5,39 (d (br), 1H, J=51,2), 5,00 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,35 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,28-3,78 (m, 7H), 2,71-2,52 (m, 1H), 2,46-2,27 (m, 1H), 1,62-1,39 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S}-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(3-metoxibencil)sulfonil]-2-metilpropilcarbamato
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) que contenía el compuesto B (617 mg, 0,0013 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (2,3g 0,013 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 647 mg de un sólido bruto (98%). El sólido blanquecino resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,30-7,25 (m, 1H), 7,01-6,98 (m, 2H,), 6,92-6,88 (m, 1H), 5,49 (d (br), 1H, J=8,4 Hz), 5,39 (d (br), 1H, J = 50,8 Hz), 5,03 (d (br), 1H, J=9,2), 4,96 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,32-3,80 (m, 4H), 3,79 (s, 3H), 2,71-2,54 (m, 1H), 2,46-2,24 (m, 1H), 1,59-1,39 (m, 15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(3-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (647 mg, 0,0013 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 221 mg del compuesto D.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz 5 7,31 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 7,18-7,06 (m, 2H), 6-98 (d, 1H, J=8,0 Hz), 5,49 (d (br), 1H, J=50,8 Hz), 5,10 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,72-4,58 (m, 3H), 4,15-3,88 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,69-2,44 (m, 2H). 1,76 (s, 3H), 1,59 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 24
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32 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[1,1'-bifenil-4-ilmetil)sulfonil]-3-metilbutanoil]-4-fluoropirrolidin-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-3-[(1,1'-bifenil-4-ilmetil)tio]-2-{(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía 1,4-dioxano (10 mL) y ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió cloruro de 4-fenilbencilo (894 mg, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en éter. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,4 g (82%) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,59-7,31 (m, 9H), 5,49 (m, 1H), 4,32 (d (br), 1H, J = 9,6 Hz), 3,88-3,71 (m, 2H), 1,57-1,40 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-2-[(1,1'-Bifenil-4-ilmetil)tio]-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarba-mato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (1,4 g, 0,0034 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,3 g, 0,0101 mol) se le añadió HATU (1,9 g, 0,0051 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,1 g, 0,0037 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 828 mg (48% de rendimiento) de producto extremadamente puro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,57-7,30 (m, 9H), 5,47-5,33 (m, 2H), 5,03 (d(br), 1H, J=9,6), 4,39 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,31-3,97 (m, 2H), 3,89 (s, 2H), 2,68 (dd, 1H. J=15,6 Hz), 2,44-2,28 (m, 1H), 1,58-1,41 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-2-[(1,1'-Bifenil-4-ilmetil)sulfonil]-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) que contenía el compuesto B (828 mg, 0,0016 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (2,8 g 0,0162 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 867 mg del compuesto C (99% de rendimiento). El sólido blanco resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,63-7,33 (m, 9H), 5,53 (d(br), 1H, J=8,4 Hz), 5,42 (d(br), 1H, J = 50,8 Hz), 5,07 (d(br), 1H, J=9,2), 4,99 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 4,39-4,00 (m, 4H), 2,70 (dd, 1H, J=15,2 Hz), 2,47-2,34 (m, 1H), 1,62-1,40 (m, 15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(1,1'-bifenil-4-ilmetil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (867 mg, 0,0016 mmol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 307 mg del compuesto D.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,66-7,32 (m, 9H), 5,48 (d(br), 1H, J=50,4 Hz), 5,10 (d, 1H, J=8,0), 4,86-4,64 (m, 3H), 4,19-3,86 (m, 2H), 2,70-2,41 (m, 2H), 1,78 (s, 3H), 1,63 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 25
33
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(2-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[(2-metoxibencil)tio]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió cloruro de 2-metoxibencilo (691 mg, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,1 g (74%) del compuesto A.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,25-7,21 (m, 2H), 6,90-6,85 (m, 2H), 5,63-5,55 (m, 1H), 4,31 (d(br), 1H, J = 9,2 Hz), 3,88-3,79 (m, 5H), 1,58-1,33 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(2-metoxibencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (1,0 g, 0,0027 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,05 g, 0,0081 mol) se le añadió HATU (1,5 g, 0,00405 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (851 mg, 0,003 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 668 mg (53% de rendimiento) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,31 (dd, 1H, J=7,6Hz), 7,19 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 6,92-6,83 (m, 2H), 5,47-5,31 (m, 2H), 5,03 (d(br), 1H, J=9,2), 4,34 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 4,26-3,66 (m, 7H), 2,68 (dd, 1H, J=15,2 Hz), 2,43-2,26 (m, 1H), 1,57-1,37 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(2-metoxibencil)sulfonil]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (75 mL) que contenía el compuesto B (668 mg, 0,0014 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (2,5 g 0,0140 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 678 mg del compuesto C (95%). El sólido blanquecino resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,44 (dd, 1H, J=7,6Hz), 7,34 (m, 1H), 6,99-6,91 (m, 2H), 5,61-5,57 (m, 1H), 5,40 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,00-4,95 (m, 2H), 4,49-3,85 (m, 7H), 2,65 (dd, 1H, J=15,6 Hz), 2,45-2,28 (m, 1H), 1,62-1,37 (m, 15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(2-metoxibencil)sulfonil]-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (678 mg, 0,00136 mmol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 313 mg del compuesto D.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,45-7,38 (m, 2H), 7,06 (d, 1H, J=8,4 Hz), 6,99-6,99 (dd, 1H, J=7,2 Hz), 5,49 (d(br), 1H, J=50,8 Hz), 5,09 (m, 1H, J=9,2), 4,13-3,84 (m, 6H), 2,67-2,44 (m, 2H), 1,74 (s, 3H), 1,58 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 26
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34 
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(2S,4S)-1-{(2R)-2-Amino-3-metil-3-[(piridin-3-ilmetil)tio]butanoil-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino)-3-metil-3-[(piridin-3-ilmetil)tio]butanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió bromohidrato de 3-(bromometil)piridina (1,1 g, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 4,0) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 403 mg (30%) del compuesto A como un sólido oleoso puro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,77 (s, 1H), 8,56 (d, 1H, J=5,6 Hz), 7,80 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,37 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 5,47 (d(br), 1H, J = 9,6 Hz), 4,53 (d(br), 1H, J = 9,6 Hz), 3,95 (dd, 2H, J=69,6 Hz), 1,60-1,35 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(piridin-3-ilmetil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (400 mg, 0,0012 mol) y N,N-diisopropiletilamina (456 mg, 0,0035 mol) se le añadió HATU (670 mg, 0,0018 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S, 4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (370 mg, 0,0013 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 314 mg (61%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,58 (s, 1H), 8,46 (d, 1H, J=4,8 Hz), 7,71 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,21 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 5,45 (d(br), 1H, J=9,2 Hz), 5,43 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,02 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,41 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 4,37-3,79 (m, 4H), 2,70 (dd, 1H, J=15,6 Hz), 2,46-2,29 (m, 1H), 1,55-1,39 (m, 15H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(piridin-3-ilmetil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (22 mL) que contenía el compuesto B (314 mg, 0,720 mmol) se le añadió TFA (3 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 69 mg del compuesto C.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,57 (s, 1H), 8,46 (d, 1H, J=5,2 Hz), 7,71 (d, 1H, J=6,4 Hz), 7,23 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 5,44 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 4,97 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,20-3,58 (m, 5H), 2,66 (dd, 1H, J=15,2 Hz), 2,39-2,22 (m, 1H), 1,78 (s(br), 2H), 1,48 (s, 3H), 1,39 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 27
35 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(piridin-2-ilmetil)tio]butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(piridin-2-ilmetil)tio]butanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2Rr)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió bromohidrato de 2-(bromometil)piridina (1,1 g, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 4,0) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 557 mg (41%) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,53 (d, 1H, J=4,8 Hz), 7,75 (dd, 1H, J=7,6 Hz), 7,34-7,30 (m, 2H), 5,73 (d(br), 1H, J = 8,8 Hz), 4,47 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,41-4,01 (m, 2H) 1,55 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(piridin-2-ilmetil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (557 mg, 0,0016 mol) y N,N-diisopropiletilamina (635 mg, 0,0049 mol) se le añadió HATU (912 mg, 0,0024 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (504 mg, 0,00176 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 466 mg (65%) del compuesto B.
