JPH01101891A - Ｌ−スレオニンの製造法 - Google Patents
Ｌ−スレオニンの製造法Info
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- JPH01101891A JPH01101891A JP26055687A JP26055687A JPH01101891A JP H01101891 A JPH01101891 A JP H01101891A JP 26055687 A JP26055687 A JP 26055687A JP 26055687 A JP26055687 A JP 26055687A JP H01101891 A JPH01101891 A JP H01101891A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、Ｌ−スレオニンの製造法に関するものでらる
。
。
本発明によればＬ−もしくはＤＬ−アスパラギン酸又は
その塩から効率よくＬ−スレオニンを製造することがで
きる。
その塩から効率よくＬ−スレオニンを製造することがで
きる。
Ｌ−スレオニンは、必須アミノ酸として人間および動物
の栄養上重要な役割をするアミノ酸であり、医療、食品
、飼料強化剤としτその需要が近年急激に増加しつつあ
る。
の栄養上重要な役割をするアミノ酸であり、医療、食品
、飼料強化剤としτその需要が近年急激に増加しつつあ
る。
先行技術
Ｌ−スレオニンの工業的製造法としては、他のアミノ酸
の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成では
Ｌ体のみの製造は困難であり、主に発酵法により生産が
行われている。発酵法により製造する方法としてはアミ
ノ酸要求株を用いる方法（特公昭４６−３３１９号、同
４６−３４１９３号、同４６−３４１９４号公報等）、
また前駆体発酵法による製造法としては、ホモセリンを
前駆一体とする製造法（４？公昭３６−２８９６号、同
３８−６５９０号、同４３−８７１５号公報等）等が挙
げられる。
の場合と同様に立体異性体が存在する為、化学合成では
Ｌ体のみの製造は困難であり、主に発酵法により生産が
行われている。発酵法により製造する方法としてはアミ
ノ酸要求株を用いる方法（特公昭４６−３３１９号、同
４６−３４１９３号、同４６−３４１９４号公報等）、
また前駆体発酵法による製造法としては、ホモセリンを
前駆一体とする製造法（４？公昭３６−２８９６号、同
３８−６５９０号、同４３−８７１５号公報等）等が挙
げられる。
このような発酵法は、培地の滅菌等の煩雑な操作が必要
でろり、また生産管理も極めて難しく、更に副生成物の
問題等があり、工業的に有利な方法とは言い難い。
でろり、また生産管理も極めて難しく、更に副生成物の
問題等があり、工業的に有利な方法とは言い難い。
また、発酵法よりも固定費等が安く、生産管理がより容
易な酵素法により製造法には、グリシンとアセトアルデ
ヒドを前駆体とする方法（特開昭５６−１２１４９１号
、同５８−１１６１５８１号各公報等）などが提案され
ているが、これらはアロ体のスレオニンの副生がらり実
用的な方法とはなっていない。
易な酵素法により製造法には、グリシンとアセトアルデ
ヒドを前駆体とする方法（特開昭５６−１２１４９１号
、同５８−１１６１５８１号各公報等）などが提案され
ているが、これらはアロ体のスレオニンの副生がらり実
用的な方法とはなっていない。
この他にも酵素法による製造法には、各種の微生物菌体
を用いてＤＬ−ホモセリンを存在させた反応液にて、Ｌ
−スレオニンを生成させることが報告されている（ Ａ
ｍ１ｎｏ Ａｃ１ｄｓ 、第１号、Ｐ７１〜７４（１９
５９））。しかしながら、これら公知の方法では、Ｌ−
スレオニンの生成量は未だ十分ではない状況にあった。
を用いてＤＬ−ホモセリンを存在させた反応液にて、Ｌ
−スレオニンを生成させることが報告されている（ Ａ
ｍ１ｎｏ Ａｃ１ｄｓ 、第１号、Ｐ７１〜７４（１９
５９））。しかしながら、これら公知の方法では、Ｌ−
スレオニンの生成量は未だ十分ではない状況にあった。
発明の要旨
本発明者らは、上記課題を解決すべくＬ−又はＤＬ−ア
スパラギン酸又はその塩を主原料とし、酵素的製法によ
るＬ−スレオニンの製造法につき鋭意検討を行い本発明
を完成した。
スパラギン酸又はその塩を主原料とし、酵素的製法によ
るＬ−スレオニンの製造法につき鋭意検討を行い本発明
を完成した。
即ち、本発明は、微生物菌体の存在下、Ｌ−又はＤＬ−
アスパラギン酸又はその塩を水溶液中で酵素反応させ、
該溶液中にＬ−スレオニンを生成せしめ、これからＬ−
スレオニンを採取する方法において、微生物菌体がビオ
