ES2714911T3

ES2714911T3 - Ghrelina para uso en el tratamiento de lesión cerebral traumática leve

Info

Publication number: ES2714911T3
Application number: ES15708057T
Authority: ES
Inventors: Vishal Bansal
Original assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Current assignee: University of California Berkeley; University of California San Diego UCSD
Priority date: 2014-02-05
Filing date: 2015-02-05
Publication date: 2019-05-30
Anticipated expiration: 2035-02-05
Also published as: DK3102226T3; IL246957A0; IL293712B1; US20150216939A1; EP3102226A1; CA2945487A1; IL293712B2; US20220401520A1; IL293712A; US11241483B2; US10105416B2; EP3102226B1; US10617740B2; AU2015214028B2; MX2016010085A; US9119832B2; WO2015120203A1; IL246957B; MX383323B; EA039367B1

Abstract

Ghrelina para uso en el tratamiento de un traumatismo craneoencefálico en un sujeto, en donde la ghrelina se administra al sujeto en una cantidad suficiente para tratar el traumatismo craneoencefálico, en donde cuando se administra, no se administra un modulador de receptor de andrógeno selectivo.

Description

DESCRIPCION

Ghrelina para uso en el tratamiento de lesion cerebral traumatica leve

Campo de la invencion

Esta descripcion proporciona metodos para tratar lesiones cerebrales leves y otros trastornos neurologicos que surgen a partir de dichas lesiones en un sujeto mediante la administracion al sujeto de una cantidad efectiva de una composicion que comprende ghrelina.

Antecedentes de la invencion

La ghrelina, un peptido de 28 aminoacidos secretado predominantemente por la mucosa gastrica, es una hormona neuroendocrina que actua como ligando endogeno para el receptor secretagogo de la hormona de crecimiento. Mas alla de los efectos conocidos sobre la regulacion del hambre, la ghrelina es conocida por poseer unas potentes propiedades anti-inflamatorias y se ha demostrado que es protectora en varios modelos de lesion neuronal grave.

El edema producido por una lesion cerebral traumatica (es decir, TBI, del ingles “traumatic brain injury”) y las complicaciones asociadas al aumento de la presion intracraneal (ICP, del ingles “ intracranial pressure”) son responsables de aproximadamente el 50% de las muertes en pacientes hospitalizados. La gestion medica de la hipertension intracraneal utiliza una estrategia que combina agentes de sedacion y osmoticos tales como el manitol y el salino hipertonico. Sabiendo que la ghrelina posee unos potentes efectos anti-inflamatorios, nosotros hemos demostrado que la ghrelina evita la permeabilidad de la barrera hematoencefalica (BBB, del ingles “blood brain barrier”), la disfuncion intestinal y la inflamacion sistemica que acompanan a la TBI. El mecanismo de las anteriores observaciones no esta claro, pero puede que, al menos en parte, sea el resultado de una reduccion de la transcripcion de citocinas inflamatorias y de los efectos de cascada final que incluyen una reduccion de la apoptosis, y de las filtraciones de la barrera hematoencefalica. Animales con TBI tratados con ghrelina presentaron una reduccion significativa de la fluorescencia cerebral, que se correlaciona con una reduccion de la permeabilidad vascular de la BBB. Hemos demostrado que la ghrelina previene la regulacion al alza post-TBI de la Acuaporina 4 (AQP-4). Estudios previos han demostrado que una expresion reducida de AQP-4 se asocia a la prevencion de la ruptura de la BBB y del edema cerebral.

Las lesiones cerebrales leves (mBI, del ingles “mild brain injuries”), tfpicamente incluyen traumatismos craneoencefalicos, que te dejen “sonado”, y similares, describen una agresion al cerebro que, a su vez, puede producir una lesion a largo plazo en el cerebro. Hasta la fecha, ha habido pocos o ningun tratamiento crefble para dichas lesiones cerebrales leves (mBI). Por tanto, existe una significativa necesidad no satisfecha de una terapia para tratar la mBI que no suponga costes y retrasos no deseados y que sea efectiva.

Sumario

Esta descripcion proporciona metodos para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto que presenta dicha lesion, que comprende la administracion al sujeto de una cantidad efectiva de ghrelina o de agonista de ghrelina, tratando con ella la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion de la forma natural de una secuencia de aminoacido de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 1). En algunos casos, la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o la serina de la posicion de aminoacido 3 esta(n) acilada(s) con un grupo octanoilo (-C(O)(CH2)aCHa. Los aminoacidos de las posiciones 1 a 5 de la SEQ ID NO. 1 de la ghrelina o del agonista de ghrelina pueden presentar una modificacion. En algunas realizaciones, la ghrelina aumenta la expresion de protema desacoplante 2 (UCP-2). En algunas realizaciones, la ghrelina aumenta la expresion de UCP-2 en las mitocondrias. La cantidad administrada segun los metodos de la presente memoria, puede ser, por ejemplo, una dosis de 2 pg/kg por dosis y/o por dfa. En una realizacion de la invencion, la ghrelina es des-acil-ghrelina o ghrelina sin modificacion de la secuencia de aminoacidos primaria, tal como se proporciona en la SEQ ID NO. 1. En otra realizacion, la ghrelina se une a un receptor que no es GHSR-1a o receptor de ghrelina, y en donde la union a un receptor que no es GHSR-1a o receptor de ghrelina proporciona un beneficio terapeutico, tal como la neuroproteccion tras una mBI o mBI repetida, puede incluir una reduccion del estres oxidativo o una reduccion de la apoptosis.

En algunas realizaciones, la lesion cerebral leve comprende un traumatismo craneoencefalico. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamffero. En algunas realizaciones, el sujeto es un humano. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo no superior a aproximadamente a 8 , 24 o 72 horas desde la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo no superior a aproximadamente 24 horas desde la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 1, 2, 3, 6 , 8 , 12, 18, 24, 36, 48 o 72 horas tras la mBI.

Esta descripcion proporciona metodos para reducir la incidencia o la gravedad de la mBI en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de ghrelina, reduciendo con ello la incidencia o la gravedad de la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra antes de un evento o actividad con una potencial aparicion de mBI.

Esta descripcion proporciona metodos para reducir la cantidad de tiempo requerida para recuperarse de una lesion cerebral leve, que comprende la administracion a un paciente que padece de una lesion cerebral leve de una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en un plazo de 72 horas desde la lesion cerebral leve. En alguna realizacion, la ghrelina se administra en una dosis individual. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis entre 10 ng/kg por dfa y 10 mg/kg por dfa.

Adicionalmente, la ghrelina se puede usar en un ensayo para determinar la capacidad de compuestos candidatos para efectuar un aumento de la expresion de protema desacoplante 2 (UCP-2) que incluye aumentar la expresion de UCP-2 en mitocondrias. En dichos ensayos, se usa la ghrelina como control para determinar la eficacia relativa del compuesto o compuestos candidatos. Los ensayos adecuados incluyen, meramente a modo de ejemplo, ensayos competitivos de union de un compuesto o compuestos candidatos a receptor 1a secretagogo de hormona del crecimiento (es decir, GHSR) en presencia de ghrelina y utilizando cromatograffa de afinidad frontal.

En otra realizacion adicional, un paciente que padece perdida cognitiva o de habilidades motoras debido a una mBI y, en particular, a mBI repetitiva, puede ser monitorizado para determinar la terapia y la progresion de dichas habilidades a traves de la correlacion del nivel de ghrelina en el cerebro del paciente con el tiempo. Segun disminuyen los niveles de ghrelina, se producira un incremento de la necesidad de intervencion. Esta invencion tambien proporciona metodos para medir los niveles de ghrelina antes de una actividad, por ejemplo, antes de iniciar una temporada de futbol americano, futbol, rugby o cualquier otro deporte o actividad, y realizar una monitorizacion durante la temporada para determinar si el jugador se encuentra en un nivel no cualificado para jugar o participar utilizando un test o ensayo de medicion de los niveles de ghrelina, tal como un test o ensayo para determinar los niveles en la sangre.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar a un sujeto que padece desequilibrios metabolicos asociados a mBI o a un traumatismo craneoencefalico, en donde dicho metodo comprende la administracion de una cantidad efectiva de ghrelina al sujeto, tratando de este modo al sujeto que padece desequilibrio metabolico asociado a mBI o traumatismo craneoencefalico.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar a un sujeto que padece de niveles elevados de especies oxidativas reactivas (ROS, del ingles “reactive oxidative species”) en neuronas asociado a mBI o traumatismo craneoencefalico, en donde dicho metodo comprende la administracion de una cantidad efectiva de ghrelina al sujeto de tal modo que se reduzcan los niveles de ROS en neuronas asociados a mBI o a traumatismo craneoencefalico, tratando de este modo al sujeto que padece desequilibrios metabolicos asociados a mBI o a un traumatismo craneoencefalico.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir la encefalopatfa traumatica cronica (CTE) asociada a mBI o traumatismos craneoencefalicos repetidos en un sujeto, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto, previniendo de este modo la encefalopatfa traumatica cronica (CTE) asociada a mBI o traumatismos craneoencefalicos repetidos en un sujeto.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano neuronal asociado a estres oxidativo y a la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto, previniendo con ello el dano neuronal asociado al estres oxidativo y a la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar conexiones neuronales o axonales danadas o rotas en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto, tratando de este modo la conexion neuronal o axonal danada o rota en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es una rotura mecanica del citoesqueleto neuronal o axonal. En otra realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es un transporte neuronal o axonal danado o alterado. En otra realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es proteolisis, desconexion degenerativa y reorganizacion. En una realizacion, el tratamiento de una conexion neuronal o axonal danada o rota en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos, restaura la conexion neuronal o axonal en el cerebro de un sujeto despues de una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, el tratamiento de una conexion neuronal o axonal danada o rota en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI o de traumatismos craneoencefalicos acelera la restauracion de la conexion neuronal o axonal en el cerebro de un sujeto despues de una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir o disminuir la aparicion de una conexion neuronal o axonal danada o rota en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto, reduciendo o previniendo o disminuyendo de este modo la aparicion de una conexion neuronal o axonal danada o rota en el cerebro de un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es una rotura mecanica del citoesqueleto neuronal o axonal. En otra realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es un transporte neuronal o axonal danado o alterado. En otra realizacion, la conexion neuronal o axonal danada o rota es proteolisis, desconexion degenerativa y reorganizacion. En una realizacion, se administra ghrelina antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI, que incluyen traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administra ghrelina inmediatamente despues de la aparicion de una mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administra ghrelina antes y despues de la aparicion de una o mas mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran dosis multiples de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una perturbacion de la fisiologfa cerebral en un sujeto con una o mas incidencias de mBl, que incluye traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto, de tal modo que se restaure la despolarizacion neuronal normal, tratando de este modo la perturbacion de la fisiologfa cerebral en un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluyen traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de una fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de una perturbacion de la fisiologfa cerebral con ghrelina acelera la restauracion de la fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluyen traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantenga una despolarizacion neuronal normal, reduciendo o previniendo de este modo una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI, que incluyen traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI, que incluyen traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI, que incluye traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran dosis multiples de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se restaure la liberacion normal de neurotransmisores excitadores, tratando con ello la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina acelera la restauracion de la fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantiene la liberacion normal de neurotransmisores excitadores, reduciendo o previniendo de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI o traumatismo craneoencefalico. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran multiples dosis de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se restaura el flujo sangumeo cerebral normal, tratando de este modo una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de una fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de una fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina acelera la restauracion de una fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantiene un flujo sangumeo cerebral normal, reduciendo o previniendo de este modo una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI o traumatismo craneoencefalico. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran multiples dosis de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se restaura una funcion axonal apropiada o normal, tratando de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina acelera la restauracion de la fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantiene una funcion axonal apropiada o normal, reduciendo o previniendo de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI o traumatismo craneoencefalico. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran multiples dosis de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se restaura la funcion metabolica cerebral, tratando de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina acelera la restauracion de la fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantiene la funcion o el equilibrio metabolico cerebral, reduciendo o previniendo de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI o traumatismo craneoencefalico. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran dosis multiples de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se restaura el metabolismo de glucosa, tratando de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina restaura la fisiologfa cerebral normal. En otra realizacion, el tratamiento de la fisiologfa cerebral perturbada con ghrelina acelera la restauracion de la fisiologfa cerebral normal.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir una fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos, en donde dicho metodo comprende la administracion de una o mas dosis de ghrelina al sujeto de tal modo que se mantiene el metabolismo de glucosa, reduciendo o previniendo de este modo la fisiologfa cerebral perturbada en un sujeto con una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En una realizacion, la ghrelina se administra antes de la aparicion de una o mas incidencias de mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, la ghrelina se administra inmediatamente despues de la aparicion de una mBI o traumatismo craneoencefalico. En otra realizacion, la ghrelina se administra antes y despues de la aparicion de una o mas mBI o traumatismos craneoencefalicos. En otra realizacion, se administran dosis multiples de ghrelina.

En algunas realizaciones, la presente descripcion proporciona un metodo para prevenir perdida de memoria y dolores de cabeza en un sujeto con mBI o traumatismo craneoencefalico, en donde dicho metodo comprende la administracion de una cantidad efectiva de ghrelina al sujeto en una o mas dosis, previniendo de este modo la perdida de memoria y/o los dolores de cabeza en un sujeto con mBI o traumatismo craneoencefalico.

Algunas realizaciones se refieren a formulaciones para la administracion a un sujeto, formulaciones que pueden incluir un vetuculo farmaceuticamente aceptable y ghrelina que tenga un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde dicha formulacion es adecuada para la administracion de una cantidad efectiva de ghrelina al cerebro de dicho paciente de tal modo que se tratan las lesiones cerebrales leves. Por ejemplo, cualquiera de los metodos descritos anteriormente y en cualquier otra parte de la presente memoria puede utilizar una molecula de ghrelina que tiene un contenido de C14 inferior a 1 ppt.

Algunas realizaciones se refieren a metodos de monitorizacion de una lesion cerebral leve, la gravedad de una lesion y/o la recuperacion de dicha lesion. Los metodos pueden incluir, por ejemplo, la administracion de un compuesto de ghrelina purificado, que incluye por ejemplo, ghrelina con un contenido de C14 inferior a 1 ppt, en una composicion farmaceuticamente aceptable a un sujeto que ha sufrido una lesion cerebral leve.

