HUP0200797A2 - Könnyen hasadó kötéssel kapcsolódó vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó készítmények - Google Patents

Könnyen hasadó kötéssel kapcsolódó vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó készítmények Download PDF

Info

Publication number
HUP0200797A2
HUP0200797A2 HU0200797A HUP0200797A HUP0200797A2 HU P0200797 A2 HUP0200797 A2 HU P0200797A2 HU 0200797 A HU0200797 A HU 0200797A HU P0200797 A HUP0200797 A HU P0200797A HU P0200797 A2 HUP0200797 A2 HU P0200797A2
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
poly
amine
group
composition
mpeg
Prior art date
Application number
HU0200797A
Other languages
English (en)
Inventor
Samuel Zalipsky
Original Assignee
Alza Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alza Corporation filed Critical Alza Corporation
Publication of HUP0200797A2 publication Critical patent/HUP0200797A2/hu
Publication of HUP0200797A3 publication Critical patent/HUP0200797A3/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/196—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino group being directly attached to a ring, e.g. anthranilic acid, mefenamic acid, diclofenac, chlorambucil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/14—Peptides containing saccharide radicals; Derivatives thereof, e.g. bleomycin, phleomycin, muramylpeptides or vancomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/10—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/18—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton
    • C07C323/19—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atom of at least one of the thio groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of the carbon skeleton with singly-bound oxygen atoms bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C07D239/545—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/553—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms with halogen atoms or nitro radicals directly attached to ring carbon atoms, e.g. fluorouracil
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/12—Triazine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2984—Microcapsule with fluid core [includes liposome]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Dental Preparations (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

