ES2393317T5 - Animal protein-free media for cultivation of cells - Google Patents

Animal protein-free media for cultivation of cells Download PDF

Info

Publication number
ES2393317T5
ES2393317T5 ES10004393T ES10004393T ES2393317T5 ES 2393317 T5 ES2393317 T5 ES 2393317T5 ES 10004393 T ES10004393 T ES 10004393T ES 10004393 T ES10004393 T ES 10004393T ES 2393317 T5 ES2393317 T5 ES 2393317T5
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
cells
cell
culture
virus
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES10004393T
Other languages
English (en)
Other versions
ES2393317T3 (es
Inventor
Leopold Grillberger
Manfred Reiter
Wolfgang Mundt
Friedrich Dorner
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35447241&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2393317(T5) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Takeda Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Publication of ES2393317T3 publication Critical patent/ES2393317T3/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2393317T5 publication Critical patent/ES2393317T5/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/04—Plant cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/46—Amines, e.g. putrescine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/74—Undefined extracts from fungi, e.g. yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
    • C12N2500/92—Medium free of human- or animal-derived components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

DESCRIPCIÓN
Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende una poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras, tal como se reivindica. La invención también se refiere a procesos de cultivo exentos de proteínas animales, en los que las células pueden ser cultivadas, propagadas y pasadas sin añadir proteínas animales complementarias al medio de cultivo. Estos procesos son útiles para cultivar células, tales como células recombinantes o células infectadas con un virus, y para producir productos biológicos mediante procesos de cultivo celular.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Para el cultivo de células, particularmente de células eucariotas, y más específicamente células de mamífero, existe una necesidad constante de usar medios de cultivo especiales que hacen disponibles las sustancias nutrientes de crecimiento que son necesarias para un crecimiento eficaz de las células y para la producción de las proteínas o de los virus que se desean. Para la producción eficaz de productos biológicos, tales como virus o proteínas recombinantes, es importante que se alcance una densidad celular óptima, así como que se aumente la propia expresión de proteínas para obtener un rendimiento máximo del producto.
Las formulaciones de medios de cultivos celulares se han complementado con diversos aditivos, que incluyen componentes no definidos tales como suero bovino fetal(fetal calf serum,FCS), diversas proteínas derivadas de animales y/o hidrolizados de proteínas de origen bovino.
En general, el suero o las sustancias derivadas del suero, tales como la albúmina, la transferrina o la insulina, pueden contener agentes no deseados que pueden contaminar los cultivos celulares y los productos biológicos obtenidos a partir de los mismos. Adicionalmente, los aditivos derivados de suero humano deben ser ensayados para comprobar todos los virus conocidos, incluyendo hepatitis y VIH, que pueden ser transmitidos por el suero. Además, el suero bovino y los productos derivados del mismo son portadores de un riesgo de contaminación por BSE. Además, todos los productos derivados de suero pueden estar contaminados por constituyentes desconocidos. En el caso del suero o de aditivos proteicos que derivan de seres humanos o de otras fuentes animales en cultivos celulares, existen numerosos problemas (por ejemplo, la calidad variable de la composición de los diferentes lotes y el riesgo de contaminación por micoplasma, virus o BSE), particularmente si las células se usan para la producción de fármacos o de vacunas para su administración a seres humanos.
Por lo tanto, se han realizado muchos intentos para proporcionar sistemas hospedadores y condiciones de cultivo eficaces que no requieran suero ni otros compuestos proteicos animales. El medio simple exento de suero incluye típicamente medio basal, vitaminas, aminoácidos o sales orgánicas o inorgánicas, y opcionalmente componentes adicionales para hacer el medio nutricionalmente complejo.
Se sabe que los hidrolizados de soja son útiles para los procesos de fermentación y pueden mejorar el crecimiento de muchos organismos de cultivo difícil, levaduras y hongos. El documento WO 96/26266 describe que los digeridos papaicos de harina de soja son una fuente de carbohidratos y de nitrógeno y muchos de los componentes pueden usarse en un cultivo tisular. Franek y col. (Biotechnology Progress (2000) 16, 688 - 692) describen los efectos promotores del crecimiento y de la productividad de fracciones peptídicas definidas del hidrolizado de soja.
El documento WO 96/15231 desvela un medio exento de suero formado por medio sintético mínimo esencial y extracto de levadura para la propagación de células de vertebrados y procesos de producción de virus. En el documento WO 98/15614. Se desvela una formulación de medio compuesta por medio de un cultivo de células basal que comprende un péptido de arroz y un extracto de levadura, y la digestión enzimática de los mismos, y/o un lípido vegetal para el crecimiento. En el documento WO 01/23527 se desvela un medio que comprende un hidrolizado de soja purificado para el cultivo de células recombinantes. El documento WO 00/03000 desvela un medio que comprende un hidrolizado de soja y un extracto de levadura, pero también requiere la presencia de formas recombinantes de proteínas animales, tales como factores de crecimiento.
El documento WO2004/005493 describe un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende una combinación de péptidos no derivados de animales procedentes de hidrolizado de soja e hidrolizado de levadura animal. El documento WO01/11021 se refiere a un clon celular recombinante estable que es estable en un medio que no contiene suero y proteínas durante al menos 40 generaciones. El documento FR72.29396 describe un medio de cultivo para la selección de bacterias en el que el medio está exento de proteínas animales. El documento WO02/24876 se refiere a un proceso para aislar virus procedentes de varias fuentes y para producir vacunas antigripales de virus vivos atenuados en un cultivo celular Vero exento de suero en unas condiciones en las que se minimizan o se evitan alteraciones en los antígenos de superficie del virus debido a la selección adaptativa.
El documento EP-A-0 481 791 describe un medio de cultivo bioquímicamente definido para cultivar células CHO modificadas genéticamente que está exento de proteínas, lípidos y carbohidratos aislados a partir de una fuente animal, que comprende además una insulina recombinante o un análogo de insulina, del 1 % al 0,025 % p/v de digerido de papaína de peptona de soja y putrescina. El documento WO 98/08934 describe un cultivo celular eucariota exento de suero que comprende péptidos de hidrolizado de soja (1 - 1000 mg/L), de 0,01 a 1 mg/L de putrescina y varios componentes derivados de animales, incluyendo albúmina, fetuína, varias hormonas y otras proteínas. En este contexto, también debería mencionarse que también se sabe que la putrescina está contenida en medios estándar tales como DMEM/Ham's F12 a una concentración de 0,08 mg/L.
Sin embargo, los medios conocidos en el estado de la técnica son a menudo nutricionalmente insuficientes y/o deben ser complementados con complementos proteicos derivados de animales o versiones recombinantes de proteínas, tales como insulina, factor de crecimiento insulinoide u otros factores de crecimiento.
Por lo tanto, existe una necesidad actual de aumentar el rendimiento de la proteína recombinante expresada o de cualquier otro producto de expresión, y de la tasa de crecimiento específica de las células, y de proporcionar un medio de cultivo celular óptimo completamente exento de proteínas animales para la producción de productos biológicos, tales como los usados como productos farmacéuticos o como vacunas en seres humanos.
Sobre la base de extractos de peptona de soja (también denominado "hidrolizados de soja") se han desarrollado medios que no contienen proteínas animales. Sin embargo, la calidad de los lotes disponibles comercialmente de hidrolizados de soja varía extremadamente y, como resultado, existen amplias variaciones en la producción de proteínas recombinantes o de productos víricos (una variación de hasta en un factor de 3) en función de los lotes de hidrolizado de soja usados ("variación interlote"). Este inconveniente afecta a la proliferación de las células, así como a la expresión proteica de cada célula.
Por lo tanto, hay una necesidad de un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que esté completamente exento de proteínas animales y supere al menos uno de los problemas mencionados anteriormente.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
Un objeto de la presente invención es proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que no contenga ninguna proteína complementaria añadida derivada de una fuente animal ni/o proteínas animales recombinantes, que permita un crecimiento celular eficaz y en particular la producción proteica, con una calidad continua con respecto a la cantidad de expresión por célula. Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un procedimiento para cultivar células y un procedimiento para la expresión eficaz de proteínas recombinantes que están exentas de proteínas animales.
