ES2321162T3 - Compuestos y composiciones farmaceuticas que tienen actividad supresora del apetito. - Google Patents
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Abstract
Compuesto que tiene la fórmula estructural general** ver fórmula** en la que R = alquilo; R1 = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o cualquier otro grupo éster orgánico; R 2 = H, o uno o más 6-desoxi-hidratos de carbono, o uno o más 2,6-didesoxi-hidratos de carbono o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos; y en la que las líneas discontinuas indican la presencia opcional de un enlace adicional entre C4-C5 o C5-C6, excepto ramanona, isorramanona, 12-benzoato de isorramanona y 5beta-pregnan-20-on-3beta,12beta,14beta-triol.
Description
Compuestos y composiciones farmacéuticas que
tienen actividad supresora del apetito.
Esta invención se refiere a glicósidos
esteroideos, a composiciones que contienen tales glicósidos
esteroideos y a un nuevo uso para estos glicósidos esteroideos y
las composiciones que los contienen. Los glicósidos esteroideos
pueden extraerse y aislarse a partir de material de planta. La
invención se refiere también a compuestos y procedimientos que
pueden usarse en un procedimiento de producción sintética de estos
glicósidos esteroideos, y de ese modo facilitan los productos de
una extracción de este tipo y de un procedimiento de síntesis de
este tipo.
En una aplicación particular, la invención se
refiere a un agente supresor del apetito, a compuestos y
procedimientos que pueden usarse en un procedimiento para producir
de manera sintética el agente supresor del apetito, a una
composición supresora del apetito que contiene el agente supresor
del apetito, y a un procedimiento no terapéutico de supresión del
apetito.
En este documento se describe un procedimiento
para preparar un extracto de una planta del género
Trichocaulon o del género Hoodia, comprendiendo el
extracto un agente supresor del apetito, incluyendo el procedimiento
las etapas de tratar el material de planta recogido con un
disolvente para extraer una fracción que tiene actividad supresora
del apetito, separar la solución de extracción del resto del
material de planta, retirar el disolvente de la solución de
extracción y recuperar el extracto. El extracto así recuperado puede
purificarse adicionalmente, por ejemplo mediante procedimientos de
extracción con disolventes adecuados.
El procedimiento proporciona un extracto de
planta hecho de plantas del grupo que comprende el género
Trichocaulon y el género Hoodia y que tiene actividad
supresora del apetito.
El extracto puede prepararse a partir de
material de planta tal como los tallos y las raíces de dichas
plantas del género Trichocaulon o del género Hoodia.
El género Trichocaulon y el género Hoodia incluyen
plantas carnosas que crecen en regiones áridas tales como las que se
encuentran en África del Sur. En un ejemplo, el extracto supresor
del apetito activo se obtiene de la especie Trichocaulon
piliferum. La especie Trichocaulon officinale
también puede usarse para proporcionar un extracto supresor del
apetito activo. En otro ejemplo, el extracto supresor del apetito
activo puede obtenerse de la especie Hoodia currorii,
Hoodia gordonii u Hoodia lugardii. Los
bioensayos realizados por el solicitante en ratas han indicado que
ciertos extractos tienen actividad supresora del apetito.
El material de planta puede homogeneizarse en
presencia de un disolvente adecuado, por ejemplo, un disolvente de
metanol/cloruro de metileno, mediante un dispositivo tal como un
mezclador Waring. La solución de extracción después puede separarse
del material de planta residual por un procedimiento de separación
apropiado tal como, por ejemplo, filtración o centrifugación. El
disolvente puede retirarse mediante un rotavapor, preferiblemente
en un baño de agua a una temperatura de 60ºC. El extracto bruto
separado después puede extraerse adicionalmente con cloruro de
metileno y agua antes de separarse en un extracto de cloruro de
metileno y un extracto acuoso. Se puede retirar el disolvente del
extracto de cloruro de metileno preferiblemente mediante evaporación
en un rotavapor y el extracto resultante puede purificarse
adicionalmente mediante extracción con metanol/hexano. El producto
de extracción con metanol/hexano después puede separarse para
producir un extracto de metanol y un extracto de hexano. El
extracto metanol puede evaporarse para retirar el disolvente para
producir un extracto activo parcialmente
purificado.
purificado.
El extracto activo parcialmente purificado puede
disolverse en metanol, y puede fraccionarse adicionalmente por
cromatografía en columna, empleando gel de sílice como medio de
adsorción y una mezcla de cloroformo/metanol al 30% como eluyente.
Puede obtenerse una pluralidad de diferentes fracciones, y cada una
puede evaluarse por procedimientos de bioensayo adecuados, para
determinar la actividad supresora del apetito de las mismas.
Una fracción que tenga actividad supresora del
apetito puede preferiblemente fraccionarse adicionalmente tal como
por cromatografía en columna usando gel de sílice como medio de
adsorción y un disolvente de cloroformo:metanol 9:1, y las
subfracciones resultantes se pueden bioensayar para su actividad
supresora del apetito. Una subfracción que presente actividad
supresora del apetito puede, si se desea, fraccionarse
adicionalmente y purificarse, convenientemente usando un
procedimiento cromatográfico en columna con gel de sílice como medio
de adsorción y un disolvente de acetato de etilo:hexano 9:1. Las
fracciones purificadas resultantes pueden evaluarse de nuevo por
procedimientos de bioensayo adecuados para su actividad supresora
del apetito.
El solicitante ha descubierto que al menos una
de dichas fracciones purificadas tiene buena actividad supresora
del apetito, y el principio activo de la fracción se identificó por
técnicas químicas convencionales incluyendo resonancia magnética
nuclear, y se descubrió que era un compuesto de la fórmula
estructural
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con la nomenclatura del S.I., el
principio activo (1) es el compuesto
3-O-[-\beta-D-tevetopiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil]-12\beta-O-tigloiloxi-14-hidroxi-14\beta-pregn-50-en-20-ona
(C_{47}H_{74}O_{15}
M^{+}878).
M^{+}878).
En este documento se describe también un
procedimiento para preparar un extracto de una planta del género
Trichocaulon o del género Hoodia, comprendiendo el
extracto un agente supresor del apetito, incluyendo el
procedimiento las etapas de prensar el material de planta recogido
para separar la savia del material de planta sólido y recuperar la
savia libre del material de planta sólido para formar el
extracto.
El extracto puede secarse para retirar la
humedad, por ejemplo, por secado por pulverización, secado por
congelación o secado al vacío, para formar un polvo no
aglomerante.
Los procedimientos facilitan una composición que
tiene actividad supresora del apetito que comprende un extracto
como se ha descrito anteriormente.
La composición puede estar mezclada con un
excipiente, diluyente o vehículo farmacéutico y opcionalmente está
preparada en forma farmacéutica unitaria.
Los procedimientos facilitan también el uso de
un extracto como se ha descrito anteriormente en la fabricación de
un medicamento que tiene actividad supresora del apetito, un
extracto como se ha descrito anteriormente para su uso como
medicamento que tiene actividad supresora del apetito y un
procedimiento de supresión del apetito administrando a un ser
humano o un animal una dosificación eficaz de una composición como
se ha descrito anteriormente.
El compuesto (1) es un compuesto novedoso y la
presente invención se extiende al compuesto (1) y ciertos análogos
o derivados de este trisacárido esteroideo que tiene propiedades
supresoras del apetito. Las moléculas seleccionadas como análogos o
derivados pretenden afectar a las propiedades del trisacárido
esteroideo con el objetivo de aumentar la actividad del principio
activo. Se tuvieron en cuenta los siguientes efectos cuando se
seleccionaron los aná-
logos:
logos:
Se pretende que modificaciones de grupo
funcional de la molécula activa cambien la hidrofobicidad y
lipofilicidad de la molécula. Se ha mostrado que un aumento en la
lipofilicidad aumentada está correlacionado con un aumento en la
actividad biológica, peor solubilidad acuosa, aumento de
detergencia/lisis celular, aumento de almacenamiento en tejidos,
eliminación y metabolismo más rápidos, aumento de unión de proteínas
plasmáticas y velocidad más rápida de aparición de la acción.
Se pretende que la modificación de grupo
funcional de la molécula cambien la acidez y basicidad que tendrían
un papel principal en el control del transporte del compuesto hasta
su sitio de acción y la unión en su sitio diana.
Se pretende que modificaciones de grupo
funcional de grupos carboxilo y carbonilo cambien las interacciones
entre las proteínas en sistemas biológicos y los grupos funcionales
modificados químicamente.
El propósito de cambiar las características
estéricas de la molécula es aumentar la unión a su receptor y así
aumentar su actividad biológica.
Se pretende que las siguientes modificaciones
químicas en la molécula afecten a la hidrofobicidad y lipofilicidad,
propiedades electrónicas, enlaces de hidrógeno y parámetros
estéricos en la molécula:
- a)
- Modificación química del grupo C-12 y funcionalidad éster;
- b)
- Modificación química del doble enlace 5,6, por ejemplo hidrogenación y migración;
- c)
- Modificación química del grupo carbonilo C-20 y acetilo C-17;
- d)
- Modificación química del anillo "D" del anillo esteroideo o de aglicona;
- e)
- Modificación de los hidratos de carbono del resto de trisacárido.
Por consiguiente, la invención proporciona un
compuesto que tiene la fórmula estructural general
en la
que
R = alquilo;
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o C_{5}-C_{6},
excepto ramanona, isorramanona, 12-benzoato de
isorramanona y
5\beta-pregnan-20-on-3\beta,12\beta,14\beta-triol.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención proporciona también un compuesto
como se ha descrito anteriormente en el que hay un enlace adicional
entre C_{5}-C_{6}, R = metilo, R_{1} =
tigloílo, R_{2} =
3-O-[-\beta-D-tevetopiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosilo]
y que tiene la fórmula estructural
Análogos o derivados activos adicionales del
compuesto (1) supresor del apetito de acuerdo con la invención son
compuestos que tienen las siguientes fórmulas estructurales:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, o benzoílo, o tigloílo, o cualquier
otro grupo éster orgánico;
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, o tigloílo, o benzoílo o cualquier
otro grupo éster orgánico;
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, o tigloílo, o benzoílo o cualquier
otro grupo éster orgánico;
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, o tigloílo, o benzoílo o cualquier
otro grupo éster orgánico;
en la
que
R = alquilo;
R_{1} = H, o tigloílo, o benzoílo o cualquier
otro grupo éster orgánico, excepto ramanona, isorramanona,
12-benzoato de isorramanona y
5\beta-pregnan-20-on-3\beta,12\beta,14\beta-triol;
y
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o C_{5}-C_{6},
excepto ramanona. Compuestos que tienen las fórmulas:
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos; y
en la que las líneas discontinuas indican la presencia de un enlace
adicional entre C_{4}-C_{5} o
C_{5}-C_{6};
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o
C_{5}-C_{6};
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5}, C_{5}-C_{6} o
C_{14}-C_{15};
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo,
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5}, C_{5}-C_{6} o
C_{14}-C_{15};
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo,
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono, o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5}, C_{5}-C_{6} o
C_{14}-C_{15}; y R_{3} = H, alquilo, arilo,
acilo o glucoxilo; y
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R = H, alquilo, arilo o
cualquier esteroide que tenga un grupo hidroxilo beta en C_{14}, o
una funcionalidad hidroxilo beta en C_{12}, o un grupo acilo
C_{17}, o una olefina C_{5}-C_{6}, o
combinaciones de los
mismos;
pueden utilizarse también como compuestos
activos pero no son parte de la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se extiende todavía adicionalmente
a procedimientos que pueden usarse en un procedimiento para
producir de manera sintética un compuesto que tiene actividad
supresora del apetito.
El procedimiento usa un esteroide como material
de partida (o producto intermedio o precursor), teniendo el
esteroide la fórmula química
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El esteroide (15) puede prepararse a partir de
un compuesto que tiene la fórmula (22) mediante un procedimiento
que incluye las etapas de
\vskip1.000000\baselineskip
(i) tratar progesterona que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
con el microorganismo
Calonectria decora para producir un compuesto
12\beta,15\alpha-dihidroxi-progesterona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) tratar el compuesto (17) con
cloruro de tosilo y piridina para producir un compuesto
12\beta-hidroxi-15\alpha-(p-toluenosulfonil)-progesterona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(iii) tratar el compuesto (18) con
colidina a 150ºC para producir un compuesto
12\beta-hidroxi-\Delta^{14}-progesterona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(iv) tratar el compuesto (19) con
cloruro de acetilo y anhídrido acético a 120ºC, para producir un
compuesto
3,12\beta-diacetoxipregna-3,5,14-trien-20-ona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(v) tratar el compuesto (20) con
etilenglicol y una cantidad catalítica de ácido
p-toluenosulfónico, para producir un compuesto
3,12\beta-diacetoxi-20,20-etilendioxipregna-3,5,14-trieno
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(vi) tratar el compuesto (21) con
NaBH_{4} para producir un compuesto 12-acetato de
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En un primer procedimiento alternativo, un
procedimiento para la preparación del esteroide (15) de acuerdo con
la invención incluye las etapas de
(a) tratar el compuesto (22) con un agente
reductor, por ejemplo LiAlH_{4}, para producir un compuesto
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno
de fórmula
(b) tratar el compuesto (23) con
N-bromoacetamida (NBA) y una base, por ejemplo
piridina, para producir un compuesto
3\beta,12\beta-dihidroxi-14,15-epoxi-20,20-etilendioxipregn-5-eno
de
fórmula
(c) tratar el compuesto (24) con un
agente reductor, por ejemplo LiAlH_{4}, por ejemplo con reflujo,
para producir un compuesto
3\beta,12\beta,14\beta-trihidroxi-20,20-etilendioxipregn-5-eno
de
fórmula
y (d) tratar el compuesto (25) con
un ácido, por ejemplo ácido acético, y agua para producir el
compuesto intermedio esteroideo
3\beta,12\beta,14\beta-trihidroxi-pregn-5-eno
(15).
\newpage
El esquema de reacción A representa el
procedimiento para la preparación del producto intermedio esteroideo
(15) a partir del compuesto (22) de acuerdo con "el primer
procedimiento alternativo" de la invención (e incluye la
preparación del compuesto (22) a partir del compuesto (16) para
propósitos ilustrativos).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema de reacción
A
\newpage
En un segundo procedimiento alternativo, un
procedimiento para la preparación del esteroide (15) de acuerdo con
la invención incluye las etapas de
(a) tratar el compuesto (22)
(12-acetato de
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno)
con cloruro de p-toluenosulfonilo y una base, por
ejemplo piridina, para producir un compuesto
12-acetato de
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno-3-tosilo
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
(b) tratar el compuesto (26) con acetato de
potasio en un disolvente, por ejemplo acetona, para producir un
compuesto 12-acetato de
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxi-3,5\alpha-ciclopregnan-14-eno
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
(c) tratar el compuesto (27) con un agente
reductor, por ejemplo LiAlH_{4}, y por ejemplo tetrahidrofurano,
para producir un compuesto
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxi-3,5\alpha-ciclopregnan-14-eno
de fórmula
(d) tratar el compuesto (28) con
N-bromoacetamida, opcionalmente ácido acético, y una
base, por ejemplo piridina, para producir un compuesto
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxi-14,15-epoxi-3,5\alpha-ciclopregnano
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(e) tratar el compuesto (29) con un agente
reductor, por ejemplo LiAlH_{4}, y por ejemplo tetrahidrofurano,
para producir un compuesto
6\beta,12\beta,14\beta-trihidroxi-20,20-etilendioxi-3,5\alpha-ciclopregnano
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y (f) tratar el compuesto (30) con
un ácido, por ejemplo ácido clorhídrico, y un disolvente por ejemplo
acetona, para producir el compuesto
(15).
