JPH0342070B2 - - Google Patents
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- JPH0342070B2 JPH0342070B2 JP61192157A JP19215786A JPH0342070B2 JP H0342070 B2 JPH0342070 B2 JP H0342070B2 JP 61192157 A JP61192157 A JP 61192157A JP 19215786 A JP19215786 A JP 19215786A JP H0342070 B2 JPH0342070 B2 JP H0342070B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
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Description
（産業上の利用分野）
本発明はイプシロン−ポリ−Ｌ−リシン（以下
εPLと略記する）の生産性を改良し、これを著量
に生産する菌株に関する。 （従来の技術とその問題点） εPLは以下の構造式で表されるように、Ｌ−リ
シンのε位のアミノ基が、隣り合うＬ−リシンの
カルボン酸とアミド結合で結合した高分子化合物
である。 当該物質は必須アミノ酸であるＬ−リシンのポ
リマーであるので安全性が高くかつカチオン含量
が高いので特異な物性を有する。従つて、それら
の性質を利用してトイレタリー用品、化粧品、飼
料添加物、医薬、農薬、食品添加物、電子材料等
の用途が期待できる。 従来、当該物質はストレプトマイセス属に属す
るεPL産生菌であるストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラス
（Streptomyces albulus subsp.
lysinopolymerus）No.346−Ｄ株（微工研菌寄第
3834号）を培地に培養して、得られる培養物から
分離精製して得られている（特公昭59−20359
号）。 しかし、この先願の菌株では培養液１当りせ
いぜい0.5ｇ程度のεPLの生産性しかなく、従つ
て生産コストが高く、当該物質の広範な利用が妨
げられていた。 本発明者らは、εPLを著量に生産する株を得、
これを用いてεPLを多量に製造することを目的と
して研究を重ね、以下に述べる発明に到達した。 （問題点を解決するための手段） 本発明はεPLを産生する菌株を変異処理して得
られる、εPLの生産性を改良し、これを著量に生
産する変異株を提供する。また、本発明はこの変
異株を使用して、これを培地で培養し、εPLを培
養液中に著量に生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする。 変異株はεPLを著量に生産する菌株であり、ス
トレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシー
ズ・リジノポリメラスNo.346−Ｄ株のＬ−リシン
のアナログ物質に耐性を有する変異株が好まし
い。 Ｌ−リシンのアナログ物質は、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システイン、または、このＳ−アミノエ
チル−Ｌ−システインにＬ−スレオニン、グリシ
ン、Ｌ−ホモセリンおよびＬ−メチオニンの中か
ら選ばれる一種または数種の物質を添加したもの
が好ましい。 以下に本発明を詳細に説明する。 先ず、本発明の菌株の取得方法を述べる。Ｌ−
リシンのアナログ物質に耐性を有する変異株、例
えばＳ−アミノエチル−Ｌ−システインの耐性変
異株は、例えば以下の方法で取得する。 ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラスNo.346−Ｄ株の胞子を
トリス−マレイン酸緩衝液（PH9.0）に懸濁し、
これにＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−N′−ニトロソ
グアニジンを添加する。 これを振とう後、遠心分離機により胞子を集
め、滅菌水で洗浄し、培地に接種し、振とう培養
して菌を生育させる。菌を含む培地（以下、培養
液という）を希釈する。次に、Ｓ−アミノエチル
−Ｌ−システイン、あるいはこれにグリシン、Ｌ
−スレオニン、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−メチオニン
のアミノ酸類から一種あるいは数種を選んで前記
培地と同じ組成の寒天培地に添加する。 その際、寒天培地１ml当り0.5〜10mg、好まし
くは２mgの濃度になるようにＳ−アミノエチル−
Ｌ−システイン、または同じ濃度になるようにＳ
−アミノエチル−Ｌ−システインと寒天培地１ml
当り0.2〜５mg、好ましくは１mgの濃度になるよ
うに前記アミノ酸類を加えたものを用いる。この
寒天培地に、先の培養希釈液を塗布する。この寒
天培地を保温した後、コロニーとして生育した菌
株がＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異
株である。このとき、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステインのみを添加した寒天培地で生育した菌株