Otro objeto de la presente invención es reducir el hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras con objeto de superar los efectos inhibidores que impactarían negativamente sobre el rendimiento de la producción de un producto recombinante o vírico deseado. Sorprendentemente se encontró que los hidrolizados eran la causa de las variaciones interlote en la producción.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v), en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina.
Sorprendentemente, la adición de al menos una poliamina, en particular la adición de putrescina, al medio de cultivo celular exento de proteínas animales, proporciona el efecto ventajoso no sólo de promocionar el crecimiento celular, sino en particular de aumentar la expresión de proteínas por célula, y en particular, la expresión de proteínas recombinantes por célula.
Además, el medio exento de proteínas animales según la presente invención proporciona un crecimiento celular uniforme y un aumento en el rendimiento de los productos deseados, particularmente de proteínas objetivo tales como proteínas recombinantes, independientemente de la calidad o de las variaciones del lote del hidrolizado de proteínas, en particular de los hidrolizados vegetales, en el medio de cultivo celular exento de proteínas animales. La complementación específica de un medio de cultivo celular con poliaminas y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras actúa sinérgicamente para aumentar el crecimiento celular, la productividad específica celular y la densidad celular final.
Por lo tanto, el medio exento de proteínas animales según la presente invención es más favorable para la expresión de proteínas recombinantes y la tasa de crecimiento celular en comparación con los medios conocidos en la materia. Adicionalmente, el medio exento de proteínas animales según la presente invención permite la reducción de la cantidad de hidrolizado de proteínas que se debe añadir a un volumen dado del medio de cultivo celular.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La Figura 1 muestra una gráfica que compara (A) la productividad volumétrica de FVIII-CoA (expresada en [U/L/D] = unidades de FVIII COA por L de volumen de reactor por día y (B) la tasa de crecimiento específica (g expresada en [d-1] = 1 por día) de células GD8/6 en función del medio usado para el cultivo, que fueron complementadas con diferentes lotes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,4 % (p/v)).
La Figura 2 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA de células GD8/6 crecidas en medios con diferentes concentraciones de hidrolizado de soja.
La Figura 3 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA de células GD8/6 en función del medio usado para el cultivo, que fueron complementados con diferentes lotes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) (A) en ausencia de putrescina, y (B) en presencia de 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl.
La Figura 4 muestra una gráfica que compara las tasas de crecimiento específicas de células GD8/6 en función del medio usado para el cultivo, que fueron complementados con 5 lotes diferentes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) (A) en ausencia de putrescina, y (B) en presencia de 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl.
La Figura 5 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA (QP [U/L/D]) y la tasa de crecimiento específica (g [d'1]) de células GD8/6 y su desviación estándar crecidas en medio con 5 lotes diferentes seleccionados (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,4 % (p/v) o 0,25 % (p/v)) con los mismos hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) con y sin putrescina ■ 2 HCl a 1 mg/L.
La Figura 6 muestra una tabla que describe las concentraciones medias de putrescina encontradas en hidrolizados de soja (0,4 % (p/v) en medio de cultivo celular) procedentes de diferentes fabricantes.
La Figura 7 muestra una tabla que compara el efecto del hidrolizado de soja ((0,4 % (p/v)) y del hidrolizado de soja (0,25 % (p/v)) 1,8 mg/L de putrescina ■ 2 HCl sobre la productividad volumétrica (QP expresada en [mg IgG1/L de volumen del reactor/día] y la productividad específica celular (qp [gg lgG1/células 10E06/d]) en células ARH77 que secretan un anticuerpo monoclonal.
La Figura 8 muestra una gráfica que compara el efecto del hidrolizado de soja (0,25 % (p/v)) y del hidrolizado de soja (0,25 % (p/v)) 1 mg/L de putrescina (1,8 mg/L de putrescina ■ 2 HCl) sobre la productividad específica celular de eritropoyetina (EPO) de células BHK recombinantes (producción de EPO (unidades) / consumo de glucosa (g). La Figura 9 muestra una tabla que compara el efecto de la putrescina, la ornitina y la espermina sobre un amplio intervalo de concentraciones ( 0 - 18 mg/L) sobre el crecimiento específico (g, absoluto, g relativo) y la productividad celular específica (Qp absoluta, Qp relativa) de células GD8/6 cultivadas en medio BAV que contiene un 0,0 % de hidrolizado de soja y ninguna amina, o en medio BAV que contiene una concentración reducida de hidrolizado de soja del 0,25 % complementada con poliaminas en el intervalo de concentraciones indicado anteriormente. BAV -<s>P al 0,25 % = medio BAV que contiene un 0,25 % de hidrolizado de soja; BAV - SP al 0,4 % = medio BAV que contiene un 0,4 % de hidrolizado de soja; BAV sin soja ni poliaminas = medio BAV que no contiene ni hidrolizado de soja ni poliaminas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La invención se establece en las reivindicaciones.
Un aspecto de la invención se refiere a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v), en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina.
El término "poliamina" se refiere a cualquiera de un grupo de compuestos orgánicos formados por carbono, nitrógeno e hidrógeno, y que contienen dos o más grupos amino. Por ejemplo, el término engloba moléculas elegidas del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina y ornitina.
Salvo que se indique de otro modo, los valores de concentración indicados a lo largo de este documento se refieren a la forma de base libre del (los) componente(s).
En el medio de cultivo celular exento de proteínas animales descrito en este documento, la concentración de la poliamina está presente en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 30 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/l hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L, muy preferiblemente desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5 mg/L en el medio.
La concentración total del hidrolizado de proteínas derivadas de vegetales y/o levaduras en el medio de cultivo celular exento de proteínas animales descrito en este documento es de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 5 % (p/v), más preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 % (p/v), más preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente que el 0,25 % (p/v); es decir, si el medio contiene un hidrolizado de proteínas derivado de vegetales y de levaduras, la concentración total se calcula sumando los valores de concentración de cada uno de los componentes del hidrolizados de proteínas contenido en el medio.
El término "medio de cultivo celular exento de proteínas animales" según la presente invención se refiere a un medio que no contiene proteínas ni/o componentes proteicos procedentes de eucariotas pluricelulares no vegetales. Las proteínas típicas que se evitan son las que se encuentran en el suero y en sustancias derivadas del suero, tales como albúmina, transferrina, insulina y otros factores de crecimiento. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales también está exento de cualquier producto purificado derivado de animales y de productos derivados de animales recombinantes, así como de digeridos proteicos y extractos de los mismos o de extractos lipídicos o componentes purificados de los mismos. Las proteínas animales y los componentes proteicos deben distinguirse de las proteínas no animales, pequeños péptidos y oligopéptidos obtenibles a partir de plantas (habitualmente de 10 -30 aminoácidos de longitud), tales como la semilla de soja, y de eucariotas inferiores, tales como levaduras, que pueden incluirse en el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención.
El medio de cultivo exento de proteínas animales según la invención puede basarse en cualquier medio basal tal como DMEM, Ham's F12, medio 199, McCoy o RPMI conocidos generalmente por el trabajador experto. El medio basal puede comprender varios ingredientes, incluyendo aminoácidos, vitaminas, sales orgánicas e inorgánicas, y fuentes de carbohidratos, estando presente cada ingrediente en una cantidad que sustente el cultivo de una célula que generalmente es conocido por el experto en la materia. El medio puede contener sustancias auxiliares, tales como sustancias tamponantes como bicarbonato sódico, antioxidantes, estabilizantes para contrarrestar el estrés mecánico, o inhibidores de la proteasa. Si se requiere puede añadirse como agente antiespumante un tensioactivo no iónico, tal como mezclas de polietilenglicoles y propilenglicoles (por ejemplo, Pluronic F68 ®, SERVA).