.«‘U P020 0 /S7 .Í. ·>····· i *
KÖNNYEN HASADÓ KÖTÉSSEL KAPCSOLÓDÓ VEGYÜLETEK ÉS ILYEN VEGYÜLETEKET TARTALMAZÓ KÉSZÍTMÉNYEK
A találmány tárgyát olyan vegyületek képezik, amelyek egy hidrofil polimerből - például polietilénglikolból - állnak, amely könnyen hasadó kötéssel kapcsolódik egy amint tartalmazó ligandumhoz, amely a találmány előnyös kiviteli formáiban amint tartalmazó lipid, gyógyszerhatóanyag vagy protein lehet. Ezek a vegyületek enyhén tiolitikus körülmények között hasíthatok, és ennek eredményeként az amint tartalmazó ligandum eredeti formájában regenerálódik.
A hidrofil polimereket, például a polietilénglikolt (röviden: PEG) felhasználták különböző szubsztrátumok, például polipeptidek, gyógyszerhatóanyagok és liposzómák módosítására azzal a céllal!, hogy a szubsztrátum immunogenitását (immunogén jellegét) csökkentsék és/vagy a vérkeringésben érvényesülő felezési idejét (a vérkeringésben mutatott élettartamát) javítsák.
így például a parenterálisan adagolt proteinek immunogének lehetnek, és farmakológiai felezési idejük rövid lehet. Továbbá, a proteinek vízben esetleg kevéssé oldódhatnak. Ennek következményeként a proteineknek a terápiásán megfelelő vér szintjeit esetleg nehéz elérni a betegekben. Közölték, hogy a PEG és proteinek kapcsolatával (konjugációjával) ezeknek a nehézségeknek a kiküszöbölése megkísérelhető. Davis és munkatársai a 4 179 337 számú US szabadalmi leírásban közölták, hogy PEG kapcsolása proteinekkel, például enzimekkel vagy inzulinnal, és így PEG-protein-konjugátumok kialakítása az immunogenitás csökkenésével jár, míg a fiziológiai aktivitás lényeges hányada megmarad. Veronese és munkatársai [Applied Biochem és Biotech. 11, 141-152 (1985)] leírták, hogy polietilénglikolokat fenil-klórformiátokkal aktiválták egy ribonukleáz és egy szuper oxid-diszmutáz módosítása céljából. Katre és munkatársai a 4 766 106 és 4 917 888 számú US szabadalmi leírásokban ismertették proteinek szolubilizálását (oldhatóságának a növelését) polimer kapcsolása útján. A PEG-t és más polimereket konjugáltak rekombináns proteinekké az immunogén jelleg csökkentése és a felezési idő növelése céljából [(Nitecki et al., U.S. Pat. No. 4,902,502; Enzon, Inc., PCT/US90/02133). Garman (U.S. Patent No. 4,935,465)] olyan proteineket közöltek, amelyeket vízben oldható polimerekkel módosítva egy reverzibilisen kötődő csoport útján kapcsoltak a proteinhez.
A mindeddig leírt PEG-protein konjugátumok azonban számos hátrányt mutatnak. így például a protein PEG-gel való módosítása gyakran inaktiválja a proteint, s az így kapott konjugátum biológiai aktivitása csekély. Általában a technika jelenlegi állása szerint kívánatos a fehérjéhez stabilisán kapcsolt PEG kidolgozása olyan módon, hogy a PEG által biztosított előnyös sajátságok megmaradjanak. Egyes protein-PEG konjugátumokkal kapcsolatban felmerülő másik nehézséget jelent, hogy a konjugátum lebomlása során nem kívánt termékek képződhetnek.
Közölték továbbá, hogy PEG felhasználható a liposzómák vérkeringésben érvényes felezési idejének a javítására (lásd az 5 103 556 számú US szabadalmi leírást). Ebben az esetben a PEG kovalensen kapcsolódik egy lipid poláris főcsoportjához, azzal a céllal, hogy a liposzómákat maszkírozzák vagy árnyékolják a retikuloendoteliális rendszer általi felismeréstől és eltávolításuktól. Leírtak továbbá olyan, könnyen hasadó PEG láncokat tartalmazó liposzómákat is, amelyekben a PEG egység a liposzómából alkalmas stimulus hatására, például a pH értékének megváltozása következtében hasad le (PCT/US 97/18813 számú szabadalmi dokumentum). A PEG-lánc liposzómáról való leválása azonban azt a nehézséget támasztja, hogy a lebomlás termékei kémiailag módosulnak, s ennek következtében in vivo körülmények között előre nem jósolható, potenciális negatív hatásokat fejthetnek ki.
Az alábbiakban a találmányt röviden összefoglaljuk.
A fentiek alapján a találmány egyik célja olyan vegyületek kidolgozása, amelyekben egy ligandum kovalensen, azonban reverzibilisen kapcsolódik egy hidrofil polimerhez. A kötés felhasadása (megszűnése) után a ligandum természetes formájában regenerálódik. A találmány egyik jellemző vonása szerint az (I) általános képletű vegyületekre vonatkozik, ahol
R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képlet csoport;
R4 jelentése amint tartalmazó ligandum; és
R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben van.
A találmány egyik megvalósítási formájában R5 jelentése hidrogénatom, és R2 jelentése metil-, etil- vagy CsHs képletű csoport. Egy másik megvalósítási forma szerint R2 és R5 alkilcsoportot jelentenek.
Egy másik kivitelezés szerint az amint tartalmazó R4 ligandum valamilyen polipeptid, amincsoportot tartalmazó gyógyszerhatóanyag (röviden: hatóanyag), vagy amint tartalmazó lipid. Olyan megvalósítási formában, ahol az amint tartalmazó R4 ligandum egy amint tartalmazó lipid, a lipid vagy egyszeres szénhidrogénláncot vagy kettős szénhidrogénláncot tartalmaz. Egy előnyös kiviteli forma szerint a Hpid egy kettős szénhidrogénláncot tartalmazó foszfolipid.
Az R1 hidrofil polimer egy további megvalósítási lehetőség szerint például polivinilpirrolidon, polivinil-metil-éter, polimetiloxazolin, polietiloxazolin, poli(hidroxipropil)oxazolin, poli(hidroxipropil)-metakrilamid, polimetakrilamid, polidimetilákril)amid, poH(hidroxipropil)-metakrilát, polihidroxietil)akrilát, hidroximetilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, poliaszpartamid, ezek kopolimerjei, valamint poli(etilénoxid) -poli(propilénoxid) lehet.
Egy előnyös kiviteli forma szerint az R1 hidrofil polimer polietilénglikol. Egy másik kiviteli forma szerint, ha R1 jelentése polietilénglikol, akkor R5 hidrogénatomot, és R2 metil- vagy etilcsoportot jelent.
Egy még további kivitelezés szerint az amint tartalmazó R4 ligandum egy polipeptid. Egy másik megoldás szerint a polipeptid rekombináns polipeptid lehet. Példaként és előnyös pokpeptidekként a citokineket, így az interferonokat, interleukineket és szaporodási faktorokat, valamint enzimeket említjük.
A találmány egy másik tárgyát képezik olyan készítmények, amelyek egy (I) általános képletű vegyülettel végbemenő reakció útján előállítható konjugátumot tartalmaznak, ahol az (I) képletben
R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletű csoport;
R4 jelentése kilépő csoport; és
R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben van. A készítmény továbbá gyógyászati szempontból elfogadható vívőanyagot, például konyhasóoldatot, pufferanyagot vagy ezekhez hasonló anyagokat is tartalmaz.
Ebben a vonatkozásban az egyik kiviteli forma szerint R2 szubsztituenst a metil-, etil- és C3H8 képletű csoportból álló vegyületcsoportból választjuk. Egy további megoldási forma szerint R3 jelentése O(C=O)R4 csoport, és R4 jelentése hidroxil- vagy oxitartalmű kilépő csoport. Egy másik megvalósítás szerint a kilépő csoport klorid, para-nitrofenol, orto-nitrofenol, N-hidroxitetrahidroftálimid, N-hidroxiszukcinimid, N-hidroxiglutárimid, Nhidroxinorbornén-2,3-dikarboximid, 1-hidroxibenzotriazol, 3hidroxipiridin, 4-hidroxipiridin, 2-hidroxipiridin, l-hidroxi-6(trifluormetil)benzotriazol, imidazol, triazol, N-metilimidazol, pentafluorfenol, trifluorfenol, vagy triklórfenol vegyűletből származik.
Egy még további megoldási mód szerint a vegyűletet egy amint tartalmazó ligandummal reagáltatjuk, amely az R4 csoport
kicserélése útján egy amint tartalmazó ligandumot magában foglaló konjugátumot képez. így például az amint tartalmazó ligandum egy foszfolipid lehet.
Egy előnyös megvalósítási forma szerint az R1 hidrofil polimer polietilénglikol, R5 hidrogénatomot és R2 metil- vagy etilcsoportot jelent.
Ebben a vonatkozásban egy még további kiviteli forma szerint a konjugátumot tartalmazó készítmény liposzómát tartalmaz (liposzómákat foglal magában). Továbbá a liposzóma befogott (csapdázott) terápiás hatóanyagot tartalmazhat.
Egy másik kiviteli forma szerint az amint tartalmazó ligandum polipeptid.
Egy még további vonatkozásban a találmány liposzómakészítményre vonatkozik, amely olyan liposzómákból áll, amelyek hidrofil polimer láncokból álló felületi bevonatot tartalmaznak, ahol a hidrofil polimer láncok legalább egy részének általános szerkezete az (I) képletnek megfelelő, ahol
R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletü csoport;
R4 jelentése amint tartalmazó ligandum; és
R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben van.
A liposzómák élettartama a vérkeringésben hosszabb, mint olyan liposzómák élettartama, amelyek hidrofil polimer láncai alifás diszulfidkötés útján kötődnek a liposzómához.
-*·*-’
Egy megvalósítási forma szerint a liposzóma továbbá egy befogott (bezárt) terápiás szert is tartalmazhat.
Egy még további vonatkozásban a találmány eljárásra vonatkozik olyan liposzómák vérkeringési élettartamának a javítására, amelyek könnyen hasadó (leváló, lehasadó) hidrofil polimer láncokból álló felületi bevonattal rendelkeznek. Ez az eljárás olyan liposzómák előállításában áll, amelyek körülbelül 1%tól körülbelül 20%-ig terjedő mennyiségben egy (I) általános képletű vegyületet tartalmaznak, ahol R1, R2, R3 és R5 jelentése a fenti, és R4 amint tartalmazó lipidet jelent.
Ebben a vonatkozásban egy előnyös megoldás szerint R5 jelentése hidrogénatom és R2 metil-, etil- vagy C3H8 képletű csoportot jelent.
Egy még további kiviteli forma szerint az amint tartalmazó lipid foszfolipid, és R1 jelentése polietilénglikol.
Ebben a vonatkozásban a liposzómák továbbá egy befogott (bezárt) terápiás hatóanyagot is tartalmazhatnak.
A fenti célok és a találmány további sajátságai teljesebben érthetővé válnak, ha a találmány alább következő részletes leírását a csatolt rajzokkal együtt olvassák.
Az alábbiakban a rajzok rövid leírását adjuk.
Az 1A. ábra egy olyan találmány szerinti formát mutat, ahol a ditiobenzil- egység (DTB) egy metoxi-polietilénglikol (mPEG) egységet és az amint tartalmazó ligandumot kapcsolja össze.
Az 1B. ábra az 1A. ábrában feltüntetett vegyűlet tiolitikus hasadásából származó termékeket szemlélteti.
• 4 * · · · · ,:λ .:.
A 2. ábra szintetikus reakció vázlatot szemléltet az mPEGDTB-aminlipid vegyület szintéziséhez, ahol az amin-ligandum a disztearoil-foszfatidiletanolamin (DSPE).
A 3. ábra szemlélteti a para-ditiobenziluretánnal (DTB) összekapcsolt mPEG-DSPE konjugátum tiolitikus hasadási mechanizmusát.
A 4A.-4B. ábrák szintetikus reakcióvázlatot mutatnak be a találmány szerinti mPEG-DTB-DSPE vegyület előállítására, ahol a DTB kötés egy alkilcsoport által szférikusán gátolt kötés.
Az 5. ábra egy másik szintetikus reakcióvázlatot szemléltet egy mPEG-DTB-ligandum vegyület előállítására a találmány szerint.
A 6A. ábra szintetikus reakcióvázlat, amely szemlélteti olyan mPEG-DTB-Hpid-szintézisét, amely tiolitikus hasadás útján kationos lipidet eredményez.
A 6B. ábra a 6A. ábrában szereplő vegyület tiolitikus hasadása után kapott termékeket szemlélteti.
A 7A. ábra mutatja orto-mPEG-DTB-DSPE és para-mPEGDTB-DSPE konjugátumok hasadási sebességét oldatban, aminek során önmagában pufferban micellák képződnek [ortokonjugátum(*) para-konjugátum (+)]; és 150 μΜ tisztein jelenlétében (az orto-konjugátumot üres körök, a parakonjugátumot üres négyzetek jelölik).
A 7B. ábra a 7A. ábrában leírt micelláris mPEG-DTB-DSPE konjugátumok hasadási sebességét mutatja, valamint orto-mPEGDTB-DSPE hasadási sebességét (sötét körök) és para-mPEG-DTBDSPE hasadási sebességét mutatja (sötét négyzetek), amely .if. .:. .«.·konjugátumokat liposzómákban formuláztunk, és 150 μΜ cisztein jelenlétében inkubáltuk.
A 8A.-8B. ábra a befogott fluorofortartalom felszabadulásának százalékos értékét mutatja olyan liposzómákból, amelyek DOPE-orto-mPEG-DTB-DSPE-ből állnak (8A. ábra), illetve DOPE-para-mPEG-DTB-DSPE-ből állnak (8B. ábra), amelyeket a feltüntetett koncentrációkban cisztein jelenlétében inkubáltunk.
A 9A. ábra befogott fluorofor normalizált százalékos felszabadulását szemlélteti az idő függvényében olyan liposzómák esetén, amelyek DOPE és para-mPEG-DTB-DSPE-t tartalmúak. A befogott fluorofor százalékos felszabadulását a cisztein távollétében inkubált liposzómákból felszabaduló fluorofor felszabadulási százalékára vonatkozóan normalizáltuk olyan liposzómákból, amelyeket cisztein távollétében inkubáltunk. Az ábra mutatja a felszabadulás sebességét olyan liposzómákból, amelyet inkubáltunk cisztein jelenlétében 15 μΜ koncentrációban (sötét négyzetek), 75 μΜ koncentrációban (üres háromszögek), 150 μΜ koncentrációban (X szimbólumok), 300 μΜ koncentrációban (üres körök), 1500 μΜ koncentrációban (sötét körök), 3000 μΜ koncentrációban (+ szimbólumok) és 15000 μΜ koncentrációban (üres rombuszok).
A 9B. ábra a befogott fluorofor normalizált százalékos felszabadulását mutatja az idő függvényében DOPE-ból és paramPEG-MeDTB-DSPE-ból álló liposzómák esetében. A befogott fluorofor felszabadulásának százalékos értékét olyan fluorofor felszabadulásának százalékos értékéhez viszonyítva normalizáltuk, amelyet liposzómákban inkubáltunk cisztein nélkül. Az ábra mutatja a cisztein jelenlétében inkubált liposzómák esetére a .::. .:.
felszabadulás sebességét 15 μΜ (sötét négyzet), 75 μΜ (üres háromszög), 150 μΜ (X szimbólum), 300 μΜ (üres kör), 1500 μΜ (sötét kör), 3000 μΜ (+ szimbólum) és 15000 μΜ (üres rombusz) koncentrációk esetében.
A 9C. ábra befogott fluorofor felszabadulásának normalizált százalékos értékét mutatja az idő függvényében olyan liposzómák esetére, amelyek DOPE-ból és a 6A. ábrában bemutatott mPEGMeDTB-disztearoil-glicerin vegyületból állnak (lásd a 6A. ábrát). A befogott fluorofor százalékos felszabadulási értékét olyan liposzómákból származó fluorofor százalékos felszabadulásához viszonyítva normalizáltuk, amelyeket cisztein nélkül inkubáltunk. Az ábra mutatja a festékanyag felszabadulását a vegyület hasítása után olyan liposzómákból, amelyeket 15 μΜ (sötét négyzet), 75 μΜ (üres háromszög), 150 μΜ (X szimbólum), 300 μΜ (üres kör), 1500 μΜ (sötét kör), 3000 μΜ (+ szimbólum) és 15000 μΜ (üres rombusz) koncenterációjú cisztein jelenlétében inkubáltunk.
A 10. ábra olyan görbe, amely a liposzómák mennyiségét perc/ml liposzóma szerint ábrázolja, amelyek befogott Inlu-et tartalmaznak olyan vérmintákban, amelyeket egerektől vettünk különböző időpontokban PHPC: koleszterin: mPEG-DTB-DSPE-ból álló liposzómák befecskendezése után (55:40:5 moláris arányban). Az állatoknak egyik csoportja a zérus időpontban 200 μΐ injekcióban 200 mM ciszteint kapott (sötét négyzet). A kontrollcsoport a zérus időpontban konyhasó-injekciót kapott (üres kör).
A 11A. ábra szintetikus reakcióvázlatot mutat be egy mPEGDTB-protein vegyület szintézisére a találmány egy másik megvalósítási módja szerint.
Si. ·?’·*’
A 11B. ábra a 11A. ábrában bemutatott vegyület tiolitikus hasadása után mutatja a bomlástermékeket.
A 12. ábra egy fényképet mutat be egy olyan lizozim nátrium dodecil-szulfátos poliakrilamidgél elektroforézis (SDS-PAGE) profiljáról, amelyet 15 percig (1. oszlop) vagy 1 óráig (2. oszlop) mPEG-MeDTBnitrofenil-klórformiáttal reagáltattunk egy mPEGMeDTB-lizozim konjugátum kialakításának céljából, valamint natív lizozim (3. oszlop), 1 órán át mPEG-nitrofenil-klórformiáttal reagáltatott lizozim (4. oszlop), molekulatömegjelzők (5. oszlop), valamint az 1.-4. oszlopok olyan mintáival együtt mutatjuk be, amelyeket 10 percig 70 °C hőmérsékleten 2% bétamerkaptoetanollal reagáltattunk.
A 13. ábra az mPEG-DTB-p-nitroanilid konjugátum tiolitikus hasítása utáni lebomlási termékeket mutatja.
A 14A. ábra mutatja az abszorbancia függését a hullámhossztól nm-ben mPEG-MeDTB-para-nitroanilid esetében (sötét rombuszok), valamint in vitro inkubálás után 5 mM ciszteinnel 2 percig (sötét négyzetek), 5 percig (X szimbólumok), 10 percig (üres négyzetek), 20 percig (háromszögek), 40 percig (üres rombuszok) és 80 percen át (sötét körök).
A 14B. ábra a para-nitroanilid mennyiségét mutatja mól/literben, amely in vitro körülmények között szabadul fel az idő függvényében (perc), mPEG-MeDTB-para-nitroanilid konjugátum ból, amelyet 5 mM cisztein jelenlétében inkubáltunk (sötét körök), 1 mM cisztein jelenlétében (sötét négyzetek), vagy 0,15 mM cisztein jelenlétében (sötét rombuszok).
.·!, .·. a·-
Az alábbiakban a találmányt részletesen ismertetjük.
I. Definíciók
A leírásunkban szereplő fogalmakat az alábbiakban definiáljuk.
Polipeptid fogalmán aminosavak polimerjét értjük, és ez a megjelölés nem vonatkozik az aminosav-polimer valamilyen specifikus hosszúságára. így például a peptid, oligopeptid, protein és enzimek kifejezését a polipeptid definícióján belül értjük. Ez a megfogalmazás a polipeptid expresszió utáni módosításait, így például a glikozilezés, acetilezés, foszforilezés útján kapott módosított termékeket is magában foglalja.
Amint tartalmazó kifejezés bármilyen vegyületre vonatkozhat, amely ammóniából származó egységet tartalmaz úgy, hogy a hidrogénatomok közül egy vagy kettő alkil- vagy arilcsoportokkal van kicserélve, s így az RNH2 (primer arninok) és R2NH (szekunder arninok) általános szerkezetéhez vezet, ahol a képletekben R hidrokarbilcsoportot jelent.
Hidrofil polimer kifejezés olyan polimerre vonatkozik, amely vízben oldható szerkezeti egységekkel rendelkezik, amelyek a polimernek szobahőmérsékleten egy bizonyos mértékű vízoldhatóságot kölcsönöznek. Ilyen hidrofil polim erek például: a polivinilpirrolidon, polivinil-metil-éter, polimetiloxazolin, polietiloxazolin, poli(hidroxipropil)oxazolin, poli(hidroxipropil)metakrilamid, polimetakrilamid, polidimetilakrilamid, poli(hidroxipropil)-metakrilát, poli(hidroxietil)-akrilát, hidroximetilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, poliaszparaginamid, a fentebb megnevezett polimerek kopolimerjei, valamint a polietilén oxid)-poli(propílén-oxid)-kopolimerek. Számos ilyen polimer tulajdonságai és reakciói találhatók az 5 395 619 és 5 631 018 számú US szabadalmakban.
Reakcióképes funkciós csoportot tartalmazó polimer vagy kapcsolódásra alkalmas kötést tartalmazó polimer kifejezések olyan polimerre vonatkoznak, amelyek módosítottak (általában azonban nem feltétlenül), valamelyik láncvégi olyan egységen, amely egy másik vegyülettel reagálva kovalens kötést képez. A szakterületen jártas személyek könnyen meghatározhatják azokat a reakciósorokat, amelyekkel egy polimer funkcionalizálható, hogy reakcióképes funkciós csoporttal rendelkezzék. Ezeknek a leírása megtörtént például Zalipsky és munkatársai közleményében, például a következő helyen: Eur. Polymer. J. 19(12) 1177-1183 (1983); Bioconj. Chem., 4(4) 296-299 (1993).