チン要求性のプレビパクテリウＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ）属に属するものであることを特徴と
するＬ−スレオニンの製造法を提供するものでるる。
アスパラギン酸又はその塩を水溶液中で酵素反応させ、
該溶液中にＬ−スレオニンを生成せしめ、これからＬ−
スレオニンを採取する方法において、微生物菌体がビオ
チン要求性のプレビパクテリウＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ ）属に属するものであることを特徴と
するＬ−スレオニンの製造法を提供するものでるる。
１１狂と１１
本発明の方法によれば、Ｌ−スレオニンが高収量で製造
できる。又、エタノール及び／又はグルコースを含む反
応液を酵素反応の水＠液として使用した場合には、Ｌ−
スレオニンが高収量に製造でき、発酵法の様な培地の滅
菌等の煩雑な操作が必要でなく、生産管理が極めて容易
となる。
できる。又、エタノール及び／又はグルコースを含む反
応液を酵素反応の水＠液として使用した場合には、Ｌ−
スレオニンが高収量に製造でき、発酵法の様な培地の滅
菌等の煩雑な操作が必要でなく、生産管理が極めて容易
となる。
３コヱｌ甜印氾Ｐ艶
本発明に使用されるビオチン要求性のブレビバクテリウ
Ａ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ）属に属する微
生物菌体としては、以下の様なものがらり、Ｌ−スレオ
ニン生産菌が含まれる。
Ａ （Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ）属に属する微
生物菌体としては、以下の様なものがらり、Ｌ−スレオ
ニン生産菌が含まれる。
エタノール資化性のもの、例えばプレビバクテリウＡ−
フラバＡ （３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） ＭＪ−２３３（微工研菌寄 第３０６８号）
、プレビバクテリクＡ’フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ ）ＭＪ−２３３−ＡＢ−４
１（微工研菌寄 第３８１２号）、ブレビバクテリウム
・７ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３−ＡＢＴ−１１（微工研菌
寄 第８４２３号）及びブレビバクテリウム・フラバム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−
２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄 第８０５５号）等
がある。これらの他にもブレビバクテリウム・アンモニ
アゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎ
ｉａｇｅｎｅｓ ） Ａ Ｔ ＣＣ６８７１、同１３７
４５、同１３７４６、ブレビバクテリウム０デバリカタ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｄｉｖａｒｉｃａ
ｔｕｍ ）ＡＴＣＣ１４０２０等が例示できる。
フラバＡ （３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） ＭＪ−２３３（微工研菌寄 第３０６８号）
、プレビバクテリクＡ’フラパＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ ）ＭＪ−２３３−ＡＢ−４
１（微工研菌寄 第３８１２号）、ブレビバクテリウム
・７ラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖ
ｕｍ ） Ｍ Ｊ −２３３−ＡＢＴ−１１（微工研菌
寄 第８４２３号）及びブレビバクテリウム・フラバム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−
２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄 第８０５５号）等
がある。これらの他にもブレビバクテリウム・アンモニ
アゲネス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎ
ｉａｇｅｎｅｓ ） Ａ Ｔ ＣＣ６８７１、同１３７
４５、同１３７４６、ブレビバクテリウム０デバリカタ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｅｔｅｒｉｕｍ ｄｉｖａｒｉｃａ
ｔｕｍ ）ＡＴＣＣ１４０２０等が例示できる。
これらの微生物菌体の中でもエタノール資化性のものが
好ましく、特にブレビバクテリウム・フラバム ＭＪ−
