JPH01206996A - １．３―ジヒドロキシ―８―デセン―５―オンを含む免疫賦活剤及び制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は免疫賦活作用及び制癌作用を有する１゜３−ジ
ヒドロキシ−８−デセン−５−オンの新規な製造法に関
し、また、これを有効成分とする免疫賦活剤及び制癌剤
に関するものである。

〔従来の技術〕

１．３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンがストレ
プトミセス・フイムブリアタス（Ｓ　ｔｒｅｐ　ｔｏｍ
ｙｃｅｓｆ　ｉｍｂｒｉａｔｕｓ）Ｔｉｉ２３３５株に
よって生産されることは既に知られている（Ｈｅｌｖｅ
ｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ　　第６６巻１２
５３〜１２６１頁（１９８３年））。しかしながら、そ
の生産方法について検討してみると微生物の培養及び生
成物の構成、採取方法は、すべて実験室規模で行われて
おり、その収量も明示されておらず工業的発明とは言い
得ないものである。

而うして、１．３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オ
ンンがストレプトミセス・シラッス（Ｓ　ｔｒｅｐ　Ｌ
ｏ…ｙｃｅｓｃｉｒｒａｔｕｓ）に属する菌株によって
生産されることは未だ知られていなかったし、また、こ
の物質が免疫賦活作用を有し、更に、制癌作用を有する
ことも知られていなかった。

本発明は、免疫賦活作用、制癌作用を有する１゜３−ジ
ヒドロキシ−８−デセン−５−オンを新らしい微生物を
使用して効率よく工業的規模で生産する方法を見出し、
新らしい免疫賦活剤及び制癌剤を提供しようとするもの
である。

〔発明が解決しようとする問題点〕

新らしい免疫賦活剤や制癌剤の出現は病気の有効な治療
を可能にするため待ち望まれているところである。

本発明者らは、昭和６０年６月、微生物化学研究所にお
いて研究所構内の土壌より分離された放線菌の一菌株Ｍ
ｆ１６６３−ｍＦ３が、マウスに移植した固型癌の増殖
を強く抑制する物質をその培養濾液中に生産することを
発見し、この生理活性物質を精製単離した。本活性物質
についてその化学構造を詳細に検討した結果、１９８３
年、Ｗ、　Ｋ、　−５ｃｈｉｅｒｌｅｉｎとり、Ｗｕｔ
ｈｉｅｒがＨｅ１ｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃ
ｔａに報告した１、３−ジヒドロキシ−８−デセン−５
−オンであると同定した。

本発明においては、この生理活性物質を効率よく醗酵法
により得るとともに、従来まで知られていなかった免疫
賦活作用や制癌作用を有することを見出し、新しい免疫
賦活剤及び制癌剤を提供しようとするものである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、以下に述べる形態学的研究及びその性状
から、前記ＭＨ６６３−ｍＦ３菌株をストレプトミセス
・シラッス（且皿旦匣圧照　ｃｉｒｒａｔｕｓ）に属す
る新菌株であると同定した。

〔本物質の理化学的性状〕

本菌株を放線菌の培養に通常用いられる方法に従って培
養することにより培地中に生理活性物質が生産される。

この生理活性物質は無色油状の物質であり、下記の立体
化学構造式を有し、次の物性をする（３Ｓ、８１Ｅ）−
１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オン（（３Ｓ
、８Ｂ）−１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−８−ｄｅｃｅ
ｎ−５−ｏｎ）である。

分子式：０１゜Ｈｌ。０゜ 質量分析：　（ＥＩ−ＭＡＳＳ電子イオン化質量分析）
１８６（Ｍ”）　　、１６８（Ｍ”　−Ｈ２Ｏ）比施光
度：　〔α）　　＋３０．２°（ｃＯ，５，クロロホル
ム） 紫外部吸収極大：吸収極大（ｎｍ）、括弧内はｌｏｇ（
ε）メタノール中：２７９．８（１，４５）赤外部吸収
極大：波数（（Ｊ−’） １７０２．１６６０．９８２ なお、添付図面の第１図に本物質の臭化カリウム錠によ
る赤外部吸収スペクトルを示す。

