JPH0155000B2 - - Google Patents
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- JPH0155000B2 JPH0155000B2 JP19134081A JP19134081A JPH0155000B2 JP H0155000 B2 JPH0155000 B2 JP H0155000B2 JP 19134081 A JP19134081 A JP 19134081A JP 19134081 A JP19134081 A JP 19134081A JP H0155000 B2 JPH0155000 B2 JP H0155000B2
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Description
本発明は（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールの生化学的製造法に関
するものである。さらに詳しくはアルスロバクタ
ー（Arthrobacter）属またはシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する微生物が生産するエ
ステラーゼを、PH７以下において、（Ｒ，Ｓ）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
有機カルボン酸（炭素数１〜18個の飽和または不
飽和のカルボン酸）エステルに作用させて、（Ｓ）
−（−）−体アルコールのエステルを優先的に不斉
加水分解し、光学純度の高い（Ｓ）−（−）−α−
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールとそ
の対掌体のエステルを得ることによる（Ｓ）−
（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールの生化学的製造法に関する。 α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルは優れた殺虫活性を有するいわゆる合成ピレス
ロイドと呼ばれる一群のエステル化合物の新規な
アルコール成分として知られている。該アルコー
ルをアルコール成分として有するフエンバレレー
ト、サイパーメスリン、デルタメスリンなどに代
表される合成ピレスロイドは、その飛躍的な効力
の増強に加え耐陽光性を有することから、家庭用
および防疫用のみならず農業用殺虫剤としても注
目されており、それ故、該α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールの重要性が一層増して
きている。 該α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ
ールは、そのα−位に不斉炭素を有していること
から、２種の光学異性体が存在し、エステルとし
ての殺虫効力はＳ体アルコールの方が、対応する
Ｒ体に比し遥かに優れていることが知られている
（吉岡宏輔、有機合成化学、38巻、12号、115−
1162頁（1980））。従つて、通常の合成化学的製造
法によつて得られる（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールを工業的にも有
利な方法で光学分割し、Ｓ体を取得する技術の開
発が望まれてきている。 ところで該α−シアノ−３−フエノキシベンジ
ルアルコールは、不安定な化合物であり、通常の
光学活性な有機酸とのエステルまたは半エステル
を経由する従来のアルコールの光学分割法は採用
し難く、これまでに（Ｓ）−（−）−α−シアノ−
３−フエノキシベンジルアルコールの取得方法と
しては、 （） 酸性試剤の存在下に（Ｒ，Ｓ）−α−シ
アノ−３−フエノキシベンジルアルコールをシ
ス−２，２−ジメチル−3S−（ジヒドロキシメ
チル）シクロプロパン−1R−カルボン酸ラク
トンと反応させエーテル化合物に導き、生じた
２つの異性体混合物を物理的手段によつて分離
し、（Ｓ）−（−）体アルコール成分を含むエー
テル化合物を酸性媒質中で加水分解し、所望の
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールを得る方法（特開昭54−109944
号）や （） キラルなシクロプロパンカルボン酸の
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールエステルにハロゲン化ほう素を
作用させ、更に水を作用させて（Ｓ）−（−）−
α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルを得る方法（特開昭56−12355号）。 が知られているに過ぎない。しかしながらこれら
の方法においても複雑な工程を必要とすること、
高価な光学活性試薬を必要とすることおよび通算
収率が低いこと、更に（）の方法では、予め光
学活性なα−シアノ−３−フエノキシベンジルア
ルコールのエステルが必要であることなどの点で
必ずしも充分な方法とは言い難い。 本発明者らはこれらの諸問題点を克服し、工業