Algunas realizaciones se refieren a metodos de tratamiento de lesion cerebral leve, que reducen la incidencia o la gravedad de la mBI en un sujeto, y/o reducen la cantidad de tiempo necesaria para recuperarse de una lesion cerebral leve. Los metodos incluyen proporcionar o administrar a un sujeto que lo necesite (p.ej., un sujeto que ha padecido, esta en riesgo de padecer, es propenso a padecer, y/o esta a punto de participar en una actividad con un elevado riesgo de padecer, una mBI) una cantidad de ghrelina (que incluye ghrelina con un contenido de C14 inferior a 1 ppt) suficiente para proporcionar un nivel in vivo de ghrelina terapeuticamente efectivo para tratar o reducir segun el metodo, en donde el nivel es superior al nivel endogeno de ghrelina del sujeto. Por ejemplo, la cantidad de ghrelina administrada puede ser una cantidad suficiente para proporcionar un nivel en sangre de ghrelina que es superior al nivel endogeno en sangre de ghrelina habitual o medio, tal como 1,5, 2, 3, 5, 10, 20, 50, 100, 1.000 o hasta 2.000 veces el nivel endogeno en sangre normal (o cualquier sub valor o sub rango entre medias). En algun caso, la cantidad administrada puede dar como resultado una concentracion en sangre o plasma de al menos 55 picogramos por mililitro. En algunas realizaciones, los niveles mas altos de ghrelina se pueden alcanzar en un plazo de horas desde la lesion (p.ej., en menos de 8 horas desde la lesion). Tambien se pueden mantener por encima de los niveles endogenos durante un periodo de tiempo que es suficiente para proporcionar el beneficio terapeutico deseado, por ejemplo, durante al menos 30 minutos hasta 24 horas (o cualquier sub valor o sub rango entre medias). Los niveles de ghrelina endogenos no son suficientes para la mBI o reducir la incidencia, gravedad o el tiempo necesario para recuperarse, como es facilmente evidente por el dano a largo plazo provocado al cerebro por lesiones de traumatismo craneoencefalico repetitivas (mBI). Las presentes realizaciones proporcionan un beneficio y un resultado que no se producen de forma natural en el cuerpo con los niveles endogenos. Dicho beneficio era desconocido antes de las presentes realizaciones asociadas a la invencion. En algunas realizaciones, los metodos pueden incluir adicionalmente la seleccion o la identificacion de un sujeto que ha padecido, esta en riesgo de padecer, es propenso a padecer, y/o esta a punto de participar en una actividad con alto riesgo de padecer, una mBI, antes de la administracion de la ghrelina.

Algunas realizaciones se refieren a metodos para determinar la eficacia de un compuesto para tratar a un paciente que padece una lesion cerebral leve (mBI). Los metodos pueden incluir, por ejemplo, i) determinar el nivel de expresion de protema desacoplante 2 (UCP-2) en una muestra biologica obtenida de un paciente tratado con el compuesto; ii) comparar el nivel de expresion de UCP-2 con una muestra biologica obtenida de un sujeto tratado con ghrelina (como se describe en la presente memoria, incluyendo las modificaciones descritas en la presente memoria); y iii) determinar la eficacia del compuesto, en donde el compuesto es eficaz cuando el nivel de expresion de UCP-2 inducido por el compuesto es igual (dentro de un margen de al menos 10%) o superior al nivel de expresion de UCP-2 inducido por la ghrelina.

Algunas realizaciones se refieren a metodos para tratar a un paciente que padece perdida cognitiva o de habilidades motoras debido a una lesion cerebral leve (mBI). Los metodos pueden incluir, por ejemplo, i) determinar el nivel de ghrelina en el cerebro del paciente a lo largo de un periodo de tiempo; ii) administrar ghrelina (que incluye las versiones modificadas y C14 describas en la presente memoria) al paciente; y iii) repetir periodicamente la etapa ii) durante el tratamiento cuando el nivel de ghrelina caiga por debajo de un rango normal como base para determinar la eficacia del tratamiento, en donde un aumento del nivel de ghrelina en el cerebro demuestra una mejora de la afeccion cognitiva o de las habilidades motoras del paciente.

La invencion se define en las reivindicaciones.

Breve descripcion de las figuras

Las realizaciones de esta descripcion son figuras que ilustran meramente a modo de ejemplo, sin limitacion, en las que:

Figura 1: muestra el principio del ensayo del estallido oxidativo dentro de celulas inflamatorias. La dihidrorrodamina 123 (DHR 123) difunde a traves de la membrana celular. Cuando se encuentra con especies de oxfgeno reactivas (ROS), la DHR 123 se oxida y de lugar a una fluorescencia verde. A continuacion se mide la fluorescencia y se presenta como unidades de fluorescencia arbitrarias (AFU), en donde una mayor intensidad significa un mayor estallido oxidativo y, por tanto, una mayor concentracion de cantidad de ROS (vease Chen, et al., “Measurement of oxidative burst in neutrophils”, Methods Mol Biol., 844: 115-124 (2012).

Figura 2: muestra la administracion subcutanea de ghrelina que da como resultado una reduccion del estallido oxidativo en celulas inflamatorias tras una mBI. El desplazamiento a la derecha del pico refleja un mayor estallido oxidativo. Se observa un mayor estallido oxidativo en la mBI sola, y se observa un menor estallido oxidativo en la mBI tratada con ghrelina. Para el tratamiento con ghrelina, el pico se desplaza a la izquierda en lmea con el control, lo que significa un menor estallido oxidativo.

Figura 3: muestra el estallido oxidativo de cerebro completo ipsilateral tras una BI moderada. La BI moderada mas ghrelina reduce el estallido oxidativo, segun se cuantifica mediante unidades de fluorescencia arbitrarias (AFU). El estallido oxidativo aumenta en animales tras mBI en comparacion con el control simulado (7963 AFU ± 2900 BI moderada) frente a 4624 AFU ± 1858 (simulado); n=5 animales en cada grupo). El tratamiento con ghrelina reduce el estallido oxidativo en comparacion con mBI (7963 AFU ± 2900 (BI moderada) frente a 3257 AFU ± 1031 (BI moderada ghrelina (2 dosis)); valor-p de 0,048 usando el test t de Student). AFU equivale a intensidad de fluorescencia media.

Algunas o todas las figuras son representaciones esquematicas de ejemplo; por tanto, no muestran necesariamente los tamanos relativos o las localizaciones reales de los elementos mostrados. Las figuras se presentan con el proposito de ilustrar una o mas realizaciones con el entendimiento explfcito de que no van a usarse para limitar el alcance del significado de las reivindicaciones presentadas mas adelante.

Descripcion detallada de la invencion

Debe entenderse que la presente descripcion no esta limitada por las realizaciones particulares descritas, y como tal puede, por supuesto, variar. Tambien debe entenderse que la terminologfa usada en la presente memoria tiene el proposito de describir unicamente las realizaciones particulares, y no pretende ser limitativa, ya que el alcance de la presente descripcion estara limitado solo por las reivindicaciones anexas.

La descripcion detallada de la presente memoria se divide en varias secciones unicamente por comodidad para el lector y la descripcion incluida en cualquier seccion se puede combinar con la de otra seccion. A menos que se defina de otra forma, todos los terminos tecnicos y cientificos usados en la presente memoria tienen el mismo significado utilizado habitualmente por los especialistas en la tecnica a la pertenece la presente descripcion.

Definiciones

Cabe destacar que tal como se usan en la presente memoria y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares “un”, “una”, y “el”, “ la” incluyen los referentes en plural a menos que el contexto claramente dicte lo contrario. De esta manera, por ejemplo, la referencia a “un compuesto” incluye una pluralidad de compuestos.

A menos que se defina de otra manera, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados en la presente memoria tienen el mismo significado utilizado habitualmente por el especialista en la tecnica a la que pertenece la presente descripcion. Tal como se usan en la presente memoria los siguientes terminos tienen los siguientes significados.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “aproximadamente” cuando se usa antes de una designacion numerica, p.ej., temperatura, tiempo, cantidad, concentracion, y otros similares, incluyendo un rango, indica aproximaciones que pueden variar en (+) o (-) 10%, 5% o 1%.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “administracion” se puede llevar a efecto en una dosis, de forma continua o intermitentemente, o a traves de varias subdosis, que en conjunto proporcionan una unica dosis. La dosificacion se puede llevar a cabo a lo largo del curso de tratamiento. Los metodos para determinar los medios y dosis de administracion mas efectivos son conocidos por los especialistas en la tecnica y pueden variar con la composicion usada para terapia, con el proposito de la terapia, la celula diana que este siendo tratada y el sujeto que este siendo tratado. Se pueden llevar a cabo administraciones individuales o multiples con el nivel de dosis y el patron que sean seleccionados por el medico responsable. Las formulaciones y metodos de dosificacion adecuados para administrar los agentes son conocidos en la tecnica. La ruta de administracion tambien puede ser determinada y los especialistas en la tecnica conocen los metodos para determinar la ruta mas efectiva de administracion, y variara con la composicion usada para el tratamiento, con el proposito del tratamiento, el estado de salud o el estadio de enfermedad del sujeto que esta siendo tratado y con la celula o tejido diana. Los ejemplos no limitativos de ruta de administracion incluyen administracion oral, vaginal, administracion nasal, inyeccion, aplicacion topica, sublingual, pulmonar y mediante supositorio.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “afinidad” se refiere a la fortaleza de union entre receptores y sus ligandos, por ejemplo, entre un anticuerpo y su antfgeno.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “residuo de aminoacido” se refiere a un aminoacido formado mediante digestion qmmica (hidrolisis) de un polipeptido y sus enlaces peptfdicos. A menos que se especifique de otro modo, el aminoacido abarca L-aminoacido, incluyendo tanto aminoacido natural como sintetico o similar, siempre que la propiedad funcional deseada sea retenida por el polipeptido. NH2 se refiere al grupo amino libre presente en el extremo amino de un polipeptido. COOH se refiere al grupo carboxi libre presente en el extremo carboxi de un polipeptido. Las abreviaturas estandar de polipeptido para residuos de aminoacido son las siguientes: A (Ala o Alanina); C (Cys o Cistema); D (Asp o Acido Aspartico); E (Glu o Acido Glutamico); F (Phe o Fenilalanina); G (Gly o Glicina); H (His o Histidina); I (Ile o Isoleucina); K (Lys o Lisina); L (Leu o Leucina); M (Met o Metionina); N (Asn o Asparagina); P (Pro o Prolina); Q (Gln o Glutamina); R (Arg o Arginina); S (Ser o Serina); T (Thr o Treonina); V (Val o Valina); W (Trp o Triptofano); X (Xaa o Desconocido u Otro); Y (Tyr o Tirosina); y Z (Glx/Gln/Glu o Acido Glutamico/Glutamina). Todas las secuencias de residuos de aminoacido representadas en la presente memoria mediante formula presentan una orientacion izquierda-a-derecha en la direccion convencional de extremo amino a extremo carboxi. La frase “residuo de aminoacido” se define de forma amplia para incluir los aminoacidos naturales y aminoacidos modificados y no naturales. Una raya al principio o al final de una secuencia de residuos de aminoacido indica un enlace peptfdico con una secuencia adicional de uno o mas residuos de aminoacido o un enlace covalente con un grupo amino-terminal tal como NH2 o acetilo o con un grupo carboxi-terminal tal como COOH.

Tal como se usan en la presente memoria, los terminos “que comprende” o “comprende” pretenden indicar que las composiciones y metodos incluyen los elementos enumerados, pero sin excluir otros. “Que consiste esencialmente en” cuando se usa para definir composiciones y metodos, significara que se excluyen otros elementos de cualquier significancia esencial en la combinacion para el proposito establecido. De este modo, una composicion que consiste esencialmente en los elementos definidos en la presente memoria no excluina otros materiales o etapas que no afecten materialmente a la(s) caractenstica(s) basica(s) y nueva(s) de la presente descripcion. “Que consiste en” significara que se excluye mas que elementos traza de otros ingredientes y etapas de metodo sustanciales. Las realizaciones definidas por cada uno de estos terminos de transicion se encuentran dentro del alcance de la presente descripcion.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “ghrelina” es un polipeptido que puede tener una secuencia de 28 aminoacidos como la establecida en la SEQ ID NO. 1, y que puede incluir la acilacion de octanoilo descrita anteriormente. La ghrelina humana puede ser un polipeptido que tiene la secuencia de aminoacido establecida en el N° de Acceso del GenBank® NP_057446 o el Identificador Swiss-Prot GHRL_HUMAN. La preprotema de ghrelina humana tiene 117 aminoacidos. Dicha preprotema puede someterse al siguiente procesamiento post-traduccional. Se elimina peptido senal (aminoacidos 1-23) y los restantes 94 aminoacidos son tratados con una proteasa para proporcionar una ghrelina de 28 aminoacidos madura (aminoacidos 24-51) o una ghrelina de 27 aminoacidos madura (aminoacidos 24-50) y una obestatina de 23 aminoacidos madura (aminoacidos 76-98). En otra realizacion, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacidos Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Ser-Gln-Lys-Pro-Gln-Asn-Lys-Val-Lys-Ser-Ser-Arg-Ile (p.ej., SEQ ID NO. 4). En otra realizacion, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacidos de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Lys-Ala-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 5). En otra realizacion, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacido de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Lys-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Ala-Ala-Lys-Leu-Lys-Pro-Arg (SEQ ID NO. 6 ). En otra realizacion, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacido de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Ala-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 7). En otra realizacion, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacido de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Thr-Tyr-Lys-Asn-Iln-Gln-Gln-Gln-Lys-Asp-Thr-Arg-Lys-Pro-Thr-Ala-Arg-Leu-His (SEQ ID NO. 8). En otra realizacion adicional, la ghrelina comprende un polipeptido que comprende al menos una modificacion respecto a la forma natural de una secuencia de aminoacido de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Lys-Leu-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 9). Las modificaciones en la ghrelina pueden incluir anadir o eliminar aminoacidos, siempre que la ghrelina asf modificada mantenga su valor terapeutico (p.ej., anadiendo o eliminando solo 1, 2, 3, 4 o 5 aminoacidos de la molecula).

Algunas realizaciones se refieren y pueden utilizar moleculas de ghrelina que tienen un contenido de carbono 14 (C14) inferior al encontrado en las moleculas de ghrelina producidas endogenamente, o en la ghrelina que tiene un contenido de C14 aproximadamente igual a los niveles de C14 atmosferico. Por ejemplo, las moleculas de ghrelina pueden presentar al menos un atomo de carbono o un resto que contenga carbono que derive de reactivos de origen fosil que tenga un contenido de C14 inferior al encontrado en moleculas endogenas o inferior a los niveles atmosfericos. En algunas realizaciones, las moleculas de ghrelina pueden presentar todas, sustancialmente todas, o al menos algun carbono que tenga un contenido de C14 inferior al observado endogenamente o inferior a los niveles atmosfericos. Por ejemplo, uno o mas de los aminoacidos de una secuencia pueden incluir carbono y tener un contenido de C14 inferior al observado en los aminoacidos endogenos o inferior a los niveles atmosfericos. En otros casos, una secuencia entera puede incluir carbono y presentar un contenido de C14 inferior al observado endogenamente o inferior a los niveles atmosfericos. Aun mas, en otras realizaciones, se puede modificar una molecula de ghrelina, por ejemplo para presentar un octanoilo u otro grupo similar, y el grupo octanoilo puede tener un contenido de C14 inferior a los niveles de C14 de la ghrelina endogena o inferior a los niveles atmosfericos. A continuacion, y en otros sitios de la presente memoria, se describen ejemplos y realizaciones adicionales.