La poliamina empleada para el medio de cultivo exento de proteínas animales según la invención es putrescina. En una forma de realización preferida del medio de cultivo exento de proteínas animales, la poliamina controla la síntesis de ADN y de ARN, la proliferación celular, la diferenciación celular, la estabilización de la membrana y/o la protección antioxidante del ADN. La putrescina, la espermidina, la espermina y la ornitina son ejemplos de poliaminas que muestran estas funciones. Otro ejemplo de una poliamina es la cadaverina.
En otra forma de realización preferida del medio de cultivo exento de proteínas animales, la poliamina se origina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
En el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según se describe en este documento, la poliamina está presente en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 30 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L, muy preferiblemente desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5 mg/L en el medio, y el hidrolizado de proteínas derivado de plantas y/o de levaduras que está presente en el medio en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 5 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,25 % (p/v).
El hidrolizado de proteínas derivado de vegetales usado para el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención es un hidrolizado de soja. El hidrolizado de soja puede ser un hidrolizado de soja altamente purificado, un hidrolizado de soja purificado o un hidrolizado de soja en bruto.
El término "hidrolizado" incluye cualquier digerido enzimático de un extracto vegetal o de levadura. El "hidrolizado" puede ser adicionalmente digerido enzimáticamente, por ejemplo, mediante papaína, y/o formado mediante autolisis, termolisis y/o plasmolisis. Los hidrolizados también están disponibles comercialmente, tales como HyPep 1510®, Hy-Soy®, Hy-Yeast 412® y Hi-Yeast 444®, de fuentes tales como Quest International, Noruega, NY, OrganoTechnie, S.A. Francia, Deutsche Hefewerke GmbH, Alemania, o DMV Intl. Delhi, NY. Algunas fuentes de extractos de levadura y de hidrolizados de soja también se desvelan en los documentos WO 98/15614, WO 00/03000, WO 01/23527 y US 5.741.705.
Los hidrolizados se purifican preferiblemente a partir de la fracción en bruto, ya que las impurezas podrían interferir con un cultivo eficaz. La purificación puede llevarse a cabo mediante ultrafiltración o con cromatografía de Sephadex, por ejemplo, con Sephadex 25 o Sephadex G10 o materiales equivalentes, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad, cromatografía de exclusión por tamaños o cromatografía en fase inversa. Las fracciones pueden contener hidrolizados con un peso molecular definido, preferiblemente de hasta aproximadamente 1000 Dalton, más preferiblemente de hasta aproximadamente 500 Dalton, muy preferiblemente de hasta aproximadamente 350 Dalton. Al menos aproximadamente el 90 % del hidrolizado tiene preferiblemente un peso molecular de hasta aproximadamente 1000 Dalton. El peso molecular medio de los hidrolizados está preferiblemente entre aproximadamente 220 y aproximadamente 375 Daltons. El valor del pH del hidrolizado debería estar en el intervalo de desde aproximadamente 6,5 hasta aproximadamente 7,5. El contenido total en nitrógeno está preferiblemente entre aproximadamente el 5 y aproximadamente el 15 %, y el contenido en cenizas es preferiblemente de hasta aproximadamente el 20 %. El contenido en aminoácidos libres está preferiblemente entre aproximadamente el 5 % y aproximadamente el 30 %. El contenido en endotoxinas es preferiblemente menor de aproximadamente 500 U/g.
La divulgación también proporciona un procedimiento para usar al menos una poliamina para su adición a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que contiene un hidrolizado de proteínas derivado de vegetales y/o de levaduras, para aumentar el rendimiento de la expresión de proteínas en las células cultivadas. La poliamina puede estar presente en el medio de cultivo descrito en este documento en una concentración total que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 30 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L, muy preferiblemente desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5 mg/L en el medio. Preferiblemente, la poliamina se elige del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y combinaciones de las mismas. Preferiblemente, el hidrolizado de proteínas derivado de vegetales y/o de levaduras está presente en el medio en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 5 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,25 % (p/v).
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para cultivar células, que comprende las etapas: (a) proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención, y
(b) propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v), en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina.
La presente invención no se limita a ningún tipo de célula. En una forma de realización preferida de la invención, las células usadas son, por ejemplo, células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas, células de levadura. Las células pueden ser, por ejemplo, células madre o células recombinantes transformadas con un vector para la expresión génica recombinante, o células transfectadas con un virus para producir productos víricos. Las células también pueden ser, por ejemplo, células que producen una proteína de interés sin una transformación recombinante, por ejemplo, un linfocito B que produce un anticuerpo, que puede ser transformado a un estado inmortalizado, por ejemplo, mediante una infección vírica como la infección por el virus de Epstein Barr. Las células también pueden ser, por ejemplo, células primarias, por ejemplo, células embrionarias de pollo, o líneas celulares primarias. Se prefieren las células que se usan para la producción de virusin vitro.En una forma de realización preferida las células pueden ser células BSC, LLC-MK, células CV-1, células COS, células VERO, células M<d>B<k>, células MDGK, células CRFK, células RAF, células RK, células TCMK-1, células LLCPK, células PK15, células LLC-RK, células MDOK, células BHK-21, células CHO, células NS-1, células MRC-5, células WI-38, células BHK, células 293, células RK y células embrionarias de pollo.
Las células que pueden usarse según la presente invención pueden cultivarse mediante un procedimiento elegido del grupo de cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático, todos los cuales generalmente son conocidos en la materia.
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para expresar una proteína objetivo tal como una proteína heteróloga o autóloga, o una proteína recombinante, que comprende las etapas de:
a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la presente invención; e
b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia codificante para la proteína objetivo;
c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácido nucleico; e
d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v), en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina. Preferiblemente, la poliamina se origina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
La secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia codificante para la proteína objetivo puede ser un vector. El vector puede ser un virus o un plásmido. La secuencia codificante para una proteína objetivo puede ser un gen específico o una parte biológica funcional del mismo. En una forma de realización preferida, la proteína objetivo es al menos una parte biológicamente activa de un factor de coagulación sanguínea tal como el Factor VIII o al menos una parte biológicamente activa de una proteína implicada en la producción de eritrocitos y en la angiogénesis, tal como la eritropoyetina, o un anticuerpo monoclonal.
Preferiblemente, el ácido nucleico comprende adicionalmente otras secuencias adecuadas para la expresión controlada de una proteína objetivo, tales como secuencias promotoras, como potenciadores, cajas TATA, sitios de inicio de la transcripción, policonectores, sitios de restricción, secuencias de poli-A, secuencias de procesado de proteínas, marcadores de selección y similares, que son generalmente conocidas por el experto en la materia.
Son muy preferidas las siguientes líneas celulares transformadas con un vector recombinante para la expresión de los productos respectivos: células CHO para la producción del factor de coagulación recombinante VIII, células BHK para la producción de eritropoyetina recombinante, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos B humanos inmortalizados para la producción de anticuerpos humanos.
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para producir un virus o una parte de un virus, que comprende las etapas de:
a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la presente invención; e
b) infectar las células con un virus;
c) seleccionar las células infectadas por el virus; e
d) incubar las células para propagar el virus.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v), en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina. Preferiblemente, la poliamina se origina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
El virus usado en el procedimiento según la invención puede ser cualquier virus patógeno, de mamífero, preferiblemente un virus humano, tal como una vacuna de un virus atenuado, por ejemplo, vacunas contra la viruela, coronavirus, preferiblemente virus del SARS, por ejemplo, para la producción de vacunas frente al SARS, ortomioxivirus, preferiblemente virus de la gripe, por ejemplo, para la producción de vacunas contra la gripe, paramixovirus, retrovirus, virus de la gripe A o B, virus de Ross River, flavivirus, preferiblemente virus del Nilo occidental o virus de la FSME (es decir, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas), por ejemplo, para la producción de las respectivas vacunas, picornavirus, arenavirus, herpesvirus, poxvirus o adenovirus.
El virus puede ser un virus natural, un virus atenuado, un virus reagrupado o un virus recombinante o combinaciones de los mismos, por ejemplo, atenuado y recombinante. Además, en lugar de los actuales viriones que se están usando para infectar células con un virus, puede usarse un clon infeccioso de un ácido nucleico. También pueden usarse viriones escindidos.