２３３、ブレビバクテリウム・７ラバム ＭＪ−２３３
−ＡＢ−４１、ブレビバクテリウム・７ラバム ＭＪ−
２３３−ＡＢＴ−１１、ブレビバクテリウム・７ラバム
ＭＪ−２３３−ＡＢＤ−２１が好ましい。
好ましく、特にブレビバクテリウム・フラバム ＭＪ−
２３３、ブレビバクテリウム・７ラバム ＭＪ−２３３
−ＡＢ−４１、ブレビバクテリウム・７ラバム ＭＪ−
２３３−ＡＢＴ−１１、ブレビバクテリウム・７ラバム
ＭＪ−２３３−ＡＢＤ−２１が好ましい。
なお、上記の（微工研菌寄 第３８１２号）は（微工研
菌寄 第３０６８号）を親株としてＤＬ−α−アミノ酪
酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微生物で
るる（特公昭５９−２８３９８号公報３〜４ｍ参照）。
菌寄 第３０６８号）を親株としてＤＬ−α−アミノ酪
酸耐性を積極的に付与されたエタノール資化性微生物で
るる（特公昭５９−２８３９８号公報３〜４ｍ参照）。
（微工研菌寄 第８４２３号）は、（微工研菌寄 第３
０６８号）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トランスア
ミナーゼ高活性変異株である（特願昭６０−１９０６０
９号明細書３〜５頁参照）。また、（微工研菌寄第８０
５５号）は（微工研菌寄 第３０６８号、特公昭５７−
２６７５５号公報参照）を親株としたＤ−α−アミノ酪
酸デアミナーゼ高活性変異株である（特開昭６１−１７
６６０７号公報参照）。
０６８号）を親株としたＬ−α−アミノ酪酸トランスア
ミナーゼ高活性変異株である（特願昭６０−１９０６０
９号明細書３〜５頁参照）。また、（微工研菌寄第８０
５５号）は（微工研菌寄 第３０６８号、特公昭５７−
２６７５５号公報参照）を親株としたＤ−α−アミノ酪
酸デアミナーゼ高活性変異株である（特開昭６１−１７
６６０７号公報参照）。
本発明における上記「微生物菌体」には、その固定化物
を含むものとする。ここで「固定比」は、該微生物菌体
を公知の固定化法、例えばアクリルアミド、アルギン酸
塩、カラギーナン等による包括法、ＤＥＡＥ−セファデ
ックス、ＤＥＩ：ＡＥ−セルロース等によるイオン結合
法などから適宜選択して行える。
を含むものとする。ここで「固定比」は、該微生物菌体
を公知の固定化法、例えばアクリルアミド、アルギン酸
塩、カラギーナン等による包括法、ＤＥＡＥ−セファデ
ックス、ＤＥＩ：ＡＥ−セルロース等によるイオン結合
法などから適宜選択して行える。
本発明の方法は、微生物の増殖が起こらない条件での酵
素反応であり水溶液中で行われる。この水溶液としては
、水あるいはリン酸又はトリス塩酸等の緩衝液が用いら
れるが、更に好ましくはエタノール及び／又はグルコー
スを含有する反応液が用いられる。
素反応であり水溶液中で行われる。この水溶液としては
、水あるいはリン酸又はトリス塩酸等の緩衝液が用いら
れるが、更に好ましくはエタノール及び／又はグルコー
スを含有する反応液が用いられる。
この反応液は、ビオチンを含有しない窒素源、無機塩等
をさらに含有して用いることも出来る。
をさらに含有して用いることも出来る。
この場合窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿老等が例
示でき、無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン
酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸マ
ンガン等が例示できる。
ム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿老等が例
示でき、無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン
酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸マ
ンガン等が例示できる。
上記反応液に添加されるエタノール及び／又はグルコー
スのａ度は、エタノールでは１〜２０容量％、グルコー
スでは０．５〜２０］ｉ隆％であり、エタノールとグル
コース併用の場合は前記範囲内でそれぞれ用いられる。
スのａ度は、エタノールでは１〜２０容量％、グルコー
スでは０．５〜２０］ｉ隆％であり、エタノールとグル
コース併用の場合は前記範囲内でそれぞれ用いられる。
Ｌ−又はＤＬ−アスパラギン酸又はその塩の反応時の濃
度は、一般には０．１〜２０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の濃度
範囲で使用するのが適当である。又、該菌体の使用量も
特に制限されるものではないが、−般に１〜５０％（ｗ
ｔ／ｖｏｗ！ ）の濃度で使用することが出来る。