En algunas realizaciones, la molecula de ghrelina puede presentar un contenido de C14 inferior a 0,9 ppt, 0,95 ppt, 1,05 ppt, 1,10 ppt, 1,15 ppt, 1,2 ppt o un contenido atmosferico de C14. En algunas realizaciones, la molecula de ghrelina puede tener un contenido de C14 que va entre aproximadamente 1% y 50% (o cualquier valor o sub rango entre medias) inferior al contenido de C14 en la ghrelina endogena o al contenido de C14 atmosferico. Por ejemplo, una molecula segun algunas realizaciones puede presentar entre aproximadamente 5% y aproximadamente 11% menos de contenido de C14. La ghrelina con un contenido de C14 inferior a 0,9 ppt, 0,95 ppt, 1,0 ppt, 1,05 ppt, ,1,10 ppt, 1,15 ppt, 1,2 ppt o al contenido atmosferico de C14, o con un porcentaje menor de C14 tal como se ha discutido en la presente memoria, se puede obtener mediante smtesis de peptidos o smtesis qmmica usando reactivos con carbonos libres de C14, con menos de 1 ppt de C14 o deficientes en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Alternativamente, la ghrelina con un contenido de C14 inferior a 0,9 ppt, 0,95 ppt, 1,0 ppt, 1,05 ppt, ,1,10 ppt, 1,15 ppt, 1,2 ppt o al contenido atmosferico de C14 puede producirse in vitro mediante metodos enzimaticos que parten de materiales con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Dichos metodos enzimaticos pueden incluir un sistema de smtesis de protemas libre de celulas o un sistema in vitro acoplado de transcripcion-traduccion basado en extractos celulares preparados a partir de bacterias, levaduras, germen de trigo, celulas de insecto y/o de mairnfero usando aminoacil-ARNts cargados con aminoacidos con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. En un metodo alternativo, la ghrelina con un contenido de C14 inferior a 0,9 ppt, 0,95 ppt, 1,0 ppt, 1,05 ppt, ,1,10 ppt, 1,15 ppt, 1,2 ppt o al contenido atmosferico de C14 se puede producir mediante metodos recombinantes en celulas bacterianas, de levadura, de insecto y/o de mairnfero despues de la introduccion de un sistema de expresion con un ADNc que comprende secuencias codificadas de ghrelina y cultivar las celulas en un medio con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Alternativamente, el medio puede incluir glucosa, galactosa, azucares, glicerol, piruvato, acetatos, metabolitos, acidos grasos y/o aminoacidos con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Los metodos para cambiar el contenido isotopico estable de protemas pueden encontrarse en Becker et al., 2008 (G. W. Becker (2008) Stable isotopic labeling of proteins for quantitative proteomic applications. Briefings in Functional Genomics Proteins 7 (5): 371-382). La ghrelina se puede co-expresar con, o ser expuesta a, ghrelina O-acil transferasa (GOAT) para permitir la modificacion con acidos grasos de la secuencia primaria de la ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 3, de tal modo que se produce una ghrelina biologicamente activa capaz de unirse y activar el receptor de ghrelina (GHSR-1a o el receptor de tipo 1a de secretagogo de hormona del crecimiento). La modificacion puede ser una modificacion de acido octanoico de ghrelina con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, con menos de 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14.

En algunas realizaciones, la ghrelina con un contenido de C14 inferior a 0,9 ppt, 0,95 ppt, 1,0 ppt, 1,05 ppt, ,1,10 ppt, 1,15 ppt, 1,2 ppt o al contenido atmosferico de C14 (o que tiene un porcentaje como el discutido en la presente memoria) puede obtenerse tras una modificacion de la secuencia primaria de la ghrelina (SEQ ID NO. 1) con un acido graso con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Dichos acidos grasos pueden sintetizarse qmmicamente con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14, o ser producido en una celula cultivada en un medio en donde la fuente de carbono usada para sintetizar el acido graso o los acidos grasos esta libre de C14, sustancialmente libre de C14, tiene un contenido inferior a 1 ppt de C14 o es deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. En algunas realizaciones, el acido graso o los acidos grasos se conjugan con la coenzima A (CoA) y el acido graso de los tioesteres acido graso-CoA resultantes es transferido a la serina de la posicion de aminoacido 3 de la ghrelina por accion de la ghrelina O-acil transferasa (GOAT), de tal modo que se produce una ghrelina modificada con acido graso con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. En algunas realizaciones, los acidos grasos son acidos grasos de cadena lineal con un contenido de carbono de C2, C3, C4, C5, C6 , C7, C8 , C9, C10, C11, C12, C13, C14, C15, C16, C17, C18, C19 o C20, y que presenta la formula qmmica general (CH)3-(CH2)n-2-COOH, en donde “n” es el numero de carbonos del acido graso. En una realizacion preferida, el acido graso es un acido octanoico C8 o un acido tetradecanoico C14. En una realizacion mas preferida, el acido graso es acido octanoico y la ghrelina modificada con acido graso es ghrelina modificada con octanoilo en la serina de la posicion de aminoacido 3.

En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a la ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 3. En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a la ghrelina en una posicion diferente a la serina de la posicion de aminoacido 3. En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 2. En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a la ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 2 y en la serina de la posicion de aminoacido 3. En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a la ghrelina en uno o mas aminoacidos.

En algunas realizaciones, el acido graso o acidos grasos pueden estar conjugados a ghrelina inmadura (tal como preproghrelina o proghrelina) y a continuacion la ghrelina modificada con acido graso o acidos grasos es procesada a una ghrelina madura que pueda activar el receptor de ghrelina (GHSR-1a). El procesamiento de ghrelina inmadura puede ser in vitro o in vivo y puede llevarse a cabo mediante enzimas proteolfticas. En algunas realizaciones, el acido graso o los acidos grasos pueden conjugarse a una ghrelina madura que presenta la secuencia de aminoacidos proporcionada en la SEQ ID NO. 1.

En algunas realizaciones, la ghrelina con una o mas modificaciones es una ghrelina aislada con una o mas modificaciones. En una realizacion preferida, la ghrelina con una o mas modificaciones es una ghrelina aislada con una o mas modificaciones de acido graso. En una realizacion mas preferida, la ghrelina con una o mas modificaciones es una ghrelina aislada acilada en la serina 3 con acido octanoico, tal como octanoil-ghrelina aislada.

El material de partida deficiente en C14 usado en la smtesis de ghrelina con un contenido de carbono libre de C14, sustancialmente libre de C14, inferior a 1 ppt de C14 o deficiente en C14 respecto al contenido atmosferico de C14 puede obtenerse a partir de fuentes de carbono que no participan en el ciclo de carbono atmosferico, o fraccionando el isotopo de carbono natural para obtener carbonos libres de C14, sustancialmente libres de C14, con menos de 1 ppt de C14 o deficientes en C14 respecto al contenido atmosferico de C14. Dichos carbonos estaran enriquecidos en carbono-12 (C12) y/o carbono-13 (C13) y empobrecidos en C14. Los metodos para el fraccionamiento, el enriquecimiento o el empobrecimiento isotopico son conocidos en la tecnica y se pueden basar en difusion, centrifugacion, electromagnetismo, excitacion laser, efecto de isotopo cinetico, metodos qmmicos, gravedad, evaporacion y destilacion criogenica entre muchos otros metodos de fraccionamiento isotopico.

La ghrelina tal como se usa en las diversas realizaciones descritas en la presente memoria puede ser cualquier ghrelina adecuada, incluyendo, por ejemplo, la ghrelina producida usando metodos recombinantes y la ghrelina que se sintetiza qmmicamente. Independientemente del origen, se puede usar y administrar la ghrelina tal como se describe en la presente memoria. La ghrelina puede ser ghrelina aislada, por ejemplo, ghrelina obtenida tras fraccionamiento o separacion de ghrelina de otros constituyentes presentes en una muestra en la que la ghrelina es producida o sintetizada, o bien modificada. La ghrelina aislada no tiene porque ser ghrelina pura. Aunque es deseable tener ghrelina pura o ghrelina esencialmente pura, se puede usar ghrelina aislada sin alcanzar una pureza absoluta, siempre que la ghrelina haya sido fraccionada o separada de los constituyentes cuya presencia no es deseable en una preparacion de la ghrelina aislada. Cabe destacar que tras el fraccionamiento de ghrelina, la ghrelina puede introducirse en disolucion o usarse como una mezcla en presencia de otros componentes tales como vehmulo(s) farmaceutico(s), lubricante(s), conservante(s), tampon(es), sal(es), azucar(es), colorante(s), excipiente(s) farmaceuticamente aceptable(s) y combinacion de los mismos.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “receptor de ghrelina” se refiere a cualquier molecula natural a la cual se une la ghrelina e induce una actividad biologica. Es sabido que la ghrelina se une a receptor 1a de secretagogo de hormona de crecimiento (es decir, GHSR), sin embargo, la presente descripcion no esta limitada a un tipo espedfico de receptor.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “individuo” o “sujeto” es un animal o humano susceptible de padecer una afeccion, en particular una mBI o traumatismo craneoencefalico. En algunas realizaciones, el individuo es un mairnfero, que incluye mairnferos humanos y no humanos, tal como perros, gatos, cerdos, vacas, ovejas, cabras, caballos, ratas y ratones.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “lesion cerebral leve” (mBI), a veces referido como “lesion cerebral traumatica leve” (mTBI) se refiere a un evento no relacionado con una enfermedad que es producido habitualmente por una lesion que resulta en una agresion al cerebro. La mBI puede ser causada, por ejemplo, por fuerzas de impacto, en las que la cabeza golpea o es golpeada por algo, o fuerzas impulsivas, en las que la cabeza se mueve sin ser objeto en sf misma de un trauma directo (por ejemplo, cuando el torso golpea algo y la cabeza da un latigazo hacia adelante; como resultado de una rapida aceleracion o deceleracion de la cabeza; una aceleracion o deceleracion del cerebro de un sujeto que produce un cambio en un parametro clmico cualitativo o cuantificable relacionado con el bienestar funcional del sujeto; o una aceleracion o deceleracion diferencial del cerebro del sujeto respecto al craneo del sujeto, en donde la aceleracion o deceleracion diferencial produce un cambio en un parametro clmico cualitativo o cuantificable relacionado con el bienestar funcional del sujeto). La mBI habitualmente es resultado, por ejemplo, de una lesion relacionada con el deporte, un accidente de vehmulo motorizado, una cafda accidental o un asalto. Aunque la gran mayona de dichas lesiones mejoran a traves de una recuperacion natural, el dano causado por dicha lesion o lesiones repetitivas puede provocar deficits a largo plazo en las funciones cognitivas y/o de habilidades motoras.

La BI leve es diferente, y presenta una patologfa distinta, de enfermedades tales como las agresiones cerebrales traumaticas agudas, tal como apoplejfas (isquemica o hemorragica), AVM's, tumores cerebrales, y similares.

Ademas, la mBI es diferente de la TBI grave. La lesion cerebral leve y la lesion cerebral traumatica grave son lesiones drasticamente diferentes. La BI leve y la TBI grave presentan caractensticas y smtomas diferentes, tasas de mortalidad diferentes, protocolos de tratamiento diferentes, etc. La TBI grave es un estado de lesion en el que existe un nivel inaceptable de mortalidad y de discapacidad permanente en humanos en un plazo de horas o dfas desde la lesion. Segun los Centros de Control de Enfermedades, dichas lesiones son un factor que contribuye a un tercio (30%) de todas las muertes relacionadas con lesiones en los Estados Unidos (vease, National Vital Statistics System (NVSS), 2006-2010). Las TBIs graves a menudo son producidas, por ejemplo, por accidentes de automovil y heridas de armas de fuego en combate y heridas de bomba en la cabeza. La TBI grave tfpicamente presenta hemorragias cerebrales directas y abiertas, destruccion de celulas cerebrales, edema cerebral grave y apoptosis celular grave, todas caractensticas de cambios anatomicos o lesiones anatomicas en el cerebro del paciente lesionado -todas las cuales pueden detectarse mediante metodos de imagen anatomica no invasivos. Debido a la gravedad de dichos smtomas, y al riesgo de muerte inminente y discapacidad, la intervencion operativa y los cuidados cnticos son fundamentales. La TBI grave da como resultado cambios anatomicos adversos en el cerebro del paciente (observables a un nivel de anatomfa general) dando como resultado la perdida inmediata y permanente de funciones cerebrales, si no la muerte.

Por otro lado, la lesion cerebral leve (mBI) produce cambios en la funcion cerebral a un nivel metabolico / molecular en las neuronas afectadas. Como tal, habitualmente no causa mortalidad o discapacidad permanente en el marco temporal proporcionado antes, y los pacientes a menudo recuperan las actividades y la funcionalidad normales de la vida cotidiana en cuestion de horas o dfas desde la mBI.

La respuesta del cuerpo a la TBI grave consiste en un gran numero de respuestas diferentes, que incluyen las iniciadas por hipoxia, perdida de sangre y muerte neuronal significativa, por nombrar solo unas pocas. La respuesta del cuerpo a la mBI es significativamente diferente ya que las hemorragias y la perdida de sangre, la perdida de tejido, la hipoxia, la muerte neuronal significativa, etc., no son parte de las manifestaciones de esta afeccion.