^{1}H RMN (d_{6} Acetona) 400 MHz \delta 8,46 (d, 1H, J=4,4 Hz), 7,71 (dd, 1H, J=7,6 Hz), 7,48 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,21 (dd, 1H, J=7,6 Hz), 6,25 (d(br), 1H, J=8,4 Hz), 5,60 (d(br), 1H, J=50,8 Hz), 5,05 (m, 1H), 4,61 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,43-3,83 (m, 4H), 2,83-2,52 (m, 2H), 1,50-1,35 (m, 15H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-((piridin-2-ilmetil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto B (314 mg, 0,00107 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 127 mg del compuesto C.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 8,54 (d, 1H, J=5,6 Hz), 8,34 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 7,92 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,21 (dd, 1H, J=6,4 Hz), 5,44 (d(br), 1H, J=50,4 Hz), 5,02 (d, 1H, J=10 Hz), 4,60 (m, 5H), 2,62 (dd, 1H, J=15,6 Hz), 2,54-2,34 (m, 1H), 1,40 (s, 6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 28
36
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(piridin-4-ilmetil)tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(piridin-4-ilmetil)tio]butanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió bromohidrato de 4-(bromometil)piridina (1,1 g, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 4,0) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 482 mg (35%) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,48 (d, 2H, J=6,0 Hz), 7,40 (d, 2H, J=5,6 Hz), 5,48 (d(br), 1H, J = 9,2 Hz), 4,41 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 3,82 (s, 2H) 1,52-1,38 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(piridin-4-ilmetil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (482 mg, 0,00142 mol) y N,N-diisopropiletilamina (549 mg, 0,0042 mol) se le añadió HATU (810 mg, 0,00213 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (447 mg, 0,00156 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 476 mg (77%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,51 (d, 2H, J=4,4 Hz), 7,31 (d, 2H, J=6,4 Hz), 5,43 (d(br), 1H, J=9,6 Hz), 5,43 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,01 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,39 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,35-3,96 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 2,70 (dd, 1H, J=15,4), 2,46-2,29 (m, 1H), 1,45-1,41 (m,15H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(piridin-4-ilmetil)tio]butanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto B (476 mg, 0,00109 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 107 mg del compuesto C.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 8,81 (d, 2H, J=4,8 Hz), 8,08 (d, 2H, J=6,4 Hz), 5,51 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,10 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,35-3,96 (m, 4H), 2,65-2,43 (m, 2H), 1,62-1,42 (m,6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 29
37
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3[(4-fluorobencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[(4-fluorobencil)tio]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1,0 g, 0,00401 mol) se le añadió 1-(bromometil)-4-fluorobenceno (834 mg, 0,00441 mol) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,2 g (86%) del compuesto A como un aceite.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,29-7,26 (m, 2H), 6,99-6,94 (m, 2H), 5,40 (d(br), 1H, J = 8,0 Hz), 4,40 (d(br), 1H, J = 8,0 Hz), 3,80-3,74 (m, 2H) 1,50-1,40 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-fluorobencil)tio]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (25 mL) que contenía el compuesto A (1,2 g, 0,0034 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,3 g, 0,0101 mol) se le añadió HATU (1,9 g, 0,0051 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,1 g, 0,0037 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 929 mg (61% de rendimiento) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,33 (dd, 2H, J=8,4 Hz), 6,96 (dd, 2H, J=8,8 Hz), 5,42 (d(br), 1H, J=9,2 Hz), 5,43 (d(br), 1H, J=51,6 Hz), 5,02 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,38 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,34-3,97 (m, 2H), 3,82 (s, 2H), 2,69 (dd, 1H, J=15,4 Hz), 2,46-2,28 (m, 1H), 1,45-1,41 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-[(4-fluorobencil)sulfonil]-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) que contenía el compuesto B (929 mg, 0,0019 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (3,3 g 0,0191 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 678 mg del compuesto C (97% de rendimiento). El sólido blanquecino resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,40 (dd, 2H, J=8,8 Hz), 7,07 (dd, 2H, J=8,6 Hz), 5,52 (d(br), 1H, J=9,2 Hz), 5,43 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,03 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,97 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,36-3,74 (m, 4H), 2,70 (dd, 1H, J=15,2 Hz), 2,47-2,28 (m, 1H), 1,72-1,35 (m, 15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(4-fluorobencil)sulfonil]-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (678 mg, 0,00140 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 254 mg del compuesto D como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,39 (dd, 2H, J=8,4 Hz), 7,08 (dd, 2H, J=8,6 Hz), 5,41 (d(br), 1H, J=50,8 Hz), 4,94 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,63 (d, 1H, J=13,2 Hz), 4,35-3,55 (m, 4H), 2,70 (dd, 1H, J=15,4 Hz), 2,43-2,26 (m, 1H), 1,80-1,39 (m, 8H) ppm.
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Ejemplo de referencia 30
38
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(3-fenoxibencil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[(3-fenoxibencil)tio]butanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió 1-(clorometil)-3-fenoxibenceno (964 mg, 0,00441 mol) y 1,4-dioxano (15 mL) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en éter. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,4 g (82%) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz 8 7,34-6,98 (m, 8H), 6,85 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 5,44 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 1,50-1,40 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenoxibencil)tio]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (1,4 g, 0,0032 mol) y N,N-diisopropiletilamina (1,3 g, 0,0100 mol) se le añadió HATU (1,8 g, 0,0048 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,0 g, 0,0035 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 1,1 mg (65%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,34-6,97 (m, 8H), 6,84 (dd, 1H, J=8,0 Hz), 5,44 (d(br), 1H, J=9,2 Hz), 5,39 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,01 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,36 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,29-3,90 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 2,66 (dd, 1H, J=15,4 Hz), 2,43-2,26 (m, 1H), 1,52-1,38 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenoxibencil)sulfonil]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) que contenía el compuesto B (600 mg, 0,0011 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (2,0 g 0,011 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 594 mg del compuesto C (93% de rendimiento). El sólido blanquecino resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,34-7,00 (m, 9H), 5,40 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,27 (d(br), 1H, J=8,8 Hz), 4,93 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,62 (d, 1H, J=13,2 Hz), 4,46-3,55 (m, 4H), 2,69 (dd, 1H, J=15,4 Hz), 2,42-2,25 (m, 1H), 1,62-1,43 (m,15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(3-fenoxibencil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (678 mg, 0,00106 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 268 mg del compuesto D como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{8}-DMSO) 400 MHz \delta 7,42-6,99 (m, 9H), 5,54 (d(br), 1H, J=51,2 Hz), 5,04 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,70 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 4,16-3,79 (m, 2H), 2,55-2,30 (m, 2H), 1,55 (s, 3H), 1,47 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 31
39 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(3-fenoxibencil]tio]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(3-fenoxibencil)tio]propilcarbamato de terc-butilo (500 mg, 0,0010 mol) se le añadió TFA (5 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 132 mg del compuesto del título.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,17-6,71 (m, 9H), 5,38 (d(br), 1H, J=50,4 Hz), 5,00 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,16-3,60 (m, 4H), 2,62-2,30 (m, 2H), 1,38-1,29 (s, 6H) ppm.
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Ejemplo de referencia 32
40 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2R)-2-amino-3-{[(5-cloro-1,1-dióxido-1-benzotien-3-il)metil)sulfonil}-3-metilbutanoil)4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-3-{[(5-cloro-1-benzotien-3-il)metil]tio}-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió 3-(bromometil)-5-cloro-1-benzotiofeno (1,2 g, 0,00441 mol) y 1,4-dioxano (10 mL) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 3,5) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en éter. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 1,0 g (59%) del compuesto A como un sólido tostado.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,84 (s, 1H), 7,72 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J=8,4 Hz), 5,44 (m, 1H), 4,45 (m, 1H, J=7,6 Hz), 4,07-4,00 (m, 2H), 1,55-1,40 (m, 15H) ppm.
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B. (1R)-2-{[(5-Cloro-1-benzotien-3-il)metil]tio}-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (1,0 g, 0,0023 mol) y N,N-diisopropiletilamina (902 g, 0,007 mol) se le añadió HATU (1,3 g, 0,00345 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (725 mg, 0,0025 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 738 mg (60%) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,91 (s, 1H), 7,72 (d, 1H, J=8,8 Hz), 7,47 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J=8,4 Hz), 5,49-5,35 (m, 2H), 5,04 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,41 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,35-3,98 (m, 4H), 2,69 (dd, 1H, J=15,2 Hz), 2,46-2,29 (m, 1H), 1,47-1,40 (m, 15H) ppm.
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C. (1R)-2-{[(5-Cloro-1,1-dióxido-1-benzotien-3-il)metil]sulfonil}-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]car-bonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (100 mL) que contenía el compuesto B (738 mg, 0,0014 mol) se le añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (57-86%) (4,8 g 0,028 mol). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con KOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 803 mg del compuesto C (97% de rendimiento). El sólido blanquecino resultante se usó sin purificación adicional.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,05 (s, 1H), 7,96 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,48 (m, 3H), 5,45 (d(br), 1H J=10 Hz), 5,44 (d(br), 1H, J=50,8 Hz), 5,02 (d, 1H, J=10 Hz), 4,95 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,77-3,96 (m, 4H), 2,70 (dd, 1H, J=14,8 Hz), 2,46-2,30 (m, 1H), 1,70-1,37 (m, 15H) ppm.
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D. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-((2R)-2-amino-3-{[(5-cloro-1,1-dióxido-1-benzotien-3-il)metil]sulfonil)-3-metilbutanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto C (500 mg, 0,0010 mol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 132 mg del compuesto D.
^{1}H RMN (D_{2}O) 400 MHz \delta 7,99 (s, 1H), 7,81-7,56 (m, 3H), 5,44 (d(br), 1H, J=50,4 Hz), 5,01 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,19-3,80 (m, 4H), 2,66-2,22 (m, 2H), 1,58 (s, 3H), 1,43 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 33
41
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(2,1,3-benzoxadiazol-5-ilmetil)tiol-3-metilbutanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2R)-3-[(2,1,3-benzoxadiazol-5-ilmetil)tio]-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metilbutanoico
A una solución 1,0 N de KOH (50 mL) que contenía ácido (2R)-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-mercapto-3-metilbutanoico (1 g, 0,00401 mol) se le añadió 5-(bromometil)-2,1,3-benzoxadiazol (940 mg. 0,00441 mol) y 1,4-dioxano (5 mL) a TA. Después de 17,0 horas, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se lavó con éter dietílico. Los compuestos orgánicos se desecharon y la capa acuosa se enfrió hasta 0-5ºC. La solución acuosa se tornó ácida (pH 4,0) usando HCl concentrado, y el producto se extrajo en EtOAc. Los compuestos orgánicos se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para proporcionar un total de 622 mg (41%) del compuesto A como un sólido marrón.
