JPH0143550B2 - - Google Patents

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JPH0143550B2
JPH0143550B2 JP9833881A JP9833881A JPH0143550B2 JP H0143550 B2 JPH0143550 B2 JP H0143550B2 JP 9833881 A JP9833881 A JP 9833881A JP 9833881 A JP9833881 A JP 9833881A JP H0143550 B2 JPH0143550 B2 JP H0143550B2
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JP
Japan
Prior art keywords
urokinase
perlite
human urine
urine
washed
Prior art date
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Expired
Application number
JP9833881A
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English (en)
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JPS58890A (ja
Inventor
Shigeji Yonezawa
Masato Nagata
Masao Takahashi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Godo Shusei KK
Original Assignee
Godo Shusei KK
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Filing date
Publication date
Application filed by Godo Shusei KK filed Critical Godo Shusei KK
Priority to JP9833881A priority Critical patent/JPS58890A/ja
Publication of JPS58890A publication Critical patent/JPS58890A/ja
Publication of JPH0143550B2 publication Critical patent/JPH0143550B2/ja
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  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
本発明はウロキナーゼの回収方法に関するもの
で、人尿あるいはウロキナーゼ含有液より、高収
率でかつ高純度のウロキナーゼを、工業的に有利
に回収する方法を提供しようとするものである。 ヒト尿中にはフイブリンを分解する物質が存在
し、Williams(1951)Sobel(1952)らはこの物質
はプラスミノーゲンをプラスミンに活性化する酵
素であるとして、これを「ウロキナーゼ」と命名
した。それ以来ウロキナーゼは末梢動静脈血栓
症、脳血管閉鎖症や、心筋梗塞症などの血液循環
系における血栓症、塞栓症の溶解治療剤として用
いられてきた。また最近においては制癌剤との併
用の有用性がみとめられ、ウロキナーゼの重要性
はさらに増してきている。 人尿から単離されたウロキナーゼは、抗原抗体
は反応などの副作用がなく、現在広く用いられて
いる。従来、人尿からウロキナーゼを取得するた
め、硫酸バリウム、シリカゲル、ハイフロスーパ
ーセール、ベントナイト、ハイドロキシルアパタ
イト、ゼオライト、リン酸セルロース、ボンネ
ル、その他のイオン交換体を吸着剤として使用す
る方法が知られている。本発明者らは、これらの
公知の取得方法に比べてさらに優れた方法を開発
すべく研究の結果、ウロキナーゼの吸着剤として
使用されたことのないパーライトが効果的であ
り、高収率で比活性の高いウロキナーゼの回収方
法として、工業的規模においても経済性の高いこ
とを見出し本発明を完成した。本発明で使用する
パーライトはガラス質火山岩の粉末を1000℃前後
の温度で急熱して膨張させ、細かい気泡状細胞構
造となし、これを粉砕分級したもので、数%乃至
それ以下の結合水分を有するケイ酸塩を主成分と
する鉱物質である。 本発明の概要は、人尿またはウロキナーゼ含有
液、例えば泡立て法などにより濃縮した尿を、PH
8.5〜9.5に調整し、生ずる沈澱物を除去後PHを再
度調整して5.0〜7.0とする。さらに水を加えて電
導度(以下ECと略す)を10〜20ミリモー/cmと
する。これをあらかじめIN=塩酸で処理してお
いたパーライトと接触させ、ウロキナーゼを吸着
させる。原尿1当り通常400〜1600mg程度のパ
ーライトが適当である。吸着操作はカラム法によ
つても、あるいはバツチ法によつても可能であ
る。ウロキナーゼを吸着したパーライトを吸着剤
の5倍容の水で洗浄し、ついで、0.1〜0.5Mの塩
類水溶液で洗浄し、不純物を除去する。塩類溶液
による洗浄液量は、吸着剤容積の20倍量が適当で
ある。この洗浄によりウロキナーゼ以外の大部分
の蛋白質が溶出除去される。次に0.1〜0.5Mの塩
類を添加したPH9.5〜12.0のアルカリ水溶液また
は4%アンモニア水溶液で吸着剤を溶出処理する
ことにより、5000〜10000単位/mg蛋白質の高純
度のウロキナーゼ溶出液を取得することができ
る。 人尿(原尿)あるいは泡立て法などにより濃縮
した尿を使用した場合のECとパーライトに対す
るウロキナーゼの吸着率の関係は以下のとおりで
ある。第1表は人尿を泡立て法により約13倍に濃
縮した液に、水または食塩を加えてECを10〜25
ミリモー/cmとした時のパーライトに対するウロ
キナーゼの吸着率を示したものである。パーライ
ト量は濃縮した尿に対して2W/V%使用した。
【表】 この結果は、ウロキナーゼ含有液のECを20ミ
リモー/cm以下で吸着すれば、90%以上の吸着が
可能なことを示している。 第2表はウロキナーゼ含有液をEC=13ミリモ
ー/cm、PH6.5とした時のパーライト量とウロキ
ナーゼ吸着率の関係を示したものである。
【表】 この結果、尿1に対しパーライト400mg程度
の使用で吸着率90%以上が確保できることを示し
ている。また泡立て法により13倍程度に濃縮した
尿に対して0.5W/V%の使用量で、吸着率は90