的にも有利な（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フ
エノキシベンジルアルコールの製造法を見い出す
べく研究を重ねた結果、ラセミ体即ち（Ｒ，Ｓ）
−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルのエステルを原料とし、これを生化学的に不斉
加水分解することにより、（Ｓ）−（−）−α−シア
ノ−３−フエノキシベンジルアルコールと対応す
るＲ体アルコールのエステルに効率よく分割でき
ることを見出し、さらに種々の検討を加え本発明
完成するに至つた。 即ち、本発明はアルスロバクター
（Arthrobacter）属、またはシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する微生物が生産するエ
ステラーゼを、PH７以下において、（Ｒ，Ｓ）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
有機カルボン酸（炭素数１〜18個の飽和または不
飽和のカルボン酸）エステルに作用させ、これを
不斉加水分解して、（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールとその対象体の
エステルに分割することによる（Ｓ）−（−）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
製造法を提供する。 本発明において原料として使用される（Ｒ，
Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールのエステルの有機カルボン酸成分として
は、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、拮
草酸、イソ拮草酸、カプロン酸、カプリル酸、カ
プロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチ
ン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等
が挙げられ、取り扱いの容易さ、反応生成物の光
学純度等から炭素数２〜18個の有機カルボン酸の
エステルが好ましく、更には取り扱いの容易さ、
経済的な観点等から酢酸のエステルがより好まし
い。これらのエステルの製造はエステル製造の常
法、例えば（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノ
キシベンジルアルコールに有機カルボン酸の無水
物あるいは有機カルボン酸ハライドを反応させる
ことにより容易に製造することができる。また
（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジル
アルコールのかわりに、３−フエノキシベンズア
ルデヒドと青酸ソーダおよび前記有機カルボン酸
のハライドを反応させることによつても製造でき
る。 本発明において用いることができるエステラー
ゼはアルスロバクター属またはシユードモナス属
に属する微生物の産生するリパーゼを含む広義の
エステラーゼであり、上記微生物の培養は常法に
従つて液体培養、例えば滅菌した液体培地（ブイ
ヨン培地）に微生物を接種し、通常20〜40℃で２
〜３日間往復振盪培養を行うことができる。 またこれらの微生物起源のエステラーゼのなか
には市販されているものがある。この市販酵素も
また本発明の目的に用いることが出来る。本発明
に用いることが出来る市販酵素としては下記に示
すものが挙げられる。
ノキシベンジルアルコールの生化学的製造法に関
するものである。さらに詳しくはアルスロバクタ
ー（Arthrobacter）属またはシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する微生物が生産するエ
ステラーゼを、PH７以下において、（Ｒ，Ｓ）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
有機カルボン酸（炭素数１〜18個の飽和または不
飽和のカルボン酸）エステルに作用させて、（Ｓ）
−（−）−体アルコールのエステルを優先的に不斉
加水分解し、光学純度の高い（Ｓ）−（−）−α−
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールとそ
の対掌体のエステルを得ることによる（Ｓ）−
（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールの生化学的製造法に関する。 α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルは優れた殺虫活性を有するいわゆる合成ピレス
ロイドと呼ばれる一群のエステル化合物の新規な
アルコール成分として知られている。該アルコー
ルをアルコール成分として有するフエンバレレー
ト、サイパーメスリン、デルタメスリンなどに代
表される合成ピレスロイドは、その飛躍的な効力
の増強に加え耐陽光性を有することから、家庭用