度は、一般には０．１〜２０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の濃度
範囲で使用するのが適当である。又、該菌体の使用量も
特に制限されるものではないが、−般に１〜５０％（ｗ
ｔ／ｖｏｗ！ ）の濃度で使用することが出来る。
酵素反応は、約２０〜約５０℃、好ましくは約３０〜約
４０℃の温度で、通常約１０〜約７２時間行われる。
４０℃の温度で、通常約１０〜約７２時間行われる。
上記のような反応方法によって得られる反応液中に生成
したＬ−インロイシンの分離・精製は、イオン交換樹脂
処理法あるいは、沈＃法等によ抄容易に行うことができ
る。
したＬ−インロイシンの分離・精製は、イオン交換樹脂
処理法あるいは、沈＃法等によ抄容易に行うことができ
る。
本発明に用いられる微生物、即ち、アスパラギン酸から
Ｌ−スレオニンを生成する能力を有する微生物の調製法
を以下に述べる。
Ｌ−スレオニンを生成する能力を有する微生物の調製法
を以下に述べる。
炭素源としては例えばグルコース、エタノール、メタノ
ール、溌糖蜜等が、窒素源としてはアンモニア、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、宋
素等がそれぞれ単独もしくは混合して用いることが出来
る。
ール、溌糖蜜等が、窒素源としてはアンモニア、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、宋
素等がそれぞれ単独もしくは混合して用いることが出来
る。
無機塩としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素
カリウム、＠酸マグネシウム等が用いられる。この他に
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、カザミノ酸、ビオチン等の各種ビタミン等の栄養
素を培地に添加して用いることが出来る。
カリウム、＠酸マグネシウム等が用いられる。この他に
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリ
カー、カザミノ酸、ビオチン等の各種ビタミン等の栄養
素を培地に添加して用いることが出来る。
培養は通気攪拌、振とう等の好気的条件下で行ない、培
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行な
う。培養途中のｐＨは５〜１０．好ましくは７〜８付近
にて行ない、培養中のｐＨの１整には酸、アルカリを添
加して行なうことができる。
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃で行な
う。培養途中のｐＨは５〜１０．好ましくは７〜８付近
にて行ない、培養中のｐＨの１整には酸、アルカリを添
加して行なうことができる。
培養開始時のエタノール濃度は、好ましくは工〜５容量
％、更に好ましくは２〜３容量％である。
％、更に好ましくは２〜３容量％である。
培養期間は２〜９日間、最適期間は４〜７日間である。
この様にして得られた培養物から菌体を集めて、水又は
適当な緩衝液で洗浄し、その洗浄菌体を本発明の酵素反
応に使用する。
適当な緩衝液で洗浄し、その洗浄菌体を本発明の酵素反
応に使用する。
」ｌす１
以下の実施例において、Ｌ−スレオニンの定性は、ペー
パークロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、微
生物定量法による生物活性値により確認した。定量はロ
イコノストック・メセンテ四イデス（］、ｅｕｃｏｎｏ
ｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ） Ａ Ｔ
ＣＣ８０４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と高速
液体クロマトグラフィー（高車ＬＣ−５Ａ）とを併用し
て行った。また、下記の実施例において％と表したのは
重量％を意味する。
パークロマトグラフのＲｆ値、電気泳動法の易動度、微
生物定量法による生物活性値により確認した。定量はロ
イコノストック・メセンテ四イデス（］、ｅｕｃｏｎｏ
ｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ） Ａ Ｔ
ＣＣ８０４２を用いるマイクロバイオアッセイ法と高速
液体クロマトグラフィー（高車ＬＣ−５Ａ）とを併用し
て行った。また、下記の実施例において％と表したのは
重量％を意味する。
実施例−１
培地（尿素０．４％、硫酸アンモニウム１．４％、ＫＨ
２ＰＯ４０，０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０−０５％、ＭｇＳ
