JPS6219157B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、植物の組織を培養し、分化誘導した
不定芽から精油成分を取得する方法に係り、更に
詳細には、ペラルゴニウム属、ゲラニウム属、ル
タ属、ヴイオラ属、又はメリツサ属に属する植
物、（以下本発明に係る植物と略記する）の組織
を培養し、培養物から不定芽を分化誘導せしめ、
該不定芽中に産生蓄積された精油成分を取得する
精油の製造方法に関する。 精油成分は、通常土中に播いた種子から栽培す
るか、或は挿し木等植物体の一部の栄養繁殖によ
つて栽培した植物の全草又は花から溶媒抽出、水
蒸気留等の方法により取得されており、かかる精
油成分は高級化粧品、香粧品、石鹸用香料、更に
は食品用フレーバーとして広く実用に供されてい
る。 しかし、植物を栽培し、それから精油成分を取
得するに際しては温度、気候、雨量、土質等によ
る植生分布の局在化に基づく制約を受ける他、植
物の生育は年毎の気象条件によつて大きく左右さ
れるため、特定の精油を一定量、計画的に生産る
ことが極めて困難ある等の問題があつた。 かかる問題を解決する方法として、植物組織を
培養し、得られた無定形の培養物、所謂カルスか
ら、精油を製造する方法が提案されている。しか
し、かかる方法はカルス中の精油有効成分が殆ん
ど絶無に近いことから、到底実用に供されないこ
とが判明している。（日本農芸化学会 昭和52年
度大会 講演要旨集P79、唐沢ら） 本発明者らは、精油の製造における、かかる現
状に鑑み、鋭意研究を続けた結果、前記本発明に
係る植物にあつては、組織を培養し、培養物から
誘導した不定芽中に自然栽培下の起源植物と同様
の精油有効成分が産生蓄積されていることを見出
し、本発明を完成したものである。 本発明の目的は、自然環境の影響を受けること
なく、完全に制御された環境下で植物の組織を培
養し、分化誘導せしめた不定芽から容易且つ収率
よく精油を製造する方法を提供するにある。他の
目的は植物の組織を培養し、培養物から短時間で
再現性よく不定芽を分化誘導せしめ、該不定芽か
ら随時精油成分を取得する方法を提供するにあ
る。更に他の目的及び効果は以下の説明から明ら
かにされよう。 上述の目的は、ペラルゴニウム属、ゲラニウム
属、ルタ属、ヴイオラ属、又はメリツサ属に属す
る植物の組織を培養し、培養物から不定芽を分化
誘導せしめ該不定芽中に産生蓄積された精油成分
を取得することにより達成される。 本明細書において「不定芽」とは、植物の組織
を培養することによつて該培養組織あるいは二次
的に派生した脱分化細胞から誘導された茎、葉等
の形状を備えた組織を意味する。本発明に係る植
物にあつては、組織を培養して得たカルス中に実
質的に含有されていない精油成分が不定芽中に産
生蓄積されている。かかる精油成分が不定芽中に
産生蓄積されていると云う事実は、本発明者らが
新規に知得したものであり、本発明に係る植物の
組織を培養し、誘導して得られた不定芽から精油
成分を取得することが本発明の最も重要な点であ
る。 かかる本発明が適用される植物としては、ペラ
ルゴニウム グラヴエオレンス（Pelargonium
graveolens）、ペラルゴニウム デイテイクラー
タム（P.diticulatum）、ペラルゴニウム ラドウ
ラ（P.radula）、ペラルゴニウム フラグランス
（P.fragrans）、ペラルゴニウム ローゼウム（P.
roseum）、ペラルゴニウム カピタツム（P.
capitatum）、ペラルゴニウム オドラテイシマ
ム（P.odoratissimum）、ペラルゴニウム テレ
ビンチナセウム（P.terebinthinaceum）等のペラ
ルゴニウム（Pelargonium）属、ゲラニウム マ
クロリズム（Geranium macrorhizum）、ゲラニ
ウム ルグブレ（G.lugubre）等のゲラニウム
（Geranium）属、ルタ グラヴエオレンス
（Ruta graveolens）ルタ モンタナ（R.
montana）、ルタ ブラクテオーサ（R.