^{1}H RMN (COCl_{3}) 400 MHz \delta 7,76 (d. 1H, J=9,2 Hz). 7,72 (s, 1H). 7,44 (d, 1H, J=9,2 Hz), 5,40 (d (br), 1H, J = 8,0 Hz), 4,46 (d (br), 1H, J=8,4 Hz), 3,89 (s. 2H) 1,47-1,40 (m, 15H) ppm.
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(1R)-2-[(2,1,3-Benzoxadiazol-5-ilmetil)tio}1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (20 mL) que contenía el compuesto A (622 mg, 0,00163 mol) y N,N-diisopropiletilamina (632 mg, 0,0049 mol) se le añadió HATU (930 mg, 0,00244 mol) a TA. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción se mezcló con 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (514 mg, 0,00180 mol). Después de agitar durante una noche, la reacción se inactivó con NaHCO_{3} y los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl sat. y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío y la purificación por cromatografía en columna (1/1 hexanos/EtOAc) proporcionaron 444 mg (45% de rendimiento) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,78 (s, 1H), 7,76 (d, 1H, J=9,2 Hz), 7,48 (d, 1H, J=9,2 Hz), 5,43 (d (br), 1H, J=9,6 Hz), 5,45 (d (br), 1H, J=50,8 Hz), 5,02 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,44 (d, 1H. J=9,6 Hz), 4,39-3,89 (m, 4H), 2,72 (dd, 1H, J=15,2), 2,48-2,32 (m, 1H), 1,60-1,40 (m, 15H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-[(2,1,3-benzoxadiazol-5-ilmetil)tio]-3-metilbutanoil}-4-fluoropi-rrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (45 mL) que contenía el compuesto B (444 mg, 0,770 mmol) se le añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas seguido de neutralización con NaHCO_{3} sat. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 105 mg del compuesto C.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,02-7,99 (m, 2H), 7,63 (d, 1H, J=9,6 Hz), 5,55 (d (br), 1H, J=51,2 Hz), 5,07 (d, 1H, J=9,2 Hz), 4,22-3,98 (m, 5H), 2,58-2,32 (m, 2H), 1,48 (s, 3H), 1,40 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 34
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42 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2R)-2-amino-3-metil-3-[(piridin-4-ilmetil)sulfonil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (90 mL) que contenía (1R)-1-{[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-[(piridin-4-ilmetil)tio]propilcarbamato de terc-butilo (500 mg, 0,0011 mol) se le añadió TFA (10 mL). La mezcla de reacción se dejó agitar a TA durante un período de 16,0 horas, seguido de adición de ácido 3-cloroperoxibenzoico (2,0 g, 0,0114 moles). La reacción se agitó durante un periodo de 4,0 horas seguido de neutralización con NaOH 2,0 N. Los compuestos orgánicos se separaron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron hasta sequedad para producir un sólido bruto. El sólido resultante se purificó usando cromatografía sobre gel de sílice (99% CH_{2}Cl_{2}/1% MeOH con NH_{3} 2,0 M). El sólido puro se disolvió en una mezcla de acetona/éter (1/1) y precipitó usando HCl 2,0 N en éter. El sólido resultante se filtró a vacío y se lavó con éter. Después de secar en alto vacío, la reacción proporcionó un total de 22 mg del compuesto del título.
^{1}H RMN (d_{4} CDCl_{3}) 400 MHz \delta 8,64 (d, 2H, J=5,6 Hz), 7,37 (d, 2H, J=5,6 Hz), 5,42 (d (br), 1H, J=51,2 Hz), 4,94 (d, 1H, J=9,6 Hz), 4,77 (d, 1H, J=13,2 Hz), 4,39-3,75 (m, 4H), 2,71 (dd, 1H, J=15,6 Hz), 2,43-2,29 (m, 1H), 2,06-1,86 (s (br), 2H), 1,62 (s, 3H), 1,46 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 35
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43 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-mino-3-piridin-4-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piridin-4-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piridin-4-ilpropanoico (705 mg, 2,65 mmol), HATU (1,0 g, 2,65 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,46 mL, 2,65 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (581 mg, 1,99 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,35 mL, 1,99 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h. Se añadió luego bicarbonato de sodio (100 mL) saturado, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (100 mL), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para dar el sólido bruto. El sólido se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución de dioxano que contenía HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguida de adición de éter dietílico (100 mL). El sólido precipitado se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 388 g (1,3 mmol, 65% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,92 (s(br), 3H), 8,84 (d, 2H, J= 6,2 Hz), 7,96 (d, 2H, J= 6,2 Hz), 5,45 (d, 1H, J = 51Hz), 5,00 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,47 (m(br), 1H), 4,05-3,78 (m, 2H), 3,41-3,36 (m, 2H), 2,42-2,25 (m, 2H) ppm.
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Ejemplo de referencia 36
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44 
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Hidrocloruro de (2S-4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piridin-3-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piridin-3-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadió ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piridin-3-ilpropanoico (534 mg, 2,0 mmol), HATU (0,76 g, 2,0 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,35 mL, 2,0 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (438 mg, 1,5 mmol) y N,N-diisopropiletilamina adicional (0,26 mL, 1,5 mmol). Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (150 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (100 mL), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para dar el sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución de dioxano-HCl (4,0 M, 25 mL) durante 2 h seguida de adición de éter dietílico (200 mL). El sólido precipitado se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 266 mg (0,89 mmol, 59% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,88 (s, 1H), 5,51 (d, 1H, J= 51 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,45-4,38 (m(br), 1H), 4,00-3,86 (m, 2H), 3,38-3,27 (m, 2H), 2,42-2,30 (m, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 37
45
Dihidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-4-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Sal del ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piperidin-4-ilpropanoico del ácido acético
A una solución en ácido acético (glaciar, 50 mL) de ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piridin-4-ilpropanoico (0,69 g, 2,58 mmol) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (50% p/p, 0,35 g) y se hidrogenó a 60 psi bajo una atmósfera de hidrógeno. La solución se filtró a través de celite y se concentró para proveer un sólido blanco. Luego el sólido se secó en alto vacío para proporcionar 822 mg (2,48 mmol, 96% de rendimiento) del compuesto A como la sal del ácido acético.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 10,5 (s(br), 1H), 6,21-6,19 (m(br), 1H), 3,69-3,62 (m, 1H). 3,19-3,06 (m, 2H), 2,75-2,65 (m, 2H), 1,92 (s, 3H), 1,80-1,45 (m, 6H), 1,35 (s, 9H), 1,21-1,05 (m, 1H) ppm.
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B. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il]propanoico
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) de ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piperidin-4-ilpropanoico y sal de ácido acético (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadió trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (786 mg, 3,6 mmol) y se agitó durante 12 h. Luego se añadió H_{2}O (50 mL) y CH_{2}Cl_{2} (300 mL), se acidificó hasta pH 4 con HCl 1,0 M. La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y filtración y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un aceite claro. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 1,06 g (2,86 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,08 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,98-3,81 (m(br), 3H), 2,78-2,59 (m(br), 2H), 1,68-1,42 (m, 6H), 1,39 (s, 16H), 1,02-0,89 (m, 2H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-4-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il]propanoico (0,85 g, 2,28 mmol), HATU (0,87 g, 2,28 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,40 mL, 2,28 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min, se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (500 mg, 1,71 mmol) y N,N-diisopropiletilamina adicional (0,30 mL, 1,71 mmol). Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (100 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) seguido de secado sobre MgSO_{4}. La evaporación a vacío proporcionó el sólido bruto que se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 432 g (1,26 mmol, 74% de rendimiento) del compuesto C como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz\delta 9,0-8,83 (s(br), 2H), 8,80-8,60 (s(br), 3H), 5,52 (d, 1H, J= 51 Hz), 5,06 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,07-4,01 (m(br), 1H), 3,94-3,81 (m, 2H), 3,23-3,20 (m, 2H), 2,87 (s, 1H), 2,74-2,66 (m, 3H), 2,46-2,37 (m, 2H), 1,95-1,91 (m, 1H), 1,77-1,58 (m, 3H), 1,42-1,31 (m, 1H) ppm.
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Ejemplo de referencia 38
46
Dihidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-3-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piperidin-3-ilpropanoico
A una solución en ácido acético (glaciar, 50 mL) de ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piridin-3-ilpropanoico (0,8 g, 3,0 mmol) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (50% p/p, 0,40 g) y se hidrogenó a 60 psi bajo una atmósfera de hidrógeno. La solución se filtró a través de celite, se concentró y después se secó en alto vacío para proporcionar 946 mg (2,85 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto A como la sal del ácido acético.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 10,2 (s(br), 1H), 6,15-6,05 (m, 1H), 3,69-2,64 (m, 1H), 3,21-3,07 (m, 2H), 2,67-2,61 (m, 1H), 2,39-2,31 (m(br), 1H), 1,95 (s, 3H), 1,91-1,41 (m, 6H), 1,91 (s, 9H), 1,08-1,01 (m, 1H) ppm.
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B. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il]propanoico.