\newpage
El esquema de reacción B muestra el
procedimiento para la preparación del producto intermedio esteroideo
(15) a partir del compuesto (22) de acuerdo con "el segundo
procedimiento alternativo" de la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema de reacción
B
\newpage
El compuesto (1) puede sintetizarse a partir de
un primer producto intermedio de hidrato de carbono en forma de un
resto de monosacárido cimarosa activado, que puede prepararse a
partir de un compuesto que tiene la fórmula (36). El compuesto (36)
puede prepararse mediante un procedimiento que incluye las
etapas
(i) tratar
metil-\alpha-D-glucosa
que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con benzaldehído y cloruro de zinc
para producir un compuesto
metil-4,6-O-bencilideno-\alpha-D-glucopiranósido
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) tratar el compuesto (32) con cloruro de
tosilo y piridina a 0ºC, para producir un compuesto
metil-4,6-O-bencilideno-2-O-tosil-\alpha-D-glucopiranósido
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(iii) tratar el compuesto (33) con NaOMe a 100ºC
para producir un compuesto
metil-4,6-O-bencilideno-3-O-metil-\alpha-D-altropiranósido
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(iv) tratar el compuesto (34) con
N-bromosuccinamida (NBS) para producir un compuesto
metil-6-bromo-4-O-benzoil-3-O-metil-6-desoxi-\alpha-D-altropiranósido
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y (v) tratar el compuesto (35) con
NaBH_{4} y NiCl_{2}, para producir un compuesto
metil-4-O-benzoil-3-O-metil-6-desoxi-\alpha-D-altropiranósido
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
La invención se extiende a un procedimiento para
la preparación de un producto intermedio de hidrato de carbono en
forma de un resto de monosacárido cimarosa activado que incluye las
etapas de
(i) tratar el compuesto (36) con PhSSiMe_{3},
ZnI_{2} y Bu4^{+}I^{-} para producir un compuesto
4-O-benzoil-3-O-metil-6-desoxi-\alpha\beta-D-feniltioaltrósido
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) opcionalmente tratar el compuesto (37) con
trifluoruro de dietilaminoazufre (DAST), por ejemplo a 0ºC, para
producir un compuesto
4-O-benzoil-3-O-metil-2-feniltio-2,6-didesoxi-\alpha\beta-D-fluorocimaropiranósido
que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o (iii) opcionalmente, tratar el
compuesto (37) con cloruro de t-butildimetilsililo e
imidazol en un disolvente, por ejemplo piridina, para producir
4-O-benzoil-3-O-metil-2-O-t-butildimetilsilil-\alpha\beta-D-feniltioaltrósido
que tiene la
fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo
\newpage
y (iv) tratar el compuesto (39) con una base,
por ejemplo metóxido de sodio, para producir
3-O-metil-2-O-t-butildimetilsilil-\alpha\beta-D-feniltioaltrósido
que tiene la fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
El esquema de reacción C muestra el
procedimiento para la síntesis del resto de monosacárido cimarosa
activado (40) a partir del compuesto (36) (e incluye la preparación
del compuesto (36) a partir del compuesto (31) para propósitos
ilustrativos).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema de reacción
C
\newpage
La síntesis del compuesto (1) puede implicar
también un segundo producto intermedio de hidrato de carbono en
forma de un resto de monosacárido tevetosa activado, que puede
prepararse a partir de un compuesto que tiene la fórmula (47). El
compuesto (47) puede prepararse mediante un procedimiento que
incluye las etapas de
(i) tratar
\alpha-D-glucosa que tiene la
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con acetona y ácido sulfúrico para
producir un compuesto 1,2 :
5,6-di-O-isopropilideno-\alpha-D-glucofuranosa
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) tratar el compuesto (42) con NaH y MeI para
producir un compuesto 1,2 :
5,6-Di-O-isopropilideno-3-O-metil-\alpha-D-glucofuranosa
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(iii) tratar el compuesto (43) con ácido acético
para producir un compuesto
3-O-metil-\alpha\beta-D-glucopiranosa
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(iv) tratar el compuesto (44) con metanol y
ácido clorhídrico para producir un compuesto
metil-3-O-metil-\alpha\beta-D-glucopiranósido
que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(v) tratar el compuesto (45) con benzaldehído y
cloruro de zinc para producir un compuesto
metil-4,6-O-bencilideno-3-O-metil-\alpha\beta-glucopiranósido
que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(vi) tratar el compuesto (46) con
N-bromosuccinamida, cloruro de níquel y borohidruro
de sodio para producir un compuesto
metil-4-O-benzoil-3-O-metil-6-desoxi-\alpha\beta-glucopiranósido
que tiene la fórmula
La preparación de un resto de monosacárido
tevetosa activado incluye las etapas de
(i) tratar el compuesto (47) con
feniltiotrimetilsilano y trifluorometanosulfonato de trimetilsililo
para producir un compuesto
4-O-benzoil-3-O-metil-1-feniltio-6-desoxi-\alpha\beta-glucopiranósido
que tiene la fórmula
(ii) tratar el compuesto (48) con cloruro de
pivaloílo y un disolvente, por ejemplo piridina, para producir un
compuesto
4-O-benzoil-3-O-metil-2-O-pivaloil-1-feniltio-6-desoxi-\alpha\beta-glucopiranósido
que tiene la fórmula
y (iii) tratar el compuesto (49)
con un agente de bromación, por ejemplo
N-bromosuccinimida, y trifluoruro de
dietilaminoazufre para producir un compuesto
4-O-benzoil-3-O-metil-2-O-pivaloil-1-fluoro-6-desoxi-\beta-glucopiranósido
que aparece como estereoisómeros que tienen la
fórmula
El esquema de reacción D muestra el
procedimiento para la síntesis del resto de monosacárido tevetosa
activado (50(A) y 50(B)) a partir del compuesto (48)
(e incluye la preparación del compuesto (47) a partir del compuesto
(41) para propósitos ilustrativos).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema de reacción
D
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con todavía un aspecto adicional de
la invención se proporcionan procedimientos que pueden usarse en un
procedimiento de producción sintética de un compuesto de fórmula (1)
y análogos y derivados del mismo que incluye las etapas de
sintetizar un producto intermedio esteroideo o precursor adecuado y
acoplar el número requerido de monosacáridos adecuados con el
producto intermedio esteroideo.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención proporciona también un
procedimiento de acoplamiento de un monosacárido cimarosa con el
producto intermedio esteroideo, que incluye las etapas de
(i) hacer reaccionar un resto de cimarosa (38)
con un producto intermedio esteroideo (15), por ejemplo a -15ºC, y
en presencia de cloruro de estaño, en un disolvente, por ejemplo
éter, para producir un compuesto
3-O-[4-O-benzoil-2-feniltio-\beta-D-cimaropiranosil]-12,14-6-dihidroxi-pregn-5-en-20-ona
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y (ii) tratar el compuesto (51) con
cloruro de ácido tíglico en piridina y después con una base, por
ejemplo NaOMe, para producir un compuesto
3-O-[-2-feniltio-\beta-D-cimaropiranosil]-12\beta-tigloiloxi-14-hidroxi-14\beta-pregn-5-en-20-ona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se extiende a un procedimiento que
incluye el acoplamiento de un resto de monosacárido cimarosa con un
resto de monosacárido tevetosa y el acoplamiento del disacárido
resultante con el producto esteroideo combinado (52) para formar el
compuesto (1).
El procedimiento de acoplamiento del resto de
monosacárido cimarosa con el resto de monosacárido tevetosa y el
acoplamiento del disacárido resultante con el producto esteroideo
combinado (52) puede incluir las etapas de
(i) acoplar un resto de cimarosa protegido de
manera selectiva (40) y un resto de tevotosa protegido de manera
selectiva (50 A) usando cloruro de estaño (SnCl_{2}) y
trifluorometanosulfonato de plata, por ejemplo a -15ºC, para
producir un compuesto de fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo
\vskip1.000000\baselineskip
(ii) tratar el compuesto (53) con fluoruro de
tetrabutilamonio para producir un compuesto de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
(iii) tratar el compuesto (54) con trifluoruro
de dietilaminoazufre, por ejemplo a 0ºC, para producir un compuesto
de fórmula
(iv) hacer reaccionar el compuesto (55) con el
compuesto (52) para producir un compuesto de fórmula
y (v) tratar el compuesto (56) en
una reacción con níquel Raney y después con una base, por ejemplo
NaOMe, para producir el compuesto (1) como se ha descrito
anteriormente.
El esquema de reacción E muestra el
procedimiento para la síntesis de los productos intermedios (52) y
(55) y acoplarlos para formar el compuesto (56).
Esquema de reacción
E
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con la invención, se proporciona un
procedimiento alternativo que incluye acoplar restos de cimarosa y
tevetosa para formar un trisacárido y acoplar el trisacárido en un
derivado esteroideo para formar un compuesto de fórmula (1).
\newpage
El procedimiento de formación del trisacárido y
acoplamiento del trisacárido resultante con un derivado esteroideo
puede incluir las etapas de
(i) acoplar un resto de cimarosa protegido de
manera selectiva (40) y el compuesto (45) usando cloruro de estaño
(II), AgOTf, Cp_{2}ZrCl_{2} para producir un compuesto de
fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo
(ii) tratar el compuesto (57) con fluoruro de
tetrabutilamonio y trifluoruro de dietilaminoazufre para producir
un compuesto trisacárido que tiene la fórmula
y (iii) acoplar el trisacárido (58)
con un producto intermedio esteroideo de
fórmula
usando cloruro de estaño (II),
AgOTf, Cp_{2}ZrCl_{2} para producir el compuesto
(1).
El producto intermedio esteroideo (59) puede
producirse tratando el esteroide (15) con cloruro de ácido
tíglico.
El esquema de reacción F muestra el
procedimiento para la síntesis del trisacárido (58) y la síntesis
del compuesto (1) acoplando el trisacárido (58) con el producto
intermedio esteroideo (59).
Esquema de reacción
F
Los productos intermedios (23), (24), (25),
(27), (28), (29), (30), (37), (38), (39), (40), (48), (49), (50),
(51), (53), (54), (55), (56), (57) y (58) descritos anteriormente
son compuestos novedosos y ciertos de estos compuestos se
reivindican como tal.
Se ha descubierto que el compuesto (1),
3-O-[-\beta-D-tevetopiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil]-12\beta-O-tigloiloxi-14-hidroxi-14\beta-pregn-5-en-20-ona,
y diversos análogos y derivados del mismo tienen actividad
supresora del apetito.
El principio activo puede ser un compuesto de
fórmula (1), extraído de una planta del género Trichocaulon
o Hoodia o un derivado del mismo. La planta puede ser de la
especie Trichocaulon officinale o Trichocaulon
piliferum, o la especie Hoodia currorii, Hoodia gordonii
o Hoodia lugardii.
La invención se extiende también a una
composición o formulación que tiene actividad supresora del apetito,
en la que el principio activo es un compuesto de fórmula (1)
producido de manera sintética o un derivado o análogo del mismo,
tal como se expuso anteriormente en este documento con referencia a
los compuestos (2) a (14).
El agente supresor del apetito puede ser un
compuesto químico sintético o un compuesto químico natural aislado
de fórmula:
o derivados o análogos del mismo,
tal como se expuso
anteriormente.
La composición o formulación supresora del
apetito puede constar del agente supresor del apetito mezclado con
un excipiente, diluyente o vehículo farmacéutico. Pueden añadirse
otros aditivos adecuados, incluyendo un estabilizante y otros de
dichos ingredientes que puedan desearse.
La invención se extiende al uso del compuesto
(1) o sus derivados o análogos en la fabricación de un medicamento
que tiene actividad supresora del apetito.
La invención se extiende además al compuesto
(1), o sus derivados o análogos tal como se expuso anteriormente,
para su uso como medicamento que tiene actividad supresora del
apetito.
Se proporciona también un procedimiento para
suprimir el apetito administrando un ser humano o un animal una
dosificación eficaz de una composición descrita anteriormente.
En este documento se ha descrito un
procedimiento para extraer un glicósido esteroideo que tiene
actividad supresora del apetito a partir de material de planta
obtenido de una planta del género Trichocaulon o
Hoodia. Por tanto, la invención puede usar un glicósido
esteroideo sustancialmente puro de fórmula (1) que puede obtenerse
a partir de un extracto de material de planta del género
Hoodia o Trichocaulon.
La invención también se extiende a un producto
alimenticio o una bebida que contenga una cantidad eficaz del
glicósido esteroideo de fórmula (1), o sus derivados o análogos tal
como se expuso anteriormente, para que tenga un efecto supresor del
apetito cuando se ingiere.
Los estudios genéticos moleculares han conducido
a un aumento considerable en la comprensión de la regulación del
apetito, la saciedad y el peso corporal. Estos estudios han revelado
numerosas vías reguladoras centrales, mediadas por varios
neuropéptidos. El mantenimiento de un peso corporal normal se
consigue por un equilibrio complejo entre la ingesta de energía, el
consumo de alimento, y el gasto de energía. La homeostasis de la
energía está sometida a un amplio intervalo de influencias,
finalmente controladas por el cerebro. Las diferentes señales
incluyen cosas tales como el sentido del olfato y el gusto y señales
gastrointestinales tales como la dilatación del tracto
gastrointestinal, señales químicas a la mucosa gástrica y
metabolitos en la sangre tales como ácidos grasos y glucosa.
De forma central, el neuropéptido "Y" (NPY)
que está regulado de forma negativa por la leptina, se ha
establecido como uno de los reguladores positivos del
comportamiento de la alimentación. La expresión del antagonista
endógeno para receptores de melanocortina también ha demostrado ser
la base para la obesidad en un modelo particular (el ratón ob/ob).
De hecho, la deficiencia en el receptor de melanocortina MC4 replica
completamente el síndrome de obesidad. Otros mediadores que han
demostrado tener papeles en el equilibrio energético incluyen la
bombesina, la galonina y el péptido 1 de tipo glucagón.
Sin querer restringirse a la teoría, el
solicitante cree que el compuesto (1) y sus análogos como se ha
descrito anteriormente actúan como antagonista del receptor 4 de
melanocortina. El efecto de éste es regular el NPY pero también
aumentar la colecistocinina. El efecto de la colecistocinina entre
otras cosas es inhibir el vaciado gástrico.
\global\parskip0.900000\baselineskip
La invención y su eficacia se describirán ahora
adicionalmente, sin limitación del alcance de la invención, con
referencia a los siguientes ejemplos y dibujos.
En los dibujos,
la Figura 1 muestra un diagrama de flujo de un
procedimiento general para extraer un primer extracto supresor del
apetito bruto y un extracto supresor del apetito purificado a partir
del material de planta del género Trichocaulon u
Hoodia;
la Figura 2 muestra una representación gráfica
de un bioensayo realizado en ratas usando un extracto de metanol
parcialmente purificado de Trichocaulon piliferum;
las Figuras 3 y 4 juntas muestran una
representación esquemática de una realización preferida del
procedimiento de la invención para producir un extracto de material
de planta del género Trichocaulon u Hoodia; y
las Figuras 5 y 6 muestran una representación
gráfica del porcentaje de cambio en la masa corporal de las ratas
para diferentes grupos durante los días -7 a 7 y los días 0 a 7
respectivamente en un estudio de dosis repetida usando un extracto
de savia y un extracto de savia secada por pulverización de material
de planta de la especie Hoodia gordonii.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
1
El procedimiento general para extraer un primer
extracto supresor del apetito bruto y un extracto supresor del
apetito purificado a partir de material de planta del género
Trichocaulon o del género Hoodia se ilustra a modo de
diagrama de flujo de la Figura 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo preparativo
2
Los bioensayos realizados en ratas usando un
extracto de metanol parcialmente purificado obtenido del modo
ilustrado en el Ejemplo 1, indicaron que el extracto muestra de
hecho actividad supresora del apetito. La actividad supresora del
apetito del extracto activo puede ilustrarse a modo de ejemplo
típico del efecto del extracto de metanol de Trichocaulon
piliferum sobre ratas, a modo de representación gráfica en la Figura
2.