が耐性変異株81512株であり、Ｓ−アミノエチル
−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培地
に生育した菌株が耐性変異株11011A−１株（微
工研条寄第1109号）であり、さらに、Ｓ−アミノ
エチル−Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加
した寒天培地で生育した菌株が耐性変異株81502
株である。 これらの変異株のうち、11011A−１株の菌学
的性質を示すと次の通りである。 (1) 形態学的性質 シユークロース・硝酸塩寒天培地上で30℃、
10日間生育した11011A−１株の気菌糸および
基生菌糸を顕微鏡で観察した結果を次に示す。 胞子形成菌糸の分枝法および形態： 単純分枝、閉鎖らせん状（closed spiral） 胞子の数：数十個 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約1.2〜
1.5μであり、その表面構造はスパイニー
（Spiny）である。 鞭毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在
が認められない。 胞子柄の着生位置：気菌糸上 (2) 各種培地上における生育状態 下記の各種培地上における性状はそれぞれ30
℃で10〜14日間培養後の観察結果である。
εPLと略記する）の生産性を改良し、これを著量
に生産する菌株に関する。 （従来の技術とその問題点） εPLは以下の構造式で表されるように、Ｌ−リ
シンのε位のアミノ基が、隣り合うＬ−リシンの
カルボン酸とアミド結合で結合した高分子化合物
である。 当該物質は必須アミノ酸であるＬ−リシンのポ
リマーであるので安全性が高くかつカチオン含量
が高いので特異な物性を有する。従つて、それら
の性質を利用してトイレタリー用品、化粧品、飼
料添加物、医薬、農薬、食品添加物、電子材料等
の用途が期待できる。 従来、当該物質はストレプトマイセス属に属す
るεPL産生菌であるストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラス
（Streptomyces albulus subsp.
lysinopolymerus）No.346−Ｄ株（微工研菌寄第
3834号）を培地に培養して、得られる培養物から
分離精製して得られている（特公昭59−20359
号）。 しかし、この先願の菌株では培養液１当りせ
いぜい0.5ｇ程度のεPLの生産性しかなく、従つ
て生産コストが高く、当該物質の広範な利用が妨
げられていた。 本発明者らは、εPLを著量に生産する株を得、
これを用いてεPLを多量に製造することを目的と
して研究を重ね、以下に述べる発明に到達した。 （問題点を解決するための手段） 本発明はεPLを産生する菌株を変異処理して得
られる、εPLの生産性を改良し、これを著量に生
産する変異株を提供する。また、本発明はこの変
異株を使用して、これを培地で培養し、εPLを培
養液中に著量に生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする。 変異株はεPLを著量に生産する菌株であり、ス
トレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシー
ズ・リジノポリメラスNo.346−Ｄ株のＬ−リシン
のアナログ物質に耐性を有する変異株が好まし
い。 Ｌ−リシンのアナログ物質は、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システイン、または、このＳ−アミノエ
チル−Ｌ−システインにＬ−スレオニン、グリシ
ン、Ｌ−ホモセリンおよびＬ−メチオニンの中か
ら選ばれる一種または数種の物質を添加したもの
が好ましい。 以下に本発明を詳細に説明する。 先ず、本発明の菌株の取得方法を述べる。Ｌ−
リシンのアナログ物質に耐性を有する変異株、例
えばＳ−アミノエチル−Ｌ−システインの耐性変
異株は、例えば以下の方法で取得する。 ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラスNo.346−Ｄ株の胞子を
トリス−マレイン酸緩衝液（PH9.0）に懸濁し、
これにＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−N′−ニトロソ
グアニジンを添加する。 これを振とう後、遠心分離機により胞子を集
め、滅菌水で洗浄し、培地に接種し、振とう培養
して菌を生育させる。菌を含む培地（以下、培養
液という）を希釈する。次に、Ｓ−アミノエチル
−Ｌ−システイン、あるいはこれにグリシン、Ｌ
−スレオニン、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−メチオニン
のアミノ酸類から一種あるいは数種を選んで前記
培地と同じ組成の寒天培地に添加する。 その際、寒天培地１ml当り0.5〜10mg、好まし
くは２mgの濃度になるようにＳ−アミノエチル−
Ｌ−システイン、または同じ濃度になるようにＳ
−アミノエチル−Ｌ−システインと寒天培地１ml
当り0.2〜５mg、好ましくは１mgの濃度になるよ
うに前記アミノ酸類を加えたものを用いる。この