bracteosa）等のルタ（Ruta）属、ヴイオラ グ
リポセラス（Viora grypoceras）、ヴイオラ オ
リエンタリス（V.orientalis）、ヴイオラ ブラン
デフオルミス（V.blandaeformis）、ヴイオラ オ
ブツーサ（V.obtusa）、ヴイオラ ヴイオラセア
（V.violacea）、ヴイオラ ミノール（V.minor）、
ヴイオラ ジヤポニカ（V.japonica）、ヴイオラ
オヴアト−オブロンガ（V.ovatooblonga）、ヴ
イオラ ロツシーカ（V.rossica）、ヴイオラ ト
リコロール（V.tricolor）、ヴイオラ オドラータ
（V.odorata）等のヴイオラ（Viola）属、及びメ
リツサ オフイシナリス（Melissa officinalis）
等のメリツサ（Melissa）属に属する植物が挙げ
られるが、かかる植物中、就中ペラルゴニウム
属、ルタ属、又はヴイオラ属に属する植物を使用
すると、好適な結果が得られる。かかる植物の組
織の培養を行なうに際し、その一例を示すと次の
通りである。 例えば、上記植物を流水下でよく水洗後、葉、
茎、根部に切り分け、エタノール、塩化ペンザル
コニウム、次亜塩素酸ソーダ等を用いて殺菌し、
引き続いて滅菌水で洗浄し、培地を入れた試験管
又は三角フラスコ中に載置する。使用する培地は
植物組織培養において通常使用されるものであれ
ば適用可能であり、特に限定されるものではな
く、例えばリンスマイヤー スクーグ、ムラシゲ
スクーグ、B5、ニツチ＆ニツチ、ホワイト等
の培地が挙げられる。そして実際に培養するに際
しては、これら基本培地に糖類、ビタミン類及び
必要に応じて生長調節物質等を配合したものを用
いる。生長調節物質としては、例えばインドール
―３―酢酸（IAA）、インドール―３―酪酸
（IBA）、α―ナフタレシ酢酸（NAA）、２，４―
ジクロロフエノキン酢酸（２，４―Ｄ）等のオー
キシン類、カイネチン（Kn）、６―ベンジルアデ
ニン（６―BA）等のサイトカイニン類等が挙げ
られ、これらは単独で、又は適宜組合わせて使用
される。 かかる培地中で大略22〜30℃で培養を続ける
と、約１週間から４週間程度で培養物から不定芽
の分化が起こる。この際、不定芽の発生量は、生
長調節物質であるオーキシン類とサイトカイニン
類との配合量、組織培養に供した植物組織及び光
照射条件に主として依存するが、これらの最適条
件は、使用する植物の種類によつて相違する。ペ
ラルゴニウム属、ルタ属及びヴイオラ属に属する
植物についてこれらの条件を示すと、ペラルゴニ
ウムの植物においは10^-5〜10^-7Mのオーキシンと
5^-5〜10^-6Mのサイトカイニンとを含有する培地
中で16〜24時間、5000〜10000ルクスの光照射
と、８〜０時間の暗期保持とを交互に行なつて葉
の組織から培養を開始するのが最適である。ま
た、ルタ属の植物においては、10^-6〜10^-8Mのオ
ーキシンと10^-5〜10^-6Mのサイトカイニンとを含
有する培地中で８〜16時間、2000〜5000ルクスの
光照射と16〜８時間の暗期保持とを交互に行なつ
て、萼の組織から培養を開始するのが、更にま
た、ヴイオラ属の植物においては、10^-5〜10^-6M
のオーキシンと10^-5〜10^-6Mのサイトカイニンと
を含有する培地中で16〜24時間、5000〜10000ル
クスの光照射と８〜０時間の暗期保持とを交互に
行なつて葉の組織から培養を開始するのが最適で
ある。 不定芽の分化に際しては、植物の種類によつて
は、カルス化が先行する。カルスから再分化した
不定芽は、分け取つて培地に植え継ぐと新しく発
芽が見られ、多数の不定芽が発生する。以後の不
定芽の培養も上述の条件が最適であつた。 この様にして得られた不定芽は原植物と同様の
精油成分を含有しており、これら不定芽から、例
えば石油エーテル等の溶媒を用いて抽出する方
法、水蒸気蒸留法等、通常使用される公知の方法
により精油成分が容易に取得できる。 以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
る。 なお、実施例中、不定芽は増殖度、香気の官能
評価及び精油成分の分析は次の方法により行つ
た。 (1) 不定芽の増殖度（倍） 培養３週間後の新鮮重（ｇ）／植え継ぎ時の不定芽の
新鮮重（ｇ） (2) 香気の官能評価 不定芽を手指で押し潰し、原植物を対照とし
て香気を臭覚により判定した。20人の専門員に
よつて行ない、その平均値を以て官能評価とし
た。評価基準は次のとおりである。 １ 原植物特有の精油成分の臭いなし ２ 〃 〃 かすかに有り ３ 〃 〃 有り ４ 〃 〃 強し ５ 〃 〃 非常に強し (3) 精油成分の分析 ガスクロマトグラフイー及び質量分析計を用
いて、標準物質との保持時間及びマススペクト
ルの一致から主成分を同定し、クロマトグラム