Rekombináns kifejezés, mint például a rekombináns polipeptid megnevezés jelenti aminosavak kapcsolását laboratóriumi művelettel egy kívánt szekvencia szerint.
Alkil olyan csoportot jelent, amely valamilyen alkánból egy hidrogénatom elvételével származik (bármely szénatomról) a CnHan+i formula szerint. Ha el nem ágazó alkánok terminális szénatomjáról egy hidrogént eltávolítunk, akkor a normál alkilsorozatnak az alosztálya képződik. Az RCH2-, R2CH- (ahol R nem jelent hidrogént), és R3C- csoportok (ahol R jelentése a hidrogéntől eltérő) a primer, szekunder, illetve tercier alkilcsoportokat jelentik.
Arilcsoporton szubsztituált vagy szubsztituálatlan, egyértékű aromás csoportot értünk, amely egyetlen gyűrűt tartalmaz (például, mint a benzol), vagy két kondenzált gyűrűből áll (például a naftilcsoport). Ebbe a fogalomkörbe tartoznak a heteroarilcsoportok is, amelyek olyan aromás gyűrűs csoportok, ., · V * « · ’ ···· ··*····· amelyek gyűrűjükben egy vagy több nitrogén-, oxigén- vagy kénatomot tartalmaznak, így például a furil-, pirrolil-, piridinil-, vagy az indolilcsoport. A szubsztituált azt jelenti, hogy az arilcsoportban egy vagy több gyűrűs hidrogénatomot halogén, például fluor, klór vagy bróm, vagy rövid szénláncú alkilcsoport helyettesít, amely egy vagy két szénatomot tartalmaz; ide tartozik továbbá a nitro-, amino-, metil-amino-, dim etil-amino-, metoxi-, halogén-metoxi-, halogénmetil- és halogénetilcsoport.
Az alifás diszulfid kötés az R'-S-S-R alakú kötésrendszert jelenti, ahol R' és R jelentése egyenes vagy elágazó alkillánc, amely önmagában is szubsztituálva lehet.
Az alábbiakban a következő rövidítéseket alkalmazzuk:
PEG: polietilénglikol;
mPEG: metoxi-PEG;
DTB: ditiobenzilcsoport;
MeDTB: metil- ditiobenzil- csoport;
EtDTB: etil- ditiobenzil- csoport;
DPSE: disztearoil-foszfatidiletanolamin-csoport;
DOPE: dioleoil-foszfatidiletanolamin-csoport;
PHPC: részben hidrogénezett foszfatidilkolin-csoport;
MALDI-TOFMS: mátrixszal segített lézer-dezorpció (kihasadó
tömeg ionizációs idejével végzett tömegspektrometria).
II. A találmány szerinti vegyületek
A találmány egyik szempontját képezik az (I) általános képletű vegyületek, ahol R1 olyan hidrofil polimerből áll, amely a polimert a ditiobenzil-egységgel végbemenő kovalens kötésre alkalmassá teszi. R2 és R3 egymástól függetlenül hidrogénatomot, alkil- vagy arilcsoportot jelentenek, és - amint láthatóvá válik - a diszulfid hasítási sebességének megszabása szerint variálható. így például a hasítás nagyobb sebességének elérése céljából R2 és R3 jelentése hidrogénatom. A hasítás kisebb sebességgel végezhető úgy, hogy a diszulfidot szférikusán gátoljuk azáltal, hogy R2 és R5 csoportként az egyiket alkil- vagy arilcsoportnak, vagy mindkettőt alkil- vagy arilcsoportnak választjuk. R3 olyan kapcsolóegységgel rendelkezik, amely az R4-hez csatlakozik, amely amint tartalmazó ligandumot hordoz. Az előnyös kiviteli formákban a kapcsolóegység O(C=O), S(C=O) vagy O(C=S) csoport. Az amint tartalmazó R4 ligandum primer vagy szekunder amin lehet, és bármilyen szubsztrátumok közül választható, például (azonban korlátozás nélkül) lipid, gyógyszerhatóanyag, polipeptid, vírus, biológiai anyagok felszíne vagy aminoglikozidok része lehet. Az előnyös kiviteli formákban R4 jelentése lipidet, gyógyszerhatóanyagot vagy polipeptidet tartalmazó primer vagy szekunder amin. A találmány szerinti vegyületekben a CH2-R3 képletű csoport orto- vagy parahelyzetben egyaránt lehet.
Az 1A. ábra egy példaként felhozott vegyületnek a szerkezetét mutatja a találmány szerint, ahol R1 jelentése metoxipolietilénglikol hidrofil polimer, képletben kifejezve mPEG = CHsOÍCHaCHsOjn, amelyen n értéke körülbelül 10-től körülbelül 2300-ig terjed, ami megfelel körülbelül 440 Daltontól körülbelül 100 000 Daltonig terjedő molekulatömegnek. A polimer molekulatömege egy bizonyos mértékben az R3 megválasztásától függ. Olyan kiviteli formákban, ahol R3 jelentése amint tartalmazó lipid, egy liposzómában az előnyös tartományba eső PEGmolekulatömeg körülbelül 750 Daltontól körülbelül 10 000
Daltonig, még különösebben körülbelül 2000 Daltontól körülbelül 5000 Daltonig terjed. Ebben a kiviteli formában az mPEG egy uretán-kapcsolóegységet tartalmaz. Olyan megvalósítási formákban, ahol R3 amint tartalmazó polipeptidet jelent, a PEG molekulatömegének előnyös tartománya körülbelül 2000 és körülbelül 40 000 Dalton között van, még előnyösebben körülbelül 2000 Daltontól körülbelül 20 000 Daltonig terjed. Nyilván elfogadható, hogy R1 különböző hidrofil polimerek, valamint a fentebb hivatkozott, példának felhozott polimerek közül választható. Nyilvánvaló továbbá, hogy némely ligán dumok, például polipeptidek esetében a polimer molekulatömege a ligandumhoz kapcsolódó polimer láncok számától függhet, ahol gyakran nagyobb molekulatömegű polimert választunk akkor, ha a kapcsolódó polimer láncok száma csekély.
Továbbra is az 1A. ábrára hivatkozva, az R2 és R5 jelentése ebben a példaként megadott vegyűletben hidrogénatom, azonban R2 és R5 közül akár az egyik, akár mindkettő egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, vagy valamilyen arilcsoport is lehet. Egy előnyös megvalósítási mód szerint R5 hidrogénatomot, és R2 alkilcsoportot jelent, ezekre a későbbiekben több példát adunk meg. Az 1A. ábrában bemutatott vegyűletben R3 általános formája (OC=O)(NH2ligandum), ahol az NH2-ligandum jelentése bármilyen amint tartalmazó polipeptid, gyógyszerhatóanyag vagy lipid lehet; minden egyes megvalósítási formára specifikus példákat hozunk fel. R3 jelentése továbbá O(C=S)-(NH2-ligandum) vagy S(C=O)-(NH2ligandum) csoport is lehet.
Az 1B. ábra mutatja az 1A. ábrában
DTB-(NH2-ligandum) vegyület tiolitikus szemléltetett mPEGhasadásának a mechanizmusát. Az orto- vagy para-ditiobenzilkarbamát-egység enyhe tiolitikus körülmények között - így például cisztein, vagy más, természetben előforduló redukálószer jelenlétében hasítható. A hasadáskor az amint tartalmazó ligandum természetes, módosítatlan alakjában regenerálódik. A találmány alátámasztása céljából végzett vizsgálatok - amint ezt az alábbiakban leírjuk - azt mutatják, hogy természetes, fiziológiai in vivo körülmények megfelelők a DTB kötés hasításának a kiváltására és megvalósítására. Nyilvánvaló, hogy redukálószer is adagolható abból a célból, hogy mesterségesen indukáljunk olyan tiolitikus körülményeket, amelyek a találmány szerinti vegyületek hasítására és elbontására (lebontására) megfelelők.
Amint fentebb megjegyeztük, R3 kapcsolóegység általános formáját mutatja, amilyen például az O(C=O), S(C=O) vagy O(C=S) csoportok, amelyek egy amint tartalmazó ligandumhoz kötődnek. Előnyös megvalósítás szerint az amint tartalmazó ligandum amint tartalmazó polipeptid, gyógyszerhatóanyag vagy lipid. Az alábbiakban ezekre a kiviteli formákra példákat adunk meg.
A. Amint tartalmazó lipid
Ebben a kiviteli alakban az amint tartalmazó ligandum egy amint tartalmazó lipid. A lipid megjelölést leírásunkban vízben oldhatatlan molekulákra értjük, amelyek legalább egy acilcsoporttal rendelkeznek, amely legalább körülbelül 8 szénatomos, még előnyösebben olyan acilcsoport, amely körülbelül 8-24 szénatomot tartalmaz. Az előnyös lipidformának amint tartalmazó poláris fejcsoportja és acillánca van. Példaként említjük a foszfolipideket, amelyeknek egyetlen acilláncuk van, amilyen például a sztearoilamin, vagy két acillánccal rendelkeznek.
.:.. .:. 4.·Előnyös, amint tartalmazó fej csoportokkal rendelkező foszfolipidek például a foszfatidil-etanolamin és a foszfatidilszerin. A lipidláncok farokrésze körülbelül 12-24 szénatomos és teljesen telített vagy telítetlen lehet. Előnyös lipid a disztearoil-foszfatidiletanolamin (röviden DSPE), azonban a szakterületen jártas személyek nyilvánvalóan a lipidek széles körű változatait ismerik, amelyek a leírás keretei közé esnek. Nyilvánvaló továbbá, hogy a lipid naturálisán magában foglalhat egy amincsoportot, vagy olyan származéka képezhető (úgy derivatizálható), hogy amincsoportot tartalmazzon. Más lipidegységek, amelyek acillánccal nem rendelkeznek, amilyen például a koleszterinamin, szintén alkalmazhatók.
A 2. ábrában vázlatosan tüntetjük fel egy polimer-DTB-lipid vegyület szintézisét. mPEG-származékokat (molekulatömegük 2000, illetve 5000 Dalton) - amelyek metoxikarbonil-ditioalkilvégcsoporttal rendelkeztek - előállítottunk úgy, hogy 2(metoxikarbonil-ditio)etánamint mPEG-klórformiáttal reagáltattunk, amely utóbbit könnyen előállítottuk szárított mPEG-OH oldat foszgénezésével [S. Zalipsky és munkatársai: Biotechnoi. Appl. Biochem. 15, 100-114 (1992)]. Az előbbi vegyületet úgy nyertük, hogy 2-aminoetántiol-hidrokloridot ekvivalens mennyiségű metoxikarbonil-szulfenil-kloriddal vittünk reakcióba irodalomban közölt eljárással [S. J. Brois és munkatársai: J. Amer. Chem. Soc. 92, 7629-7631 (1970); T. Koneko és munkatársai: Bioconjugate Chem. 2, 133-141 (1991)]. A merkaptobenzil-alkohol para- és orto-izomerjét [R. Grice és munkatársai: J. Chem. Soc. 1947-1954 (1963)] könnyen kapcsoltuk az így kapott PEGkapcsolatú acil-diszulfiddal, s így ditiobenzil-alkohol-végcsoportot hordozó mPEG-t kaptunk. Az aktív karbonátcsoport bevezetését nem-derivatizált mPEG-OH-val végzett reakció szerint hajtottuk végre, s így para-nitrofenil-karbonát-származékhoz jutottunk. DSPE addiciója etanolaminban a kívánt mPEG-DTB-DSPE termékhez vezetett. Mind az orto-, mind a para-DTB-lipidvegyületeket szilikagélkromatográfia segítségével tisztítottuk, és NMR színképpel és MALDI-TOFMS módszerrel jellemeztük; erre vonatkozó részleteket az 1. példában közlünk.
A 3. ábrában szemléltetjük a mPEG-DTB DSPE konjugátum tiolitikus hasadásának a mechanizmusát. A hasítás eredményeként a foszfotidiletanolamin lipid természetes, módosítatlan alakjában regenerálódik.
A 4A. és 4B. ábrák reakciósort mutatnak be az mPEG-DTBDSPE konjugátumok szintézisére, amelyek a diszulfidkötéssel szomszédos alkilcsoportot tartalmaznak, aminek következtében a diszulíidkötés gátolt jellegű. Amint a 2A. példában részletesebben leírjuk, mPEG-OH-t diklórmetánban p-nitrofenil-klórformiáttal reagáltattunk trietil-amin (TEA) jelenlétében, s így mPEGnitrofenil-karbonáthoz jutottunk. Egy aminoalkoholt, így például l-amino-2-propanolt vagy l-amino-2-butanolt dim etil formamidban (röviden: DMF) reagáltattunk mPEG-nitrofenilkarbonáttal TEA jelenlétében, s így a PEG-hez kapcsolódó szekunder alkoholt alakítottunk ki. Ezt a szekunder alkoholt azután a kívánt mPEG-DTB-DSPE vegyületté alakítottuk, amint ezt a 4A. ábrában szemléltetjük, és a 2A. példában részletesen ismertetjük.
Ebben a reakciósorban a mPEG-metil-ditiobenzil-nitrofenilklórformiátot DSPE-vel reagáltatva a kívánt vegyületet kaptuk. A .:.. .:. j. ·mPEG-metil-ditiobenzil-nitrofenil-klórformiát vegyületben a nitrofenil-klórformíát egység a kilépő csoport, amely a kiválaszott lipiddel reagáltatva a kívánt termékhez vezet. Egy más vonatkozásban a találmány olyan készítményt céloz, amelyben tartalmazott vegyületet úgy állítjuk elő, hogy egy terméket, így például mPEG-metil-ditiobenzil-R3 összetételű terméket - ahol R3 jelentése kilépő csoport - egy kapcsolóegységgel a benzolgyűrűhöz kötünk. A kilépő csoportot az amint tartalmazó ligandummal, például DSPE-vel, egy polipeptiddel vagy amint tartalmazó gyógyszerhatóanyaggal cseréljük (helyettesítjük). A kilépő csoportot a ligandumban lévő amin reakcióképessége szerint választjuk meg: e csoport előnyösen különböző, savas jellegű alkoholokból származik, amelyek hidroxi- vagy oxi-tartalmú kilépő csoporttal rendelkeznek. Ezek közé tartoznak például a kloridok, p-nitrofenil, o-nitrofenil, N-hidroxitetrahidroftálimid, N-hidroxiborostyánkősavimid, N-hidroxiglutárimid, N-hidroxinorbornén-2,3dikarboximid, 1-hidroxibenzotriazol, 3-hidroxipiridin, 4hidroxipiridin, 2-hidroxipiridin, 1 -hidroxi-6-(trifluormetil)benzotriazol, imidazol, triazol, N-metilimidazol, pentafhiorfenol, trifluorfenol és triklórfenol.
A 2B. példában közöljük egy mPEG-EtDTB-lipid konjugátum előállítását, ahol a diszulfid kötést egy etilcsoport gátolja.
Az 5. ábra egy másik szintetikus reakciósort szemléltet a találmány szerinti mPEG-DTB-ligandum vegyület előállítására. A reakciófolyamat részleteit a 3A.-3B. példákban adjuk meg. Röviden: hideg l-amino-2-propanolt kénsavval reagáltatva 2amino-l-metiletil-hidrogén-szulfátot állítottunk elő. Ezt a terméket szén-diszulfiddal és nátrium-hidroxiddal reagáltattuk vizes etanolban, s így 5-metiltiazolidin-2-tionhoz jutottunk. Az 5metiltiazoHdin-2-tionhoz vizes sósavoldatot adtunk, és egy héten át visszafolyató hűtő alatt forraltuk. A reakció termékét az 1(m erkap tóm etil) etil-ammonium-kloridot kikristályosítottuk, és elkülönítettük. Ezt a terméket metoxikarbonil-szulfenil-kloriddal reagáltatva 2-(metoxikarbonilditio)etánamint kaptunk. A 2(metoxikarbonilditio)etánamint mPEG-klórformiáttal reagáltatva a fentebb leírt eljárás alkalmazásával (lásd a 2. ábrát) a kívánt mPEG-DTB-nitrofenil-származékot nyertük, amely alkalmas egy kiválasztott amint tartalmazó ligandummal végbemenő reakcióra, amelynek eredményeként találmány szerinti vegyület jön létre.
A 3B. példa ismerteti a mPEG-(etil)DTB-nitrofenil-klórformiát szintézisének a reakcióját.
A 6A. ábra szemléltet egy reakciósort egy másik, találmány szerinti mPEG-DTB-lipid vegyület előállítására. A reakció részletei a 4. példában találhatók. Az 1,2-disztearoil-sn-glicerinamin lipidet az mPEG-DTB-nitrofenil-reakcióhoz a 4A. ábrában vagy 5. ábrában leírt módon állítottuk elő (a glicerinszármazékot a reakció céljára aktiváltuk). Az így kapott mPEG-DTB-lipid különbözik a fentebb leírt vegyületektől, mivel foszfátos fejcsoportja hiányzik. A 6A. ábrában látható mPEG-DTB-lipid a hasítás előtt neutrális. Amint a 6B. ábrában bemutatjuk, a diszulfidkötés tiolitikus redukciója során a vegyület lebomlik, és egy kationos lipidet eredményez. A pozitívan töltött lipid biztosítja az elektrosztatikus kölcsönhatást in vivo körülmények között, valamint az összemérhető előnyöket az in vivo körülmények közötti célzási lehetőségben.
A fentebb ismertetett reakcióvázlatokban az igényelt vegyület R5 csoportja hidrogénatom. Más megvalósítási formákban azonban az R5 alkil- vagy arilcsoportot jelent. Ebben a megközeHtésben, például ahol R2 és R5 egyaránt metilcsoportot jelentenek, egy α,βtelítetlen acil-kloridot (R'RC=CHCOC1, ahol R’ jelentése például metilcsoport, és R metilcsoportot jelent, azonban bármely alkilvagy arilcsoport figyelembe vehető) egy amint terminális PEG-vei reagáltatva a megfelelő N-PEG-szubsztituált α,β-telítetlen amidot kapjuk. Ezt a vegyűletet tiolecetsavval reagáltatjuk, s így a megfelelő N-PEG-szubsztituált ft-(acetiltio)-amidot nyerjük a C=C kötésre irányuló konjugált addició útján. Az acetiltiocsoportot (-SCOCH3) tiolcsoporttá (-SH) hidrolizáljuk, majd metil(klórszulfenil)formiáttal (CISCOOCH3) reagáltatjuk, s így egy metoxikarbonil-ditiocsoportot (-SSCOOCH3) vezetünk be; ezt a közbenső terméket p-merkaptobenzil-alkohollal reagáltatjuk, így az N-PEG-szubsztituált ft-(ditiobenzil-alkohol)-amidot kapjuk (amelynek a szerkezete PEG-NH-CO-CH2CR'R-SS-p-fenil-CH2OH). A benzilalkoholegységet ezt követően nitrofenil-klórformiáttal reagáltatva kapjuk a nitrofenil-karbonát kilépő csoportot a fentiek szerint.
1. Az mPEG-DTB-DSPE vegyület hasítása in vitro körülmények között
Az orto-mPEG-DTB-DSPE és para-mPEG-DTB-DSPE (amelyet az 1. példában leírtak szerint állítottunk elő) hasadásának sebességét in vitro körülmények között úgy vizsgáltuk, hogy e vegyületek micelláris oldatait állítottuk elő pufferolt vizes oldatban (pH 7,2). A vegyületek tiolitikus hasadását 150 μΜ jelenlétében és hiányában úgy monitoroztuk, hogy a vegyületek eltűnését figyeltük meg HPLC módszerrel, az 5. példában leírtak szerint. Az eredményeket a 7A. ábrában szemléltetjük, ahol az orto- és para vegyületek cisztein hiányában (* szimbólumok, illetve + szimbólumok) nem mutatnak hasadást, és ilyen körülmények között cisztein hiányában stabilisak. Az orto- és para-vegyületek amelyeket üres körök, illetve üres négyzetek szemléltetnek - 150 μΜ cisztein jelenlétében a 7A. ábrán bemutatott módon hasadnak. Az orto-vegyület kissé nagyobb sebességgel bomlik, mint a paravegyület (T1/2 megközelítő értéke 12 perc, szemben a megközelítő 18 perccel).
2. mPEG-DTB-lipid vegyületet tartalmazó liposzómakészítmények
a. Jellemzés in vitro körülmények között
Az egyik megvalósítási formában az mPEG-DTB-lipid vegyületet liposzómakká szereljük ki (formulázzuk). A liposzómák zárt lipid-hólyagocskák, amelyeket különböző terápiás célokra alkalmaznak, különösen bizonyos terápiás hatóanyagoknak a celhelyre (hatóhelyre) vagy célsejtbe való eljuttatására a liposzómák szisztémás adagolása útján. Közelebbről olyan liposzómák, amelyeknek hidrofil polimer láncokból álló felületi bevonata van - amilyen például a polietilénglikol (PEG) - kívánatos hatóanyaghordozók, mivel ezek a liposzómák nyújtott vérkeringési élettartamot tesznek lehetővé olyan liposzómákkal szemben, amelyek ilyen polimer bevonattal nem rendelkeznek. A polimer bevonatban lévő polimer láncok a liposzómákat árnyékolják, és merev kefeszerű, vízzel szolvatált polimer láncokat képeznek a liposzómák körül. Ennek következtében a polimer egy gátat alakít ki a vérproteinekkel szemben, s ezzel megakadályozza fehérje kötődését es a liposzómák felismerését makrofágok felvétele és eltávolítása, valamint a retikuloendoteliális rendszer .:.. .:. a. makrofágjainak és más sejtjeinek a felvétele és eltávolítása vonatkozásában.
A polimer láncokból álló felszíni bevonattal rendelkező liposzómákat általában úgy állítjuk elő, hogy a lipidkeverékbe körülbelül 1-20 mólszázalék polimerrel derivatizált (származékká alakított) Hpidet foglalunk. A polimerrel derivatizált lipid tényleges mennyisége a polimer molekulatömegétől függően nagyobb vagy kisebb lehet. A találmány szerint a liposzómákat úgy állítjuk elő, hogy körülbelül 1 mólszázaléktól körülbelül 20 mólszázalékig terjedő mennyiségű polimer DTB-lipid konjugátumot adunk a többi liposzóma-lipid-kettősréteg komponensekhez. Amint igazoljuk az alább leírt vizsgálatokkal, a találmány szerinti polimerDTB-lipid konjugátum vérkeringési időtartama hosszabb, mint az olyan polimer-lipid konjugátumot tartalmazó liposzómáké, ahol a polimer és a lipid egy hasítható alifás diszulfid kötéssel kapcsolódnak egymáshoz.