第１図において、横軸は波数（ｃｔａ　−’　）を、縦
軸は透過率（％）を表わす。

溶解性：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに易溶
であり、水に難溶である。

薄層シリカゲルクロマトグラフィーのＲｆ値：メルク社
　シリカゲル　ＴＬＣプレート　隘５７２１、酢酸エチ
ルで展開、０．３６核磁気共鳴スペクトル： 重クロロホルム中のプロトン核磁気共鳴スペクトルを添
付図面の第２図に示す。図の横軸はｐｐｒａを表わす。

なお、内部基準はテトラメチルシランである。更にまた
、重クロロホルム中の１３ｃ核磁気共鳴スペクトルを第
１表に示す。

注：Ｓは一重線、　ｄは二重線、 ｔは三重線、　ｑは四重線、 内部基準：テトラメチルシラン 〔微生物の同定〕 １、形態 Ｍｌ１６６３−ｍＦ３株は、顕微鏡下で、よく分枝した
基中菌糸より螺旋形成を有する気菌糸を伸長し、輪生技
は認められない。成熟した胞子鎖は、１０〜５０個の胞
子の連鎖を認め、胞子の大きさは０．５−０゜７　Ｘｏ
、８−１．１　ミクロン位である。なお、胞子の表面は
平滑である。

２、各種培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オプ・アメリカのカラー・ハーモニ
イー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａ
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡｍｅｒｉｃａのＣｏ１ｏｒ　Ｈａｒ
ｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）　　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養
）うす黄の発育上に白〜茶白（３ｈａ、　Ｐｅａｒｌ）
の気菌糸を着生する。溶解性色素は、わずかに黄色味を
帯びる程度である。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
） うす黄（１１／Ｊｃ、　ｔ、ｔ、　Ａｉｔｉｑｕｅ　Ｇ
ｏｌｄ　）　〜にぶ黄（２ｉｃ、　ｌ１ｏｎｅｙ　Ｇｏ
ｌｄ）の発育上に、茶白の気菌糸を部分的に着生する。

溶解性色素は、黄色味を帯びる。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５．２７℃培養） うす黄色（２ｉｃ、　Ｈｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）　〜うす
黄茶（２ｎｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｇｏｌｄ）の発育上
に、茶白〜うす茶（４ｅｃ、　Ｂ１５ｑｕｅ）あるいは
明るい茶灰の気菌糸を部分的に着生する。気菌糸は、培
養後１４日目頃より湿潤化し、明るい茶（４ｎｇ。

Ｌｔ、　Ｂｒｏｗｎ　）を呈する。溶解性色素は、かす
かに黄色味を帯びる程度である。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４．２
７℃培養） うす黄（２ｇｃ＋　Ｂａｓ＋ｂｏｏ〜２　ｉｃ＋　）Ｉ
ｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）の発育上に、茶色〜うす茶、ある
いは明るい茶灰の気菌糸を着生する。気菌糸は、培養後
１０日目頃より湿潤化し、明るい茶を呈する。

溶解性色素は、かすかに黄色味を帯びる程度である。

（５）チロシン寒天培地Ｃｌ５Ｐ＝培地７．２７℃培養
）うす黄（２ｇＣ，Ｂａｍｂｏｏ〜２　ｉｃ、　ｌ１ｏ
ｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）の発育上に、白〜茶色、あるいはう
す茶〔４ｅｃ、　Ｂ１５ｑｕｅ）の気菌糸を着生する。

気菌糸は、培養後１４日目頃より湿潤化し、明るい茶を
呈する。溶解性色素は、かすかに黄色味を帯びる程度で
ある。

（６ン　栄養寒天培地（２７℃培養） うす黄茶（２１ｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ）　〜うす茶（３
ｎｇ。

Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌｅ）の発育上に灰味白の気菌糸
を着生する。溶解性色素は、茶色味を帯びる。

（７）　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．
２７℃培養） うす黄茶（２ｎｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｇｏｌｄ）の発
育上に、茶白〜うす茶、あるいは明るい茶灰の気菌糸を
着生する。気菌糸は、培養後１４日目頃より湿潤化し、
明るい茶を呈する。溶解性色素は、かすかに黄色味を帯
びる程度である。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７℃
培養） 無色〜うす黄の発育上に、茶白〜うす茶気菌糸を着生す
る。気菌糸は、培養後１４日目頃より湿潤化し、明るい
茶を呈する。溶解性色素は、かすかに黄色味を帯びる程
度である。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無色
〜うす黄の発育上に、白の気菌糸をうつすらと着生し、
溶解性色素は、認められない。