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) que contenía el compuesto A (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadió trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (786 mg, 3,6 mmol), y se agitó durante 12 h. La reacción se inactivó luego con H_{2}O (50 mL) y se añadió CH_{2}Cl_{2} (300 mL). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se acidificó hasta pH 4 con HCl 1,0 M seguido de extracción con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y el disolvente se eliminó a vacío para proporcionar un aceite claro. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 1,07 g (2,87 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,15 (s(br), 1H), 7,17 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,95-3,87 (m(br), 3H), 2,61-2,45 (m(br), 2H), 1,73-1,40 (m, 6H), 1,35 (s, 16H), 1,2-0,89 (m, 2H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-3-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto B (0,85 g, 2,28 mmol), HATU (0,87 g, 2,28 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,40 mL, 2,28 mmol). Después de agitar a TA durante 30 minutos, se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (500 mg, 1,71 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,30 mL, 1,71 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h, tras las cuales se añadió bicarbonato sódico saturado (100 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó el sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proporcionar un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 419 mg (1,23 mmol, 72% de rendimiento) del compuesto C como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 9,0-8,83 (s(br), 2H), 8,60-8,50 (s(br), 3H), 5,52 (d, 1H, J =51 Hz), 5,02 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,13-4,08 (m(br), 1H), 3,99-3,87 (m, 2H), 3,37-3,31 (m, 2H), 3,05-3,01 (m, 1H), 2,87 (m, 2H), 2,46-2,37 (m, 2H), 1,95-1,91 (m, 5H), 1,22-1,11(m, 1H) ppm.
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Ejemplo de referencia 39
47
Dihidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-2-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piperidin-2-ilpropanoico
A una solución en ácido acético (glaciar, 50 mL) de ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-piridin-2-ilpropanoico (1,6 g, 6,0 mmol) se le añadió paladio al 10% sobre carbono (50% p/p, 0,80 g) y se hidrogenó a 60 psi bajo una atmósfera de hidrógeno. La solución se filtró a través de celite, se concentró y después se secó en alto vacío para proporcionar 951 mg (2,85 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto A como la sal del ácido acético.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 10,15 (s(br), 1H), 6,21-6,19 (m, 1H), 3,69-2,64 (m, 1H), 3,61-3,56 (m, 2H), 3,27-3,12 (m, 2H), 2,72-2,65 (m, 1H), 1,89 (s, 3H), 1,81-1,63 (m, 5H), 1,52-2,42 (m, 1H), 1,91 (s, 9H) ppm.
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B. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-il]propanoico.
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (150 mL) que contenía el compuesto A (1,5 g, 4,50 mmol) se le añadió trietilamina (2,27 g, 23 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (1,18 g, 5,4 mmol). Después de agitar durante 12 h, se añadieron H_{2}O (50 mL) y CH_{2}Cl_{2} (300 mL) seguidos de acidificación hasta pH 3 con HCl 1,0 M. La separación de la capa orgánica, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un aceite claro. El aceite se secó en alto vacío para proporcionar 1,68 g (4,45 mmol, 95% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,2 (s(br), 1H), 7,15 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,25-3,99 (m(br), 3H), 3,89-3,78 (m(br), 2H), 2,68-2,58 (m, 1H) 1,79-1,40 (m, 5H), 1,35 (s, 16H), 1,2-1,14 (m, 2H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-piperidin-2-ilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo.
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto B (850 g, 2,28 mmol), HATU (869 g, 2,28 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,40 mL, 2,28 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S, 4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (500 mg, 1,71 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,30 mL, 1,71 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó un sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 365 mg (1,07 mmol, 63% de rendimiento) del compuesto C como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 9,32-9,10 (s(br), 2H), 8,79-8,53 (s(br), 3H), 5,51 (d, 1H, J =51 Hz), 5,04 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,25-4,21 (m(br), 1H), 4,19-3,88 (m, 2H), 3,58-3,46 (m, 1H), 3,42-3,32 (m, 2H), 2,85 (s, 1H), 2,71-2,63 (m, 2H), 2,27-2,14 (m, 1H), 2,05-1,97 (m, 1H), 1,81-1,40 (m, 5H) ppm.
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Ejemplo de referencia 40
48
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-[1-(isopropilsulfonil)piperidin-4-il]propanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(isopropilsulfonil)piperidin-4-il]propanoico
A una solución en CH_{3}CN (150 mL) del compuesto A del ejemplo 12 (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadieron trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y cloruro de isopropilsulfonilo (513 mg, 3,6 mmol). Después de agitar durante 6 h, se eliminó el acetonitrilo a vacío y se añadieron H_{2}O (50 mL) y acetato de etilo (300 mL). La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un sólido que se lavó con éter y se secó en alto vacío para proveer 860 mg (2,26 mmol, 75% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,15 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,37-4,29 (m, 1H), 3,99-3,95 (m(br), 1H), 3,85-3,80 (m, 1H), 3,62-3,58 (m, 1H), 2,97-2,92 (m, 1H), 2,42-2,37 (m, 1H), 1,91-1,89 (m, 1H) 1,87-1,46 (m, 7H), 1,37 (s, 9H), 1,19-0,89 (d, 4H) ppm.
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B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3[1-(isopropilsulfonil)piperidin-4-il]propanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto A (1,75,g, 4,62 mmol), HATU (1,76 g, 4,62 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,80 mL, 4,62 mmol). Después de agitar a TA durante 30 minutos se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,0 g, 3,47 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,60 mL, 3,47 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó un sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 969 g (2,35 mmol, 68% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,51-8,44 (s(br), 3H), 5,15 (d, 1H, J= 51 Hz), 5,06 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,04-4,01 (s(br), 1H), 3,96-3,84 (m, 2H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,51-3,37 (m(br), 2H), 3,35-3,27 (m, 1H), 2,79-2,76 (m, 2H), 1,82-1,69 (m, 5H), 1,17 (m, 8H) ppm.
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Ejemplo de referencia 41
49
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-4-il]propanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-4-il]propanoico
A una solución en CH_{3}CN (150 mL) del compuesto A del ejemplo 12 (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadió trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y cloruro de toluenosulfonilo (686 mg, 3,6 mmol). Después de agitar durante 6 h, el acetonitrilo se eliminó a vacío y se añadieron H_{2}O (50 mL) y acetato de etilo (300 mL). La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un sólido que se lavó con éter y se secó en alto vacío para proveer 1,09 mg (2,56 mmol, 85% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,61 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,13 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 4,27-4,21 (m, 1H), 3,98-3,95 (m, 1H), 3,58-3,52 (m, 1H), 2,98-2,91 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,21-2,20 (m, 1H), 1,81-1,50 (m, 6H), 1,39 (s, 9H), 1,21-1,08 (m, 1H) ppm.
\vskip1.000000\baselineskip
B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-4-il]propanoil)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto A (2,13 g, 5,0 mmol), HATU (1,90 g, 5,00 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,87 mL, 5,0 mmol). Después de agitar a TA durante 30 minutes se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,1 g, 3,75 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,65 mL, 3,75 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó el sólido bruto que se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 1,10 g (2,4 mmol, 64% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,21-8,05 (s(br), 3H), 7,60 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 3,91-3,88 (m, 2H), 3,07-2,99 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,09-2,03 (m, 1H), 1,94-1,29 (m, 8H), 1,12-1,02 (m, 1H) ppm.
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Ejemplo de referencia 42
50
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-[1-(isopropilsulfonil)piperidin-3-il]propanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3[1-(isopropilsulfonil)piperidin-3-il]propanoico
A una solución en CH_{3}CN (150 mL) del compuesto A del ejemplo 13 (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadieron trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y cloruro de isopropilsulfonilo (513 mg, 3,6 mmol). Después de agitar durante 6 h, el acetonitrilo se eliminó a vacío y luego se añadieron H_{2}O (50 mL) y acetato de etilo (300 mL). La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un sólido que se lavó con éter y se secó en alto vacío para proveer 926 mg (2,43 mmol, 81% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,2 (s(br), 1H), 7,18 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,94-3,89 (m, 1H), 3,55-3,49 (m(br), 2H), 3,35-3,30 (m, 2H), 2,89-2,85 (m, 1H), 2,62-2,57 (m, 1H), 1,91-1,42 (m, 5H), 1,39 (s, 9H), 1,19 (d, 6H) ppm.
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B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-[1-(isopropilsulfonil)piperidin-3-il]propanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto A (1,75 g, 4,62 mmol), HATU (1,76 g, 4,62 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,80 mL, 4,62 mmol). Después de agitar a TA durante 30 minutos se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,0 g, 3,47 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,60 mL, 3,47 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL) y se secaron sobre MgSO_{4}. La eliminación del disolvente a vacío proporcionó un sólido bruto que se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 1,01 g (2,46 mmol, 71% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,42-8,39 (s(br), 3H), 5,51 (d, 1H, J =51 Hz), 5,06 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,07-4,01 (s(br), 1H), 3,98-3,84 (m, 2H), 3,52-3,49 (m, 1H), 3,41-3,27 (m(br), 4H), 3,09-3,02 (m, 1H), 2,98-2,80 (m, 1H), 2,65-2,61 (m, 1H), 1,77-1,63 (m, 6H), 1,18 (m, 8H) ppm.
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Ejemplo de referencia 43
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51 
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Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-3-il]propanol}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-3-il]propanoico
A una solución en CH_{3}CN (150 mL) del compuesto A del ejemplo 13 (1,0 g, 3,00 mmol) se le añadió trietilamina (1,52 g, 15 mmol) y cloruro de toluenosulfonilo (686 mg, 3,6 mmol). Después de agitar durante 6 h, el acetonitrilo se eliminó a vacío y luego se añadieron H_{2}O (50 mL) y acetato de etilo (300 mL). La separación de la capa de acetato de etilo, seguida de secado sobre MgSO_{4} y eliminación del disolvente a vacío, proporcionó un sólido que se lavó con éter y se secó en alto vacío para proveer 946 mg (2,22 mmol, 74% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 12,4 (s(br), 1H), 7,61 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,41 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,98-3,91 (m, 1H), 3,45-3,41 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,21-2,20 (m, 1H), 2,05-1,95 (m, 1H), 1,87-1,45 (m, 6H), 1,42 (s, 9H), 1,21-1,08 (m, 1H) ppm.