El procedimiento para expresar una proteína o para producir un virus puede usarse para producir composiciones inmunógenas que comprenden un virus o un antígeno vírico.
Las células usadas para el procedimiento para producir un virus pueden elegirse del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura. Preferiblemente, las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
Las combinaciones preferidas de células con virus para producir un virus o una parte de un virus son célula Vero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de la gripe, célula Vero / virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS, células embrionarias de pollo / virus de la FSMe .
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para usar el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención para cultivar células que expresan una proteína objetivo.
La presente invención se ilustrará ahora adicionalmente en los siguientes ejemplos, sin estar limitada a los mismos.
EJEMPLOS
Ejemplo 1 (medio BAV)
Se preparó un medio exento de proteínas animales con medio basal DMEM / HAM's F12 (1:1) complementado con sales inorgánicas, aminoácidos, vitaminas y otros componentes (Life technologies, 32500 Powder). También se añadieron L-glutamina (600 mg/L), ácido ascórbico (20 |iM), etanolamina (25 |iM), Synperonic® (SERVA) (0,25 g/L), selenito sódico (50 nM). Adicionalmente el medio de cultivo celular fue complementado con aminoácidos esenciales. Además se añadieron concentraciones variables de hidrolizado de soja (Quest Technologies, NY o DMV Intl., NY) en un intervalo del 0,0 - 1,0 % y concentraciones variables de poliaminas ( 0 - 10 mg/L) (Figuras 1 - 9)
Ejemplo 2
Se hicieron crecer cultivos celulares de células de mamífero recombinantes (por ejemplo, células CHO que expresan de forma estable el Factor VIII = células GD8/6) en suspensión en un cultivo quimioestático en biorreactores de 10 L. Las condiciones de cultivo de 37 °C, saturación de oxígeno del 20 % y pH de 7,0 a 7,1 se mantuvieron constantes. Los cultivos se complementaron con un suministro constante de medio BAV según se define en el Ejemplo 1 complementado adicionalmente con hidrolizados de soja en el intervalo del 0,1 - 1,0 % y/o la adición de putrescina ■ 2 HCl en el intervalo de 0-1 mg/L (cotéjese la Figura 1 - 5),
Se llevaron a cabo experimentos a pequeña escala con células GD8/6 en cultivo de suspensión en matraces de agitación Techne a un volumen de trabajo de 200 ml en modo de reabastecimiento de lote a 37 °C, sin control del pH ni de la pO2. Los cultivos se complementaron con medio BAV según se define en el Ejemplo 1 sin el complemento de hidrolizado de soja ni poliaminas, o complementado con hidrolizado de soja en el intervalo del 0,1 - 0,4 % y/o putrescina ■ 2 HCl, ornitina ■ HCL, espermina ■ 4 HCl en el intervalo de 0 - 18 mg/L (equivalente a 0 - 10 mg/L de la poliamina sin HCl (cotéjese la Figura 9).
Ejemplo 3 (cotéjense las Figuras 1 a 57, y 9)
Se determinaron los recuentos celulares a partir de las células en suspensión o de las células inmovilizadas mediante el recuento con una cámara de recuento CASY® según describen Scharfe y col., (Biotechnologie en Labor Praxis 10: 1096 - 1103 (1988)) o mediante extracción con ácido cítrico y tinción fluorescente de los núcleos, seguido por un recuento con un NodeoCounter ® (Chemometec, DK). La tasa de crecimiento específica (|i) se calcula a partir del incremento de las densidades celulares (Xt) y/o la tasa de dilución (D) del estado estacionario de los cultivos quimioestáticos de las suspensiones de células a lo largo de un determinado intervalo de tiempo (t):
|i = D ln (Xt/X0) / 1
Ejemplo 4
Se midió la actividad del Factor VIII (FVIII) (cotéjense las Figuras 1 a 5 y 9) mediante un ensayo cromogénico (Chromogenic, Suecia). La actividad de la eritropoyetina (cotéjese la Figura 8) y el título de anticuerpos monoclonales (cotéjese la Figura 7) se midieron mediante sistemas de ensayo ELISA.
La productividad volumétrica se calcula a partir de la cantidad de unidades de actividad o de títulos de antígeno rendidos por litro de volumen de reactor por día (U/L/d o mg/L/d) en los respectivos sistemas de producción.
La productividad específica celular se define como la cantidad específica de proteína producida (U o |ig) por número de células por día (cotéjense las Figuras 7 y 9) o como la cantidad específica de proteína producida (U) producida por cantidad de D-glucosa consumida por las células (cotéjese la Figura 8).
Ejemplo 5
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía un 0,4 % (p/v) de diferentes lotes de hidrolizado de soja. La productividad volumétrica del FVIII varió desde aproximadamente 600 hasta 1800 U/L/d, y las tasas de crecimiento específicas variaron desde 0,35 hasta 0,52 |i[d-1] entre los diferentes lotes (cotéjese la Figura 1). Esto indica que los lotes de hidrolizado de soja a la concentración del 0,4 % no permiten un crecimiento uniforme de las células GD8/6, posiblemente debido a las sustancias inhibidoras que afectan a la tasa de crecimiento específica (|i) que están contenidas en los hidrolizados de soja.
Ejemplo 6
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía diferentes concentraciones del lote del hidrolizado de soja M022257 (en el intervalo de 0,15 - 1,0 % p/v). La productividad volumétrica del FVIII varió desde 500 hasta 1,100 U/L/d y alcanzó una productividad óptima de 1,100 U/L/d a una concentración de hidrolizado de soja del 0,4 % (p/v) (cotéjese la Figura 2).
Ejemplo 7
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía un 0,25 % (p/v) de los mismos 5 lotes diferentes de hidrolizado de soja descritos en el Ejemplo 5 (Figuras 3A y 4A) y un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja de los mismos lotes de hidrolizado de soja complementados adicionalmente con 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl (Figuras 3B y 4B), respectivamente. La productividad volumétrica del FVIII varió desde 1700 U/L/d hasta 500 U/L/d en las células crecidas en medio BAV-SP que contenía un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja de diferentes lotes de hidrolizado de soja (Figura 3A). La tasa de crecimiento específica variaba desde 0,58 hasta 0,24 |i[d-1], lo que indicaba que la reducción en la concentración del hidrolizado de soja no conduce a una mejor o más constante tasa de crecimiento de las células (Figura 4A).
Por el contrario, únicamente se observaron variaciones menores en la productividad volumétrica del FVIII (Figura 3B) y en las tasas de crecimiento específicas (Figura 4B) entre los mismos lotes de hidrolizado de soja en las células crecidas en medio BAV que contiene un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja cuando se complementaba con 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl. La adición de 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl compensa aproximadamente la reducción de esta poliamina mediante la reducción en la concentración del hidrolizado de soja desde el 0,4 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v). A partir de esto puede concluirse que no es la concentración de la propia poliamina sino la adición de la poliamina en combinación con la reducción de las concentraciones de hidrolizado de soja lo que conduce a una reducción de las sustancias inhibidoras que reducen el crecimiento y la productividad (véase el Ejemplo 5). Adicionalmente, la adición de putrescina también conduce a un aumento mayor que proporcional en la productividad volumétrica del FVIII debido a un aumento en la productividad específica celular del FVIII (Figura 5).
Por lo tanto, la adición de putrescina a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales no sólo promueve la tasa de expresión proteica de las células cultivadas, sino que también reduce la cantidad de hidrolizado vegetal que debe incluirse en el medio de cultivo con objeto de obtener el mismo crecimiento celular. Como resultado, el medio de cultivo se ve menos afectado por la variación interlote en la calidad del hidrolizado vegetal, y por lo tanto se consigue una mejora global en las condiciones de cultivo celular.