Será evidente a partir de la Figura 2 que el
grupo de ensayo de ratas dosificadas con el extracto en el día 5
mostraron una ingesta de alimento sustancialmente disminuida sobre
los siguientes dos días, mientras que el grupo de control no
describe una ingesta de alimento reducida comparable. La ingesta de
alimento del grupo de ensayo volvió a la normalidad y de hecho
aumento desde el día 8 en adelante.
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Ejemplo
3
Se ilustra un procedimiento para producir un
extracto que tiene actividad supresora del apetito de forma
esquemática a modo de ejemplo en las Figuras 3 y 4, ilustrando las
dos Figuras juntas el procedimiento completo. Sin embargo, pueden
usarse diversos procedimientos diferentes, como entenderán los
especialistas en la técnica.
Con referencia a la Figura 3, se suministra
material de planta del género Trichocaulon o el género
Hoodia en un mezclador 3, por ejemplo un mezclador Waring,
mediante el conducto de suministro 1, con un disolvente en forma de
una disolución de cloruro de metileno/metanol introducida por el
conducto de suministro 2. El producto homogeneizado se suministra
por el conducto 4 a una fase de separación 5, por ejemplo en forma
de un filtro o centrifuga y el material de planta residual se
retira por el conducto 27.
La mezcla de disolvente/extracto se suministra
mediante el conducto 6 a una fase de evaporación 7, donde el
disolvente se retira, por ejemplo, mediante un rotavapor. El
extracto bruto secado se suministra por el conducto 8 a una fase de
extracción adicional 9 con la adición de una disolución de cloruro
de metileno/agua introducida por el conducto de suministro 29 para
la extracción adicional y después a una fase de separación 13
mediante el conducto 11, donde la fracción acuosa se retira
mediante el conducto 31. La fracción del extracto disuelto se
suministra mediante el conducto 15 a una fase secadora 17 donde se
evapora el disolvente, por ejemplo por un rotavapor.
Con referencia a la Figura 4, el extracto secado
se suministra mediante el conducto 10 a una fase de extracción 12.
También se suministra una disolución de metanol/hexano mediante el
conducto 14 a la fase de extracción 12 para purificación adicional
y extracción del extracto secado. La mezcla de
extracto/metanol/hexano se suministra mediante el conducto 16 a una
fase de separación 18, se retira la fracción de hexano mediante el
conducto 20 y después se suministra la mezcla de metanol/extracto
mediante el conducto 22 a una fase de secado 24. En la fase de
secado 24, se retira el disolvente, por ejemplo por evaporación en
un rotavapor.
El extracto activo parcialmente purificado y
secado se suministra mediante el conducto 26 y con la adición de
metanol mediante el conducto 28 en una fase de disolución 30 y la
fracción disuelta se suministra mediante el conducto 36 a una
columna de cromatografía 38.
En la columna 38, se fracciona adicionalmente la
fracción soluble en metanol, usando gel de sílice y un disolvente
de cloroformo/metanol al 30%, en diferentes fracciones
esquemáticamente indicadas como fracciones I a V. De acuerdo con un
procedimiento de fraccionamiento real realizado por el solicitante,
el procedimiento de fraccionamiento produjo los siguientes pesos de
fracción: I(3,9 g); II(2,6 g); III(2,1 g);
IV(1,1 g) y V(2,0 g). Estas fracciones se evalúan
individualmente por un procedimiento de bioensayo adecuado (en una
etapa no mostrada) y las fracciones identificadas como fracciones I
y II, que presentan una marcada actividad supresora del apetito, se
suministran por los conductos de suministro 40 y 42 en las columnas
44 y 46 respectivamente donde se fraccionan adicionalmente y se
purifican por cromatografía en columna, de nuevo usando gel de
sílice y un sistema de cloroformo:metanol 9:1.
Las subfracciones II(A)-(C) obtenidas de
la columna 44 no presentan, cuando se ensayan, una actividad
supresora del apetito notable y pueden reciclarse para
cromatografía adicional.
Las subfracciones I(A)-(L) obtenidas de
la columna 46 también se evalúan (por una etapa de ensayo no
mostrada) y se descubre que la subfracción I(C) tiene una
marcada actividad supresora del apetito.
La subfracción I(C) se suministra
mediante el conducto 48 en la columna 50 para un fraccionamiento y
purificación adicionales, usando gel de sílice y el eluyente
acetato de etilo:hexano 9:1. De las fracciones purificadas
resultantes, se descubre que la fracción I(C)(ii), después
del ensayo, tiene una marcada actividad supresora del apetito.
El producto purificado se identifica por
espectroscopia de resonancia magnética nuclear (como se indica en
las Tablas 1 y 2 a continuación) como el compuesto (1).
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\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
(1)
Datos IR: 3440 cm^{-1} (OH), 2910 cm^{-1}
(CH), 1700 cm^{-1} (C=O) [\alpha_{D}]^{20} 589 =
12,67º (C=3, CHCl_{3}) p.f. 147ºC - 152ºC
Los ejemplos 4 a 13 ilustran los procedimientos
sintéticos por medio de los cuales pueden prepararse los compuestos
intermedios y el esteroide (15) de acuerdo con "el primer
procedimiento alternativo".
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Ejemplo
4
Se preparan cultivos de Calonectria
decora (ATCC 14767) mediante la inoculación de un medio de
cultivo compuesto por sacarosa (900 g), K_{2}HPO_{4} (30 g),
concentrado Czapek (300 ml), aguas de maceración de maíz (300 ml) y
agua destilada (30 l) (matraces, 150 X 500 ml). Tras 5 días de
agitación a 26ºC, se añade progesterona (16) (150 g) en una
suspensión de Tween 80 (disolución al 0,1%, 1,5 l) a los matraces.
Se incuban los cultivos durante 5 días adicionales y entonces se
tratan mediante centrifugación, decantación, extracción del medio
con cloroformo y después evaporación para dar la
dihidroxiprogesterona (17) (75 g, 45%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,71 (1H, s,
H-4); 4,12-4,22 (1H, m,
H-15) 4,43 (1H, s.a., OH); 3,46-3,53
(1H, dd, J = 4,6 Hz, H-12); 2,16 Hz (3H, s,
H-21); 1,18 (3H, s, H-19); 0,74 (3H,
s, H-18)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Se disuelve la dihidroxiprogesterona (17) (75 g,
0,22 mol) en piridina seca (300 ml) y se enfría hasta 0ºC. Se añade
gota a gota cloruro de p-toluenosulfonilo (46 g,
0,24 mol) en piridina seca (200 ml) a la mezcla de reacción a 0ºC.
Se agita la reacción durante la noche a 0ºC y se extingue mediante
la adición de H_{2}O (500 ml). Se extrae la fase acuosa con
acetato de etilo (1 l) y se lava el extracto orgánico con ácido
clorhídrico (6 M, 3 X 1 l), bicarbonato de sodio saturado acuoso
(500 ml), cloruro de sodio saturado acuoso (500 ml) y agua (500
ml). Se seca la fase orgánica (MgSO_{4}), se filtra y se evapora
para dar progesterona p-toluenosulfonada (18) (98
g, 92%) como un aceite amarillo oscuro viscoso.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 7,7 (2H, d, J = 14 Hz,
H-2,6); 7,34 (2H, d, J = 8,4 Hz,
H-3,5); 5,67 (1H, s, H-4);
4,86-4,93 (1H, m, H-15);
3,45-3,50 (1H, dd, J = 4,6 Hz,
H-12); 2,44 (3H, s, H-4Me); 2,15
(3H, s, H-21) 1,13 (3H, s, H-19);
0,74 (3H, s, H-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Se somete a reflujo una disolución de la
progesterona tosilada (18) (98 g, 0,19 mol) en
2,4,6-trimetilcolidina (500 ml) a 150ºC durante 3
h. Se enfría la mezcla de reacción y se vierte en agua (500 ml). Se
extrae la fase acuosa con acetato de etilo (1 l), tras lo cual se
lava la fase orgánica con ácido clorhídrico (6 M, 3 X 1 l),
bicarbonato de sodio saturado acuoso (500 ml), cloruro de sodio
saturado acuoso (500 ml) y agua (500 ml). Tras secar (MgSO_{4}) y
filtrar, se evapora el acetato de etilo y se purifica la mezcla
bruta mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con
acetona:cloroformo (1:10) para proporcionar
\Delta^{14}-progesterona (19) (50 g, 78%) como
un aceite rojo oscuro.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,73 (1H, s,
H-4), 5,28 (1H, dd, J = 2,2 Hz,
H-15), 4,41 (1H, s.a., OH),
3,49-3,52 (1H, dd, J = 4,3 Hz,
H-12), 2,80-2,84 (1H, dd, J = 9,2
Hz, H-17), 2,14 (3H, s, H-21), 1,19
(3H, s, H-19), 0,89 (3H, s,
H-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Se somete a reflujo una disolución de
\Delta^{14}-progesterona (19) (50 g, 0,15 mol)
en cloruro de acetilo (1,5 l) y anhídrido acético (750 ml) durante
2 horas. Se vierte la mezcla de reacción en acetato de etilo frío
(1 l) y se añade bicarbonato de sodio saturado acuoso con agitación
hasta que cesa la efervescencia. Se separa la fase de acetato de
etilo de la fase de bicarbonato de sodio y se lava con porciones
adicionales de bicarbonato de sodio acuoso (3 X 700 ml), después
con cloruro de sodio saturado acuoso (700 ml) y finalmente con agua
(700 ml). Se seca la fase orgánica (MgSO_{4}), se filtra y se
evapora para proporcionar la
3,12\beta-diacetoxipregna-3,5,14-trien-20-ona
(20) (60 g, 93%) como un aceite
naranja.
naranja.
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,68 (1H, s,
H-4), 5,44 (1H, m, H-6), 5,31 (1H,
dd, J = 2,2 Hz, H-15), 4,82-4,86
(1H, dd, J = 4,5 Hz, H- 12), 3,10-3,18 (1H, t, J =
9,5 Hz, H-17), 2,18 (3H, s, 3-Ac),
2,11 (3H, s, 12-Ac), 2,08 (3H, s,
H-21), 1,02 (3H, s, H-19), 1,01 (3H,
s, H-18)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Se disuelve el compuesto de diacetoxilo (20) (60
g, 0,14 mol) en benceno (1 l) y se añaden etilenglicol (60 ml) y
ácido p-toluenosulfónico (1 g). (Se somete a reflujo
previamente el benceno con una trampa de
Dean-Stark). Se somete a reflujo la mezcla con
agitación y eliminación azeotrópica del agua durante 16 horas. Se
añade disolución saturada de bicarbonato de sodio acuosa (500 ml) a
la disolución enfriada. Entonces se lava esto con salmuera (500 ml)
y con agua (500 ml) y se seca (MgSO_{4}). Se evapora el disolvente
y se purifica la mezcla bruta mediante cromatografía en columna de
gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo:hexano (2:8) para dar
el etilendioxipregna-3,5,14-trieno
(21) (35 g, 53%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,68 (1H, s,
H-4), 5,45 (1H, m, H-6), 5,31 (1H,
dd, J = 2,2 Hz, H-15), 4,73-4,85
(1H, dd, J = 4,4 Hz, H-12),
3,78-3,98 (4H, m, etilendioxilo), 2,16 (3H, s,
3-Ac), 2,04 (3H, s, 12-Ac), 1,29
(3H, s, H-21), 1,12 (3H, s, H-19),
1,02 (3H, s, H-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
Se suspende el dienol-acetato
(21) (35 g, 0,077 mol) en etanol (500 ml) y se añade borohidruro de
sodio (2,8 g, 0,074 mol) a 0ºC. Se deja calentar la mezcla hasta
temperatura ambiente y se agita durante la noche. Se elimina la
mayoría del disolvente a vacío y la mezcla se diluye con agua (500
ml) y se extrae con acetato de etilo (500 ml). El tratamiento
seguido por cromatografía en gel de sílice con acetona/cloroformo
(1:10) da el 3\beta-alcohol (22) (25 g, 80%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,41 (1H, m,
H-6), 5,28 (1H, dd, J = 2,2 z,
H-15), 4,72-4,81 (1H, dd, J = 4,4 z,
H-12), 3,82-4,02 (4H, m,
etilendioxilo 3,45-3,59 (1H, m,
H-3), 2,03 (3H, s, 12-Ac), 1,28 (3H,
s, H-21), 1,10 (3H, s, H-19), 1,01
(3H, s, H-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
10
Se añade gota a gota el
3\beta-alcohol (22) (25 g, 60,2 mmol) en
tetrahidrofurano seco (300 ml) a una suspensión de hidruro de
aluminio y litio (2,7 g, 72,2 mmol) en tetrahidrofurano seco (500
ml). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante
24 horas tras lo cual se añade cuidadosamente agua (2,7 ml) y se
agita durante 10 min adicionales. Entonces se añade hidróxido de
sodio (disolución al 15%, 2,7 ml) y se agita la suspensión. Tras 10
min, se añade agua (8,1 ml) y se agita la suspensión durante 10
minutos, se filtra, se seca (MgSO_{4}) y se evapora el disolvente
para proporcionar el
3\beta,12\beta-dihidroxipregna-dieno
(23) (20 g, 90%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,36 (1H, m,
H-6), 5,23 (1H, dd, J = 2,2 Hz,
H-15), 3,94-4,06 (4H, m,
etilendioxilo), 3,41-3,52 (1H, m,
H-3), 3,32-3,36 (1H, dd, J = 4,3 Hz,
H-12), 1,31 (3H, s, H) 1,01 (3H, s,
H-19), 0,96 (3H, s, H-18).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): 152,4
(c-14), 140,2 (c-5), 121,1
(c-15) 119,7 (c-6), 111,1
(C-20), 79,8 (C-12), 71,6
(C-3), 63,7 y 63,6 (etilendioxilo), 58,8
(C-17), 19,0 (C-19), 11,9
(C-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Se añade N-bromoacetamida (211
mg, 1,5 mmol) a una disolución con agitación del
5,14-dieno (23) (500 mg, 1,34 mmol) en acetona (100
ml), ácido acético (2,5 ml) y agua (5 ml) a 0ºC. Tras 15 min se
añade sulfito de sodio (disolución al 5%, 50 ml) a la mezcla de
reacción. Se evapora la acetona y se extrae la fase acuosa con
diclorometano (3 X 50 ml). Se seca la fase orgánica (MgSO_{4}),
se filtra y se evapora. Se añade piridina (1 ml) al producto y se
agita durante 0,5 h. Entonces se añade diclorometano (100 ml) a la
mezcla de reacción y se lava el diclorometano con ácido cítrico
(disolución al 5%, 3 X 100 ml), bicarbonato de sodio saturado (50
ml) y agua (50 ml). Se seca la fase orgánica (MgSO_{4}), se
filtra y se evapora para dar la mezcla de 14,15- y
5,6-epóxidos (360 mg, 69%) como una espuma blanca.
No pudo separarse la mezcla de epóxidos mediante cromatografía en
columna de gel de sílice.