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B. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-[1-(4-metilfenilsulfonil)piperidin-3-il]propanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron el compuesto A (2,13 g, 5,0 mmol), HATU (1,90 g, 5,00 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,87 mL, 5,0 mmol). Después de agitar a TA durante 30 minutos se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,1 g, 3,75 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,65 mL, 3,75 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para dar un sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 1,17 g (2,55 mmol, 51% de rendimiento) del compuesto B como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,50-8,43 (s(br), 3H), 7,61 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 5,51 (d, 1H, J= 51 Hz), 5,07 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,07-4,01 (br m, 1H), 3,91-3,83 (m, 1H), 3,48-3,40 (m, 2H), 3,17-3,05 (m, 2H), 2,57-2,51 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 1,84-1,23 (m, 8H), 1,07-1,05 (m, 1H) ppm.
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Ejemplo de referencia 44
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52 
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Hidrocloruro de (2S-4S)-1-[(2S)-2-amino-3-(1-benzotien-3-il)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3-(1-benzotien-3-il)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A DMF seca (25 mL) se le añadieron ácido (2S)-3-(1-benzotien-3-il)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]propanoico (1,92 g, 6,0 mmol), HATU (2,28 g, 6,0 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (1,05 mL, 6,0 mmol). Después de agitar a TA durante 30 min se añadieron 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,31 g, 4,5 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,78 mL, 4,5 mmol) adicional. Esta solución se dejó agitar a TA durante 12 h y luego se añadió bicarbonato sódico saturado (110 mL). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 X 100 mL) y los compuestos orgánicos se lavaron con NaCl saturado (50 mL), se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron hasta sequedad para dar un sólido bruto. El sólido se cromatografió (gel de sílice, hexanos/EtOAc 4:1) para proveer un sólido que se agitó en una solución dioxano-HCl (4,0 M, 20 mL) durante 2 h seguido de adición de éter dietílico (100 mL). El precipitado resultante se recogió por filtración y se secó en alto vacío, proporcionando 1,0 g (2,84 mmol, 63% de rendimiento) del compuesto A como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,70-8,61 (s(br), 3H), 8,05-8,00 (m, 2H), 7,45-7,36 (m, 3H), 5,21 (d, 1H, J= 51 Hz), 5,01 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 4,23-4,20 (m, 1H), 3,71 (ddd, 1H, J = 41,1, 12,3, 3,2 Hz), 3,55-3,51 (m, 1H), 3,30-3,24 (m, 1H), 2,73 (q, 1H, J = 12,1 Hz), 2,39-2,14 (m, 2H) ppm.
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Ejemplo de referencia 45
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53
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-metil-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo A. 2-Metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]propanal
A una solución en tolueno (90 mL) que contenía 2-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]propanonitrilo (véase: J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 712, Caron, S. et al. para la preparación de este compuesto) (5,54 g, 26,0 mmol), enfriada hasta -78ºC, se le añadieron 26,0 mL de una solución 1,5 M en tolueno de DIBAL (39,0 mmol). La solución resultante se agitó a -78ºC durante 2,5 h, tras las cuales se inactivó con una solución THF acuosa (105 mU20 mL) que contenía acetato de sodio (6,6 g) y ácido acético (6,6 mL). Después de 5 min, el baño de frío se eliminó y se siguió agitando durante 20 min a TA y se añadieron celite y Et_{2}O. Después de agitar durante 30 min. adicionales, la solución heterogénea se filtró a través de un lecho de celite. El lecho de celite se enjuagó abundantemente con Et_{2}O y después se separó la capa acuosa. Los compuestos orgánicos se lavaron con H_{2}O, se secaron (MgSO_{4}) y se eliminó el disolvente a vacío. El aceite residual se purificó por cromatografía en columna (5% EtOAc/hexanos) para proporcionar 4,22 g (19,5 mmol, 75% de rendimiento) del compuesto A como un aceite claro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 9,52 (s, 1H), 7,63 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 1,49 (s, 3H) ppm.
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B. 2-Amino-3-metil-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanonitrilo
A una solución en MeOH (10 mL) que contenía el compuesto A (1,87 g, 8,66 mmol) se le añadieron 1,2 mL de NH4OH al 30%, H_{2}O (6 ml) y cianuro de potasio (592 g, 9,09 mmol). A esta solución se le añadió cloruro de amonio (510 g, 9,53 mmol) a TA. Después de 1 h, la solución se calentó hasta 70º durante 6 h. Tras enfriar, la reacción se diluyó con EtOAc y después se lavó con NaHCO_{3} sat. y H_{2}O. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc (3:2)) para producir 1,52 g (6,27 mmol, 72% de rendimiento) del compuesto B.
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,63 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,55 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,80 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 1,56 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,40 (d(br), 2H, J = 6,9 Hz) ppm.
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C. Hidrocloruro del ácido 2-amino-3-metil-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoico
A un matraz que contenía el compuesto B (2,96 g, 12,2 mmol) se le añadieron 10 mL de ácido acético seguidos de 60 mL de HCl concentrado. La solución se calentó luego hasta reflujo durante una noche y tras enfriar el volumen del disolvente se eliminó a vacío. El sólido blanco resultante se trituró con una solución de Et_{2}O/hexanos (2:1) y se recogió por filtración a vacío. Después de bombear en alto vacío, se obtuvieron 3,13 g (10,5 mmol, 86% de rendimiento) del compuesto C como un sólido blanco.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,69-7,68 (m, 4H), 4,33 (s, 1H), 1,57 (s, 3H), 1,53 (s, 3H) ppm.
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D. Ácido 2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-3-metil-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoico
A una solución en dioxano (30 mL)/H_{2}O (7 mL) que contenía el compuesto C (3,05 g, 10,2 mmol) se le añadieron 12,8 mL de una solución 2,0 M de NaOH (25,6 mmol) seguidos de dicarbonato de di-t-butilo (3,13 g, 14,4 mmol) a TA. La solución se agitó durante la noche y luego se vertió en NaHCO_{3} sat. y se lavó con Et_{2}O. La capa de Et_{2}O se lavó con NaHCO_{3} sat. y luego se combinaron las capas acuosas. Después de la acidificación con HCl 1,0 M, los compuestos orgánicos se extrajeron con EtOAc (2X). Después de secar sobre MgSO_{4,} el disolvente se eliminó a vacío, produciendo 3,58 g (9,92 mmol, 97% de rendimiento) del compuesto D como un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,57 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,49 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 4,99 (d(br), 1H, J = 9,2 Hz), 4,63 (d(br), 1H, J = 9,3 Hz), 1,45 (s, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,36 (s, 9H) ppm.
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E. (1S)-1-{[(2S,4S)-2-Ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-metil-2-{4-(trifluorometil)fenil]propilcarbamato de terc-butilo
A una solución en DMF (45 mL) que contenía el compuesto D (2,0 g, 5,54 mmol) se le añadió N,N-diisopropiletilamina (788 mg, 6,09 mmol) seguida de HATU (2,21 g, 5,82 mmol) a TA. La solución resultante se agitó durante 30 min, tras los cuales se añadió una solución en DMF (27 mL) que contenía 4-metilbencenosulfonato de (2S,4S)-4-fluoro-2-pirrolidinacarbonitrilo (1,66 g, 5,82 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (752 mg, 5,82 mmol). Después de agitar durante una noche, la solución se diluyó con EtOAc y se lavó con H_{2}O (3X), NaHCO_{3} sat. y HCl 1,0 M. Después de secar sobre MgSO_{4}, el disolvente se eliminó a vacío y el aceite oscuro residual se purificó por cromatografía en columna (hexanos/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} (5:4:1)). Se obtuvo un material de bajo R_{f} (610 mg, 1,37 mmol) que fue un estereoisómero simple por ^{1}H RMN y LC más 335 mg de un material de alto R_{f} que contenía el producto deseado, pero se contaminó con otro compuesto. El material de bajo R_{f} resultó ser el (S)-diastereómero después de las pruebas in vitro.
Diastereómero de bajo R_{f}:
^{1}H RMN (CDCl_{3}) 400 MHz \delta 7,65-7,60 (m, 2H), 7,59-7,55 (m, 2H), 5,29 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 5,06 (dt, 1H, J = 51,1, 3,3 Hz), 4,85 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 4,34 (d, 1H, J = 9,9 Hz), 3,55 (ddd, 1H, J = 3,4, 12,1, 36,2 Hz), 2,70 (dd, 1H, J = 12,3, 17,8 Hz), 2,48 (t, 1H, J= 15,4 Hz), 2,15 (m, 1H). 1,53 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,40 (s, 9H) ppm.
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F. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-{(2S)-2-amino-3-metil-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoil}-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) que contenía el compuesto E (643 mg, 1,44 mmol, isómero de bajo R_{f}) se le añadió TFA (1,65 g, 14,4 mmol) a TA. Después de 1 h, se añadieron 5 eq de TFA adicional y después de un total de 2 h el disolvente se eliminó a vacío y el aceite residual se disolvió en 5 mL de dioxano. A esta solución se le añadieron 10 ml de una solución 4,0 N en dioxano de HCl. El disolvente se eliminó a vacío seguido por la adición de CH_{2}Cl_{2} y Et_{2}O. Este procedimiento se repitió 3X hasta que se formó un sólido uniforme. El sólido se recogió por filtración a vacío, produciendo 406 mg (1,03 mmol, 72% de rendimiento) del compuesto F.
^{1}H RMN (d_{4}-MeOH) 400 MHz \delta 7,74-7,66 (m, 4H), 5,13 (d(br), 1H, J = 51,3 Hz), 4,97 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 4,25 (s, 1H), 3,52 (m, 1H), 2,74 (dd, 1H, J = 22,0, 11,9 Hz), 2,47-2,22 (m, 2H), 1,67 (s, 3H), 1,60 (s, 3H) ppm.