Ejemplo 8
La Figura 5 comprende el análisis estadístico de los Ejemplos mostrados en las Figuras 1, 2 y 4: las células GD8/6 se complementaron con medio BAV que contenía un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja y 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl. Las desviaciones estándar se calculan basándose en cinco lotes seleccionados de hidrolizados de soja (K119-1, K138-1, M022963, MD24423, M022453). La productividad volumétrica y específica celular del FVIII y la tasa de crecimiento específica con un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja era menor que con un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja, lo que confirma el óptimo representado en la Figura 2. Sin embargo, la productividad volumétrica y específica celular del FVIII y la tasa de crecimiento específica aumenta en el medio de cultivo celular que contiene un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja 1 mg/L de putrescina ■ 2 HCl. Además, la desviación estándar calculada a partir de cinco lotes diferentes de hidrolizados de soja está significativamente reducida (cotéjese la Figura 5 [QP [U/L/D] = productividad volumétrica; qp [mU/106 células/día] = productividad específica celular),
Ejemplo 9
Los Ejemplos 7 y 8 muestran que la putrescina es un compuesto activo que sustenta el crecimiento celular, y más específicamente, la expresión de proteínas. Por lo tanto, se analizó cuantitativamente la concentración de putrescina procedente de diferentes lotes de hidrolizado de soja de 2 proveedores diferentes (Quest y DMV) mediante un método por HPLC y se evaluó estadísticamente. La concentración en los medios de cultivo celular preparados con el hidrolizado de soja de ambos proveedores fue de aproximadamente 2,3 mg/L de putrescina, cuando se añadía hidrolizado de soja al medio a una concentración del 0,4 % (p/v) (cotéjese la Figura 6).
Ejemplo 10
Se hicieron crecer células ARH77 (línea celular linfoblastoide humana que expresa de forma estable hlgG) en un cultivo por perfusión tras la inmovilización sobre microportadores macroporosos en el tanque de un biorreactor de 80 L agitado a 37 °C, pH 7,0 - 7,2 y pO2 del 20 - 80 % de saturación de aire, abastecido con medio BAV que contiene un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja 1,8 mg/L de putrescina ■ 2 HCl. Se calcularon las medias aritméticas y las desviaciones estándar a partir de los datos puntuales que representaban los estados estacionarios para las respectivas formulaciones de medio. La hlgG volumétrica-productividad volumétrica / productividad específica celular en medio BAV complementado con un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja era menor que el medio BAV complementado con un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja 1,8 mg/L de putrescina ■ 2 HCl. Este experimento indica que la composición del medio según la presente invención es capaz de promover también la expresión de anticuerpos monoclonales a partir de una línea celular transformada. Además, la composición específica del medio también puede usarse en cultivos por perfusión (cotéjese la Figura 7).
Ejemplo 11
Se hicieron crecer hasta confluencia células BHK recombinantes en un medio que contenía suero bovino fetal al 5 % (v/v). Las células se lavaron con un medio exento de proteínas y se incubaron durante 3 días en medio BAV complementado con un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja 1,8 mg/L de putrescina ■ 2 HCl (Figura 8). Dado que en este experimento no se realizó ningún recuento celular, se midió la tasa de consumo de glucosa (g/L) durante tres días para probar la biomasa equivalente en el sistema de cultivo. La actividad de la EPO (mU/ml) se correlacionó con la tasa de consumo de glucosa (g/L) durante tres días. La adición de putrescina proporciona un aumento del 16 % en la productividad de EPO en comparación con un medio BAV complementado simplemente con un 0,25 % (p/v) de peptona de soja. Este experimento también indica que la composición del medio según la presente invención es capaz de promover la expresión de diferentes proteínas recombinantes.
Ejemplo 12
Para probar el efecto específico de la putrescina, la ornitina y la espermina en un amplio intervalo de concentraciones (de 0 - 18 mg/L equivalentes a 0-10 mg/L de la poliamina sin HCL) se lleva a cabo un experimento en el que las células GD8/6 se incubaron en matraces de agitación Techne a 1 - 1,5 E06 células / ml en medio BAV que contenía un 0,25 % y un 0,4 % de hidrolizado de soja sin poliaminas, y en medio BAV que contenía la reducida concentración de hidrolizado de soja del 0,25 % con las poliaminas en el intervalo de concentraciones mencionado anteriormente. Las tres poliaminas del intervalo de concentraciones investigado dieron como resultado un aumento significativo en la productividad específica celular (expresado en mU/106 células / día) en comparación con la formulación del medio no complementado con un 0,25 % de hidrolizado de soja, o la concentración aumentada del 0. 4.%. El aumento en la productividad específica celular claramente no se correlaciona con un aumento en la tasa de crecimiento específica, lo que confirma el efecto específico sobre la tasa de expresión del FVIII recombinante de las células GD8/6 (Figura 9).
Por ejemplo, la presente descripción se refiere a los siguientes puntos:
1. Un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras.
2. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 10 mg/L.
3. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina se elige del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y una combinación de las mismas.
4. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina es putrescina en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 10 mg/L, y el hidrolizado de proteínas es hidrolizado de soja en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 % (p/v) hasta aproximadamente el 5 % (p/v)
5. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina se origina a partir de una fuente distinta a un hidrolizado de proteínas.
6. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta 30 mg/L.
7. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que el hidrolizado de proteínas está presente en el medio de cultivo en una concentración total que varía desde aproximadamente el 0,05 % (p/v) hasta aproximadamente el 5 % (p/v) para todos los hidrolizados de proteínas.
8. El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que el hidrolizado de proteínas deriva de una planta elegida del grupo formado por cereales y soja.
9. Un procedimiento para cultivar células, que comprende las etapas de:
(a) proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, y
(b) propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
10. El procedimiento según el punto 9, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
11. El procedimiento según el punto 9, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
12. Un procedimiento para expresar una proteína objetivo, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un cultivo de células que se han hecho crecer en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1;
b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia que codifica para la proteína objetivo;
c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácidos nucleicos; e
d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
13. El procedimiento según el punto 12, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
14. El procedimiento según el punto 12 en el que la combinación de célula / proteína objetivo se elige del grupo formado por células CHO / factor de coagulación VIII, células BHK / eritropoyetina, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos B humanos inmortalizados / anticuerpos humanos.
15. El procedimiento según el punto 12, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
16. Un procedimiento para producir un virus, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un cultivo de células que se han hecho crecer en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1;
b) infectar las células con el virus;
c) seleccionar las células infectadas por el virus; e
d) incubar las células para propagar el virus.
17. El procedimiento según el punto 16, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
18. El procedimiento según el punto 16, en el que la combinación de célula / virus se elige del grupo formado por célula Vero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de la gripe, célula Vero / virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS y células embrionarias de pollo / virus de la FSME.
19. El procedimiento según el punto 16, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    i.Un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y al menos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínas está presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v),
    en el que el al menos un hidrolizado de proteínas se origina a partir de soja y en el que la al menos una poliamina es putrescina.
  2. 2. Un procedimiento para cultivar células, que comprende las etapas de:
    (a) proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1, y (b) propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
  3. 3. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  4. 4. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
  5. 5. Un procedimiento para expresar una proteína objetivo, que comprende las etapas de:
    a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1;
    b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia que codifica para la proteína objetivo;
    c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácidos nucleicos; e
    d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
  6. 6. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  7. 7. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que la combinación de célula / proteína objetivo se elige del grupo formado por células CHO / factor de coagulación VIII, células BHK / eritropoyetina, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos B humanos inmortalizados / anticuerpos humanos.
  8. 8. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
  9. 9. Un procedimiento para producir un virus, que comprende las etapas de:
    a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1;
    b) infectar las células con el virus;
    c) seleccionar las células infectadas por el virus; e
    d) incubar las células para propagar el virus.
  10. 10. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que las células se eligen del grupo formado por células de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  11. 11. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que la combinación de célula / virus se elige del grupo formado por célula Vero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de la gripe, célula Vero / virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS y células embrionarias de pollo / virus de la FSME.
