ES2579231T3 - Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos - Google Patents

Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos Download PDF

Info

Publication number
ES2579231T3
ES2579231T3 ES09703045.6T ES09703045T ES2579231T3 ES 2579231 T3 ES2579231 T3 ES 2579231T3 ES 09703045 T ES09703045 T ES 09703045T ES 2579231 T3 ES2579231 T3 ES 2579231T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
phybe
vector
vectors
replication
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES09703045.6T
Other languages
English (en)
Inventor
Chung-Ming Hsieh
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
AbbVie Inc
Original Assignee
AbbVie Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by AbbVie Inc filed Critical AbbVie Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2579231T3 publication Critical patent/ES2579231T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Un vector de expresión que comprende: (a) un origen de replicación OriP del virus de Epstein-Barr (EBV); (b) un origen de replicación de SV40; (b) un sitio de inserción para la inserción de un gen de interés; (d) un promotor EF-1α conectado operablemente al sitio de inserción; y, opcionalmente, que comprende (e) una secuencia de ácido nucleico que codifica una región constante de cadena pesada o ligera de un anticuerpo, conectada operablemente al sitio de inserción, en donde el origen de la replicación OriP está unido mediante un factor de iniciación de la replicación EBNA1 que actúa en trans que no está codificado por el vector de expresión.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
incluyen el uso de la región del núcleo de estreptavidina para preparar una molécula tetramérica scFv (Kipriyanov et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) y el uso de un residuo de cisteína, un marcador peptídico y una etiqueta de polihistidina C-terminal para preparar moléculas de scFv bivalentes y biotiniladas (Kipuyanov et al. (1994) Mol. Immunol. 31: 1047-1058). Las porciones de anticuerpo, tales como los fragmentos Fc, Fab y F(ab')2, se pueden preparar a partir de anticuerpos completos usando técnicas convencionales, tales como digestión con papaína o pepsina, respectivamente, de anticuerpos completos. Por otra parte, los anticuerpos, porciones de anticuerpos y moléculas de inmunoadherencia pueden ser obtenidos usando técnicas de ADN recombinante convencionales.
El término "dominio" se refiere a una estructura de proteína plegada que retiene su estructura terciaria independientemente del resto de la proteína. Generalmente, los dominios son responsables de las propiedades funcionales discretas de las proteínas, y en muchos casos se pueden añadir, eliminar o transferir a otras proteínas sin pérdida de la función del resto de la proteína y/o del dominio. Por dominio variable sencillo de anticuerpo se entiende un dominio de polipéptido plegado que comprende secuencias características de dominios variables de anticuerpos. Por lo tanto, incluye dominios completos de anticuerpos variables y los dominios variables modificados, por ejemplo, en el que uno o más bucles han sido reemplazados por secuencias que no son características de dominios variables de anticuerpo, o dominios variables de anticuerpo que han sido truncados o comprenden extensiones N-o C-terminales, así como fragmentos plegados de dominios variables que retienen al menos en parte la actividad de unión y la especificidad del dominio completo.
Los dominios variables de la invención pueden combinarse para formar un grupo de dominios; por ejemplo, se pueden combinar dominios complementarios, de manera que los dominios VL se combinen con los dominios VH. Los dominios no complementarios también pueden combinarse, p. ej., un dominio VH y un segundo dominio VH. Los dominios se pueden combinar de diversas maneras, que implican la conexión de los dominios por medios covalentes
o no covalentes.
Un "dAb" o "anticuerpo de dominio" se refiere a un polipéptido de dominio variable de un solo anticuerpo (VH o VL) que se une específicamente al antígeno. En una realización, el vector de la invención se utiliza para expresar un dAb.
La frase "anticuerpo recombinante" se refiere a anticuerpos que se preparan, expresan, crean o aíslan por medios recombinantes, tales como anticuerpos expresados usando un vector de expresión recombinante transfectado en una célula anfitriona, anticuerpos aislados de un biblioteca de anticuerpos recombinante, combinatoria, anticuerpos aislados de un animal (p. ej., un ratón) que es transgénico para genes de inmunoglobulina humana (véase, p. ej., Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295) o anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implica el corte y empalme de determinadas secuencias de genes de inmunoglobulina (tales como secuencias de genes de inmunoglobulina humanas) con otras secuencias de ADN. Los ejemplos de anticuerpos recombinantes incluyen anticuerpos quiméricos, injertados con CDR y humanizados.
El término "anticuerpo humano" se refiere a anticuerpos que tienen regiones variables y constantes correspondientes a, o derivadas de, secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana como describen, por ejemplo, Kabat et al. (Véase Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, Departamento de Salud y Servicios Humanos de EE.UU., Publicación NIH Núm. 91-3242). Los anticuerpos humanos de la invención, sin embargo, pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana (p. ej., mutaciones introducidas por medio de mutagénesis aleatoria o específica de sitio in vitro o por mutación somática in vivo), Por ejemplo en las CDR y en particular, CDR3.
Los anticuerpos humanos recombinantes de la invención tienen regiones variables, y también pueden incluir regiones constantes, derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana (véase Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, Departamento de Salud y Servicios Humanos de EE.UU., Publicación NIH Núm.. 91-3242). En ciertas realizaciones, sin embargo, tales anticuerpos humanos recombinantes son sometidos a mutagénesis in vitro (o, cuando se usa un animal transgénico para las secuencias de Ig humanas, mutagénesis somática in vivo) y por lo tanto las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque derivadas de y relacionadas con secuencias VH y VL de la línea germinal humana, pueden no existir de forma natural dentro del repertorio de la línea germinal de anticuerpos humanos in vivo. En ciertas realizaciones, sin embargo, dichos anticuerpos recombinantes son el resultado de mutagénesis selectiva o retromutación o ambas.