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Ejemplo de referencia 46
54
Ácido (3R)-3-amino-4-[[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-2-metil-4-oxobutano-2-sulfónico A. Ácido (4R)-2,2,5,5-tetrametil-1,3-tiazolidina-4-carboxílico
A una suspensión de L-penicilamina (0,300 g, 2,01 mmol) en metanol (2 mL) se le añadió acetona (4 mL, 54,5 mmol). La solución se tornó clara y se agitó aproximadamente 3 horas, tras lo cual se volvió turbia nuevamente. La solución se concentró a vacío para producir 0,3779 mg del compuesto A como un sólido blanco (99% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{6}-OMSO) 400 MHz \delta 3,74 (s, 1H) 2,4 (m, 2H), 1,54 (m,6H). 1,43 (s,3H), 1,18 (s,3H)ppm.
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B. (2S,4S)-4-Fluoro-1-{[[(4R)-2,2,5,5-tetrametil-1,3-tiazolidin-4-il]carbonil}pirrolidina-2-carbonitrilo
Una solución del compuesto A (0,256 g, 1,35 mmol), tosilato de (2S,4)-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (0,387 g, 1,35 mmol), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (0,182 g, 1,35 mmol) y N,N'-diciclohexilcarbodiimida (0,279 g, 1,35 mmol) y N,N'-diisopropiletilamina (0,280 mL, 1,63 mmol) en tetrahidrofurano (13 mL) se agitó durante aprox. 48 horas y luego se concentró. El residuo se disolvió con acetato de etilo y se filtró. El filtrado se lavó con NaHCO_{3} acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. La mezcla bruta se cromatografió en gel de sílice (5% MeOH/95% CHCl_{3}) para producir 0,171 g del compuesto B como un sólido blanco (44% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 5,48 (d, J= 50 Hz, 1H), 5,02 (m, 1H), 4,05-3,85 (m,3H), 3,48 (m, 1H), 2,42 (m,1H), 1,54 (m, 5H), 1,47 (s,3H), 1,22 (s,3H) ppm.
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C. Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[[(2R)-2-amino-3-mercapto-3-metilbutanil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo
A una solución del compuesto B (0,143 g, 0,501 mmol) en 50% v:v agua/metanol (20 mL) se le añadió HCl 1,0 N (0,550 mL, 0550 mmol). La solución se mezcló a aprox. 500 m bar a aprox. 35ºC durante aprox. 1 hora. La solución se concentró, se disolvió con tetrahidrofurano, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró nuevamente para producir 0,163 g del compuesto C como un sólido blanquecino (100% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,61 (s, 1H). 5,54 (d, J = 9 Hz, 1H) 4,28-3,89 (m, 4H, 2,47 (m, superposición DMSO, 1H), 1,74 (m, 3H), 1,43 (m, 6H), 1,33 (s. 3H) ppm.
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D. (1R)-1-{[[2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]carbonil}-2-mercapto-2-metilpropilcarbamato de terc-butilo
A una solución del compuesto C (0,141 g, 0,501 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,090 mL, 0,526 mmol) en diclorometano (3 mL) se le añadió dicarbonato de di-(terc-butilo) (0,120 g, 0,551 mmol) seguido de N,N-diisopropiletilamina (0,100 mL, 0,584 mmol) adicional. La solución se agitó durante aprox. 2 h y luego se concentró. La mezcla bruta se cromatografió sobre gel de sílice (2%MeOH/98% CHCl_{3}) para proporcionar 0,088 g del compuesto D como un aceite que se cristalizó en un sólido blanco (51% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 6,99 (d, J = 9 Hz 1H), 5,53 (d, J = 51 Hz 1H), 4,97 (d, J = 7 Hz 1H), 4,37-3,74 (m, 3H), 2,95 (s,1H), 2,40 (m, 1H), 1,35 (m, 15H) ppm.
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E. Ácido (3R)-3-amino-4-[(2S,4S)-2-ciano-4-fluoropirrolidin-1-il]-2-metil-4-oxobutano-2-sulfónico
A una solución del compuesto D (4,412 g, 12,8 mmol) en metanol (18 mL) se le añadió peróxido de hidrógeno acuoso al 30% (5,9 mL). La solución se agitó durante aprox. 30 horas, se concentró, se liofilizó y se secó sobre P_{2}O_{5} a aprox. 40ºC durante por lo menos 12 horas. La mezcla bruta se disolvió con una solución de 20% metanol/80% cloroformo/ácido acético y se precipitó un sólido. La suspensión se filtró para proporcionar 0,607 g del compuesto E como un sólido rosado (16% de rendimiento).
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) 400 MHz \delta 8,12 (s,3H), 5,50 (d, J = 50 Hz 1H), 5,07 (d, J = 9 Hz 1H), 4,27-3,30 (m,6H), 2,30 (m, superposición DMSO 1H), 1,26(s,3H), 1,15 (m, 3H), ppm.
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Datos biológicos Materiales
Se adquirió H-Ala-Pro-pNA\cdotHCl de BACHEM Bioscience Inc. (producto no. L-1115). Se preparó una solución madre 500 mM con sulfóxido de dimetilo y se conservó a -20ºC. Se adquirió Gly-Pro-AMC de Enzyme System Products (producto no. AMC-39) y se conservó a -20ºC como una solución madre 10 mM en sulfóxido de dimetilo. Los compuestos de prueba se disolvieron hasta 10 mM en sulfóxido de dimetilo y esto se usó como una solución madre para los ensayos de titulación de DPP-IV. Athens Research and Technology, Inc preparó la DPP-IV humana purificada. El material se aisló de prostasomas humanos, usando el método de DeMeester et al., J. Immunol, Methods 189, 99-105 (1996).
Ensayo de DPP-IV
Se realizaron diluciones dobles en serie de los compuestos de prueba en 100% de sulfóxido de dimetilo en placas de poliestireno con fondo plano de 96 pocillos (Costar, #9017). La actividad enzimática promedio de los pocillos que contenían sulfóxido de dimetilo pero que carecían del compuesto de prueba se usó como el valor de control para calcular el porcentaje de inhibición. Se mezcló DPP-IV (20 ng/mL) en placas de microtitulación con compuestos de prueba, tampón de ensayo y sustrato para producir 100 \muM de H-Ala-Pro-pNA-HCl en Tris 25 mM, pH 7,5, KCI 10 mM, NaCl 140 mM. El péptido intacto contiene una p-nitrofenilanilida que, cuando se hidroliza por DPP-IV, libera la p-nitrofenilanilina absorbente. La absorbancia se vigiló en intervalos de 20 minutos a una longitud de onda de 387 nm, usando una lectora de placas de absorbancia Molecular Devices SpectraMax 25D. La actividad enzimática se determinó estimando el mejor ajuste lineal a los datos. Los valores para la actividad enzimática se tomaron directamente del ajuste lineal determinado por el software en la placa lectora.
Análisis de los datos: La actividad enzimática se determinó estimando el mejor ajuste lineal a los datos. La reducción de datos se llevó a cabo usando Microsoft Excel RoboSage.
Determinación de valores CI_{50}: La actividad enzimática se trazó contra la concentración del compuesto de prueba, incluyendo [I] = 0, y el CI_{50} determinado a partir de un ajuste de la ecuación 2 a los datos.
55
V_{max} fue el mejor ajuste estimado de la actividad enzimática máxima.
Determinación de valores K_{i}: los valores Ki se calcularon a partir de valores CI_{50} usando la ecuación 3, asumiendo un modelo competitivo.
56
Los valores pKi aparentes fueron > 5,0 para cada uno de los ejemplos.
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Ensayo de DPP-II
La placa intermedia contenía 5,3 \muL del compuesto de prueba en diluciones en serie dobles en toda la placa. Un volumen de 209 \muL de tampón (acetato de sodio 100 mM, pH 5,5) que contenía sustrato (H-Lys-Ala-pNA-2HCl; producto no. L-2085; BACHEM Bioscience Inc.:) se añadió a cada pocillo de la placa intermedia, luego se mezcló. La reacción se inició con la transferencia de 180 \muL de la solución de compuesto de prueba/sustrato a la placa de ensayo que contenía 20 \muL de enzima. Las concentraciones finales en el ensayo fueron enzima 100 nM y sustrato 1000 \muM en NaOAc 100 mM, pH 5,5, DMSO al 2,5% en un volumen final de 200 \muL. La absorbancia se vigiló cada 20 minutos durante 5 horas a 387 nm, usando una lectora de placas de absorbancia Molecular Devices SpectraMax 250.
Análisis de los datos: La actividad enzimática se determinó estimando el mejor ajuste lineal a los datos. La reducción de datos se llevó a cabo usando Microsoft Excel RoboSage.
Determinación de valores CI_{50}: La actividad enzimática se trazó contra la concentración del compuesto de prueba, incluyendo [I] = 0, y el CI_{50} determinado a partir de un ajuste de la ecuación 2 a los datos.
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V_{max} fue el mejor ajuste estimado de la actividad enzimática máxima.
Determinación de valores K_{i}: los valores Ki se calcularon a partir de valores CI_{50} usando la ecuación 3, asumiendo un modelo competitivo.
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Ciertos compuestos de la presente invención demostraron actividad para DPP-II, por ejemplo, valores pKi > 6,0, mientras que otros demostraron selectividad para DPP-IV, como se analizó anteriormente.
