JPH0611333B2 - 免疫複合体の吸着体およびそれを用いた免疫複合体の除去装置 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は体液から有害な成分を吸着除去するための吸着
体およびそれを用いた除去装置に関する。さらに詳しく
は体液中より免疫複合体を除去し、自己免疫疾患を抑制
するための吸着体およびそれを用いた免疫複合体の除去
装置に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］ われわれの周囲には、おびただしい種類のウイルス、細
菌、かび、寄生虫などの感染性の異物が存在している。
そのいずれもが生体に疾患をおこすことができ、もし無
制限に生体内で増殖すれば、最終的に生物を殺してしま
うことになる。そこで生体にはこれを防御する機能とし
て免疫系が存在している。この免疫系で主役をなすのが
抗体分子である。つまりウイルスや細菌などの異物が抗
原となり、免疫系を刺激すると、その抗原と選択的に結
合する抗体分子が産生される。

一方自己免疫疾患では、外部の生物でなく自己の細胞や
組織のもつ抗原に対して体液性あるいは細胞性の免疫応
答がおこり、自己に対する抗体（以下、自己抗体とい
う）や抗原抗体が特異的に反応しあって作られる複合体
（以下、免疫複合体という）などが大量に生じる。そし
てこの体液中の免疫複合体は、生理的排除機構によって
処理されず、腎糸球体、関節滑膜、肺、血管壁などの組
織に沈着して自己免疫疾患に特徴的な病態の出現に直接
関わりをもつことが多い。

代表的な自己免疫疾患である全身性エリテマトーデス
（以下、ＳＬＥという）では細胞の核成分、とりわけデ
オキシリボ核酸（以下、ＤＮＡという）に対する抗体
（以下、抗ＤＮＡ抗体という）が体液中に出現し、この
自己抗体自身が抗原と結合して免疫複合体を形成し組織
に沈着することにより組織障害を起こす機構が提唱され
ている。ＳＬＥのばあいは発生した抗ＤＮＡ抗体が同じ
く血中に流出した細胞由来のＤＮＡと免疫複合体を形成
し、血管壁、腎糸球体基底膜に沈着することによりそれ
ぞれ血管炎、ルーブス腎炎を発症することが知られてお
り、実際ＳＬＥでは腎不全により死亡する例が多い。

このように産生した自己抗体と対応抗原との免疫複合体
によりさまざまな症状がひきおこされるわけであるか
ら、治療には免疫複合体のコントロールが非常に重要で
ある。

従来より免疫複合体の産生を抑制する目的でステロイド
剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤などがＳＬＥの
治療に広く用いられている。なかでもステロイド剤はも
っとも一般的に用いられ、パルス療法と呼ばれるステロ
イドの短期超大量投与療法もしばしば行われている。し
かしながら、ステロイドは少量の投与によっても副作用
を生じやすいのでステロイドの短期超大量投与療法によ
れば、さらに大きな副作用を生じさせやすくなるのは自
明である。また、これらの薬剤は長期にわたって用いら
れることが多く、そのようなばあいには副作用がさらに
出やすく、また薬剤耐性によりしだいに増量しなければ
ならないことも多いため症例によってはこれらの薬剤の
使用が不可能であったり、充分な効果を発揮しないばあ
いも多い。とくにＳＬＥの活動期は抗ＤＮＡ抗体および
免疫複合体の抑制がもっとも必要な時期であるにもかか
わらず、上記の理由によりパルス療法や免疫抑制剤など
の薬剤を用いる強力な療法を採用できないばあいも多
い。

一方、これらの薬剤療法とは別のアプローチとして、体
液中の免疫複合体を体外循環によって直接除去しようと
する試みがなされている。もっとも簡便な方法は、免疫
複合体を含む患者の血漿を健常人の血漿と交換する、い
わゆる血漿交換療法である。この方法によって血中の免
疫複合体は大幅に低下し、症状の改善がみられている。
しかしながらこの方法では大量の健常血漿が必要となり
高価であるばかりでなく、該療法処置中に血清肝炎など
の感染の危険性を伴うために広く普及するには至ってい
ない。