El término "retromutación" se refiere a un proceso en el que algunos o todos de los aminoácidos mutados somáticamente de un anticuerpo humano se remplazan por los correspondientes residuos de la línea germinal a partir de una secuencia de anticuerpo de la línea germinal homóloga. Las secuencias de cadena pesada y ligera de un anticuerpo humano de la invención se alinean por separado con las secuencias de la línea germinal en la base de datos VBASE para identificar las secuencias con la mayor homología. Las diferencias en el anticuerpo humano de la invención se devuelven a la secuencia de línea germinal mutando posiciones de nucleótidos definidas que codifican
8
imagen7
imagen8
imagen9
imagen10
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
los SEQ ID NO: 3-32.
Una realización de la invención incluye vectores que se pueden utilizar para expresar un anticuerpo completo, es decir, una región variable conectada a la región constante, ya sea para la cadena pesada o ligera. Por lo tanto, el gen de interés puede codificar una región variable de cadena pesada o de cadena ligera de anticuerpo, que puede ser de cualquier tipo de anticuerpo, p. ej., murino, quimérico, humanizado, y humano. Un gen de interés que codifica una región variable de cadena pesada o cadena ligera puede incluir la región variable completa, o, alternativamente, puede codificar solo un fragmento de la cadena pesada o de la cadena ligera, p. ej., la región de la porción de unión a antígeno. En una realización, el gen de interés codifica una región variable de anticuerpo murino o humano. En tal caso, la región constante puede ser emparejada con las especies de la región variable (los SEQ ID NO: 3-8, 27 y 28 codifican las regiones constantes murinas, mientras que los SEQ ID NO: 9-26 y 29-32 codifican las regiones constantes humanas).
En una realización, el vector de la invención incluye una secuencia de ácido nucleico que codifica una región constante de cadena pesada del anticuerpo que tiene ciertas características de isotipo y/o alotipo. La región constante de cadena pesada puede ser, por ejemplo, un isotipo gamma (IgG), tal como gamma 1, gamma 2, gamma 3, o gamma 4. En una realización, la región constante gamma 1 de la cadena pesada es un cierto alotipo, incluyendo, pero no limitado a, los alotipos z, a y z, no a. El alotipo z, a, también se conoce como alotipos G1m17 y G1m1, y corresponde a IGHG1 con Lys en la posición 214 (dentro de CH1), Asp en 356 (CH3), y Leu en 358 (CH3) (numeración de acuerdo con el sistema de numeración EU). El alotipo z, no a, también conocido como alotipos G1m17, y nG1m1, corresponde a IGHG1 con Lys en la posición 214 (dentro de CH1), Glu en 356 (CH3), y Met en 358 (CH3) (numeración de acuerdo con el sistema de numeración EU).
En otra realización, la región constante gamma 2 de la cadena pesada (hcG2) es un cierto alotipo, incluyendo, pero no limitado a, n-o n+. El alotipo n+ de hcG2, también conocido como G2m (n) o G2m (23), corresponde a IGHG2 con Thr en la posición 189 en CH1 y Met en la posición 282 (numeración de acuerdo con el sistema de numeración EU). El alotipo n-de hcG2, también conocido como G2m (n-), corresponde a IGHG2 con Pro en la posición 189 en CH1 y Val en la posición 282 (numeración de acuerdo con el sistema de numeración EU). Los detalles adicionales de los alotipos n + y n-son descritos por Hougs et al. (2001) Immunogenetics 52:242 y Brusco et al. (1995) Immunogenetics 42:414.
En otras realizaciones, la región constante de cadena pesada puede ser un isotipo IgM, IgA (IgA1 o IgA2), IgD, o IgE.
En una realización, la región constante de cadena pesada puede tener las siguientes características de isotipo y alotipo humanos: gamma 1, z, a; gamma 1, z, no a; gamma 2, n+; gamma 2, n-; o gamma 4. En una realización, el isotipo/alotipo gamma 1, z, no a puede incluir una mutación en la posición 234 de la región constante de la cadena pesada. En una realización adicional, el isotipo/alotipo gamma 1, z, no a puede incluir mutaciones en la posición 234 y 235 o 234 y 237 de la región constante de cadena pesada. Los ejemplos de tales vectores se proporcionan en las Figuras 8 a 25.
En otro ejemplo, la región constante de la cadena ligera codificada en el vector de la invención puede comprender un isotipo kappa o isotipo lambda.
Las regiones constantes codificadas por el vector de la invención no están limitadas a las humanas, sino que en su lugar pueden incluir regiones constantes murinas o de otras especies. En una realización, el vector de expresión de la invención comprende un ácido nucleico que codifica una región constante de cadena pesada que es o bien un isotipo gamma 1 murino o un isotipo gamma 2a murino, o una región constante de cadena ligera que es un isotipo kappa murino.