寒天培地に、先の培養希釈液を塗布する。この寒
天培地を保温した後、コロニーとして生育した菌
株がＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異
株である。このとき、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステインのみを添加した寒天培地で生育した菌株
が耐性変異株81512株であり、Ｓ−アミノエチル
−Ｌ−システインにグリシンを添加した寒天培地
に生育した菌株が耐性変異株11011A−１株（微
工研条寄第1109号）であり、さらに、Ｓ−アミノ
エチル−Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加
した寒天培地で生育した菌株が耐性変異株81502
株である。 これらの変異株のうち、11011A−１株の菌学
的性質を示すと次の通りである。 (1) 形態学的性質 シユークロース・硝酸塩寒天培地上で30℃、
10日間生育した11011A−１株の気菌糸および
基生菌糸を顕微鏡で観察した結果を次に示す。 胞子形成菌糸の分枝法および形態： 単純分枝、閉鎖らせん状（closed spiral） 胞子の数：数十個 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約1.2〜
1.5μであり、その表面構造はスパイニー
（Spiny）である。 鞭毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在
が認められない。 胞子柄の着生位置：気菌糸上 (2) 各種培地上における生育状態 下記の各種培地上における性状はそれぞれ30
℃で10〜14日間培養後の観察結果である。
【表】
(3) 生理的性質
11011A−１株の生理的性質は次の通りであ
る。 生育温度範囲 約15〜40℃。生育最適温度：30℃付近。 ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および
脱脂牛乳のペプトン化：すべて陽性 脱脂牛乳の凝固：陰性 メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成
する。 細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の
型についてベツカー（Becker）らの方法
〔アプライド・マイクロバイオロジー第13巻
第236頁（1965年）参照〕により分析した結
果、Ｌ，Ｌ型であつた。 (4) 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリ
ープ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シユークロース − ラフイノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉ−イノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −：同化しない。 以上記述したように、本発明の変異株の菌学的
性質は原菌株であるストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
346−Ｄ株の菌学的性質と類似している。 次にこれらの方法で得られた変異株を用いて本
発明方法によりεPLを製造する。なお、文中の％
は特に記さないかぎり重量（ｇ）／容量（ml）％
を示す。 まず、得られた変異株を培地に接種して培養
し、培養液から生成蓄積したεPLを分離・精製す
る。培地は炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンが
含まれていれば、いかなるものでもよいが、好ま
しくは炭素源としてブドウ糖５％、あるいはグリ
セリン５％を含み、窒素源として硫酸アンモニウ
ム、あるいはＬ−リシンあるいはペプトンを含む
ものが良い。培養途中で炭素源、窒素源を逐次添
加してもよい。PHは培養初期はPH4.0になるまで
下がるにまかせ、その後水酸化ナトリウム水溶液
等のアルカリでPH4.0を維持するようにしても良
い。培養液から遠心分離機あるいはフイルターで
菌体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを
濃縮する。濃縮液からアセトン、エタノール等の
有機溶媒でεPLを晶析する。 （発明の効果） 本発明の変異株はεPLの生産性を改良し、これ
を著量に生産する能力を有しており、該変異株を
培養することによつて公知の菌株を用いるよりも
著量にεPLを産生することができるので、εPLの
生産コストを従来に比べて大幅に引き下げること
ができる。 （実施例） 以下、本発明を実施例につき詳細に述べる。 実施例 １ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性株の取
得： ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラス（Streptomyces
albulus subsp.lysinopolymerus）No.346−Ｄ株の
胞子１白金耳量をトリスーマレイン酸緩衝液（PH
9.0）５mlに懸濁し、これにＮ−メチル−Ｎ−ニ
