JPH0153423B2 - - Google Patents

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JPH0153423B2
JPH0153423B2 JP56160461A JP16046181A JPH0153423B2 JP H0153423 B2 JPH0153423 B2 JP H0153423B2 JP 56160461 A JP56160461 A JP 56160461A JP 16046181 A JP16046181 A JP 16046181A JP H0153423 B2 JPH0153423 B2 JP H0153423B2
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Takashi Kudo
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Mochida Pharmaceutical Co Ltd
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Description

【発明の詳細な説明】
本発明は固相に結合して存在する反応性物質と
液相に存在する反応性物質とを効率よく反応させ
るための装置に関するものである。 体液中に微量に存在する物質や生体に投与した
薬物の血中もしくは尿中濃度を測定する手段とし
て抗原抗体反応を利用した免疫学的測定方法が使
用されている。この測定法にはいつくつかの異な
つた測定原理に基づく方法が知られており、それ
ぞれが実用化されているが、測定感度が高く、定
量性に優れている放射免疫学測定法（RIA）、酵
素免疫測定法（EIA）及び螢光免疫測定法
（FIA）が広く用いられている。なかでもいわゆ
るサンドウイツチ法は測定感度が高く、操作が容
易であるので広く利用されている。 その測定法においては被測定抗原とその抗原に
対する不溶化した抗体とを反応させる（第１反
応）と両者は反応して抗原抗体複合物を形成す
る。この抗原抗体複合物に、標識剤で標識した被
測定抗原と結合する抗体（標識抗体）を反応させ
た（第二反応）後、この標識抗体を抗原抗体複合
物に結合した標識抗体と結合しなかつた標識抗体
とに分離し、いずれか一方の標識剤の活性を測定
する。 このような反応を行なうにあたり、抗体等の反
応性物質を不溶化するための担体として容器状の
ものの内壁面を使用すると都合がよい。しかし反
応容器の内壁面は抗体等の反応性物質を結合させ
る表面積が他の担体、例えばプラスチツクビー
ズ、紙、セルロース微粒子等に比べて小さいの
で、その表面に結合させうる反応性物質の量が少
ないという欠点がある。そのため、このような内
壁面に反応性物質を不溶化して有する反応容器で
従来行なわれてきた反応方法、即ち試験管等の反
応容器を直立させて静置もしくは間歇的に撹拌し
て反応させる方法は長時間を要するという欠点が
ある。 このような欠点を除去するために、本発明者ら
は研究を重ねた結果、従来行なわれてきたように
反応容器を直立させて静置、もしくは間歇的に撹
拌するのではなく、反応容器を一定角度に傾斜さ
せて、一定の回転数で回転させつつ反応を行なわ
せることにより、反応容器を不溶化担体として使
用する方法において従来より測定感度を高めうる
とともに測定時間を短縮しうることを見出した。
すなわち、体液中に存在する物質は一般に微量で
ありそれを含む体液自体も少量しか得られない場
合が多い。従つて、従来この種の方法において、
試験管に抗体を結合させる場合、試験管の底部に
近い部分のみ（底部から１cm程度）に結合されて
いるのが通常であるが、前記のように反応容器を
傾斜させて回転させることによつて、試料が少量
の場合でも反応容器内面に結合した抗体と十分接
触することが可能なので、試験管内壁面の上部ま
で抗体を結合させることができる。更に、回転に
よる撹拌効果も得られるので短時間で高感度の測
定ができるのである。 なお、反応容器の傾斜角度に関する本発明者ら
の知見によれば、一般に二つの反応成分の接触が
多いほど反応は良く進行する。しかして、同一接
触面積を得るに必要な試料の量は反応容器の傾斜
角が水平に近いほど少量ですむので、反応液がこ
ぼれ出ない程度に水平に近い方が良い。したがつ
て反応容器の傾斜角度の上限に特に制限はない
が、試料の節約あるいは測定感度上昇の効果を得
るために45度ないし水平とするのが適当である。 傾斜させた反応容器の回転数は10〜100rpmが
適当である。100rpmより速いと試料が管壁に沿
つて流下せず、一緒に回転してしまうので抗体と
充分接触しなくなるためであり、10rpmより遅い
と撹拌効果が著しく減少するからである。。 本発明はこのように反応容器を傾斜させて回転
