JPH0143550B2 - - Google Patents
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- JPH0143550B2 JPH0143550B2 JP9833881A JP9833881A JPH0143550B2 JP H0143550 B2 JPH0143550 B2 JP H0143550B2 JP 9833881 A JP9833881 A JP 9833881A JP 9833881 A JP9833881 A JP 9833881A JP H0143550 B2 JPH0143550 B2 JP H0143550B2
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- human urine
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Landscapes
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Description
本発明はウロキナーゼの回収方法に関するもの
で、人尿あるいはウロキナーゼ含有液より、高収
率でかつ高純度のウロキナーゼを、工業的に有利
に回収する方法を提供しようとするものである。 ヒト尿中にはフイブリンを分解する物質が存在
し、Williams(1951)Sobel(1952)らはこの物質
はプラスミノーゲンをプラスミンに活性化する酵
素であるとして、これを「ウロキナーゼ」と命名
した。それ以来ウロキナーゼは末梢動静脈血栓
症、脳血管閉鎖症や、心筋梗塞症などの血液循環
系における血栓症、塞栓症の溶解治療剤として用
いられてきた。また最近においては制癌剤との併
用の有用性がみとめられ、ウロキナーゼの重要性
はさらに増してきている。 人尿から単離されたウロキナーゼは、抗原抗体
は反応などの副作用がなく、現在広く用いられて
いる。従来、人尿からウロキナーゼを取得するた
め、硫酸バリウム、シリカゲル、ハイフロスーパ
ーセール、ベントナイト、ハイドロキシルアパタ
イト、ゼオライト、リン酸セルロース、ボンネ
ル、その他のイオン交換体を吸着剤として使用す
る方法が知られている。本発明者らは、これらの
公知の取得方法に比べてさらに優れた方法を開発
すべく研究の結果、ウロキナーゼの吸着剤として
使用されたことのないパーライトが効果的であ
り、高収率で比活性の高いウロキナーゼの回収方
法として、工業的規模においても経済性の高いこ
とを見出し本発明を完成した。本発明で使用する
パーライトはガラス質火山岩の粉末を1000℃前後
の温度で急熱して膨張させ、細かい気泡状細胞構
造となし、これを粉砕分級したもので、数%乃至
それ以下の結合水分を有するケイ酸塩を主成分と
する鉱物質である。 本発明の概要は、人尿またはウロキナーゼ含有
液、例えば泡立て法などにより濃縮した尿を、PH
8.5〜9.5に調整し、生ずる沈澱物を除去後PHを再
度調整して5.0〜7.0とする。さらに水を加えて電
導度(以下ECと略す)を10〜20ミリモー/cmと
する。これをあらかじめIN=塩酸で処理してお
いたパーライトと接触させ、ウロキナーゼを吸着
させる。原尿1当り通常400〜1600mg程度のパ
ーライトが適当である。吸着操作はカラム法によ
つても、あるいはバツチ法によつても可能であ
る。ウロキナーゼを吸着したパーライトを吸着剤
の5倍容の水で洗浄し、ついで、0.1〜0.5Mの塩
類水溶液で洗浄し、不純物を除去する。塩類溶液
による洗浄液量は、吸着剤容積の20倍量が適当で
ある。この洗浄によりウロキナーゼ以外の大部分
の蛋白質が溶出除去される。次に0.1〜0.5Mの塩
類を添加したPH9.5〜12.0のアルカリ水溶液また
は4%アンモニア水溶液で吸着剤を溶出処理する
ことにより、5000〜10000単位/mg蛋白質の高純
度のウロキナーゼ溶出液を取得することができ
る。 人尿(原尿)あるいは泡立て法などにより濃縮
した尿を使用した場合のECとパーライトに対す
るウロキナーゼの吸着率の関係は以下のとおりで
ある。第1表は人尿を泡立て法により約13倍に濃
縮した液に、水または食塩を加えてECを10〜25
ミリモー/cmとした時のパーライトに対するウロ