Consecuentemente, los tratamientos terapeuticos para cada lesion son significativamente diferentes. La misma metodologfa terapeutica usada para la TBI grave, por ejemplo, cirugfa, sedacion profunda, terapia de manitol y descompresion operativa, estana contra-indicada para el tratamiento de mBI, por ejemplo, de traumatismo craneoencefalico, que es un tipo de lesion cerebral leve. Lo contrario, tal como el descanso y la relajacion mental con poca intervencion para recuperarse de mBI, es igualmente cierto.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “polipeptido” o “peptido” pretende abarcar un “polipeptido” singular, asf como “polipeptidos” plurales, y se refiere a una molecula compuesta por monomeros (aminoacidos) unidos linealmente a traves de enlaces amida (tambien conocidos como enlaces peptidicos). El termino “polipeptido” se refiere a cualquier cadena o cadenas de dos o mas aminoacidos, y no se refiere a una longitud espedfica del producto. De esta manera, los peptidos, dipeptidos, tripeptidos, oligopeptidos, “protema”, “cadena de aminoacido”, o cualquier otro termino usado para referirse a una cadena o cadenas de dos o mas aminoacidos, quedan incluidos dentro de la definicion de “polipeptido”, y el termino “polipeptido” puede usarse en lugar de, o de forma intercambiable con, cualquiera de dichos terminos. El termino “polipeptido” tambien pretende indicar los productos de modificaciones postexpresion del polipeptido, que incluyen sin limitacion glicosilacion, acetilacion, fosforilacion, amidacion, acilacion, acilacion con acidos grasos, modificacion con acidos grasos, derivatizacion con grupos protectores/bloqueantes conocidos, ruptura proteolftica, o modificacion con aminoacidos no naturales. La modificacion puede ser modificacion con acidos grasos o modificacion con trigliceridos. La modificacion con acidos grasos puede ser con un acido graso de cadena corta a media. El acido graso corto puede ser un acido graso de dos carbonos o acido acetico. El acido graso de cadena media puede ser un acido graso de 14 carbonos o acido tetradecanoico. La modificacion con un acido graso puede ser acilacion de SEQ ID NO. 1 en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o la erina de la posicion de aminoacido 3. La modificacion puede estar catalizada por ghrelina O-acil transferasa (GOAT) de tioester de acido graso y ghrelina como sustratos. En una realizacion, la ghrelina modificada post-traduccionalmente puede estar ligada y/o reconocida por receptor de tipo 1a de secretagogo de hormona del crecimiento (GHSR-1a) o receptor de ghrelina. En una realizacion, la ghrelina modificada post-traduccionalmente puede ser ghrelina acilada con acido graso en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o la serina de la posicion de aminoacido 3 ligada y/o reconocida por GHSR-1a o receptor de ghrelina. Un polipeptido puede derivarse de una fuente biologica natural o puede ser producido mediante tecnologfa recombinante, pero no es necesariamente traducido a partir de una secuencia de acido nucleico designada. Puede generarse de cualquier manera, que incluye mediante smtesis qrnmica. El termino “polipeptido” o “peptido” tambien se refiere a un compuesto que comprende una pluralidad de aminoacidos ligados en el mismo a traves de enlaces peptfdicos. Aqrn, el aminoacido (tambien denominado residuo de aminoacido) incluye aminoacidos naturales representados por la formula: NH2-CH(R')-COOH, en donde R' es un grupo sustituyente natural, asf como sus isomeros opticos D y L, etc. Tambien existe un peptido, en donde un determinado aminoacido natural es reemplazado por un aminoacido modificado. El aminoacido modificado incluye los aminoacidos de la anterior formula en la que el grupo sustituyente R' esta modificado adicionalmente, sus isomeros opticos D y L, y aminoacidos no naturales en los que, p.ej., varios grupos sustituyentes estan ligados al grupo sustituyente R' de la anterior formula a traves, o no a traves, de un enlace ester, eter, tioester, tioeter, amida, carbamida o tiocarbamida. El aminoacido modificado tambien incluye aminoacidos no naturales cuyos grupos amino estan reemplazados por grupos alquilo inferiores.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “secretagogo” es una sustancia que estimula la liberacion de hormona del crecimiento, tal como ghrelina. En algunas realizaciones, la ghrelina se une al receptor secretagogo de hormona del crecimiento GHS-R 1a (GHSR). Los compuestos de ghrelina descritos en la presente memoria son activos en el receptor de secretagogo de hormona de crecimiento (GHS), p.ej., el receptor GHS-R 1a. Los compuestos se pueden unir a GHS-R 1a, y estimular la actividad de receptor. En algunas realizaciones, los compuestos se pueden unir a otros receptores y, opcionalmente, estimular su actividad. En algunas realizaciones, la ghrelina aumenta la expresion de protema desacoplante 2 (UCP-2). En algunas realizaciones, la ghrelina aumenta la expresion de UCP-2 en mitocondrias. En algunas realizaciones, la ghrelina previene la consecuencia metabolica de la mBI y cualesquier afecciones cronicas asociadas.

Tratamiento de lesion cerebral leve (mBI) y otros trastornos neurologicos

La presente descripcion esta dirigida a la identificacion de un nuevo uso para la ghrelina en mBI. La BI leve, que incluye el traumatismo craneoencefalico, presenta una patologfa significativamente diferente a otros traumas asociados con enfermedades del cerebro y lesiones cerebrales traumaticas graves (TBI grave), tal como aquellas que causan isquemia. La BI leve no causa el dano masivo celular y tisular observado en la enfermedad cerebral traumatica grave. En su lugar, la mBI causa cambios metabolicos sutiles dentro del cerebro, espedficamente estres oxidativo y sobreproduccion de especies de oxfgeno reactivas (ROS) lo cual, a su vez, puede danar la neuroconectividad y conducir a danos neuronales y cambios encefalopaticos y fisiologicos con lesion recurrente.

La presente descripcion utiliza ghrelina para tratar la mBI. Al contrario que la lesion traumatica grave del cerebro, la mBI no muestra cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema celular o vasogenico significativo (es decir, ruptura de la barrera hematoencefalica). En su lugar, la mBI es una afeccion clmica asociada de forma general a una lista de smtomas clmicos. A veces se asocia a la perdida de consciencia, pero no muestra necesariamente cambios radiologicos significativos. Los smtomas reportados habitualmente incluyen, aunque sin limitacion, dolor de cabeza, “presion en la cabeza”, dolor de cuello, nausea o vomitos, mareos, vision borrosa, problemas de equilibrio, sensibilidad a la luz, sensibilidad al sonido, sentimiento de ralentizacion, sentimiento de estar “en una niebla”, “no sentirse bien”, dificultad para concentrarse, dificultad para recordar, fatiga o falta de energfa, confusion, somnolencia, problemas para dormir, estar mas emocional, irritabilidad, tristeza y estar nervioso o ansioso.

En algunas realizaciones no limitativas, los metodos de la presente memoria pueden incluir o referirse a tratar o reducir uno o mas de los smtomas enumerados. De forma destacada, los traumatismos craneoencefalicos repetidos, como los que se dan en militares y en deportes tales como el futbol americano y el hockey, producen una serie de alteraciones metabolicas y la formacion de ROS. Esta serie de eventos conduce a encefalopatia traumatica cronica (CTE, del ingles “chronic traumatic encephalopathy”) como se ha comprobado en las autopsias de varios jugadores de futbol americano profesional fallecidos.

En algunas realizaciones, la ghrelina tiene la capacidad de reducir las ROS y el posterior dano causado a las neuronas tras una mBI. Esto es especialmente importante para traumatismos craneoencefalicos cronicos donde la prevencion de los efectos inflamatorios, excitantes de ROS, tendna un impacto clmico significativo. Los tratamientos con ghrelina reducen las ROS, y por tanto previenen la consecuencia metabolica de los traumatismos craneoencefalicos y las afecciones cronicas asociadas a los mismos.

En algunas realizaciones, el efecto terapeutico de la ghrelina en la mBI se compara a su efecto terapeutico en la TBI grave. La etiologfa, las imagenes y la determinacion de la mBI carecen de una explicacion cohesiva para los deficits cognitivos observados de dolores de cabeza cronicos, perdida de memoria y afectacion al sueno. Solo la tecnologfa mas avanzada y compleja puede llegar a detectar los cambios sutiles asociados a la mBI. Por lo tanto, al contrario que la TBI grave, donde una lesion masica definitiva es identificada por cambios anatomicos y celulares, la mBI es indetectable radiologicamente, no obstante, se producen desajustes metabolicos espedficos. La presente descripcion describe que la ghrelina puede ser un potente agente neuro-conservador en la mBI.

Sin pretender establecer ninguna teona, la presente descripcion tambien describe la funcion biologica de la ghrelina tras una mBI. Tras la mBI, las necesidades metabolicas de la celula, que incluyen los requerimientos de glucosa, aumentan. Las celulas lesionadas leventemente presentan desajustes metabolicos significativos que causan la aparicion de especies de oxfgeno reactivas en las neuronas. Este estres metabolico y el aumento de las necesidades metabolicas es el concepto fundamental que subyace bajo la gestion del traumatismo craneoencefalico agudo. La reduccion de ROS y la mejora de la captacion de glucosa del cerebro o de las celulas neuronales y axones pueden restaurar la funcion intracelular y permanecer viable. Esto previene o reduce la disfuncion inducida por traumatismos craneoencefalicos y en general mejora el resultado neurocognitivo, y previene la perdida de memoria, y los estados de mBI cronica de dolor de cabeza y desarrollo de encefalopatfa traumatica cronica.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (BI leve o mBI) en un sujeto, que comprende la administracion al sujeto (p.ej., un sujeto que tiene una mBI) de una cantidad efectiva de un compuesto que comprende ghrelina, tratando con ello la mBI. La ghrelina puede administrarse para el proposito de tratar la mBI en una cantidad terapeuticamente efectiva para la mBI. En algunas realizaciones, los metodos pueden incluir ademas la seleccion y la identificacion de un sujeto que ha padecido, que esta en riesgo de padecer, que es propenso a padecer, y/o que esta a punto de participar en una actividad con un riesgo elevado de padecer, una mBI, antes de la administracion de la ghrelina.

En algunas realizaciones, la lesion cerebral leve comprende un traumatismo craneoencefalico. En algunas realizaciones, el sujeto que se somete al metodo de tratamiento es un mamffero. En algunas realizaciones, el sujeto es un humano, mono, vaca, cabra, oveja, raton, rata, gato, perro, caballo, hamster, cerdo, pez y pollo. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en un plazo de aproximadamente 72 horas de la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en un plazo de aproximadamente 24 horas de la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en un plazo de aproximadamente 0,1, 0,3, 0,5, 0,7, 1,2, 3, 6 , 12, 18, 24, 36, 48 o 72 horas de la mBI.

La presente descripcion tambien proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, tratando de este modo la mBI, en donde la ghrelina es el unico agente activo. En algunas realizaciones, la ghrelina presenta la secuencia Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 1). En algunas realizaciones, la ghrelina es modificada con uno o mas acidos grasos. En algunas realizaciones, el acido graso es un acido octanoico. En algunas realizaciones, la ghrelina esta modificada en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 de la SEQ ID NO. 1. En algunas realizaciones, la ghrelina esta modificada en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico. En algunas realizaciones, la modificacion de la ghrelina es una acilacion de la ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico. En algunas realizaciones, la ghrelina asf modificada es una octanoil-ghrelina con una acilacion en la serina de la posicion de aminoacido 3 con acido octanoico. En algunas realizaciones, la mBI comprende un traumatismo craneoencefalico. En algunas realizaciones, el sujeto es un marnffero. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada, al menos durante una primera administracion (pero sin limitacion), en un plazo o en menos de aproximadamente 24 horas, o menos de 48 horas, o menos de 72 horas desde la mBI, o cualquier subvalor o subrango entre inmediatamente despues de la lesion y dichos periodos de tiempo. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en un plazo no superior a aproximadamente 8 horas desde la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina puede ser administrada con aproximadamente 6 horas desde la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina puede administrarse en una dosis individual, o en dosis multiples, por ejemplo 2-3 dosis. Las dosis multiples pueden tener al menos una primera dosis administrada en el periodo de tiempo mencionado en la presente memoria, y una o mas dosis posteriores despues del periodo de tiempo. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una cantidad que da como resultado niveles de ghrelina en sangre que son al menos 1, al menos 1,5, al menos dos veces (o mas) superiores a los niveles sangumeos de ghrelina endogenos del sujeto. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis individual. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis desde 10 ng/kg al dfa hasta 10 mg/kg al dfa o por dosis. En algunas realizaciones, la dosis de ghrelina puede estar entre 1 microgramo y 15 microgramos por kg, por ejemplo aproximadamente 10 jg/kg. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis de 2 |jg/kg por dosis o en algun caso por dfa. En algunas realizaciones, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt).

La presente descripcion tambien proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando de este modo la mBI. La ghrelina puede ser el unico agente activo. En algunas realizaciones, la ghrelina presenta la secuencia de Gly-Ser-Ser-Pher-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 1). En algunas realizaciones, la ghrelina esta modificada con uno o mas acidos grasos. En algunas realizaciones, el acido graso es acido octanoico. En algunas realizaciones, la ghrelina esta modificada en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 de la SEQ ID NO. 1. En algunas realizaciones, la ghrelina esta modificada en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico. En algunas realizaciones, la modificacion de la ghrelina es acilacion de ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico. En algunas realizaciones, la ghrelina asf modificada es una octanoil-ghrelina con una acilacion en la serina de la posicion de aminoacido 3 con acido octanoico. En algunas realizaciones, la mBI comprende un traumatismo craneoencefalico. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis individual. En algunas realizaciones, la cantidad administrada proporciona un nivel en sangre de al menos 1,0 a 100 veces superior a la cantidad observada endogenamente en el sujeto. En algunas realizaciones, la cantidad administrada da como resultado un nivel en sangre de al menos 55 picogramos/mL. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis entre 10 ng/kg al dfa y 10 mg/kg por dosis y/o al dfa. En algunas realizaciones, la dosis de ghrelina puede estar entre 1 microgramo y 15 microgramos por kg, por ejemplo aproximadamente 10 jg/kg. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis de 2 jg/kg por dosis o en algun caso por dfa. En algunas realizaciones, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,0, 2,0 veces, o mas, superiores a los niveles de ghrelina en sangre endogenos del sujeto, tratando con ello la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de una composicion farmaceutica que consiste esencialmente en ghrelina. En alguna realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra al sujeto en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,0 , 1,5, 2,0 o mas veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando con ello la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 2,0 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando de este modo la mBI.

En algunas realizaciones, el sujeto esta libre hipertension intracraneal. En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica. En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de necrosis del tejido cerebral. En alguna realizacion, el sujeto esta libre de danos masivos celulares o tisulares del cerebro asociados a una lesion cerebral. En alguna realizacion, el sujeto esta libre de inflamacion neuronal grave o de edema vasogenico o celular significativo en la cabeza del sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de cambios anatomicos grandes asociados a lesiones en el cerebro del sujeto.

En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, o necrosis del tejido cerebral. En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de dano tisular o celular masivo en el cerebro asociado a lesion cerebral, inflamacion neuronal grave o edema celular o vasogenico significativo en la cabeza del sujeto, o cambios anatomicos grandes asociados a lesiones en el cerebro del sujeto.

En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis del tejido cerebral, dano tisular o celular masivo en el cerebro asociado a lesion cerebral, inflamacion neuronal grave o edema celular o vasogenico significativo en la cabeza del sujeto, o cambios anatomicos grandes asociados a lesiones en el cerebro del sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto esta libre de hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis del tejido cerebral, dano tisular o celular masivo en el cerebro asociado a lesion cerebral, inflamacion neuronal grave o edema celular o vasogenico significativo en la cabeza del sujeto, o cambios anatomicos grandes asociados a lesiones en el cerebro del sujeto, o combinaciones de los mismos.

En algunas realizaciones, la mBI esta asociada a la perdida de habilidades cognitivas o motoras. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a desajustes metabolicos. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a encefalopatfa traumatica cronica (CTE). En algunas realizaciones, la mBI se asocia a dano neuroconectivo. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a cambios encefalopaticos y/o psicologicos. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a perdida de consciencia.