トロ−N′−ニトロソグアニジンを1.5mg/mlの濃度
になるように添加した。これを、30分間、30℃で
振とうした後、遠心分離機により胞子を集め、滅
菌水で洗浄し、ブドウ糖５％、硫酸アンモニウム
１％、酵母エキス0.5％、リン酸二水素一カリウ
ム・７水塩0.136％、リン酸一水素二ナトリウ
ム・12水塩0.158％、硫酸マグネシウム・７水塩
0.05％、硫酸亜鉛・７水塩0.004％、硫酸第一
鉄・７水塩0.003％、PH6.8の培地（以下第１培地
と呼ぶ）５mlに接種し、一昼夜30℃で振とう培養
し、菌を生育させた。 その培養液をMS溶液（組成は硫酸マグネシウ
ム・７水塩0.05％、塩化ナトリウム0.5％、ツイ
ーン80 0.05％）で5000倍に希釈する。次いで、
この希釈培養液を、寒天培地１ml当り２mgの濃度
になるようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システイ
ン、またはこの濃度になるようにＳ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインおよび寒天培地１ml当り１mg
の濃度になるようにグリシンまたはＬ−スレオニ
ンを添加した前述の第１培地と同じ組成の寒天培
地に塗布した。この寒天培地を、30℃で48時間保
温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システイン耐性変異株を得た。 このうち、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン
のみ添加した寒天培地中の１株が81512株である。
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システインにグリシンを
添加した寒天培地中の１株が11011A−１株（微
工研条寄第1109号）である。Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加した寒天
培地中の１株が81502株である。 εPLの生産： 前記第１培地と同じ組成の培地５mlにＳ−アミ
ノエチル−Ｌ−システイン耐性株81512株を１白
金耳量接種し、30℃で８日間振とう培養した。培
養終了後、培養液中のεPLの濃度をイツアキ
（Itzhaki）の方法で測定した。 その結果を表１に示す。 実施例 ２および３ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
81512株の代わりに、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン＋グリシン耐性変異株11011A−１株
（微工研条寄第1109号）（実施例２）、Ｓ−アミノ
エチル−Ｌ−システイン＋Ｌ−スレオニン耐性変
異株81502株（実施例３）を用いた以外は、実施
例１と同様の方法で培養し、εPLの濃度を同様の
方法で測定した。 その結果を表１に示す。 実施例 ４ プラスミド増幅性変異株の取得： 実施例１で得られたＳ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン耐性変異株を、実施例１に記載した第１
培地と同じ組成の培地５mlに接種する。 これを30℃２日間振とう培養した後に、クロラ
ムフエニコールを培養液１当り50から500mg、
好ましくは100mgの濃度になるように添加し、さ
らに５から10時間好ましくは８時間培養を続け
る。遠心分離して菌体を集め、滅菌水あるいは生
理食塩水で洗浄した後、第１培地と同じ組成の培
地に寒天1.7％を加えた寒天培地に菌を塗布する。 ８日間30℃で静置培養した後、ブドウ球菌
（Staphylococcus aureus）を含む普通寒天培地
を重層し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌
の生育阻止円の大きな株がプラスミド増幅性εPL
高生産株である。この中の１株が50833株（微工
研条寄第1110号）である。 εPLの生産： 得られたプラスミド増幅性変異株50833株を用
いた以外は、実施例１と同様の方法で培養し、
εPLの濃度も同様の方法で測定した。 その結果を表１に示す。 比較例 １ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
81512株の代わりに、ストレプトマイセス・アル
ブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
346−Ｄ株を用いた以外は、実施例１と同様の方
法で培養し、εPLの濃度を同様の方法で測定し
た。 その結果を表１に示す。
る。 生育温度範囲 約15〜40℃。生育最適温度：30℃付近。 ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および
脱脂牛乳のペプトン化：すべて陽性 脱脂牛乳の凝固：陰性 メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成
する。 細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の
型についてベツカー（Becker）らの方法
〔アプライド・マイクロバイオロジー第13巻