Dos vectores de la invención, pHybC y pHybE, son vectores vacíos ya que estos vectores no contienen regiones constantes, y pueden ser utilizados para la clonación de genes de interés. Las descripciones de pHybC y pHybE se proporcionan a continuación, y los mapas de estos vectores se pueden encontrar en las Figuras 1 y 2.
pHybC El vector pHybC (vacío) contiene dos orígenes de replicación virales, de manera que el vector se puede replicar en diferentes líneas celulares. pHybC contiene los siguientes elementos: un origen de replicación de SV40 ( "Ori SV40"), que permite la replicación del plásmido vector en células que expresan la proteína grande del antígeno T de SV40 (p. ej., una célula COS7); un promotor de CMV ("pCMV") conectado operablemente al sitio de inserción para un gen de interés; una secuencia líder tripartita (TPL); un sitio donador de empalme (SD); un elemento potenciador tardío principal de adenovirus (enh MLP); un sitio aceptor de empalme (SA); una región de marco de lectura abierto (ORF) de un gen de interés seguida de una señal de poli A (pA); un elemento bivalente simétrico (DS); un origen de replicación eucariota derivado del virus de Epstein Barr (OriP), que permite la replicación del plásmido vector en células que expresan la proteína EBNA-1 viral (por ejemplo, células HEK-293-6E); una región de repetición (FR); un marcador de resistencia a la ampicilina (AmpR); y un origen de replicación bacteriano (pMB1ori).
13 5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
El vector pHybC utiliza el promotor pCMV, uno de los elementos promotores más fuertes disponibles. Un mapa de vector de pHybC (vacío) se describe en la Figura 1. La secuencia de ácido nucleico del vector pHybC se expone en el SEQ ID NO: 1.
pHybE El vector pHybE (vacío) contiene dos orígenes de replicación, de tal manera que el vector se puede replicar en diferentes líneas celulares. pHybE contiene los siguientes elementos: un origen de replicación de SV40 ("Ori SV40"), que permite la replicación del plásmido vector en células que expresan la proteína grande del antígeno T de SV40 (por ejemplo, una célula COS7); un promotor de eucariota EF-1a conectado operablemente al sitio de inserción para un gen de interés; una región de marco de lectura abierto (ORF) de un gen de interés seguida de una señal de poli A (pA); un elemento bivalente simétrico (DS); un origen de replicación eucariótico derivado de un virus de Epstein Barr (OriP); una región de repetición (FR); un marcador de resistencia a la ampicilina (AmpR); y un origen de replicación bacteriano (pMB1ori). Un mapa de vector de pHybE (vacío) se describe en la Figura 2. pHybE se distingue de pHybC en que pHybE contiene un promotor EF-1a conectado operablemente al sitio de inserción para el gen de interés, mientras pHybC contiene un promotor de CMV. La secuencia de ácido nucleico del vector pHybE se expone en el SEQ ID NO: 2.
Los vectores mencionados a continuación se basan en pHybE o en pHybC, y, además, contienen regiones constantes de cadena pesada o ligera de inmunoglobulina. Al igual que con pHybE y pHybC, los siguientes vectores tienen sitios de clonación que se pueden utilizar para la inserción de un gen de interés, p. ej., una secuencia codificante de una región variable de inmunoglobulina, o una porción de unión a antígeno de la misma. En cada caso, el sitio de clonación para el gen de interés es adyacente a la secuencia codificante de una región constante contenida en el vector. Por lo tanto, los vectores siguientes se pueden utilizar para expresar cadenas pesadas o ligeras de anticuerpo que contienen una región constante concreta, y una región variable concreta. Al igual que con pHybC y pHybE, cada uno de los vectores de la invención mencionados a continuación contienen orígenes de replicación múltiples, de tal manera que la cadena ligera o pesada del anticuerpo se pueden expresar en diferentes líneas celulares utilizando el mismo vector. Las descripciones de vectores adicionales de la invención se exponen a continuación (véanse también los mapas de vectores proporcionados en las Figuras 8 a 25). Cabe señalar que los vectores pHyb descritos como versión 1 (V1) tienen un sitio Swa I adicional aguas arriba del sitio de restricción Srf I, mientras que los vectores descritos como pHyb versión 2 (V2) no tienen el sitio Swa I adicional.
Vectores de la invención que comprenden regiones constantes murinas
pHybC-mCg2a El vector pHybC-mCg2a está basado en el vector pHybC (por lo tanto contiene todos los elementos descritos anteriormente para pHybC). Este vector también comprende la secuencia codificante de inmunoglobulina murina para la región constante de cadena pesada gamma 2a. Por lo tanto, en una realización, el vector de pHybCmCg2a se puede utilizar para expresar una cadena pesada del anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina (o una porción de la misma) y una región constante de cadena pesada gamma 2 murina. Alternativamente, pHybC-mCg2 se puede utilizar para expresar un gen de interés fusionado a una región constante de cadena pesada gamma 2, p. ej, una proteína de fusión de Fc. La Figura 8 muestra un mapa de pHybC-mBR3-mCg2a que comprende la secuencia codificante para el dominio extracelular (ECD) de la proteína BR3 murina como gen de interés. La secuencia de ácido nucleico de pHybC-mBR3-mCg2a se expone en el SEQ ID NO:
27.
pHybE-MCK El vector pHybE-MCK está basado en el vector pHybE (por lo tanto contiene todos los elementos descritos anteriormente para pHybE). pHybE-MCK también comprende la secuencia codificante de inmunoglobulina murina para la región constante de la cadena ligera kappa. Por lo tanto, en una realización, el vector pHybE-MCK se puede utilizar para expresar una cadena ligera de anticuerpo que comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina y una región constante de cadena ligera kappa murina. Alternativamente, pHybE-MCK se puede utilizar para expresar un gen de interés fusionado a una región constante de cadena ligera kappa murina. Un mapa de vector de pHybE-MCK V2 se proporciona en la Figura 25. La secuencia de ácido nucleico de pHybE-MCK V1 se expone en el SEQ ID NO: 3 y la secuencia de ácido nucleico de pHybE-MCK V2 se expone en el SEQ ID NO: 4.