En algunas realizaciones, la mBI esta asociada a la perdida de habilidades cognitivas o motoras y desajustes metabolicos. En alguna realizacion, la mBI se asocia a encefalopatia traumatica cronica (CTE) y dano neuroconectivo. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a cambios fisiologicos y perdida de consciencia. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a perdida de habilidades cognitivas o motoras, desajustes metabolicos, encefalopatfa traumatica cronica (CTE), dano neuroconectivo, cambios fisiologicos, o perdida de consciencia. En algunas realizaciones, la mBI se asocia a perdida de habilidades cognitivas o motoras, desajustes metabolicos, encefalopatia traumatica cronica (CTE), dano neuroconectivo, cambios fisiologicos, y perdida de consciencia o combinaciones de los mismos.

La presente descripcion proporciona un metodo para reducir, inhibir y/o minimizar el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina asf administrada reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, inhibiendo con ello el dano a las neuronas asociado al estres oxidativo y la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y la ghrelina es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona ademas un metodo para inhibir el dano en neuronas asociado al estres oxidativo y la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI), que incluye traumatismos craneoencefalicos, en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina administrada de este modo reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, y en donde la ghrelina es el unico agente activo, inhibiendo de este modo el dano a neuronas asociado al estres oxidativo y a la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona adicionalmente un metodo para inhibir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y a sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismos craneoencefalicos en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde la ghrelina administrada de este modo reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, inhibiendo con ello el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion tambien proporciona un metodo para inhibir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde la ghrelina administrada de este modo reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS y en donde la ghrelina es el unico agente activo, inhibiendo de este modo el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

Adicionalmente, la presente descripcion describe un metodo para restaurar la funcion intracelular tras una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina de tal modo que se reduzcan las ROS y se mejore la captacion de glucosa del cerebro o de las celulas neuronales y axones, restaurando asf la funcion intracelular tras la mBI en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina presenta un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina presenta un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona ademas un metodo para restaurar la funcion intracelular tras una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina de tal modo que se reducen las ROS y se mejora la captacion de glucosa del cerebro o las celulas neuronales y axones, en donde la ghrelina es el unico agente activo, restaurando con ello la funcion intracelular tras la mBI en el sujeto.

La presente descripcion proporciona adicionalmente un metodo para restaurar la funcion intracelular tras una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido en carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), de tal modo que se reducen las ROS y se mejora la captacion de glucosa del cerebro o las celulas neuronales y axones, restaurando con ello la funcion intracelular tras una mBI en el sujeto.

La presente descripcion tambien proporciona un metodo para restaurar la funcion intracelular tras una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) de tal modo que se reducen las ROS y se mejora la captacion de glucosa del cerebro o las celulas neuronales y axones, en donde la ghrelina es el unico agente activo, restaurando de este modo la funcion intracelular tras una mBI en el sujeto.

Adicionalmente, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis, o dano tisular o celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende la administracion al sujeto de una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, tratando con ello la mBI. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona adicionalmente un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis, o dano tisular o celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI. La presente invencion describe un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis, o dano tisular o celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando con ello la mBI.

La presente descripcion proporciona tambien un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis, o dano tisular o celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI.

Asimismo, la presente descripcion proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis o dano tisular y celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando de este modo la mBI. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis o dano tisular y celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI.

La presente descripcion proporciona adicionalmente un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis o dano tisular y celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y en una cantidad que proporciona niveles de ghrelina en sangre que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles de ghrelina en sangre del sujeto, tratando de este modo la mBI.

La presente descripcion tambien proporciona un metodo para tratar la lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto libre de edema cerebral, hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis o dano tisular y celular masivo asociado a lesion cerebral, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles de ghrelina en sangre del sujeto, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando con ello la mBI.

La presente descripcion proporciona ademas un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a una lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, tratando con ello los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion describe un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a una lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a la lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido en carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando de este modo los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporcion ademas un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a una lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende la administracion al sujeto de una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a una lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1.5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando de este modo los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1.5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina del sujeto, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando con ello los desajustes metabolicos asociados a la mBI o el traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1.5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina presenta un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando de este modo los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar desajustes metabolicos asociados a una lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1.5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo, tratando con ello los desajustes metabolicos asociados a la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, previniendo de este modo el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo. La presente invencion describe un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde el tratamiento de ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS y en donde la ghrelina es el unico agente activo, previniendo de este modo el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente activa de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobre produccion de ROS, previniendo de este modo el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI y o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS y en donde la ghrelina es el unico agente activo, previniendo con ello el dano a neuronas asociado al estres oxidativo y la sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, previniendo con ello el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces mas elevados que los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS, y en donde la ghrelina es el unico agente activo, previniendo de este modo el dano a las neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para prevenir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde el tratamiento con ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS y en donde la ghrelina tiene un contenido en carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), previniendo de este modo el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para reducir el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de lesion cerebral leve (mBI) o traumatismo craneoencefalico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde el tratamiento de ghrelina reduce el estres oxidativo y la sobreproduccion de ROS y en donde la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y el unico agente activo, previniendo con ello el dano a neuronas asociado a estres oxidativo y sobreproduccion de especies oxidativas reactivas (ROS) con una o mas incidencias de la mBI o traumatismo craneoencefalico en el sujeto.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, tratando con ello la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), donde la grelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que es al menos 1,5 veces superior a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido en carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando de este modo la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto, libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo, una cantidad terapeuticamente efectiva en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo, tratando con ello la mBI en el sujeto libre de cambios histologicos neuronales agudos, inflamacion neuronal grave o edema vasogenico o celular significativo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir smtomas de lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, tratando con ello o reduciendo los smtomas de la mBI. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando o reduciendo de este modo los smtomas de la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando asf o reduciendo los smtomas de la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina que tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando o reduciendo con ello los smtomas de la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, tratando o reduciendo de este modo los smtomas de la mBI. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt). En una realizacion, la ghrelina es el unico agente activo. En una realizacion, la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina es el unico agente activo, tratando o reduciendo con ello los smtomas de la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de una lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina presenta un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt), tratando o reduciendo con ello los smtomas de la mBI.

La presente descripcion proporciona un metodo para tratar o reducir los smtomas de lesion cerebral leve (mBI) en un sujeto), que comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina en una cantidad que proporciona niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto, en donde la ghrelina tiene un contenido de carbono 14 (C14) inferior a 1 parte por trillon (ppt) y es el unico agente activo, tratando o reduciendo de este modo los smtomas de la mBI.

En algunas realizaciones, los smtomas de la mBI son cualquier dolor de cabeza, “presion en la cabeza”, dolor de cuello, nausea o vomitos, mareos, vision borrosa, problemas de equilibrio, sensibilidad a la luz, sensibilidad al sonido, sentimiento de ralentizacion, sentimiento de estar “en una niebla”, “no sentirse bien”, dificultad para concentrarse, dificultad para recordar, fatiga o falta de energfa, confusion, somnolencia, perdida de consciencia, problemas para dormir, estar mas emocional, irritabilidad, tristeza y estar nervioso o ansioso.

Tal como se ha discutido en la presente memoria, la ghrelina puede usarse para tratar y/o reducir la gravedad de las lesiones cerebrales leves, tales como, por ejemplo, los traumatismos craneoencefalicos. La ghrelina puede proporcionarse o administrarse como se describe en la presente memoria. Tal como se describe en otra parte de la presente memoria, la ghrelina puede ser el unico agente activo administrado a un sujeto. Por ejemplo, la ghrelina puede ser el unico ingrediente activo para tratar la mBI o para reducir la gravedad de la mBI. En algunas realizaciones, se excluyen espedficamente agentes activos adicionales. Por ejemplo, en algunos metodos de la presente memoria en los que se administra ghrelina, los metodos pueden excluir espedficamente el uso o la administracion de otros compuestos, tal como, por ejemplo, moduladores de receptor de androgeno selectivos, moduladores de receptor de esteroide, ligando para un receptor de glucocorticoide, o un modulador de la ruta de senalizacion NF-kB.

En las realizaciones descritas en la presente memoria, debe entenderse que mBI es diferente y no es TBI severa.

En algunas realizaciones, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados mediante tecnicas de imagen funcional no invasivas despues del impacto. En algunas realizaciones, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados mediante determinacion neurofisiologica despues del impacto. En alguna realizacion, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados mediante determinacion neuroanatomica del cerebro despues del impacto. En alguna realizacion, la determinacion neuroanatomica del cerebro despues del impacto es a nivel celular o a nivel molecular. En alguna realizacion, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados mediante determinacion del estado de alerta despues del impacto. En algunas realizaciones, la mBI o traumatismo craneoencefalico pueden diagnosticarse y/o ser determinados mediante evaluacion de una o mas de estado de consciencia, determinacion de estado de alerta, determinacion de la orientacion, determinacion de la funcion cognitiva, determinacion del estado psicologico, determinacion neuropsicologica.

En algunas realizaciones, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados usando una Escala de Coma de Glasgow (GCS, del ingles “Glasgow Coma Scale”) que tiene una puntuacion de 13 a 15. En algunas realizaciones, la mBI o traumatismo craneoencefalico son diagnosticados usando una Escala de Coma de Glasgow (GCS) que tiene una puntuacion de 13 o superior.

Por el contrario, a modo de ejemplo, la TBI grave generalmente tiene una puntuacion de GCS de 8 o menos.

En algunas realizaciones, se emplea una inyeccion intravenosa de ghrelina. La ruta de administracion debe asegurar que la forma bioactiva no degradada del peptido sera la forma dominante en la circulacion, que alcanzara y estimulara los receptores de ghrelina a fin de obtener el efecto maximo del tratamiento de ghrelina sobre la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en el plazo de aproximadamente 30 minutos desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en el plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 horas desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en el plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 6 horas desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina es administrada en el plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 12 horas desde el incidente que produce la mBI.

Una dosis tfpica es una concentracion equivalente de entre 10 ng y 10 mg de ghrelina por kg de peso corporal. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una concentracion equivalente a entre aproximadamente 0,1 |jg y aproximadamente 1 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 0,5 jg y aproximadamente 0,5 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1,0 jg y aproximadamente 0,1 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1.0 jg y aproximadamente 50 jg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1,0 jg y aproximadamente 10 jg de ghrelina por kg de peso corporal. En algunas realizaciones, se reconstituyen aproximadamente 10 jg de polvo de ghrelina en aproximadamente 100 jL de una disolucion salina esteril antes de la administracion. En algunas realizaciones, la disolucion salina esteril esta contenida en una bolsa IV para facilitar la administracion.

En algunas realizaciones, la ghrelina y ghrelina o agonista de ghrelina se usan en un ensayo para determinar la capacidad de los compuestos candidatos para efectuar un aumento de la expresion de protema desacoplante 2 (UCP-2) que incluye un aumento de la expresion de UCP-2 en las mitocondrias. En dichos ensayos, la ghrelina se usa como control para determinar la eficacia relativa del compuesto o compuestos candidatos. Los ensayos adecuados incluyen, a modo de ejemplo, solo ensayos competitivos para la union de un compuesto o compuestos candidatos al receptor 1a de secretagogo de hormona del crecimiento (es decir, GHSR-1a) en presencia de ghrelina, asf como cromatograffa de afinidad frontal.

Cualquier ensayo de union competitivo conocido en la tecnica es aplicable para la union de un compuesto o compuestos candidatos a receptor de secretagogo de hormona del crecimiento en presencia de ghrelina, usando tanto metodos heterogeneos como homogeneos, con uno o mas reactivos, y con etiquetas y metodos de deteccion. A modo de ejemplo no limitativo, los metodos de deteccion pueden incluir metodos radioactivos; tecnicas enzimaticas que usan enzimas intactas de muchos tipos, que incluyen, por ejemplo, p-galactosidasa, glucosa 6-fosfatasa deshidrogenasa, fosfatasa alcalina, peroxidasa de rabano, o glucosa oxidasa; tecnicas que usan fragmentos enzimaticos, tales como ensayos de complementacion de p-galactosidasa; sistemas de deteccion que incluyen sustratos cromogenicos; metodos fluorescentes detectados mediante fluorescencia directa, fluorescencia resuelta en el tiempo, polarizacion de fluorescencia, o transferencia de energfa de fluorescencia; y sistemas de deteccion qmmicos o de bioluminiscencia.

En algunas realizaciones, se puede usar la cromatograffa de afinidad frontal (FAC) para el cribado de bibliotecas de compuestos. La premisa basica de la FAC es que la infusion continua de un compuesto permitira el equilibrio del ligando entre los estados libre y ligado, donde se conoce la concentracion precisa del ligando libre. La deteccion de compuestos que eluyen de la columna se puede llevar a cabo usando metodos tales como fluorescencia, radioactividad o espectrometffa de masas de electropulverizacion. Los primeros dos metodos habitualmente usando una biblioteca marcada, o usan un compuesto indicador marcado, que compite con compuestos no marcados conocidos, desplazandose a tiempos mas cortos si hay presente un ligando de union mas fuerte.

En algunas realizaciones, un paciente que padece perdida de habilidades cognitivas o motoras debido a mBI y, en particular, a mBI repetitiva, puede ser monitorizado para terapia o progresion de dichas habilidades a traves de la correlacion de la evolucion del nivel de ghrelina en el cerebro del paciente con el tiempo. Segun disminuyen los niveles de ghrelina, se producira un aumento de la necesidad de intervencion.

Esta descripcion tambien proporciona metodos para medir los niveles de ghrelina antes de comenzar un deporte o actividad, por ejemplo antes del inicio de la temporada de futbol (o cualquier otro deporte o actividad, que incluye los enumerados en otro sitio de la presente memoria), y monitorizar los niveles de ghrelina durante la temporada para establecer si el jugador o participante esta en un nivel no cualificado para jugar o participar. Los metodos pueden incluir el uso de cualquier tecnica de medida o ensayo adecuada para medir los niveles de ghrelina, tal como a partir de la sangre, para determinar si los niveles en sangre se correlacionan con los niveles cerebrales.

Con el beneficio de las presentes realizaciones, el especialista en la tecnica puede seleccionar cualquier tecnica adecuada para medir los niveles de ghrelina. Una serie de ensayos conocidos en la tecnica para medir un nivel de protema u hormona son aplicables para medir los niveles de ghrelina. A modo de ejemplos no limitativos, ensayos tales como un test de azucar en sangre extrayendo una gota de sangre y colocandola en un dispositivo, pueden determinar cuantitativamente la cantidad de ghrelina, o un ensayo que implica medir un rango de sustancias mediante las cuales se sigue una reaccion qmmica espedfica foto-metricamente con el tiempo, por ejemplo utilizando un anticuerpo espedfico para la ghrelina que se recubre sobre parffculas de latex, y midiendo el aumento de turbidez que se produce cuando la ghrelina que esta siendo medida promueve la agregacion de las parffculas de latex segun se va produciendo la reaccion entre la ghrelina y el anticuerpo anti-ghrelina. Esta medicion del aumento de turbidez se puede realizar con un fotometro convencional y usando los principios cienffficos asociados de las mediciones fotometricas. Despues se compara la turbidez, dependiente de la concentracion, con la producida por patrones establecidos en la tecnica.