  12. 12. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
ES10004393T 2004-10-29 2005-10-12 Animal protein-free media for cultivation of cells Expired - Lifetime ES2393317T5 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US976399 2004-10-29
US10/976,399 US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2004-10-29 Animal protein-free media for cultivation of cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2393317T3 ES2393317T3 (es) 2012-12-20
ES2393317T5 true ES2393317T5 (en) 2025-01-02

Family

ID=35447241

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10004394T Expired - Lifetime ES2393703T3 (es) 2004-10-29 2005-10-12 Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células
ES10004392T Expired - Lifetime ES2394746T5 (en) 2004-10-29 2005-10-12 Animal protein-free media for cultivation of cells
ES10004395T Expired - Lifetime ES2400214T3 (es) 2004-10-29 2005-10-12 Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células
ES10004393T Expired - Lifetime ES2393317T5 (en) 2004-10-29 2005-10-12 Animal protein-free media for cultivation of cells

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10004394T Expired - Lifetime ES2393703T3 (es) 2004-10-29 2005-10-12 Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células
ES10004392T Expired - Lifetime ES2394746T5 (en) 2004-10-29 2005-10-12 Animal protein-free media for cultivation of cells
ES10004395T Expired - Lifetime ES2400214T3 (es) 2004-10-29 2005-10-12 Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células

Country Status (16)

Country Link
US (12) US20060094104A1 (es)
EP (5) EP2213725B2 (es)
JP (1) JP4847962B2 (es)
KR (1) KR101043547B1 (es)
CN (1) CN101065480B (es)
AU (1) AU2005299040B2 (es)
CA (1) CA2585518A1 (es)
DK (4) DK2213725T4 (es)
ES (4) ES2393703T3 (es)
FI (1) FI2213725T4 (es)
MX (1) MX2007005132A (es)
PL (4) PL2213725T5 (es)
PT (4) PT2213726E (es)
RU (1) RU2383616C2 (es)
SI (3) SI2213724T1 (es)
WO (1) WO2006045438A1 (es)

Families Citing this family (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
EP3653699A1 (en) 2006-01-04 2020-05-20 Baxalta Incorporated Oligopeptide-free cell culture media
HUE030533T2 (hu) 2006-06-20 2017-05-29 Transgene Sa Eljárás poxvírusok és poxvírus-készítmények elõállítására
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
TWI456062B (zh) 2006-09-13 2014-10-11 Abbvie Inc 細胞培養改良
WO2008047596A1 (fr) * 2006-10-18 2008-04-24 Fuji Oil Company, Limited Levure résistant à la congélation
WO2008154014A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Amgen Inc. A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
JP5431361B2 (ja) * 2008-01-09 2014-03-05 セルカ ゲーエムベーハー 改善された培養培地添加物及びそれを用いる方法
US9458422B2 (en) * 2008-01-25 2016-10-04 University Of Maryland Composition of matter and method for stimulating the growth of beneficial microorganisms
WO2009132195A1 (en) * 2008-04-23 2009-10-29 Michigan State University Immortal avian cell line and methods of use
TW201012930A (en) 2008-06-16 2010-04-01 Intervet Int Bv Method of replicating viruses in suspension
US8821480B2 (en) * 2008-07-16 2014-09-02 Intuitive Surgical Operations, Inc. Four-cable wrist with solid surface cable channels
RS51999B (sr) * 2008-08-28 2012-04-30 Novartis Ag Dobijanje skvalena iz hiperprodukcijskih kvasaca
AU2009347206C1 (en) 2008-10-20 2016-12-08 Abbvie Inc. Isolation and purification of antibodies using Protein A affinity chromatography
MX2011004201A (es) 2008-10-20 2011-05-24 Abbott Lab Desactivacion viral durante purificacion de anticuerpos.
CA2742107A1 (en) 2008-11-12 2010-05-20 Baxter International Inc. Method of producing serum-free insulin-free factor vii
KR101737645B1 (ko) 2008-12-30 2017-05-18 박스알타 인코퍼레이티드 알킬-아민-ｎ-옥시드 (ａａｎｏｘ)를 사용하는 세포 성장 증진 방법
CN101851608B (zh) * 2009-03-31 2012-09-05 北京清大天一科技有限公司 一种悬浮培养bhk21细胞生产狂犬病病毒的方法
CN104962539B (zh) 2009-07-31 2019-09-17 百深公司 用于adamts蛋白表达的细胞培养基
HUE028688T2 (en) 2009-09-21 2017-01-30 Baxalta GmbH Stabilized liquid and lyophilized adamts13 formulations
CA2805557A1 (en) 2010-07-08 2012-01-12 Baxter International Inc. Method of producing recombinant high molecular weight vwf in cell culture
CA2810731A1 (en) 2010-09-17 2012-03-22 Baxter International Inc. Stabilization of immunoglobulins and other proteins through aqueous formulation with sodium chloride at weak acidic to neutral ph
BR112013010362A2 (pt) 2010-10-27 2016-08-02 Baxter Healthcare Sa métodos para induzir uma tolerância imune a fviii, para fazer um peptídeo fviii, e para identificar uma célula t específica de peptídeo fvii, peptídeo, composição, e, proteína de fusão
CN102127525B (zh) * 2010-12-27 2013-06-05 吉林亚泰生物药业股份有限公司 流感病毒疫苗株在Vero细胞上的适应方法
KR102007997B1 (ko) 2011-02-07 2019-08-07 라이프 테크놀로지스 코포레이션 감수성 화합물을 안정화시키는 조성물 및 방법
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
ES2682249T3 (es) 2011-06-10 2018-09-19 Baxalta GmbH Tratamiento de una enfermedad de la coagulación mediante la administración de VWF recombinante
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
EP2906683B1 (en) 2012-10-15 2017-05-31 Bristol-Myers Squibb Company Mammalian cell culture processes for protein production
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
US8921526B2 (en) 2013-03-14 2014-12-30 Abbvie, Inc. Mutated anti-TNFα antibodies and methods of their use
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
AR095196A1 (es) * 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2015101510A1 (en) 2013-12-30 2015-07-09 Baxter Healthcare Sa A method of predicting a performance characteristic of a plant or yeast hydrolysate and its use
CN106282090B (zh) * 2015-06-08 2021-07-13 齐鲁制药有限公司 一种驯化后的cho-s细胞系及其培养方法与应用
TW202440904A (zh) 2015-08-04 2024-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法（二）
CN105385731B (zh) * 2015-12-25 2018-10-30 上海莱士血液制品股份有限公司 一种表达重组八因子的灌注培养方法
EP3299454A1 (en) * 2016-09-21 2018-03-28 Deutsches Krebsforschungszentrum Optimized method for large scale production of parvovirus h-1 in an essentially serum-free medium
CN106635953B (zh) * 2016-12-13 2021-02-19 昆明润什生物科技有限公司 无血清无蛋白细胞培养基
JP6258536B1 (ja) * 2017-03-03 2018-01-10 協和発酵キリン株式会社 ダルベポエチン組成物の製造方法およびダルべポエチン産生細胞の培養方法
KR102659791B1 (ko) * 2017-07-06 2024-04-23 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 당단백질을 만들기 위한 세포 배양 과정
US20190091298A1 (en) 2017-07-07 2019-03-28 Baxalta Incorporated Treatment of patients with severe von willebrand disease undergoing elective surgery by administration of recombinant vwf
CA3069295A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Baxalta Incorporated Treatment of gastrointestinal bleeding in patients with severe von willebrand disease by administration of recombinant vwf
CA3094644A1 (en) 2018-03-21 2019-09-26 Baxalta Incorporated Separation of vwf and vwf propeptide by chromatographic methods
LT3781941T (lt) 2018-04-20 2026-04-10 Janssen Biotech, Inc. Chromatografijos kolonėlės kvalifikavimas gamybos būduose, skirtuose anti-tnf antikūnų kompozicijoms gaminti