A találmány alátámasztása céljából végzett vizsgálatok során vezikulumképző lipidből álló liposzómákat állítottunk elő (lásd a 6. példát), ahol a lipid parciálisán hidrogénezett foszfatidilkolin, valamint koleszterin és az orto-mPEG-DTB-DSPE vagy paramPEG-DTB-DSPE vegyületeket előállítottuk. A mPEG-DTB-DSPE vegyületek ciszteinnel közvetített hasadását 150 μΜ cisztein jelenlétében vagy hiányában vizes pufferban figyeltük meg. Az eredményeket a 7B. ábrában tüntetjük fel, amely a 7A. ábra adatait is tartalmazza összehasonlítás céljára. A 7B. ábrában az orto- és para-vegyületek micelláris formában, cisztein nélkül (* szimbólumok és + szimbólumok megfelelőleg) nem mutatnak hasadásra, ez a konjugátum stabilitására utal tiolok távollétében.
IXz üres körök és üres négyzetek megfelelnek az orto-, illetve paravegyületeknek micelláris formában, tisztein jelenlétében, amint ezt fentebb a 7A. ábrával kapcsolatban kifejtettük. A sötét körök és sötét négyzetek megfelelnek az orto-, illetve para-vegyületeknek liposzóma-formában, tisztein jelenlétében.
A 7B. ábra adatai azt mutatják, hogy mind az orto-, mind a para-vegyületek valamivel ellenállóbb a tiolitikus hasítással szemben, ha ezek liposzómákba vannak beépítve. A tiolizis-reakció termékeinek a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata (szilikagél G, kifejlesztő szer kloroform-metanol-víz 90:18:2 arányban) [J. C. Dittmer és munkatársai: J. Lipid Res. 5, 126-127 (1964)] azt mutatta, hogy a DSPE az egyedüli lipidkomponens, és egy másik folt megfelel a tiolcsoportot tartalmazó, lipidmentes mPEGszárm azéknak.
A találmány alátámasztása céljából végzett másik vizsgálatunkban liposzómákat állítottunk elő a dioleoilfoszfatidiletanolamin (DOPE) lipidből és az orto-mPEG-DTB-DSPE, vagy a para-mPEG-DTB-DSPE vegyületből. A DOPE egy hexagonális fázisú lipid, amely önmagában lipid-vezikulumokat nem képez. Ha azonban a DOPE-t néhány mólszázalék mPEGDTB-DSPE-vegyülettel kombináljuk, akkor liposzómák alakulnak ki. A mPEG-DTB-DSPE-vegyület kiváltja a liposzómák bomlását, és a liposzómába foglalt (liposzómásan befogott) tartalom felszabadulását. Ennek következtében a tartalom felszabadulásának a karakterisztikái ezeknek a liposzómáknak az esetében lehetővé teszi a hasítható, PEG-hordozó liposzómák célszerű, kvantitatív kiértékelését.
.:.. .:. j, *DOPE-ból és orto-, illetve para-mPEG-DTB-DSPE vegyületből álló liposzómákat állítottunk elő a 7A. példában leírtak szerint befogott (csapdázott) fluoroforokkal: p-xilol-bisz(piridiniumbromid)-dal és trinátrium-8-hidroxipiréntriszulfonáttal. A íluoroforok liposzómákból végbemenő felszabadulását cisztein jelenlétében végzett inkubálás során - ahol a cisztein koncentrációját változtattuk - monitoroztuk, és a 7B. példában leírtuk.
A 8A. ábrában mutatjuk be az orto-vegyületet tartalmazó liposzómákkal kapcsolatos eredményeinket, aminek során szemléltetjük befogott fluorofortartalom felszabadulásának százalékos értékét olyan liposzómákból, amelyeket cisztein jelenlétében inkubáltunk, ahol a cisztein koncentrációja 15 μΜ (sötét rombuszok), 150 μΜ (sötét, fordított háromszögek), 300 μΜ (sötét háromszögek), illetve 1,5 mM (sötét körök) volt. A 8B. ábra hasonló görbe olyan liposzómákra vonatkozóan, amelyek a paravegyületet tartalmazták, ahol a liposzómákat ciszteinben inkubáltuk 15 μΜ (sötét rombuszok), 300 μΜ (sötét háromszögek), 1 μΜ (sötét négyzetek), illetve 1,5 mM (sötét körök) ciszteinkoncentráció mellett.
A 8A.-8B. ábrák szemléltetik, hogy mind az orto-, mind a para-vegyületek hasadnak, ha azokat liposzómába építjük; ezt igazolja a bezárt (befogott) festékanyag felszabadulása a cisztein koncentrációjától függő sebességgel. Kontrollvizsgálatok nem hasadó mPEG-DPSE-tartalmú liposzómákkal nem váltották ki a tartalom felszabadulását (ezeket az eredményeket itt nem mutatjuk be). Ezek az eredmények valószínűsítik, hogy az ortokonjugátum némileg érzékenyebb a tiolitikus hasítással szemben.
így például 300 μΜ koncentrációjú cisztein a DOPE-liposzómák tártaim ónak legnagyobb részét 20 percen belül szabaddá teszi. Ugyanilyen körülmények között a para-mPEG-DTB-DSPEvegyületet tartalmazó liposzómáknak csak egy töredéke bomlik le. Hasonlóképpen 20 percig tartó inkubálással 150 μΜ cisztein jelenlétében a befogott tartalomnak a fele szabadult fel az ortovegyületet tartalmazó liposzómákból, míg megközelítőleg csupán a tartalom 10%-a szabadult fel a para-vegyületet tartalmazó liposzómákból. Mind az orto-, mind a para-vegyületek felezési ideje 20 percnél kevesebb 150 μΜ koncentrációnál (lásd az adatokat a 7B. ábrában). Ez valószínűsíti, hogy az eredeti 3 mólszázalék mPEG-DTB-lipid több mint felének hasadnia kell, hogy a liposzómákból végbemenő tartalmi felszabadulás megfigyelhető legyen.
Az mPEG-DTB-DSPE/DOPE liposzómák bomlása 15 μΜ ciszteinben - amely az átlagos plazmakoncentráció mind emberekben, mind rágcsálókban [J. H. Lash és munkatársai: Arch. Biochem. Biophys. 240, 583-592 (1985)] - minimális volt kísérleteink időtartama alatt (60 perc). Ez valószínűsíti, hogy az mPEG-DTB-lipid vegyületeknek megfelelően hosszú élettartammal kell rendelkeznie a plazmában, hogy lehetővé váljék a PEG-gócokat tartalmazó vezikulumok eloszlása szisztémásán in vivo körülmények között, vagy azok felhalmozódása egy specifikus hatóhelyen akár passzív módon, akár egy ligandummal közvetített célzás útján. A ciszteinkoncentráció lokális vagy rövid időtartamú növelése potenciálisan elérhető az intravénás vagy intraarteriális adagolással. A 8A.-8B. ábrákban bemutatott eredmények továbbá azt sejtetik, hogy a természetes plazma-cisztein koncentráció (körülbelül 15 μΜ) hatásának való tartós kitételnek (expozíciónak) elegendőnek kell lennie e vegyületek legnagyobb részének a lebontására. Ezeket a lehetőségeket in vivo vizsgálatokban tanulmányoztuk, amelyeket az alábbiakban közlünk.
A találmány alátámasztására végzett további vizsgálatunkban DOPE-ból és három különböző mPEG-DTB-lipid-vegyületből álló liposzómákat állítottunk elő. A Hposzómákat a 7. példában leírtak szerint készítettük, és ezek befogott fluorofort tartalmaztak. A három mPEG-DTB-lipid-vegyület a következő: az 1A. ábrában bemutatott mPEG-DTB-DSPE; A 4B. ábrában bemutatott mPEGMeDTB-DSPE, ahol R jelentése metilcsoport; valamint a 6A. ábrában bemutatott mPEG-MeDTB-disztearoil-gHcerin. A liposzómák 97 mólszázalék DOPE-t és 3 mPEG-DTB-lipid-vegyület egyikének 3 mólszázalékát tartalmazták. A vegyületek ciszteinnel közvetített hasadásának sebességét a befogott fluorofor felszabadulásának monitorozásával határoztuk meg, mind az időnek a függvényét a cisztein különböző koncentrációinak a jelenlétében. Az eredményeinket a 9A.-9C. ábráinkban mutatjuk be, ahol a befogott fluorofor felszabadulásának százalékos értékét a pufferban önmagában inkubált liposzómákból végbemenő felszabadulási sebességre normalizáltuk.
A 9A. ábra befogott fluorofor felszabadulásának százalékos értékét mutatja az idő függvényeként DOPE-ból és para-mPEGDTB-DSPE-ból (1A. ábra vegyülete) álló liposzómák esetében. A konjugátumot tartalmazó, liposzómákból végbemenő felszabadulás sebessége különböző koncentrációjú cisztein jelenlétében végzett inkubálás után az ábrán látható; a cisztein koncentrációi: 15 μΜ (sötét négyzetek); 75 μΜ (üres háromszögek); 150 μΜ (X szimbólumok); 300 μΜ (üres körök); 1500 μΜ (sötét körök); 3000 μΜ (+ szimbólumok); valamint 15000 μΜ (üres rombuszok).
A 9B. ábra a befogott (bezárt) fluorofor felszabadulásának százalékos értékét mutatja az idő függvényében olyan liposzómák esetére, amelyek DOPE-ból és para-mPEG-MeDTB-DSPE-ből (a 4B. ábra vegyülete) állnak. Az ábra mutatja a fluorofor felszabadulási sebességét olyan liposzómákból, amelyeket a következő koncentrációban jelenlévő ciszteinnel inkubáltunk: 15 μΜ (sötét négyzetek); 75 μΜ (üres háromszögek); 150 μΜ (X szimbólumok); 300 μΜ (üres körök); 1500 μΜ (sötét körök); 3000 μΜ (+ szimbólumok); és 15000 μΜ (üres rombuszok).
A 9C. ábra hasonló görbe DOPE-ból és mPEG-MeDTBdisztearoil-glicerinből kialakított liposzómák esetében (a 6A. ábra vegyülete). Az ábra a festékanyag liposzómákból végbemenő felszabadulásának sebességét mutatja. A liposzómákat a következő koncentrációkban jelenlévő ciszteinnel inkubáltuk: 15 μΜ (sötét négyzetek); 75 μΜ (üres háromszögek); 150 μΜ (X szimbólumok); 300 μΜ (üres körök); 1500 μΜ (sötét körök); 3000 μΜ (+ szimbólumok); és 15000 μΜ (üres rombuszok).
A 9A.-9C. ábrák azt mutatják, hogy a mPEG-MeDTB-lipid hasadásának sebessége függ a cisztein koncentrációjától, ha a hasadás sebessége csekély; ezt igazolja a bezárt fluorofor felszabadulása 15-75 μΜ ciszteinkoncentrációknál. Ha a 9A. ábra adatait a 9B. ábra adataival összehasonlítjuk, akkor látható, hogy a mPEG-MeDTB-DSPE vegyület (9B. ábra) körülbelül tízszer lassabban hasad, mint a mPEG-DTB-DSPE vegyület (9A. ábra). Ennek alapján a hasadás sebessége az R egységnek megfelelően szabályozható (lásd a 2. ábrát) a DTB kapcsolatban.
b. Jellemzés in vivo körülmények között
A 8. példában leírtak szerint előállított liposzómák vérkeringési élettartamát (amelyek polimer-DTB-lipid konjugátumot tartalmaznak a találmány értelmében) egereken határoztuk meg. Inlu-ot zártunk liposzómákba, majd a liposzómákat intravénás injekcióval adagoltuk. A vizsgálati állatok egyik csoportja ezen kívül ciszteininjekciót kapott; az állatok kontrollcsoportjának konyhasóoldatból álló injekciót adtunk. Különböző időpontokban vérmintákat vettünk, és a liposzómák jelenlétét elemeztük, amelyet az In111 jelenléte igazolt.
A 10. ábra mutatja eredményeinket, azaz a percenkénti beütések számát (CPM) - amely az In111-tői származott - az idő függvényében a liposzómák, illetve konyhasóoldat (üres körök) vagy 200 mM tisztein (sötét négyzetek) befecskendezése után kaptunk. Látható, hogy az mPEG-DTB-DSPE hasadása bekövetkezett, amikor a viszonyok a fiziológiai körülményeknek megfeleltek, amint ezt igazolja a hasadás az egerek olyan csoportjában, amelyeket liposzómák adagolása után konyhasóoldattal kezeltünk. Egy oxigén redukálószer - a cisztein egereknek való adagolása hatásosan növelte az mPEG-DTB-lipid vegyület hasadási sebességét a körülbelül 2 órától körülbelül 8 óráig terjedő időszakban.
Lényeges, hogy a találmány szerinti polimer-DTB-lipid vegyület hasadása az eredeti, módosítatlan lipidhez vezet. Ez kívánatos, mivel a nem természetes, módosított lipideknek nemkívánt in vivo hatásaik vannak. Egyszersmind a vegyület stabilis, ha redukálószerektől mentesen tároljuk.
Más vizsgálatok során - amelyeket itt nem szemléltetünk mPEG-DTB-lipidet tartalmazó liposzómák vérkeringési élettartamát összehasonlítottuk polimer-lipid konjugátumot tartalmazó liposzómákkal, ahol a polimer és a lipid egy hasítható alifás diszulfid kötéssel kapcsolódik. Az alifás diszulfidkötések in vivo körülmények között könnyen hasadnak, és olyan liposzómáknak a vérkeringési élettartama, amelyek polimer láncokkal rendelkeznek, és a polimer láncok egy alifás diszulfidkötéssel kapcsolódnak a felületükhöz, általában nem rendelkeznek olyan nyújtott (hosszabb) vérkeringési élettartammal, mint amelyet stabilisán kötött polimer láncokkal rendelkező liposzómák esetében megfigyeltünk. A találmány szerinti ditiobenzil kapcsolat és különösen a gátoltabb DTB-kötések in vivo körülmények között stabilisabb ak, és hosszabb vérkeringési élettartamot biztosítanak in vivo körülmények között, mint azok a liposzómák, amelyek polimer láncai alifás diszulfidkötés útján kapcsolódnak.
B. Amint tartalmazó polipeptid
Egy további megvalósítási formában a találmány az 1A. ábrában leírtakkal kapcsolatos vegyületekre vonatkozik, ahol az amint tartalmazó ligandum egy polipeptid. A 11A. ábrában szintetikus reakcióvázlatot szemléltetünk, amely polimer-DTBpolipeptid előállítását mutatja be, ahol a példa szerinti polimer a mPEG. Általában egy mPEG-DTB-kilépő csoport típusú vegyületet a fenti 2., 4A. és 5. ábrákban leírtak szerint valamelyik szintetikus úton álhtjuk elő. A kilépő csoport nitrofenil-karbonát vagy bármilyen más típusú kilépő csoport lehet. A mPEG-DTBnitrofenil-karbonát-vegyület uretánkötéssel kapcsolódik egy polipeptid aminegységéhez. A diszulfiddal szomszédos R csoport a vegyületben hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport, vagy ehhez hasonló csoport lehet; ezt a csoportot a diszulfid kívánt hasadási sebességének megfelelően választjuk.
A 11B. ábra mutatja a vegyület ciszteinnel közvetített hasadásának a bomlástermékeit. Látható, hogy a hasadás során a natív protein regenerálódik, a protein amincsoportjának módosulása nélkül.
A polimer láncok, például a PEG kapcsolódása egy polipeptidhez gyakran csökkenti az enzimatikus vagy más biológiai aktivitást, például egy polipeptid-receptor kötését. Ezzel szemben egy polipeptid polimer módosítása növeli a polipeptid vérkeringési élettartamát. A jelen találmány szerint a polimerrel módosított polipeptidet egy személynek adagoljuk. Amint a polimerrel módosított polipeptid keringése folyamán fiziológiai redukáló körülmények hatása alá kerül - amilyen például a vér cisztein tartalm a és más, in vivo körülmények közötti tiolok elkezdődik a polimer láncok leválása a polipeptidről. Amint a polimer láncok a polipeptidről felszabadulnak, a polipeptid biológiai aktivitása fokozatosan helyreáll. Ennek alapján a polipeptidnek kezdetben megfelelő vérkeringési élettartama van a biológiai eloszlás céljára, és ezen az időponton túl, ahogyan a polimer láncok lehasadnak, visszanyeri teljes biológiai aktivitását.
A találmány alátámasztására végzett egyik vizsgálatban modell polipeptidként lizozimet alkalmaztunk, és egy mPEGMeDTB-lizozim konjugátumot állítottunk elő a fentebb leírtakhoz hasonló szintetikus úton. A lizozimet mPEG-MeDTB-nitrofenilkarbonáttal inkubáltuk 0,1 moláris borát jelenlétében 9-es pH értéken, a nitrofenil-karbonátnak a lizozim amincsoportjához viszonyított 2:1 aránya mellett. 15 perces és 3 órás reakcióidő után mintákat vettünk ki, és SDS-Page módszerrel jellemeztük. Összehasonlító vegyületet állítottunk elő úgy, hogy lizozimet azonos körülmények között 60 percig reagáltattunk egy mPEGnitrofenil-karbonát konjugátummal, amellyel stabilis mPEGlizozim konjugátum alakítható ki.
A 12. ábra szemlélteti az SDS-Page gél eredményeit. Az 1. foltsor (pálya) megfelel a lizozim és mPEG-MeDTB-nitrofenilkarbonát közötti 15 perces reakciónak; a 2. foltsor reprezentálja ugyanezen vegyületek 1 órás reakcióban keletkezett reakció term ékét. A 3. foltsor mutatja a natív lizozimet, és a 4. foltsor megfelel a lizozim és a mPEG-nitrofenil-karbonát 1 óra alatt végbemenő reakciójának. A molekulatömegjelzők az 5. foltsorban felülről lefelé a következők:
Molekulatömeg (kDalton) Jelző
1163 β - Galaktozidáz
97,4 Foszforiláz b
66,3 Szarvasmarha-szérumalbumin
55,4 Glutaminsav- dehidrogenáz
36,5 Laktát-dehidrogenáz
31 Szénsav-anhidráz
21,5 Tripszingátló
14,4 Lizozim
Az 1. és 2. foltsor összehasonlítása azt mutatja hogy a hosszabb reakcióidő a vegyület molekulatömegének a növekedését idézi elő, amely további, a polipeptidre hosszabb inkubációs idővel konjugált mPEG-láncokkal összeegyeztethető.
Az SDS-Page profil 6.-9. foltsorai megfelelnek az 1.-4. foltsorokban felvitt mintáknak 2%-os béta-merkaptoetanollal 10 percig 70 °C hőmérsékleten végzett kezelés után. A mPEG-MeDTBlizozim konjugátum egy redukálószer hatásának kitéve lebomlott, és így a natív lizozim regenerálódott, amit igazol a 6. és 7. foltsorban lévő sáv 14,4 kDalton molekulatömegnél. Ezzel ellentétben a stabilis mPEG-lizozim vegyületet egy redukálószerrel végzett inkubálás nem érintette: ezt a 9. foltsor és 4. foltsor profiljában megfigyelhető egyezés igazolja.
Az SDS-Page profilból nyilvánvaló, hogy mPEG-MeDTB kovalens kapcsolása egy proteinhez különböző mPEG-protein arányokat tartalmazó konjugátumok keverékét alakítja ki. Ez az arány a reakció időtartamától és körülményeitől függ. Ez világosan látható az 1. és 2. foltsorokban lévő sávokból, ahol az 1. foltsor a körülbelül 1-6 PEG lánccal derivatizált lizozimet mutatja. A 2. foltsorban a hosszabb reakcióidő magasabb mPEG-protein arányú mPEG-MeDTB-lizozim konjugátumokat eredményezett. Valamennyi hasítható konjugátum könnyen regenerálódott a natív proteinné: ez a 6. és 7. foltsorok sávjaiból látható.
Nyilvánvaló, hogy a fentebb leírt hidrofil polimerek bármelyikének alkalmazása fontolóra vehető. A polimer molekulatömegét a polipeptidtől, a polipeptiden lévő reakcióképes amincsoportok számától és a polimerrel módosított vegyület kívánt méretétől függően választjuk.
Az alkalmazás szempontjából számba vehető polipeptidek korlátlanok, és lehetnek természetben előforduló, vagy rekombináns eljárással előállított polipeptidek. Kisméretű, humán rekombináns polipeptidek előnyösek; továbbá előnyösek a 10-30 kDalton tartományba eső molekulatömegú polipeptidek. Az ilyen polipeptidek közé tartoznak citokinek, például a tumornekrózis faktor (TNF), interleukinek és interferonok; az eritropoietin (EPO), a granulocita-kolóniát stimuláló faktor (GCSF), enzimek és ezekhez hasonló hatóanyagok. Tekintetbe vehetők továbbá a vírus-eredetű pokpeptidek is, amelyekben egy vírus felületét módosítjuk, és ennek útján egy vagy több DTB-reverzhibilis kötés útján egy vagy több polimer láncot kapcsolunk hozzá. Egy olyan vírusnak a módosítása, amely transzfektálásra alkalmas gént tartalmaz, kiterjesztené a vírus keringési idejét, és redukálhatná immunogenitását, s ezáltal egy exogén gén célba juttatását javíthatná.
C. Az amint tartalmazó gyógyszerhatóanyag
A találmánynak egy még további kiviteli formájaként megfontolható egy polimer-DTB-amin-tartalmú gyógyszerhatóanyag alkalmazása. A vegyület a fentebb leírt szerkezetű, különösen az 1A. ábrára való tekintettel, ahol az amint tartalmazó ligandum maga az amint tartalmazó gyógyszerhatóanyag. A terápiás hatóanyagok PEG-gel végzett módosítása hatékonyan javítja a hatóanyag vérkeringési élettartamát, és ennek útján az immunogenitást csökkentheti.