キナーゼの吸着率を示したものである。パーライ
ト量は濃縮した尿に対して2W/V%使用した。
で、人尿あるいはウロキナーゼ含有液より、高収
率でかつ高純度のウロキナーゼを、工業的に有利
に回収する方法を提供しようとするものである。 ヒト尿中にはフイブリンを分解する物質が存在
し、Williams(1951)Sobel(1952)らはこの物質
はプラスミノーゲンをプラスミンに活性化する酵
素であるとして、これを「ウロキナーゼ」と命名
した。それ以来ウロキナーゼは末梢動静脈血栓
症、脳血管閉鎖症や、心筋梗塞症などの血液循環
系における血栓症、塞栓症の溶解治療剤として用
いられてきた。また最近においては制癌剤との併
用の有用性がみとめられ、ウロキナーゼの重要性
はさらに増してきている。 人尿から単離されたウロキナーゼは、抗原抗体
は反応などの副作用がなく、現在広く用いられて
いる。従来、人尿からウロキナーゼを取得するた
め、硫酸バリウム、シリカゲル、ハイフロスーパ
ーセール、ベントナイト、ハイドロキシルアパタ
イト、ゼオライト、リン酸セルロース、ボンネ
ル、その他のイオン交換体を吸着剤として使用す
る方法が知られている。本発明者らは、これらの
公知の取得方法に比べてさらに優れた方法を開発
すべく研究の結果、ウロキナーゼの吸着剤として
使用されたことのないパーライトが効果的であ
り、高収率で比活性の高いウロキナーゼの回収方
法として、工業的規模においても経済性の高いこ
とを見出し本発明を完成した。本発明で使用する
パーライトはガラス質火山岩の粉末を1000℃前後
の温度で急熱して膨張させ、細かい気泡状細胞構
造となし、これを粉砕分級したもので、数%乃至
それ以下の結合水分を有するケイ酸塩を主成分と
する鉱物質である。 本発明の概要は、人尿またはウロキナーゼ含有
液、例えば泡立て法などにより濃縮した尿を、PH
8.5〜9.5に調整し、生ずる沈澱物を除去後PHを再
度調整して5.0〜7.0とする。さらに水を加えて電
導度(以下ECと略す)を10〜20ミリモー/cmと
する。これをあらかじめIN=塩酸で処理してお
いたパーライトと接触させ、ウロキナーゼを吸着
させる。原尿1当り通常400〜1600mg程度のパ
ーライトが適当である。吸着操作はカラム法によ
つても、あるいはバツチ法によつても可能であ
る。ウロキナーゼを吸着したパーライトを吸着剤
の5倍容の水で洗浄し、ついで、0.1〜0.5Mの塩
類水溶液で洗浄し、不純物を除去する。塩類溶液
による洗浄液量は、吸着剤容積の20倍量が適当で
ある。この洗浄によりウロキナーゼ以外の大部分
の蛋白質が溶出除去される。次に0.1〜0.5Mの塩
類を添加したPH9.5〜12.0のアルカリ水溶液また
は4%アンモニア水溶液で吸着剤を溶出処理する
ことにより、5000〜10000単位/mg蛋白質の高純
度のウロキナーゼ溶出液を取得することができ
る。 人尿(原尿)あるいは泡立て法などにより濃縮
した尿を使用した場合のECとパーライトに対す
るウロキナーゼの吸着率の関係は以下のとおりで
ある。第1表は人尿を泡立て法により約13倍に濃
縮した液に、水または食塩を加えてECを10〜25
ミリモー/cmとした時のパーライトに対するウロ
キナーゼの吸着率を示したものである。パーライ
ト量は濃縮した尿に対して2W/V%使用した。
【表】
この結果は、ウロキナーゼ含有液のECを20ミ
リモー/cm以下で吸着すれば、90%以上の吸着が
可能なことを示している。 第2表はウロキナーゼ含有液をEC=13ミリモ
ー/cm、PH6.5とした時のパーライト量とウロキ
ナーゼ吸着率の関係を示したものである。
リモー/cm以下で吸着すれば、90%以上の吸着が
可能なことを示している。 第2表はウロキナーゼ含有液をEC=13ミリモ
ー/cm、PH6.5とした時のパーライト量とウロキ
ナーゼ吸着率の関係を示したものである。
【表】
この結果、尿1に対しパーライト400mg程度
の使用で吸着率90%以上が確保できることを示し
ている。また泡立て法により13倍程度に濃縮した
尿に対して0.5W/V%の使用量で、吸着率は90
%以上であつた。 次に実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。なお、ウロキナーゼ活性の測定はプルウクら
のフイブリン平板法〔J.Ploug:Biochim.