Ｑｌ　　スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄の発育
上に、白〜茶白（４ｃａ、　Ｐｅａｒｌ　Ｐｉｎｋ）気
菌糸を着生するが、培養後１０日目頃より気菌糸は湿潤
化し、うす茶（３１ｅ。

Ｃｉｎｎａｍｏｎ）　〜明るい茶（４ｐｇ、　ＤＫ、　
ＬｕｇｇａｇｅＴａｎ　）を呈する。溶解性色素は、黄
色味を帯びる。

Ｑｌｌ　　リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）うす黄
の発育上に、白〜茶白（３ｂａ、　Ｐｅａｒｌ〕気菌糸
を着生する。気菌糸は、培養後ｌＯ０日目頃り湿潤化し
、うす茶（３１ｅ、　Ｃｉｎｎ−ａｍｏｎ）　〜明るい
茶（４’ｇ＋　ｔ、ｔ、　Ｂｒｏｗｎ　）を呈する。溶
解性色素は認められない。

０乃　セルロース（２７℃培養） 発育は無色、条目の気菌糸を着生する。溶解性色素は認
められない。

０罎　ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では、発育はう
す黄（２ｉｃ、　１ｌｏｎｅｙ　Ｇｏｌｄ）　〜うす黄
茶、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は黄色味
を帯びる。グルコース・ベプｌ−７・ゼラチン培地（２
７℃培養）の場合、発育はうす黄だいだい（３ｇｃ、　
Ｌｔ、　Ｔａｎ　）　〜うす茶（３ｉｅ＋　Ｃａｍｅｌ
）　、気菌糸は着生せず、溶解性色素はかすかに茶色味
を帯びる程度である。

Ｃａ　脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認めら
れない。

３、生理的性質 （１）　　生育温度範囲 スターチ・イースト寒天培地（可溶性デンプン１．０％
、イースト・エキス０．２％紐寒天３．０％、ｐＨ７，
０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃
、５０℃の各温度で試験した結果５０℃を除いてそのい
ずれの温度でも生育したが、至適温度は３０〜３７℃付
近である。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃
培養） １５％単純ゼラチン培地では培養後１２２日目頃りわず
かに液化を認め、その作用は弱い方である。グルコース
・ペプトン・ゼラチン培地の場合、培養後２１日間の観
察では液化を認めなかったが、３００日目頃り弱い液化
作用が観察された。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） いずれの培地においても、培養後３日目頃より氷解性が
認められ、その作用は中等度〜強い方である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後５日目頃より凝固状を呈し、２〜３日間で完了後
、ペプトン化がはじまる。ペプトン化は、極めてゆっく
りと進行する。凝固作用は、中等度〜強い方であり、ペ
プトン化は弱い方である。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
プロス、ｌ５Ｐ−培地ｌ；ペプトン・イースト・鉄寒天
培地、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地、ｌ５Ｐ−培
地７；いずれも２７℃培養） トリプトン・イースト・プロス及びペプトン・イースト
・鉄寒天培地では陽性、チロシン寒天培地では陰性であ
る。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ｌ５Ｐ−培地９；２７℃培養）グルコース、Ｌ−ア
ラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース、シュ
クロース、イノシトール、ラムノース、ローマンニトー
ルヲ利用して発育し、ラフィノースは利用しない。

（７）　　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地
、２７℃培養） 培養後５日目頃より、リンゴ酸石灰の溶解を認め、その
作用は中等度〜強い方である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｌ５Ｐ−培地８；２７℃培養）陽性である。

（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） 陰性である。

以上の性状を要約すると、ＭＨ６６３−ｍＦ３株は、そ
の形態上気菌糸に螺旋形成を有し、輪生技及び胞子嚢は
認めない。胞子の表面は平滑である。種々の培地で、う
す黄〜うす黄茶の発育上に条目〜うす茶、あるいは明る
い茶灰の気菌糸を着生し、溶解性色素はかすかに黄色味
を帯びる。多くの培地で、気菌糸は培養後１４４日目頃
り湿潤化し、明るい茶を呈する。メラニン様色素は、ト
リプトン・イースト・ブロス及びペプトン・イースト・
鉄寒天培地で陽性、チロシン寒天培地では陰性である。