および防疫用のみならず農業用殺虫剤としても注
目されており、それ故、該α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールの重要性が一層増して
きている。 該α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ
ールは、そのα−位に不斉炭素を有していること
から、２種の光学異性体が存在し、エステルとし
ての殺虫効力はＳ体アルコールの方が、対応する
Ｒ体に比し遥かに優れていることが知られている
（吉岡宏輔、有機合成化学、38巻、12号、115−
1162頁（1980））。従つて、通常の合成化学的製造
法によつて得られる（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールを工業的にも有
利な方法で光学分割し、Ｓ体を取得する技術の開
発が望まれてきている。 ところで該α−シアノ−３−フエノキシベンジ
ルアルコールは、不安定な化合物であり、通常の
光学活性な有機酸とのエステルまたは半エステル
を経由する従来のアルコールの光学分割法は採用
し難く、これまでに（Ｓ）−（−）−α−シアノ−
３−フエノキシベンジルアルコールの取得方法と
しては、 （） 酸性試剤の存在下に（Ｒ，Ｓ）−α−シ
アノ−３−フエノキシベンジルアルコールをシ
ス−２，２−ジメチル−3S−（ジヒドロキシメ
チル）シクロプロパン−1R−カルボン酸ラク
トンと反応させエーテル化合物に導き、生じた
２つの異性体混合物を物理的手段によつて分離
し、（Ｓ）−（−）体アルコール成分を含むエー
テル化合物を酸性媒質中で加水分解し、所望の
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールを得る方法（特開昭54−109944
号）や （） キラルなシクロプロパンカルボン酸の
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールエステルにハロゲン化ほう素を
作用させ、更に水を作用させて（Ｓ）−（−）−
α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルを得る方法（特開昭56−12355号）。 が知られているに過ぎない。しかしながらこれら
の方法においても複雑な工程を必要とすること、
高価な光学活性試薬を必要とすることおよび通算
収率が低いこと、更に（）の方法では、予め光
学活性なα−シアノ−３−フエノキシベンジルア
ルコールのエステルが必要であることなどの点で
必ずしも充分な方法とは言い難い。 本発明者らはこれらの諸問題点を克服し、工業
的にも有利な（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フ
エノキシベンジルアルコールの製造法を見い出す
べく研究を重ねた結果、ラセミ体即ち（Ｒ，Ｓ）
−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルのエステルを原料とし、これを生化学的に不斉
加水分解することにより、（Ｓ）−（−）−α−シア
ノ−３−フエノキシベンジルアルコールと対応す
るＲ体アルコールのエステルに効率よく分割でき
ることを見出し、さらに種々の検討を加え本発明
完成するに至つた。 即ち、本発明はアルスロバクター
（Arthrobacter）属、またはシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する微生物が生産するエ
ステラーゼを、PH７以下において、（Ｒ，Ｓ）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
有機カルボン酸（炭素数１〜18個の飽和または不
飽和のカルボン酸）エステルに作用させ、これを
不斉加水分解して、（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールとその対象体の
エステルに分割することによる（Ｓ）−（−）−α
−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの
製造法を提供する。 本発明において原料として使用される（Ｒ，
Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールのエステルの有機カルボン酸成分として
は、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、拮
草酸、イソ拮草酸、カプロン酸、カプリル酸、カ
プロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチ
ン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等
が挙げられ、取り扱いの容易さ、反応生成物の光
学純度等から炭素数２〜18個の有機カルボン酸の
エステルが好ましく、更には取り扱いの容易さ、
経済的な観点等から酢酸のエステルがより好まし
い。これらのエステルの製造はエステル製造の常