Biophys.Acta 24、278(1957)〕によつて行い、
活性表示はジヨンソンらにより定められた国際単
位(IU)〔A.Johnson:Thrombos.Diathes
haemorrh(Stuttg)21、259、(1969)〕によつた。
また蛋白質の定量は、Folin−Lowry法で行つた。 実施例 1 人尿25を泡立て法により濃縮した液2.0を
PH8.5にして、生ずる沈澱物を遠心分離して除去
した後PH6.5に調整する。水を加えて、EC=12〜
13ミリモー/cmとなし、あらかじめIN塩酸処理
後水洗したパーライト40gを加え、1時間撹拌し
ウロキナーゼを吸着させた。ウロキナーゼを吸着
したパーライトは別し、200mlの蒸留水で洗浄
した後、300mlの水に分散させカラム(径9X3cm)
に注加した。水が流下した後さらに500mlの蒸留
水で洗い、次いで0.5M−Nacl水溶液800mlで夾
雑蛋白質を流出除去した。最後に0.5M Naclを
含む0.2%アンモニア水溶液でカラムを溶出し、
無色透明のウロキナーゼ溶出液を得た。吸着率95
%、溶出率9.8%、比活性は9505IU/mg蛋白質で
あつた。 実施例 2 人尿2600を実施例1と同様に処理して濃縮尿
160を得た。この濃縮液を調整してEC=14.5ミ
リモー/cm、PH6.5とした液320に、IN−Hclで
あらかじめ処理し水洗したパーライト3.5Kgを添
加し1時間撹拌しウロキナーゼを吸着させた。こ
のパーライトをカラムに注加し(径40×16cm)、
まず蒸留水100で、次いで0.5M−Nacl水溶液
65で洗浄後、0.5M−Naclを含む0.2%アンモニ
ア水溶液で溶出して、無色透明のウロキナーゼ溶
出液を得た。吸着率90%、溶出率83%、比活性
6580IU/mg蛋白質、人尿の1t当りウロキナーゼ
収量は506万IU/Tであつた。 実施例 3 直径9cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した(径9×3
cm)。人尿25.0をPH8.5として生ずる沈澱物を除
去後、PHを6.5に調整する。この液に水を加えて
EC=12〜13ミリモー/cmに調整した後、前記カ
ラムに通した。全量がカラムを通過した後、蒸留
水1でカラムを洗い非吸着物質を除去した。さ
らに0.5M−Nacl水溶液800mlをカラムにかけて
洗浄し、夾雑蛋白質を溶出させた。 最後に0.5M−Naclを含む0.2%アンモニア水溶
液で溶出し、無色透明のウロキナーゼ溶出液を得
た。吸着率91.5%、溶出率95%、比活性は、
10158IU/mg蛋白質であつた。 実施例 4 直径15cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した。粗ウロキ
ナーゼ(240IU/mg、比活性542IU/mg蛋白質)
300万IUを2000IU/mlの水溶液とし、PH6.5に調
整後EC=10ミリモー/cmとした液を前記カラム
に通した。全量がカラムを通過した後、蒸留水8
でカラムを洗浄し非吸着物を除去し、ついで
0.5M−Nacl水溶液7で夾雑蛋白質を洗い流し
た。最後に0.1M−Naclを含む0.2%アンモニア水
溶液でウロキナーゼを溶出させ回収した。吸着率
90%、溶出率96%、比活性は8761IU/mg蛋白質
であつた。
の使用で吸着率90%以上が確保できることを示し
ている。また泡立て法により13倍程度に濃縮した
尿に対して0.5W/V%の使用量で、吸着率は90
%以上であつた。 次に実施例により本発明をさらに詳細に説明す
る。なお、ウロキナーゼ活性の測定はプルウクら
のフイブリン平板法〔J.Ploug:Biochim.