蛋白分解力は弱い方、スターチの氷解性は中等度〜強い
方である。なお、細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピ
メリン酸はＬＬ−型であった。

これらの性状により、ＭＨ６６３−ｍＦ３株はストレプ
トミセス５勺１■ザ１遼蛙に属するものと考えられ、Ｎ
４ｄの既知菌種を検索すると、次の３種があげられる。

すなわち、ストレプトミセス・フミヅス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　　ｈｕｍｉｄｕｓ、文献１　、　Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔ
ｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　１８巻、
３３４ページ、　１９６８年；文献２．「ジヒドロスト
レプトマイシンの製造法」特公昭３５−１２６４７号）
、ストｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ、　１９巻、４３４ページ。

１９６９年）及びストレプトミセス・シラソス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｃｉｒｒａｔｕｓ、文献１　、
　ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ＋　
２２巻。

２８４ページ、　１９７２年；文献２　、　Ｋａｓｈｉ
ｙａｍａ　ｅｔ　ａｌ、：Ｃｉｒｒａｍｙｃｉｎ、ａ　
　ｎｅｗ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ、Ｊｏｕｒｎａｌ　　
ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、　Ｓｅｒ、Ａ＋　１６巻
５９−６６ページ、　１９６３年）である。このうち、
ストレプトミセス・フミヅスとは、そのメラニン様色素
の生成能及び湿潤化した気菌糸が黒色を呈する点等で区
別される。また、ストレプトミセス・グリセオラベンヅ
スとは、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュクロ
ース、イノシトール、ラムノース、Ｄ−マンニトールの
利用性に相異が認められる。そこで、最も類似すると考
えられるストレプトミセス・シラソスＩＭＣＳ−０７５
１（ＩＳＰ　５４７９）株とＭｌ１６６３−ｍＦ３株と
を実地に比較検討した。その成績の大要をストレプトミ
セス・シラソスの文献記録とともに次の第２表に示す。

第２表から明らかなように、ＭＨ６６３−ｍＦ３株とス
トレプトミセス・シラッスとは炭素源の利用性を除き、
よく一致した性状を示した。しかし、イノシトール及び
Ｄ−マンニトールの利用性の相違は両者の大きな相異点
とは考えられない。これらのことから、？Ｌｔ１６６３
−ｍＦａ株をストレプトミセス・シラッスに最も近縁で
あると考えられる。そこでＭｆ１６６３−ｍＦ　３株を
ストレプトミセス・シラッス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅ
ｓ　　ｃｉｒｒａｔｕｓ）　　ＭＨ６６３−ｍＦ３と同
定した。

なお、ＭＨ６６３−ｍＦ３株を工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託申請し、昭和６２年１１月１７日、徽工
研菌寄第９７１Ｏ号として受託された。

〔ｌ、３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンの製造
〕本発明においては、１．３−ジヒドロキシ−８−デセ
ン−５−オンは下記の方法により製造することが出来る
。即ち、ストレプトミセス・シラッスに属する１、３−
ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンを生成する能力を
有する菌株（好ましくはストレプトミセス・シラッスＭ
ＩＩ６６３−＋ａＦ３株）を通常、放線菌を培養する方
法に従って培養することにより培養液中に大量蓄積させ
ることができ、常法に従って採取することができる。

用いる培地中の栄養源としては、放線菌の栄養源として
用いられる公知のものが使用できる。例えば市販されて
いる大豆粉、ニスサンミート、ペプトン、肉エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー、綿実粉、落花生粉、乾燥酵
母、酵母エキス、ＮＺアミン、カゼイン、硝酸ナトリウ
ム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素源
、およびグリセリン、しょ糖、でん粉、グルコース、ガ
ラクトース、マルトース、デキストリン、乳ｔＪ！、Ｉ
ｎつ、大豆油、脂肪、アミノ酸などの炭素源、および食
塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化
コバルト、塩化マンガンなどの無機塩を使用できる。そ
の他必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として勅、植、
鉱物油などを添加することができる。此等は生産菌が利
用し得、そして本物質の生産に有効なものはすべて使用
することができ、培養の初期から全量培地に添加するこ
ともでき、また、培養の途中で適量ずつフィードするこ
ともできる。培養条件は好気的な液体培養が好ましく、
培養温度は通常２０〜４０℃　（好ましくは２５〜３７
℃）であり、５日〜２週間程度の培養時間を必要とする
。此等の条件は使用する菌の性質に応じて適宜選択して
行うことができる。