血漿交換療法では血漿中のすべての成分が除かれ、健常
血漿と交換されるわけであるが、これに対して病因物質
である免疫複合体を選択的に除去する目的で、分子サイ
ズにより病因物質を分離する血漿分離膜法が開発され
た。この方法では膜により血漿を高分子量画分と低分子
量画分に分離し、病因物質が含まれている高分子量画分
を廃棄し、主要蛋白であるアルブミンが含まれている低
分子量画分を患者に戻すが、免疫複合体は、分子量約16
万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）と抗原との複合体が主
であり、その分子量分布も広いために、アルブミン、正
常なＩｇＧやＩｇＭ（免疫グロブリンＭ）との分離は必
ずしも充分でなく、免疫複合体を除去する際にこれらも
大量に除去され、さらに病因物質と同等以上の分子量の
蛋白はすべて除去されるなどの欠点がある。

したがって、病因物質である免疫複合体をより選択的に
除去し、体液中の有用成分がほとんど失われることのな
い除去手段の出現が望まれていた。

本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意研究を重ねた結
果、体液中の有効成分をほとんど失うことなくほぼ免疫
複合体のみを選択的に吸着しうる吸着体を見出し、本発
明を完成するに至った。

［課題を解決するための手段］ すなわち本発明は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定されてなる免疫複合体の吸着
体ならびに流体の流入口および流出口を有する容器、流
体および詳流体に含まれる成分は通過できるが、前記の
免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、および
前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体からな
る免疫複合体の除去装置に関する。

［実施例］ 本明細書において体液とは血液、血漿、血清、腹水、リ
ンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分、
ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。

本発明において水不溶性多孔質担体とは、アニオン性官
能基を有する化合物を固定するための水に溶解しない性
質を有する物質をいう。本発明に用いる水不溶性多孔質
担体は、大きな径の連続した細孔を有するものが好まし
い。すなわち免疫複合体は、おもにＩｇＧと抗原からな
り、分子量が16万以上であり、分子量が100万位の巨大
分子のものも存在すると予想されるために、これを効率
よく吸着するためには免疫複合体が容易に多抗質体内に
侵入しうることが必要である。

細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入法がもっとも
よく用いられているが、親水性多孔質体のばあいには適
用が難しい。これに変わる細孔径の目安として排除限界
分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水性多孔質
体のいずれにも適用できる。排除限界分子量とは成書
（たとえば波多野博之、花井俊彦著、実験高速液体クロ
マトグラフィー、化学同人）などに述べられているごと
く、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔内に侵入
できない（排除される）分子のうちもっとも小さい分子
量をもつ物の分子量をいう。

排除限界分子量は対象とする化合物により異なることが
知られており、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポリ
エチレングリコールなどについてよく調べられているが
本発明に用いる担体のばあい、免疫複合体にもっとも類
似していると思われる球状蛋白質を用いてえられた値を
用いるのが適当である。

排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質担体を用いて検
討した結果、免疫複合体の吸着に適当な細孔径の範囲
は、40万以上6000万以下であることが明らかになった。
すなわち40万未満の排除限界分子量をもつ水不溶性多孔
質担体を用いたばあいには免疫複合体の吸着量は小さく
実用に耐えない。一方排除限界分子量が大きくなるにつ
れて、免疫複合体の吸着量は増加するがやがて頭打ちと
なり、排除限界分子量が6000万をこえると表面積が少な
すぎ吸着量は目だって低下するばかりでなく、目的とす
る免疫複合体以外の吸着、すなわち非特異吸着が増加し
選択性がいちじるしく低下する。

したがって本発明に用いる水不溶性多孔質担体の好まし
い排除限界分子量は40万以上6000万以下であり、さらに
好ましくはより選択性吸着容量の大きい点から60万以上
2000万以下であるのがよい。

つぎに水不溶性多孔質担体の多孔構造については表面多
孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が吸着容量が
大きいという点から20％以上であることが望ましい。水
不溶性多孔質担体の形状は、粒状、球状、繊維状、膜
状、ホローファイバー状など任意の形状を選ぶことがで
きる。粒状の水不溶性多孔質担体を用いるばあい、その
粒子径は１μｍ未満のばあい圧力損失が大きく、5000μ
ｍをこえるばあい吸着容量が小さい点から１μｍ以上50
00μｍ以下であるのが好ましい。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機性、無機性い
ずれであってもよいが、目的とする免疫複合体以外の体
液成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少ないものが好
ましい。親水性であるほうが非特異吸着が少ないので水
不溶性多孔質担体は疎水性であるよりも、親水性である
ほうが好ましい。