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Ejemplo
11
Se añade la mezcla de 14,15- y
5,6-epóxidos (14,4 g, 37,0 mmol) en tetrahidrofurano
seco (200 ml) a una suspensión de hidruro de aluminio y litio (1,69
g, 44,4 mmol) en tetrahidrofurano seco (300 ml). Se agita la mezcla
de reacción a temperatura ambiente durante 24 horas, tras lo cual
se trata como se ha descrito anteriormente mediante la adición de
agua (1,69 ml) e hidróxido de sodio (disolución al 15%, 1,69 ml).
Tras la filtración y evaporación del disolvente, se purifica el
producto bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice
usando metanol/cloroformo (1:9) como disolvente para dar el
14,15-epoxi-20,20-etilendioxipregn-5-eno
(24) que no reaccionó
(300 mg, 2,1%).
(300 mg, 2,1%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,31 (1H, m,
H-6), 3,82-3,98 (4H, m,
etilendioxilo), 3,43-3,52 (1H, m,
H-3), 3,41 (1H, s, H-15),
3,31-3,35 (1H, dd, J=4,3 Hz, H-12),
1,29 (3H, s, H-21), 1,17 (3H, s,
H-19), 1,02 (3H, s, H-18).
^{13}C RMN (CDCl_{3}): 139,8
(C-5), 120,8 (C-6), 112,1
(C-20), 77,2 (C-12), 75,4
(C-14), 61,0 (C-15), 22,3
(C-21), 19,2 (C-19), 9,5
(C-18).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
12
Se añade el 14,15-epóxido (24)
(300 mg, 0,77 mmol) en tetrahidrofurano seco (10 ml) a una
suspensión de hidruro de aluminio y litio (300 mg, 7,89 mmol) en
tetrahidrofurano y se somete a reflujo la reacción durante 48 h.
Tras la adición de agua (0,3 ml), hidróxido de sodio (disolución al
15%, 0,3 ml) y filtración como se ha descrito anteriormente, se
purifica la mezcla mediante cromatografía en columna de gel de
sílice usando metanol: cloroformo (1:9) como disolvente para dar el
trihidroxipregneno (25) (250 mg, 83%).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,38 (1H, m,
H-6), 3,98 (4H, m, etilendioxilo),
3,43-3,53 (1H, m, H-3),
3,25-3,32 (1H, dd, J = 4,1 Hz,
H-12), 1,32 (3H, s, H-21), 1,01 (3H,
s, H-19), 0,98 (3H, s, H-18)
^{13}C RMN CDCl_{3}): 139,1
(C-5), 122,1 (C-6), 112,2
(C-20), 85,1 (C-14), 75,1
(C-12), 71,6 (C-3), 23,4
(C-21), 19,4 (C-19), 8,9
(C-18)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
13
Se disuelve el etilendioxipregneno (25) (250 mg,
0,64 mmol) en ácido acético (13,4 ml) y agua que tras el secado por
pulverización proporciona el trihidroxiesteroide (15) (200 mg, 89%),
p.f.: 228º-235ºC (bibl. 225º-235ºC), M+ 348,
[\alpha_{D}]^{20} + 35º (bibl.
[\alpha_{D}]^{20} + 29º).
^{1}H RMN (CDCl_{3}): 5,39 (1H, m,
H-6), 3,56-3,62 (1H, t, J = 8,1 Hz,
H-17), 3,42-3,51 (1H, m,
H-3), 3,28-3,39 (1H, dd, J = 4,3
Hz, H-12), 2,23 (3H, s, H-21), 1,01
(3H, s, H-19), 0,90 (3H, s,
H-18)
^{13}C RMN (CDCl_{3}): 217,7
(C-20), 138,9 (C-5), 122,2
(C-6), 85,5 (C-14), 73,6
(C-12), 71,6 (C-3),57,0
(C-17), 55,1 (C-13), 43,6
(C-9), 42,1 (C-4), 37,3
(C-1), 36,8 (C-10), 35,9
(C-8), 34,5 (C-15), 32,9
(C-21), 31,5 (C-16), 30,1
(C-2), 27,4 (C-7), 24,4
(C-11), 19,4 (C-19), 8,3
(C-18).
Los ejemplos 14 a 19 ilustran los procedimientos
sintéticos por medio de los cuales pueden prepararse los compuestos
intermedios y el esteroide (15) de acuerdo con "el segundo
procedimiento alternativo".
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
14
Acetato de
20,20-etilendioxi-3\beta-tolueno-p-sulfoniloxi-pregn-5,14-dien-12\beta-ol
(26) - Se añadió gota a gota una disolución de cloruro de
p-toluenosulfonilo (650 mg, 3,4 mmol) en piridina
(10 ml) a una mezcla del 12-acetato de
20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno-3\beta,12\beta-diol
(22) (1,3 g, 3,1 mmol) en piridina (15 ml) a 0ºC. Se dejó agitar la
mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 24 horas tras lo
cual se añadió agua a la mezcla de reacción. Se extrajo la
disolución con acetato de etilo (2x50 ml), se lavó la fase de
acetato de etilo con ácido cítrico (5x50 ml), disolución saturada de
bicarbonato de sodio (100 ml), disolución saturada de cloruro de
sodio (100 ml) y agua (100 ml). Se secó el acetato de etilo
(MgSO_{4}), se filtró, y se evaporó y se purificó por
cromatografía en columna ultrarrápida usando
hexano-acetato de etilo (8:2 v/v) como eluyente
dando el \beta-O-tosilesteroide
(26), (1,5 g, 84%), como un aceite amarillo, (hallado M
570,271, C_{32}H_{42}O_{7}S requiere: M 570,273).
\delta_{H} 1,021 (3H, s,
19-H), 1,131 (3H, s, 18-H), 1,282
(3H, s, 21-H), 2,021 (CH_{3} de acetato), 2,431
(3H, s, CH_{3} Ar), 3,883 (4H, m, OCH_{2}CH_{2}O), 4,750 (1H,
dd, ^{3} J 10,8 Hz, 5,2 Hz, 12-H), 4,890
(1H, m, 30H), 5,281 (1H, dd, ^{3} J 4,2 Hz, 2,1 Hz,
15-H), 5,388 (1H, m, 6-H), 7,341
(2H, d, ^{3} J 8,2 Hz, ArH), 7,746 (2H, d, ^{3} J
8,2 Hz, ArH).
\delta_{C} 13,493Q (C-18),
19,002Q (C-19), 21,612Q (metilo Ar)*, 21,671Q
(C-21)*, 24,175Q (metilo de acetato), 63,401T
(etilendioxilo), 63,498T (etilendioxilo), 71,531S
(C-13), 80,912D (C-12), 82,531D
(C-3), 111,363S (C-20), 120,881D
(C-15), 121,461D (C-6),
123,715-133,917 (aromático), 139,903S
(C-14), 151,722S (C-5), 170,819S
(carbonilo de éster). * pueden intercambiarse
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
15
12-Acetato de
20,20-Etilendioxi-3\alpha,5-ciclo-5\alpha-pregn-14-eno-6\beta,12\beta-diol
(27) - Se sometió a reflujo una disolución de
3\beta-tolueno-p-sulfoniloxi-pregn-5,14-dieno
(26) (1,2 g, 2,1 mmol) y acetato de potasio (2,2 g, 22,4 mmol) en
agua (250 ml) y acetona (500 ml) a 60ºC durante 16 horas. Se
evaporó la acetona y se extrajo el agua con acetato de etilo (200
ml). Se secó (MgSO_{4}) el acetato de etilo, se filtró y se
evaporó. La separación cromatográfica ultrarrápida de la mezcla
usando cloroformo-acetona (9:1 v/v) como eluyente
dio el 3\alpha,5-cicloderivado (27), (530 mg, 61%)
como un aceite amarillo, (Hallado M 416,262,
C_{25}H_{36}O_{5} requiere: M 416,263).
\delta_{H} 0,288 (1H, dd, ^{3} J
8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-H_{a}), 0,477 (1H, dd, ^{3}
J 4,4 Hz, 4,4 Hz, 4-H_{b}), 1,025 (3H, s,
19-H), 1,121 (3H, s, 18-H), 1,256
(3H, s, 21-H), 1,989 (3H, s, CH_{3} de acetato),
3,302 (1H, dd, ^{3} J 2,8 Hz 2,8 Hz, 6-H),
3,784-3,947 (4H, m, OCH_{2}CH_{2}O), 4,721 (1H,
dd, ^{3} J 8,5 Hz, 5,6 Hz, 12-H), 5,232
(1H, dd, ^{3} J 3,9 Hz, 1,9 Hz, 15-H).
\delta_{C} 11,678T (C-4),
12,298Q (C-18), 19,971Q (C-19),
23,623Q (C-21), 24,153Q (metilo de acetato),
63,700T (etilendioxilo), 63,788T (etilendioxilo), 73,591D
(C-6), 80,551D (C-12), 111,126S
(C-20), 118,778D (C-15), 152,959S
(C-14), 170,991S (carbonilo de éster).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
16
20,20-Etilendioxi-3\alpha,5-ciclo-5\alpha-pregn-14-eno-6\beta,12\beta-diol
(28) - Se añadió gota a gota una disolución del
3\alpha,5-cicloderivado (27), (500 mg, 1,2 mmol)
en tetrahidrofurano (20 ml) a una suspensión de hidruro de aluminio
y litio (50 mg, 1,3 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml). Se agitó la
mezcla de reacción durante 4 horas y se extinguió mediante la
adición de agua (50 \mul). Tras 30 minutos, se añadió hidróxido
de sodio (disolución al 15%, 50 \mul) y la agitación continuó
durante 30 minutos adicionales. Se añadió agua (150 \mul y se
filtró la mezcla de reacción. Se secó (MgSO_{4}) el
tetrahidrofurano, se filtró y se evaporó y la purificación
cromatográfica ultrarrápida usando
cloroformo-acetona (8:2 v/v) como eluyente dio el
diol (28), (370 mg, 83%) como un aceite, (Hallado M 374,250,
C_{23}H_{34}O_{4} requiere: M 374,252)
\delta_{H} 0,298 (1H, dd, ^{3} J
8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-H_{2}), 0,510 (1H, dd, ^{3}
J 4,4 Hz, 4,4 Hz,4-Hb), 0,985 (3H, s,
19-H), 1,055 (3H, s, 18-H), 1,325
(3H, s, 21-H), 3,318 (1H, dd, ^{3} J 3,0
Hz, 3,0 Hz, 6-H),), 3,363 (1H, dd, ^{3} J
11,4 Hz, 4,2 Hz, 12-H), 4,019 (4H, m,
OCH_{2}CH_{2}O) 4,622 (1H, s, OH), 5,255 (1H, dd, ^{3}
J 3,9 Hz, 1,9 Hz, 15-H).
\delta_{C}
11,681T(C-4),
12,243Q(C-18), 19,844Q
(C-19), 23,604Q(C-21),
63,620T (etilendioxilo), 63,733T (etilendioxilo), 73,569D
(C-6), 77,478D (C-12), 111,125S
(C-20), 118,702D (C-15), 152,912S
(C-14).
\newpage
Ejemplo
17
20,20-Etilendioxi-14,25\beta-epoxi-3\alpha,5-ciclo-5\alpha,14\beta-pregnano-6\beta,12\beta-diol
(29) - Se añadió N-bromoacetamida (150 mg, 1,1
mmol) a una disolución del
20,20-etilendioxi-3\alpha,5-ciclo-5\alpha-pregn-14-eno-6\beta,12\beta-diol
(28) (340 mg, 0,91 mmol) en acetona (20 ml), agua (0,25 ml) y ácido
acético (0,25 ml) a 0ºC. Tras 15 min, se añadió sulfito de sodio
(disolución al 5%, 20 ml) a la mezcla de reacción. Se evaporó la
acetona a presión reducida y se extrajo la disolución restante con
diclorometano (3x30 ml). Se secó (MgSO_{4}) la fase de
diclorometano, se filtró y se evaporó hasta un volumen concentrado
(50 ml). Se añadió piridina (0,5 ml) a la mezcla y se agitó durante
1 hora adicional tras lo cual se lavó la fase de diclorometano con
una disolución de ácido cítrico (5%, 3x30 ml), disolución saturada
de bicarbonato de sodio (30 ml) y agua (30 ml). Se secó
(MgSO_{4}) la fase de diclorometano, se filtró y se evaporó y se
purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida usando
cloroformo-metanol (9,5:0,5 v/v) como eluyente para
dar el epóxido (29) (180 mg, 51% como una espuma, (Hallado M
390,245, C_{23}H_{34}O_{2} requiere: M 390,247).
\delta_{H} 0,287 (1H, dd, ^{3} J
8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-H_{a}), 0,501 (1H, dd, ^{3}
J 4,4 Hz, 4,4 Hz,4-H_{b}), 0,978 (3H, s,
19-H), 1,048 (3H, s, 18-H), 1,321
(3H, s, 21-H), 3,318 (1H, dd, ^{3} J 3,1
Hz, 3,1 Hz, 6-H), 3,355 (1H, dd, ^{3} J
11,2 Hz, 4,1 Hz, 12-H), 3,491 (1H, s,
15-H), 4,001 (4H, m, OCH_{2}CH_{2}O), 4,901
(1H, s, OH).
\delta_{C}
11,668T(C-4),
11,973Q(C-18), 19,515Q
(C-19), 23,519Q(C-21),
59,910D (C-15), 63,601T (etilendioxilo), 63,713T
(etilendioxilo), 72,501S (C-14), 73,571D
(C-6), 77,471D (C-12),
111,085S (C-20).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
18
20,20-Etilendioxi-6\beta,12\beta,14-trihidroxi-3\alpha,5-ciclo-5\alpha,14\beta-pregnano
(30) - Se añadió una disolución del epóxido (29) (170 mg, 0,44
mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) a una suspensión de hidruro de
aluminio y litio (20 mg, 0,53 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml). Se
sometió a reflujo la mezcla de reacción durante 2 horas tras lo
cual se añadió agua (20 \mul) y la agitación continuó durante 05
horas. Se añadió disolución de hidróxido de sodio (15%, 20 \mul)
y la agitación continuó durante 0,5 horas adicionales. Se añadió
una cantidad adicional de agua (60 \mul) y se agitó la suspensión
durante 1 hora. Tras la filtración, se secó (MgSO_{4}) la
suspensión, se filtró y se evaporó el tetrahidrofurano. La
separación cromatográfica ultrarrápida de la mezcla resultante
eluyendo con cloroformo-metanol (9:1 v/v) dio el
triol requerido (30), (90 mg, 53%) como un aceite transparente,
(Hallado M 392,261, C_{23}H_{38}O_{5} requiere:
M 392,263).
\delta_{H} 0,287 (1H, dd, ^{3} J
8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-H_{2}), 0,510 (1H, dd, ^{3}
J 4,4 Hz, 4,4 Hz,4-H_{b}), 0,971 (3H, s,
19-H), 1,042 (3H, s, 18-H), 1,319
(3H, s, 21-H), 3,321 (1H, dd, ^{3} J 3,0
Hz, 3,0 Hz, 6-H), 3,321 (1H, dd, ^{3} J
11,1 Hz, 3,9 Hz, 12-H), 3,561 (1H, s, OH), 4,084
(4h, m, OCH_{2}CH_{2}O) 4,671 (1H, s, OH).