法、例えば（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノ
キシベンジルアルコールに有機カルボン酸の無水
物あるいは有機カルボン酸ハライドを反応させる
ことにより容易に製造することができる。また
（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジル
アルコールのかわりに、３−フエノキシベンズア
ルデヒドと青酸ソーダおよび前記有機カルボン酸
のハライドを反応させることによつても製造でき
る。 本発明において用いることができるエステラー
ゼはアルスロバクター属またはシユードモナス属
に属する微生物の産生するリパーゼを含む広義の
エステラーゼであり、上記微生物の培養は常法に
従つて液体培養、例えば滅菌した液体培地（ブイ
ヨン培地）に微生物を接種し、通常20〜40℃で２
〜３日間往復振盪培養を行うことができる。 またこれらの微生物起源のエステラーゼのなか
には市販されているものがある。この市販酵素も
また本発明の目的に用いることが出来る。本発明
に用いることが出来る市販酵素としては下記に示
すものが挙げられる。
【表】
本発明方法を実施するに際し、（Ｒ，Ｓ）−α−
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの有
機カルボン酸エステルの不斉加水分解は、前記微
生物を培養した培養液、培養濾液、エステラーゼ
抽出液、または濃縮液などのエステラーゼ含有
物、あるいは粗製エステラーゼ、精製エステラー
ゼを含有する水溶液と該（Ｒ，Ｓ）−体アルコー
ルの有機カルボン酸エステルを混合し、撹拌また
は振盪することにより行なわれる。必要に応じ、
非エステル系の界面活性剤を添加してもよい。ま
た、酵素を固定化して使用することも可能であ
る。 また、この時反応温度としては10〜65℃が適当
であり、生成した該アルコールが比較的熱に不安
定であること、およびあまり低温では反応速度が
遅いことから20〜50℃が好ましい。 反応時間は通常３〜48時間であるが反応温度を
高めたり、活性の高い酵素を用いることによつて
反応時間の短縮も可能である。また、α−シアノ
−３−フエノキシベンジルアルコールはとりわけ
塩基によつて分解されやすいから酵素反応中の水
溶液のPHのコントロールは重要である。即ち塩基
性媒質中ではエステラーゼによる不斉加水分解が
進行しても、生成した該アルコールが変性を受け
ることからPH７以下で酵素反応を行うことが肝要
である。また、あまりに低いPHでは酵素の失活が
起こることから、PH4.5〜PH6.5の範囲で行うこと
が好ましい。さらに加水分解によつて生成する酢
酸などの有機酸によるPHの低下を防ぐ為に緩衝液
を使用するなどしてPHを一定に制御することが望
ましい。緩衝液としては無機酸塩、有機酸塩いず
れの緩衝液も使用することが出来る。 基質であるエステルの使用濃度は反応液に対し
１〜80W／Ｗ％の範囲、好ましくは５〜35％の範
囲であり、高い基質濃度でも行なうことができ
る。 次に、このようにして不斉加水分解反応を行つ
た後、遊離した（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−
フエノキシベンジルアルコールと未反応の対掌体
のエステルを分離回収する。この分離回収に際し
ては溶媒抽出、分別蒸留、カラムクロマトグラフ
イーなどの操作を適宜採用することができる。例
えば反応液をエーテル、ベンゼンあるいはトルエ
ンなどの有機溶媒で抽出し、この抽出物を減圧で
分別蒸留し、（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールとその対掌体のエステ
ルとを分離するか、または抽出物をシリカゲル等
を用いるカラムクロマトグラフイーで分離するこ
となどして遊離の（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールを得ることがで
きる。 尚、このようにして分離除去された未反応のエ
ステルはアンモニア、ピリジン、トリエチルアミ
ン等の塩基化合物と接触させることによりエピ化
し、再び本発明方法の原料として使用することが
できる。 次に本発明を実施例によつてさらに詳細に説明
するが本発明はこれらに限定されるものではな
い。 実施例 １〜２ （Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールの酢酸エステル1.0ｇと下記表１
に記載した各エステラーゼ20mgを0.2M濃度の酢
酸塩緩衝液（PH5.0）10mlに加え、30℃で撹拌子
を用いて激しく撹拌しつつ反応させた。24時間反
応を行つた後、反応物をトルエンで抽出した。抽
出液を高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
〔Lichrosorb RP−18，MeOH−水（６：４）、
254nm UV検出）で分析し、α−シアノ−３−
フエノキシベンジルアルコールの酢酸エステルと
α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコール
とのピーク面積比より加水分解率を算出した。な