さらに、水不溶性多孔質担体表面には、リガンドの固定
化反応に用いうる官能基が存在していると好都合であ
る。これらの官能基の代表例としては、水酸基、アミノ
基、アルデヒド基、アルボキシル基、チオール基、シラ
ノール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、スクシ
ニルイミド基、酸無水物基などがあげられるが、これら
に限定されるわけではない。また、水不溶性多孔質担体
は前記官能基のなかでも水酸基を有する化合物よりなる
ものであるばあい、非特異吸着が少ないのでとくに好ま
しい。これら官能基をスペーサーとして導入された水不
溶性多孔質担体も、用いうることはいうまでもない。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン、ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および／またはセルロースなどの天然高分
子を原料とする多孔質ポリマーハードゲルなどがあげら
れるがこれらに限定されるわけではない。

本発明の吸着体を体外循環治療に用いる際には、血液、
血漿のごとき高粘性流体を高速で流す必要があるため
に、圧密化を引き起こさない充分な機械的強度を有する
硬質水不溶性多孔質担体を用いるのが好ましい。すなわ
ち硬質水不溶性多孔質担体とは後記参考例に示すごと
く、水不溶性多孔質担体を円筒状カラムに均一に充填
し、水性流体を流通したばあいの圧力損失と流量との関
係が少なくとも0.3kg/cm²まで直線関係にあるものをい
う。

本発明の吸着体のアニオン性官能基は、pHが中性付近で
負に帯電するような官能基であればいかなるものも使用
しうる。これらの代表例としては、カルボキシル基、ス
ルホン酸基、スルホン基、硫酸エステル基、シラノール
基、リン酸エステル基、フェノール性水酸基などがあげ
られるがこれらに限定されるものではない。

アニオン性官能基を有する化合物としては、１分子あた
りひとつのアニオン性官能基を有する化合物であって
も、また複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン
化合物であってもよい。ポリアニオン化合物は、免疫複
合体に対する親和性が大きく、また単位量の水不溶性多
孔質担体に多くのアニオン性官能基を導入しやすいので
好ましい。なかでも分子量が1000以上のポリアニオン化
合物は親和性、アニオン性官能基導入量の点で好まし
い。ポリアニオン化合物が有するアニオン性官能基は１
種類であってもよいし、複数の種類であってもよい。

本発明に用いるポリアニオン化合物の代表例としては、
ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン
酸、ポリビニルリン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリ
スチレンリン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイ
ン酸共重合体などの合成ポリアニオン化合物、およびヘ
パリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン、コンドロ
イチン硫酸、ホスホマンナン、キチン、キトサンなどの
アニオン性官能基含有多糖類があげられるがこれらに限
定されるわけではない。

本発明の吸着体に固定されるアニオン性官能基を有する
化合物は１種類であってもよいし、２種類以上であって
もよい。

本発明の吸着体は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定された状態のものをいう。そ
のようなアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる状態をうるためにアニオン性官能基を水不溶性多孔
質担体に導入する方法としては公知の種々の方法を特別
な制限なしに用いることができるが、そのようなアニオ
ン性官能基を有する化合物が固定されてなる状態をうる
ためのアニオン性官能基の担体への代表的な導入方法と
しては、 (1) アニオン性官能基あるいは容易にアニオン性官能
基に変換しうる官能基を含有する化合物をモノマーある
いは架橋剤として用いる重合によって吸着体を形成させ
る方法、 (2) アニオン性官能基を含有する化合物を水不溶性多
孔質担体に固定させる方法、 (3) アニオン性官能基を形成する化合物と水不溶性多
孔質担体とを直接反応させることによって、水不溶性多
孔質担体にアニオン性官能基を有する化合物を固定させ
る方法 などがあげられる。

もちろんガラス、シリカ、アルミナなどもともとアニオ
ン性官能基を含有するアニオン性官能基含有化合物を吸
着体として用いてもよい。

(1)の方法において用いてアニオン性官能基あるいは容
易にアニオン性官能基に変換しうる官能基を含有するモ
ノマーあるいは架橋剤の代表例としては、アクリル酸お
よびそのエステル、メタクリル酸およびそのエステル、
スチレンスルホン酸などがあげられるがこれらに限定さ
れるわけではない。

(2)の方法、すなわちアニオン性官能基を含有する化合
物を水不溶性多孔質担体に固定させる方法としては、物
理的吸着による方法、イオン結合による方法、共有結合
により固定する方法などがあり、いかなる方法を用いて
もよいが、吸着体の保存性ならびに安定性のためにはア
ニオン性官能基含有化合物が脱離しないことが重要であ
るので、強固な固定が可能な共有結合法が望ましい。