%以上であつた。 次に実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。なお、ウロキナーゼ活性の測定はプルウクら
のフイブリン平板法〔J.Ploug:Biochim.
Biophys.Acta 24、278(1957)〕によつて行い、
活性表示はジヨンソンらにより定められた国際単
位(IU)〔A.Johnson:Thrombos.Diathes
haemorrh(Stuttg)21、259、(1969)〕によつた。
また蛋白質の定量は、Folin−Lowry法で行つた。 実施例 1 人尿25を泡立て法により濃縮した液2.0を
PH8.5にして、生ずる沈澱物を遠心分離して除去
した後PH6.5に調整する。水を加えて、EC=12〜
13ミリモー/cmとなし、あらかじめIN塩酸処理
後水洗したパーライト40gを加え、1時間撹拌し
ウロキナーゼを吸着させた。ウロキナーゼを吸着
したパーライトは別し、200mlの蒸留水で洗浄
した後、300mlの水に分散させカラム(径9X3cm)
に注加した。水が流下した後さらに500mlの蒸留
水で洗い、次いで0.5M−Nacl水溶液800mlで夾
雑蛋白質を流出除去した。最後に0.5M Naclを
含む0.2%アンモニア水溶液でカラムを溶出し、
無色透明のウロキナーゼ溶出液を得た。吸着率95
%、溶出率9.8%、比活性は9505IU/mg蛋白質で
あつた。 実施例 2 人尿2600を実施例1と同様に処理して濃縮尿
160を得た。この濃縮液を調整してEC=14.5ミ
リモー/cm、PH6.5とした液320に、IN−Hclで
あらかじめ処理し水洗したパーライト3.5Kgを添
加し1時間撹拌しウロキナーゼを吸着させた。こ
のパーライトをカラムに注加し(径40×16cm)、
まず蒸留水100で、次いで0.5M−Nacl水溶液
65で洗浄後、0.5M−Naclを含む0.2%アンモニ
ア水溶液で溶出して、無色透明のウロキナーゼ溶
出液を得た。吸着率90%、溶出率83%、比活性
6580IU/mg蛋白質、人尿の1t当りウロキナーゼ
収量は506万IU/Tであつた。 実施例 3 直径9cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した(径9×3
cm)。人尿25.0をPH8.5として生ずる沈澱物を除
去後、PHを6.5に調整する。この液に水を加えて
EC=12〜13ミリモー/cmに調整した後、前記カ
ラムに通した。全量がカラムを通過した後、蒸留
水1でカラムを洗い非吸着物質を除去した。さ
らに0.5M−Nacl水溶液800mlをカラムにかけて
洗浄し、夾雑蛋白質を溶出させた。 最後に0.5M−Naclを含む0.2%アンモニア水溶
液で溶出し、無色透明のウロキナーゼ溶出液を得
た。吸着率91.5%、溶出率95%、比活性は、
10158IU/mg蛋白質であつた。 実施例 4 直径15cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した。粗ウロキ
ナーゼ(240IU/mg、比活性542IU/mg蛋白質)
300万IUを2000IU/mlの水溶液とし、PH6.5に調
整後EC=10ミリモー/cmとした液を前記カラム
に通した。全量がカラムを通過した後、蒸留水8
でカラムを洗浄し非吸着物を除去し、ついで
0.5M−Nacl水溶液7で夾雑蛋白質を洗い流し
た。最後に0.1M−Naclを含む0.2%アンモニア水
溶液でウロキナーゼを溶出させ回収した。吸着率
90%、溶出率96%、比活性は8761IU/mg蛋白質
であつた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 人尿またはウロキナーゼ含有液をパーライト
    と接触させウロキナーゼを吸着せしめ、該パーラ
    イトよりウロキナーゼを溶出することを特徴とす
    るウロキナーゼの取得法。 2 パーライトの使用量が、溶液を人尿に換算し
    て1当り400mg以上1600mg以下である特許請求
    の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。 3 パーライトよりウロキナーゼを溶出するに先
    立ち、0.1〜0.5Mの塩類溶液で洗浄する特許請求
    の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。 4 吸着に先立ち、人尿またはウロキナーゼ含有
    液の電導度を、10〜20ミリモー/cmに調整する特
    許請求の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。
JP9833881A 1981-06-26 1981-06-26 ウロキナ−ゼの回収法 Granted JPS58890A (ja)

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Application Number Priority Date Filing Date Title
JP9833881A JPS58890A (ja) 1981-06-26 1981-06-26 ウロキナ−ゼの回収法

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JP9833881A JPS58890A (ja) 1981-06-26 1981-06-26 ウロキナ−ゼの回収法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS58890A JPS58890A (ja) 1983-01-06
JPH0143550B2 true JPH0143550B2 (ja) 1989-09-21

Family

ID=14217111

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JP9833881A Granted JPS58890A (ja) 1981-06-26 1981-06-26 ウロキナ−ゼの回収法

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JPS61241171A (ja) * 1985-04-18 1986-10-27 Tokyo Electric Co Ltd 印字装置

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JPS58890A (ja) 1983-01-06

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