Polimer-DTB-amin-tartalmú gyógyszerhatóanyag bármely fenti reakcióvázlat szerint előállítható olyan módosításokkal, amelyek szükségesek az adott gyógyszer kialakítására. A terápiás hatóanyagok széleskörű változatai tartalmaznak reakcióképes amincsoportot, mint például: a mitomicin C, bleomicin, doxorubicin és ciprofloxacin, és a találmány bármelyik ilyen hatóanyagot korlátozás nélkül figyelembe veszi. Nyilvánvaló, hogy a találmány olyan gyógyszerhatóanyagok esetében is alkalmazható, amelyek alkohol- vagy karboxilcsoportot tartalmaznak. Olyan esetben, ha a hatóanyag reakcióra alkalmas hidroxil- vagy karboxilcsoportot tartalmaz, a polimer-DTB-egység a hatóanyaghoz uretán-, észter-, éter-, tioéter- vagy tioészter-kötések útján kapcsolható. Mindezen megvalósítási formákban a polimer-DTBgyógyszerhatóanyag adagolás után in vivo körülmények között tiolitikus úton bomlik, s így az amint tartalmazó gyógyszerhatóanyag természetes, aktív alakjában regenerálódik. A vegyület terápiás aktivitása módosítás után és adagolás előtt nem szükséges. Ennek következtében olyan esetekben, ha a gyógy szerhatóanyag módosítása DTB-polimerrel a terápiás hatás csökkenésével vagy elvesztésével jár, akkor adagolás után és a DTB-polimernek a hatóanyagról való lehasadása után a gyógyszerhatóanyag aktivitása visszaáll.
A találmány alátámasztása céljából végrehajtott vizsgálatainkban a hatóanyag nitroanilidjét mPEG-MeDTBnitrofenil-karbonáttal reagáltatva mPEG-MeDTB-para-nitroanilid vegyületet alakítottunk ki, amint ez a 13. ábrán látható. A vegyület lebontása redukálószer hatására az ábrán mutatott termékekhez vezet, és a gyógyszerhatóanyag para-nitroanilidje módosítatlan formában regenerálódik.
A mPEG-MeDTB-para-nitroanilid vegyületet in vitro inkubáltuk 5 mM ciszteint tartalmazó pufferban; a különböző időpontokban kivett minták abszorbanciáját a 14A. ábrában szemléltetjük. Az ábrán különböző időpontokban mért minták láthatók, ezek: zérus időpont (sötét rombuszok); 2 perc (sötét négyzetek); 5 perc (X szimbólumok); 10 perc (üres négyzetek); 20 perc (b óromszögek); 40 perc (üres rombuszok); és 80 perc (sötét körök). Nyilvánvaló a változás az UV színképekben a ciszteinben végzett inkubálási idő függvényeként; ez mutatja a para-nitroanilid ciszteinnel közvetített felszabadulását a mPEG-MeDTB-paranitroanilid-vegyületből.
A 14B. ábra mutatja mól/liter egységekben az in vitro mPEGMeDTB-para-nitroanilid konjugátumból (in vitro) felszabadult para-nitroanilid mennyiségét, aminek során az inkubálás a következő koncentrációjú cisztein jelenlétében történt: 5 mM cisztein (sötét körök); 1 mM cisztein (sötét négyzetek); és 0,15 mM cisztein (sötét rombuszok). A hatóanyagnak a konjugátumból végbemenő felszabadulási sebessége a jelenlévő redukálószer koncentrációjának a függvénye.
A 15. ábrán látható az (I) általános képlet.
Az előbb elmondottakból látható, hogy a találmány mennyire változatos tulajdonságokat és szempontokat tesz lehetővé. A találmány szerinti vegyületek olyan amint tartalmazó ligandumot tartalmaznak, amely reverzibilisen kötődik egy hidrofil polimerhez egy orto- vagy paradiszulfid útján benzil-uretán kapcsolattal. Ha ezt a kapcsolatot enyhe tiolitikus körülményeknek vetjük alá, akkor hasad, és az eredeti amint tartalmazó ligandum módosítatlan formájában regenerálódik. A hasadásnak a sebessége a kapcsolatban lévő diszulfid szférikus gátlása útján szabályozható és/vagy a tiolitikus feltételek in vivo befolyásolásával is szabályozható. A ditiobenzil-kapcsolat hasadása előtt a vegyületek megnövekedett vérkeringési időtartammal, javított stabilitással és csökkent immunogenitással rendelkeznek.
.:. a. ·
III. példák
Az alább következő példák a találmány leírását szemléltetik, azonban semmiképpen sem korlátozzák a találmány oltalmi körét.
Anyagok
Az összes anyagokat kereskedelmi szempontból megfelelő cégektől, így például az Aldrich cégtől szereztük be.
1. példa mPEG-DTB-DSPE szintézise mPEG-MeDTB-nitrofenil-karbonátot (300 mg, 0, 12 mmol, 1,29 ekv.) 3 ml kloroformban oldottunk, 70 mg (0,093 mól) DSPE-t és 58,5 pl (0,42 mmol, 4,5 ekv.) TEA-t adtunk a PEG-oldathoz, és az elegyet 50 °C hőmérsékleten (az olajfürdő hőmérséklete) kevertük. 15 perc múlva a vékonyréteg-kromatogramm (röviden: VRK) mutatta, hogy a reakció még nem fejeződött be. Ekkor két részletben 10 μΐ és 20 μΐ TEA-t és néhány adag (50 mg, 30 mg, 10 mg) mPEG-MeDTB-nitrofenil-karbonátot adtunk hozzá minden 10 perc eltelte után mindaddig, amíg a reakció be nem fejeződött. Az oldószert lepároltuk. A termékkeveréket metanolban oldottuk, és 1 g C8 szilikagélt adtunk hozzá. Az oldószert ismét lepároltuk. Az oszlopnak a tetejére vittük a terméket tartalmazó C8 szilikagélt, majd metanol:víz gradienssel eluáltuk (nyomás alatt): MeOH:H2O = 80:20, 80 ml (a termék eluálása); MeOH:H2O = 85:15, 40 ml; Me0H:H20 = 90:10, 40 ml; MeOH = 40 ml; CHCl3:MeOH:H2O = 90:18:10, 40 ml. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük, és bepároltuk, így a terméket színtelen, sűrű folyadék alakjában kaptuk. 5 ml tercier-butanolt adtunk hozzá, Hofilizáltuk, és vákuumban P2O5 fölött szárítottuk. így a terméket fehér, pelyhes szilárd anyag alakjában 252 mg (89%) hozammal nyertük.
Az orto- és para-DTB-DSPE vegyületeket szilikagél-kromatográfiával tisztítottuk (metanol-gradiens 0-10% kloroformban, körülbelül 70% elkülönített hozam) a szerkezeteket NMR és MALDI-TOFMS felvételekkel igazoltuk: pH NMR a para-konjugátum esetére: (d6DMSO, 360 MHz) δ 0.86 (t, CH3, 6 H), 1.22 (s, CH2 of lipid, 56H), 1.57 (m, C772CH2CO2, 4H), 2.50 (2xt, CH2CO2, 4H), 2.82 (t, CH2S, 2H), 3.32 (s, OCH3, 3H), 3.51 (m, PEG, -180 H), 4.07 (t, PEG-CH2OCONH, 2H), 4.11 & 4.28 (2 x dd CH2CH of glycerol, 2H), 4.98 (s, benzyl-CH2, 2H), 5.09 (m, C/7CH, of lipid), 7.35 & 7.53 (2 x d, aromatic, 4H) ppm.
Az orto-konjugátum csak a benzil- és aromás szignálokban különbözött 5,11-nél (s, CH2, 2H) és 7,31-nél (d, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,75 (d, 1H) ppm.
A MALDI-TOFMS módszer megoszlást jelzett a távközzel elhelyezkedő ionok között 44 Da egyenlő intervallumokra, amelyek megfelelnek az ismétlődő etilén-oxid-egységeknek. A vegyűleteknek az átlagos molekulatömege 3127-nek illetve 3139 Da-nak adódott a para-, illetve orto-izomerek esetében (az elméleti molekulatömeg megközelítőleg 3100 Da).
A reakcióvázlatot a 2. ábrában szemléltetjük.
2. példa mPEG-DTB-DSPE szintézise
A reakcióvázlatot a 4A.-4B. ábrák szemléltetik. 40 g (8 mmol) mPEG(5K)-OH-t toluollal azeotróposan szárítottunk (a teljes térfogat 270 ml-t tett ki, amelyből Dean-Stark feltéttel 250 ml-t ledesztilláltunk. mPEG-OH-hoz 100 ml diklórmetánt adtunk, majd a PEG oldatot 4 °C hőmérsékletre hútöttük (jeges vízzel), és 2,40 g (12 mmol, 1,5 ekv.) p-nitrofenil-klórformiátot és 3,3 ml (24 mmol, 3 ekv.) TEA-t adtunk a PEG-oldathoz, amelyet nedvességgel szemben védtünk. Enyhén sárgás TEA-hidroklorid képződött. 15 perc hűtés után a fürdőt eltávolítottuk, és a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten kevertük. Ekkor a VRK elemzés szerint (kifejlesztőszer kloroform-metanol-víz 90:18:2 arányú elegyével), a reakció teljesen végbement. Az oldószer lepárlása után kapott maradékot 50 °C hőmérsékletű etil-acetátban oldottuk. A TEAhidrokloridot szűrtük, és meleg etil-acetáttal mostuk. Az oldószert lepároltuk, és az így kapott terméket izopropanolból háromszor átkristályosítottuk. így a cím szerinti terméket 38,2 g (92%) hozammal kaptuk.
Ή NMR (DMSO-cU, 360 MHz) δ 3.55 (s, PEG, 450H); 4.37 (t, PEG-CHa, 2H); 7.55 (d, C6H5, 2H); 8.31 (d, C6H5, 2H).
1,1 ml (14,52 mmol, 3 ekv.) l-amino-2-propanolt és 2,02 ml (14,52 mmol, 3 ekv.) TEA-t adtunk 25 g (4,84 mmol) mPEG(5K)~ nitrofenil-karbonáthoz 60 ml DMF és 40 ml diklórmetán elegyében. így tiszta, sárga oldatot kaptunk, amelyet szobahőmérsékleten 30 percig kevertünk. A VRK elemzés (kifejlesztőszerként kloroform és metanol 90:10 arányú elegyével) azt mutatta, hogy a reakció befejeződött. Az oldószert (diklórmetánt) lepároltuk, és 250 ml izopropanolt adtunk a 60 ml DMF-ban oldott maradékhoz. A termék azonnal kicsapódott; háromszor izopropanolból átkristályosítottuk, s így a várt terméket 22,12 g (90%) hozammal kaptuk.
Ή NMR (DMSO-cZő, 360 MHz) δ .98 (d, CH3CH(OH)CH2, 3H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.03 (t, PEG-CH2, 2H); 4.50 (d, CH3CHOH, 1H); 7.0 (t, mPEG-OCONH).
22,12 G (4,34 mmol) mPEG(5K)-uretán-2-metil-propanolt azeotróposan szárítottunk 45 ml toluollal, majd a maradékhoz 60 ml diklórmetánt adtunk. A mPEG-oldathoz 0 °C hőmérsékleten 604,6 μΐ (7,81 mmol, 1,8 ekv.) metánszulfonil-kloridot és 3,93 ml (28,21 mmol, 6,5 ekv.) TEA-t adtunk keverés közben, nedvesség elleni védelemmel. 30 perc múlva a hűtőfürdőt eltávolítottuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át kevertük, utána az oldószert lepároltuk, és a maradékhoz a TEA-só eltávolítása végett etil-acetátot adtunk. A terméket izopropanolból háromszor átkristályosítottuk, így a várt terméket 20,27 g (90%) hozammal kaptuk.
NMR (DMSO-cZ6, 360 MHz) δ 1.27 (d, CH3CHOSO2CH3, 3H); 3.162 (s, CH3O2SOCH, 3H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.07 (t, PEGCH2, 2H); 4.64 (q, CH3CHOH, 1H); 7.43 (t, mPEG-OCONH).
10,27 g (1,98 mmol) mPEG(5K)-uretán-2-metilmetán-szulfont azeotróposan szárítottunk 20 ml-es toluol-részletekkel. A maradékhoz 60 ml vízmentes toluolban 0 °C hőmérsékleten (jeges vízzel végzett hűtés közben) 377 mg (9,4 mmol, 4,75 ekv.) nátriumhidridet adtunk 60 ml vízmentes toluolban. 5 perc múlva az oldathoz 3,92 g (14,6 mmol, 7,15 ekv.) trifenil-metántiolt adtunk. Tíz perc múlva 10,27 g (1,98 mmol) mPEG-uretán-2-metil-metánszulfont adtunk a reakcióelegyhez. Az oldat sárga színre változott. 45 perc elmúltával a VRK elemzés (kifejlesztószerként kloroform, etanol és víz 90:18:2 arányú elegyének a használatával) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement. A reakcióelegyhez a nátrium-hidrid feleslegének közömbösítése céljából 444,57 μΐ (7,42 mmol, 3,75 ekv.) ecetsavat adtunk, ekkor az oldat megsűrűsödött és kifehéredett. Az oldószert ledesztilláltuk, és a szilárd maradékot 30 ml etil-acetát és 70 ml izopropanol keverékéből átkristályosítottuk. A termékkeverék nem oldódott fel teljesen, ezért a csapadékot szűrtük. Ezt követően a termékelegyet 100 ml izopropanol és 20 ml terc-butanol elegyéből átkristályosítottuk. így 8,87 g (84%) hozammal jutottunk a várt vegyülethez.
iH NMR (DMSO-dő, 360 MHz) δ .74 (d, CH3CHSC(C6H5)3, 3H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.0 (t, PEG-CH2, 2H); 4.64 (q, CH3CHOH, 1H); 7.49 (t, mPEG-OCONH); 7.20-7.41 (m, SC(C6H5)3, 15H).
8,87 g (1,65 mmol) mPEG(5K)-uretán-2-metil-trifenilmetántiolt oldottunk 0 °C hőmérsékleten 10 ml TEA és 10 ml diklórmetán elegyében. Ehhez az oldathoz erélyes keverés közben 185,5 μΐ (1,99 mmol, 1,2 ekv.) metoxikarbonil-szulfenil-kloridot adtunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 15 percig kevertük. A VRK-vizsgálat (kloroform és metanol 90:10 arányú kifejlesztő szerrel) azt mutatta, hogy a reakció befejeződött. Az oldószereket lepároltuk, és a termékkeveréket 80 ml izopropanol és 20 ml terc-butanol elegyéből kétszer átkristályosítottuk. A termékhez 5 ml terc-butanolt adtunk, majd liofilizáltuk, és vákuumban P2O5 felett szárítottuk. így 8,32 g (97%) hozammal fehér, pelyhes szilárd terméket kaptunk.
1H NMR (DMSO-cU, 360 MHz) δ 1.17 (d, CH3CHSSCOOCH3, 3H); 3.42 (s, PEG, 180H); 3.84 (s, CH3OCOSSCH, 3H); 4.05 (t, mPEG-CH2, 2H); 7.38 (t, mPEG-OCONH, 1H).
8,32 g (1,6 mmol) mPEG(5K)-uretán-etil(metil)ditiokarbonilmetoxidot 20 ml száraz metanol és 2,5 ml kloroform keverékében oldottunk. A PEG-oldathoz 592 mg (4 mmol, 2,5 ekv.) merkaptobenzil-alkohol és 2 ml száraz metanol oldatát adtuk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 18 órán át kevertük. Az oldószert bepároltuk, a termékkeveréket háromszor átkristályosítottuk etil-acetát és izopropanol 30:100 arányú elegyével. Az NMR vizsgálat azt mutatta, hogy 16% termék képződött.
Ennek alapján egy másik adag 322 mg (2,18 mmol, 1,8 ekv.) merkaptobenzil-alkohol és 2 ml metanol oldatát 24 ml metanol és 1 ml kloroform keverékében oldott termékkeverékhez csepegtettük 0 °C hőmérsékleten (jeges vízzel végzett hűtés közben). A hozzáadás (10 perc időtartammal) után a fürdőt eltávolítottuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 24 órán át kevertük. A VRKelemzés szerint (kloroform, metanol és víz 90:18:2 arányú elegyével, mint kifejlesztőszerrel) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement. Az oldószert lepároltuk, majd a termékkeveréket 30 ml etil-acetát és 100 ml izopropanol elegyéből átkristályosítottuk. így a kívánt terméket 7,25 g (94%) hozammal kaptuk. XH NMR (DMSO-cZő, 360 MHz) δ 1.56 (d,
C/73CHSSC6HsCH2OH, 3H); 3.29 (C/íjO-PEG, 3H); 3.50 (s, PEG, 450H); 4.03 (t, mPEG-CZ72, 2H); 4.46 (d, HOC7y2C6H5, 2H); 5.16 (t, #OCH2C6H5, 1H);
7.30 (d, C6H5, 2H); 7.40 (br t, mPEG-OCONTY, 1H); 7.50 (d, C6H5, 2H). .
6,75 g (1,27 mmol) mPEG(5K)-uretán-etil(metil)-ditiobenzilalkoholt 30 ml kloroformban oldottunk, és 0 °C hőmérsékleten (jeges vízzel végzett hűtés közben) 513 mg (2,54 mmol, 2 ekv.) pnitrofenil-klórformiátot adtunk hozzá. Öt perc múlva 531 pl (3,81 mmol, 3 ekv.) TEA-t adtunk hozzá. 30 perc múlva a jégfürdőt eltávolítottuk, és a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten kevertük. Az oldószer lepárlása után a termékkeveréket etilacetátban oldottuk. A TEA-sót szűrtük, és a szürletből az oldószert lepároltuk. Utána a termékkeveréket etil-acetát és izopropanol keverékéből átkristályosítottuk (háromszor kristályosítottuk 30 ml etil-acetát és 100 ml izopropanol keverékéből).
így a várt terméket 6,55 g (94%) hozammal kaptuk.’ll NMR (DMSOA 360 MHz) δ 1.17 (d, Ctt3CHSSC6H5, 3H); 3.24 (C^O-PEG, 3H); 3.40 (s, PEG, 180H); 4.03 (br t, mPEG-C#2, 2H); 5.28 (S, C6H5C/72OCO, 2H); 7.45-8.35 (m, C6H5\, 8H)
766 mg (0,14 mmol, 1,29 ekv.) mPEG-MeDTB-nitrofenilkarbonátot 5 ml kloroformban oldottunk, ehhez az oldathoz 70 mg (0,093 mól) DSPE-t és 58,5 μΐ (0,42 mmol, 4,5 ekv.) TEA-t adtunk, és az elegyet 50 °C hőmérsékleten kevertük (a hőmérséklet az olajfürdőre vonatkozik). 20 perc múlva a VRK-elemzés azt mutatta, hogy a reakció még nem teljes. További mPEG-MeDTB-nitrofenilkarbonátot (összesen 1239 mg, 0,23 mmol, 2,47 ekv. mennyiségben) és 25 mg 1-hidroxibenzotriazolt (HOBt-t) (25 mg, 0,19 mmol, 2 ekv.) adtunk hozzá. 20 perc múlva a VRK-vizsgálat (kifejlesztőszerként kloroform, metanol és víz 90:18:2 arányú elegyével; detektálás molibdénnel és ninhidrinnel) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement. Az oldószer lepárlása után kapott termékkeveréket 42 °C-ra melegített etil-acetátban oldottuk (így homályos oldatot kaptunk, a TEA-só kicsapódott). Az oldatot szűrtük, az oldószert lepároltuk, és a termékkeverékhez metanolt és 2 g C8 szilikagélt adtunk. Az oldószert ismét lepároltuk, a C8 tartalmú terméket egy oszlop tetejére vittük, majd metanokvíz gradienssel (nyomás alatt) eluáltuk. A gradiensek a következők voltak: metanokvíz 30:70, 100 ml; metanokvíz 50:50, 100 ml; metanokvíz 70:30, 250 ml (itt eluáltuk a kiinduló anyagot); metanokvíz 75:25, 40 ml; metanokvíz 80:20, 200 ml (a termék eluálása); metanol = 100 ml; kloroform:metanokvíz = 90:18:2, 100 ml; kloroform:metanokvíz = 75:36:6, 100 ml. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük, és bepárlás után a terméket színtelen, sűrű folyadék alakjában nyertük. Ehhez 5 ml tercbutanolt adtunk, lioíilizáltuk, majd vákuumban P2O5 fölött szárítottuk, és így a terméket fehér, pelyhes, szilárd anyag formájában kaptuk 467 mg (83%) hozammal.
Ή NMR (DMSO-dö, 360 MHz) δ 0.83 (d, 2(CH3),
3H); 1.16 (d, CH3CHSSC6H5, 3H); 1.21 (s, 28(CH2, 56H); 1.47 (br m, CH2CH2CO, 4H); 2.23 (2 x t, CH2CZf2CO, 4H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.04 (br t, mPEG-C#2, 2H); 4.05 (trans d, PO4CH2CHCZZ2, 1H); 4.24 (cis d, PO4CH2CHC/72, 1H); 4.97 (s, C6H5CA2OCO-DSPE, 2H); 5.03 (br s, (PO4CH2C/f, 1H); 7.32 (d, C6tt5, 2H); 7.53 (d, C6H5, 2H); 7.52 (br s, mPEG-OCONH, 1H).
A MALDI-TOFMS módszerrel egy harangalakú ioneloszlást kaptunk, amelynek távközei 44 Da intervallumokra helyezkedtek el egymástól, megfelelve az etilén-oxid ismétlődő egységeinek. A konjugátum és az mPEG-tiol (legnagyobbrészt hasított diszulfid) átlagos molekulatömege 6376, illetve 5368 Da (az elméleti molekulatömeg 6053, illetve 5305 Dalton).
B. mPEG-etilDTB-DSPE szintézise g (0,90 mmol) mPEG-uretán-etil(etil)ditiokarbonil-metoxidot 8 ml száraz metanolban oldottunk. Kezdetben az oldat homályos volt, 5 perc alatt azonban feltisztult. A PEG-oldathoz 265,2 mg (1,79 mmol, 2 ekv.) merkaptobenzil-alkoholt adtunk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 órán át kevertük, majd 70 ml étert adtunk hozzá a terméknek a kicsapására a reakcióelegyből, és az elegyet másnapig 4 °C hőmérsékleten tartottuk. A fehér, szilárd csapadékot szűrtük, és 30 ml etil-acetát és 70 ml éter keverékéből átkristályosítottuk. így a kívánt terméket 1,96 g (94%) hozammal kaptuk. NMR (DMSO-6?6, 360 MHz) 50.86 (d, C//3CH2CHSSC6H5CH2OH, 3H); 1.42 (p, CH3CZ72CHSSC6H5CH2OH, 1H); 1.64 (p, CH3C#2CHSSC6H5CH2OH, 1H); 3.51 (s, PEG, 180H); 4.03 (t, mPEG-CZZ2, 2H); 4.47 (d, HOCtt2C6H5, 2H); 5.20 (t, HOCH2C6H5, 1H); 7.31(d, C6775, 2H); 7.42 (br t, mPEG-OCONZf, 1H); 7.49 (d, C6775, 2H). .
mg (0,269 mmol) N-hidroxi-s-norbornén-2,3dikarboxilsav-imidet (röviden: HONB) adtunk 55 mg (0,073 mmol) DSPE és 3 ml kloroform oldatához 50 °C hőmérsékleten (az olajfürdő hőmérséklete). 3-4 perc múlva tiszta oldatot kaptunk, ekkor 334 mg (0,134 mmol) mPEG-EtDTB-nitrofenil-klórformiátot, utána 45 μΐ (0,329 mmol) TEA-t tettünk hozzá. 20 perc múlva a VRK-elemzés (eluálószerként kloroform, metanol és víz 90:18:2 arányú elegyét alkalmazva) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement (detektálásra molibdénes és ninhidrines permetet alkalmaztunk). Az oldószert lepároltuk, és a maradék terméket metanolban oldottuk, C8 szilikagéllel (1 g mennyiséggel) elegyítettük, majd forgóbepárló készülékben az oldószert lepároltuk. A szilárd maradékot egy C8 oszlop tetejére öntöttük, és az eluálást metanol: H2O gradienssel (nyomáson) végeztük: metanol:H2O = 30:70, (60 ml); metanol:H2O = 50:50, (60 ml); metanol:H2O = 70:30, (140 ml); metanol:H2O - 75:25, (140 ml) (a kiinduló anyag eluálása); metanol:H2O = 80:20, (80 ml); metanol:H2O = 90:10, (140 ml) (a termék eluálása); metanol = 40 ml; CHCI3 : MeOH : H2O = 90:18:10 (40 ml). A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük, és bepároltuk. így színtelen, sűrű folyadékterméket kaptunk. Ehhez 5 ml terc-butanolt adtunk, liofilizáltuk, utána vákuumban P2Os fölött
