JPH01128934A - プロテアーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規なプロテアーゼ阻害剤に関する。

さらに詳しくは表在性毛壷性膿庖を主症状とする毛紫炎
、尋常性毛庶、ポックハルトｌ１ｍ癲疹などのプロテア
ーゼに起因する疾患を予防、防止するための新規かつ安
全性の高いプロテアーゼ阻害剤に関する。

（従来の技術〕 従来、人体におけるプロテアーゼは皮膚表層に存在する
プロピオニバクテリウム　アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉ
ｂｏｃｔｅｒｉｕｎ＋　ａｃｎｅｓ　）やスタフィロコ
ッカス　エピデルミゾイス（Ｓ　ｔａｐｈｙｒｏｃｏｃ
ｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｅｓ）の表皮性ブドウ球菌な
どがその活性を有していることが知られている（　Ｊ、
Ａｐρ１゜Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ　、　、　５４．２６３
．１９８３．皮膚科の臨床、９，８゜６７３、１９６７
）。

表皮性ブドウ球菌は、コアグラーゼ生産能陰性、マンニ
ット分解能陰性で生物学的活性の低いもので、非病原性
菌とされているが、尋常性毛癒、毛昏炎等の表在性原皮
症では表在性プドア球菌の検出率はきわめて高く、しか
も表皮性ブドウ球菌の単独分離例がきわめて多い。さら
に毛蚤炎患者の定型的な身からは黄色ブドウ球菌のみが
分離され、毛　炎の病巣からは表皮性ブドウ球菌のみが
分離されそれぞれ起炎菌が異なることが証明されている
。そのため深在性膿皮症分鼾、朧、化膿性汗腺炎、汗腺
ＩＩＩ瘍等、および表在性原皮症のうちでも化Ｉｌ傾向
の強い伝染性Ｉｌｌ癲疹では黄色ブドウ球菌が起炎菌で
ありこれに反して表在性毛骨性膿庖を主症状とする毛　
炎、尋常性毛唐、ポックハルトＨＷＨｆｍ疹などでは表
皮性ブドウ球菌が起炎菌、病原菌として重要な役割を果
していると考えられている。そして表皮性ブドウ球菌は
、前述のように生物学的活性が低く、病原性を示唆する
生物学的活性としては′溶血能がプロテアーゼ活性を有
している（皮膚科臨床、９．　８．６７３．１９６７）
。

現在までにこのような酵素活性に注目し、この酵素を阻
害することにより、表在性毛奢性膿庖の予防又は治療を
目的とした薬剤はなかった。また現存するプロテアーゼ
阻害剤は、エラスチーゼ阻害体を用いたエラスチンまた
はその他の蛋白質に対するプロテアーゼの分解作用によ
り発病する病気、例えば肺気腫、成人呼吸困難症候群等
の経口治療薬として有用であり（特開昭６０−２０８９
４３公報、特開昭６０−２０８９５１公報）、外用とし
てはほかの配合成分との関係から十分な治療効果が発揮
できなかったり、局所的におれる安全性、有効性の点で
必ずしも満足しえない。

また、−数的な試薬として、フェニルメチルスルフオル
フルオライドが、プロテアーゼ阻害剤として知られてい
るが、安全性の面から医薬品、皮膚外用剤、化粧品とし
てまったく使用することはできない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は、現在するプロテアーゼ阻害剤の満足できない
点を考慮し、安全性が高く真にプロテアーゼ阻害効果に
優れた薬剤を得るべく鋭意研究を重ねた結果、現在他の
用途に使用されている数多くの生薬抽出エキスにプロテ
アーゼ阻害作用があるという全く新規な事実を見出し、
この知見にもとづいて本発明を完成するにいたった。

〔問題を解決するための手段〕

すなわち本発明は、シャクヤク、オオレン、オオバク、
ボタンピ、ゲンノショウコ、茶、クジンシボタンツル、
オドリコソウ、サルビア、西洋ネズ、ハマメリスおよび
バーチからなる群の１種または２種以上から選ばれる生
薬、または上記群の１種または２種以上から選ばれた植
物の溶媒抽出エキスを有効成分とするプロテアーゼ阻害
剤を提供するものである。

以下、本発明について詳しく説明する。

本発明における生薬とは植物体を乾燥し、粉砕したもの
であり、溶媒抽出−エキスとは、特に明記しない限り次
の方法によって得られる上記植物またはその生薬抽出液
、その希釈液、その濃縮エキスあるいはその乾燥床を意
味するものとする。

溶媒抽出エキスは、上記植物または生薬乾燥米を、水も
しくは有機溶媒（石油エーテル、シクロヘキサン、四塩
化炭素、トルエン、ベンゼン、ジクロルメタン、クロロ
ホルム、エーテル、酢酸エチル、ブタノール、アセトン
、′ｎ〜プロパツール、エタノール、メタノール、ピリ
ジン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール
）たとえば水性アルコールを用い、通常３℃〜７０℃で
抽出処理して得られる。以上の生薬、溶媒抽出エキスは
、そのまま、または希釈あるいは濃縮し、もしくは凍結
乾燥した後、粉末またはペースト上に調製し所望により
適宜製剤化しプロテアーゼ阻害剤として用いることがで
きる。