お上記条件での反応中に３−フエノキシベンズア
ルデヒドの副生がないことはHPLCの分析結果よ
り確認された。抽出後を濃縮し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーにかけ、シクロヘキサン−
エチルエーテル（94：６）溶液で溶出し、未反応
のα−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルの酢酸エステルを分離除去した後、更に微量
（10-5％）のパラトルエンスルホン酸を含むメタ
ノールで溶出し、遊離のα−シアノ−３−フエノ
キシベンジルアルコールを取得した。その構造は
HPLC，NMRおよびIR測定により確認された。 次に、溶出溶媒を留去した後、該アルコールの
一部をとりその比旋光度をクロロホルム中で測定
した結果、ここで得られたα−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールは（−）体、すなわち
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジ
ルアルコールであることが確認された。 また得られた遊離α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールのうち10mgをトルエン１mlに
溶解し、等モルの（Ｓ）−（＋）−２−（４−クロロ
フエニル）−イソ吉草酸のクロライドとピリジン
を加え反応させ、α−シアノ−３−フエノキシベ
ンジルアルコールの（Ｓ）−（＋）−２−（４−クロ
ロフエニル）−イソ吉草酸のジアステレオマーと
し、ガスクロマトグラフイー（10％DCQF−１，
2.5ｍ，250℃）で光学異性体比の分析を行つた。 結果を下記表１に示す。 なお酵素反応後分離取得した未反応のエステル
の比旋光度は、クロロホルム中で負の値を示すこ
とがわかつた（例えば実施例１の場合〔α〕D＝−
8.5（Ｃ＝1.5）。
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの有
機カルボン酸エステルの不斉加水分解は、前記微
生物を培養した培養液、培養濾液、エステラーゼ
抽出液、または濃縮液などのエステラーゼ含有
物、あるいは粗製エステラーゼ、精製エステラー
ゼを含有する水溶液と該（Ｒ，Ｓ）−体アルコー
ルの有機カルボン酸エステルを混合し、撹拌また
は振盪することにより行なわれる。必要に応じ、
非エステル系の界面活性剤を添加してもよい。ま
た、酵素を固定化して使用することも可能であ
る。 また、この時反応温度としては10〜65℃が適当
であり、生成した該アルコールが比較的熱に不安
定であること、およびあまり低温では反応速度が
遅いことから20〜50℃が好ましい。 反応時間は通常３〜48時間であるが反応温度を
高めたり、活性の高い酵素を用いることによつて
反応時間の短縮も可能である。また、α−シアノ
−３−フエノキシベンジルアルコールはとりわけ
塩基によつて分解されやすいから酵素反応中の水
溶液のPHのコントロールは重要である。即ち塩基
性媒質中ではエステラーゼによる不斉加水分解が
進行しても、生成した該アルコールが変性を受け
ることからPH７以下で酵素反応を行うことが肝要
である。また、あまりに低いPHでは酵素の失活が
起こることから、PH4.5〜PH6.5の範囲で行うこと
が好ましい。さらに加水分解によつて生成する酢
酸などの有機酸によるPHの低下を防ぐ為に緩衝液
を使用するなどしてPHを一定に制御することが望
ましい。緩衝液としては無機酸塩、有機酸塩いず
れの緩衝液も使用することが出来る。 基質であるエステルの使用濃度は反応液に対し
１〜80W／Ｗ％の範囲、好ましくは５〜35％の範
囲であり、高い基質濃度でも行なうことができ
る。 次に、このようにして不斉加水分解反応を行つ
た後、遊離した（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−
フエノキシベンジルアルコールと未反応の対掌体
のエステルを分離回収する。この分離回収に際し
ては溶媒抽出、分別蒸留、カラムクロマトグラフ
イーなどの操作を適宜採用することができる。例
えば反応液をエーテル、ベンゼンあるいはトルエ
ンなどの有機溶媒で抽出し、この抽出物を減圧で
分別蒸留し、（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールとその対掌体のエステ
ルとを分離するか、または抽出物をシリカゲル等
を用いるカラムクロマトグラフイーで分離するこ
となどして遊離の（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３
−フエノキシベンジルアルコールを得ることがで
きる。 尚、このようにして分離除去された未反応のエ
ステルはアンモニア、ピリジン、トリエチルアミ
ン等の塩基化合物と接触させることによりエピ化
し、再び本発明方法の原料として使用することが
できる。 次に本発明を実施例によつてさらに詳細に説明
するが本発明はこれらに限定されるものではな