pHybE-mCg1 pHybE-mCg1 está basado en el vector pHybE (por lo tanto contiene todos los elementos descritos anteriormente para pHybE). Este vector también comprende la secuencia codificante de inmunoglobulina murina para la región constante de cadena pesada gamma 1. Por lo tanto, en una realización, el vector de pHybE-mCg1 se puede utilizar para expresar una cadena pesada del anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina y una región constante de la cadena pesada gamma 1 murina. Alternativamente, pHybEmCg1 se puede utilizar para expresar un gen de interés fusionado a una región constante de la cadena pesada gamma 1 murina, p. ej, una proteína de fusión de Fc. Un mapa de vector de pHybE-mCg1 V2 se proporciona en la Figura 21. La secuencia de ácido nucleico de pHybE-mCg1 V1 se expone en el SEQ ID NO: 5 y la secuencia de ácido nucleico de pHybE-mCg1 V2 se expone en el SEQ ID NO: 6.
pHYbE-mCg2a pHybE-mCg2a está basado en el vector pHybE (por lo tanto contiene todos los elementos descritos anteriormente para pHybE). Este vector también comprende la secuencia codificante de inmunoglobulina murina
14
imagen11
imagen12
imagen13
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
memoria. El grado de identidad de secuencia entre dos moléculas de ácido nucleico afecta a la eficacia y la intensidad de sucesos de hibridación entre tales moléculas. Una secuencia de ácido nucleico parcialmente idéntica inhibirá al menos parcialmente la hibridación de una secuencia completamente idéntica con una molécula diana. La inhibición de la hibridación de la secuencia completamente idéntica puede evaluarse usando análisis de hibridación que son bien conocidos en la técnica (por ejemplo, transferencia Southern, transferencia Northern, hibridación en solución, o similares, véase Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Nueva York; o Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York (1997)). Tales ensayos pueden realizarse usando grados variables de selectividad, por ejemplo, usando condiciones que varían de baja a alta rigurosidad. Si se emplean condiciones de baja rigurosidad, la ausencia de unión no específica puede evaluarse usando una sonda secundaria que carece incluso de un grado parcial de identidad de secuencia (por ejemplo, una sonda que tiene menos de aproximadamente 30% de identidad de secuencia con la molécula diana), de manera que, en ausencia de eventos de unión no específica, la sonda secundaria no hibridará con la diana.
Cuando se utiliza un sistema de detección basado en la hibridación, se elige una sonda de ácido nucleico que es complementaria a una secuencia de ácido nucleico diana, y a continuación mediante la selección de las condiciones apropiadas la sonda y la secuencia diana "hibridan selectivamente", o se unen, entre sí para formar una molécula híbrida. Una molécula de ácido nucleico que es capaz de hibridarse selectivamente a una secuencia diana en condiciones "moderadamente rigurosas" típicamente hibrida en condiciones que permiten la detección de una secuencia de ácido nucleico diana de al menos aproximadamente 10-14 nucleótidos de longitud que tiene al menos aproximadamente 70% de identidad de secuencia con la secuencia de la sonda de ácido nucleico seleccionada. Las condiciones de hibridación rigurosas típicamente permiten la detección de secuencias de ácidos nucleicos diana de al menos aproximadamente 10-14 nucleótidos de longitud que tienen una identidad de secuencia de más de aproximadamente 90 a 95% con la secuencia de la sonda de ácido nucleico seleccionada. Las condiciones de hibridación útiles para la hibridación de la sonda/diana, donde la sonda y la diana tienen un grado específico de identidad de secuencia, pueden determinarse como se conoce en la técnica (véase, por ejemplo, Nucleic Acid Hybridization: A Practical Approach, editores B. D. Hames y S. J. Higgins, (1985) Oxford; Washington DC.; IRL Press).
Con respecto a las condiciones de rigurosidad para la hibridación, es bien sabido en la técnica que se pueden emplear numerosas condiciones equivalentes para establecer una rigurosidad concreta variando, por ejemplo, los siguientes factores: la longitud y naturaleza de las secuencias de la sonda y diana, la composición de bases de las diversas secuencias, las concentraciones de sales y otros componentes de la solución de hibridación, la presencia o ausencia de agentes de bloqueo o detergentes en las soluciones de hibridación (p. ej., formamida, sulfato de dextrano y polietilenglicol, y dodecilsulfato de sodio), los parámetros de temperatura y de tiempo de la reacción de hibridación, así como, variando las condiciones de lavado. La selección de un conjunto particular de condiciones de hibridación se realiza siguiendo procedimientos convencionales en la técnica (véase, por ejemplo, véase Sambrook, et al., Supra, o Ausubel et al., Supra). Un primer polinucleótido está "derivado de" un segundo polinucleótido si tiene la misma o sustancialmente la misma secuencia de pares de bases que una región del segundo polinucleótido, su ADNc, sus complementos, o si presenta una identidad de secuencia como se ha descrito anteriormente. Un primer polipéptido está "derivado de" un segundo polipéptido si está (i) codificado por un primer polinucleótido derivado de un segundo polinucleótido, o (ii) muestra una identidad de secuencia con los segundos polipéptidos como se ha descrito anteriormente.
La invención también proporciona un kit que contiene uno o más vectores de la invención en un recipiente adecuado tal como un vial. Los vectores de expresión pueden contener al menos un sitio de clonación para la inserción de una secuencia de interés seleccionada, o pueden tener un gen de interés específico ya presente en el vector. El vector puede ser proporcionado en una forma deshidratada o liofilizada, o en una solución acuosa. El kit puede incluir un tampón para reconstituir el polinucleótido deshidratado. Otros reactivos pueden incluirse en el kit, por ejemplo, tampones de reacción, vectores de control positivo y negativo para la comparación. Generalmente, el kit también incluirá instrucciones para el uso de los reactivos en el mismo.