Λ Λ f · · « ··« · · · · • * · · · ·ί. ··.·szárítottuk, s így egy fehér, pelyhes, szilárd termékhez jutottunk 175 mg (78%) hozammal. Ή NMR (DMSO-de, 360 MHz) 5 0.85 (d, 2(CH3), 6H; d, CH3CHSSC6H5, 3H); 1.22 (s, 28(CH2), 56H); 1.49 (br m, C//2CH2CO, 4H); 2.24 (2 x t, CH2C#2CO, 4H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.04 (br t, mPEG-CH2, 2H); 4.08 (trans d, PO4CH2CHC#2, 1H); 4.27 (cis d, PO4CH2CHC772, 1H); 4.98 (s, C6H5Ctt2OCO-DSPE, 2H); 5.06 (br s, (PO4CH2Ctt, 1H); 7.34 (d, C6H5, 2H); 7.53 (d, C6H5, 2H); 7.55 (br s, mPEG-OCONtt, 1H).
mPEG-DTB-nitrofenil-klórformiát szintézise
A. l-(Merkaptometil)etil-ammónium-klorid előállítása.
1. 2 -Amino-2-metiletil-hidrogén-szulfát
22,53 g (0,3 mól) l-amino-2-propanolhoz jégfürdős hűtés és erélyes keverés közben nagyon lassan, 1 óra alatt 16,10 ml (0,3 mól) kénsavat adagoltunk. A lombikban sűrű gőzök keletkeztek, és a folyadék igen viszkózussá alakult. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet vákuumban 170 és 180 °C közötti hőmérsékleten melegítettük. A melegítés befejezése után a reakció enyhén barna színűvé változott. Az összes víztartalom eltávozása után (azaz megközelítőleg 1 óra múlva) az elegyet szobahőmérsékletre hagytuk lehűlni. Húlés közben barna, üvegszerű szilárd termék képződött, amely metanollal átdolgozva megkristályosodott. E terméket 60 °C hőmérsékleten 50 ml vízben oldottuk, utána az elegyhez addig adtunk metanolt, míg az oldat metanoltartalma 80%-ot ért el. Hűtéskor kristályok váltak ki, ezeket szűrtük, P2O5 fölött szárítottuk, s így 17,17 g (37%) hozamot értünk el, op.: 248250 °C (írod, op.: 250 °C). Ή NMR (DÖ-DMSO): 5 1.16 (d, CH3, 3H); δ 2.78 (dd, NH3-C7/2, 1H); δ 2.97 (dd, NH3-CZZ2, 1H); δ 4.41 (m, CH-OSO3, 1H); δ 7.69 (s, /73N, 3H). Melting point: 248°-250°C (lit: 250°C)
2. 5-Metiltiazolidin-2-tion
Egy 250 ml-es gömblombikban 40 ml 50%-os vizes etanolban keverés közben 23,03 g (148 mmol) 2-amino-l-metiletil-hidrogénszulfátot és 10,71 ml (178 mmol, 1,2 ekv.) szén-diszulfidot kevertünk, és ehhez az elegyhez 13,06 g (327 mmol, 2,2 ekv.) nátrium-hidroxid és 50 ml 50%-os vizes etanol oldatát csepegtettük igen lassú ütemben. A nátrium-hidroxid hozzáadása után az összes kiinduló anyagok oldódtak, és az oldat narancsszínűvé változott. E reakcióelegyet 85 °C hőmérsékleten 40 percig visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ez alatt az oldat csillogó sárga színre váltott, és sűrű csapadék képződött. Az etanolt lepároltuk, és a maradékot (vizes oldatot) megmelegítettük, s utána Büchner-tölcséren szűrtük a vízben oldhatatlan szennyezések eltávolítása céljából. A kristályos maradékot meleg etanolban, majd meleg vízben oldottuk, a meleg vizet addig adagoltuk hozzá, ómig az oldatban a víztartalma az oldat 80%-át elérte. Ekkor az elegyet lehűlni hagytuk, majd hűtőszekrényben hűtöttük. A kívánt terméket 14,64 g (75%) hozammal hosszú, túalakú kristályok formájában kaptuk; op.: 92,5-93,5 °C (írod, op.: 94-95 °C).
XH NMR (Dő-DMSO):
δ 1.33 (d, CH3, 3H); δ 3.50 (m, R3CH, 1H); δ 3.95 (dd, N-C7/2, 1H); δ 4.05 (m, NCH3, 1H); δ 10.05 (s, NH, 1H).
3. példa
- (Merkaptom etil) etil- ammonium-klorid
6,5 g (49 mmol) 5-metiltiazolidin-2-tionhoz egy 250 ml-es gömblombikban 40 ml 18%-os vizes sósavoldatot adtunk, majd a lombikot olajfürdőben melegítettük, és egy hétig 120 °C hőmérsékleten visszafolyató hűtő alatt forraltuk. E hét folyom ón három alkalommal egy-egy ml tömény sósavat adtunk hozzá. A reakció haladását VRK-elemzéssel monitoroztuk, eluáló szerként etil-acetátot használtunk. A foltokat UV, ninhidrin és jódgőzök segítségével tettük láthatóvá. Az egy hetes reakcióidő túlnyomó részében az elegy heterogén volt, és a kiinduló anyag olajformában maradt, amelynek sűrűsége nagyobb volt a víznél. Egy hét elmúltával az olájszerű kiinduló anyag eltűnt, jóllehet a VRK-on még látható volt. A reakcióelegyet a hőforrástól eltávolítottuk, és szobahőmérsékletre hagytuk lehűlni, majd hűtöttük a kiinduló anyag kikristályosodása céljából. A kristályos kiinduló anyagot szűrtük, a szürletet bepároltuk, és P2O5 és NaOH fölött szárítva összes víz és sósavtartalmát eltávolítottuk. A nyers terméket kétszer 50 ml dietil-éterrel mosva valamennyi kiinduló anyagot eltávolítottuk. A kívánt terméket P2O5 fölött ismét szárítottuk, s így a kívánt terméket 2,83 g (45%) hozammal nyertük, op.: 80-82 °C (írod, op.: 92-94 °C). Ή NMR (D6DMSO): δ 1.33 (d, CH3, 3H); δ 2.92 (m, N-Ctt2, 2H); δ 3.12 (m, SH, 1H); δ 3.18 (m, R3-CA, 1H); δ 8.23 (bs, NA3, 3H).
A reakció vázlatát az 5. ábrában szemléltetjük. B. mPEG-etilDTB-nitrofenil-klórformiát szintézise 1. 2-Amino- 1-etiletil-hidrogén-szulfát
100 ml-es gömblombikban jéghűtés és keverés közben 15 ml (158 mmol) l-amino-2-butanolhoz nagyon lassú ütemben 8,43 ml (158 mmol) kénsavat adagoltunk 1 óra alatt. A lombikban sűrű füst és igen viszkózus oldat képződött. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet vákuumban (mintegy 100-150 Hgmm vákuumban) 170-180 °C hőmérsékleten melegítettük, miközben a reakcióelegy barnaszínúvé vált. A teljes víztartalom eltávolítása .:. J. <· után (ami körülbelül 1 órán át tartott) szobahőmérsékletre hagytuk lehűlni. Hűtés hatására barna, üvegszerű szilárd termék képződött, amelyet feloldottunk 50 ml forró vízben, majd másnapig hűtőszekrényben tartottuk. Hűtés hatására kristályos anyag képződött, amelyet szűrtünk és P2O5 fölött szárítottuk. így a terméket 9,98 g (37%) hozammal nyertük. Ή NMR (D6-DMSO): δ 0.87 (t,C#3, 3H); δ 1.51 (q, CH3-C#2, 2H); δ 2.82 (dd, NH3-CW2, 1H); δ 3.00 (dd, NH3-C/72, 1H); δ 4.21 (m, Cíf-OSO3, 1H); δ 7.70 (s, 273N, 3H).
2. 5-Etiltiazolidin-2-tion
9,98 g (59 mmol) 2-amino-l-etiletil-hidrogén-szulfát, 4,26 ml (71 mmol. 1,2 ekv.) szén-diszulfld és 15 ml 50%-os vizes etanol elegyet egy 100 ml-es gömblombikban kevertük, és az elegyhez igen lassú ütemben 5,20 g (130 mmol, 2,2 ekv.) nátrium-hidroxid és 20 ml 50%-os vizes etanol elegyet csepegtettük. A nátriumhidroxid hozzáadása után az összes kiindulóanyag oldódott, és az oldat sárga szint öltött. A reakcióelegyet 40 percig 85 C hőmérsékleten visszafolyató hűtő alatt forraltuk, ezt követően az oldat fényes sárga színűvé változott, és sűrű csapadék vált ki. Az etanolt lepároltuk, és a visszamaradó vizes oldatot megmelegítettük, és Büchner-tölcséren szűrve a vízben oldhatatlan szennyezéseket eltávolítottak. A visszamaradó knstálytömeget meleg etanolban oldottuk, és meleg vizet adagoltunk hozzá mindaddig, amíg az oldat víztartalma a 80%-ot el nem érte. Ezt követően az elegyet lehűlni hagytak, majd hűtőszekrényben tartottuk, így tűszerű kristályokat kaptunk. A kívánt terméket 7,28 g (86%) hozammal nyertük, op.: 76-78 °C (írod, op.: 76,6-76,9 °C).
a
Ή NMR (D6-DMSO): δ 0.88 (t, CH3, 3H); δ 1.66 (in, CH3-C#2, 2H); δ 3.58 (m, R3CH, 1H); δ 3.93 (m, N-CH,, 2H); δ 10.06 (s, Ntt, 1H).
3. l-(Merkaptoetil)etil-ammónium-klorid
7,24 g (50 mmol) 5-etiltiazolidin-2-tionhoz 250 ml-es gömblombikban 45 ml 18%-os vizes sósavat adtunk, és a lombikot olajfürdőben melegítettük. Hevítés közben a kiinduló anyag megolvadt, és egy teljesen heterogén keveréket eredményezett. A reakcióelegyet 1 hétig 120 °C hőmérsékleten visszafolyató hűtő alatt forraltuk. A hét folyamán négy alkalommal 1-1 ml tömény sósavat adtunk az elegyhez. A reakció előrehaladását VRKelemzéssel monitoroztuk, kifejlesztő szerként (eluálószerként) etilacetátot alkalmaztunk. A foltokat UV, ninhidrin és jódgőzök segítségével tettük láthatóvá. A hét folyamán a reakcióelegy heterogén, a kiindulóanyag víznél sűrűbb, olaj szerű termék volt. A reakció alatt a melegítést megszüntettük, az elegyet szobahőmérsékletre engedtük lehűlni, majd hűtéssel kikristályosítottuk a kiinduló anyagot, amelyet szűrtünk, és a szűrletet bepároltuk, foszforpentoxid és nátrium-hidroxid felett szárítottuk, az összes víztartalom és sósavtartalom eltávolítása céljából. A nyers terméket kétszer mostuk 50 ml dietil-éterrel, s így a kiinduló anyagot teljesen eltávolítóttuk. A maradék terméket P2O5 fölött ismét megszárítottuk, s így 3,66 g (52%) hozammal kaptuk a kívánt terméket.
A reakció vázlatát az 5. ábrában szemléltetjük.
4. példa mPEG-DTB-lipid szintézise
500 mg (0,8 mmol) 1,2-disztearoil-sn-glicerint benzollal együtt végzett háromszoros azeotrópos desztillációval szárítottunk. Az 5 ml kloroformban oldott 1,2-disztearoilglicerinhez 242 mg (1,2 mmol, 1,5 ekv.) p-nitrofenil-klórformiátot, 10 mg (0,08 mmol, 0,1 ekv.) dim etil-aminopiridint (DMAP) ÉS 334,5 μΐ (2,4 mmol, 3 ekv.) TEA-t adtunk. A reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten kevertük, ebben az időpontban a VRK-elemzés (kifejlesztőszerként toluol és etil-acetát 7:3 arányú elegyének az alkalmazásával) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement. Az elegyet 10%-os citrom savoldattal extrahálva eltávolítottuk a DMAP-t, utána négyszer 3 ml acetonitrillel mostuk a feleslegben vett p-nitrofenilklórformiát eltávolítására, majd vákuumban foszfor-pentoxid fölött szárítottuk a tiszta terméket. így 557 mg (88%) hozammal kaptuk a kívánt terméket. Ή NMR (CHCI3, 360 MHz) δ 0.88 (t, end CH3, 6H); 1.25 (s, 28xCH2, 56H); 1.58 (m, Ctt2CH2CO, 4H); 2.34 (2xt, C/Z2CO, 4H); 4.22 (trans d, Ctt2OCOCI7H35, 1H); 4.35 (m, OCOOCZ^CH, 2H); 4.51 (cis d, C//2OCOC17H35, 1H); 5.37 (m, OCOOCH2C/7, 1H); 7.39 (d, C6V5, 2H); 8.28 (d, C6ZZ5, 2H).
μΐ (0,63 mmol, ötszörös felesleg) etiléndiamint és 200 μΐ piridint 1 ml kloroformban oldottunk, és ehhez az oldathoz 100 mg (0,13 mmol) 2-disztearoil-sn-p-nitrofenil-karbonátot adtunk 1 ml kloroformban oldva cseppenként egy Pasteur-pipetta segítségével 0 °C hőmérsékleten (jégvízhútés közben), éjszakán át folyamatosan (16 órán át). A VRK-elemzés (kifejlesztőszerként kloroform metanol-víz 90:18:2 arányú elegyét, majd kloroform és metanol 90:10 arányú elegyét alkalmazva) azt mutatta, hogy á reakció teljesen végbement. Az oldószert a piridin eltávolítása céljából lepároltuk, majd a terméket kloroformban oldottuk, és egy oszlopra
töltöttük (Aldrich, szilikagél 60° A, 200-400 mesh finomságú), és kloroform: aceton, majd kloroform és metanol gradienssel a következőképpen: kloroform:aceton = 90:10 (60 ml) (a felső folt ekiálása); kloroform:metanol = 90:10 (60 ml) (a termék eluálása). A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük, és bepároltuk. A maradékhoz terc-butanolt adtunk, és vákuumban foszforpentoxid felett szárítottuk, így 64 mg (75%) hozamot értünk el. Ή NMR (DMSO-d5, 360 MHz) δ .83 (t, end CH3, 6H); 1.22 (s, 28xCH2, 56H); 1.51 (m, CH2CH2CO, 4H); 2.25 (2xt, CW2C0, 4H); 2.83 (m, H2NC#2CH2NH, 2H); 3.21 (m, H2NCH2C7/2NH, 2H); 4.10-4.14 (m & cis d, COOC#2CHC772, 4H); 5.17 (m, OCOOC/72CH, 1H); 7.78 (m, H2NCH2CH2NH, 2H).
400 mg (0,162 mmol, 2,2 ekv.) mPEG-MeDTB-nitrofenilklórformiátot 2 ml kloroformban oldottunk, és ehhez az oldathoz 51 mg (0,075 mmol) 1,2-sztearoil-sn-etilén-amint és 37 pl (0,264 mmol, 3,52 ekv.) TEA-t adtunk, utána a reakcióelegyet 20 percig 45 °C hőmérsékleten kevertük. Ebben az időpontban a VRKelemzés (kifejlesztőszerként kloroform-metanol-víz 90:18:2 arányú elegyét, majd kloroform és metanol 90:10 arányú elegyét alkalmazva) azt mutatta, hogy a reakció teljesen végbement. Az oldószert lepároltuk, a lepárlási maradékot metanolban oldottuk, 2 g C8 szilikagélt adtunk hozzá, majd az oldószert lepároltuk. A C8 szilikagélt tartalmazó termékkeveréket egy C8 oszlop tetejére vittük (Supelco, Cupel clean, Lot no. SP0824), és metanoLvíz gradienssel (nyomás alatt) eluáltuk: metanoLvíz = 60:40 (40 ml); metanoLvíz = 70:30 (80 ml) (a kiinduló anyag eluálása); metanoLvíz = 80:20 (40 ml); metanoLvíz = 90:10 (20 ml); kloroform:metanol:víz = 5:80:15 (20 ml); kloroform:metanol:víz = 90:18:10 (40 ml) (a termék eluálása). A tiszta terméket tartalmazó frakciókat egye sítettük, és bepároltuk, így sűrű, színtelen folyadékot kaptunk, amelyhez 5 ml terc-butanolt adtunk, és az oldatot liofilizáltuk, majd vákuumban P2O5 felett szárítottuk. így a várt terméket fehér, szilárd alakban 200 mg (89%) hozammal nyertük. Ή NMR (DMSO-cZe, 360 MHz) δ .83 (t, end CH3, 6H); 1.22 (s, 28xCH2, 56H); 1.48 (m, Ctt2CH2C0, 4H); 2.25 (2 x t, Ctt2CO, 4H); 3.10 (m, HNCH2CH2NH, 4H); 3.50 (s, PEG, 180H); 4.04 (t, mPEGCH2, 2H); 4.09 (trans d; COOCH2CHCW2, 1H); 4.25 (cis d, COOCH2CHCff2, 1H); 4.98 (s, C6H5CH2OCO, 2H); 5.23 (m, COOCH2C#CH2, 1H); 7.18 (m, N7/CH2CH2N/7, 2H); 7.33 (d, C6H5, 2H); 7.38 (m, mPEG-OCOW, 1H); 7.52 (d, C6H5, 2H).
A reakcióvázlatot a 6A. ábrában szemléltetjük.
5. példa mPEG-DTB-DSPE vegyület hasítása in vitro körülmények között
Pufferolt vizes oldathoz (pH-étéke 7,2) 150 μΜ cisztein jelenlétében, illetve hiányában orto-mPEG-DTB-DSPE-t és paramPEG-DTB-DSPE-t adtunk (amelyet az 1. példában leírt módon állítottunk elő). A konjugátumok megszűnését HPLC alkalmazásával figyeltük (monitoroztuk) (Phenomenex CB Prodigy, az oszlop mérete 4,6 x 50 mm, detektálás 277 nm-nél, mozgó fázis metanol és víz 95:5 arányú elegye 0,1% trifluorecetsavval 1 ml/perc sebességgel). Az eredményeket a 7A. ábrában szemléltetjük, ahol az orto-konjugátumot az üres körök és a parakonjugátumot üres négyzetek jelzik.
6. példa
Liposzómákban lévő orto- és para-mPEG-DTB-DSPE vegyület hasítása in vitro körülmények között
A. Liposzóma előállítása ,í'.. .:. J.
A. Liposzóma előállítása
A parciálisán hidrogénezett foszfatidil-kolin (PHPC), koleszterin és orto- vagy para-mPEG-DTB-DSPE (előállításuk az 1. példában adott leírás szerint, mPEG molekulatömege 1980 Dalton) lipideket 95:5:3 mólarányban, megfelelő szerves oldószerben, általában kloroform és metanol 1:1 arányú vagy 1:3 arányú elegyében oldottuk. Az oldószert forgóbepárló készülékben eltávolítva száraz lipidfilmet alakítottunk ki. A filmet hidratáltuk vizes pufferoldattal; így liposzómákat alakítottunk ki, amelyeket extruzió útján 120 nm átlagos átmérőre méreteztünk.
B. Jellemzés in vitro körülmények között
A liposzómákat 7,2 pH-értékú, foszfáttal pufferolt konyhasóoldatban inkubáltuk, amely 5 mM EDTA-t tartalmazott; az inkubálást 37 °C hőmérsékleten 150 μΜ cisztein jelenlétében végeztük. A konjugátumok eltűnését HPLC-vel monitoroztuk (Phenomenex Cs Prodigy, 4,6 x 50 mm méretű oszlop, detektálás 277 nm-nél, mozgó fázis metanol és víz 95:5 arányú elegye 0,1% trifluorecetsavval, 1 ml/perc sebességgel). Az eredményeket a 7B. ábra mutatja, ahol az orto-konjugátumot tartalmazó liposzómákat a sötét körök, a para-konjugátumot tartalmazó liposzómákat a sötét négyzetek jelzik. Az üres körök és üres négyzetek megfelelnek a micelláris formában lévő orto-mPEG-DTB-DSPE-nek, illetve para-mPEG-DTB-DSPE-nek (ennek kifejezését lásd fentebb az 5. példában, 7A. ábra).
7. példa
Liposzómákban lévő orto- és para-mPEG-DTB-DSPE vegyület hasítása in vitro körülmények között ! · ·· J ‘-’
A. Liposzóma előállítása
A dioleoil-foszfatidil-etanolamin (DOPE), és az orto- vagy para-mPEG-DTB-DSPE (előállítása az 1. példában leírták szerint, a mPEG átlagos molekulatömege 1980 Dalton) Hpideket 97:3 mólarányban kloroform és metanol 1:1 arányú elegyében oldottuk. Az oldószert forgóbepárló berendezésben eltávolítva szárított lipidfilmet alakítottunk ki. Ezt a lipidfilmet olyan vizes oldattal hidratáltuk, amely 30 mM fluorofor p-xilol-bisz(piridiniumbromid)-ot és ugyanannyi trinátrium-8-hidroxipiréntriszulfonátot tartalmazott vizes pufferoldatban, s így olyan liposzómákat kaptunk, amelyeket extruzió útján 100 ml átlagos átmérőre méreteztünk.
B. Jellemzés in vitro körülmények között
A liposzómákat 7,2 pH-értékú HEPES pufferoldatban 37 °C hőmérsékleten 15 μΜ, 150 μΜ, 300 μΜ, illetve 1,5 mM ciszteinkoncentrációk jelenlétében inkubáltuk. A felszabadult festékanyag százalékos értékét a minta fluoreszcenciájának növekvéseként határoztuk meg (Xm = 512 nm, λ6Χ = 413 nm) pH-tól független izoszbesztikus pont) az előinkubálási minta értéke felett (zérus kibocsátás) normalizálva annak a fluoreszcenciának a növekvésére, amelyet az előinkubálási minta lizise után kaptunk 0,2% Triton X-100 felhasználásával (100%-os kibocsátás) (D. Kirpotin és munkatársai: FEBS Letters, 388, 115-118 (1996). A 8A. ábra szemlélteti az eredményeket különböző ciszteinkoncentrációk esetén, orto-vegyületet tartalmazó liposzómák vizsgálatában; a 8B. ábra mutatja ugyanezt a megfelelő para-vegyület alkalmazása során.
.i., .:. J.·-·
8. példa mPEG-DTB-DSPE vegyületet tartalmazó liposzómák jellemzése in vivo körülmények között
A. Liposzóma előállítása
A parciálisán hidrogénezett foszfatidil-kolin (PHPC), koleszterin és para-mPEG-DTB-DSPE lipideket (előállításuk az 1. példában leírtak szerint, a mPEG átlagos molekulatömege 1980 Dalton) 55:40:5 mólszázalék arányban szerves oldószerben oldottuk. Az oldószert forgóbepárló berendezésben eltávolítva szárított lipidfilmet kaptunk. Ezt a lipidfilmet olyan vizes pufferoldattal hidratáltuk, amely dietilén-triamin-pentaecetsavat (DTPA) tartalmazott, s így liposzómákat alakítottunk ki. Ezt követően a liposzómákat átlagosan 120 nm átlagos átmérőre csökkentettük, a befogott DTPA-t eltávolítottuk, és a külső közeghez Inin-t adtunk. A liposzómákat megfelelő időn át inkubáltuk, hogy az In111 képes legyen áthaladni a lipid kettősrétegen, és kelátot kialakítani a DTPA-val.
B. Adagolás in vivo körülmények között
Az egereket két vizsgálati csoportra osztottuk. A fentebb leírt liposzómakészítményt fecskendeztük az összes vizsgálati állatba. A vizsgálati állatok egyik csoportja továbbá a liposzóma befecskendezése után 1, 3, illetve 5 órával 200 μΐ injekcióban 200 mM ciszteint is kapott. A másik vizsgálati csoport ugyanezen időpontokban konyhasóoldat-injekciót kapott. A vérben a liposzómatartalmat a vérminták In111 monitorozásával határoztuk meg. A kapott eredményeket a 10. ábrában mutatjuk be.
X. ·:· ·». -*
Jóllehet a találmányt konkrét megvalósítási formákra vonatkozóan írtuk le, a szakterületen jártas egyének számára nyilvánvaló, hogy azokon különböző változtatások és módosítások tehetők a találmány oltalmi körének (kereteinek) a túllépése nélkül.