Otras metodologfas compatibles, pero no limitativas, incluyen llevar a cabo una serie de reacciones ligadas a enzima en disolucion, donde la ghrelina de la fraccion de plasma de una muestra de sangre entera es alterada por una reaccion promovida por enzima para derivar finalmente una sustancia coloreada a partir de los constituyentes de reaccion incoloros. El color se desarrolla de un modo dependiente del tiempo y se monitoriza foto-metricamente. Esta medida del cambio de color tambien se puede realizar usando un fotometro convencional usando los principios cienffficos asociados de las medidas fotometricas. Entonces se compara dicho cambio en la transmision, dependiente de la concentracion, con el producido por patrones.

En muestras de sangre entera, el hematocrito o porcentaje de globulos rojos en volumen de la muestra de sangre entera es una variable, y se puede tener en cuenta cuando se analizan los niveles de ghrelina presentes en el componente de plasma. Segun aumenta el hematocrito de la sangre de un paciente, tambien lo hace el volumen de plasma en una muestra de volumen fijo, que es introducida en el dispositivo de ensayo, disminuye y viceversa. Puesto que es el componente de plasma el que porta exclusivamente los niveles de ghrelina que estan siendo medidos, entonces cuanto menor sea volumen de componente de plasma anadido a la mezcla de reaccion, menor es la concentracion resultante de la sustancia que esta siendo medida en dicha mezcla de reaccion, y el valor ensayado resultante y viceversa.

Cualquier analisis que produce una concentracion de una sustancia en plasma de sangre entera puede ser corregido para variaciones en el hematocrito para dar lugar a una verdadera concentracion en plasma. Puede ser muy util en estas situaciones para medir dos sustancias, una de las cuales es la ghrelina objeto de la investigacion y la otra que se considera un marcador mediante el cual estimar o normalizar el hematocrito de la muestra. La concentracion de hemoglobina de la sangre entera, una vez que los globulos rojos son lisados, es directamente proporcionar al volumen de globulos rojos en la muestra de sangre entera.

Composiciones farmaceuticas

La ghrelina descrita en la presente memoria se puede formular como una composicion farmaceutica, p.ej., congelada subitamente o liofilizada para almacenamiento y/o transporte. En algunas realizaciones, el compuesto puede estar en una composicion con salino esteril, por ejemplo. En algunas realizaciones, se puede reconstituir una ghrelina en un salino como ese o en otro diluyente aceptable. En algunas realizaciones, se reconstituyen aproximadamente 10 |jg de polvo de ghrelina en aproximadamente 100 jL de disolucion de salino antes de la administracion. Adicionalmente, la composicion se puede administrar sola o en combinacion con un vetnculo, tal como un vetnculo farmaceuticamente aceptable o un soporte biocompatible. Las composiciones de la invencion pueden administrarse de forma convencional parenteralmente, mediante inyeccion, por ejemplo, intravenosamente, subcutaneamente o intramuscularmente. Otras formulaciones adicionales que son adecuadas para otros modos de administracion incluyen formulaciones orales. Las formulaciones orales incluyen excipientes empleados normalmente tales como, por ejemplo, grados farmaceuticos de manitol, lactosa, almidon, estearato magnesico, sacarina sodica, celulosa, carbonato magnesico, y otros similares. Estas composiciones adoptan la forma de disoluciones, suspensiones, comprimidos, pfldoras, capsulas, formulaciones de liberacion sostenida o polvos, y contienen de aproximadamente un 10% a aproximadamente un 95% de ingrediente activo, de aproximadamente 25% a aproximadamente 70%.

Tfpicamente, las composiciones se administran de un modo compatible con la formulacion de dosificacion, y en una cantidad tal que es terapeuticamente efectiva para la enfermedad o afeccion a tratar. La cantidad a administrar depende del sujeto a tratar. Las cantidades precisas de la composicion a administrar dependen del juicio del medico. Los regfmenes adecuados para la administracion inicial y para los recuerdos tambien son variables, pero tfpicamente consisten en una administracion inicial seguida de administraciones subsiguientes.

En algunas realizaciones, se administran a un sujeto composiciones farmaceuticas adicionales para apoyar o potenciar las composiciones descritas en la presente memoria. Los diferentes aspectos de la presente invencion implican la administracion de una cantidad efectiva de la composicion a un sujeto. Adicionalmente, dichas composiciones pueden administrarse en combinacion con otros agentes. Dichas composiciones generalmente se disolveran o dispersaran en un vetnculo farmaceuticamente aceptable o medio acuoso.

Las frases “farmaceuticamente aceptable” o “farmacologicamente aceptable” se refieren a entidades moleculares y composiciones que no producen una reaccion adversa, alergica u otra reaccion inapropiada cuando se administran a un animal, o humano. Tal como se usa en la presente memoria, “vetnculo farmaceuticamente aceptable” incluye cualquier y todos los disolventes, medios de dispersion, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifungicos, agentes isotonicos y de retraso de la absorcion, y otros similares. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmaceuticas activas es bien conocido en la tecnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con los ingredientes activos, se contempla su uso en composiciones inmunogenicas y terapeuticas.

Los vetnculos farmaceuticos adecuados incluyen diluyentes o rellenos solidos inertes, disolucion acuosa esteril y diversos disolventes organicos. Los ejemplos de vetnculos solidos son lactosa, terra alba, sacarosa, ciclodextrina, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato magnesico, acido estearico o eteres de celulosa de alquilos inferiores. Los ejemplos de vetnculos lfquidos son jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, fosfolfpidos, acidos grasos, aminas de acido graso, polioxietileno o agua. Se pueden preparar aerosoles nasales o formulaciones para inhalacion, por ejemplo, como disoluciones en salino, empleando alcohol bendlico u otros conservantes adecuados, promotores de absorcion para potenciar la biodisponibilidad, emplear fluorocarbonos, y/o emplear otros agentes solubilizantes o dispersantes.

Una cantidad efectiva de composicion terapeutica se determina en base al objetivo pretendido. El termino “dosis unitaria” o “dosificacion” se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas para uso en un sujeto, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de la composicion calculada para producir las respuestas deseadas discutidas anteriormente en asociacion con su administracion, es decir, la ruta y regimen apropiado. La cantidad a administrar, tanto de acuerdo al numero de tratamientos y a la dosis unitaria, depende del resultado y/o la proteccion deseados. Las cantidades precisas de la composicion tambien dependen del juicio del medico responsable y son particulares para cada individuo. Los factores que afectan a la dosis incluyen el estado ffsico y clmico del sujeto, la ruta de administracion, el objetivo pretendido para el tratamiento (alivio de smtomas frente a cura), y la potencia, estabilidad y toxicidad de la composicion particular. Tras la formulacion, las disoluciones seran administradas de una manera compatible con la formulacion de dosificacion y en una cantidad tal que sea terapeutica y profilacticamente efectiva. Las formulaciones son facilmente administradas en una variedad de formas de dosificacion, tal como el tipo de disoluciones inyectables descritas antes.

Las composiciones de ghrelina pueden producirse usando tecnicas bien conocidas en la tecnica. Por ejemplo, una region de polipeptido de ghrelina puede sintetizarse y modificarse qmmica o bioqmmicamente. Las tecnicas para la smtesis qmmica de polipeptidos son bien conocidas en la tecnica (Lee V. H. L. en “Peptide and Protein Drug Delivery”, New York, N.Y., M. Dekker, 1990). Los ejemplos de tecnicas para la smtesis bioqmmica que implican la introduccion de un acido nucleico en una celula y la expresion de acidos nucleicos se proporcionan en Ausubel F. M. et al., “Current Protocols in Molecular Biology”, John Wiley, 1987-1998, y Sambrook J. et al., “Molecular Cloning, A Laboratory Manual”, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, cada una de las cuales se incorporan a la presente memoria a modo de referencia. Otro ejemplo de tecnica descrita en la Pat. de EE.UU. n° 5.304.489, incorporada a la presente memoria a modo de referencia, es el uso de un mairnfero transgenico que presenta mutaciones dirigidas a la glandula mamaria, que dan como resultado la produccion y secrecion de ghrelina sintetizada en la leche del mamffero transgenico.

La ghrelina tambien puede ser producida recombinantemente usando metodos de expresion rutinarios conocidos en la tecnica. El polinucleotido que codifica la ghrelina deseada (p.ej., secuencia primaria de ghrelina tal como se muestra en la SEQ iD NO. 1) se liga operativamente a un promotor en un vector de expresion adecuado para cualquier hospedante conveniente. Se usan sistemas hospedantes tanto eucarioticos como procarioticos para formar la ghrelina recombinante. A continuacion la ghrelina es aislada de las celulas lisadas o del medio de cultivo y se purifica hasta el punto necesario para su uso pretendido. La ghrelina aislada puede ser modificada o modificada adicionalmente en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 mediante acilacion con acido graso in vivo o in vitro, comprendiendo la ultima condicion de reaccion de acilacion in vitro un tioester de acido graso, ghrelina y microsomas que comprenden ghrelina O-acil transferasa (GOAT). En algunas realizaciones, la acil ghrelina modificada con acido graso en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 es aislada de los componentes celulares o de reaccion.

Las composiciones de ghrelina pueden incluir sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de las mismas. Dichas sales seran aquellas que son aceptables en su aplicacion para un uso farmaceutico, lo que significa que la sal retendra la actividad biologica del compuesto de partida y la sal no tendra efectos inapropiados o perjudiciales en su aplicacion y uso en el tratamiento de enfermedades. Las sales farmaceuticamente aceptables se preparan de un modo estandar.

Las composiciones de ghrelina pueden administrarse en la forma de una sal de metal alcalino o metal alcalino terreo de la misma, concurrentemente, simultaneamente, o junto con un vehmulo o diluyente farmaceuticamente aceptable, especialmente y en la forma de una composicion farmaceutica de la misma, a traves de diversas rutas (p.ej., oral, rectal, parenteral, subcutanea) en una cantidad efectiva.

Adm inistracion de composiciones

La presente descripcion proporciona un metodo para reducir la incidencia o la gravedad de la mBI en un sujeto, que comprende la administracion al sujeto de una cantidad efectiva de un compuesto que comprende ghrelina, reduciendo de este modo la incidencia o gravedad de la mBI. La presente descripcion tambien proporciona metodos para reducir la incidencia o la gravedad de la mBI en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad efectiva de ghrelina, reduciendo con ello la incidencia o la gravedad de la mBI. Esta invencion proporciona ademas metodos para reducir la cantidad de tiempo necesario para recuperarse de una lesion cerebral leve, que comprende administrar a un paciente que padece de una lesion cerebral leve una cantidad terapeuticamente efectiva de ghrelina dentro de un determinado periodo (p.ej., 72 horas) desde la lesion cerebral leve.

En algunas realizaciones, la ghrelina se administra antes de un evento o actividad con un potencial de aparicion de mBI. En algunas realizaciones, el evento o actividad es la participacion en un evento deportivo, entrenamiento ffsico o combate. En algunas realizaciones, el evento o actividad es beisbol, baloncesto, rugby, futbol americano, hockey, lacrosse, futbol, ciclismo, boxeo, gimnasia, un arte marcial, un arte marcial mixto, un ejercicio militar, carreras de automovil, esqm en nieve, snowboard, patinaje en hielo, monopatm, motocross, ciclismo de montana, motociclismo y pilotaje de quads, y similares. En algunas realizaciones, el sujeto no ha sufrido una mBI. En algunas realizaciones, el sujeto presenta una historia de mBI o es susceptible a una mBI.

En algunas realizaciones, una ruta de administracion para una ghrelina se selecciona entre: administracion bucal, administracion sublingual, administracion transdermica, inhalacion e inyeccion sin aguja, tal como usando metodos desarrollados por PowderJet. Para la inhalacion, la ghrelina puede formularse usando metodos conocidos por los especialistas en la tecnica, por ejemplo un aerosol, polvo seco o solubilizado tal como en microgotas, en un dispositivo disenados para dicha administracion (tal como los dispositivos disponibles comercialmente y las tecnologfas de formulacion de Aradigm Corp. (Hayward, Calif.), Alkermes, Inc. (Cambridge, Mass.), Nektar Therapeutics (San Carlos, Calif.), Windgap Medical, Inc. (p.ej., Abiliject™) o MannKind Corporation (Valencia, Calif.; p.ej., las tecnologfas Technosphere®, Dreamboat® y Criket™)).

En algunas realizaciones, la ghrelina se administra a traves de un polvo o formulacion estable, en donde la ghrelina se formula en una forma de dosis seleccionada del grupo que consiste en: lfquido, brebaje, bebida deportiva medicada, polvo, capsula, comprimido masticable, capsula, comprimido tragable, comprimido bucal, pastilla soluble, pastilla, chicle, disolucion, suspension, spray, supositorio, tintura, decoccion, infusion, y una combinacion de los mismos.

En algunas realizaciones, la ghrelina se administra via inhalacion, oral, intravenosa, parenteral, bucal, subcutanea, transdermica, parche, sublingual, intramuscular o intranasal. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una unica dosis. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en dosis multiples. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una dosis entre 10 ng/kg al dfa y 10 mg/kg al dfa (o cualquier sub valor o sub rango entre medias, p.ej., de 0,1 pg/kg al dfa a 5 mg/kg al dfa). En algunas realizaciones, se administra un regimen de dosificacion (2 pg/kg, por ejemplo administrados intravenosamente) en un plazo de 8 horas desde la lesion. La dosificacion es una dosis de una sola vez con posible dosificacion recurrente en base a los smtomas del paciente.

La administracion nasal es una ruta no invasiva para agentes terapeuticos dirigidos al sistema nervioso central debido a la relativamente alta permeabilidad de la membrana del epitelio nasal, evitando la eliminacion de primera paso hepatico. La administracion nasal es facil de administrar y permite la auto-medicacion del individuo. La eliminacion mucociliar nasal es un factor limitativo importante para la administracion nasal de farmacos. La eliminacion mucociliar nasal limita de forma grave el tiempo permitido para que se produzca la absorcion del farmaco y puede evitar de manera efectiva una administracion sostenida de farmaco. Sin embargo, se ha documentado que la administracion nasal de determinadas hormonas ha dado como resultado una administracion mas completa. En algunas realizaciones, la presente descripcion utiliza administracion nasal de ghrelina.

En algunas realizaciones, una composicion que comprende ghrelina que es adecuada para administracion nasal puede incluir uno o mas polfmeros bioadhesivos. Algunos polfmeros tales como carbopol, pueden adherirse a la mucosa nasal durante periodos de tiempo razonablemente prolongados, previniendo la eliminacion nasal rapida. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de polfmero bioadhesivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0,1%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de polfmero bioadhesivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0,5%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de polfmero bioadhesivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 1%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de polfmero adhesivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 5%.