\delta_{C}
11,668T(C-4),
11,971Q(C-18), 19,511Q
(C-19), 23,520Q (C-21), 63,612T
(etilendioxilo), 63,711T (etilendioxilo), 73,483D
(C-6), 76,051D (C-12), 84,307S
(C-14), 111,0995 (C-20).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
19
3\beta,12\beta,14-Trihidroxi-14\beta-pregn-5-en-20-ona
(15) - Se sometió a reflujo una mezcla del triol (30) (80 mg, 0,20
mmol) en acetona (20 ml) y ácido clorhídrico (1 M, 10 ml) a 60ºC
durante 2 horas. Se enfrió la mezcla de reacción y se añadió
disolución saturada de bicarbonato de sodio (20 ml). Se evaporó la
acetona y se extrajo la fase acuosa con cloroformo (3 x 20 ml), se
secó (MgSO_{4}) la fase de cloroformo, se filtró y se evaporó
dando los trihidroxiesteroides epiméricos (15a, 15b) (42 mg, 61%).
Se logró la separación de la mezcla epimérica (15a, 15b) (15 mg)
mediante separación cromatográfica ultrarrápida usando
cloroformo:metanol (9:1 v/v) como eluyente dando el epímero
17\beta puro (15a), (10 mg), p.f. 224-229ºC
(acetona), (bibl.. 226-223º), (Hallado M
348,234, C; 72,32, H 9,21% C_{21}H_{32}O_{4} requiere: C,
72,38; H 9,26%, M 348,236) y el epímero 17\alpha (15B) (3
mg), p.f. 183-191ºC (acetona), (bibl.
184-196º).
3\beta,12\beta,14-Trihidroxi-14\beta-pregn-5-en-20-ona
(15a): \delta_{H} 0,963 (1H, s, 19-H), 1,192
(3H, s, 18-H), 2,236 (3H, s 21- H), 3,325 (1H, dd,
^{3} J 11,2 Hz, 3,9 Hz, 12-H), 3,464 (1H,
s, OH), 3,5140 (1H, m, 3-H), 3,598 (1H, dd, ^{3}
J 9,6 Hz, 9,6 Hz, 17-H), 4,255 (1H, s, OH),
5,383 (1H, m, 5-H).
\delta_{C} 8,275Q (C-18),
19,414Q (C-19), 24,400T (C-11)
24,581T (C-16), 27,443T (C-7),
30,062T (C-2), 32,972Q (C-21),
34,543T (C-15), 35,864D (C-8),
36,975S (C-10), 37,337T (C-1),
42,144T (C-4), 43,565D (C-9),
55,101S (C-13), 57,038D (C-17),
71,597D (C-3), 73,558D (C-12),
85,566S (C-14), 122,223D (C-6),
138,9325 (C-5), 217,011S
(C-20).
3\beta,12\beta,14-Trihidroxi-14\beta-pregn-5-en-20-ona
(15b): \delta_{H} 0,996 (1H, s, 19-H), 1,144
(3H, s, 18-H), 2,221 (3H, s 21-H),
3,339 (1H, dd, ^{3} J 9,4 Hz, 9,4 Hz,
17-H), 3,492 (1H, m, 3-H), 3,629
(1H, dd, ^{3} J 11,1 Hz, 3,9 Hz, 12-H),
3,712 (1H, s, OH), 4,325 (1H, s, OH), 5,383 (1H, m,
5-H).
Los ejemplos 20 a 28 ilustran los procedimientos
por medio de los cuales pueden prepararse los compuestos
intermedios para formar el primer monosacárido (40).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
20
Se agita una mezcla de
metil-\alpha-D-glucopiranósido
(30 g, 0,15 mol), benzaldehído (70 ml) y cloruro de zinc (20 g) a
temperatura ambiente durante 24 horas. Se vierte el producto de
reacción en agua helada y la agitación continuó durante 15 min. Se
filtra el precipitado blanco y se lava con dietil éter. Se agita el
material sólido con una disolución de metabisulfito de sodio
(disolución al 10%), durante 15 min, se filtra y se lava con agua.
Se cristaliza el material sólido en cloroformo y éter para dar el
producto de bencilideno (32) (31 g, 72%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
21
Se añade gota a gota cloruro de
p-toluenosulfonilo (25 g, 1,2 eq) en piridina (100
ml) a una disolución de la bencilideno-glucosa (32)
(31 g, 0,12 mol) en piridina (100 ml) a 0ºC. Se agita la reacción a
temperatura ambiente durante 48 horas. Se añade hielo a la mezcla
de reacción. Se lava el material sólido blanco resultante con agua
y se recristaliza en etanol caliente para dar la glucosa tosilada
(33) (28 g, 60%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
22
Se calienta el tosilato (33) (28 g, 64 mmol) en
una disolución de sodio (7 g) en metanol (150 ml) a 110ºC durante
48 horas en un autoclave. Se enfría el vaso de reacción y se añade
dióxido de carbono sólido a la mezcla de reacción. Tras la
filtración, se evapora el metanol y entonces se lleva el material
sólido a agua. Se extrae la fase acuosa con cloroformo (X 3). Se
seca (MgSO_{4}) el cloroformo, se filtra y se evapora. Se
purifica la mezcla bruta mediante cromatografía en columna de gel de
sílice eluyendo con cloroformo:acetona (9:1) para dar el altrósido
(34) (10 g, 52%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
23
Se añade el
bencilideno-altrósido (34) (10 g, 33 mmol) a una
disolución de N-bromosuccinimida (7,6 g) y carbonato
de bario (20 g) en tetracloruro de carbono y se somete a reflujo la
mezcla de reacción a 75ºC durante 3 horas. Se filtra la mezcla de
reacción y se lava la fase de tetracloruro carbono con agua. Se seca
(MgSO_{4}) la fase orgánica, se filtra y se evapora para dar
6-bromo-altrósido (35), (9 g,
69%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
24
Se añade gota a gota borohidruro de sodio (18 g)
en agua (30 ml) a una disolución del bromoaltrósido (35) (9 g, 23
mmol) y cloruro de níquel (18 g) en etanol (300 ml) a 0ºC. Se somete
a reflujo la mezcla de reacción a 75ºC durante 1 hora y después se
filtra. Se evapora el etanol y se extrae la fase acuosa restante con
cloroformo (X 3). Se seca (MgSO_{4}) el cloroformo, se filtra y
se evapora, para dar el
6-desoxi-altrósido (36) (5 g,
72%)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
25
Se añaden feniltiotrimetilsilano (5 ml) y
sulfonato de trimetilsililtrifluorometano (2 ml) a 0ºC a una
disolución del 6-desoxi-altrósido
(36) (5 g, 17 mmol) en diclorometano (200 ml). Se agita la mezcla de
reacción a temperatura ambiente durante 6 horas. Se añade
bicarbonato de sodio saturado a la mezcla de reacción. Se seca
(MgSO_{4}) la fase de diclorometano, se filtra y se evapora. Se
purifica la mezcla bruta mediante cromatografía en columna de gel
de sílice eluyendo con cloroformo:acetona (9:1) para dar el
\alpha\beta-feniltioaltrósido (37) (4 g,
63%).
\newpage
Ejemplo
26
Se añade trifluoruro de dietilaminoazufre (0,65
g) rápidamente a una disolución del
\alpha\beta-feniltioaltrósido (37) (0,5 g, 1,33
mmol) en diclorometano a 0ºC. Se agita la reacción durante 0,5 h a
0ºC y después se añade bicarbonato de sodio saturado. Se separa el
diclorometano de la fase acuosa, se seca (MgSO_{4}), se filtra y
se evapora para dar la
\alpha\beta-fluorocimarosa (38) (450 mg,
90%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
27
Se silila el 6-desoxialtrósido
(37) (5 g) usando cloruro t-butildimetilsililo (3 g)
e imidazol (3 g) en piridina (50 ml). Se trata la reacción
extrayendo con acetato de etilo, lavando el acetato de etilo con
ácido clorhídrico (6 N), después con bicarbonato de sodio y
finalmente con agua. Se seca (MgSO_{4}) la fase de acetato de
etilo, se filtra y se evapora para dar el benzoilfeniltioaltrósido
sililado (39) (80%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
28
Se trata el benzoilfeniltioaltrósido sililado
(39) (6 g) con metóxido de sodio (100 ml) durante 4 horas. Se
evapora el metanol y se añade agua a la reacción. Se acidifica la
fase acuosa (pH 5, ACOH) y se extrae con acetato de etilo. Se lava
el acetato de etilo con agua, se seca (MgSO_{4}), se filtra y se
evapora para dar metilfeniltioaltrósido sililado (40) (75%).
Los Ejemplos 29 a 37 ilustran los procedimientos
sintéticos por medio de los cuales pueden prepararse los compuestos
intermedios para formar el segundo monosacárido (50).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
29
Se añade gota a gota ácido sulfúrico (40 ml) a
una disolución de \alpha-D-glucosa
(41) (50 g, 0,28 mol) en acetona (1 l) a 0ºC. Se agita la mezcla de
reacción durante 24 h y después se neutraliza usando hidróxido de
sodio (6 M). Se evapora la acetona y se extrae la fase acuosa con
cloroformo (X2). Se seca (MgSO_{4}) el cloroformo, se filtra y se
evapora. La cristalización en ciclohexano dio la
di-isopropilideno-glucosa (42) (41
g, 57%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
30
Se añade gota a gota la
\alpha-D-glucofuranosa (42) (41 g,
0,16 mol) en tetrahidrofurano (300 ml) a una suspensión de hidruro
de sodio (5 g) en tetrahidrofurano (200 ml). Tras 0,5 h, se añade
gota a gota yoduro de metilo (25 g) en tetrahidrofurano (100 ml) a
la mezcla de reacción que entonces se agita durante 24 h. Se añade
agua a la mezcla de reacción que entonces se extrae con éter (X 3).
Se seca (MgSO_{4}) la fase de éter, se filtra y se evapora para
dar el glucosa metil-protegida (43) (38 g, 83%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
31
Se disuelve el compuesto de
metil-diisopropilideno (43) (38 g, 0,14 mol) en
ácido acético (50%, 700 ml) y se somete a reflujo la disolución
durante 18 h. Tras enfriar se evapora el ácido acético. Se purifica
el producto bruto mediante cromatografía en columna eluyendo con
cloroformo:metanol:acetona:agua (70:27:2:1) para dar
3-O-metil-\alpha\beta-glucopiranósido
(44) (13 g, 50%).
\newpage
Ejemplo
32
Se disuelve el
3-O-metil-\alpha\beta-glucopiranósido
(44) (10 g) en metanol (50 ml) y HCl (conc.) (1 ml) y se somete a
reflujo durante la noche. Se añade NaHCO_{3} sólido y se filtra la
reacción. Se evapora el metanol para dar
1,3-di-O-metil-\alpha\beta-D-glucopiranósido
(45), (95%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
33
Se agita el glucopiranósido (45) (8 g) a
temperatura ambiente en una disolución de benzaldehído (20 ml) y
cloruro de zinc (5 g). Tras 24 horas, se añade hielo y se extrae la
fase acuosa con cloroformo. Se seca (MgSO_{4}) la fase de
cloroformo, se filtra y se evapora. Se elimina el benzaldehído
mediante destilación a vacío y se purifica el producto mediante
cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con
acetona:cloroformo (0,5:9,5), para dar
bencilideno-\alpha\beta-glucopiranósido
(46) (60%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
34
Se somete a reflujo el compuesto de bencilideno
(46) (5 g) a 80ºC en una mezcla de
N-bromosuccinimida (3,7 g) y carbonato de bario (4
g) en tetracloruro de carbono. Tras 4 horas, se filtra la reacción y
se lava el tetracloruro de carbono con agua, se seca (MgSO_{4}),
se filtra y se evapora para dar el compuesto de bromo (70%).
Se disuelve el compuesto de bromo (4,3 g) en una
disolución de etanol (300 ml) y cloruro níquel (8,6 g) a 0ºC. A
esta disolución, se le añade gota a gota borohidruro de sodio (8,6
g) en agua (50 ml) a lo largo de un periodo de 15 minutos. Se
somete a reflujo la mezcla de reacción a 100ºC durante 45 minutos,
se enfría, se filtra y se evapora. Se añade cloroformo y se lava la
fase de cloroformo con agua, se seca (MgSO_{4}), se filtra y se
evapora para dar el 6-desoxi-azúcar
(47) (70%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
35
Se disuelve el
6-desoxiglucopiranósido (47) (3 g) en diclorometano
(50 ml). A esta disolución, se le añaden feniltiotrimetilsilano (2
g) y sulfonato de trimetilsililtrifluorometano (0,2 ml). Se agita la
disolución a temperatura ambiente durante la noche, tras lo cual se
añade bicarbonato de sodio saturado. Se seca (MgSO_{4}) la fase
de diclorometano, se filtra y se evapora. Se purifica el producto
mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con
acetato de etilo:hexano (2:8), para dar el compuesto (48) (60%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
36
A una disolución del glucopiranósido (48) (2 g)
en piridina (20 ml), se le añade cloruro de pivaloílo (2 ml). Se
agita la disolución a temperatura ambiente durante la noche tras lo
cual se añade agua. Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo y
se lava la fase orgánica con HCl (6 N). Se seca (MgSO_{4}) la fase
orgánica, se filtra y se evapora para dar el éster de pivaloílo
(49) (80%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
37
Se añaden N-bromosuccinimida
(1,2 g) y trifluoruro de dietilaminoazufre (1,2 g) a una disolución
del éster de pivaloílo (49) (2 g) en diclorometano (100 ml) a 0ºC.
Tras 1 hora, se añade bicarbonato de sodio saturado. Se seca
(MgSO_{4}) la fase de diclorometano, se filtra y se evapora. Se
purifica el \beta-fluoropiranósido (50) mediante
cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetato de
etilo:hexano (2:8), (rendimiento del 45%).
El ejemplo 38 ilustra el procedimiento sintético
por medio del cual puede prepararse el compuesto
3-O-[4-O-benzoil-2-feniltio-\beta-D-cimaropiranosil]-12,14\beta-dihidroxi-pregnan-5-en-20-ona
(51).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
38
Se añade cloruro de estaño (190 mg, 1 mmol) a
una disolución de
3,12,14\beta-trihidroxipregnan-5-en-20-ona
(15) (100 mg, 0,28 mmol) y el fluorocimaropiranósido (38) (210 mg,
0,56 mmol), en dietil éter seco y tamices moleculares de
4\ring{A} a -15ºC. Se mantiene la mezcla de reacción a -15ºC
durante 3 días. Se añade bicarbonato de sodio saturado a la mezcla
de reacción. Se seca (MgSO_{4}) la fase de éter, se filtra y se
evapora. Se purifica el producto mediante cromatografía en columna
de gel de sílice eluyendo con cloroformo:metanol (9, 5:0,5) para
dar el glicósido (51) (30 mg, 15%)
Los ejemplos 39 a 41 ilustran los procedimientos
sintéticos por medio de los cuales pueden acoplarse los restos de
cimarosa y tevetosa.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
39
Se agita una disolución de tevetosa (50 A) (1,5
g), cimarosa (40) (1,3 g) tamices moleculares de 4\ring{A} en
diclorometano a temperatura ambiente durante 1 hora. Se enfría la
mezcla de reacción hasta -15ºC y se añaden cloruro de estaño (II)
(0,8 g) y trifluorometanosulfonato de plata (1,1 g). Se agita la
mezcla a -15ºC durante 16 horas, tras lo cual se añade trietilamina
(0,5 ml). Se filtra el producto de reacción y se evapora el
diclorometano. Se purifica el disacárido (53) mediante
cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con acetato de
etilo:hexano (2:8), rendimiento del 15%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
40
A una disolución del disacárido (53) (200 mg) en
tetrahidrofurano (20 ml), se le añade fluoruro de tetrabutilamonio
(0,4 ml). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora,
tras lo cual se añade bicarbonato de sodio saturado. Se extrae la
mezcla de reacción con acetato de etilo y se seca (MgSO_{4}) la
fase de acetato de etilo, se filtra y se evapora. Se purifica el
disacárido (54) mediante cromatografía en columna de gel de sílice
(acetona:cloroformo, 0,5:9,5) rendimiento del 60%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
41
A una disolución del disacárido (54) (80 mg) en
diclorometano (10 ml), se le añade trifluoruro de dietilaminoazufre
(80 ml) a 0ºC. Tras agitar a 0ºC durante 0,5 horas, se añaden
bicarbonato de sodio saturado y más diclorometano. Se seca
(MgSO_{4}) el diclorometano, se filtra y se evapora. La
purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice
(acetato de etilo:hexano 1:9), da el disacárido (55) en un
rendimiento del 65%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
42
Los resultados de los siguientes tres bioensayos
sobre la suspensión del apetito se exponen a continuación viz.
a) Ensayo de Irwin;
b) Ensayo de Toxicidad Aguda; y
c) Ensayo Anoréctico de Dosis Oral.