Claims (41)

  1. * *♦**···♦
    59 4.. .:· 4. ·Szabadalmi igénypontok
    1. Az (I) általános képletű vegyületek, ahol
    R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzilegységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
    R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletű csoport;
    R4 jelentése amint tartalmazó ligandum; és
    R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben van.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, ahol R5 jelentése hidrogénatom, és R2 jelentése metil-, etil- vagy C3H8 képletű csoport.
  3. 3. Az 1. igénypont vagy 2. igénypont szerinti vegyületek, ahol az amint tartalmazó R4 ligandum polipeptid, amint tartalmazó gyógyszerhatóanyag vagy amint tartalmazó lipidvegyület.
  4. 4. Az 1. igénypont vagy 2. igénypont szerinti vegyületek, ahol az amint tartalmazó R4 ligandum amint tartalmazó lipidvegyület, amely egyszeres szénhidrogénláncot vagy kettős szén-hidrogénláncot tartalmaz.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti vegyületek, a h ο 1 az amint tartalmazó lipidvegyület kettős szénhidrogénláncot tartalmazó foszfo lipid.
  6. 6. Az 1., 3., 4. vagy 5. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek, ahol R2 és R5 alkilcsoportot jelent.
  7. 7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti vegyületek, « · ·« · · · *
    60 .:. 4. ·ahol R1 jelentése polivinilpirrolidon, polivinil-metil-éter, pofim etil-oxazolin, pofié tiloxazolin, pofi(hidroxipropil) oxazolin, pofi(hidroxipropil)-metakrilamid, pofim etakrilamid, poli-(dimetilakril)amid, pofi(hidroxipropil)-metakrilát, pofi-(hidroxietil)akrilát, hidroximetilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, pofiaszpartamid, ezek kopolimerjei, valamint pofi(etilénoxid)poli(propilénoxid) lehet.
  8. 8. Az 1.-6. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek, ahol R1 jelentése polietilénglikol.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti vegyületek, ahol R5 jelentése hidrogénatom, és R2 jelentése metil- vagy etilcsoport.
  10. 10. Liposzóma, a m e 1 y az előző igénypontok bármelyike szerinti vegyületet tartalmaz.
  11. 11. Az 1., 2., 7., 8. vagy 9. igénypontok bármelyike szerinti vegyületek, a h ο 1 az amint tartalmazó R4 ligandum valamilyen polipeptid.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti vegyületek, ahol a polipeptid rekombináns polipeptid.
  13. 13. A 11. igénypont szerinti vegyületek, ahol a polipeptid valamilyen citokin.
  14. 14. A 11. igénypont szerinti vegyületek, ahol a polipeptid valamilyen interferon, interleukin, szaporodási faktor vagy enzim
  15. 15. Készítmény, amely egy (I) általános képletű vegyület reakciójával kapható konjugátumot és gyógyászati szempontból elfogadható vívőanyagot tartalmaz, a h ο 1 az (I) képletű vegyűletben
    R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
    • · · ·· 61 .*·» J.
    R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletű csoport;
    R4 jelentése kilépő csoport; és
    R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben van.
  16. 16. A 15. igénypont szerinti készítmény, ahol R2 jelentése CH3, C2H5 vagy CsHs képletű csoport.
  17. 17. A 15. igénypont szerinti készítmény, ahol R3 jelentése O(C=O)R4 képletű csoport, és R4 jelentése hidroxi- vagy oxitartalmú kilépő csoport.
  18. 18. A 15. igénypont szerinti készítmény, a h ο 1 a kilépő csoport klorid, para-nitrofenol, orto-nitrofenol, N-hidroxi-tetrahidroftálimid, N-hidroxiszukcinimid, N-hidroxiglutárimid, Nhidroxinorbornén-2,3-dikarboximid, 1-hidroxibenzotriazol, 3hidroxipiridin, 4-hidroxipiridin, 2-hidroxipiridin, l-hidroxi-6(trifluormetil)benzotriazol, imidazol, triazol, N-metilimidazol, pentafluorfenol, trifluorfenol, vagy triklórfenol vegyületből származik.
  19. 19. A 15. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a fenti vegyületet egy amint tartalmazó ligandummal reagáltatjuk, amellyel az R4 csoportot helyettesítjük, s így egy amint tartalmazó ligandumot magában foglaló konjugátumot alakítunk ki.
  20. 20. A 19. igénypont szerinti készítmény, ahol az amint tartalmazó ligandum foszfolipid.
  21. 21. A 19. igénypont szerinti készítmény, ahol az amint tartalmazó ligandum polipeptid.
    62 ./*. .:. J.
  22. 22. A 20. igénypont vagy 21. igénypont szerinti készítmény, ahol R1 jelentése polivinilpirrolidon, polivinil-metil-éter, polimetiloxazolin, polietiloxazolin, poli(hidroxipropil)oxazolin, poli(hidroxipropil)-metakrilamid, polimetakrilamid, poli-(dimetilakril)amid, poli(hidroxipropil)-metakrilát, poli-(hidroxietil)akrilát, hidroximetilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, poliaszpartamid, ezek kopolimerjei, valamint poli(etilénoxid)poli(propilénoxid) lehet.
  23. 23. A 20. igénypont vagy 21. igénypont szerinti készítmény, ahol R1 jelentése polietilénglikol.
  24. 24. A 23. igénypont szerinti készítmény, a h ο 1 R2 metilvagy etilcsoportot jelent.
  25. 25. A 20. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a konjugátumot tartalmazó készítmény egy liposzóma.
  26. 26. A 25. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a liposzóma kiegészítőleg egy bezárt (befogott) terápiás hatóanyagot is tartalmaz.
  27. 27. A 21. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a polipeptid valamilyen rekombináns polipeptid.
  28. 28. A 21. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a polipeptid valamilyen citokin.
  29. 29. A 21. igénypont szerinti készítmény, ahol a polipeptid valamilyen interferon, interleukin, szaporodási faktor vagy enzim
  30. 30. Liposzómakészítmény, amely hidrofil polimer láncokból álló felületi bevonattal rendelkező liposzómákat tartalmaz, ahol a hidrofil polimer láncok legalább egy részének szerkezetét az (I) általános képlet ábrázolja, ahol az (I) képletben
    4 4 · · ♦ * · · • * · ··
    63 .<.♦ .:. J· ’-*
    R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
    R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletü csoport;
    R4 jelentése amint tartalmazó ligandum; és
    R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    s ahol a CH2-R3 csoport orto- vagy para-helyzetben lehet;
    s ahola liposzómák hosszabb (tartósabb) vérkeringési élettartammal rendelkeznek, mint azok a liposzómák, amelyek a liposzómához alifás diszulfid kapcsolat útján kötődő hidrofil polimer láncokat tartalmaznak.
  31. 31. A 30. igénypont szerinti készítmény, ahol R5 jelentése hidrogénatom, és R2 jelentése CH3, C2H5 vagy C3H8 összetételű csoport.
  32. 32. A 30. vagy 31. igénypont szerinti készítmény, a h o 1 az amint tartalmazó lipid valamilyen foszfolipid.
  33. 33. A 30.-32. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, a h o 1 R1 jelentése polivinilpirrolidon, polivinil-metil-éter, polimetiloxazolin, polietiloxazolin, poli(hidroxipropil)oxazolin, poli(hidroxipropil)-metakrilamid, polimetakrilamid, poli-(dimetilakril)amid, poli(hidroxipropil)-metakrilát, poli-(hidroxietil)akrilát, hidroximetilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, poliaszpartamid, ezek kopolimerjei, valamint poli(etilénoxid)poli(propilénoxid) lehet.
  34. 34. A 30.-32. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, ahol R1 jelentése polietilénglikol.
    • * · ·♦
    64 -i. ’··
  35. 35. A 30.-34. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a liposzóma kiegészítőleg egy bezárt (befogott) terápiás hatóanyagot is tartalmaz.
  36. 36. Eljárás olyan liposzómák vérkeringési élettartamának a javítására, amelyek felszabaduló hidrofil polimer láncokból álló felületi bevonattal rendelkeznek, azzal jellemezve, hogy olyan liposzómákat állítunk elő, amelyek körülbelül 1%-tól körülbelül 20%-ig terjedő mennyiségben egy (I) általános képletű vegyületet tartalmaznak, ahol
    R1 jelentése hidrofil polimer, amely a ditiobenzil-egységhez kapcsolódó kötéssel rendelkezik;
    R2 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    R3 jelentése O(C=O)R4, S(C=O)R4 vagy O(C=S)R4 képletű csoport;
    R4 jelentése amint tartalmazó lipid; és
    R5 jelentése hidrogénatom, alkil- vagy arilcsoport;
    és ahol a CH2-R3 csoport orientációja orto- vagy parahelyzetú.
  37. 37. A 36. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy R5 jelentése hidrogénatom, és R2 jelentése CH3, C2H5 vagy C3H8 összetételű csoport.
  38. 38. A 36. igénypont vagy 37. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az amint tartalmazó lipid valamilyen foszfolipid.
  39. 39. A 36.-38. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy R1 jelentése polivinilpirrolidon, polivinil-metiléter, polimetiloxazolin, polietiloxazolin, poli(hidroxipropil)oxazolin, poli(hidroxipropil)-metakrilamid, polimetakrilamid, poli-(dimetilakril)amid, poh(hidroxipropil)-metakrilát, poli-(hidroxietil)akrilát, hidroxim etilcellulóz, hidroxietilcellulóz, polietilénglikol, poliaszpartamid, ezek kopolimerjei, valamint poli(etilénoxid)poli(propilénoxid) lehet.
  40. 40. A 36.-38. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy R1 jelentése polietilénglikol.
  41. 41. A 36.-38. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a liposzóma kiegészítőleg egy bezárt (befogott) terápiás hatóanyagot is tartalmaz.
    A meghatalmazott:
    IRODA
HU0200797A 1999-04-23 2000-04-21 Releasable linkage and compositions containing same HUP0200797A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US13089799P 1999-04-23 1999-04-23