III. Usos de los vectores de la invención La invención incluye métodos para expresar proteínas utilizando los vectores descritos en la presente memoria. Por lo tanto, la invención incluye un método para producir una proteína recombinante que comprende introducir el vector de expresión de la invención en una célula anfitriona de mamífero, cultivar la célula anfitriona de mamífero bajo condiciones adecuadas para expresar la proteína, y recuperar la proteína. Una ventaja del vector de la invención es que proporciona una alta producción de proteína utilizando sistemas de cultivo de células de mamíferos.
Cualquier tipo de célula susceptible de expresión génica a través de un ácido nucleico o vector de expresión de la presente invención se puede utilizar en la presente invención como célula anfitriona. El término "células anfitrionas" se refiere a células que han sido transformadas con un vector construido utilizando técnicas de ADN recombinante.
Los expertos en la técnica puede seleccionar una línea de célula anfitriona concreta que sea la más adecuada para
18
imagen14
imagen15
imagen16
imagen17
imagen18
Tabla 2: Conjunto maestro ilustrativo de vectores pHybE preparados para la expresión de IgG humana y de ratón
imagen19
Vectores de cadena pesada Vectores cadena ligera
Humano
pHybE-,hCg1, z ,a pHybE-hCk
imagen20
pHybE-,hCg1, z, no a pHybE-hCl
imagen21
pHybE-,hCg1, z, no a, (mut 234235) imagen22
imagen23
pHybE-,hCg1, z, no a, (mut 234237) imagen24
imagen25
pHybE-,hCg2,n+ imagen26
imagen27
pHybE-,hCg2,n imagen28
imagen29
pHybE-,hCg4 imagen30
Ratón
pHybE-mCg1 pHybE-mCk
imagen31
pHybE-mCg2a imagen32
Compendio:
5 Los experimentos anteriores descritos en los Ejemplos 1-4 muestran que los vectores pHyb-C y pHyb-E son funcionales en más de una línea celular a la vez que proporcionar una amplia expresión de proteínas que a menudo supera los niveles de expresión observados con los vectores pBOS y pTT3 originales. Este aumento de expresión fue particularmente pronunciado cuando se utilizó el vector pHyb-E para expresar la proteína de fusión mBR3-Fc de bajo rendimiento en las células HEK-293-6E. Como se muestra mediante estos datos, los vectores pHyb-C y pHyb-E
10 representan un avance significativo en la tecnología de vectores sobre los vectores utilizados previamente.
Tabla 3: Visión de conjunto de vectores de la invención Los vectores pHyb descritos como versión 1 tienen un sitio adicional Swa I aguas arriba del sitio de restricción Srf I. Los pHyb vectores descritos como versión 2, no tienen sitio adicional Swa I.
SEQ ID NO
DESCRIPCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
1
pHybC-vacío
2
pHybE-vacío
3
pJP180 ; pHybE-mCk V1
4
pJP193 ; pHybE-mCk V2
5
pJP176 ; pHybE-V1 mCg1
6
pJP189 ; pHybE-mCg1 V2
7
pJP177 ; pHybE-mCg2a V1
8
pJP190 ; pHybE-mCg2a V2
9
pJP178 ; pHybE-hCk V1
10
pJP191 ; pHybE-hCk V2
11
pJP179 ; pHybE-hCk V1
12
pJP192 ; pHybE-hC1 V2
13
pJP170 ; pHybE-hCg1, z, a V1
14
pJP182 ; pHybE-hCg1, z, a V2
15
pJP171 ; pHybE-hCg1,z,no a V1
16
pJP183 ; pHybE-hCg1,z,no a V2
17
pJP172 ; pHybE-hCg1,z,no a,mut (234,235) V1
18
pJP184 ; pHybE-hCg1,z,no a,mut (234,235) V2
19
pJP173 ; pHybE-hCg1,z,no a,mut (234,237) V1
20
pJP185 ; pHybE-hCg1,z,no a,mut (234,237) V2
24

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
ES09703045.6T 2008-01-15 2009-01-15 Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos Active ES2579231T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2128208P 2008-01-15 2008-01-15
US21282 2008-01-15
US10454608P 2008-10-10 2008-10-10
US104546 2008-10-10
PCT/US2009/031136 WO2009091912A2 (en) 2008-01-15 2009-01-15 Improved mammalian expression vectors and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2579231T3 true ES2579231T3 (es) 2016-08-08

Family

ID=40885886

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES09703045.6T Active ES2579231T3 (es) 2008-01-15 2009-01-15 Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos

Country Status (16)

Country Link
US (3) US8187836B2 (es)
EP (2) EP2240581B1 (es)
JP (2) JP5635912B2 (es)
KR (1) KR20100113112A (es)
CN (1) CN101970655B (es)
AU (1) AU2009206089B2 (es)
BR (1) BRPI0906490A2 (es)
CA (1) CA2711962A1 (es)
ES (1) ES2579231T3 (es)
IL (1) IL206774A0 (es)
MX (1) MX2010007729A (es)
NZ (2) NZ600979A (es)
RU (1) RU2502800C2 (es)
TW (1) TWI478937B (es)
WO (1) WO2009091912A2 (es)
ZA (1) ZA201004736B (es)