第236頁（1965年）参照〕により分析した結
果、Ｌ，Ｌ型であつた。 (4) 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴツトリ
ープ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シユークロース − ラフイノース − Ｄ−マンニトール ＋ ｉ−イノシトール ＋ サリシン − 註）＋：同化する、 −：同化しない。 以上記述したように、本発明の変異株の菌学的
性質は原菌株であるストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
346−Ｄ株の菌学的性質と類似している。 次にこれらの方法で得られた変異株を用いて本
発明方法によりεPLを製造する。なお、文中の％
は特に記さないかぎり重量（ｇ）／容量（ml）％
を示す。 まず、得られた変異株を培地に接種して培養
し、培養液から生成蓄積したεPLを分離・精製す
る。培地は炭素源、窒素源、無機塩、ビタミンが
含まれていれば、いかなるものでもよいが、好ま
しくは炭素源としてブドウ糖５％、あるいはグリ
セリン５％を含み、窒素源として硫酸アンモニウ
ム、あるいはＬ−リシンあるいはペプトンを含む
ものが良い。培養途中で炭素源、窒素源を逐次添
加してもよい。PHは培養初期はPH4.0になるまで
下がるにまかせ、その後水酸化ナトリウム水溶液
等のアルカリでPH4.0を維持するようにしても良
い。培養液から遠心分離機あるいはフイルターで
菌体を除いた後、濾過液を精製・脱色し、これを
濃縮する。濃縮液からアセトン、エタノール等の
有機溶媒でεPLを晶析する。 （発明の効果） 本発明の変異株はεPLの生産性を改良し、これ
を著量に生産する能力を有しており、該変異株を
培養することによつて公知の菌株を用いるよりも
著量にεPLを産生することができるので、εPLの
生産コストを従来に比べて大幅に引き下げること
ができる。 （実施例） 以下、本発明を実施例につき詳細に述べる。 実施例 １ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性株の取
得： ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピー
シーズ・リジノポリメラス（Streptomyces
albulus subsp.lysinopolymerus）No.346−Ｄ株の
胞子１白金耳量をトリスーマレイン酸緩衝液（PH
9.0）５mlに懸濁し、これにＮ−メチル−Ｎ−ニ
トロ−N′−ニトロソグアニジンを1.5mg/mlの濃度
になるように添加した。これを、30分間、30℃で
振とうした後、遠心分離機により胞子を集め、滅
菌水で洗浄し、ブドウ糖５％、硫酸アンモニウム
１％、酵母エキス0.5％、リン酸二水素一カリウ
ム・７水塩0.136％、リン酸一水素二ナトリウ
ム・12水塩0.158％、硫酸マグネシウム・７水塩
0.05％、硫酸亜鉛・７水塩0.004％、硫酸第一
鉄・７水塩0.003％、PH6.8の培地（以下第１培地
と呼ぶ）５mlに接種し、一昼夜30℃で振とう培養
し、菌を生育させた。 その培養液をMS溶液（組成は硫酸マグネシウ
ム・７水塩0.05％、塩化ナトリウム0.5％、ツイ
ーン80 0.05％）で5000倍に希釈する。次いで、
この希釈培養液を、寒天培地１ml当り２mgの濃度
になるようにＳ−アミノエチル−Ｌ−システイ
ン、またはこの濃度になるようにＳ−アミノエチ
ル−Ｌ−システインおよび寒天培地１ml当り１mg
の濃度になるようにグリシンまたはＬ−スレオニ
ンを添加した前述の第１培地と同じ組成の寒天培
地に塗布した。この寒天培地を、30℃で48時間保
温し、コロニーとして生育させ、Ｓ−アミノエチ
ル−Ｌ−システイン耐性変異株を得た。 このうち、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン
のみ添加した寒天培地中の１株が81512株である。
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システインにグリシンを
添加した寒天培地中の１株が11011A−１株（微
工研条寄第1109号）である。Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システインにＬ−スレオニンを添加した寒天
培地中の１株が81502株である。 εPLの生産： 前記第１培地と同じ組成の培地５mlにＳ−アミ
ノエチル−Ｌ−システイン耐性株81512株を１白
金耳量接種し、30℃で８日間振とう培養した。培
養終了後、培養液中のεPLの濃度をイツアキ
（Itzhaki）の方法で測定した。 その結果を表１に示す。 実施例 ２および３ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
81512株の代わりに、Ｓ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン＋グリシン耐性変異株11011A−１株
（微工研条寄第1109号）（実施例２）、Ｓ−アミノ
エチル−Ｌ−システイン＋Ｌ−スレオニン耐性変
異株81502株（実施例３）を用いた以外は、実施
例１と同様の方法で培養し、εPLの濃度を同様の