させつつ反応を行なわしめるための傾斜回転装置
に関するものである。 本発明の装置は、一定の範囲の任意の速度で一
方向に回転可能に支持体に取付けられた円盤、前
記円盤を所望する速度で回転させる手段、各々自
身の軸を中心に回転しうるように前記円盤に取付
けられた複数の反応容器ホルダー、前記反応容器
ホルダーを例えば10〜100rpmなどの任意の回転
数で回転させる手段及び前記反応容器ホルダーが
水平方向に対し上方０〜90度の任意の角度に向く
ように前記円盤全体をを固定するための固定手段
とからなる。 次に本発明の装置を図面に基づいてさらに詳し
く説明する。第１図は本発明装置のの一実施例を
表わし、第２図は第１図の断面図を表わし、そし
て第３図は第２図の切断線Ｉ−Ｉに沿つて切断し
た本発明装置の部分断面図である。円盤２の盤上
には、該円盤と同心円を描くように等間隔で複数
容器ホルダー１が回転可能に取り付けられてい
る。このホルダー１は反応容器を円盤上に保持す
る目的で取付けられており、図に示す例では複数
本の棒状突起１−ａとその下の円筒状部１−ｂと
からなり、この突起１−ａにより反応容器Ａをは
さんで支持する。円筒状部１−ｂは、ホルダー１
を円盤２上に保持するための係止部１−Ｃ、ホル
ダー１を円盤２上で回転させるための摺動面１−
ｄおよびホルダー１に回転運動を与えるための回
転盤３との圧接部１−ｅよりなり、この部分は運
動を伝える手段として歯車を使用することもでき
る。回転盤３は円盤２を支持する回転軸８に遊嵌
されており、その一面に固着された歯車４、該歯
車４に咬合する歯車４′および該歯車４′の軸に連
なる減速器５を介してモーター６からの回転運動
を前記ホルダー１に伝える。ホルダー１の回転速
度は調節器７により調節して、ホルダー１に保持
された容器Ａを10〜100rpmの範囲の任意の回転
数に回転させうるようになつている。 円盤２は回転軸８の先端に固定され、該回転軸
８の途中に設けられた歯車９、該歯車９に咬合す
る歯車９′、ウオームギア１０および減速器１１
を通じて前記とは別のモーター１２により駆動さ
せることにより、反応容器ホルダーを順次一回転
方向に送る役目を果す。一つの位置の反応容器ホ
ルダーをその隣の反応容器ホルダーの位置まで送
るための送り時間は調節器１３により、0.5〜５
分間の任意の間隔で設定できる。 この装置は例えば支持板１４で支持して使用す
るが、そのとき装置上に保持された反応容器の口
が水平より０〜90度の範囲の任意の角度になるよ
うに設定する。 本発明の装置を使用すると次のように利点が得
られる。 (i) 反応容器はたえず回転しているため、反応液
の撹拌が十分に行なわれるので反応効率が良く
なり、高感度の測定が可能で、測定精度が向上
する。 (ii) 従来、高感度の測定系を得るには試料液量を
増やすなどの処置が行なわれていたが、本発明
の装置を使用すれば、反応容器の傾斜角度に応
じて第１表に示すように、従来の1/2〜1/10の
試料液量で済むので実質上、従来の方法で試料
液量を２〜10倍に増加させたと同様の効果を有
する。
【表】 (iii) 従来、反応の一方の成分の量が少ないと検量
線の勾配が小さいため測定の精度が低下する問
題があつた。これに対して本発明の装置を使用
すれば第２表に示すように反応容器の傾斜角度
に応じて試料液量を従来と同一とすると試料と
接触しうる反応容器内面の面積は従来の1.5〜
４倍に拡大される。
【表】 従つて、この拡大された部分にも抗体を結合
させることができるので高感度、かつ高精度を
得ることができる。例えば、アルフア−フエト
プロテイン（AFP）測定で同一試薬を用い、
同一試料液量を使用し、各濃度で５回ずつ測定
して第３表に示す結果を得た。第４図はこの結
果をもとに描いた検量線を比較したものであ
る。本発明装置の使用による検量線の方が従来
法による検量線より勾配が大きく精度が高いこ
とがわかる。なおこのAFPの測定は傾斜角10
度、回転数30rpmで行なつた。
【表】 (iv) 反応時間を大巾に短縮することができる。例
えば第４表はAFPの測定で同一試薬を使用し
て同程度の測定感度及び精度を得るに必要な測
定時間を比較したものである。本発明装置の使
用によつて１時間で実施でき測定時間が大巾に
短縮されていることがわかる。なお、この場合
の傾斜角は20度、回転数は20rpmであり、得ら
れた標準曲線を第５図に示した。
【表】 (v) 本発明装置は反応容器を回転させながら順
次、自動送りさせることができるので、例えば
試料液を添加した多数の反応容器を次々に円盤
のスタート位置反応容器ホルダーに載架し、こ
の反応容器を回転させながら自動送りする間に
反応を完了せしめ、所定の位置で検知器、たと
えば分光光度計で自動的に測定することもでき