のピークの高さからそれらの成分量を求め、精
油成分の精油全量に対する百分率で表示した。 なお不定芽からの精油の抽出は、溶媒として塩
化メチレンを用い、粉砕、塩析、遠心分離、溶媒
層分取、濃縮という常法により行なつた。 測定条件： １ ガスクロマトグラフイー 機種：島津GC―6AM ガスクロマトグラフ カラム：FFAP コーテイング 溶融 シリカ
キヤピラリー カラム （0.25mm×50ｍ） インジエクシヨン温度：250℃ オーブン温度：70〜180℃（昇温２℃／分） N₂流量：１ml／分 スプリツト比：１／150 ２ 質量分析 機種：JEOL JMS―D300質量分析計（JEOL
JGC―20K及びJMA―2000データシステ
ム装備） イオン化電圧：70eV イオン源温度：200℃ 実施例 １〜３ 充分水洗したペラルゴニウム ローゼウムの葉
を70％のエチルアルコールを用いて２〜３分間予
備殺菌し、引き続いて0.2％塩化ベンザルコニウ
ム水溶液で２分間、更に１％次亜鉛素酸ナトリウ
ム水溶液で５〜10分間滅菌した。次に滅菌蒸留水
で薬剤を完全に除去した葉を無菌的に約５mm角に
細断し、外植片とした。この細断葉を
IBA10^-5M、６―BA10^-6Mを添加した、３％の蔗
糖と１％の寒天を含むPH5.7に調節したリンスマ
イヤースクーブ培地上に置床し、25℃で16時間、
7500ルクスの白色光照射下での培養と、８時間暗
所下での培養とを交互に行なつたところ、１週間
後に不定芽が分化した。結果を実施例１として第
１表に示す。上記実施例において、培地として第
１表に示す所定の培地を使用し、ペラルゴニウム
ローゼウムに代替してゲラニウムマクロリズ
ム、又はメリツサ オフインナリスを使用し、オ
ーキシン、サイトカニンの種類を数える以外は実
施例１と全く同様にして組織培養を行つた。結果
を実施例２及び実施例３として第１表に示す。ま
た対照としてそれぞれの原植物の精油主成分及び
含有率を比較例１，２及び３として併せ、第１表
に示す。

【表】 実施例 ４ ルタ属の一品種、ルタ グラヴエオレンスの萼
を原料とし、滅菌細断の過程を実施例１と同様の
操作で行なつてのち、切片をムラシゲスクーグ基
本培地にしよ糖３％、IAA10^-5M、６―BA
10^-6M添加した１％寒天培地上に置床すると、カ
ルス（脱分化細胞）が形成されたが、このカルス
からも再分化不定芽が誘導された。この不定芽／
カルスの不均一な組織培養物から不定芽のみ、又
はカルスのみを選択しつつ、カルスは同一組成培
地に植え継ぎ、不定芽はホルモン濃度のみを
IAA10^-7M、６―BA10^-5Mとした培地に植え継ぐ
と、最終的に、略不定芽又はカルスだけを分離し
たものを培養するに至つた。以上の培養は25℃、
12時間4000ルクスの光照射と、12時間の暗期保持
とを交互に行なうという環境条件下でなされた。
これら不定芽又はカルスについて、実施例１〜３
と同様の評価テストならびに分析実験を行なつ
た。得られた結果を実施例４及び比較例４として
第２表に示す。 同表から、本発明に係る、組織培養により得ら
れた不定芽（実施例４）は、カルス部分（比較例
４）と比べて官能評価においてはつきりと差が認
められ、原植物体（比較例５）とほぼ組成の等し
い精油が得られたことがわかる。

【表】

【表】 実施例 ５ スミレ属の一品種、ヴイオラ ロツシーカの葉
を材料として実施例１と同様の滅菌操作を行な
い、細断した切片を、リンスマイヤースクーブを
基本培地とし、しよ糖３％とIBA10^-5M、６―
BA10^-6Mを添加した１％寒天培地（PH5.7）上に
置くと、不定芽／カルス／不定根の不均一培養の
状態になつたため、不定芽のみを選んで、ホルモ
ン濃度のみをIBA10^-5M、６―BA10^-5Mとした上
記培地で継代培養し、大量の不定芽を得た。以上
の培養は23℃、16時間、7500ルクスの光照射と、
８時間暗期保持とを交互に行なうという環境条件
下でなされた。 この不定芽（178ｇ）を石油エーテルにて氷冷
下粉砕処理を行ない、コンクリートを得（2.6
ｇ）、専門員による官能評価に供した。 結果は次の通りであつた。 原植物体由来のリーフコンクリートと 同一の香りがする。 18／20 原植物体由来のリーフコンクリートと 類似の香りがする。 ２／20 原植物体由来のリーフコンクリートと 相違する香りがする。 ０／20

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ペラルゴニウム属、ゲラニウム属、ルタ属、
   ヴイオラ属、又はメリツサ属に属する植物の組織
   を培養し、培養物から不定芽を分化誘導せしめ、
   該不定芽中に産生蓄積された精油成分を取得する
   ことを特徴とする精油の製造方法。 ２ 植物がペラルゴニウム属、ルタ属、又はヴイ
   オラ属に属するものである特許請求の範囲第１項
   記載の精油の製造方法。