JPH01228413A - 精油の製造方法 - Google Patents

精油の製造方法

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JPH01228413A
JPH01228413A JP5377088A JP5377088A JPH01228413A JP H01228413 A JPH01228413 A JP H01228413A JP 5377088 A JP5377088 A JP 5377088A JP 5377088 A JP5377088 A JP 5377088A JP H01228413 A JPH01228413 A JP H01228413A
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essential oil
adventitious bud
adventitious buds
adventitious
purified oil
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宗澤 眞木子
Koichi Takasaki
高崎 幸一
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、植物の組織を培養し、分化誘導した不定芽か
ら精油成分を製造する方法に関す、る。
〔従来の技術〕
精油は、植物体から圧搾、抽出等により得られる物質で
あって、化粧品、香料、食用フレーバー等の分野で広く
用いられている。そして、この精油は一般に栽培した植
物を原料として製造されている。
近年、植物の組織培養が比較的容易となり、この方法が
植物成分の製造手法として検討されている。そして、ベ
ラルゴニウム属、ゲラニウム属、ルタ属、ヴィオラ属、
メリッサ属、イリス属等の植物について、その不定芽か
ら精油を製造する方法が提案されている(特開昭59−
213393号、特開昭60−71699号、特開昭6
0−248188号)。しかし、アンテミス属に属する
植物については、これまで全く報告がない。
〔発明が解決しようとする課題〕
本発明者らは、従来の植物の栽培によるものに比べて気
象条件等の影響を受けず完全に制御された環境下で容易
かつ高収率で精油を製造する方法を開発すべく研究し、
本発明を完成するに至った。
〔課題を解決するだめの手段〕
本発明は、アンテミス(An themis)属に属す
る植物の組織を培養し、培養物から不定芽を分化誘導せ
しめ、該不定芽中に産生蓄積された精油成分を採取する
精油の製造方法である。そして、この不定芽としては増
殖に最適な植物ホルモンを含有する培地で継代培養し増
殖したもの、継代培養したものから選抜した精油間産生
株が、加えて該高産生株を液体培地で大量培養したもの
がそれぞれ使用される。さらに、本発明には、不定芽を
継代培養したものの中から、その形態による目視的選抜
及びヘッドスペースガスクロマトグラフィー法(以下M
S−GC法という)による選抜により精油間産生株を選
抜する精油間産生株の取得法が含まれる。
以下に、本発明を詳しく述べる。
本発明においては、アンテミス属に属する植物の組織を
寒天培地中で培養し、培養物から不定芽を分化誘導し、
この不定芽を最適な植物ホルモンの存在下に継代培養し
て増殖させ、得られる不定°芽の中から精油間産生株を
選抜し、この不定芽から精油を製造する。更に原料の不
定芽としては上記精油間産生株を液体培地中で大量培養
したものを用いることができる。
本発明で使用されるアンテミス属に属する植物としては
アンテミス・ノビリス(八nthemis nobol
is)。
アンテミス・チンクトリア(八nthemis tin
ctoria)。
アンテミス・アルペンシス(八nthemis arv
ensis)+アンテミス・コチュラ(八nthemi
s cotula)が挙げられる。そして、植物体とし
ては葉、茎、根の断片のいずれでもが使用できる。植物
の組織から不定芽を分化誘導する培地としては、植物組
織培養において通常使用されるもの、例えば、リンスマ
イヤー・スクーグ(LS)培地、ムラシゲ・スクーグ培
地、B5培地、ニッチ&ニッチ培地、ホワイト培地等が
使用されるが、好ましくはLS培地が用いられる。そし
て、実際に培養するに際しては、これら基本培地にit