方法で測定した。 その結果を表１に示す。 実施例 ４ プラスミド増幅性変異株の取得： 実施例１で得られたＳ−アミノエチル−Ｌ−シ
ステイン耐性変異株を、実施例１に記載した第１
培地と同じ組成の培地５mlに接種する。 これを30℃２日間振とう培養した後に、クロラ
ムフエニコールを培養液１当り50から500mg、
好ましくは100mgの濃度になるように添加し、さ
らに５から10時間好ましくは８時間培養を続け
る。遠心分離して菌体を集め、滅菌水あるいは生
理食塩水で洗浄した後、第１培地と同じ組成の培
地に寒天1.7％を加えた寒天培地に菌を塗布する。 ８日間30℃で静置培養した後、ブドウ球菌
（Staphylococcus aureus）を含む普通寒天培地
を重層し、さらに１夜培養し生成したブドウ球菌
の生育阻止円の大きな株がプラスミド増幅性εPL
高生産株である。この中の１株が50833株（微工
研条寄第1110号）である。 εPLの生産： 得られたプラスミド増幅性変異株50833株を用
いた以外は、実施例１と同様の方法で培養し、
εPLの濃度も同様の方法で測定した。 その結果を表１に示す。 比較例 １ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
81512株の代わりに、ストレプトマイセス・アル
ブラス・サブスピーシーズ・リジノポリメラスNo.
346−Ｄ株を用いた以外は、実施例１と同様の方
法で培養し、εPLの濃度を同様の方法で測定し
た。 その結果を表１に示す。
【表】
実施例 ５
実施例１に記載した第１培地と同じ組成の培地
1.5に0.05容量％のポリオキシアルキレングリ
コール誘導体消泡剤を加え、Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システイン耐性変異株11011A−１株を前培
養した培養液50mlを接種し、600rpm、通気量２
／min.、30℃で培養した。 24時間後に、ブドウ糖５％、硫酸アンモニウム
１％を無菌的に添加した。PH低下後、PHが4.0以
下にならないように6N水酸化ナトリウムをPHコ
ントローラーで自動的に連続制御しながら加え
た。培養後、遠心分離機で菌体を除去し培養液中
のεPLをアニオン交換樹脂IRA−402、カチオン
交換樹脂IRC−50、活性炭カルボラフイン50wで
精製して表２に示す結果を得た。 比較例 ２ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
11011A−１株の代わりに、ストレプトマイセ
ス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリ
メラスNo.346−Ｄ株を用いた以外は実施例５と同
様の方法で培養し、同様に精製して表２に示す結
果を得た。
1.5に0.05容量％のポリオキシアルキレングリ
コール誘導体消泡剤を加え、Ｓ−アミノエチル−
Ｌ−システイン耐性変異株11011A−１株を前培
養した培養液50mlを接種し、600rpm、通気量２
／min.、30℃で培養した。 24時間後に、ブドウ糖５％、硫酸アンモニウム
１％を無菌的に添加した。PH低下後、PHが4.0以
下にならないように6N水酸化ナトリウムをPHコ
ントローラーで自動的に連続制御しながら加え
た。培養後、遠心分離機で菌体を除去し培養液中
のεPLをアニオン交換樹脂IRA−402、カチオン
交換樹脂IRC−50、活性炭カルボラフイン50wで
精製して表２に示す結果を得た。 比較例 ２ Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株
11011A−１株の代わりに、ストレプトマイセ
ス・アルブラス・サブスピーシーズ・リジノポリ
メラスNo.346−Ｄ株を用いた以外は実施例５と同
様の方法で培養し、同様に精製して表２に示す結
果を得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピ
ーシーズ・リジノポリメラス（Streptomyces
albulus subsp.lysinopolymerus）菌株を変異処
理して得られ、Ｌ−リシンのアナログ物質に耐性
を有するイプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを生産す
る菌株。 ２ Ｌ−リシンのアナログ物質が、Ｓ−アミノエ
チル−Ｌ−システイン、または、このＳ−アミノ
エチル−Ｌ−システインにＬ−スレオニン、グリ
シン、Ｌ−ホモセリン、およびＬ−メチオニンの
中から選ばれる一種または二種以上の物質を添加
したものである特許請求の範囲第１項記載の菌
株。 ３ イプシロン−ポリ−Ｌ−リシンを生産する菌
株が、ストレプトマイセス・アルブラス・サブス
ピーシーズ・リジノポリメラス（Streptomyces
albulus subsp.lysinopolymerus）No.346−Ｄ株の
Ｓ−アミノエチル−Ｌ−システインにグリシンを
添加したものに耐性を持つ変異株11011A−１株
（微工研条寄第1109号）である特許請求の範囲第
１項記載の菌株。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192157A JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