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Estudios in vivo
Se alojaron ratones CD1 con compatibilidad de edad y peso individualmente a 72ºF y 50% de humedad relativa con un ciclo luz/oscuridad de 12 h. A los animales se les administraron, por gavaje oral, 10 ml/kg de vehículo (0,5% metilcelulosa (HPMC) con 0,1% Tween 80) o 1 mg/kg del compuesto de prueba en vehículo. Los animales fueron anestesiados con isofluorano para recolección de sangre en los tiempos especificados (0-6 horas). La actividad de la DPP-IV en plasma se midió usando el sustrato fluorogénico Gly-Pro-AMC (50 \muM) de acuerdo con la especificación de los fabricantes (Enzyme System Products, Livermore CA). El sustrato se mezcló con Tris 50 mM, pH 7,8 y 20% plasma. Las muestras se incubaron durante 20 min a 30ºC y la fluorescencia se midió usando un espectrofluorómetro Cytofluor con los filtros regulados a 360 nm de excitación y 460 nm de emisión.
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Ejemplos comparativos
Los compuestos de la presente invención demuestran una serie de características preferidas. Sin limitarse a ellas, se cree que las características preferidas de los compuestos de la presente invención se deben a los beneficios inesperados obtenidos a través de la manipulación de los patrones de sustitución de los compuestos de Fórmula (I). Los resultados de las pruebas comparativas ilustran varios beneficios sorprendentes e inesperados. Más específicamente, las pruebas comparativas indican que los compuestos de la presente invención demuestran: (i) mayor potencia, según lo caracterizado por la actividad de inhibición de DPP-IV medida del plasma; (ii) mayor selectividad; (iii) mayor duración de la acción; y/o (iv) mayor perfil de seguridad.
Ejemplos comparativos
59
Comparador I
Potencia/Duración
Sorprendentemente, con respecto a la inhibición de las dipeptidil peptidasas, en particular con la DPP-IV, los compuestos que demuestran gran afinidad hacia la enzima (es decir, potente) no necesariamente poseen la duración de la acción deseada para eficacia terapéutica. La duración de la acción, según se utiliza en la presente memoria, incluye la capacidad del compuesto de mantener su eficacia, preferiblemente eficacia terapéutica, durante un período de tiempo sostenido. Un compuesto que demuestra el nivel preferido de duración de la acción provee eficacia terapéutica con administraciones de una vez al día. Un régimen de administración de una vez al día, según se aprecia en la técnica farmacéutica, puede ser ventajoso en comparación con regímenes de administración de varias veces al día, por razones tales como cumplimiento y comodidad del paciente. Por lo tanto, los compuestos preferidos no solo deben ser lo suficientemente potentes sino que también deben demostrar niveles deseados de duración de la acción.
Desafortunadamente, como apreciarán los expertos en la técnica, no hay una correlación necesaria entre la potencia y la duración de la acción. En otros términos, si bien un compuesto demuestra una gran afinidad hacia la enzima DPP-IV, el compuesto no necesariamente tiene las propiedades de duración adecuadas para la administración de una vez al día preferida. Lo siguiente ilustra esta falta de correlación entre la potencia y la duración de la acción. Los siguientes datos ilustran la invención pero no deben interpretarse como limitativos de la misma.
Se alojaron ratones CD con compatibilidad de edad y peso individualmente a 72ºF y 50% de humedad relativa con un ciclo luz/oscuridad de 12 h. A los animales se les administró, por gavaje oral, vehículo (ácido acético 10 mM) o 1 mg/kg del compuesto de prueba en vehículo. Después de 6 h de la administración del compuesto, las ratas fueron anestesiadas con isofluorano para recolección de sangre cardíaca. La actividad de la DPP-IV en el suero se midió usando el sustrato fluorogénico Gly-Pro-AMC (50 \muM) de acuerdo con la especificación de los fabricantes (Enzyme System Products, Livermore CA). El sustrato se mezcló con Tris 50 mM, pH 7,8, en plasma (20% final v/v) y las muestras se incubaron durante 5-20 min a 30ºC. La actividad de la DPP-IV se determinó midiendo la fluorescencia, usando un espectrofluorómetro Cytofluor con los filtros regulados a 360 nm de excitación y 460 nm de emisión. Los promedios y las desviaciones estándar de cada grupo (n=3) se calcularon usando la prueba de la t de Student y se compararon con las ratas tratadas con vehículo para determinar el porcentaje de inhibición, como se muestra en la Tabla I.
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TABLA I
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Como se muestra, los Ejemplos comparativos 1, 2 y 4 son muy potentes, teniendo cada uno valores CI_{50} de <5,6 nM. El compuesto ilustrativo de la presente invención, el Ejemplo 2 y también el Ejemplo de referencia 9 demuestran la potencia adecuada, a saber valores CI_{50} de 22 y 72 respectivamente. Cuando se ensayaron los Ejemplos comparativos 1, 2 y 4 para duración de la acción, no obstante, cada uno demostró un nivel deficiente de duración. Los compuestos de la presente invención, si bien menos potentes, presentan una duración de la acción preferida para todo el perfil terapéutico.
Se incluye el Ejemplo comparativo 5 para demostrar incluso más la imprevisibilidad entre la potencia y la duración de la acción. Más específicamente, el Ejemplo comparativo 5 ilustra un compuesto que tiene tanto gran afinidad de unión como duración de la acción. Por lo tanto, la relación de potencia a duración de la acción no puede caracterizarse estrictamente como una relación paralela ni inversa. En cambio, la relación no es previsible.
Esta falta de correlación entre la potencia y la duración de la acción presenta una falta de previsibilidad entre los inhibidores de las dipeptidil peptidasas, específicamente la DPP-IV. Esta imprevisibilidad no ha sido reconocida hasta el momento. Como se demostró más arriba, los datos de unión, solos, pueden o no ser suficientes para averiguar la utilidad terapéutica de dichos compuestos. Los compuestos de la presente invención demuestran niveles deseados tanto de potencia como de duración de la acción, además de otras propiedades analizadas en esta memoria.
Comparador II
\beta-substitución y ciclización
Como se describe en esta memoria, los compuestos de la presente invención tienen por lo menos dos \beta-sustituciones idénticas, a saber, R^{1} y R^{2} son iguales. Tal como se indica en esta memoria, los compuestos de la presente invención están di-\beta-sustituidos, como se ilustra en el Ejemplo 1
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61 
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Una realización preferida se ilustra mediante el Ejemplo 1, a saber, cuando R^{1} y R^{2} son cada uno arilo, más preferiblemente fenilo y, como se ilustra en el Ejemplo 2, más preferiblemente fenilo sustituido con halógeno, preferiblemente flúor. En general, los compuestos di-\beta-sustituidos, como aquellos de la presente invención, no tienden a ciclarse con la cabeza de nitrilo para formar amidina cíclica y, por lo tanto, son estables.
Por otra parte, los compuestos mono-\beta-sustituidos, por ejemplo, los Ejemplos comparativos 3 y 4 ilustrados anteriormente, donde el carbono \beta no porta dos sustituyentes idénticos, tienden a ciclarse y, en consecuencia, demuestran semividas de estabilidad relativamente corta, según lo medido por t _{1/2}.
Además, en general los compuestos con el patrón de gem-sustitución en el carbono \beta demuestran también mayor selectividad.
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Estudios de estabilidad para compuestos DPP IV
Por regla general, se disuelven 0,2-0,5 mg del compuesto en 1 mL de solución salina tamponada con fosfato (PBS) en un vial de muestra de HPLC y se disponen en un automuestreador controlado de manera termostática a 37ºC. Se obtiene un cromatograma de HPLC en un punto de tiempo inicial seguido de sucesivos cromatogramas de HPLC en puntos de tiempo de 24, 48, 72, horas, etc..
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Método de HPLC:
Columna: Phenomenex Luna C18(2), 3 \mu, 100 x 4,6 mm, con termostato regulado a 40ºC
Fase móvil A: 95:5:0,2% Agua: Acetonitrilo: Ácido trifluoroacético
Fase móvil B: 5:95:0,2% Agua: Acetonitrilo: Ácido trifluoroacético
Caudal: 1 mL/minuto
Gradiente: 0-100% B en 15 minutos
Longitud de onda de detección UV: 215 nm.
El área debajo del pico de la sustancia del fármaco se compara con el área inicial para cada cromatograma y se traza como porcentaje restante del tiempo inicial (t_{0}).
La comparación de las semividas de la reacción de ciclización/degradación (t_{1/2}) de los compuestos muestra una mayor estabilidad para los compuestos di-\beta-sustituidos, como en el Ejemplo 2 y en el Ejemplo de referencia 9. El aumento de t_{1/2} se relaciona directamente con el aumento de estabilidad del compuesto.
TABLA 2
62 
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Por lo tanto, además de la potencia y la duración de la acción, los compuestos de la presente invención demuestran también la estabilidad deseada.
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Comparador III
Perfil de seguridad
El perro es una especie no roedora común rutinariamente utilizada para satisfacer los requerimientos reguladores. Se eligió el beagle para examinar la seguridad de los compuestos de la presente invención debido al conocimiento de la patología de esta raza y la respuesta a una amplia diversidad de fármacos. A perros (Marshall Farms Inc., North Rose, NY, EE. UU.) de 9 a 12 meses (5 a 12 kg) se les administró, por gavaje oral, a 10 mL/kg/día, vehículo (ácido acético 10 mM, pH 3,3) o el compuesto de prueba en vehículo. Después de cada dosis se realizó una purga de aproximadamente 10 mL de agua, una vez al día con 24-48 horas entre cada dosis posterior. Si no se observaba una toxicidad gastrointestinal limitativa, la dosis se aumentaba al triple no antes de aproximadamente 24 horas de la dosis precedente. La toxicidad gastrointestinal limitativa incluye diarrea, heces sueltas o mucoides, sangre en las heces y/o desprendimiento del epitelio intestinal. Se realizaron observaciones clínicas por lo menos tres veces por día durante el tratamiento (una antes de la administración, aproximadamente una hora después de la administración y una vez junto con la viabilidad pm). La actividad de la DPP-IV en el suero se midió usando el sustrato fluorogénico Gly-Pro-AMC (50 \muM) de acuerdo con la especificación de los fabricantes (Enzyme System Products, Livermore CA). El sustrato se mezcló con Tris 50 mM, pH 7,8, en suero (20% final v/v) y las muestras se incubaron durante 5-20 min a 30ºC. La actividad de la DPP-IV se determinó midiendo la fluorescencia, usando un espectrofluorómetro Cytofluor con los filtros regulados a 360 nm de excitación y 460 nm de emisión.