〔１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンの精製
・採取〕 培養液より１．３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オ
ンを精製・採取するには通常の精製・採取手段を使用す
ることができる。即ち溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、
吸着または分配カラムクロマト法、ゲル濾過法、透析法
、沈澱法等を単独でまたは適宜組み合わせて抽出及び精
製することができる。

〔１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンの正常
動物に対する免疫賦活作用と制癌効果〕 １．３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンは正常動
物に対し各種の免疫賦活作用を有するとともに、制癌作
用をも有することが本発明者らによって確かめられた０
次にこれ等の試験例を示す。

バ１１生１ １、抗体産生に対する作用 マウスの羊赤血球に対する抗体産生への本物質の効果を
検討した。羊赤血球１ｘｌＯＢ個を、発熱物質を含まな
い生理食塩水０．１−に浮遊させて、これを雌性・８週
令のＣＤＦ　、マウスに静注して免疫し、同時に１０％
ＤＭＳＯを含む生理食塩水に溶解した本物質の各量を腹
腔内投与した。４日後、マウス牌細胞中の抗体産生細胞
数をＣｕｎｉｎｇｈａｍらの方法（Ｇｕｎｉｎｇｈａｍ
、Ａ、Ｔ、ａｎｄ　Ａ、Ｓｚｅｎｂｅｒｇ：　　ｒＰｕ
ｒｔｈｅｒｉｍｐｒｏｖｅｎ＋ｅｎｔｓ　　ｉｎ　ｔｈ
ｅ　ｐｌａｑｕｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒｄｅｔ
ｅｃｔｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｆｏ
ｒｍｉｎｇ　ｃｅｌｌｓ、Ｊ　＋ｒ１ｍａ＋ｕｎｏｌｏ
ｇｙＪ　１４．５９９−６００（１９６Ｂ）参照〕に準
じて算定した。その結果、第３表に示す様に本物質の４
００μｇ／マウスの投与は、抗体産生細胞を有意に増加
させ、本物質に抗体産生を促進する作用があることが明
らかにされた。

坐３表 マウスにおける羊赤血球に対する 抗体産生への効果 申傘Ｐ＜０．０５ １）羊赤血球での免疫と同時に投与。

２、細胞性免疫に対する作用 Ｌａｇｒａｎｇｅらの方法（Ｌａｇｒａｎｇｅ、　Ｐ、
Ｈ，＊　Ｇ、Ｂ、Ｍａｃｋａ−ｎｅｓｓ　ａｎｄ　Ｔ、
Ｅ、Ｍｉｌｌｅｒ　：　ｒｌｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　
ｄｏｓｅａｎｄ　ｒｏｕｔｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ　
１ｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎ−ｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　１ｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｃｅｌ
ｌｓ、Ｊ　＋　　ｒＪ、　ｆ！ｘｐ。

Ｍｅｄ、Ｊ　１３９．５２８−５４２（１９７４）参照
）に準じて、羊赤血球を抗原として得られるマウスの遅
延型過敏症（ＤＴｌｌと略称する）を指標として、本物
質の細胞性免疫に対する作用を検討した。羊赤血球をｌ
Ｘｌ０’個、静注して免疫を施し、同時に１回あるいは
、１日１回３日間又は４日間本物質を腹腔内あるいは経
口投与した。免疫の４日後、マウス足跡に　　・１×１
０１１個の羊赤血球を皮下注射して反応を誘起し、２４
時間後、足踏の腫張をノギスで測定して、その効果を調
べた。結果は第４表に示した通りである。腹腔内、経口
投与とも、免疫と同時に１回投与した群よりも、３日間
あるいは４日間連続投与した群において、顕著なりＴＨ
反応の促進が見られ、本物質が細胞性免疫反応促進に作
用することが明らかにされた。