共有結合によりアニオン性官能基含有化合物を固定させ
るばあい、アニオン性官能基含有化合物がアニオン性官
能基以外に固定に利用できる官能基を有するのが好まし
い。

固定に利用できる官能基の代表例としては、アミノ基、
アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシニルイ
ミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン
基、エポキシ基、シラノール基などがあげられるがこれ
らに限定されるわけではない。

これらの官能基を有するアニオン性官能基含有化合物は
多数存在するが、実施例に記載した、スルファニル酸、
ホスホリルエタノールアミン、グリシン、タウリンなど
はその一例である。

また、アニオン性官能基を含有する化合物のうち硫酸エ
ステル基を含有する化合物の代表例としてはアルコー
ル、糖類、グリコールなどの水酸基含有化合物の硫酸エ
ステルがあげられるが、これらのなかでも多価アルコー
ルの部分硫酸エステル化合物、とりわけ糖類の硫酸エス
テル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官能基の双方
を含んでいるうえに、生体適合性および活性ともに高
く、さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔質担体に
固定しうることからとくに好ましい。

つぎに、(3)の方法、すなわちアニオン性官能基を形成
する化合物と水不溶性多孔質担体とを反応させることに
よって、水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有す
る化合物を固定させてアニオン性官能基を導入する方法
の代表例として水酸基含有多孔質担体に硫酸エステル基
を導入する反応があげられる。このばあい、水酸基含有
水不溶性多孔質担体とクロロスルホン酸、濃硫酸などの
試薬を反応させることによって直接硫酸エステル基を導
入することができる。

導入されるアニオン性官能基の量は、吸着体１mlあたり
0.01μmol以上10mmol以下が好ましい。0.01μmol未満の
ばあい吸着能力が充分でなく、10mmolをこえるばあい非
特異吸着が多すぎて実用に供することが困難になる。よ
り好ましいアニオン性官能基導入量は１μmol以上100μ
mol以下であるのがよい。

本発明の吸着体を治療に用いるには種々の方法がある。
もっとも簡便な方法としては患者の血液を体外に導出し
て血液バッグに貯め、これに本発明の吸着体を混合して
免疫複合体を除去後、フィルターを通して吸着体を除去
し、血液を患者に戻す方法がある。この方法は、複雑な
装置を必要としないが、１回の処理量が少なく治療に時
間を要し、操作が煩雑になるという欠点を有する。

つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体外循環回路に
組み込みオンラインで吸着除去を行うものである。すな
わち流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
質担体にアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、お
よび前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体か
らなる免疫複合体の除去装置に体液を通液する方法が簡
便で好ましい。

第２図に本発明の免疫複合体の除去装置の一実施例の概
略断面図を示す。第２図中、(1)および(2)はそれぞれの
流体の流入口と流出口、(3)は本発明の吸着体、(4)およ
び(5)は流体および流体に含まれる成分は通過できるが
本発明の吸着体は通過できないフィルターまたはメッシ
ュ、(6)はカラム、(7)は容器である。ここで流体の流入
口側のフィルター(4)は存在しなくてもよい。

以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。

参考例 両端に孔径15μｍのフィルターを装着したガラス製円筒
カラム（内径9mm、カラム長さ150mm）にアガロースゲル
（バイオラド（Biorado）社製のBiogel A5m、粒径50〜1
00メッシュ）、ポリマー硬質ゲル（東洋曹達工業（株）
製のトヨパールHW65、粒径50〜100μm、およびチッソ
（株）製のセルロファインGC700、粒径45〜105μｍ）を
それぞれ均一に充填しペリスタルティックポンプにより
カラム内に水を流過し、流量と圧力損失ΔＰとの関係を
求めた。その結果を第１図に示す。同図より明らかなよ
うに軟質ゲルであるアガロースゲルは一定の流量以上で
は圧密化をおこし、圧力を増加させても流量が増加しな
いのに対し、トヨパール、セルロファインなどの硬質ゲ
ルは圧力の増加にほぼ比例して流量が増加する。

製造例１ 多孔質セルロースゲルであるCKゲルA3（商品名、チッソ
（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量5000万、粒径45
〜105μｍ）100mlに20％NaOH40g、ヘプタン120ｇおよび
ノニオン系界面活性剤トゥイーン20（商品名、花王アト
ラス（株）製）を10滴加えた。40℃で２時間攪拌後、エ
ピクロルヒドリン50ｇを加えて２時間攪拌し、ゲルを水
洗濾過し、エポキシ基の導入されたセルロースゲル（以
下、エポキシ化ゲルという）をえた。