!I、ビタミン類及び植物ホルモンを添加して用いる。
植物ホルモンとしては、例えばインドール−3−酢酸(
IAA) 、インドール−3−酪酸(TBA)、α−ナ
フタレン酢酸(NAA) 、2.4−ジクロロフェノキ
シ酢酸(2゜4−D)等のオーキシン類、カイネチン(
Kn)、6−ベンジルアデニン(6−BA)等のサイト
カイニン類等が挙げられ、これらオーキシンとサイトカ
イニンを組み合せて使用される。特に好ましい組み合せ
はオーキシン:サイトカイニンが10−6M: 10−
’Mである。この培地中で明下20〜30°C1好まし
くは25°Cで2〜3週間培養することによりカルス化
し、不定芽及び不定根の誘導が起る。光の条件は200
0〜3000ルツクスの光照射を用いる。
この不定芽は新芽を含む葉2〜3枚の小さい株に分けて
継代培養して増殖を行うが、そのときの培地としては上
記基本培地が用いられる。そして、その際使用する植物
ホルモンの組成により異なった形態(葉の形、色等)の
不定芽が得られる。即ち、植物ホルモンとしてIBA 
10−’M、 BA10−’M  ;IBA  10−
’M、  BA  10−6M  、  NAA  t
o−’M、  BA  10−’M  などを用いたと
ころ、その不定芽の形態が3種類に分類された。
母植物に近い形態のタイプl1葉の分岐があまり無いタ
イプl1葉と茎の区別がつかないタイプ■の3種類であ
る。その形態的分類では、第1表に示す通りタイプ■で
のみ良好な精油成分が産生じた。したがって、タイプl
の不定芽の増殖に好適な植物ホルモンは、例えばIBA
 : 10−’MとBA:10−”〜10〜7Mとを組
み合せたものである。
不定芽を増殖して得られる株の中から精油の高産生株を
選抜するためには、不定芽の形態及び精油成分をMS−
GC法(恩田宣彦:ぶんせき、並。
12(1987) )にかけて行った。従来、精油成分
の分析には蒸留や溶媒抽出等の煩雑な操作及び多量の試
料が必要であるが、このM S −G C法では少量の
試料で節単にかつ短時間で分析が可能である。
この精油高産生株は、液体培地においても大量培養する
ことができる。この液体培地は次の組成から成る。
(液体培地組成) (1)基本培地  LS培地の濃度の1〜1/2倍(2
)  ショ糖    3% (3)  ホルモン  IBA  10−’MBA  
 10−’M (4)窒素源   アンモニア態窒素/硝酸態窒素=1
75〜1/11 培養は、25°Cで7〜10日間明所(2000〜30
00ルツクス)下で行う。
このようにして得られた不定芽はアンテミス属の植物と
同様の精油成分を含有しており、これら不定芽から、例
えば石油エーテル等の溶媒を用いて抽出する方法、水蒸
気蒸留法等、通常使用される公知の方法により精油成分
が容易に取得できる。
(発明の効果〕 本発明の方法は、従来の栽培によるものに比べて気象条
件等の影響を受けず、完全に制御された環境の下で短期
間に高収率かつ多量に精油を製造することができる。ま
た、原料として使用する精油高卒生不定芽株が形態の目
視選抜及びHS −GC法により容易に選抜できる。
実施例 1 (1)不定芽の分化誘導 水洗したアンテミス・ノビリスの葉を70%のエタノー
ルで1分間、予備滅菌し、次いで1%アンチホルミンで
5〜10分間滅菌した。次に滅菌蒸留水で薬剤を完全に
除去した葉を無菌的に約5+mn角に細断し、外植片と
した。この細断葉を植物ホルモンとして、オーキシン(
IBAまたはNAA)の10−5M〜l0−6とサイト
カイニン(B八またはカイネチン)の10−’M〜10
−6Mとの組合わせで、それぞれ添加した3%のシ=J
[と1%の寒天を含むpH5,6に調節したLS培地上
に置床し、25°Cで2000〜3000ルツクスの光
照射下で培養を行ないカルスを形成せしめ、2〜3週間
後に不定芽及び、または不定根が分化誘導した。
(2)不定芽の継代培養及び精油高産生株の選抜この不
定芽から葉2〜3枚を含む新芽のある小さな株を選抜し
同じ培地及び培養条件で3〜4週間継代培養した。各培
地で得られる不定芽の形態(葉の形、色等)及びH3−
GCの結果は第1表の通りである。この結果については
H3−GCによって得られたクロマトグラムのピーク高
さから成分Nを求め、クロマトグラムに表われた成分全
量に対する百分率で表示した。このことからタイプIが