３、　マクロファージに対する作用 （イ）マクロファージの賞食能に対する作用ｌ５ｈｉｚ
ｕｋａらの方法（Ｉｓｈｉｚｕｋａ、Ｍ、、　Ｓ、ｌ５
ｈｉ−ｚｅｋｉ、　Ｔ、Ｍａｓｕｄａ、　Ａ、Ｍｏｍｏ
ｓｅ、　Ｔ、＾ｏｙａｇｉ、　Ｔ。

Ｔａｋｅｕｃｈｉ及びＨ，Ｕｍｅｚａｗａ：　ｒＳｔｕ
ｄｉｅｓ　ｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ　ｆｏｒｐｈｅｎ
ｉｃｉｎｏｌ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ
、Ｊ　＋ｒＪ、　ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＪ　３５．１
０４２−１０４８（１９Ｂ２）参照〕に従い、チオグリ
コレート培地を腹腔的投与して誘導したマウス腹腔内マ
クロファージの酵母に対する賞食能に対する効果を検討
した。

ＣＤＦ、マウス（８週令、雌性）にチオグリコレート培
地を腹腔的投与と、マクロファージ採取の３日前あるい
は１日前に本物質を腹腔的投与し、腹腔内マクロファー
ジの酵母に対する賞食能を調べた。その結果、第５表に
示した通り、３日前あるいは１日前投与のいずれでも本
物質６．２５μｇ／マウス〜４００μｇ／マウスの投与
により、マクロファージ亥食能の顕著な先進が見られた
。

匹−−一互一一一鷹 腹腔内マクロファージの食食能に対する効果１）　　Ｉ
ｎ腔内マクロファージ採集３日前あるいは１日前に腹腔
的投与。

（０）マクロファージのスーパーオキサイドアニオン（
Ｏｌ）産生に対する作用 Ｋｉｔａｇａｗａ　ａｎｄ　Ｊｏｈｎｓｔｏｎの方法（
Ｋｉｔａｇａｉｎａ。

Ｓ、　ａｎｄ　ＲｏＢ、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、　Ｊｒ、：
　　ｒＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｅ
ｍｂｒａｎｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　
ａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｃ
ａｐａｃｉｔｙ　ｉｎ　ｒｅｓｉｄｅｎｔａｎｄ　ａｃ
ｔｉｖａｔｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓＪ　＋ｒＪ、Ｉｍｎ＋ｕｎｏ１
．Ｊ　１３５．３４１７−３４２３（１９８５）参照〕
に準じ、マクロファージの０□−産生に対する効果を検
討した、ＣＤＦ　、マウス（８〜１１週令、雌性）に本
物質を腹腔内あるいは経口投与した１日後、腹腔内マク
ロファージを採取し、フェリチトクロームＣの還元を０
□−の産生の指標とした。結果は第６表に示した通り本
物質の腹腔内投与７．８μｇ／マウス〜５００μｇ／マ
ウスあるいは経口投与３１．３μｇ／マウス〜５００μ
ｇ／マウスで著しい０□−の産生の凡退が見られた。

１）腹腔内マクロファージ採集１日前に投与。

（ハ）マクロファージ細胞増殖阻止作用に対する効果 プロテオースペプトン培地を腹腔的投与して誘導したマ
ウス腹腔内マクロファージのマウスＥＬ−４細胞に対す
る増殖阻止作用への効果を検討した。ＣＤＦ　＋マウス
（８週令、雌性）に１０％プロテオースペプトン培地を
腹腔的投与しマクロファージ採取の７日前、５日前ある
いは３日前に本物質を１００μｇ／マウス腹腔内投与し
た。採取した腹腔内マクロファージ（２Ｘ　１０’個／
培地）とＥＬ−４細胞（Ｉ　Ｘ　１０’個／培地）を−
緒に培養し、トリチウムラベルしたチミジンの取り込み
を放射活性で表わした、その結果、第７表に示した通り
、７日前、５日前、３日前投与のいずれでも、マクロフ
ァージのＥＬ−４細胞に対する増殖阻止作用の先進が見
られた。