EA202191352A1 (ru) 2018-11-13 2021-08-11 Янссен Байотек, Инк. Контроль содержания микроэлементов-металлов во время продукции антител к cd38
KR20210090632A (ko) 2018-11-15 2021-07-20 알레프 팜스 리미티드 고품질 배양육, 이를 생산하기 위한 조성물 및 방법
US12128090B2 (en) 2019-02-01 2024-10-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods of prophylactic treatment using recombinant VWF (rVWF)
JP7662529B2 (ja) 2019-03-14 2025-04-15 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｔｎｆ抗体組成物を産生するための方法
KR20210141990A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-il12/il23 항체 조성물을 생성하기 위한 제조 방법
CA3133381A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
KR20210141976A (ko) 2019-03-14 2021-11-23 얀센 바이오테크 인코포레이티드 항-tnf 항체 조성물의 제조 방법
US20220401524A1 (en) 2019-09-11 2022-12-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods of treatment related to complexes of von willebrand factor and complement c1q
CZ308590B6 (cs) * 2019-09-25 2020-12-16 Výzkumný ústav mlékárenský s.r.o. Hypoalergenní veganské médium pro kultivaci bakterií mléčného kvašení
US12297451B1 (en) 2019-10-25 2025-05-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture medium
US11180540B2 (en) 2019-12-06 2021-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-VEGF protein compositions and methods for producing the same
KR102817858B1 (ko) 2019-12-24 2025-06-10 주식회사 엘지화학 베로 세포 배양용 저혈청 배지 조성물 및 이의 이용
IL294248A (en) 2019-12-31 2022-08-01 Air Protein Inc High protein food compositions
KR20220150303A (ko) 2020-02-04 2022-11-10 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 재조합 vwf의 투여에 의한 중증 폰 빌레브란트병 환자의 월경과다 치료
WO2021198781A2 (en) 2020-04-02 2021-10-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Adamts13 variant, compositions, and uses thereof
JP2023525034A (ja) 2020-05-08 2023-06-14 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｖｅｇｆトラップおよびミニトラップならびに眼障害およびがんの治療方法
PT4043551T (pt) 2021-02-12 2025-03-05 Buehler Ag Meios nutritivos para cultura celular que contêm hidrolisados de proteína vegetal
KR102392018B1 (ko) * 2021-05-24 2022-04-27 한국해양과학기술원 스피룰리나 가수분해물을 포함하는 세포 배양용 배지 조성물 및 이의 제조방법
IL309987A (en) 2021-07-09 2024-03-01 Janssen Biotech Inc Production methods for the production of anti-IL12/IL23 antibody compositions
AU2022308201A1 (en) 2021-07-09 2024-02-22 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
WO2023167847A2 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bioreactor for antibody production
WO2024039216A1 (ko) * 2022-08-19 2024-02-22 셀미트주식회사 동물세포 또는 동물 세포주의 배양방법
WO2025053166A1 (ja) * 2023-09-05 2025-03-13 味の素株式会社 培地組成物
WO2026058210A1 (en) 2024-09-12 2026-03-19 Janssen Biotech, Inc. Model system and biomarkers to prevent lactate runaway

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT165999B (de) 1947-06-26 1950-05-25 Delle Atel Const Electr Einirchtung zum Schutz von Drehstrommotoren gegen Überstrom
FR2196386A1 (en) * 1972-08-17 1974-03-15 Cudennec Alain Culture media selection - for identification of unknown bacteria
US4443540A (en) * 1980-05-09 1984-04-17 University Of Illinois Foundation Protein hydrolysis
DK207980A (da) * 1980-05-13 1981-11-14 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et skumnings- eller emulgeringsmiddel paa sojaproteinbasis
EP0120896B1 (en) 1982-10-02 1986-08-13 Anderson Strathclyde Plc Line pans
JPS59187511A (ja) 1983-04-06 1984-10-24 株式会社日本バノツク 自動結束機
US4767704A (en) * 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
NZ210501A (en) 1983-12-13 1991-08-27 Kirin Amgen Inc Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence
FI86885C (fi) 1984-04-20 1992-10-26 Genentech Inc Foerfarande foer framstaellning av human rekombinantfaktor viii och nukleinsyrasekvenser och vektorer anvaend daertill
ATE89314T1 (de) 1985-02-13 1993-05-15 Scios Nova Inc Menschlicher metallothionein ii-promotor in saeugetierexpressionssystemen.
US4978616A (en) * 1985-02-28 1990-12-18 Verax Corporation Fluidized cell cultivation process
US5250421A (en) * 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
DE3787805T2 (de) 1986-08-04 1994-02-10 Garvan Inst Med Res Serumfreies gewebekulturmedium, das ein polymerzellenschutzmittel enthält.
AU627427B2 (en) 1987-06-30 1992-08-27 Amgen, Inc. Production of kallikrein
JP2507882B2 (ja) 1988-02-17 1996-06-19 工業技術院長 外部増殖因子非依存性増殖良好細胞株の製造法
US6048728A (en) * 1988-09-23 2000-04-11 Chiron Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression
US5573937A (en) * 1989-12-07 1996-11-12 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Serum free culture medium
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
DK0512066T3 (da) 1990-01-22 1996-12-02 Us Health CO2-uafhængigt vækstmedium til opretholdelse og opformering af celler
JP2844484B2 (ja) 1990-02-22 1999-01-06 味の素株式会社 組換え蛋白質の生産方法
JP2859679B2 (ja) 1990-03-01 1999-02-17 協和醗酵工業株式会社 新規細胞株
US5378612A (en) * 1990-05-11 1995-01-03 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Culture medium for production of recombinant protein
JP2696001B2 (ja) 1991-04-15 1998-01-14 財団法人化学及血清療法研究所 組換え蛋白質産生用培地
US5122469A (en) * 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
AU643077B2 (en) 1990-10-19 1993-11-04 Unilever Plc Detergent compositions
JPH04228066A (ja) 1990-10-23 1992-08-18 Rikagaku Kenkyusho 外来遺伝子発現用培養細胞
EP0531562A1 (de) * 1991-09-11 1993-03-17 Doerr, Hans-Wilhelm, Prof. Dr. med. Kultivierung von Säugetierzellen
JPH05123178A (ja) 1991-11-01 1993-05-21 Ajinomoto Co Inc Ｌ−フエニルアラニンの製造法
JPH06217759A (ja) 1993-01-25 1994-08-09 Sapporo Breweries Ltd 酵母プロトプラストの再生用培地と再生方法
AU7895898A (en) 1993-04-26 1998-10-08 Hans Wolf Mammal cell lines and method of obtaining glycoproteins
DE4313620A1 (de) 1993-04-26 1994-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung
GB9311132D0 (en) * 1993-05-28 1993-07-14 Eisai London Res Lab Ltd Control of cell death
US5405637A (en) 1993-06-30 1995-04-11 Bristol-Myers Squibb Company Milk protein partial hydrolysate and infant formula containing same
JP2766165B2 (ja) 1993-08-02 1998-06-18 株式会社バイオポリマー・リサーチ バクテリアセルロースの製造方法
US5719050A (en) * 1993-12-24 1998-02-17 Eiken Chemical Co., Ltd. Animal cell culturing media containing N-acetyl-L-glutamic acid
EP0666312A1 (en) 1994-02-08 1995-08-09 Wolfgang A. Renner Process for the improvement of mammalian cell growth
US5789247A (en) * 1994-04-01 1998-08-04 Ballay; Annick Expression in non-tumoral human lymphoblastoid lines with an integrative vector
WO1996007730A2 (de) 1994-09-09 1996-03-14 Renner Wolfgang A Chemisches verfahren zur förderung der proliferation von tierischen zellen
US6146873A (en) * 1994-11-10 2000-11-14 Baxter Aktiengesellschaft Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media
ES2378409T3 (es) 1994-11-10 2012-04-12 Baxter Healthcare S.A. Método para producir sustancias biológicas en cultivo sin proteínas
AT403167B (de) 1994-11-14 1997-11-25 Immuno Ag Selektion und expression von fremdproteinen mittels eines selektions-amplifikations-systems