Biophys.Acta 24、278(1957)〕によつて行い、
活性表示はジヨンソンらにより定められた国際単
位(IU)〔A.Johnson:Thrombos.Diathes
haemorrh(Stuttg)21、259、(1969)〕によつた。
また蛋白質の定量は、Folin−Lowry法で行つた。 実施例 1 人尿25を泡立て法により濃縮した液2.0を
PH8.5にして、生ずる沈澱物を遠心分離して除去
した後PH6.5に調整する。水を加えて、EC=12〜
13ミリモー/cmとなし、あらかじめIN塩酸処理
後水洗したパーライト40gを加え、1時間撹拌し
ウロキナーゼを吸着させた。ウロキナーゼを吸着
したパーライトは別し、200mlの蒸留水で洗浄
した後、300mlの水に分散させカラム(径9X3cm)
に注加した。水が流下した後さらに500mlの蒸留
水で洗い、次いで0.5M−Nacl水溶液800mlで夾
雑蛋白質を流出除去した。最後に0.5M Naclを
含む0.2%アンモニア水溶液でカラムを溶出し、
無色透明のウロキナーゼ溶出液を得た。吸着率95
%、溶出率9.8%、比活性は9505IU/mg蛋白質で
あつた。 実施例 2 人尿2600を実施例1と同様に処理して濃縮尿
160を得た。この濃縮液を調整してEC=14.5ミ
リモー/cm、PH6.5とした液320に、IN−Hclで
あらかじめ処理し水洗したパーライト3.5Kgを添
加し1時間撹拌しウロキナーゼを吸着させた。こ
のパーライトをカラムに注加し(径40×16cm)、
まず蒸留水100で、次いで0.5M−Nacl水溶液
65で洗浄後、0.5M−Naclを含む0.2%アンモニ
ア水溶液で溶出して、無色透明のウロキナーゼ溶
出液を得た。吸着率90%、溶出率83%、比活性
6580IU/mg蛋白質、人尿の1t当りウロキナーゼ
収量は506万IU/Tであつた。 実施例 3 直径9cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した(径9×3
cm)。人尿25.0をPH8.5として生ずる沈澱物を除
去後、PHを6.5に調整する。この液に水を加えて
EC=12〜13ミリモー/cmに調整した後、前記カ
ラムに通した。全量がカラムを通過した後、蒸留
水1でカラムを洗い非吸着物質を除去した。さ
らに0.5M−Nacl水溶液800mlをカラムにかけて
洗浄し、夾雑蛋白質を溶出させた。 最後に0.5M−Naclを含む0.2%アンモニア水溶
液で溶出し、無色透明のウロキナーゼ溶出液を得
た。吸着率91.5%、溶出率95%、比活性は、
10158IU/mg蛋白質であつた。 実施例 4 直径15cmのカラムに、あらかじめIN−Hcl処理
し水洗したパーライト40gを充填した。粗ウロキ
ナーゼ(240IU/mg、比活性542IU/mg蛋白質)
300万IUを2000IU/mlの水溶液とし、PH6.5に調
整後EC=10ミリモー/cmとした液を前記カラム
に通した。全量がカラムを通過した後、蒸留水8
でカラムを洗浄し非吸着物を除去し、ついで
0.5M−Nacl水溶液7で夾雑蛋白質を洗い流し
た。最後に0.1M−Naclを含む0.2%アンモニア水
溶液でウロキナーゼを溶出させ回収した。吸着率
90%、溶出率96%、比活性は8761IU/mg蛋白質
であつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 人尿またはウロキナーゼ含有液をパーライト
と接触させウロキナーゼを吸着せしめ、該パーラ
イトよりウロキナーゼを溶出することを特徴とす
るウロキナーゼの取得法。 2 パーライトの使用量が、溶液を人尿に換算し
て1当り400mg以上1600mg以下である特許請求
の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。 3 パーライトよりウロキナーゼを溶出するに先
立ち、0.1〜0.5Mの塩類溶液で洗浄する特許請求
の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。 4 吸着に先立ち、人尿またはウロキナーゼ含有
液の電導度を、10〜20ミリモー/cmに調整する特
許請求の範囲1記載のウロキナーゼの取得法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9833881A JPS58890A (ja) | 1981-06-26 | 1981-06-26 | ウロキナ−ゼの回収法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9833881A JPS58890A (ja) | 1981-06-26 | 1981-06-26 | ウロキナ−ゼの回収法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58890A JPS58890A (ja) | 1983-01-06 |
| JPH0143550B2 true JPH0143550B2 (ja) | 1989-09-21 |
Family
ID=14217111
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9833881A Granted JPS58890A (ja) | 1981-06-26 | 1981-06-26 | ウロキナ−ゼの回収法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58890A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61241171A (ja) * | 1985-04-18 | 1986-10-27 | Tokyo Electric Co Ltd | 印字装置 |
-
1981
- 1981-06-26 JP JP9833881A patent/JPS58890A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58890A (ja) | 1983-01-06 |
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