い。 実施例 １〜２ （Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールの酢酸エステル1.0ｇと下記表１
に記載した各エステラーゼ20mgを0.2M濃度の酢
酸塩緩衝液（PH5.0）10mlに加え、30℃で撹拌子
を用いて激しく撹拌しつつ反応させた。24時間反
応を行つた後、反応物をトルエンで抽出した。抽
出液を高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
〔Lichrosorb RP−18，MeOH−水（６：４）、
254nm UV検出）で分析し、α−シアノ−３−
フエノキシベンジルアルコールの酢酸エステルと
α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコール
とのピーク面積比より加水分解率を算出した。な
お上記条件での反応中に３−フエノキシベンズア
ルデヒドの副生がないことはHPLCの分析結果よ
り確認された。抽出後を濃縮し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーにかけ、シクロヘキサン−
エチルエーテル（94：６）溶液で溶出し、未反応
のα−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコー
ルの酢酸エステルを分離除去した後、更に微量
（10-5％）のパラトルエンスルホン酸を含むメタ
ノールで溶出し、遊離のα−シアノ−３−フエノ
キシベンジルアルコールを取得した。その構造は
HPLC，NMRおよびIR測定により確認された。 次に、溶出溶媒を留去した後、該アルコールの
一部をとりその比旋光度をクロロホルム中で測定
した結果、ここで得られたα−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールは（−）体、すなわち
（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジ
ルアルコールであることが確認された。 また得られた遊離α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールのうち10mgをトルエン１mlに
溶解し、等モルの（Ｓ）−（＋）−２−（４−クロロ
フエニル）−イソ吉草酸のクロライドとピリジン
を加え反応させ、α−シアノ−３−フエノキシベ
ンジルアルコールの（Ｓ）−（＋）−２−（４−クロ
ロフエニル）−イソ吉草酸のジアステレオマーと
し、ガスクロマトグラフイー（10％DCQF−１，
2.5ｍ，250℃）で光学異性体比の分析を行つた。 結果を下記表１に示す。 なお酵素反応後分離取得した未反応のエステル
の比旋光度は、クロロホルム中で負の値を示すこ
とがわかつた（例えば実施例１の場合〔α〕D＝−
8.5（Ｃ＝1.5）。
【表】
実施例 ３
実施例１においてエスエラーゼ量を20mgから40
mgにし、また緩衝液を0.2M濃度の酢酸塩緩衝液
（PH5.0）から0.1M濃度のリン酸塩緩衝液（PH6.0）
に変更すると共に、反応の進行に伴い1M濃度の
NaOH水溶液をドロツプコントローラーで微小
水滴とし注意深く添加しながらPHをコントローラ
ーでPHを一定に制御した以外は、実施例２と同様
にして酵素反応および反応物の分離を行い、取得
した（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールの比旋光度および加水分解率
を測定した。 結果を表２に示す。
mgにし、また緩衝液を0.2M濃度の酢酸塩緩衝液
（PH5.0）から0.1M濃度のリン酸塩緩衝液（PH6.0）
に変更すると共に、反応の進行に伴い1M濃度の
NaOH水溶液をドロツプコントローラーで微小
水滴とし注意深く添加しながらPHをコントローラ
ーでPHを一定に制御した以外は、実施例２と同様
にして酵素反応および反応物の分離を行い、取得
した（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールの比旋光度および加水分解率
を測定した。 結果を表２に示す。
【表】
実施例 ４〜５
（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールのカプリン酸エステル1.5ｇと下
記表３に記載した各エステラーゼ30mgを0.2M濃
度の酢酸塩緩衝液（PH5.4）10mlに加え、30℃で
激しく撹拌しつつ24時間反応させた。以後実施例
１〜２と同様の操作で分離、分析を行つた。 結果を表３に示す。
ジルアルコールのカプリン酸エステル1.5ｇと下
記表３に記載した各エステラーゼ30mgを0.2M濃
度の酢酸塩緩衝液（PH5.4）10mlに加え、30℃で
激しく撹拌しつつ24時間反応させた。以後実施例
１〜２と同様の操作で分離、分析を行つた。 結果を表３に示す。
【表】
実施例 ６〜９
実施例１〜２において各エステラーゼ量を20mg
から30mgに、緩衝液を0.2M濃度の酢酸塩緩衝液
（PH5.0）から0.1M濃度の酢酸塩緩衝液（PH5.3）
に変更すると共に、反応の進行に伴い1M濃度の
NaOH水溶液をドロツプコントローラーを用い