JP3244391B2 (ja) 1994-12-08 2002-01-07 財団法人国際超電導産業技術研究センター 複合基板及びそれを用いた単結晶基板の製造方法
EP0799310A1 (en) 1994-12-16 1997-10-08 Novartis AG Production of recombinant secretory component
DE69608668T2 (de) 1995-02-23 2001-02-01 Quest International B.V., Naarden Peptide für gewebe- und zellkulturmedien
US5741705A (en) * 1995-02-23 1998-04-21 Quest International Flavors & Food Ingredients Company, Division Of Indopco, Inc. Method for in vitro cell growth of eucaryotic cells using low molecular weight peptides
WO1996040866A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Novartis Ag Serum-free media for primitive hematopoietic cells and methods of use thereof
AUPN442295A0 (en) 1995-07-26 1995-08-17 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Regulated autocrine growth of mammalian cells
US5851800A (en) * 1996-05-14 1998-12-22 Pharmacia & Upjohn Ab Process for producing a protein
EP1482031B1 (en) 1996-08-30 2015-10-28 Life Technologies Corporation Serum-free mammalian cell culture medium, and uses thereof
JP4543402B2 (ja) 1996-10-10 2010-09-15 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 植物由来栄養素を含む動物細胞培養培地
US20040171152A1 (en) * 1996-10-10 2004-09-02 Invitrogen Corporation Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
FR2755976B1 (fr) * 1996-11-15 1999-01-15 Idm Immuno Designed Molecules Nouveaux complexes d'acides nucleiques et de polymere substitue par des residus entrainant la destabilisation des membranes cellulaires
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
ATE372376T1 (de) 1997-05-28 2007-09-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Kulturmedium mit sojabohnenextrakt als aminosäuren-quelle und ohne proteinkomplexe tierischen ursprungs
US6475725B1 (en) * 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
AT407255B (de) * 1997-06-20 2001-02-26 Immuno Ag Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons
EP0986644B1 (de) 1997-07-23 2006-10-04 Boehringer Mannheim GmbH Herstellung von erythropoietin durch endogene genaktivierung mit viralen promotoren
FR2775983B1 (fr) 1998-03-13 2000-11-10 Pasteur Merieux Serums Vacc Milieu et procede de propagation et de multiplication virales
WO1999057246A1 (en) 1998-05-01 1999-11-11 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6537782B1 (en) * 1998-06-01 2003-03-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Media for culturing animal cells and process for producing protein by using the same
EP0965583A1 (en) * 1998-06-15 1999-12-22 Transgene S.A. Polyamine compounds and compositions containing them useful for the transfer of active substances into a cell
US6406909B1 (en) * 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
AT409379B (de) * 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
ATE330003T1 (de) 1999-08-05 2006-07-15 Baxter Ag Rekombinanter stabiler zellklon, seine herstellung und verwendung
WO2001014529A1 (en) 1999-08-25 2001-03-01 Immunex Corporation Compositions and methods for improved cell culture
KR100369788B1 (ko) 1999-09-03 2003-01-29 동아제약 주식회사 재조합 인간 에리트로포이에틴의 제조방법
KR100581574B1 (ko) * 2000-03-22 2006-05-22 옥타게네 게엠베하 인간 세포주 내 재조합 혈액 응고 인자의 제조
DE10015688A1 (de) 2000-03-29 2001-10-18 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zum Zünden mindestens eines Zündelements für ein Rückhaltemittel in einem Kraftfahrzeug
US6596526B1 (en) 2000-06-09 2003-07-22 Baxter Aktiengesellschaft Furin polypeptides with improved characteristics
US7494659B2 (en) * 2000-09-25 2009-02-24 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh Live attenuated influenza vaccine
EP1208966A1 (en) 2000-11-27 2002-05-29 Cheng-Kun Liao Manufacturing process of patio tabletop glass with broken protection
DE10059175A1 (de) 2000-11-29 2002-06-20 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zur Anrufumleitung mittels eines Stellvertreters in einem Kommunikationssystem
EP1434857B1 (en) 2001-10-02 2007-08-01 Novo Nordisk Health Care AG Method for production of recombinant proteins in eukaryote cells
PT2287288E (pt) * 2002-07-09 2012-12-10 Baxter Int Meio isento de proteína animal para cultura de células
WO2004073701A1 (ja) * 2003-02-19 2004-09-02 Kuniyasu Soda Lfa-1抑制剤、及びその用途
KR20040088169A (ko) * 2003-04-09 2004-10-16 주식회사 제일생명공학서비스 동물세포 배양용 무혈청 배지
JP4740138B2 (ja) 2003-10-10 2011-08-03 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 真核生物細胞におけるポリペプチドの大規模生産方法及びそれに適した培養容器
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
JP4316484B2 (ja) 2004-12-10 2009-08-19 シャープ株式会社 画像形成装置、トナー濃度制御方法、トナー濃度制御プログラムおよびその記録媒体

Also Published As

Publication number Publication date
ES2400214T3 (es) 2013-04-08
PL2213726T3 (pl) 2013-04-30
CA2585518A1 (en) 2006-05-04
DK2213724T3 (da) 2012-10-15
EP2213726B1 (en) 2012-12-05
WO2006045438A1 (en) 2006-05-04
US10138461B2 (en) 2018-11-27
DK2218776T3 (da) 2012-10-15
PT2213726E (pt) 2013-01-22
US20080009040A1 (en) 2008-01-10
US9809796B2 (en) 2017-11-07
EP2213724B2 (en) 2023-12-27
PT2213724E (pt) 2012-10-09
US20130230919A1 (en) 2013-09-05
US20110081680A1 (en) 2011-04-07
RU2383616C2 (ru) 2010-03-10
SI2213725T1 (sl) 2012-10-30
AU2005299040A1 (en) 2006-05-04
SI2218776T1 (sl) 2012-10-30
ES2393317T3 (es) 2012-12-20
SI2213724T1 (sl) 2012-11-30
KR20070073930A (ko) 2007-07-10
JP2008517610A (ja) 2008-05-29
EP2213726A1 (en) 2010-08-04
US20080064080A1 (en) 2008-03-13
PL2218776T3 (pl) 2013-01-31
US20170267969A1 (en) 2017-09-21
AU2005299040B2 (en) 2011-07-07
EP2218776A1 (en) 2010-08-18
US20190078051A1 (en) 2019-03-14
FI2213725T4 (fi) 2024-04-29
HK1147284A1 (en) 2011-08-05
US20110081722A1 (en) 2011-04-07
PT2218776E (pt) 2012-09-24
CN101065480B (zh) 2010-05-26
DK2213726T3 (da) 2013-01-21
EP2213725A1 (en) 2010-08-04
US20180023048A1 (en) 2018-01-25
US20160083689A1 (en) 2016-03-24
EP2218776B1 (en) 2012-08-29
EP2213725B2 (en) 2024-02-14
DK2213725T4 (da) 2024-04-15
JP4847962B2 (ja) 2011-12-28
PL2213725T5 (pl) 2024-05-13
ES2394746T5 (en) 2025-01-20
CN101065480A (zh) 2007-10-31
EP1805298A1 (en) 2007-07-11
PL2213725T3 (pl) 2013-01-31
US8748156B2 (en) 2014-06-10
ES2393703T3 (es) 2012-12-27
US20060094104A1 (en) 2006-05-04
US10655099B2 (en) 2020-05-19
US9222075B2 (en) 2015-12-29
US9714411B2 (en) 2017-07-25
EP2213725B1 (en) 2012-08-22
HK1147110A1 (en) 2011-07-29
DK2213725T3 (da) 2012-09-24
PL2213724T3 (pl) 2013-02-28
EP2213724A1 (en) 2010-08-04
MX2007005132A (es) 2007-07-04
RU2007119719A (ru) 2008-12-10
KR101043547B1 (ko) 2011-06-21
US20080064105A1 (en) 2008-03-13
PT2213725E (pt) 2012-09-24
EP2213724B1 (en) 2012-09-26
US20150104867A1 (en) 2015-04-16
US8440408B2 (en) 2013-05-14
ES2394746T3 (es) 2013-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2393317T5 (en) Animal protein-free media for cultivation of cells
AU2011221414B2 (en) Animal Protein-Free Media for Cultivation of Cells
HK1147110B (en) Animal protein-free media for cultivation of cells
HK1147284B (en) Animal protein-free media for cultivation of cells