El compuesto anteriormente ilustrado como el Ejemplo comparativo 5 contiene una porción de P2 relativamente pequeña según lo determinado por el peso molecular. Por lo tanto, el Ejemplo comparativo 5 y los compuestos de la presente invención, que se describen en esta memoria con grandes porciones de P2, a saber el Ejemplo 2 y el Ejemplo de referencia 9 para ilustración, se ensayaron cada uno en los estudios de aumento de la dosis descritos.
En base a los estudios de aumento de la dosis en perros, 0,3 mg/kg del Ejemplo comparativo 5 causaron heces sueltas/mucoides con rastros de sangre, mientras que 1 mg/kg del Ejemplo de referencia 9 no causó efectos adversos. Tras el aumento a 3 mg/kg, no obstante, el Ejemplo de referencia 9 causó heces sueltas/mucoides con rastros de sangre.
En cambio 12 horas después de la administración oral de 0,2 mg/kg del Ejemplo comparativo 5. El Ejemplo comparativo 5 inhibió la DPP-IV por 2%. Sorprendentemente, 0,2 mg/kg del Ejemplo 9 inhibieron la DPP4 por 76%, indicando que el Ejemplo 9 inhibe significativamente la actividad de la DPP4 en suero.
Asimismo, con otros compuestos de la presente invención, 10 mg/kg del Ejemplo 2 no tuvieron efectos adversos sobre la toxicidad gastrointestinal y 0,5 mg/kg del Ejemplo 2 inhibieron la DPP-IV por 45% 12 horas después de la administración oral.
En base a los estudios de aumento de la dosis en perros, se prefieren los compuestos de la presente invención, como se ilustra en el Ejemplo 2 y en el Ejemplo de referencia 9, que tienen una porción P2 de peso molecular mayor.
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Comparador IV
Fluorado frente a no fluorado
Cuando los compuestos de la presente invención se ensayaron in vivo en períodos de tiempo en el intervalo de 0 a 10 horas, los compuestos fluorados de la presente invención demostraron un incremento significativo en la inhibición de DPP-IV en comparación con sus contrapartidas no fluoradas. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención proveen una potencia inesperada que no se ha apreciado antes. Por ejemplo, el Ejemplo 2 y su versión no fluorada, el Ejemplo comparativo 6, se compararon para determinar el beneficio del sustituyente 4-fluoro. Sorprendentemente, el sustituyente 4-fluoro prolonga la duración del complejo inhibidor de la enzima marcadamente, y además proporciona un aumento significativo de la potencia. Estas propiedades beneficiosas no habían sido apreciadas hasta el momento.
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TABLA 3
64 
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Toda la investigación cumplió con los principios de cuidados de animales de laboratorio (publicación NIH No. 85-23, revisada en 1985) y con la política sobre uso de animales de GlaxoSmithKline.
Si bien las realizaciones específicas de la presente invención han sido ilustradas y descritas en detalle, la invención no se limita a las mismas. La descripción detallada previamente de las realizaciones preferidas se provee como ejemplo únicamente y no deberá interpretarse como limitación de la invención. Las modificaciones serán obvias para los expertos en la técnica.

Claims (26)

1. Un compuesto de fórmula (I):
65
incluyendo sus sales y solvatos, en donde
X es F o H;
R^{1} y R^{2} son iguales y son cada uno arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido; y
R^{3} es H o alquilo;
donde el término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución.
El término "arilo" se refiere a un sistema de anillo aromático, que incluye sistemas condensados en los que el anillo(s) puede estar opcionalmente sustituido, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede estar unido el grupo arilo;
el término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillo aromático monocíclico o a un sistema de anillo aromático bicíclico condensado que comprende dos anillos aromáticos, en donde los anillos heteroarilo contienen uno o más átomos de nitrógeno, azufre y/u oxígeno, en donde los N-óxidos, óxidos de azufre y dióxidos son sustituciones de heteroátomos permisibles, y los anillos pueden estar opcionalmente sustituidos, permitiéndose múltiples grados de sustitución, y también incluye un enlazador alquileno opcional, como alquileno C_{1}-C_{6}, a través del cual puede estar unido el grupo heteroarilo; "opcionalmente sustituido" denota una sustitución opcional, una o más veces, con acilo; alquilo; alquenilo; alquinilo; alquilsulfonilo; alcoxi; ciano; halógeno; haloalquilo; hidroxi; nitro; arilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilo, que puede además estar sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; arilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroarilsulfonilo, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; ariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; heteroariloxi, que puede estar además sustituido con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro; -R'OR'R^{4}; o -NR^{4}R^{5}; donde para cada caso R' es alquileno, alquenileno o alquinileno, y R^{4} y R^{5} se seleccionan cada uno independientemente entre H, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o heteroarilsulfonilo, donde cada aparición de dicho arilo o heteroarilo puede estar sustituida con uno o más acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro, o R^{4} y R^{5} pueden combinarse para formar un anillo, que opcionalmente tiene heteroátomos adicionales, que opcionalmente tiene uno o más grados de insaturación y que opcionalmente puede sustituirse adicionalmente con acilo, alcoxi, alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilsulfonilo, ciano, halógeno, haloalquilo, hidroxi o nitro.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, incluyendo sus sales y solvatos, en donde X es H.
3. Un compuesto según la reivindicación 1 ó 2, incluyendo sus sales y solvatos, en donde R^{3} es H.
4. Un compuesto según cualquier reivindicación precedente, incluyendo sus sales y solvatos, en donde R^{1} y R^{2} son ambos arilo.
5. Un compuesto según la reivindicación 4, incluyendo sus sales y solvatos, en donde cada arilo es fenilo sustituido con halógeno.
6. Un compuesto según la reivindicación 5, incluyendo sus sales y solvatos, en donde dicho halógeno es flúor.
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7. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado entre:
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66
y sus sales y solvatos.
8. Un compuesto según la reivindicación 7, seleccionado entre:
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo; e
Hidrocloruro de (2S,4S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-bis(4-fluorofenil)propanoil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo.
9. Un compuesto según la reivindicación 7, seleccionado del compuesto
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y sus sales y solvatos.
10. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 9.
11. La formulación farmacéutica según la reivindicación 10, que además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. Uso de un compuesto, incluyendo sus sales y solvatos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la elaboración de un medicamento para la inhibición de la proteasa que escinde la post prolina/alanina.
13. El uso según la reivindicación 12, en donde la proteasa que escinde la post prolina/alanina es una serina proteasa.
14. El uso según la reivindicación 13, en donde la serina proteasa es una dipeptidil peptidasa.
15. El uso según la reivindicación 14, en donde la dipeptidil peptidasa es DPP-II.
16. El uso según la reivindicación 14, en donde la dipeptidil peptidasa es DPP-IV.
17. Uso de un compuesto, incluyendo sus sales y solvatos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos metabólicos, trastornos gastrointestinales, trastornos víricos, trastornos inflamatorios, diabetes, obesidad, hiperlipidemia, trastornos dermatológicos o de las membranas mucosas, psoriasis, malestar intestinal, constipación, trastornos autoinmunitarios, encefalomielitis, trastornos mediados por complementos, glomerulonefritis, lipodistrofia, daño hístico, trastornos psicosomáticos, depresivos y neuropsiquiátricos, infección por VIH, alergias, inflamación, artritis, rechazo a trasplantes, hipertensión arterial, insuficiencia cardíaca congestiva, tumores y abortos inducidos por estrés.
18. Uso según la reivindicación 17, en el que el medicamento es para el tratamiento o la profilaxis de la diabetes.
19. Un compuesto, incluyendo sus sales y solvatos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para uso como una sustancia terapéutica activa.
20. Una combinación que comprende un compuesto según la reivindicación 9, y uno o más de otros agentes antidiabéticos, seleccionados entre insulina, inhibidores de \alpha-glucosidasa, biguanidas, secretagogos de insulina o sensibilizantes de insulina.
21. Una combinación según la reivindicación 20, en donde dichos inhibidores de \alpha-glucosidasa se seleccionan entre acarbosa, emiglitato, miglitol y voglibosa.
22. Una combinación según la reivindicación 20, en donde dichas biguanidas se seleccionan entre metformina, buformina y fenformina.
23. Una combinación según la reivindicación 20, en donde dichos secretagogos de insulina se seleccionan entre sulfonilureas.
24. Una combinación según la reivindicación 20, en donde dichos sensibilizantes de insulina se seleccionan entre ligandos de los receptores activados por el proliferador de peroxisoma (PPAR).
25. Una combinación según la reivindicación 24, en donde dichos ligandos PPAR se seleccionan entre agonistas de PPAR-\gamma.
26. Una combinación según la reivindicación 24, en donde dichos agonistas de PPAR-\gamma se seleccionan entre Actos^{TM} y Avandia^{TM}.
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