て微小水滴とし注意深く添加しながらPHコントロ
ーラーでPHを一定に制御し、かつ基質の（Ｒ，
Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールの酢酸エステルの使用量を1.0ｇから下記
表４に示した量に変更した以外は、実施例１〜２
と全く同じ方法で酵素反応および分離、分析を行
い、加水分解率、比旋光度およびガスクロマトグ
ラフイーによる光学異性体比率を測定した。 結果を表４に示す。
から30mgに、緩衝液を0.2M濃度の酢酸塩緩衝液
（PH5.0）から0.1M濃度の酢酸塩緩衝液（PH5.3）
に変更すると共に、反応の進行に伴い1M濃度の
NaOH水溶液をドロツプコントローラーを用い
て微小水滴とし注意深く添加しながらPHコントロ
ーラーでPHを一定に制御し、かつ基質の（Ｒ，
Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールの酢酸エステルの使用量を1.0ｇから下記
表４に示した量に変更した以外は、実施例１〜２
と全く同じ方法で酵素反応および分離、分析を行
い、加水分解率、比旋光度およびガスクロマトグ
ラフイーによる光学異性体比率を測定した。 結果を表４に示す。
【表】
実施例 10〜13
1000mlの三角フラスコにブイヨン培地（水１
にペプトン5.0ｇ、肉エキス5.0ｇNaCl3.0ｇ溶解
し、これに実施例10〜11では２ｇのトリプチリン
を添加し、また実施例12〜13では２ｇのオリーブ
油を添加し、Na2HPO4とKH2PO4でPH7.2とす
る。）200mlを入れて殺菌した後、下記表５に記載
した各微生物を斜面培養から２白金耳接種し、30
℃で48時間往復振盪培養した。次いで遠心分離を
行い、水溶液層に85％濃度になるまでアセトンを
加え、直ちに濾過を行い得られた沈澱物を水洗
後、0.2M濃度の酢酸塩緩衝液（PH5.2）15mlに溶
解し、実施例10〜11においては（Ｒ，Ｓ）−α−
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの酪
酸エステル1.5ｇを加え、また実施例12〜13にお
いては（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールのラウリン酸エステル3.0ｇ
を加え、いずれも33℃で激しく撹拌しつつ26時間
反応させた。以後実施例１〜２と同様の操作で分
離、分析を行い、加水分解率および比旋光度を求
めた。 結果を表５に示す。
にペプトン5.0ｇ、肉エキス5.0ｇNaCl3.0ｇ溶解
し、これに実施例10〜11では２ｇのトリプチリン
を添加し、また実施例12〜13では２ｇのオリーブ
油を添加し、Na2HPO4とKH2PO4でPH7.2とす
る。）200mlを入れて殺菌した後、下記表５に記載
した各微生物を斜面培養から２白金耳接種し、30
℃で48時間往復振盪培養した。次いで遠心分離を
行い、水溶液層に85％濃度になるまでアセトンを
加え、直ちに濾過を行い得られた沈澱物を水洗
後、0.2M濃度の酢酸塩緩衝液（PH5.2）15mlに溶
解し、実施例10〜11においては（Ｒ，Ｓ）−α−
シアノ−３−フエノキシベンジルアルコールの酪
酸エステル1.5ｇを加え、また実施例12〜13にお
いては（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシ
ベンジルアルコールのラウリン酸エステル3.0ｇ
を加え、いずれも33℃で激しく撹拌しつつ26時間
反応させた。以後実施例１〜２と同様の操作で分
離、分析を行い、加水分解率および比旋光度を求
めた。 結果を表５に示す。
【表】
実施例 14
（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベン
ジルアルコールの酢酸エステル8.0ｇとアルスロ
バクター属エステラーゼ（リパーゼ合計BSL）
160mgを0.1M濃度の酢酸塩緩衝液（PH4.5）２ml
に加え、40℃で撹拌子を用いて激しく撹拌しつつ
反応させた。この時、反応中1M濃度のNaOH水
溶液をドロツプコントローラーで微小水滴とし注
意深く添加しながらPHコントローラーでPHを一定
に制御した。24時間反応を行つた後、反応物をト
ルエンで抽出した。 以後、実施例１と同様の操作を行い、表６の結
果を得た。
ジルアルコールの酢酸エステル8.0ｇとアルスロ
バクター属エステラーゼ（リパーゼ合計BSL）
160mgを0.1M濃度の酢酸塩緩衝液（PH4.5）２ml
に加え、40℃で撹拌子を用いて激しく撹拌しつつ
反応させた。この時、反応中1M濃度のNaOH水
溶液をドロツプコントローラーで微小水滴とし注
意深く添加しながらPHコントローラーでPHを一定
に制御した。24時間反応を行つた後、反応物をト
ルエンで抽出した。 以後、実施例１と同様の操作を行い、表６の結
果を得た。
Claims (1)
- １ アルスロバクター（Arthrobacter）属また
はシユードモナス（Pseudomonas）属に属する
微生物が生産するエステラーゼを、PH７以下にお
いて、（Ｒ，Ｓ）−α−シアノ−３−フエノキシベ
ンジルアルコールの有機カルボン酸（炭素数１〜