第　　　　７　　　　表 腹腔内マクロファージのＥＬ−４リンノ＼肝細胞に対す
る増殖阻止作用への効果 １）　１００μｇ／マウスを腹腔的投与した。

試験肛 １ＭＣ固形癌に対する制癌効果 ＩＭＣ細胞１×１０ｂ個をＣＤＦ　＋マウス（１００週
令雌性）に皮下注射によって移植し、各投与スケジュー
ルによって本物質を腹腔的投与し、２８日後の腫瘍の重
量を測定し、制癌効果（抑制率１％）を求めた。結果は
第８表に示した通り、各投与スケジュールにおいて５０
０μｇ／マウス〜２■／マウスの投与量で本物質を投与
した場合に著名な腫瘍増殖抑制効果を示した。

〔免疫賦活剤及び制癌剤の製剤〕

以上によって明らかなように、１．３−ジヒドロキシ−
８−デセン−５−オンは各種の免疫賦活作用を有すると
ともに制癌作用をも有することが認められる。マウスに
対する急性毒性試験では本物質の５００　ｍｇ／　ｋｇ
の静脈内投与では死亡例は認められない。よって、本物
質は安全な物質であると考えられ、免疫賦活剤及び制癌
剤として有用でありあるいは各種癌化中療法剤の補助薬
として有用である。

本物質、及びこれを含む医薬薬剤の投与形態は経口、注
射、直腸坐剤のいずれでもよい。注射剤を調製する場合
には、上記の有効成分化合物に液状の担体、並びにｐＨ
調整剤、緩衝剤、安定化剤、賦形剤等を添加し、常法に
より凍結乾燥して凍結乾燥注射剤を製造することができ
、また有効成分化合物にｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤
、等張剤、局麻剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内
、静脈内用注射剤を製造することもできる。

経口用固形製剤を調製する場合には、有効成分化合物に
固体状の賦形剤例えばチターチ、さらに必要に応じて結
合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤を加え
た後、常法により錠剤、被覆錠剤、課粒剤、散剤、又は
カプセル剤等を製造することができる。

経口液状製剤を調製する場合には、有効成分化合物を無
毒の溶剤、例えばエタノールにとかし、更に矯味剤、緩
衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により溶液剤、
シロップ剤、又はドライシロップ剤とすることができる
。

直腸坐剤製剤を調製する場合には、有効成分化合物に賦
形剤、さらに必要に応じて界面活性剤を加えたのち、常
法により坐剤とすることができる。

好ましい投与方法としては、動物の場合、腹腔内注射、
皮下注射、静脈又は動脈への血管内注射及び局所投与等
の注射剤として、ヒトの場合は静脈又は動脈への血管内
注射又は局所投与等の注射剤として投与され、その投薬
量は動物試験の結果及び種々の情況を勘案して総投与量
が一定量を越えない範囲で、連続的又は間けつ的に投与
することができる。しかし、その投与量は投与方法、患
者、又は被処理動物の状況例えば年令、体重、性別、感
受性、食餌、投与時間、投与方法、併用する薬剤、患者
又はその病気の程度に応じて適宜に変えて投与すること
はもちろんである。投与量及び投与回数は病気と病状に
応じて専門医の適量決定試験によって決定されなければ
ならない。一般に、−日一回２．５曙ハｇ〜１００■／
ｋｇの投与量が適当と認められる。これらの投与条件は
、経口投与においても同様に考慮される。

次に本発明の実施例を掲げるが、本発明の範囲はこれに
限定されるものではない。

実施例１ 〔ストレプトミセス・シラッスＭＨ６６３−ｍＦ３株の
培養〕 ストレプトミセス・シラッスＭＨ６６３−ｍＦａ株（微
工研菌寄第９７１０号）の１白金耳ずつを５本の５００
−の回転培養用フラスコ中のＳ培地１１０ｔ’に植菌し
、３０℃におて２日間培養し、種培養液とした。

Ｓ培地の組成は、ガラクトース２％、デキストリン２％
、バタトソイトン（米国ＤＩＦＣＯ社）　１％、コーン
・ステイープ・リカー（味の素社）０．５％、硫酸アン
モニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％、消泡剤１
滴（ｐＨ７，４）である。種培養液２．５−ずつをＲ培
地１３０ｍｊ！ずつを分注した５００−の坂ロフラスコ
２３０本（培地３０１分）に植菌し、２７℃において５
日間、毎分１３０往復の振盪培養を行った。Ｒ培地の組
成は、グリセリン３．０％、魚粉（ＢＰ１０４、焼津水
産化学工業）２．０％、炭酸カルシウム０．２％（ｐｌ
＋７．４）である。培養液から、遠心分離法により２１
Ｎの培養濾液を得た。