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP0200797A2 true HUP0200797A2 (hu) 2002-07-29
HUP0200797A3 HUP0200797A3 (en) 2010-01-28

Family

ID=22446872

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0200797A HUP0200797A3 (en) 1999-04-23 2000-04-21 Releasable linkage and compositions containing same
HU0201425A HUP0201425A3 (en) 1999-04-23 2000-04-21 Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0201425A HUP0201425A3 (en) 1999-04-23 2000-04-21 Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome

Country Status (18)

Country Link
US (8) US6342244B1 (hu)
EP (3) EP1880736A1 (hu)
JP (1) JP4558952B2 (hu)
KR (2) KR100642955B1 (hu)
CN (2) CN100512879C (hu)
AT (1) ATE340592T1 (hu)
AU (1) AU769425B2 (hu)
CA (1) CA2369595C (hu)
DE (1) DE60030965T2 (hu)
DK (1) DK1173222T3 (hu)
ES (1) ES2272280T3 (hu)
HK (1) HK1041820B (hu)
HU (2) HUP0200797A3 (hu)
IL (2) IL146055A0 (hu)
MX (2) MXPA01010750A (hu)
NO (1) NO20015144L (hu)
WO (1) WO2000064484A2 (hu)
ZA (2) ZA200108726B (hu)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5981501A (en) * 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US7422902B1 (en) * 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
AU733310C (en) 1997-05-14 2001-11-29 University Of British Columbia, The High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles
US7303760B2 (en) 1999-04-23 2007-12-04 Alza Corporation Method for treating multi-drug resistant tumors
ATE340592T1 (de) * 1999-04-23 2006-10-15 Alza Corp Konjugate enthaltend eine spaltbare bindung zur anwendung in einem liposom
US7238368B2 (en) * 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
US7112337B2 (en) * 1999-04-23 2006-09-26 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid
GB9915074D0 (en) * 1999-06-28 1999-08-25 Cortecs Plc Ligand-binding composition
US7094423B1 (en) * 1999-07-15 2006-08-22 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for preparation of lipid-encapsulated therapeutic agents
WO2002076428A1 (en) * 2001-03-26 2002-10-03 Alza Corporation Liposome composition for improved intracellular delivery of a therapeutic agent
ATE427948T1 (de) 2001-04-24 2009-04-15 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
EP1441763A2 (en) * 2001-11-07 2004-08-04 Inex Pharmaceuticals Corp. Mucosal adjuvants comprising an oligonucleotide and a cationic lipid
US7842498B2 (en) * 2001-11-08 2010-11-30 Bio-Rad Laboratories, Inc. Hydrophobic surface chip
US7211440B2 (en) 2002-03-08 2007-05-01 Wallac Oy Dissociative fluorescence enhancement assay
US6737524B2 (en) * 2002-03-25 2004-05-18 Paul K. Smith Activated polyethylene glycol compounds
US20040009944A1 (en) * 2002-05-10 2004-01-15 Inex Pharmaceuticals Corporation Methylated immunostimulatory oligonucleotides and methods of using the same
WO2003097805A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 California Pacific Medical Center Delivery of nucleic acid-like compounds
CA2484640C (en) * 2002-05-15 2012-01-17 Endocyte, Inc. Vitamin-mitomycin conjugates
JP4995423B2 (ja) * 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
WO2004069159A2 (en) 2003-01-27 2004-08-19 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
CA2542099A1 (en) * 2003-10-11 2005-04-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Methods and compositions for enhancing innate immunity and antibody dependent cellular cytotoxicity
US20050191344A1 (en) * 2004-01-15 2005-09-01 Samuel Zalipsky Liposome composition for delivery of therapeutic agents
US7282590B2 (en) * 2004-02-12 2007-10-16 The Research Foundation Of State University Of New York Drug conjugates
US7931693B2 (en) * 2004-02-26 2011-04-26 Endosphere, Inc. Method and apparatus for reducing obesity
US9592277B2 (en) * 2004-04-14 2017-03-14 Avirid, Inc. Compositions with modified nucleases targeted to viral nucleic acids and methods of use for prevention and treatment of viral diseases
JP2007533750A (ja) * 2004-04-21 2007-11-22 アルザ コーポレイション 緩和なチオール分解条件下で遊離可能なポリマー結合体
WO2005105154A1 (en) * 2004-04-21 2005-11-10 Alza Corporation Polymer conjugate releasable under mild thiolytic conditions
CN101098854B (zh) * 2004-07-23 2012-12-05 恩多塞特公司 二价连接体及其轭合物
AU2005282463A1 (en) * 2004-09-03 2006-03-16 Alza Corporation Endogenously-formed conjugate of albumin
TW200612993A (en) * 2004-10-08 2006-05-01 Alza Corp Lipopolymer conjugates
WO2006050327A2 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 Alza Corporation Lyophilized liposome formulations and method
CN101175757B (zh) * 2005-03-16 2012-11-14 恩多塞特公司 蝶酸及其缀合物的合成和纯化
BRPI0615354A2 (pt) * 2005-08-19 2011-05-17 Endocyte, Inc. conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor, composição farmacêutica que o compreende, bem como seu uso
EP2382995A3 (en) * 2005-08-19 2013-09-25 Endocyte, Inc. Ligand conjugates of Vinca alkaloids, analogs and derivatives
US7700651B2 (en) * 2006-07-19 2010-04-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Preparations of phospholipids and pharmaceuticals containing 5-amino salicylic acid for the treatment of inflammatory bowel disease
US20100329664A1 (en) * 2007-01-23 2010-12-30 Lim Dae-Soon Shutter device for camera
US20100104626A1 (en) * 2007-02-16 2010-04-29 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
AU2008224988A1 (en) * 2007-03-14 2008-09-18 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
ITRM20070327A1 (it) * 2007-06-11 2008-12-12 Univ Palermo Vettori colloidali a struttura poliamminoacidica per il rilascio orale di peptidi e proteine e relativo metodo di produzione.
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
CN101784565B (zh) 2007-06-25 2014-12-10 恩多塞特公司 含有亲水性间隔区接头的共轭物
WO2009006311A2 (en) * 2007-06-29 2009-01-08 Wisconsin Alumni Research Foundation Structuring effect of cholesterol in peg-phospholipid micelles, drug delivery of amphotericin b, and combination antifungals
WO2009013115A2 (en) * 2007-07-20 2009-01-29 Basf Se Vesicles comprising a transmembrane transport trigger system
US8440787B2 (en) * 2007-10-23 2013-05-14 Nektar Therapeutics Hydroxyapatite-targeting multiarm polymers and conjugates made therefrom
CN101909441B (zh) 2007-10-25 2015-05-13 恩多塞特公司 微管蛋白抑制剂及其制备方法
US9259398B1 (en) * 2007-11-26 2016-02-16 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Bioactive agent-loaded targeting micelles
KR101975843B1 (ko) * 2008-05-23 2019-05-09 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 리포좀 나노입자에 사용하기 위한 변형된 약물
US9393227B2 (en) * 2009-02-04 2016-07-19 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nanoscale platinum compounds and methods of use thereof
BRPI1012036A2 (pt) 2009-05-27 2017-10-10 Selecta Biosciences Inc nanocarreadores que possuem componentes com diferentes taxas de liberação
ES2641892T3 (es) * 2009-08-26 2017-11-14 Selecta Biosciences, Inc. Composiciones que inducen la ayuda de las células T
EP2496262A2 (en) * 2009-11-02 2012-09-12 Université de Genève Stabilized protein formulations and use thereof
EP3318248B1 (en) 2009-12-01 2019-04-10 Translate Bio, Inc. Delivery of mrna for the augmentation of proteins and enzymes in human genetic diseases
WO2011119995A2 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc. Formulations and methods of use
DE102010042338A1 (de) * 2010-10-12 2012-04-12 Bayer Technology Services Gmbh Zusammensetzung zur Behandlung von Krebs mit kontrollierter Freisetzung des Wirkstoffes
EA201390660A1 (ru) 2010-11-05 2013-11-29 Селекта Байосайенсиз, Инк. Модифицированные никотиновые соединения и связанные способы
MX374963B (es) 2011-04-29 2025-03-06 Selecta Biosciences Inc Nanoportadores sintéticos tolerogénicos para reducir las respuestas de anticuerpos.
ES2795110T3 (es) 2011-06-08 2020-11-20 Translate Bio Inc Lípidos escindibles
RU2013154295A (ru) 2011-06-08 2015-07-20 Шир Хьюман Дженетик Терапис, Инк. КОМПОЗИЦИИ ЛИПИДНЫХ НАНОЧАСТИЦ И СПОСОБЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ мРНК
EP2606884A1 (en) 2011-12-21 2013-06-26 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Inhibitors of notch signaling pathway and use thereof in treatment of cancers
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
AU2013237874B2 (en) 2012-03-29 2018-01-18 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
BR112015008365A2 (pt) 2012-10-16 2017-07-04 Endocyte Inc composto da fórmula b-l(d)x, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, composição farmacêutica, uso de um composto, composição de forma de dosagem unitária ou dose unitária, composição para tratar um câncer em um paciente, e método para tratar um câncer em um paciente
RS57739B1 (sr) 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
JP6586075B2 (ja) 2013-03-14 2019-10-02 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａの精製方法
US9827552B2 (en) 2013-07-17 2017-11-28 Clemson University Functionalized lipid modification of solid phase surfaces for use in chromatography
ES3032935T3 (en) 2013-10-22 2025-07-29 Translate Bio Inc Lipid formulations for delivery of messenger rna
CN106413811A (zh) 2013-10-22 2017-02-15 夏尔人类遗传性治疗公司 精氨基琥珀酸合成酶缺乏症的mrna疗法
JP6506749B2 (ja) 2013-10-22 2019-04-24 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド フェニルケトン尿症のためのｍＲＮＡ療法
US9850269B2 (en) 2014-04-25 2017-12-26 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger RNA
JP6557722B2 (ja) 2014-05-30 2019-08-07 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド 核酸の送達のための生分解性脂質
WO2015191563A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Lipomedix Pharmaceuticals Ltd. Combination chemotherapy comprising a liposomal prodrug of mitomycin c
KR102559979B1 (ko) 2014-06-24 2023-07-25 샤이어 휴먼 지네틱 테라피즈 인크. 핵산의 전달용 입체화학적으로 풍부한 조성물
WO2016149516A1 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Lipomedix Pharmaceuticals Ltd. Methods for the treatment of bladder cancer
CN106519221B (zh) * 2015-09-10 2019-04-26 中国科学院高能物理研究所 一种聚乙二醇/聚酰胺胺共聚物、其制备方法及包含该共聚物的两亲性siRNA载体
CN106519211B (zh) * 2015-09-10 2018-10-09 中国科学院高能物理研究所 一种两亲性聚合物以及由其形成的磁性胶束纳米载体和其用途
CN105866311B (zh) * 2016-05-25 2017-05-31 福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心 测定鸡肉中抗病毒药物残留的uplc‑ms/ms方法
GB2552301A (en) * 2016-07-11 2018-01-24 Evox Therapeutics Ltd Metabolic drug loading of EVs
WO2018089481A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Mallinckrodt Llc Mitomycin c prodrug liposome formulations and uses thereof
EA201991747A1 (ru) 2017-02-27 2020-06-04 Транслейт Био, Инк. НОВАЯ КОДОН-ОПТИМИЗИРОВАННАЯ мРНК CFTR
MX2019013752A (es) 2017-05-16 2020-07-20 Translate Bio Inc Tratamiento de la fibrosis quística mediante el suministro de arnm que codifica cftr optimizado en codones.
WO2019016208A1 (en) * 2017-07-17 2019-01-24 Technische Universiteit Eindhoven APPLICABLE CHEMICAL COMPOSITION COMPRISING AN AGENT CONJUGATED TO A HYDROPHOBIC PART AND A SUPPORT
ES2951817T3 (es) 2017-08-22 2023-10-25 Dynavax Tech Corp Derivados de imidazoquinolina de cadena alquílica modificada como agonistas de TLR7/8 y usos de los mismos
US10722591B2 (en) 2017-11-14 2020-07-28 Dynavax Technologies Corporation Cleavable conjugates of TLR7/8 agonist compounds, methods for preparation, and uses thereof
WO2019243523A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Cellestia Biotech Ag Process for making amino diaryl ethers and amino diaryl ethers hydrochloride salts
KR102950141B1 (ko) 2018-08-24 2026-04-07 트랜슬레이트 바이오 인코포레이티드 전령 rna의 정제 방법
WO2020106946A1 (en) 2018-11-21 2020-05-28 Translate Bio, Inc. TREATMENT OF CYSTIC FIBROSIS BY DELIVERY OF NEBULIZED mRNA ENCODING CFTR
KR20210114971A (ko) 2019-01-11 2021-09-24 리포메딕스 파마슈티컬스 리미티드 미토마이신 c의 리포좀성 전구약물를 포함하는 리포좀 조성물 및 제조 방법
BR112021020226A2 (pt) 2019-04-10 2021-12-07 Cellestia Biotech Ag Inibidores de via de sinalização notch e uso dos mesmos no tratamento de cânceres
EP4031662A1 (en) 2019-09-20 2022-07-27 Translate Bio, Inc. Mrna encoding engineered cftr
WO2022122667A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Cellestia Biotech Ag Pharmaceutical combinations for treating cancer
EP4008324A1 (en) 2020-12-07 2022-06-08 Cellestia Biotech AG Combinations comprising an inhibitor of an anti-apoptotic protein, such as bcl-2, bcl-xl, bclw or mcl-1, and a notch signaling pathway inhibitor for treating cancer
TW202313020A (zh) 2021-06-02 2023-04-01 瑞士商西萊絲蒂亞生物科技股份有限公司 自體免疫及發炎性疾病的治療方法
EP4429661A1 (en) 2021-11-08 2024-09-18 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer
EP4223292A1 (en) 2022-02-07 2023-08-09 Cellestia Biotech AG Pharmaceutical combinations for treating cancer

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS5240B2 (hu) * 1973-12-17 1977-01-05
GB8430252D0 (en) 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US5059421A (en) 1985-07-26 1991-10-22 The Liposome Company, Inc. Preparation of targeted liposome systems of a defined size distribution
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JPH0615532B2 (ja) * 1986-02-03 1994-03-02 テルモ株式会社 ５−フルオロウラシル誘導体およびこれを含有する医薬製剤
US4766105A (en) * 1986-10-31 1988-08-23 Shell Oil Company Ethylene oxide catalyst and process for preparing the catalyst
JPH01113391A (ja) * 1987-10-24 1989-05-02 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd マイトマイシン誘導体
US4952394A (en) * 1987-11-23 1990-08-28 Bristol-Myers Company Drug-monoclonal antibody conjugates
ZA886812B (en) * 1987-11-23 1989-07-26 Bristol Myers Co Anti-tumor prodrugs
US5103556A (en) 1988-05-05 1992-04-14 Circon Corporation Method of manufacturing an electrohydraulic probe
US4902502A (en) 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
TW211015B (hu) * 1990-01-11 1993-08-11 Nippon Shinyaku Co Ltd
US5169934A (en) * 1990-05-14 1992-12-08 Anergen, Inc. Intracellularly cleavable compounds
ATE194767T1 (de) * 1992-03-23 2000-08-15 Univ Georgetown In liposomen verkapseltes taxol und verwendungsverfahren
JP2813511B2 (ja) * 1992-06-10 1998-10-22 大日本スクリーン製造株式会社 ロールコータによる基板表面への塗液塗布方法
WO1994005259A1 (en) * 1992-09-02 1994-03-17 Georgetown University Method of encapsulating anthracycline glycosides in liposomes
US5395619A (en) 1993-03-03 1995-03-07 Liposome Technology, Inc. Lipid-polymer conjugates and liposomes
US5820873A (en) * 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5952499A (en) * 1995-01-16 1999-09-14 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Therapeutic compound-fatty acid conjugates
AU4857796A (en) 1995-01-20 1996-08-07 Florida State University Sex-specific dna probe for parrots, methods and kits
JPH09268190A (ja) * 1996-04-02 1997-10-14 Sagami Chem Res Center マイトマイシンｃ誘導体及び非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤
TW520297B (en) * 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
JP2001503396A (ja) 1996-10-11 2001-03-13 アルザ コーポレイション 治療用リポソーム組成物および方法
JPH1160499A (ja) 1997-08-22 1999-03-02 Hiroshi Maeda 抗腫瘍剤
SE513149C2 (sv) * 1997-12-05 2000-07-17 Katarina Edwards Läkemedelsdistributionssystem med tvåstegsmålsökning, till specifika celler eller vävnad och till dess cellkärna
US6180095B1 (en) * 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
EE05214B1 (et) * 1998-04-28 2009-10-15 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Polool-IFN- β konjugaat, selle valmistamismeetod ja farmatseutiline kompositsioon
US7112337B2 (en) 1999-04-23 2006-09-26 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
JP2002542386A (ja) 1999-04-23 2002-12-10 アルザ・コーポレーション 放出可能な結合及びこれを含む組成物
US7303760B2 (en) 1999-04-23 2007-12-04 Alza Corporation Method for treating multi-drug resistant tumors
ATE340592T1 (de) * 1999-04-23 2006-10-15 Alza Corp Konjugate enthaltend eine spaltbare bindung zur anwendung in einem liposom
WO2001026625A2 (en) 1999-10-08 2001-04-19 Alza Corp Neutral-cationic lipid for nucleic acid and drug delivery
EP2295450B1 (en) 2000-09-29 2015-01-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Pegylated interleukin-10
US7260330B2 (en) * 2002-11-04 2007-08-21 The Boeing Company Optical communication system using correlation receiver

Also Published As

Publication number Publication date
US6984396B2 (en) 2006-01-10
IL146055A (en) 2006-12-31
US7608687B2 (en) 2009-10-27
WO2000064484A3 (en) 2001-11-15
US7276248B2 (en) 2007-10-02
EP1880736A1 (en) 2008-01-23
US6342244B1 (en) 2002-01-29
MXPA01010751A (es) 2002-05-14
AU4657700A (en) 2000-11-10
EP1579874A3 (en) 2006-01-25
DE60030965D1 (de) 2006-11-09
US20050271715A1 (en) 2005-12-08
HUP0201425A2 (hu) 2002-12-28
EP1173222A2 (en) 2002-01-23
DE60030965T2 (de) 2007-05-24
CA2369595A1 (en) 2000-11-02
JP2002542302A (ja) 2002-12-10
KR100642955B1 (ko) 2006-11-10
MXPA01010750A (es) 2003-08-20
US6849270B2 (en) 2005-02-01
ES2272280T3 (es) 2007-05-01
CN1399561A (zh) 2003-02-26
US20030054028A1 (en) 2003-03-20
CA2369595C (en) 2010-10-05
NO20015144L (no) 2001-12-11
NO20015144D0 (no) 2001-10-22
EP1579874A2 (en) 2005-09-28
EP1173222B1 (en) 2006-09-27
US6365179B1 (en) 2002-04-02
US7285622B2 (en) 2007-10-23
CN1244376C (zh) 2006-03-08
ZA200108726B (en) 2003-03-05
DK1173222T3 (da) 2007-01-29
US20020128195A1 (en) 2002-09-12
US20050123597A1 (en) 2005-06-09
KR100669053B1 (ko) 2007-01-15
JP4558952B2 (ja) 2010-10-06
ZA200108724B (en) 2002-10-23
US20030211079A1 (en) 2003-11-13
IL146055A0 (en) 2002-07-25
HK1041820B (en) 2007-03-30
HUP0200797A3 (en) 2010-01-28
AU769425B2 (en) 2004-01-29
WO2000064484A2 (en) 2000-11-02
KR20020005006A (ko) 2002-01-16
HUP0201425A3 (en) 2006-07-28
CN100512879C (zh) 2009-07-15
CN1355713A (zh) 2002-06-26
US6605299B2 (en) 2003-08-12
US20080152702A1 (en) 2008-06-26
ATE340592T1 (de) 2006-10-15
KR20010114247A (ko) 2001-12-31
HK1041820A1 (en) 2002-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUP0200797A2 (hu) Könnyen hasadó kötéssel kapcsolódó vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó készítmények
US7592307B2 (en) Releasable linkage and compositions containing same
KR20040066169A (ko) 핵산의 송달을 위한 리포좀 조성물
JP2007512355A (ja) 開裂性のｐｅｇで表面修飾されたリポソーム−ｄｎａ複合体で媒介される遺伝子送達
AU770390B2 (en) Releasable linkage and compositions containing same
US20060079486A1 (en) Lipopolymer conjugates
KR20070010175A (ko) 온화한 가티올분해 조건하에서 방출될 수 있는 폴리머콘쥬게이트
EP4094778A1 (en) Polymer linkers and their uses
ES2380620T3 (es) Tratamiento de tumores resistentes a múltiples fármacos mediante un conjugado de mitomicina C
HK1078483A (en) Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome

Legal Events

Date Code Title Description
FA9A Lapse of provisional patent protection due to relinquishment or protection considered relinquished