18個の飽和または不飽和のカルボン酸）エステル
に作用させ、これを不斉加水分解して、（Ｓ）−
（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアル
コールとその対掌体のエステルに分割することを
特徴とする（Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエ
ノキシベンジルアルコールの生化学的製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19134081A JPS5894389A (ja) | 1981-11-28 | 1981-11-28 | （Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ−ルの生化学的製造法 |
| EP19820306125 EP0080827B1 (en) | 1981-11-28 | 1982-11-17 | Method for biotechnologically preparing (s)-(-)-alpha-cyano-3-phenoxybenzyl alcohol |
| DE8282306125T DE3278204D1 (en) | 1981-11-28 | 1982-11-17 | Method for biotechnologically preparing (s)-(-)-alpha-cyano-3-phenoxybenzyl alcohol |
| US07/201,927 US4985365A (en) | 1981-11-28 | 1988-06-03 | Process for producing optically active benzyl alcohol compound |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19134081A JPS5894389A (ja) | 1981-11-28 | 1981-11-28 | （Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ−ルの生化学的製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5894389A JPS5894389A (ja) | 1983-06-04 |
| JPH0155000B2 true JPH0155000B2 (ja) | 1989-11-21 |
Family
ID=16272929
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19134081A Granted JPS5894389A (ja) | 1981-11-28 | 1981-11-28 | （Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ−ルの生化学的製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5894389A (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58212790A (ja) * | 1982-06-02 | 1983-12-10 | Sumitomo Chem Co Ltd | （Ｓ）−（−）−α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ−ルの生化学的製造法 |
| JPS5959196A (ja) * | 1982-09-28 | 1984-04-04 | Sumitomo Chem Co Ltd | 光学活性α−シアノ−３−フエノキシベンジルアルコ−ルの生化学的製造法 |
| JPH0679B2 (ja) * | 1984-06-15 | 1994-01-05 | 住友化学工業株式会社 | 光学活性ベンジルアルコ−ル化合物の製造法 |
| US4827013A (en) * | 1985-12-31 | 1989-05-02 | Ethyl Corporation | (S) α-(cyano-3-phenoxy-benzyl acetate |
| KR100341256B1 (ko) * | 1999-09-11 | 2002-06-21 | 박호군 | 리파제를 이용한 베라파밀 중간체의 분할 및 (ｒ)- 및 (ｓ)-베라파밀의 제조 방법 |
| KR100341255B1 (ko) * | 1999-09-11 | 2002-06-21 | 박호군 | 4급 비대칭탄소를 함유하는 라세미체 알콜 화합물의 분할방법과 시스탄 유사체의 합성 |
-
1981
- 1981-11-28 JP JP19134081A patent/JPS5894389A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5894389A (ja) | 1983-06-04 |
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