精油の高産生株であることが判った。この結果から判る
通り、継代培養した不定芽の中から精油の高産生株が目
視的に容易に選抜できる。
この方法で得られる不定芽を培養し、精油を製造した結
果につきその培養条件、増殖度、精油の成分等を第2表
に示す。
(来夏以下余白) なお、第1表および第2表において、不定芽の増殖度、
香気の官能試験及び精油成分の分析は次の方法により行
った。
(1)不定芽の増殖度(倍) 培養開始時の切片(又は培養物)の新鮮型(g)(2)
香気の官能試験 不定芽を手指で押しつぶし香気を10人の専門員によっ
て臭覚により判定した。対照は原植物とした。その平均
値を以って官能評価とした。
評価基準: 1、原植物の精製成分の臭いなし 2、            かすかに有り3、   
            有り4・         
   強し 5、            非常に強しく3)精油成
分の分析 ヘッドスペースガスクロマトグラフィー(Its−GC
)を用い、クロマトグラムのピークの高さから成分量を
求め、クロマトグラムに表われた成分全量に対する百分
率で表示した。定性分析はガスクロマトグラフィー及び
質量分析計により標準物質との保持時間及びマススペク
トルを比較する事により行った。
(測定条件) 1)ガスクロマトグラフィー 機 種: HP5890Aガスクロマトグラフカラム:
 DB−WAXヒューズド・シリカ・キャピラリーカラ
ム(径0.25mmX60m)検出器: FID インジェクション温度:250°C オーブン温度=70°C−180°C(4°C/min
で昇温)キャリアガス流1jt(lle) : 0.7
8m/m111スプリット比: 1/20 2)ヘッドスペースサンプラー 機種: HP19395A 保温温度ニア5°C 保温時間:90分 3)質量分析 機種: HP59970C イオン化電圧: 70eV イオン源温度:260”C マスフィルタ:双曲線四重極 実施例2 実施例1で得られた精油の高産生株の新芽を含み葉が2
〜3枚ついた株を、IBAIO−’M、 BAIO−’
M。
を添加して、3%ショ糖を加え、更にアンモニア態窒素
と硝酸態窒素を1対5から1対11の比率にし、基本培
地の濃度が1倍〜%倍であるリンスマイヤー・スクーグ
培地(pH5,6)に投入し、25°Cで2000〜3
000ルツクスの光照射下で、100r、p、m。
の振とう培養を行った。
培養後2日後から、不定芽の茎基部より、新たな不定芽
が出現し、以後その数が増加した。
10日後の培養結果を実施例2として、表2に示す。表
2より液体培養によって得られた不定芽(実施例2)は
、実施例1と比べて、増殖度が良い。
又、栽培によって得られる植物と同等な組成の精油が得
られた事がわかる。
実施例3 実施例2と同様な高生産株を、実施例2と同様の培地に
投入した。ただし、本実施例においては、振とう培養の
代わりに、細かい泡(ガラスフィルター〇2程度)で通
気培養を行った。
10日培養後の結果を実施例3として第2表に示す。実
施例2と比べて、良好な増殖が得られ、かつ栽培によっ
て得られる植物と同等な組成の精油が得られたことがわ
かる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、アンテミス属に属する植物の組織を培養し、培養物
    から不定芽を分化誘導せしめ、該不定芽中に産生蓄積さ
    れた精油成分を採取することを特徴とする精油の製造方
    法。 2、不定芽が増殖に最適な植物ホルモンを含む培地で継
    代培養し、増殖されたものであることを特徴とする請求
    項1記載の精油の製造方法。 3、不定芽が増殖に最適な植物ホルモンを含む培地で継
    代培養したものから選抜した精油高産生株であることを
    特徴とする請求1記載の精油の製造方法。 4、不定芽が液体培地中で大量培養して得られたもので
    あることを特徴とする請求項1記載の精油の製造方法。 5、不定芽を継代培養したものの中から、その形態によ
    る目視的選抜及びヘッドスペースガスクロマトグラフィ
    ー法による選抜により精油高産生株を選抜することを特
    徴とする精油高産生株の取得法。
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