Ｏ４・７）ｈｏ ０．０５％、ＣａＣ２ｚ・２Ｈｚ０２
ｐｐｍ、 ＦｅＳＯ４−７Ｈ２０２ｐｐｍ、 Ｍｎ５
Ｏ＋ ・４〜６Ｈ２０２ｐｐｍ。
２ＰＯ４０，０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０−０５％、ＭｇＳ
Ｏ４・７）ｈｏ ０．０５％、ＣａＣ２ｚ・２Ｈｚ０２
ｐｐｍ、 ＦｅＳＯ４−７Ｈ２０２ｐｐｍ、 Ｍｎ５
Ｏ＋ ・４〜６Ｈ２０２ｐｐｍ。
ＺｎＳＯ４・７Ｈｚ０２ ｐｐｍ、 ＮａＣｔ２ｐｐ
ｍ、ビオチン２００ ｆｉｔ／ｌ、 ｆアミ＞ φＨＣ
１１００ｐ？／Ｌ、 カザミノ酸０．１％、酵母エキス
０．１％）ｘｏｏ＊を５００ｄ容三角フラスコに分注、
滅菌（滅菌後ｐＨ７，０） した後ブレビバクテリウム
・フラバム（１３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａ
ｖｕｍ ） ＭＪ ２３３ （微工研菌寄 第３０
６８号）を植菌し、無菌的にエタノールを２ｄ加え、３
０℃にて２日間振盪培養を行った。
ｍ、ビオチン２００ ｆｉｔ／ｌ、 ｆアミ＞ φＨＣ
１１００ｐ？／Ｌ、 カザミノ酸０．１％、酵母エキス
０．１％）ｘｏｏ＊を５００ｄ容三角フラスコに分注、
滅菌（滅菌後ｐＨ７，０） した後ブレビバクテリウム
・フラバム（１３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａ
ｖｕｍ ） ＭＪ ２３３ （微工研菌寄 第３０
６８号）を植菌し、無菌的にエタノールを２ｄ加え、３
０℃にて２日間振盪培養を行った。
次に、本培養培地（硫酸アンモニウム２．３％、ＫＨ２
ＰＯ４０，０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０，０５％、ＭｇＳＯ
４・７Ｈｚ０ ０．０５％、Ｆｅ５０＋ ・７Ｈ２０２
０ｐｐｍ。
ＰＯ４０，０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０，０５％、ＭｇＳＯ
４・７Ｈｚ０ ０．０５％、Ｆｅ５０＋ ・７Ｈ２０２
０ｐｐｍ。
Ｍｎ５Ｏ＜ ” ｎｅｏ ２０ ＰｐｍＮ ビオテ＞
２００ ｐ？／Ｌ。
２００ ｐ？／Ｌ。
チアミン・ＨＣｌ １００μｙ／ｌ、 カザミノ酸０
．３％、酵母エキス０．３％）の１ｏｏｏｙを２ｚ容通
気攪拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、エ
タノールの２０ｔ／と前記前培養物の２０ｄを添加して
、回転数１００ Ｏｒｐｍ、通気骨Ｉ Ｖ’Ｖｍ、温度
３３℃ｐＨ７，６にて４８時間培養を行った。
．３％、酵母エキス０．３％）の１ｏｏｏｙを２ｚ容通
気攪拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）後、エ
タノールの２０ｔ／と前記前培養物の２０ｄを添加して
、回転数１００ Ｏｒｐｍ、通気骨Ｉ Ｖ’Ｖｍ、温度
３３℃ｐＨ７，６にて４８時間培養を行った。
尚、エタノールは、培養中培地の濃度が２容量％を越え
ないように、約１〜２時間ごと断続的に添加した。
ないように、約１〜２時間ごと断続的に添加した。
培養終了後、培養物３００ｄから遠心分離にて集菌後、
脱塩蒸留水にて２度洗浄した菌体を反応液（ＤＬ−アス
パラギン酸２■、ピリドキサールリン酸５μ？、リン酸
緩衝Ｉｙ、１００ μｍｏＡｅａ 、 ｘタノール１０
１ｑ、 ｐＨ７，６を反応液ｌｄ中に含有〕１０００
ｄに懸濁後、該懸濁液を２を容通気攪拌槽に仕込み、エ
タノール２０ｄを添加して、回転数３００ ｒｐｍ、通
気量０．１ ｖｖｍ、温度３３℃、ｐＨ７，６にて１０
時間反応を行った。
脱塩蒸留水にて２度洗浄した菌体を反応液（ＤＬ−アス
パラギン酸２■、ピリドキサールリン酸５μ？、リン酸
緩衝Ｉｙ、１００ μｍｏＡｅａ 、 ｘタノール１０
１ｑ、 ｐＨ７，６を反応液ｌｄ中に含有〕１０００
ｄに懸濁後、該懸濁液を２を容通気攪拌槽に仕込み、エ
タノール２０ｄを添加して、回転数３００ ｒｐｍ、通
気量０．１ ｖｖｍ、温度３３℃、ｐＨ７，６にて１０
時間反応を行った。
反応終了後、遠心分離（４０ＧＯｒｐｍ、１５分間、４
℃）にて除菌した上清液中のＬ−スレオニンを定量した
。
℃）にて除菌した上清液中のＬ−スレオニンを定量した
。
また、反応終了後の培養液５００−を、強酸性陽イオン
交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムに通してＬ−スレオニンを
吸着させ、水洗後、０．５Ｎアンモニア水で溶出させた
のち、Ｌ−スレオニン画分を濃縮し、冷エタノールでＬ
−スレオニンの結晶を析出させた。結果を後に掲げる第
１表に示した。
交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムに通してＬ−スレオニンを