El propósito de este ensayo fue evaluar el
agente supresor del apetito de la invención producido a partir de
un extracto de planta como se ha descrito anteriormente en este
documento, de acuerdo con el ensayo de Irwin reducido en animales
para la acción tranquilizante y sedante.
El agente supresor del apetito se extrajo del
material de planta por el solicitante por el procedimiento que se
ha descrito anteriormente en este documento y se administró a dos de
cuatro grupos de tres animales cada uno: un grupo no recibió
tratamiento, un grupo recibió el disolvente dimetilsulfóxido (DMSO),
un grupo recibió la muestra de ensayo a 50 mg/kg, y un grupo
recibió la muestra de ensayo a 300 mg/kg. El tratamiento tuvo lugar
por inyección intraperitoneal, y se hicieron observaciones a
intervalos específicos hasta cinco horas después del tratamiento.
En la interpretación de los resultados se usaron solamente los
síntomas diferentes a los observados en los animales tratados con
DMSO.
Quedó claro que el disolvente, DMSO, tenía un
efecto marcado sobre los animales, especialmente sobre el mecanismo
regulador del calor. Las temperaturas corporales de todos los
animales tratados con el disolvente, solo o junto con la muestra de
ensayo, mostraron una disminución marcada.
Los animales en el grupo de dosis baja mostraron
una dispersión disminuida en la jaula y una actividad locomotora
disminuida, como en todos los demás grupos, incluyendo el grupo de
control. Se observó apatía en el mismo grado que en el grupo
tratado con DMSO. La respiración disminuida se observó
15-60 minutos después del tratamiento. También se
observó ptosis (cierre de los párpados de los ojos) a un grado
superior que en el grupo de DMSO. Se observó una respuesta de la
pinna (oreja) así como una respuesta positiva a los dedos, indicando
timidez. La temperatura corporal bajó hasta 32,7ºC después del
tratamiento
Los animales en el grupo de dosis elevada
mostraron, como en los otros grupos, una dispersión inicial
disminuida en la jaula y actividad locomotora disminuida, pero
mostraron una dispersión y actividad locomotora aumentadas antes de
la muerte, que sucedía aproximadamente 1 hora después del
tratamiento. Hubo varias convulsiones simétricas clónicas 30
minutos después del tratamiento. La respiración disminuyó
inicialmente, pero aumentó antes de la muerte.
Se retardó la respuesta de la pinna (oreja) y se
observó una respuesta positiva a los dedos, indicando timidez, como
se observó en animales en el grupo de dosis baja. La temperatura
corporal bajó hasta 30,7ºC después del tratamiento. Se observó una
pasividad posicional aumentada así como un tono corporal disminuido.
Se observó una rotación anormal de las extremidades, la fuerza de
agarre disminuyó, no estuvo presente una respuesta al dolor y
sucedió una pérdida del reflejo de estiramiento.
Cuando se comparan con los animales de control y
tratados con DMSO, los animales que recibieron solamente la dosis
baja (50 mg/kg) mostraron una respiración disminuida y un grado
aumentado de ptosis. Los animales que recibieron la dosis elevada
(300 mg/kg) de la muestra de ensayo reaccionaron de forma muy
intensamente mostrando convulsiones y muerte. Todas las demás
observaciones hechas en estos animales pueden atribuirse a los
animales que tienen convulsiones y mueren. No se observaron signos
que sugieran acciones tranquilizantes y sedantes tales como una
marcada dispersión disminuida en las jaulas, actividad locomotora
disminuida y apatía que pudieran atribuirse a la muestra de ensayo
en los grupos de ensayo.
Por lo tanto puede concluirse que la muestra de
ensayo es letal para ratones a 300 mg/kg y tiene efectos supresores
de la respiración en ratones a 50 mg/kg, cuando se da forma de forma
intraperitoneal con DMSO como disolvente.
El propósito de este ensayo fue obtener
información sobre la toxicidad de la muestra de ensayo.
Se purificó un extracto de planta preparado de
acuerdo a como se ha descrito anteriormente en este documento, y
que tiene acción supresora del apetito y se ensayó una muestra de
ensayo a dosis crecientes por tratamiento oral en ratones. Se
usaron dos animales por grupo de dosis, excepto en el grupo de la
dosis más alta donde sólo se trató un animal. Los animales se
examinaron para la buena salud y se determinaron sus masas
corporales en el día de tratamiento.
Las dosis variaron de 100 mg/kg hasta 3.028,5
mg/kg. La dosis se calculó y se mezcló en almidón de patata
preparado, de modo que cada animal recibió una dosis total de 0,2
ml. El animal 13 recibió 0,25 ml. El almidón de patata se preparó
mezclando 20 g de almidón en un pequeño volumen de agua fría, y
añadiéndolo a agua hirviendo, para componer un volumen de 1 litro.
La suspensión se dejó enfriar a temperatura ambiente antes de
dosificarla.
Los animales en los grupos 1 y 2 se trataron en
el mismo día. Se observaron durante 24 horas y si no se
desarrollaban signos de toxicidad, se trataba el segundo grupo. Se
siguió el mismo enfoque hasta que se trataron todos los animales.
Este programa se siguió para asegurar que los animales no se
trataran innecesariamente cuando se hubiera alcanzado una dosis
tóxica aguda en el grupo previo.
Los animales se observaron para los signos
clínicos de toxicidad inmediatamente (1-2 horas)
después del tratamiento y diariamente después de ello. Se determinó
la masa corporal una vez a la semana y se midió la ingesta total de
alimento y agua de cada animal.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Los animales supervivientes se sacrificaron con
eutanasia por inyección intraperitoneal de pentobarbitona sódica
(disponible en el mercado con el nombre comercial Euthanaze,
Centaur^{R}) en el día 14 del experimento. Se realizó un examen
post-mortem de estos animales, así como del animal
que murió durante el experimento. Se recogieron muestras para
histopatología.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 1 (Grupo de
Control)
No se observaron signos clínicos de toxicidad
durante el periodo de observación de 14 días. La ingesta de
alimento y agua estuvo en los parámetros normales y los cambios en
la masa corporal también estuvieron en los parámetros normales. No
se registraron cambios histopatológicos en las muestras
hepáticas.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 2 (100
mg/kg)
No se observaron signos clínicos de toxicidad
durante el periodo de observación. La ingesta de alimento y agua
fue normal y los cambios en la masa corporal durante el periodo de
observación también fueron normales. No se observó patología
macroscópica ni se registraron cambios histopatológicos o
morfológicos en las muestras hepáticas.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 3 (200
mg/kg)
Los animales en este grupo no mostraron signos
clínicos de toxicidad durante el experimento. La ingesta de
alimento y agua fue normal, así como el cambio en la masa corporal.
No se observó patología macroscópica, pero los hígados mostraron
cambios histopatológicos en el examen. La hinchazón de aspecto opaco
de los hepatocitos fue leve en el animal 6, pero moderada en el
animal 5. También sucedió degeneración hidrópica moderada en los
hepatocitos del animal 5.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 4 (400
mg/kg)
No se observaron signos clínicos de toxicidad
durante el periodo de observación, y no se observó patología
macroscópica durante el examen post-mortem. Se
observó hinchazón de aspecto opaco moderada y cambios hidrópicos
leves de los hepatocitos en la histología.
La ingesta de agua y alimento y el aumento en la
masa corporal del animal 7 fueron normales. El animal 8 consumió
casi el doble de la ingesta total de alimento del animal 7 (144,6 g
y 73,9 g respectivamente), pero el aumento en la masa corporal fue
sólo de 0,81 g comparado con 2,7 g.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 5 (800
mg/kg)
Un animal (animal 10) murió tres horas después
de la dosificación sin mostrar ningún signo específico. El otro
animal (animal 9) sobrevivió al periodo completo de observación sin
ningún signo de toxicidad. La ingesta de agua del animal
superviviente fue normal (42,42 ml), mientras que la ingesta de
alimento fue elevada (134,2 g). La masa corporal aumentó en 2,85 g
que fue la más elevada de todos los animales del experimento.
En el examen post-mortem del
animal 10, que murió poco después de la dosificación oral, se
congestionaron los pulmones. No se presentó ninguna reacción por
cuerpos extraños que hubiera indicado inhalación de material de
ensayo. No se observó patología macroscópica en el animal 9. Hubo
vacuolización citoplásmica leve (degeneración hidrópica) en el
animal 10, pero moderada en el animal 9. El aspecto citoplásmico
glandular del hígado se clasificó como moderado en ambos
animales.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 6 (1.600
mg/kg)
Ninguno de los animales presentó ningún signo
clínico de toxicidad durante el transcurso del experimento. No se
observó patología macroscópica en el examen
post-mortem, pero se observaron cambios
degenerativos moderados en el hígado del animal 11 en el examen
histopatológico. El animal 12 mostró hinchazón de aspecto opaco
moderada y cambios hidrópicos leves de los hepatocitos. La ingesta
de alimento y agua fue normal, así como el aumento en la masa
corporal durante el periodo experimental.
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 7 (3.028,5
mg/kg)
Se trató sólo un animal en esta dosis. Este
animal no mostró signos de toxicidad durante el periodo de
observación, y no se observó patología macroscópica. En el examen
histopatológico se observó hinchazón de aspecto opaco moderada y
degeneración hidrópica de los hepatocitos. El animal mostró una
pérdida de masa corporal durante el periodo de observación (-0,82
g), pero la ingesta de alimento y agua fue normal.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Como se usó una cantidad muy pequeña de animales
en cada grupo de dosis, es difícil hacer ninguna conclusión. El
hecho de que sólo un animal muriera a un índice bajo de dosis, sin
mostrar ningún síntoma, puede indicar que la muerte no estaba
relacionada con la muestra de ensayo, sino debida al estrés durante
y/o después del tratamiento. Ningún animal en grupos de dosis más
altas murió o mostró ningún signo de toxicidad, que apoya
adicionalmente esta suposición.
La ingesta de alimento aumentada observada en el
animal 8 podría atribuirse posiblemente a un excesivo vertido de
comida como se reflejó en el pequeño aumento en la masa corporal.
Debe tenerse también en mente que todos los animales en este
experimento se trataron sólo una vez, y que es improbable que un
supresor del apetito tuviera una influencia marcada sobre la
ingesta de alimento o agua, o la masa corporal en un periodo de 14
días, como fue el caso en este experimento.
A partir del examen histopatológico de las
muestras hepáticas, quedó claro que los cambios patológicos estaban
relacionados con la dosis, mostrando los animales que recibieron
dosis más altas cambios extensivos. La patología observada no era
de naturaleza metabólica, sino que posiblemente estaba inducida por
la muestra de ensayo. Los cambios fueron sólo degenerativos y por
lo tanto reversibles. No se observaron signos de cambios
hepatocelulares irreversibles.
Puede, por lo tanto, concluirse que sólo un
animal murió a una dosis inferior (800 mg/kg), pero que la muerte
posiblemente no estaba relacionada con la muestra de ensayo. Ninguno
de los demás animales en ninguno de los grupos de dosis mostró
ningún signo de toxicidad durante el periodo de observación de 14
días después del tratamiento, o murió como resultado del
tratamiento. Una dosis oral única de la muestra de ensayo indujo
cambios hepatocelulares reversibles relacionados con la dosis.
El propósito de este ensayo fue determinar la
actividad de un extracto de planta preparado de acuerdo con la
invención, y la dosis eficaz mínima, y en el mismo momento
investigar cualquier posible efecto secundario tal como supresión
de la respiración, como se experimenta en el ensayo de Irwin
(mencionado anteriormente).
Se asignaron animales a grupos de tratamiento
usando tablas de aleatorización. Cada grupo de tratamiento constaba
de tres animales, con 6 animales en el grupo de control. La muestra
de ensayo se dosificó a ratas hembras jóvenes con un peso corporal
de 100-150 g en la aclimatación, durante tres días
consecutivos. Los animales se identificaron mediante crotales
metálicos y marcas cutáneas de KMnO_{4} para una fácil
identificación. Los animales se alojaron individualmente en jaulas
de policarbonato convencionales para roedores, y estuvieron
disponibles ad libitum agua y gránulos en polvo comerciales
para roedores. Se midió la ingesta de agua y alimento y se calculó
para cada día. Para encontrar la dosis eficaz mínima de la muestra
de ensayo, se ensayaron cinco dosis. El tratamiento fue por sonda
oral, con la muestra de ensayo suspendida en almidón de patata.
La sustancia de ensayo era compuesto (1), un
polvo granular blanco preparado a partir de un extracto de material
de planta de acuerdo con la invención, y la cantidad medida de la
muestra de ensayo se mezcló con almidón de patata preparado y se
dosificó. La mezcla con almidón de patata tuvo lugar inmediatamente
antes de la dosificación en cada día. Antes de retirar el volumen
de dosificación para cada animal, las suspensiones mezclaron
minuciosamente usando un agitador Vortex.
Se ensayó un intervalo de cinco dosis,
recibiendo un grupo de control sólo la sustancia de vehículo. Las
dosis se eligieron en base a los efectos observados en el ensayo de
Irwin descrito anteriormente y fueron:
Grupo 1: 0,00 mg/kg (Grupo de Control)
Grupo 2: 6,25 mg/kg
Grupo 3: 12,50 mg/kg
Grupo 4: 25,00 mg/kg
Grupo 5: 37,50 mg/kg
Grupo 6: 50,00 mg/kg
El tratamiento no afectó a la salud de los
animales durante el periodo de estudio. Los animales tratados con
la muestra de ensayo en todos los grupos de dosis, mostraron una
ganancia de masa corporal media significativamente reducida durante
el periodo total del estudio, y animales en tres de los cinco grupos
de tratamiento realmente perdieron masa corporal.
La ingesta media de alimento para todos los
grupos de tratamiento se redujo durante el periodo de estudio. Los
animales en los grupos de dosis más altas mostraron un consumo de
agua aumentado.
La velocidad respiratoria en ninguno de los
animales en ningún grupo de dosis se vio afectada
significativamente.
Los animales en todos los grupos de dosis
presentaron hígados desmenuzables en el examen
post-mortem, pero no se observó patología
macroscópica.
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos recogidos durante el periodo de
aclimatación confirmaron que todos los animales incluidos en el
experimento estaban sanos y la ganancia de masa corporal era
comparable entre los animales.
La reducción, y en algunos animales incluso una
pérdida, en la ganancia de masa corporal, en combinación con la
ingesta reducida de alimento es fuertemente indicativa de supresión
del centro del apetito.