実施例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにスルファニル酸0.
17ｇを10mlの水に溶解してpH9.9に調整した溶液を加
え、常温で24時間振盪し、0.5％モノエタノールアミン
水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してス
ルファニル酸が固定されたセルロースゲルをえた。固定
されたスルファニル酸により導入されたアニオン性官能
基量は吸着体１mlあたり6.5μmolであった。

実施例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにホスホリルエタノ
ールアミン0.1ｇを10mlの水に溶解してpH9.6に調整した
溶液を加え、40℃で４時間振盪し、0.5％モノエタノー
ルアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封
止してホスホリルエタノールアミンが固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたホスホリルエタノールアミ
ンにより導入されたアニオン性官能基量は吸着体１mlあ
たり４μmolであった。

実施例３ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlに分子量約5000、イ
オウ含量15％のデキストラン硫酸ナトリウム４ｇおよび
水５mlを加えpH９に調整して45℃で16時間振盪した。そ
の後、ゲルを濾別して、2M食塩水溶液、0.5M食塩水溶液
および水を用いてこの順に洗浄し、0.5％モノエタノー
ルアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポキシ基を封
止してデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたセルロ
ースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸により導
入されたアニオン性官能基量は吸着体１mlあたり10μmo
lであった。

実施例４ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにグリシン0.22ｇを
10mlの水に溶解してpH9.8に調整した溶液を加えて常温
で24時間振盪した。その後、ゲルを濾別して、0.5％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポ
キシ基を封止してグリシンが固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたグリシンにより導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１mlあたり９μmolであつた。

実施例５ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５mlにタウリン0.37ｇを
10mlの水に溶解してpH9.0に調整した溶液を加えて常温
で24時間振盪した。その後、ゲルを濾別して、0.5％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポ
キシ基を封止してタウリンが固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたタウリンにより導入されたアニオン
性官能基量は吸着体１mlあたり５μmolであった。

実施例６ 製造例１で用いたものと同様のCKゲルA3、10mlを水洗後
吸引濾過し、これにジメチルスルホキシド６ml、2N-NaO
H2.6ml、エピクロルヒドリン1.5mlを加えて40℃で２時
間攪拌した。反応後ゲルを濾別し、水洗してエポキシ基
の導入されたセルロースゲルをえた。

これに濃アンモニア水６mlを加え40℃で２時間反応させ
てアミノ化セルロースゲルをえた。

このゲル５mlに分子量19万〜50万のポリアクリル酸ナト
リウム0.2ｇを10mlの水に溶解してpH4.5に調整した溶液
を加え、さらに1-エチル-3-（ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド200mgをpH4.5に保ちながら添加し、
４℃で24時間振盪した。反応後ゲルを濾別し、水洗して
ポリアクリル酸の導入されたセルロースゲルをえた。固
定されたポリアクリル酸により導入されたアニオン性官
能基量は吸着体１mlあたり14μmolであった。

実施例７ 多孔質セルロースゲルをCKゲルA22（商品名、チッソ
（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量2000万、粒径45
〜105μｍ）、セルロファインGCL-2000m（商品名、チッ
ソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量300万、粒径4
4〜105μｍ）、セルロファインGCL-1000m（商品名、チ
ッソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量60万、粒径
44〜105μｍ）、セルロファインGC-700m（商品名、チッ
ソ（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量40万、粒径44
〜105μｍ）、セルロファインGC-200m（商品名、チッソ
（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量12万、粒径45〜
105μｍ）、セルロファインGCL-90（商品名、チッソ
（株）製、球状蛋白質の排除限界分子量3.5万、粒径45
〜105μｍ）にかえたほかは製造例１および実施例３と
同様にしてデキストラン硫酸ナトリウムの固定されたセ
ルロースゲルをえた。固定されたデキストラン硫酸によ
り導入されたアニオン性官能基量は吸着体１mlあたりそ
れぞれ16、18、30、24、30、37μmolであった。

実施例８ エポキシ化架橋アガロースゲルであるエポキシアクティ
ベイティッドセファローズCL-6B（商品名、ファルマシ
アファインケミカルズ社製、球状蛋白質の排除限界分子
量400万、粒径45〜165μｍ）ゲルを用いたほかは実施例
３と同様の方法でデキストラン硫酸ナトリウムを固定し
た。固定されたデキストラン硫酸により導入されたアニ
オン性官能基量は吸着体１mlあたり20μmolであった。