〔発明の効果）ＡｙＣ費狗合す〕

本発明のプロテアーゼ阻害剤は以下に説明する実施例か
られかるようにプロテアーゼを強力かつ有効に抑制する
。さらに皮膚に対する刺激やホルモン様副作用を全く与
えないので皮膚に対して非常に安全である。

（実施例１） （１１プロテアーゼの調製 プロテアーゼ（スタフィロコッカス属由来、Ｔｙｐｅ　
　　Ｘ　■、　八ｃｔｉｖｉｔｙ：　　１　〜３　　ｕ
ｎｉｔｓ　　ｐｅｒ　　ｍｇｓｏｌｉｄ、シグマ社製）
を最終濃度が０　、１　ｍｇ　／　ｍＱとなるように０
．１Ｍリン酸緩（近液ｐＨ７，５に８固型した。

（２）溶媒抽出エキス試料の調製 乾燥し粉砕した生薬１〜１０ｇに１０倍量の水、メタノ
ールまたはこれらの混液を加え、振盪抽出するか、また
は加熱還流下に抽出した後上清と沈直に分離した。上清
を減圧下に濃縮乾固して溶媒抽出エキスを得、必要に応
じてこれを水またはメタノールで希釈して溶媒抽出エキ
ス試料とした。

（３）プロテアーゼ活性測定法 カゼイン（Ｈａｍｍａｒｓｔｅｎ）　　１．２ｇ　（ｄ
ｒｙｗｔ　）に０．０５Ｍ　Ｎａ２　ＨＰＯ４１６０Ｊ
を加えてよく分散させ温水中で１０分間加熱しながら攪
拌し冷却する。塩酸水溶液または水酸化ナトリウム水溶
液で調製しｐＨ７，５とし、蒸留水を加えて全量を２０
０ｒｄ２にした。

ｆｌ）プロテアーゼの調製で調製した酵素液中に（２）
溶媒抽出エキス試料の調製で調製した生薬抽出エキスを
所定濃度添加し、３７℃で一定時間放置して処理酵素液
とした。

コントロールとして、生薬抽出エキスのかわりに生薬抽
出エキスの濃度を調製する際に用いた溶媒を生薬抽出エ
キスと同量添加して、処理酵素液と同様に３７℃で一定
時間放置してコントロール酵素液とした。

α二蒙１ 基質５−を５０−共栓付三角フラスコにとり３７°Ｃで
５分間予熱した。これに処理酵素液１−を加え３７℃で
１０分間作用させ、正確に１０分後トリクロル酢酸混液
５−を加えてよく振りまぜ、更に３７℃で３０分間放置
した後口過した（東洋口紙！１ｋＬ４直径１１ω）。口
液を水を対照に層長１０龍、波長２７５ｍμの吸光度Ｅ
ｌｌｌを測定した。

別に空試験として処理酵素液１−を三角フラスコにとり
、トリクロル酢酸混液５−を加え混和しこれに基質５−
を加え、３７℃、３０分間放置した。

以下検体と同様に操作し吸光度Ｅｏを測定した。

又、チロシン標準液（１−／■）５−をとり０、ＩＮ塩
酸にて１００−とし、この液について水を対照に検体と
同様に吸光度ＥＳを測定した。別に０、ＩＮ塩酸につい
ても同様にＥｓｏを測定し式（１１のようにして酵素力
価を計算した。

Ｗ　（Ｕ／■）　　Ｅｓ　−Ｅｓｏ　　　　１０分コン
トロール酵素液を処理酵素液と同様に活性を測定し、式
（１）に準じてコントロール酵素力価Ｅ′を計算した。

処理酵素液が影響された程度を式（２）の阻害率で表し
、その結果を表−１に示した。

（比較例１） （１１プロテアーゼの調製 実施例１の（１）プロテアーゼの調製と同様に調製した
。

（２）プロテアーゼ阻害剤の調製 プロテアーゼ阻害効果のある試薬として知られているフ
ェニルメチルスルフォニルフルオライド（Ｐｈｅｎｙ　
ｍｅｔｈｙｌ　５ｕｌｆｏｎｙ　ｆｌｕｏｒｉｄｅ　：
シグマ社製）をＪ固装した。

（３）プロテアーゼ活性の測定法 実施例１の（３）プロテアーゼ活性の測定法に準じて操
作した。

その結果を表−１に示した。

表−１から明らかなように本発明に係るプロテアーゼ阻
害剤は生薬抽出エキス試料が反応系中にｏ、ｏｏｉ〜０
．１％存在する場合、２０〜９０％のプロテアーゼ阻害
作用を示すことがわかる。さらにプロテアーゼ阻害剤と
してしられているフェニルメチルスルフオルフルオライ
ドは、反応系中に０．０１％特許出願人　　株式会社　
資生堂

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. シャクヤク、オオレン、オオバク、ボタンピ、ゲンノシ
   ョウコ、茶、クジン、シボタンツル、オドリコソウ、サ
   ルビア、西洋ネズ、ハマメリス、およびバーチからなる
   群の１種または２種以上から選ばれる生薬、または上記
   群の１種または２種以上から選ばれた植物の溶媒抽出エ
   キスを有効成分とするプロテアーゼ阻害剤。