En algunas realizaciones, una composicion que comprende ghrelina que es adecuada para administracion nasal puede incluir uno o mas tensioactivos. Los tensioactivos que pueden usarse en las composiciones de la presente invencion incluyen diferentes polietilen glicoles (PEGs) y derivados de polietilen glicol. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de tensioactivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 1%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de tensioactivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 2%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de tensioactivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 5%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de tensioactivo en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 10%.

En algunas realizaciones, una composicion que comprende ghrelina que es adecuada para administracion nasal puede incluir uno o mas agentes tamponantes para controlar el pH de la composicion. Los agentes tamponantes que pueden usarse en las composiciones de la presente invencion incluyen acido cttrico y dihidrato de citrato sodico. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de agente tamponante en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0,001%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de agente tamponante en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0,005%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de agente tamponante en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0,01%. En algunas realizaciones, una composicion adecuada para administracion nasal, el porcentaje de agente tamponante en una disolucion adecuada de ghrelina es de aproximadamente 0 ,1%.

En algunas realizaciones, la osmolaridad de la composicion que comprende ghrelina puede estar controlada por propilen glicol. Cuando una composicion que comprende ghrelina es un gel, la composicion puede incluir un agente gelificante tal como hidroxilpropil celulosa, carbopols, carboximetilcelulosa y etilcelulosa. En algunas realizaciones, la composicion que comprende ghrelina puede incluir un conservante tal como acido etilendiamintetraacetico (EDTA) y cloruro de benzalconio. Los ejemplos no limitativos de disolventes adecuados para las composiciones de la presente invencion incluyen agua, aceite vegetal y etanol. En algunas realizaciones, el uso de un inhalador nasal reduce la concentracion requerida para tratar la mBI y prevenir efectos secundarios no deseados.

En algunas realizaciones, la administracion nasal es un medio mas practico de administracion en unas instalaciones militares o deportivas. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un metodo para mejorar el estandar de cuidados para prevenir o tratar la mBI en personal militar o atletas mediante un agente terapeutico intranasal profilactico y post-agudo. En algunas realizaciones, el ingrediente activo del agente terapeutico es ghrelina. En algunas realizaciones, la ghrelina puede ser parte de una formulacion que se administra intranasalmente para facilitar el acceso y el uso en el campo y para minimizar la dosis requerida, limitando adicionalmente los efectos secundarios. El uso de ghrelina como agente terapeutico puede reducir la aparicion de malos resultados tras la lesion, especialmente trastornos neuropsicologicos y neurodegenerativos que incluyen Encefalopatia Traumatica Cronica (CTE) y Trastorno de Estres Post-Traumatico (PTSD) ligado a lesiones cerebrales repetitivas, una preocupacion creciente hoy dfa para el personal militar y los atletas.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona composiciones que comprenden ghrelina que son aplicadas como gotas nasales, gotas oculares y sprays nasales. Para la aplicacion nasal, se puede usar una disolucion o suspension que se aplica como spray, es decir, en la forma de una dispersion fina en aire o por medio de una botella o bomba de pulverizacion. Los vetnculos no toxicos farmaceuticamente aceptables adecuados para uso en un sistema de administracion de farmacos para administracion intranasal de ghrelina pueden incluir, aunque sin limitacion, vetnculos usados para formulaciones farmaceuticas nasales para otros esteroides, tal como estrogeno.

En algunas realizaciones, las formulaciones de la presente invencion pueden contener un conservante y/o estabilizante. Estos incluyen, aunque sin limitacion, acido etilen diamino tetraacetico (EDTA) y sus sales alcalinas (por ejemplo, sales dialcalinas tales como sal disodica, sal calcica, sal de calcio-sodio), p-hidroxibenzoatos de alquilo inferior, clorhexidina (por ejemplo, en la forma de acetato o gluconato) y borato de fenil mercurio. Otros conservantes adecuados son: compuestos de amonio cuaternario farmaceuticamente utiles, por ejemplo cloruro de cetilpiridinio, bromuro de tetradeciltrimetil amonio, generalmente conocido como “cetrimida”, cloruro de N-bencil-N,N-dimetil-2-{2-[4-(2,4,4,-trimetilpentan-2-il)fenoxi]etoxi}etanaminio, generalmente conocido como “cloruro de bencetonio” y cloruro de miristil picolinio. Cada uno de estos compuestos puede usarse en una concentracion de aproximadamente 0,002 a 0,05%, por ejemplo de aproximadamente 0,02% (peso/volumen en las formulaciones lfquidas, en otros casos peso/peso). En algunas realizaciones, los conservantes entre los compuestos de amonio cuaternario son, aunque sin limitacion, cloruro de alquilbencil dimetil amonio y mezclas de los mismos, por ejemplo, cloruro de benzalconio.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona una estrategia de tratamiento para atletas que han sufrido una mBI que puede no solo reducir el tiempo requerido para el regreso seguro al juego, sino tambien proporcionar proteccion frente a futuras mBI.

Las administraciones intranasales (IN) pueden presentar menos efectos secundarios que las administraciones intraperitoneales (IP) debido a un cambio en la investigacion farmaceutica de sprays, gotas y geles nasales: la ruta nasal de administracion de farmacos continua recibiendo una creciente atencion de los cientfficos farmaceuticos y de los medicos debido a que esta ruta sortea la eliminacion de primer paso hepatico asociada a la administracion oral, es facilmente accesible y adecuada para la auto-medicacion. La administracion intranasal tambien se adecua particularmente a farmacos dirigidos al cerebro, ya que determinadas disoluciones de farmacos pueden sortear la barrera hematoencefalica (BBB) y alcanzar el sistema nervioso central (CNS) directamente desde la cavidad nasal -la captacion de dichos farmacos depende de su peso molecular y su lipofilicidad. La administracion intranasal aumenta los niveles cerebrales del farmaco, a la vez que reduce las concentraciones sistemicas y por tanto debena dar lugar a menos efectos secundarios daninos.

En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un metodo para administrar profilacticamente una composicion que comprende ghrelina a individuos que participan en actividades, tales como deportes de contacto o que sirven en las fuerzas armadas, en donde existe una posibilidad de que los individuos sufran una mBI. En algunas realizaciones, la presente invencion proporciona un metodo para tratar de forma precisa individuos que han sufrido una mBI. Para tratamientos agudos, la administracion nasal de la composicion que comprende ghrelina puede reducir el tiempo de captacion y aumentar la concentracion de ghrelina que alcanza la sangre o el cerebro.

Para administracion oral, los excipientes incluyen, p.ej., grados farmaceuticos de manitol, lactosa, almidon, estearato magnesico, sacarina sodica, talco, celulosa, glucosa, gelatina, sacarosa, carbonato magnesico, y otros similares. En polvos, el vehnculo es un solido dividido finamente, que esta mezclado con el componente activo dividido finamente. En los comprimidos, el componente activo se mezcla con el vehnculo que tiene la capacidad de union necesaria en proporciones adecuadas y se compacta en la forma y tamano deseados. Los polvos y comprimidos contienen entre uno y aproximadamente setenta por ciento de componente activo. Los vetnculos adecuados son carbonato magnesico, estearato magnesico, talco, azucar, lactosa, pectina, dextrina, almidon, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica, una cera de punto de fusion bajo, manteca de cacao, y otros similares. El termino “preparacion” pretende incluir una composicion que comprende un compuesto activo descrito en la presente memoria con material encapsulante como vehnculo que proporciona una capsula en la que el componente activo, con o sin vetnculos, esta rodeado por un vehnculo, que esta en asociacion con el. De forma similar, se incluyen pastillas y pastillas solubles. Los comprimidos, polvos, capsulas, pfldoras, pastillas y pastillas solubles pueden estar como formas solidas adecuadas para administracion oral.

Tambien se incluyen las preparaciones en forma solida, que se pretende que se conviertan, poco antes del uso, en preparaciones en forma lfquida para administracion oral. Dichas formas lfquidas incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones. Estas preparaciones pueden contener, ademas del componente activo, colorantes, aromatizantes, estabilizantes, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes, y otros similares.

Otras formas adecuadas para la administracion oral incluyen preparaciones en forma Ifquida que incluyen emulsiones, jarabes, elixires, disoluciones acuosas, suspensiones acuosas, pasta de dientes, dentffrico en gel, chicle, o preparaciones en forma solida que se pretende que se conviertan poco antes del uso en preparaciones en forma kquida. Las emulsiones se pueden preparar en disoluciones en disoluciones acuosas de propilen glicol, o pueden contener agentes emulsionantes tales como lecitina, monooleato de sorbitan o goma acacia. Las disoluciones acuosas se pueden preparar disolviendo el componente activo en agua y anadiendo colorantes, aromatizantes, agentes estabilizantes y espesantes adecuados. Las suspensiones acuosas se pueden preparar dispersando el componente dividido finamente en agua con material viscoso, tal como gomas naturales o sinteticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica, y otros agentes de suspension bien conocidos. Las preparaciones en forma solida incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones, y pueden contener, ademas del componente activo, colorantes, aromatizantes, estabilizantes, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes, y otros similares.

La administracion de ghrelina se basa en regfmenes de dosificacion adecuados que tienen en cuenta factores bien conocidos en la tecnica, que incluyen, p.ej., el tipo de sujeto que recibe la dosis; edad, peso, sexo y condicion medica del sujeto; la ruta de administracion; la funcion renal y hepatica del sujeto; el efecto deseado; y el compuesto particular empleado. La precision optima para alcanzar las concentraciones de farmaco en el rango que da lugar a eficacia sin toxicidad requiere un regimen basado en la cinetica de la disponibilidad del farmaco en las zonas diana. Esto implica una consideracion de la distribucion, equilibrio y eliminacion de un farmaco.

En algunas realizaciones, la composicion de ghrelina se administra subcutaneamente. En algunas realizaciones, la composicion de ghrelina se administra como un bolo, en donde la forma de administracion puede ser cualquier forma parenteral adecuada.

Las composiciones farmaceuticas para administracion parenteral incluyen disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones esteriles inyectables, acuosas y no acuosas, asf como polvos esteriles para ser reconstituidos en disoluciones o dispersiones inyectables esteriles antes de su uso. Otras formas de administracion adecuadas incluyen supositorios, sprays, pomadas, cremas, geles, inhalantes, parches dermicos, implantes, pfldoras, comprimidos, pastillas y capsulas.

Una dosificacion tfpica no limitativa esta en una concentracion equivalente a entre 10 ng y 10 mg de ghrelina por kg de peso corporal. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en una concentracion equivalente a entre aproximadamente 0,1 |jg y aproximadamente 1 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 0,5 jg y aproximadamente 0,5 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1,0 jg y aproximadamente 0,1 mg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1,0 jg y aproximadamente 50 jg de ghrelina por kg de peso corporal, tal como entre aproximadamente 1,0 jg y aproximadamente 10 jg de ghrelina por kg de peso corporal.

En algunas realizaciones, se emplea una inyeccion intravenosa de ghrelina. La ruta de administracion debe asegurar que la forma bioactiva no degradada del peptido sera la forma predominante en circulacion, que alcanzara y estimulara los receptores de ghrelina a fin de obtener el maximo efecto del tratamiento con ghrelina de la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo de aproximadamente 30 minutos desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 2 horas desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 6 horas desde el incidente que produce la mBI. En algunas realizaciones, la ghrelina se administra en un plazo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 12 horas desde el incidente que produce la mBI.

Las composiciones de ghrelina se pueden formular para administracion parenteral (p.ej., mediante inyeccion, por ejemplo inyeccion de bolo o infusion continua) y pueden presentarse en formas de dosis unitaria en ampollas, jeringas pre-rellenadas, infusion de volumen pequeno o en recipientes multi-dosis con un conservante anadido. Las composiciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, disoluciones o emulsiones en vehfculos oleaginosos o acuosos, por ejemplo disoluciones en polietilen glicol acuoso. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo, obtenido mediante aislamiento aseptico de un solido esteril o mediante liofilizacion desde disolucion para constitucion antes de su uso con un vehfculo adecuado, p.ej., agua esteril, libre de pirogeno. Las disoluciones acuosas debenan estar tamponadas de forma adecuada si es necesario, y el diluyente lfquido debe hacerse primero isotonico con suficiente salino o glucosa. Las disoluciones acuosas son particularmente adecuadas para administracion intravenosa, intramuscular, subcutanea e intraperitoneal. Los medios acuosos esteriles empleados se encuentran todos facilmente disponibles mediante tecnicas estandar conocidas por los especialistas en la tecnica.

Las formas de dosificacion farmaceutica adecuadas para inyeccion o infusion pueden incluir disoluciones o dispersiones acuosas esteriles que comprenden el ingrediente activo, que se adaptan para administracion mediante encapsulacion en liposomas. En todos los casos, la forma de dosificacion final debe ser esteril, fluida y estable en las condiciones de fabricacion y almacenamiento. Las disoluciones esteriles inyectables se preparan incorporando ghrelina o una sal farmaceuticamente aceptable de la misma en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con varios de los ingredientes adicionales enumerados anteriormente, segun sea requerido, seguido, p.ej., de esterilizacion por filtracion.

Los compuestos de ghrelina tambien pueden administrarse topicamente. Las regiones para administracion topica incluyen la superficie de la piel y tambien los tejidos de membrana mucosa del recto, nariz, boca y garganta. Las composiciones para administracion topica a traves de la piel y de las membranas mucosas no debenan dar lugar a signos de irritacion, tal como hinchamiento o rojez.

Los compuestos de ghrelina pueden incluir un vehfculo farmaceuticamente aceptable adaptado para administracion topica. De esta manera, la composicion puede adoptar la forma de, por ejemplo, una suspension, disolucion, pomada, locion, crema, espuma, aerosol, spray, supositorio, implante, inhalante, comprimido, capsula, polvo seco, jarabe, balsamo o pastilla. Los metodos para preparar dichas composiciones son bien conocidos en la industria farmaceutica.

Los compuestos de ghrelina se pueden administrar transdermicamente, lo que implica la administracion de un agente farmaceutico mediante pasaje percutaneo del farmaco a la circulacion sistemica del paciente. Las zonas de la piel incluyen regiones anatomicas para administrar transdermicamente el farmaco e incluyen el antebrazo, el abdomen, el pecho, la espalda, las nalgas, y otros similares. La administracion transdermica se lleva a cabo exponiendo una fuente del compuesto activo a la piel de un paciente durante un periodo de tiempo extendido. Los parches transdermicos pueden anadir la ventaja de proporcionar una administracion controlada de un compuesto complejo para el cuerpo. Dichas formas de dosis pueden prepararse disolviendo, dispersando o incorporando de otro modo el compuesto de ghrelina en un medio apropiado, tal como un material de matriz elastomerica. Tambien se pueden usar potenciadores de la absorcion para aumentar el flujo del compuesto a traves de la piel. La velocidad de dicho flujo se puede controlar proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz polimerica o un gel.