Families Citing this family (122)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
ATE239041T1 (de) * 1996-02-09 2003-05-15 Basf Ag Humane antikörper welche an humanen tnfalpha binden
US20160279239A1 (en) 2011-05-02 2016-09-29 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of anti-cd74 antibody for systemic lupus erythematosus and autoimmune disease
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
US20040131614A1 (en) * 2002-07-19 2004-07-08 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of pulmonary disorders using TNFalpha inhibitor
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
MY150740A (en) * 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) * 2004-04-09 2014-06-01 艾伯維生物技術有限責任公司 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
WO2006041970A2 (en) * 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
US20160355591A1 (en) 2011-05-02 2016-12-08 Immunomedics, Inc. Subcutaneous anti-hla-dr monoclonal antibody for treatment of hematologic malignancies
JP5757495B2 (ja) * 2005-05-16 2015-07-29 アッヴィ バイオテクノロジー リミテッド びらん性多発性関節炎の治療のためのｔｎｆ阻害剤の使用
TW201337266A (zh) 2005-11-01 2013-09-16 Abbott Biotech Ltd 利用生物標記診斷關節黏連脊椎炎之方法及組合物
CN102391358B (zh) 2006-04-05 2016-08-10 艾伯维生物技术有限公司 抗体纯化
US9399061B2 (en) * 2006-04-10 2016-07-26 Abbvie Biotechnology Ltd Methods for determining efficacy of TNF-α inhibitors for treatment of rheumatoid arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
WO2008063213A2 (en) 2006-04-10 2008-05-29 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
WO2007120626A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
CN103316402A (zh) 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
EP2684895A1 (en) 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
EP2171451A4 (en) 2007-06-11 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd METHOD FOR TREATING JUVENILIAN IDIOPATHIC ARTHRITIS
CA2693771A1 (en) * 2007-07-13 2009-01-22 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for pulmonary administration of a tnf.alpha. inhibitor
MX2010001488A (es) 2007-08-08 2010-03-01 Abbott Lab Composiciones y metodos para cristalizar anticuerpos.
US8420081B2 (en) 2007-11-30 2013-04-16 Abbvie, Inc. Antibody formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
MX2010007393A (es) * 2008-01-03 2010-11-09 Abbott Biotech Ltd Anticipacion de eficacia a largo plazo de un compuesto en el tratamiento de psoriasis.
ES2579231T3 (es) * 2008-01-15 2016-08-08 Abbvie Inc Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos
EP2297209A4 (en) 2008-06-03 2012-08-01 Abbott Lab IMMUNOGLOBULINS WITH TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF
AU2010242972B2 (en) 2009-04-29 2015-07-09 Abbvie Biotechnology Ltd Automatic injection device
US11512326B2 (en) 2009-05-26 2022-11-29 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Small angiotensin peptide expression system in mammalian cells
CA2771575A1 (en) 2009-08-29 2011-03-03 Abbott Laboratories Therapeutic dll4 binding proteins
EP2512558A4 (en) 2009-12-15 2014-08-13 Abbvie Biotechnology Ltd IMPROVED TRIP KNOB FOR AUTOMATIC INJECTION DEVICE
WO2011109298A2 (en) 2010-03-02 2011-09-09 Abbott Laboratories Therapeutic dll4 binding proteins
MX2012011629A (es) 2010-04-07 2013-03-05 Abbvie Inc Proteinas de union a tnf-alfa.
MX2012014080A (es) 2010-06-03 2013-05-01 Abbvie Biotechnology Ltd Usos y composiciones para el tratamiento de hidradenitis superativa (hs).
KR20130100118A (ko) 2010-08-03 2013-09-09 아비에 인코포레이티드 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
ES2665954T3 (es) 2010-08-19 2018-04-30 Zoetis Belgium S.A. Anticuerpos anti-NGF y su uso
US9046513B2 (en) 2010-08-26 2015-06-02 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UA113500C2 (xx) 2010-10-29 2017-02-10 Одержані екструзією розплаву тверді дисперсії, що містять індукуючий апоптоз засіб
KR20180059560A (ko) 2010-10-29 2018-06-04 애브비 인코포레이티드 아폽토시스―유도제를 포함하는 고체 분산체
TWI603739B (zh) 2010-11-11 2017-11-01 艾伯維生物技術有限責任公司 具有增進高濃度之抗－ＴＮＦα抗體之液體調配物
RU2593231C2 (ru) 2010-11-23 2016-08-10 ЭббВи Айэленд Анлимитед Компани Способы лечения с использованием селективных ингибиторов bcl-2
WO2012071336A1 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Abbott Laboratories Salts and crystalline forms of an apoptosis-inducing agent
MX2013007332A (es) 2010-12-21 2014-01-23 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable doble biespecificas de il-1 alfa y beta y su uso.