吸着させ、水洗後、０．５Ｎアンモニア水で溶出させた
のち、Ｌ−スレオニン画分を濃縮し、冷エタノールでＬ
−スレオニンの結晶を析出させた。結果を後に掲げる第
１表に示した。
第１表
実施例−２
実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム−７ラ
バム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ１４ｖｕｍ
） ＭＪ −２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄 第３８
１２号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に℃反
応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定量した。
バム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆ１４ｖｕｍ
） ＭＪ −２３３−ＡＢ−４１（微工研菌寄 第３８
１２号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に℃反
応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定量した。
また、実施例−１と同様にしてＬ−スレオニンの結晶を
析出させた。結果は第２表に示した。
析出させた。結果は第２表に示した。
第２表
実施例−３
実施例−１と同様の条件にてプレビバクテリウＡ”７ラ
バＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ
） Ｍ Ｊ −２ａ ３−ＡＢＴ −１１（微工研閑
寄 第８４２３号）を培養し、また実施列−１と同様の
条件にて反応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定量
した。また、実施例−１と同様にしてＬ−スレオニンの
結晶を析出させた。侍果は第３表に示した。
バＡ （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ
） Ｍ Ｊ −２ａ ３−ＡＢＴ −１１（微工研閑
寄 第８４２３号）を培養し、また実施列−１と同様の
条件にて反応させた後上清液中のＬ−スレオニンを定量
した。また、実施例−１と同様にしてＬ−スレオニンの
結晶を析出させた。侍果は第３表に示した。
第３表
実施例−４
実施例−１と同様の条件にてブレビバクテリウム−フラ
バム（Ｂｒｅｖｔｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ
） Ｍ Ｊ −２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄 第
８０５５号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に
て反応させた抜上ａ液中のし一スレオニンを定量した。
バム（Ｂｒｅｖｔｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ
） Ｍ Ｊ −２３３−ＡＢＤ−２１（微工研菌寄 第
８０５５号）を培養し、また実施例−１と同様の条件に
て反応させた抜上ａ液中のし一スレオニンを定量した。
また、実施例−１と同様にしてＬ−スレオニンの結晶を
析出させた。結果を第４表に示した。
析出させた。結果を第４表に示した。
第４表
実施例−５
実施例−１で反応時に添加するエタノールをグルコース
に変えた以外は実施例−１と同様の操作を実施した。尚
、グルコース濃度は、２重危％とした。反応終了後の上
清液中のし一スレオニン生成忙および精製量を第５表に
示した。
に変えた以外は実施例−１と同様の操作を実施した。尚
、グルコース濃度は、２重危％とした。反応終了後の上
清液中のし一スレオニン生成忙および精製量を第５表に
示した。
第５表
実施例−６
実施例−１で反応時に用いた反応液を（ＮＨ４）２８０
４ ２ ｆ ／ Ｌ ： ＫＨ２ＰＯ４０，５ｔ ／
Ｌ ： ＫＰｈＰ０４ ０−５ ｆ ／ Ｌ ； Ｍｇ
５Ｏａ・７Ｈ２０ｏ、ｓ ｙ ／ｌ： Ｆｅ５Ｏａ ・
７Ｈ２０２０ｐｐｍ ： Ｍｎ５Ｏ＋ ・４〜６ＨｚＯ
２０ｐｐｒｎ ：チアミンーＨＣ１１ｏ ｏ ｐｆ／Ｌ
； Ｄ Ｌ−アスノ５ラギン酸 ２ ｙ／ Ｌ （ｐ
、Ｈ７，６）Ｋ変えた以外は実施例−１と同様の操作を
実施した。
４ ２ ｆ ／ Ｌ ： ＫＨ２ＰＯ４０，５ｔ ／
Ｌ ： ＫＰｈＰ０４ ０−５ ｆ ／ Ｌ ； Ｍｇ
５Ｏａ・７Ｈ２０ｏ、ｓ ｙ ／ｌ： Ｆｅ５Ｏａ ・
７Ｈ２０２０ｐｐｍ ： Ｍｎ５Ｏ＋ ・４〜６ＨｚＯ