La ingesta reducida de alimento y la ganancia
reducida de masa corporal se experimentó incluso con el grupo de
dosis más baja (6,25 mg/kg). Se experimentó una pérdida real de masa
corporal en el grupo de 12,50 mg/kg.
Es importante observar que todos los grupos de
tratamiento tuvieron un consumo de agua aumentado cuando disminuyó
el consumo de alimento (Figura 2). Esto podía deberse a un efecto
diurético de la muestra de ensayo, o a la estimulación del centro
de la sed en el cerebro.
El hecho de que no sucediera supresión
respiratoria como se había observado en el ensayo de toxicidad aguda
mencionado anteriormente, con la vía intraperitoneal, se ve como un
aspecto positivo. Esto podría deberse a una absorción reducida del
tracto gastrointestinal, con una consecuente biodisponibilidad
reducida. La biodisponibilidad a las dosis orales ensayadas fue,
sin embargo, suficiente para que la muestra de ensayo fuera eficaz.
La ligera reducción en la velocidad de la respiración 1 hora
después del tratamiento en la mayoría de los grupos podría
atribuirse al llenado del estómago con el volumen de dosis y la
consecuente pasividad de los animales.
Los hígados desmenuzables observados en los
grupos de tratamiento podrían deberse a un cambio en el metabolismo
energético después de la ingesta reducida de alimento, causando un
metabolismo aumentado de las grasas y una sobrecarga en el hígado.
Si de hecho éste el caso, estos cambios probablemente podrían
considerarse como transitorios que podrían recuperarse con el
tiempo después de que se haya alcanzado un estado estacionario, o
después de la retirada de la muestra de ensayo. El posible efecto
sobre el hígado también tiene que investigarse adicional-
mente.
mente.
Como este estudio estaba pretendido
principalmente como ensayo de exploración, se usaron grupos pequeños
de animales de ensayo. Esto hace que la interpretación estadística
de los datos sea difícil, especialmente cuando los animales
individuales reaccionaron de forma totalmente diferente. Sin
embargo, los datos indican que la muestra de ensayo tiene acción
supresora del apetito, incluso la dosis más baja ensayada (6,25
mg/kg). No sucedieron signos clínicos de supresión respiratoria a
las dosis ensayadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
43
Las plantas Hoodia recogidas recibidas
del entorno natural o a través de un programa de cultivo se
almacenan primero a 4ºC durante un máximo de 48 horas. Las plantas
se lavan en agua corriente y después se trocean en porciones de
\pm 1 cm. Los pedazos troceados se combinan todos y después se
prensan a través de una prensa hidráulica a 30 MPa (300 bares) de
presión durante un mínimo de 0,5 horas por prensado. Durante el
prensado se recoge por separado la savia de la planta. La savia se
almacena a -18ºC hasta que se requiere el procesamiento
adicional.
La savia se seca por pulverización en
condiciones adecuadas para obtener un polvo no aglomerante. El
contenido de humedad en el polvo es preferiblemente menor del 5%
después del secado por pulverización y, si es necesario, se seca
adicionalmente en un horno de vacío o usando un secador de lecho
fluido.
Tanto la savia como el material secado por
pulverización han demostrado ser eficaces como agente supresor del
apetito en ensayos biológicos en ratas.
Se lavaron 50 kg de plantas de Hoodia
gordonii con agua corriente y después se trocearon en
porciones de 1 cm. Las plantas troceadas se prensaron después a
través de una prensa hidráulica a 30 MPa (300 bares) durante un
mínimo de 0,5 horas por lote. La savia se recogió y se descubrió que
la masa era de 10 kg cuando se usaron plantas de Hoodia
gordonii del entorno, y 20 kg cuando se usaron plantas de
Hoodia gordonii del programa de cultivo. La savia
(500 g) se secó por pulverización usando las siguientes
condiciones:
- Caudal:
- 2,85 ml/min
- Temperatura de entrada:
- 110ºC
- Temperatura de salida:
- 70ºC
- Temperatura de la cámara:
- 78ºC
El polvo secado por pulverización obtenido era
un polvo no aglomerante (22 g) con un contenido de humedad del
6,9%.
El polvo secado por pulverización se analizó
para la concentración de ingrediente activo usando técnicas de
HPLC. Se determinó que la concentración del activo era de 13 g/kg de
polvo secado por pulverización.
\vskip1.000000\baselineskip
- Eluyente:
- Acetonitrilo:agua (7:3), isocrático
- Columna:
- C-18 fase inversa
- Absorbancia UV:
- 225 nm
- Caudal:
- 1 ml/min
- Volumen de inyección:
- 10 \mul
Se disolvió el polvo secado por pulverización
(10 mg) en agua (0,5 ml) y acetonitrilo (0,5 ml) y se inyectaron 10
\mul de esta solución en la HPLC y se determinó la concentración
del compuesto activo (1) usando una curva patrón que se preparó a
partir del compuesto puro (1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
44
A continuación se presentan los resultados de un
estudio diseñado para evaluar los posibles efectos anorécticos del
compuesto (1) en ratas. En lo siguiente, las muestras ensayadas son
savia pura (Muestra 1), savia secada por pulverización (Muestra 2)
y un resto activo (Muestra 3). Las Muestras 1 y 2 son la savia y la
savia secada por pulverización respectivamente, como se describe en
el Ejemplo 5 anterior. La Muestra 3 es compuesto (1) extraído con
disolvente de una pureza de \geq95%.
Las Muestras 1 a 3 se administraron cada una
como una dosis oral única a ratas Wistar macho. Dos grupos de
control adicionales recibieron vehículo (agua destilada o DMSO). Se
incluyó fenfluramina administrada por vía oral (7,5 mg/kg) como
patrón de referencia.
La Muestra 1 (savia pura) administrada por vía
oral, produjo reducciones dependientes de la dosis en el consumo de
alimento que fueron estadísticamente significativas a dosis de 1600
mg/kg y superiores en comparación con los controles tratados con
vehículo. También se registraron reducciones concomitantes en el
peso corporal (o índice de crecimiento). En el día de la
dosificación, se registraron aumentos estadísticamente
significativos en el consumo de agua 3 horas después de la dosis
(6.400 y 10.000 mg/kg) y 6 horas después de la dosis (10.000
mg/kg). Entre 24 y 48 horas después de la dosis, se registraron
reducciones estadísticamente significativas en el consumo de agua a
dosis de 3.200 mg/kg y superiores.
La Muestra 2 (savia secada por pulverización)
administrada por vía oral a 76 mg/kg también produjo reducciones
estadísticamente significativas en el consumo de alimento y el peso
corporal en comparación con animales tratados con vehículo. No se
registraron efectos estadísticamente significativos sobre el consumo
de agua.
\newpage
La Muestra 3 (resto activo) produjo reducciones
estadísticamente significativas en el consumo de alimento a una
dosis oral de 5,0 mg/kg. No se produjeron efectos estadísticamente
significativos sobre los pesos corporales por el resto activo
aunque el examen de los datos reveló un ligero retardo en el
crecimiento en comparación con animales de control tratados con
vehículo. No se registraron efectos estadísticamente significativos
sobre el consumo de
agua.
agua.
El patrón de referencia, fenfluramina (7,5
mg/kg), produjo reducciones estadísticamente significativas en el
consumo de alimento a las 6 y 24 horas después de la dosis en
comparación con el grupo de control relevante tratado con vehículo.
No se registraron efectos estadísticamente significativos sobre el
consumo de agua o el peso corporal.
No se registraron efectos relacionados con el
tratamiento en los hígados.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se usaron cincuenta y cinco ratas Wistar macho
para el estudio.
Se registraron los pesos corporales, consumo de
alimento (peso de la tolva de comida) y consumo de agua (peso del
frasco) diariamente en el mismo momento cada día desde el día de la
llegada hasta la terminación del estudio.
\newpage
En el día 1, las ratas recibieron una dosis oral
única (sonda) de acuerdo con la siguiente tabla:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se dosificó a los grupos 1 - 8 usando un volumen
de dosis constante de 10 ml/kg y se dosificó a los grupos 9 - 12
usando un volumen de dosis de 1 ml/kg.
También se midió el consumo de alimento y agua a
las 1,3 y 6 horas después de la dosificación en el Día 1.
Después de las mediciones del Día 8, se
sacrificó a los animales por asfixia con dióxido de carbono, y se
escindieron los hígados y se colocaron en formalina tamponada al
10%, antes de la histología. Se tomaron secciones en cera parafina
de cada hígado a 4 - 5 \mum y se tiñeron con hematoxilina y
eosina. Se cortaron secciones adicionales en un criostato a 12
\mum y se tiñeron para las grasas con Aceite Rojo O (ORO).
\vskip1.000000\baselineskip
Se compararon las mediciones de consumo de
alimento y agua después de la dosis y los pesos corporales en cada
momento puntual para los animales tratados con P57 con las del grupo
de control relevante tratado de forma similar vehículo usando el
análisis de la varianza seguido por el ensayo de Williams para
comparaciones con los controles.
Los datos de los animales tratados con
fenfluramina se compararon con los del grupo de control tratado con
vehículo usando el ensayo t de Student.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados se resumen en las tablas.
La Muestra 1 (savia pura) administrada por vía
oral produjo reducciones marcadas relacionadas con la dosis en el
consumo diario de alimento. La duración y amplitud de estas
reducciones en el consumo de alimento fueron dependientes de la
dosis. A las 24 horas después de la dosis, la Muestra 1 (savia pura)
produjo reducciones estadísticamente significativas en el consumo
de alimento a dosis de 1.600 mg/kg y superiores en comparación con
los controles tratados con vehículo. La dosis más elevada de Muestra
1 (savia) (10.000 mg/kg) produjo reducciones estadísticamente
significativas en el consumo de alimento en una base diaria hasta 5
días después de la dosis.
La Muestra 2 (savia secada por pulverización) y
la Muestra 3 (resto activo) produjo reducciones marcadas y
estadísticamente significativas en el consumo de alimento a dosis
orales de 76 y 5,0 mg/kg respectivamente. En ambos casos los
efectos duraron 48 horas después de la dosis.
El patrón de referencia, fenfluramina (7,5
mg/kg, p.o.) produjo reducciones estadísticamente significativas en
el consumo de alimento a las 6 y 24 horas después de la dosis en
comparación con el grupo de control relevante tratado con vehículo
(Grupo 12).
La Muestra 2 (savia secada por pulverización) y
la Muestra 3 (resto activo) no produjeron efectos marcados
relacionados con la dosis sobre el consumo de agua. En el día de la
dosificación, la savia pura produjo aumentos estadísticamente
significativos en el consumo de agua a las 3 horas después de la
dosis (6.400 y 10.000 mg/kg) y 6 horas después de la dosis (10.000
mg/kg). Dos días después de la dosificación, sin embargo, se
registraron disminuciones estadísticamente significativas en el
consumo de agua en animales que recibieron Muestra 1 (savia) a
3.200, 6.400 y 10.000 mg/kg. Estas reducciones, sin embargo, no
estuvieron claramente relacionadas con la dosis y solamente
sucedieron entre 1 y 2 días después de la dosis. El significado
biológico de estos efectos, por lo tanto, sigue sin estar
claro.
La Muestra 1 (savia pura) produjo efectos
estadísticamente significativos relacionados con la dosis en los
pesos corporales en comparación con el grupo de control tratado con
vehículo (Grupo 1). Cuando se administraron por vía oral, a dosis
de 3.200 mg/kg y superiores, la Muestra 1 (savia pura) produjo
reducciones estadísticamente significativas en el peso corporal o
índices de crecimiento disminuidos en comparación con los animales
tratados con vehículo. Estos efectos fueron estadísticamente
significativos desde 48 horas después de la dosis hasta el final
del estudio.
La Muestra 2 (savia secada por pulverización)
administrada por vía oral a 76 mg/kg también produjo reducciones
estadísticamente significativas en el crecimiento de los animales en
comparación con el grupo de control tratado con vehículo (Grupo 1).
Estos efectos fueron estadísticamente significativos entre los Días
3 (48 horas después de la dosis) y 5, ambos incluidos.
Aunque la Muestra 3 (resto activo) pareció
retardar el crecimiento de los animales a la dosis más elevada (5,0
mg/kg) en comparación con el grupo de control relevante tratado con
vehículo (Grupo 12), este efecto no fue estadísticamente
significativo.
La fenfluramina (7,5 mg/kg) no produjo efectos
marcados o estadísticamente significativos sobre el consumo de agua
o los pesos corporales en comparación con el grupo de control
tratado con vehículo (Grupo 12).
No se registraron efectos relacionados con el
tratamiento en los hígados.
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\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
El examen histológico se restringió al hígado.
No se detectaron cambios relacionados con el tratamiento para la
Muestra 1 (líquido), Muestra 2 (savia secada por pulverización),
Muestra 3 (resto activo), fenfluramina o el grupo de control con
DMSO.
Los descubrimientos registrados fueron de una
incidencia similar en los grupos de control y tratados.
Ejemplo
45
A continuación se describe un bioensayo
adicional, que empleó las mismas muestras de ensayo que las
descritas en el Ejemplo 44. Los animales en este estudio recibieron
una dieta restringida, es decir, los animales sólo recibieron
comida entre las 12:00 y 3:00 pm diariamente. Esto es diferente de
todos los otros ensayos biológicos realizados hasta ahora, en los
que el alimento estaba disponible para las ratas ad libitum.
Los animales se aclimataron durante un periodo de siete días (días
-7 a -1), la dosificación tuvo lugar desde el día 0 al día 6 a las
9:00 am por sonda oral. El periodo de recuperación fue del día 7 al
día 13. Los grupos de dosificación se describen en la siguiente
Tabla 1. Debe observarse que el grupo de control real está marcado
como Grupo 09. El Grupo 5 es un grupo controlado que recibió una
dieta equivalente a la del Grupo 4. El propósito de este grupo fue
evaluar el efecto que una dieta restringida tiene sobre la vida de
los animales.
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados generados durante el estudio
mostraron que el periodo de aclimatación fue demasiado corto. Las
ratas se alimentaron principalmente durante la noche y el cambio
repentino a un acceso restringido al alimento durante 3 horas
durante el periodo de día, produjo una ingesta diaria inferior. La
ingesta diaria de comida aún aumentaba en la mayoría de los grupos
al final del periodo de aclimatación cuando comenzó la dosificación
con los artículos de ensayo. Como resultado de esto, el efecto de
los materiales de ensayo no afectó significativamente a la ingesta
de alimento de las ratas durante el periodo de dosificación.
Las masas corporales medias para los diferentes
grupos durante los días -7 a -1 y los días 0 a 6 se muestran en la
Tabla D1 y Tabla D2. El efecto de las diferentes dosificaciones de
la savia y savia secada por pulverización se muestra en los
gráficos adjuntos como % de cambio en la masa corporal del día 0 a 7
(Figura 5), y % de cambio en la masa corporal del día -7 a 7
(Figura 6). La pérdida en la masa corporal está claramente
relacionada con la dosis especialmente con las dosificaciones más
elevadas.
El examen histopatológico de los hígados no
mostró ninguna patología significativa en los grupos que recibieron
los artículos de ensayo.
\vskip1.000000\baselineskip
El consumo de alimento se midió diariamente,
durante la aclimatación y durante el estudio. El alimento estuvo
disponible durante un periodo diario de alimentación de 3 horas,
comenzando a las 12:00 y finalizando a las 15:00.
Los animales estuvieron en ayunas durante el
resto del tiempo. Los animales del Grupo 5 recibieron una cantidad
medida de alimento en el Día 1, equivalente al consumo promedio de
alimento del Grupo 4 en el Día 0. Este patrón de alimentación
controlado para el Grupo 5, determinado a partir del consumo
promedio de alimento del Grupo 4 del día previo, se siguió durante
los Días 1 - 7.