SG192119A1 (en) 2011-01-24 2013-08-30 Abbvie Biotechnology Ltd Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AU2012250924B2 (en) 2011-05-02 2017-05-25 Immunomedics, Inc. Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration
US9249425B2 (en) * 2011-05-16 2016-02-02 The Trustees Of The University Of Pennslyvania Proviral plasmids and production of recombinant adeno-associated virus
AU2012328921B2 (en) 2011-10-24 2017-05-11 Abbvie Inc. Immunobinders directed against TNF
UY34410A (es) 2011-10-24 2013-05-31 Abbvie Inc Inmunoligantes biespecificos dirigidos contra tnf
AR088513A1 (es) 2011-10-24 2014-06-18 Abbvie Inc Inmunoenlazantes dirigidos contra esclerostina
WO2013101972A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AR089529A1 (es) 2011-12-30 2014-08-27 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra il-13 y/o il-17
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9249182B2 (en) 2012-05-24 2016-02-02 Abbvie, Inc. Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
AR091755A1 (es) 2012-07-12 2015-02-25 Abbvie Inc Proteinas de union a il-1
HK1211981A1 (en) 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
PE20151179A1 (es) 2012-11-01 2015-09-12 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas
WO2014089209A2 (en) 2012-12-04 2014-06-12 Abbvie, Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins
US20160194660A1 (en) * 2012-12-21 2016-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Expression vectors for recombinant protein production in mammalian cells
US9856319B2 (en) 2012-12-28 2018-01-02 Abbvie Inc. Monovalent binding proteins
US20140219913A1 (en) 2012-12-28 2014-08-07 Abbvie, Inc. Dual Specific Binding Proteins Having a Receptor Sequence
US10981961B2 (en) 2013-03-11 2021-04-20 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Delivery of card protein as therapy for occular inflammation
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
BR112015017307A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-21 Abbvie Inc composições de espécies com baixa acidez e métodos para produção e uso das mesmas
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014159554A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing the same using displacement chromatography
CA2904407A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against tnf.alpha.
AU2014227732A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 beta and IL-17
WO2015035044A2 (en) 2013-09-04 2015-03-12 Abbvie Biotherapeutics Inc. Fc VARIANTS WITH IMPROVED ANTIBODY-DEPENDENT CELL-MEDIATED CYTOTOXICITY
US9598667B2 (en) 2013-10-04 2017-03-21 Abbvie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
MX2016004420A (es) 2013-10-06 2017-03-31 Abbvie Inc Proteinas de union especificas duales dirigidas contra los receptores de células inmunes y autoantígenos de señalización de tlr.
AU2014337263B2 (en) 2013-10-16 2019-12-12 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
RS60387B1 (sr) 2014-01-15 2020-07-31 Medimmune Llc Rsv-specifična antitela i njihovi funkcionalni delovi
EP3105311A1 (en) 2014-02-10 2016-12-21 Univercells NV System, apparatus and method for biomolecules production
US11053291B2 (en) 2014-02-19 2021-07-06 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Delivery of Nrf2 as therapy for protection against reactive oxygen species
EP4050020A1 (en) * 2014-03-11 2022-08-31 University of Florida Research Foundation, Inc. Aav-expressed m013 protein as an anti-inflammatroy therapeutic for use in a method of treating inflammatory ocular disease
TWI731535B (zh) 2014-03-21 2021-06-21 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
WO2015191934A2 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Abbvie Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins for treating brain and neurological diseases
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
US20160185848A1 (en) 2014-07-09 2016-06-30 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars
EP3183580B1 (en) 2014-08-21 2025-03-26 Eurofins DiscoverX Corporation Homogenous thermal shift ligand binding assay
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP3247718B1 (en) 2015-01-21 2021-09-01 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
CN105315371B (zh) * 2015-03-05 2018-05-29 北京百特美博生物科技有限公司 抗人il-17单克隆抗体
TWI554608B (zh) * 2015-03-27 2016-10-21 Univ China Medical A nucleic acid sequence segment for enhancing protein expression, an expression vector comprising a sequence segment thereof, and a kit comprising its expression vector
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
WO2017085693A1 (en) 2015-11-19 2017-05-26 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Reporter gene assay methods for identifying and analyzing multi-specific binding proteins
EP3411401A1 (en) 2016-02-03 2018-12-12 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
JP6994018B2 (ja) 2016-07-26 2022-01-14 バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド 新規アデノ随伴ウイルスキャプシドタンパク質
JP7215994B2 (ja) 2016-09-06 2023-01-31 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 人工多能性幹細胞由来の免疫細胞
IL322146A (en) 2016-11-17 2025-09-01 Nationwide Childrens Hospital Inc Intrathecal administration of adenovirus encoding methyl-CpG-binding protein 2
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
KR102616820B1 (ko) 2017-03-17 2023-12-21 애드베룸 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드 향상된 유전자 발현을 위한 조성물 및 방법
CA3044082A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy
US11572544B2 (en) 2017-06-14 2023-02-07 The Children's Medical Center Corporation Hematopoietic stem and progenitor cells derived from hemogenic endothelial cells by episomal plasmid gene transfer
CN107254472A (zh) * 2017-06-15 2017-10-17 江苏迈健生物科技发展股份有限公司 人表皮生长因子hEGF基因优化序列及其制备方法和应用
CN107254481A (zh) * 2017-06-15 2017-10-17 江苏迈健生物科技发展股份有限公司 人重组表皮生长因子MJ‑hEGF基因优化序列及其制备方法和应用
PE20210844A1 (es) 2017-11-01 2021-05-10 Hoffmann La Roche Contorsbodies 2 + biespecificos
RU2759681C1 (ru) 2017-12-13 2021-11-16 Иновио Фармасьютикалз, Инк. Противораковые вакцины, нацеленные на boris, и способы их применения
JP2021506255A (ja) 2017-12-13 2021-02-22 イノビオ ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド Ｐｒａｍｅを標的とするがんワクチンおよびその使用
KR20210008501A (ko) 2018-05-09 2021-01-22 바이오마린 파머수티컬 인크. 페닐케톤뇨증을 치료하는 방법
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
US12576143B2 (en) 2018-10-19 2026-03-17 Nouscom Ag Teleost invariant chain cancer vaccine
CN114250226B (zh) * 2020-09-25 2026-08-11 北京安龙生物医药有限公司 用于高水平表达外源基因的表达载体
KR20230128466A (ko) * 2021-01-07 2023-09-05 내셔날 리서치 카운실 오브 캐나다 안정한 세포주를 사용한 생물학적 제제의 생산을 위한엄격하게-조절된 유도성 발현 시스템
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
WO2023244746A1 (en) 2022-06-15 2023-12-21 Abbvie Inc. Risankizumab compositions

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3431140A1 (de) 1984-08-24 1986-03-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Enhancer fuer eukaryotische expressionssysteme
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
DK0897983T3 (da) 1991-10-25 2003-08-11 Immunex Corp Antistoffer mod CD40-L
NZ311335A (en) 1995-06-07 1998-05-27 Immunex Corp Cd40l muteins and their use as ligands
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE69918090T2 (de) * 1998-04-24 2005-06-16 University Of Florida, Gainesville Rekombinanter adeno-assoziierter viraler vektor, der alpha-1 antitrypsin kodiert, zur gentherapie
US6440741B2 (en) * 1999-03-15 2002-08-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Expression vector for consistent cellular expression of the tet on repressor in multiple cell types
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
EP1644508A1 (en) 2003-07-11 2006-04-12 Cytos Biotechnology AG Gene expression system
US7968684B2 (en) 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
US20060018902A1 (en) 2004-04-09 2006-01-26 Reilly Edward B Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof
SG188175A1 (en) * 2004-06-03 2013-03-28 Novimmune Sa Anti-cd3 antibodies and methods of use thereof
CN101595228A (zh) * 2005-07-21 2009-12-02 艾博特公司 包括sorf构建体的多基因表达和使用多蛋白、前体蛋白和蛋白酶解的方法
ES2579231T3 (es) * 2008-01-15 2016-08-08 Abbvie Inc Vectores de expresión de mamíferos mejorados y usos de los mismos

Also Published As

Publication number Publication date
CN101970655A (zh) 2011-02-09
TWI478937B (zh) 2015-04-01
WO2009091912A2 (en) 2009-07-23
AU2009206089B2 (en) 2014-08-28
AU2009206089A1 (en) 2009-07-23
EP2240581A2 (en) 2010-10-20
NZ586576A (en) 2012-08-31
MX2010007729A (es) 2010-08-04
BRPI0906490A2 (pt) 2015-07-14
CA2711962A1 (en) 2009-07-23
KR20100113112A (ko) 2010-10-20
TW200940563A (en) 2009-10-01
RU2010133938A (ru) 2012-02-27
US20090239259A1 (en) 2009-09-24
IL206774A0 (en) 2010-12-30
EP2784089A1 (en) 2014-10-01
EP2240581B1 (en) 2016-05-11
US8455219B2 (en) 2013-06-04
WO2009091912A3 (en) 2009-09-24
JP5635912B2 (ja) 2014-12-03
NZ600979A (en) 2014-01-31
US8187836B2 (en) 2012-05-29
CN101970655B (zh) 2014-03-05
RU2502800C2 (ru) 2013-12-27
US20120237976A1 (en) 2012-09-20
JP2014147390A (ja) 2014-08-21
EP2240581A4 (en) 2011-06-22
US20130344537A1 (en) 2013-12-26
JP2011509673A (ja) 2011-03-31
ZA201004736B (en) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2618316T3 (es) Anticuerpo anti EPHA2
ES2555979T3 (es) Anticuerpos monoclonales contra la claudina-18 para el tratamiento del cáncer
ES2540854T3 (es) Usos de antagonistas MDL-1
ES2563321T5 (es) Anticuerpos solubles “solo de cadena pesada”
ES2603559T3 (es) Cadena ligera común de ratón
Yoshida et al. HPC-1 is associated with synaptotagmin and omega-conotoxin receptor.
CN103596424B (zh) 表达具有共同轻链的抗体的非人动物
RU2603090C2 (ru) Мыши с ограниченной тяжелой цепью иммуноглобулина
JP5099405B2 (ja) 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
ES2230848T3 (es) Anticuerpos monoclonales con inmunogenicidad reducida.
ES2562627T3 (es) Anticuerpos anti-C5aR humanizados
ES2712207T3 (es) Ratones que expresan un repertorio limitado de cadenas ligeras de inmunoglobulina
ES2602633T3 (es) Anticuerpos anti-PSGL-1
ES2872048T3 (es) Métodos celulares para acoplar interacciones de proteínas y selección y diversificación de moléculas de unión
JP2007332152A (ja) 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
CN101263158B (zh) 表达人源化免疫球蛋白的转基因动物中b细胞凋亡的抑制
KR20100113112A (ko) 개선된 포유동물 발현 벡터 및 이의 용도
Khass et al. The sequences encoded by immunoglobulin diversity (DH) gene segments play key roles in controlling B‐cell development, antigen‐binding site diversity, and antibody production
Li et al. Structure‐function analysis of a lupus anti‐DNA autoantibody: central role of the heavy chain complementarity‐determining region 3 Arg in binding of double‐and single‐stranded DNA
EP3476942B1 (en) Long germline dh genes and long hcdr3 antibodies
EP3625250B1 (en) Single chain vh and heavy chain antibodies
CN107207581A (zh) 用于制备优化的治疗分子的方法
ES2620410T3 (es) Selección de células que expresan polipéptidos heterómeros
CN119264252B (zh) 一种针对胶质纤维酸性蛋白的抗体及其制备方法和应用
Chang et al. Humanized mouse G6 anti-idiotypic monoclonal antibody has therapeutic potential against IGHV1-69 germline gene-based B-CLL