実施例２ （１１３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンのｔ！
縮・精製〕 実施例１で得られた培養濾液２７１に活性炭粉末（和光
０薬工業）２７０ｇを添加し、室温で時々攪拌しながら
３０分間放置し濾過を行った。脱イオン水で洗浄後、４
１のメタノールを添加し、３０分間放置後、濾過により
メタノール濾液を得た。このメタノール液を減圧下に濃
縮乾固することにより茶かっ色の油状物質を粗物質とし
て得た。

上記の如くで得られた茶かっ色の油状の粗物質を脱イオ
ン水に溶解し、ＩＮ水酸化ナトリウムでｐＨを８．０と
したのち、ノルマルブタノールによる抽出を３回行なっ
た。上層のノルマルブタノール液を減圧下に濃縮した。

濃縮したノルマルブタノール液に５ｇのシリカゲル粉末
を加え（ワコーゲルＣ−２００、和光０薬工業）減圧下
で乾固させた。

この乾固させた粉末をヘキサンで平衡化したシリカゲル
（ワコーゲルＣ−２００、和光０薬工業）カラム（２Ｘ
１６ｃｍ）に添加した。ヘキサン：酢酸エチル（５：　
５）　５０−で洗浄した後、ヘキサン：酢酸エチル（３
，５：　６．５）　５００−で溶出した。１フラクシヨ
ン１６ｇで分画し、フラクション４６番から９１番の分
画を合せて減圧下に濃縮乾固し、１１１■の粗物質を得
た。

上記の如く得られた粗物質の１１１■をアセニトリルに
溶解、高速液体クロマトグラフィー（Ｃ１８逆相カラム
、センシューバックＯＯＳ　、センシュー工業、２０’
　Ｘ　３０００）にかけ、２５％アセトニトリルから３
０％アセトニトリルへの直線的勾配溶出法により溶出し
た。　（７０分、５ｍｊ／ｗｉｎ）　　１フラクション
５−で分画することにより、フラクション２８番から４
２番の分画を合せて減圧下に濃縮乾固し、７３．５ｍｇ
の粗物質を得た。

実施例３ 〔１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンの採取
〕実施例２で得られた粗物質７３．５■をシリカゲル（
フコ−ゲルＣ−２０Ｏ和光純薬工業）のカラム（２Ｘ１
６ｃｍ）にかけ、ヘキサン：酢酸エチル（３，５：６．
５）の混合溶媒で溶出した。１フラクシヨン１７ｇで分
画し、フラクション４６番から６０番の分画を合せて減
圧下に濃縮乾固することにより、無色透明で油状物質と
して目的の１．３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オ
ンの４９．１■を得た。

（α）　　　＋３０．２　”　（ｃ　Ｏ，５，クロロホ
ルム）猶、マウス（ＣＤＦ　、マウス、１０週、雌性）
に皮下注射によって移植された１ＭＣ癌細胞（ＩＸＩＯ
’個）は局所に固型癌として増殖するが、これに対する
抑制活性を指標として本発明の活性物質の抽出、精製が
行われる。従って、上記実施例１．２及び３においても
、活性物質はそのようにして抽出精製した。

実施例４ 〔製　剤〕 実施例３で得られた１、３−ジヒドロキシ−８−デセン
−５−オンを５倍量の乳糖（ｗ／ｗ）　、５０ｃｃの蒸
留水に溶解して注射液を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明で得られた（３Ｓ、８Ｈ）−１，３−ジ
ヒドロキシ−８−デセン−５−オンの赤外部吸収スペク
トルであり、第２図はプロトン核磁気共鳴スペクトルで
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ストレプトミセス・シラッスに属し、１，３−ジヒ
   ドロキシ−８−デセン−５−オンを生産する能力を有す
   る菌株を培養し、その培養液から１，３−ジヒドロキシ
   −８−デセン−５−オンを採取することを特徴ととする
   １，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンの製造法
   。 ２、１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンを有
   効成分として含む免疫賦活剤。 ３、１，３−ジヒドロキシ−８−デセン−５−オンを有
   効成分として含む制癌剤。