る。したがつて本発明装置は反応の自動化に特
に適する。 次に本発明の装置の使用例を示す。使用例中
においては、説明の便宜上、反応容器を試験
管、反応容器の内壁面に結合して存在する物質
を抗体、液相中に存在する物質を抗原として説
明するが、本発明はこれらの組合せのみに限定
されるものではない。 使用例 １ AFPの測定 (a) 反応用試験管の製造 ポリスチレン製試験管を0.05Mリン酸緩衝生
理食塩水、PH6.4（以下PBSと略す）にて洗浄し
た後、単クローン性抗AFP抗体〔Ａ〕（１mg／
ml）２mlを入れて、56℃20分間反応させた。反
応後PBSで洗浄し抗AFP抗体〔Ａ〕感作試験
管を製造した。また、「ジヤーナル・オブ・ヒ
ストケミストリー・アンド・サイトケミストリ
ー（J.Histochem.Cytochem）第22巻、第1084
頁（1974年）」に記載された中根等の方法によ
り前記〔Ａ〕とはクローンの異なる単クローン
性抗体〔Ｂ〕に西洋ワサビパーオキシデース
（ベーリンガーマンハイム社grade1：以下
HRPOと略す）を標識した後、PBSにて50倍
稀釈に稀釈して１mlずつ充填した。次いでこの
両者を凍結乾燥した後密栓してAFP測定用試
験管を製造した。 (b) AFP測定 前記(a)で製造したAFP測定用試験管に
PBS0.9mlを加えた後、AFPを1000、100、10、
1ng／mlとなるように健常人血清で稀釈した各
濃度の標準液0.1mlを加え本発明装置に容器ホ
ルダー上に乗せ、傾斜角20度、回転数50rpmで
30分間反応を行なつた。反応終了後0.005％
tween20を含む生理食塩水（以下洗浄剤と略
す）で洗浄し、50ng／mlの５−アミノサリチ
ル酸および0.01％過酸化水素を含む酵素基質液
２mlを加え再び容器ホルダー上に乗せ、傾斜角
20度、回転数20rpmで30分間反応を行なつた。 反応終了後、２％アジ化ナトリウム50μlを加
え反応を停止し、分光光度計を用いて、波長
500nmで吸光度を測定した。得られた標準曲線
を第６図に示した。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明の実施例を示す図、第２図は第
１図の断面図、第３図は第２図の切断線Ｉ−Ｉに
沿つて切断した本発明装置の部分断面図、第４図
は本発明装置と従来の反応方法の検量線を比較し
たグラフ、第５図は本発明装置の使用で反応時間
の短縮が可能であることを示すグラフ、第６図は
使用例１のAFPの測定における標準曲線を示す
グラフである。 Ａ…反応容器、１…反応容器ホルダー、２…円
盤、３…回転盤、４，４′…歯車、５…減速器、
６…モーター、７…調節器、８…回転軸、９，
９′…歯車、１０…ウオームギヤ、１１…減速器、
１２…モーター、１３…調節器。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ 反応容器の内壁面に反応性物質を結合させ
    て、反応容器を反応性物質の不溶化担体として用
    いて免疫学的反応を行なうための装置であつて、
    一定の範囲の任意の速度で一方向に回転可能に支
    持体に取付けられた円盤、前記円盤を所望する速
    度で回転させる手段、各々自身の軸を中心に回転
    しうるように前記円盤に取付けられた複数の反応
    容器ホルダー、前記反応容器ホルダーを任意の回
    転数で回転させる手段及び前記反応容器ホルダー
    が水平方向に対し上方０〜90度の任意の角度に向
    くように前記円盤全体を固定するための固定手段
    とからなる免疫学的反応装置。
JP56160461A 1981-10-08 1981-10-08 免疫学的反応装置 Granted JPS5861469A (ja)

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Publication Number Publication Date
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JPH0153423B2 true JPH0153423B2 (ja) 1989-11-14

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BR (1) BR8205917A (ja)
CA (1) CA1201113A (ja)
CH (1) CH662518A5 (ja)
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FR (1) FR2514510B1 (ja)
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