| EP87111253A EP0256423B1 (en) | 1986-08-19 | 1987-08-04 | Strain mass-producing epsilon-poly-l-lysine, a method for using its strain and a method for producing epsilon-poly-l-lysine |
| DE8787111253T DE3785266T2 (de) | 1986-08-19 | 1987-08-04 | Stamm zur massenproduktion von epsilon-poly-l-lysin, methode, um diesen stamm zu gebrauchen, und methode zur herstellung von epsilon-poly-l-lysin. |
| JP27773890A JPH03143398A (ja) | 1986-08-19 | 1990-10-18 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンの製造方法 |
| JP4548791A JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
| US07/864,183 US5294552A (en) | 1986-08-19 | 1992-04-03 | Strain mass-producing ε-poly-L-lysine |
| US08/200,361 US5434060A (en) | 1986-08-19 | 1994-02-23 | Method for producing ε-poly-L-lysine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192157A JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27773890A Division JPH03143398A (ja) | 1986-08-19 | 1990-10-18 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンの製造方法 |
| JP4548791A Division JPH0675501B2 (ja) | 1986-08-19 | 1991-02-19 | イプシロン−ポリ−ｌ−リシンを生産する菌株 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6349075A JPS6349075A (ja) | 1988-03-01 |
| JPH0342070B2 true JPH0342070B2 (ja) | 1991-06-26 |
Family
ID=16286641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61192157A Granted JPS6349075A (ja) | 1986-08-19 | 1986-08-19 | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンを生産する菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6349075A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019039544A1 (ja) | 2017-08-23 | 2019-02-28 | 公立大学法人福井県立大学 | クリック官能基をもつε－ポリ－Ｌ－リジン誘導体、その製法、及びその用途 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69322893T2 (de) * | 1992-02-26 | 1999-05-27 | Chisso Corp., Osaka | Verfahren zur Herstellung von Epsilon-poly-L-Lysin |
| JP3525190B2 (ja) * | 1995-10-24 | 2004-05-10 | チッソ株式会社 | ε−ポリ−Ｌ−リジンを著量に生産する菌株及びそれを用いたε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61192158A (ja) * | 1985-02-21 | 1986-08-26 | Canon Inc | 画像読み取り装置 |
-
1986
- 1986-08-19 JP JP61192157A patent/JPS6349075A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019039544A1 (ja) | 2017-08-23 | 2019-02-28 | 公立大学法人福井県立大学 | クリック官能基をもつε－ポリ－Ｌ－リジン誘導体、その製法、及びその用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6349075A (ja) | 1988-03-01 |
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