実施例９ ポリメタクリル酸メチルを主成分とする親水性多孔性硬
質ヒドロゲルであるFD-HG（商品名、三菱化成（株）
製、球状蛋白質の排除限界分子量400万、粒径120μｍ）
を用いたほかは製造例１および実施例３と同様にしてデ
キストラン硫酸ナトリウムが固定されたゲルをえた。固
定されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性
官能基量は吸着性１mlあたり９μmolであった。

実施例10 実施例６と同様にしてえたアミノ化セルロースゲル2g
に、実施例３で用いたものと同様の分子量5000、イオウ
含量15％のデキストラン硫酸ナトリウム4gを0.1Mリン酸
バッファー（pH8.0）８mlに溶解した液を加え室温で16
時間振盪した。反応後NaCNBH₃20mgを加え室温で30分撹
拌後、40℃で４時間加熱したのちゲルを濾別水洗してデ
キストラン硫酸ナトリウムの固定されたセルロースゲル
をえた。固定されたデキストラン硫酸により導入された
アニオン性官能基量は吸着体１mlあたり18μmolであっ
た。

実施例11 実施例１〜６および10でえられた吸着体および比較の目
的で製造例１で用いた担体のCKゲルA3を15Mトリス緩衝
液（pH7.4）で洗浄したのち、各吸着体0.1mlずつをポリ
プロピレン製マイクロチューブ（容量７ml）にとり、0.
15Mトリス緩衝液（pH7.4）を加えて全量を１mlとした。
これに免疫複合体を含む血清0.2mlずつを加え、25℃で
２時間振盪した。この吸着操作終了後、遠心分離してゲ
ルを沈降させ、採取した上清中の免疫複合体濃度を酵素
免疫抗体法（ELISA法）により測定した。つまり、免疫
複合体濃度は、Clqをコートしたプレートに希釈した検
体を加え、抗原−抗体反応を行い、ペルオキシダーゼ標
識抗ヒト免疫グロブリン抗体を滴下し、酵素発色反応を
SLT-210（商品名、ラボサイエンス（株）製）にて測定
波長486nmで測定した。測定値は、熱変性IgGにより作成
した標準曲線により標準化した。第１表に、各吸着体に
固定されたアニオン性官能基を有する化合物名、および
各吸着体の上澄み中の免疫複合体濃度を希釈を考慮して
原血清中の濃度に換算して示す。

第１表から水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有
する化合物が固定されてなる吸着体は、免疫複合体を吸
着しているのがわかる。そして、デキストラン硫酸が固
定された吸着体の免疫複合体の吸着能がとくに優れてい
ることがわかる。

実施例12 実施例３および７〜９でえられた吸着体を用い、加えた
血清量を0.1mlとしたほかは実施例11と同様の方法にし
たがって上澄み中の免疫複合体濃度を希釈を考慮して原
血清中の濃度に換算して求めた。えられた結果を用いた
種々の水不溶性多孔質担体名とともに第２表に示す。比
較のため原血清の免疫複合体濃度を測定したところ32.3
μg/mlであった。

第２表から、排除限界分子量が40万以下の水不溶性多孔
質担体である実施例７のセルロファインGC-700m、セル
ロファインGC-200mおよびセルロースGCL-90の免疫複合
体吸着能がおとることがわかる。また、逆に、排除限界
分子量を5000万と大きくしすぎても実施例３のセルロー
スCKゲルA3の結果から免疫複合体吸着能は落ちる傾向に
あることがわかる。

［発明の効果］ 本発明の吸着体およびそれを用いた除去装置は体液より
免疫複合体を選択的に除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】 第１図は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフであり、第２図は本発明の免
疫複合体の除去装置の一実施例の概略断面図である。 （図面の主要符号） (1)：流入口 (2)：流出口 (3)：吸着体 (4)、(5)：フィルター (7)：容器

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を
   有する化合物が固定されてなる免疫複合体の吸着体。
2. 【請求項２】水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限
   界分子量が40万以上6000万以下である請求項１記載の免
   疫複合体の吸着体。
3. 【請求項３】水不溶性多孔質担体が水酸基を有する化合
   物よりなる請求項１記載の免疫複合体の吸着体。
4. 【請求項４】アニオン性官能基を有する化合物が、１分
   子内に複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化
   合物である請求項１記載の免疫複合体の吸着体。
5. 【請求項５】流体の流入口および流出口を有する容器、
   流体および該流体に含まれる成分は通過できるが、請求
   項１記載の免疫複合体の吸着体は通過できないフィルタ
   ー、および前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸
   着体からなる免疫複合体の除去装置。