Kits

Las composiciones de ghrelina se pueden administrar solas o en combinacion con vehfculos o excipientes farmaceuticamente aceptables, tanto en dosis individuales como en dosis multiples. Las formulaciones pueden presentarse de forma conveniente en forma de dosificacion unitaria mediante metodos conocidos por los especialistas en la tecnica. Los compuestos se pueden proporcionar en un kit. Dicho kit tfpicamente contiene un compuesto activo en formas de dosificacion para administracion. El kit comprende una cantidad de unidades de dosificacion que corresponde al regimen de dosificacion relevante. En alguna realizacion, el kit comprende una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de ghrelina o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y un vehfculo y/o excipiente farmaceuticamente aceptable, presentando dicho kit multiples unidades de dosificacion. Las unidades de dosificacion comprenden una cantidad de ghrelina o de una sal de la misma equivalente a entre aproximadamente 0,3 |jg y aproximadamente 600 mg de ghrelina, tal como entre aproximadamente 2,0 |jg y aproximadamente 200 mg de ghrelina, tal como entre aproximadamente 5,0 jg y aproximadamente 100 mg de ghrelina, tal como entre aproximadamente 10 jg y aproximadamente 50 mg de ghrelina, tal como entre aproximadamente 10 jg y aproximadamente 5 mg de ghrelina, tal como entre aproximadamente 10 jg y aproximadamente 1,0 mg de ghrelina.

El kit contiene instrucciones que indican el uso de la forma de dosificacion para alcanzar un efecto deseable y la cantidad de forma de dosificacion a tomar a lo largo de un periodo de tiempo especificado. Por consiguiente, en una realizacion el kit comprende instrucciones para administrar la composicion farmaceutica. En particular, dichas instrucciones pueden incluir instrucciones que se refieren a la administracion de dicha composicion farmaceutica tras la mBI o el traumatismo craneoencefalico, o como mucho aproximadamente 12 horas despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 6 horas despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 3 horas despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 1 hora despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 30 minutos despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 10 minutos despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico, tal como mucho aproximadamente 5 minutos despues del incidente que causo la mBI o el traumatismo craneoencefalico.

EJEMPLOS

Los siguientes Ejemplos pretenden ilustrar adicionalmente determinadas realizaciones de la descripcion y no se pretende que limiten su alcance.

EJEMPLO 1

La administracion de ghrelina reduce el estallido oxidativo en celulas inflamatorias tras una mBI. Puesto que no existe un modelo animal bien aceptado para los traumatismos craneoencefalicos, como modelo de la mBI se una lesion cerebral muy pequena que imite estrechamente la mBI. Se administra 0,3 mg/kg de buprenorfina a ratones C57/B6 anestesiados con un 5% de isoflurano en oxfgeno (1,7 L/min) subcutaneamente para analgesia antes de infligir la lesion cerebral leve. La anestesia se evaluo mediante reflejo de pinchazo en la zarpa. Tras crear un agujero limpio a traves de la dura con un taladro dental, se usa una lesion con un impactador cortical controlado (CCI) para crear una herida 1 mm lateral y posterior al bregma (5,0 mm/s a una profundidad de 1,0 mm).

Los animales son separados en tres grupos de tratamiento: 1) simulados, 2) mBI, y 3) mBI mas ghrelina. Se puede ensayar una variedad de dosis dependiendo de la ghrelina particular. La ghrelina se puede obtener por ejemplo en Phoenix Pharmaceuticals, Inc. (Burlingame, CA). Por ejemplo, de 1 a 50 |jg en uno o mas puntos temporales. A modo de ejemplo, el tratamiento con ghrelina subcutanea: 1 dosis de 10 jg tras la mBI y una dosis adicional de 10 jg 1 hora despues. Se recolecto el tejido cerebral a 2-8 horas, preferiblemente aproximadamente 6 horas post-lesion. Se miden las especies de oxfgeno reactivo (ROS) a traves del estallido oxidativo de neutrofilos en leucocitos aislados del tejido cerebral como se muestra en la Fig. 1, que presenta el principio de ensayo de estallido oxidativo dentro de las celulas inflamatorias. La dihidrorrodamina 123 (DHR 123) se difunde a traves de la membrana celular. Cuando se encuentra con especies de oxfgeno reactivas (ROS), la DHR 123 es oxidada y fluoresce en verde. Entonces se mide la fluorescencia y se presenta como unidades de fluorescencia arbitrarias (AFU), en donde una mayor intensidad significa un mayor estallido oxidativo y, por lo tanto, una mayor concentracion o cantidad de ROS. Las celulas cerebrales son aisladas (por ejemplo mediante colagenasa Dispasa/ADNasa y un gradiente Percoll con resuspension de la partmula usando 1O0 jL de HBSS). El estallido oxidativo, que es un marcador para ROS, se puede medir mediante citometna de flujo (p.ej., canal FL1 con un laser de 488 nm).

El estallido oxidativo aumenta en los animales tras mBI en comparacion con el control. El numero de animales fue de tres en cada grupo (n=3 animales en cada grupo). El tratamiento con ghrelina redujo el estallido oxidativo en comparacion con el animal no tratado con mBI (Fig. 2). La Fig. 2 muestra que la ghrelina subcutanea reduce el estallido oxidativo en celulas inflamatorias tras mBI. Se puede cuantificar el impacto en la mBI cuando se administra la ghrelina, por ejemplo, a traves de unidades de fluorescencia arbitrarias (AFU) (Fig. 3). La Fig. 3 muestra la cuantificacion del estallido oxidativo de cerebro entero ipsilateral tras una BI leve. El estallido oxidativo aumento en los animales tras la mBI en comparacion con el control. El tratamiento con la ghrelina redujo el estallido oxidativo en comparacion con la mBI no tratada (Fig. 2 y Fig. 3).

Tal como se cuantifica en la Fig. 3, el estallido oxidativo aumento en los animales tras la mBI en comparacion con el control simulado (7963 AFU ± 2900 (BI leve) frente a 4624 AFU ± 1858 (simulado); n=5 animales en cada grupo). El tratamiento con ghrelina redujo el estallido oxidativo en comparacion con mBI (7963 AFU ± 2900 (BI leve) frente a 3257 AFU ± 1031 (BI leve ghrelina (2 dosis)); valor-p de 0,048 usando el test de t de Student).

EJEMPLO 2

La capacidad de union de la ghrelina a GHS-R puede determinarse a traves de un ensayo de union. Se preparan celulas de lmea celular de ovario de hamster chino, CHO-K1, para expresar el receptor de g Hs recombinante humano.

Las celulas se pueden preparar mediante cualquier metodo adecuado. Uno de tales metodos puede incluir: el ADNc correspondiente a receptor de secretagogo de hormona del crecimiento humano (hGHS-R1a, o receptor de ghrelina) es clonado mediante reaccion en cadena de polimerasa (PCR) usando ARN de cerebro humano como plantilla (Clontech, Palo Alto, Calif.), cebadores espedficos de gen flanqueando la secuencia codificadora de longitud completa de hGHS-R, (S: 5'-ATGTGGAACGCGACGCCCAGCGAAGAG-3' (SEQ ID NO: 2) y AS: 5'-TCATGTATTAATACTAGATTCTGTCCA-3' (SEQ ID NO: 3), y el kit de PCR Advantage 2 (Clontech). El producto de la PCR es clonado en el vector pCR2.1 usando el kit de clonacion Original TA (Invitrogen, Carlsbad, Calif.). El GHS-R humano de longitud completa es subclonado en el vector de expresion de mairnfero pcDNA 3.1 (Invitrogen). El plasmido es transferido a la lmea celular de ovario de hamster chino, CHO-K1 (American Type Culture Collection, Rockville, Md.), mediante el metodo de fosfato calcico (Wigler, M. et al., Cell 11, 223, 1977). Los clones de celula individual que expresan de forma estable hGHS-R se obtienen seleccionando las celulas transfectadas crecidas en anillos de clonacion en medio RPMI 1640 suplementado con un 10% de suero bovino fetal y piruvato sodico 1 mM que contema 0,8 mg/mL de G418 (Gibco, Grand Island, N.Y.).

El ensayo de union de GHS-R se lleva a cabo homogeneizando las celulas CHO-K1 que expresan el receptor GHS recombinante humano en 20 mL de Tris-HCl 50 mM enfriado en hielo con un Brinkman Polytron (Westbury, N.Y.). Los homogenatos se lavan dos veces mediante centrifugacion (39.000 g/10 min), y las partmulas finales son resuspendidas en Tris-HCl 50 mM, que contema MgCh 2,5 mM, y un 0,1% de BSA. Para el ensayo de union a GHS-R, se incuban almuotas (0,4 mL) con (125I)ghrelina 0,05 nM (~2000 Ci/mmol, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, Mass.), con y sin 0,05 mL de peptidos de ensayo competitivo no marcados. Despues de una incubacion de 60 min (4°C), la (125I)ghrelina ligada es separada de la libre mediante filtracion rapida a traves de filtros GF/C (Brandel, Gaithersburg, Md.), que habfan sido empapados previamente en polietilenimina al 0,5%/BSA al 0,1%. Los filtros se lavan a continuacion tres veces con almuotas de 5 mL de Tris-HCl 50 mM y albumina de suero bovino al 0,1%, y se realiza el conteo de la radioactividad ligada atrapada en los filtros mediante espectrometna gamma (Wallac LKB, Gaithersburg, Md.). La union espedfica se define como la (125I)ghrelina total ligada menos la ligada en presencia de ghrelina 1000 nM.

EJEMPLO 3

La actividad funcional de la ghrelina es examinada usando ensayos de actividad funcional de GHS-R in vitro e in vivo. La union de ghrelina a receptor GSH puede mediar en la movilizacion intracelular de iCa2+ in vitro. Tambien se puede evaluar la ghrelina para determinar su capacidad para estimular o suprimir la liberacion de hormona del crecimiento (GH) in vivo.

Se pueden usar celulas que expresan receptor GSH humano. Por ejemplo, las celulas CHO-K1 que expresan el receptor GSH humano son recolectadas incubando en una disolucion salina tamponada de EDTA al 0,3%/fosfato (25°C), y son lavadas dos veces mediante centrifugacion. Las celulas lavadas son resuspendidas en disolucion salina tamponada de Hank (HBSS) para carga del indicador de Ca2+ fluorescentes Fura-2AM. Se incubaron suspensiones celulares de aproximadamente 106 celulas/mL con Fura-2AM 2 pM durante 30 min a aproximadamente 25°C. El Fura-2AM no cargado es eliminado mediante centrifugacion dos veces en HBBS, y las suspensiones finales son transferidas a un espectrofluorometro (Hitachi F-2000) equipado con un mecanismo de agitacion magnetica y un recipiente cubeta de temperatura regulada. Tras equilibrar a 37°C, se anade la ghrelina para la medida de la movilizacion de Ca2+ intracelular. Las longitudes de onda de excitacion y emision pueden ser, por ejemplo, 340 y 510 nm, respectivamente.

La ghrelina puede ser evaluada en terminos de su capacidad para estimular o suprimir la liberacion de hormona del crecimiento (GH) in vivo (Deghenghi, R., et al., Life Sciences, 1994, 54, 1321-1328; Solicitud de Patente Internacional n° WO 02/08250). Asf, por ejemplo, a fin de determinar la capacidad de la ghrelina para estimular la liberacion de GH in vivo, el compuesto puede ser inyectado subcutaneamente en ratas de 10 dfas de edad con una dosis de, p.ej., 300 mg/kg. La GH en circulacion se puede determinar, p.ej., a los 15 minutos de la inyeccion y compararse con los niveles de GH en ratas inyectadas con un control de disolvente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Ghrelina para uso en el tratamiento de un traumatismo craneoencefalico en un sujeto, en donde la ghrelina se administra al sujeto en una cantidad suficiente para tratar el traumatismo craneoencefalico, en donde cuando se administra, no se administra un modulador de receptor de androgeno selectivo.

2. Ghrelina para uso en el tratamiento de lesion cerebral traumatica leve (mTBI) en un sujeto, en donde la ghrelina se administra al sujeto en una cantidad suficiente para tratar la mTBI en el sujeto, en donde cuando se administra, no se administra un modulador de receptor de androgeno selectivo.

3. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1 o 2, en donde la ghrelina se administra en una cantidad suficiente para proporcionar niveles en sangre de ghrelina que son al menos 1,5 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto.

4. La ghrelina para el uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde cuando se administra la ghrelina es el unico agente activo administrado al sujeto.

5. La ghrelina para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la ghrelina tiene la secuencia de Gly-Ser-Ser-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-His-Gln-Arg-Val-Gln-Gln-Arg-Lys-Glu-Ser-Lys-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg (SEQ ID NO. 1).

6. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 5, en donde la ghrelina es modificada con uno o mas acidos grasos, preferiblemente en donde el acido graso es un acido octanoico.

7. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 5, en donde la ghrelina esta modificada en la seria de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 de la SEQ ID NO. 1, preferiblemente en donde la ghrelina esta modificada en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico.

8. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 7, en donde la modificacion de la ghrelina es acilacion de ghrelina en la serina de la posicion de aminoacido 2 y/o en la serina de la posicion de aminoacido 3 con un acido octanoico, preferiblemente en donde la ghrelina asf modificada es una octanoil-ghrelina con una acilacion en la serina de la posicion de aminoacido 3 con el acido octanoico.

9. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1, en donde el sujeto es un mairnfero.

10. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1, 2 o 3, en donde la ghrelina se administra en un plazo no superior a aproximadamente 24 horas desde el traumatismo craneoencefalico o mTBI, preferiblemente en donde la ghrelina se administra en un plazo no superior a aproximadamente 8 horas desde el traumatismo craneoencefalico o mTBI.

11. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1 o 3, en donde la ghrelina se administra en una cantidad que da como resultado niveles en sangre de ghrelina que al menos 1,5 veces, al menos dos veces, o al menos de 1,5 a 100 veces superiores a los niveles en sangre de ghrelina endogenos del sujeto.

12. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1, en donde la ghrelina se administra en una unica dosis.

13. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1, en donde la ghrelina se administra en una dosificacion de entre 10 ng/kg al dfa y 10 mg/kg al dfa, preferiblemente 2 pg/kg al dfa.

14. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 11, en donde la cantidad administrada da como resultado un nivel en sangre de al menos 55 picogramos/mL.

15. La ghrelina para el uso de la reivindicacion 1, en donde el sujeto esta libre de hipertension intracraneal, permeabilidad vascular de la barrera hematoencefalica, necrosis del tejido cerebral, dano tisular o celular masivo en el cerebro asociado a lesion cerebral, inflamacion neuronal grave o edema celular o vasogenico significativo en la cabeza del sujeto, o cambios anatomicos grandes asociados a lesiones en el cerebro del sujeto.