\vskip1.000000\baselineskip
El agua se proporcionó en recipientes
convencionales. El agua (Agua Corriente de Magalies Agua Board,
adecuada para el consumo humano) estuvo disponible ad
libitum. El consumo de agua se midió una vez al día, en el
mismo momento cada día, después de la determinación del consumo de
alimento.
\vskip1.000000\baselineskip
Los animales se aclimataron durante siete días
antes del inicio del estudio, tiempo durante el cual se determinó
el consumo de alimento y agua como se ha descrito anteriormente. Se
determinaron las masas corporales en una base diaria durante este
tiempo.
Los artículos de ensayo se administraron en una
base diaria durante siete días, usando una aguja
intra-gástrica. Los animales se dejaron en ayunas
durante 18 horas antes de la administración del artículo (comenzando
a las 09:00).
Se trató a los animales durante 7 días
consecutivos (desde el Día 0 - Día 6). Tres animales de cada grupo
se sacrificaron 24 horas después de la última dosis (Día 7). Los
tres animales restantes se sacrificaron 7 días después del último
tratamiento (Día 13). Este procedimiento se siguió para todos los
grupos excepto para el Grupo 5 en el que se sacrificaron tres
animales 24 horas después de la última alimentación controlada (Día
8), los tres animales restantes se sacrificaron 7 días después del
último tratamiento (Día 13).
Las masas corporales se determinaron
diariamente, a aproximadamente el mismo momento cada día durante el
transcurso del estudio, incluyendo durante el periodo de
aclimatación.
Se sacrificaron tres animales de cada grupo 24
horas después de la última dosificación (Día 7).
Los tres animales restantes se sacrificaron 7
días después del último tratamiento. Este procedimiento se siguió
para todos los grupos excepto para el Grupo 5 en el que se
sacrificaron tres animales 24 horas después de la última
alimentación controlada (Día 8), los tres animales restantes se
sacrificaron 7 días después del último tratamiento (Día 13). Los
animales se sacrificaron con eutanasia al final del periodo de
estudio con gas CO_{2}.
Los exámenes oftalmoscópicos, usando un
oftalmoscopio, se hicieron antes de la primera administración del
artículo de ensayo y al final, en todos los animales en todos los
grupos.
Se realizó un examen
post-mortem completo en cada animal que se
sacrificó con eutanasia al final del periodo de estudio.
Se realizó el examen histopatológico del hígado
de cada uno de los animales.
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
No se registraron lesiones específicas en las
secciones hepáticas de las ratas experimentales que recibieron la
savia congelada así como la savia secada por pulverización que
podría atribuirse a la administración oral de los compuestos
químicos mencionados anteriormente. La hinchazón celular hidrópica
registrada en las ratas tanto de control como experimentales puede
indicar una hinchazón celular metabólica normal y cambios anóxicos.
Se encontraron focos mínimos de agrupamiento perivascular
linfocítico en algunos animales y muy probablemente es una
observación fortuita. En unas pocas ratas se presentó congestión de
grado leve en los sinusoides hepáticos y deben considerarse como
una observación fortuita.
Una característica importante de la invención
mostrada por los resultados de este estudio es que no se desarrolló
tolerancia a ninguna de las muestras durante el periodo de ensayo.
Esto puede proporcionar un beneficio considerable, particularmente
en relación con el uso de los compuestos y composiciones de la
invención en el tratamiento de la obesidad.
Aunque los compuestos y composiciones de la
invención se han descrito principalmente en relación a sus
propiedades como supresores del apetito, debe observarse que esta
expresión -"supresor del apetito"- se usa en este documento
para indicar la actividad que tiende a limitar el apetito y/o
aumentar la sensación saciedad, y por tanto tiende a reducir la
ingesta calórica total; esto a su vez tiende a contrarrestar la
obesidad. Por consiguiente, esta invención deja disponible un
procedimiento para tratar, prevenir o combatir la obesidad en un ser
humano o un animal no humano que comprende administrar a dicho ser
humano o animal no humano una cantidad de tratamiento, prevención o
combate de la obesidad de un compuesto de fórmula (2). Una
realización preferida de este aspecto de la invención utiliza una
composición o extracto que contenga un compuesto de fórmula (1).
El término "animal" como se usa en este
documento se extiende a, pero sin restricción, animales de compañía,
por ejemplo, mascotas del hogar y animales domesticados; incluyendo
ejemplos no limitantes de dichos animales, ganado, ovejas, hurones,
cerdos, camellos, caballos, aves, peces, conejos, cabras, perros y
gatos.
Como agente anoréctico o en el tratamiento o
prevención de la obesidad en un ser humano, un compuesto de fórmula
(2), preferiblemente de fórmula (1), se administra de forma
ventajosa a dicho ser humano en una cantidad de dosificación de
aproximadamente 0,01 mg/kg/día a aproximadamente 10 mg/kg/día. Un
intervalo de dosificación preferido es de 0,05 mg/kg/día a 0,5
mg/kg/día. Cuando se usa la forma en polvo secado por pulverización
del extracto de esta invención, un intervalo de dosificación
preferido es de 0,1 mg/kg/día a 20 mg/kg/día; se prefiere
especialmente de 0,5 mg/kg/día a 5 mg/kg/día.
Claims (46)
1. Compuesto que tiene la fórmula estructural
general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo;
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o C_{5}-C_{6},
excepto ramanona, isorramanona, 12-benzoato de
isorramanona y
5\beta-pregnan-20-on-3\beta,12\beta,14\beta-triol.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
en el que hay un doble enlace entre C_{5}-C_{6},
R = metilo, R_{1} = tigloílo, R_{2} =
3-O-[-\beta-D-tevetopiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil-(1\rightarrow4)-\beta-D-cimaropiranosil],
teniendo el compuesto la fórmula estructural
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
3. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{2} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico.
\newpage
5. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o
C_{5}-C_{6}.
\newpage
7. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo;
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico,
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o
C_{5}-C_{6}.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Compuesto de acuerdo con la reivindicación 1,
que tiene la fórmula estructural general
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
R = alquilo; y
R_{1} = H, alquilo, tigloílo, benzoílo o
cualquier otro grupo éster orgánico;
R_{2} = H, o uno o más
6-desoxi-hidratos de carbono, o uno
o más 2,6-didesoxi-hidratos de
carbono o moléculas de glucosa, o combinaciones de los mismos;
y en la que las líneas discontinuas indican la
presencia opcional de un enlace adicional entre
C_{4}-C_{5} o
C_{5}-C_{6}.
\newpage
9. Procedimiento para la preparación de un
producto intermedio esteroideo de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
que incluye las etapas
de
\vskip1.000000\baselineskip
(a) tratar el compuesto
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con un agente reductor para
producir un compuesto
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(b) tratar el compuesto (23) con
N-bromoacetamida (NBA) y una base para producir un
compuesto
3\beta,12\beta-dihidroxi-14,15-epoxi-20,20-etilendioxirpregn-5-eno
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(c) tratar el compuesto (24) con un agente
reductor para producir un compuesto
3\beta,12\beta,14\beta-trihidroxi-20,20-etilenedoxipregn-5-eno
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y (d) tratar el compuesto (25) con
un ácido y agua para producir el compuesto
(15).
\vskip1.000000\baselineskip
10. Procedimiento para la preparación del
compuesto (15) que incluye las etapas de
(a) tratar el compuesto (22) tal como se muestra
en la reivindicación 9 con cloruro de
p-toluenosulfonilo y una base para producir un
compuesto 12-acetato de
3\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxipregna-5,14-dieno-3-tosilo
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(b) tratar el compuesto (26) con acetato de
potasio en un disolvente para producir un compuesto
12-acetato de
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilenedioxi-3,5\alpha-ciclopregnan-14-eno
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(c) tratar el compuesto (27) con un agente
reductor para producir un compuesto
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxi-3,5\alpha-ciclopregnan-14-eno
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(d) tratar el compuesto (28) con
N-bromoacetamida, y una base para producir un
compuesto
6\beta,12\beta-dihidroxi-20,20-etilendioxi-14,15-epoxi-3,5\alpha-ciclopregnano
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
(e) tratar el compuesto (29) con un agente
reductor para producir un compuesto
6\beta,12\beta,14\beta-trihidroxi-20,20-etilendioxi-3,5\alpha-ciclopregnano
de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y (f) tratar el compuesto (30) con
un ácido y un disolvente para producir el compuesto
(15).
\vskip1.000000\baselineskip
11. Procedimiento de acoplamiento de un
monosacárido cimarosa con un producto intermedio esteroideo, que
incluye las etapas de
i) hacer reaccionar un resto de cimarosa de
fórmula (38)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
con un producto intermedio
esteroideo de fórmula (15) tal como se muestra en la reivindicación
9 en presencia de cloruro de estaño en un disolvente para producir
un compuesto
3-O-[4-O-benzoil-2-feniltio-\beta-D-cimaropiranosil]-12,14-\beta-dihidroxi-pregnan-5-en-20-ona
de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
y (ii) tratar el compuesto (51) con
cloruro de ácido tíglico en piridina y después con una base para
producir un compuesto
3-O-[2-feniltio-\beta-D-cimaropiranosil]-12\beta-tigloiloxi-14-hidroxi-14\beta-pregnan-5-en-20-ona
de
fórmula
12. Compuesto de fórmula (52) de acuerdo con la
reivindicación 11.
13. Procedimiento de acoplamiento de un resto de
monosacárido cimarosa con un resto de monosacárido tevetosa y
acoplamiento del disacárido resultante con el compuesto de fórmula
(52) de acuerdo con la reivindicación 12, que incluye las etapas
de
i) acoplar un resto de cimarosa protegido de
manera selectiva de fórmula (40) a continuación y un resto de
monosacárido tevetosa de fórmula (50A) a continuación:
usando cloruro de estaño,
SnCl_{2}, y trifluorometanosulfonato de plata para producir un
compuesto de
fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo
ii) tratar el compuesto (53) con
fluoruro de tetrabutilamonio para producir un compuesto de
fórmula
iii) tratar el compuesto (54) con
trifluoruro de dietilaminoazufre para producir un compuesto de
fórmula
iv) hacer reaccionar el compuesto
(55) con el compuesto (52) de acuerdo con la reivindicación 12 para
producir un compuesto de
fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
y (v) tratar el compuesto (56) en
una reacción con níquel Raney y después con una base para producir
el compuesto (1) de acuerdo con la reivindicación
2.
14. Procedimiento de formación de un trisacárido
y acoplamiento del trisacárido resultante con un producto intermedio
esteroideo, que incluye las etapas de
i) acoplar un resto de cimarosa protegido de
manera selectiva de fórmula (40) y el compuesto (45) usando cloruro
de estaño (II), AgOTf, Cp_{2}ZrCl_{2} para producir un compuesto
de fórmula
en la que Z = TBDMS =
t-butildimetilsililo;
ii) tratar el compuesto (57) con fluroruro de
tetrabutilamonio y trifluoruro de dietilaminoazufre para producir
un compuesto trisacárido que tiene la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
y (iii) acoplar el trisacárido de
fórmula (58) con un producto intermedio esteroideo de
fórmula
usando cloruro de estaño (II),
AgOTf, Cp_{2}ZrCl_{2} para producir el compuesto (1) de acuerdo
con la reivindicación
2.
15. Composición que tiene actividad supresora
del apetito que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8 ambas incluidas.
16. Composición de acuerdo con la reivindicación
15, en la que el compuesto es el compuesto de fórmula (1) de
acuerdo con la reivindicación 2.
17. Composición de acuerdo con la reivindicación
15 o reivindicación 16, mezclada con un excipiente, diluyente o
vehículo farmacéutico.
18. Composición de acuerdo con la reivindicación
15, 16 ó 17, que está preparada en forma farmacéutica unitaria.
19. Uso de un compuesto de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 ambas incluidas, sin tener
en cuenta las cláusulas de excepción en las mismas, en la
fabricación de un medicamento que tiene actividad supresora del
apetito.
20. Uso de acuerdo con la reivindicación 19, de
un compuesto de fórmula (1) de acuerdo con la reivindicación 2.
21. Compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 8 ambas incluidas, sin tener en cuenta las
cláusulas de excepción en las mismas, para su uso como medicamento
que tiene actividad supresora del apetito.
22. Compuesto de acuerdo con la reivindicación
21, que es el compuesto de fórmula (1) de acuerdo con la
reivindicación 11.
23. Producto alimenticio o bebida que comprende
una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8 ambas incluidas, para tener un efecto
supresor del apetito cuando se ingiere.
24. Producto alimenticio o bebida de acuerdo con
la reivindicación 23, siendo el compuesto el compuesto de fórmula
(1) de acuerdo con la reivindicación 2.
25. Composición que tiene actividad supresora
del apetito que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8, sin tener en cuenta las cláusulas de
excepción en las mismas, para su uso para tratar, prevenir o
combatir la obesidad de un ser humano o animal.
26. Composición de acuerdo con la reivindicación
25, en la que el compuesto es el compuesto de fórmula (1) de
acuerdo con la reivindicación 2.
27. Composición de acuerdo con la reivindicación
25 o reivindicación 26, mezclada con un excipiente, diluyente o
vehículo farmacéutico.
28. Composición de acuerdo con la reivindicación
25, 26 ó 27, que está preparada en forma farmacéutica unitaria.
29. Composición de acuerdo con la reivindicación
25, en la que la obesidad es de un ser humano.
30. Producto alimenticio o bebida que comprende
una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con una cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 8, sin tener en cuenta las cláusulas de
excepción en las mismas, para tener un efecto supresor del apetito
cuando se ingiere, para su uso para tratar, prevenir o combatir la
obesidad de un ser humano o animal.
31. Producto alimenticio o bebida de acuerdo con
la reivindicación 30, en el que el compuesto es el compuesto de
fórmula (1) de acuerdo con la reivindicación 2.
32. Producto alimenticio o bebida de acuerdo con
la reivindicación 30, en el que la obesidad es de un ser humano.
33. Compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 8, sin tener en cuenta las cláusulas de
excepción en las mismas, para su uso para tratar, prevenir o
combatir la obesidad de un ser humano o animal.
34. Compuesto de fórmula (1) de acuerdo con la
reivindicación 2, para su uso para tratar, prevenir o combatir la
obesidad de un ser humano o animal.
35. Compuesto de acuerdo con la reivindicación
33 ó 34, en el que la obesidad es de un ser humano.
36. Método no terapéutico de reducción de la
ingesta calórica total de un ser humano o animal, comprendiendo el
método administrar a dicho ser humano o animal un compuesto de
acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, sin tener
en cuenta las cláusulas de excepción en las mismas.
37. Método no terapéutico de supresión del
apetito de un ser humano o animal, comprendiendo el método
administrar a dicho ser humano o animal un compuesto de acuerdo con
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, sin tener en cuenta
las cláusulas de excepción en las mismas.
38. Método de acuerdo con la reivindicación 36 ó
37, en el que el compuesto se administra en un producto alimenticio
o una bebida que comprende una cantidad eficaz del compuesto para
tener un efecto supresor del apetito cuando se ingiere.
39. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 36 a 38, en el que el compuesto es el compuesto de
fórmula (1) de acuerdo con la reivindicación 2.
40. Método de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 36 a 39, en el que el compuesto se administra a un
ser humano.
41. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
\vskip1.000000\baselineskip
42. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
\vskip1.000000\baselineskip
43. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
\newpage
44. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
45. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
46. Compuesto que tiene la fórmula
estructural
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ZA97/3201 | 1997-04-15 | ||
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