２０ｐｐｒｎ ：チアミンーＨＣ１１ｏ ｏ ｐｆ／Ｌ
； Ｄ Ｌ−アスノ５ラギン酸 ２ ｙ／ Ｌ （ｐ
、Ｈ７，６）Ｋ変えた以外は実施例−１と同様の操作を
実施した。
反応終了後の上清液中のＬ−スレオニン生成揄および精
製量を第６表に示した。
製量を第６表に示した。
第６表
特許出願人 三菱油化株式会社
代理人 弁理士 長 谷 正 久
代理人 弁理士 山 本 隆 也
手続補正書（自発）
Claims (4)
- （１）微生物菌体の存在下、Ｌ−又はＤＬ−アスパラギ
ン酸又はその塩を水溶液中で酵素反応させ、該溶液中に
Ｌ−スレオニンを生成せしめ、これからＬ−スレオニン
を採取する方法において、微生物菌体がビオチン要求性
のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）属に属するものであることを特徴とするＬ−スレオニ
ンの製造法。 - （２）水溶液がエタノール及び／又はグルコースを含む
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製造法。 - （３）ビオチン要求性のブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物菌体がエタノ
ール資化性のものである特許請求の範囲第１項又は第２
項記載の製造法。 - （４）ビオチン要求性のブレビバクテリウム・フラバム
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ
−２２３、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３
−ＡＢ−４１、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２
３３−ＡＢＴ−１１、ブレビバクテリウム・フラバムＭ
Ｊ−２３３−ＡＢＤ−２１から選ばれるものである特許
請求の範囲第１項又は第２項記載の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26055687A JP2582805B2 (ja) | 1987-10-15 | 1987-10-15 | Ｌ−スレオニンの製造法 |
| US07/257,524 US5153123A (en) | 1987-10-15 | 1988-10-14 | Method for producing l-threonine, and plasmid and microorganism employed in the same |
| DE3888076T DE3888076T2 (de) | 1987-10-15 | 1988-10-14 | Verfahren zur Herstellung von L-Threonin. |
| EP88117119A EP0312089B1 (en) | 1987-10-15 | 1988-10-14 | Method for producing L-threonine |
| KR1019880013479A KR890006826A (ko) | 1987-10-15 | 1988-10-15 | L-트레오닌의 제조방법과 이에 이용되는 플라스미드 및 미생물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26055687A JP2582805B2 (ja) | 1987-10-15 | 1987-10-15 | Ｌ−スレオニンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01101891A true JPH01101891A (ja) | 1989-04-19 |
| JP2582805B2 JP2582805B2 (ja) | 1997-02-19 |
Family
ID=17349597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26055687A Expired - Lifetime JP2582805B2 (ja) | 1987-10-15 | 1987-10-15 | Ｌ−スレオニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2582805B2 (ja) |
-
1987
- 1987-10-15 JP JP26055687A patent/JP2582805B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2582805B2 (ja) | 1997-02-19 |
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