JPH0160784B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、オートラジオグラフ測定法に関する
ものである。

放射性標識を付与した物質を生物体に投与した
のち、その生物体、あるいは、その生物体の組織
の一部を試料とし、この試料と高感度Ｘ線フイル
ムなどの放射線フイルムとを一定時間重ね合わせ
ることによつて、該フイルムを感光（あるいは、
露光）させ、その感光部位から該試料中における
放射性標識物質の位置情報を得ることからなるオ
ートラジオグラフイー（ラジオオートグラフイー
とも呼ばれる）、すなわちオートラジオグラフ測
定法は、従来より知られている。このオートラジ
オグラフイーは、たとえば、生物体における投与
物質の代謝、吸収、排泄の経路、状態などを詳し
く研究するために利用されている。このようなオ
ートラジオグラフイーについては、たとえば、次
に示す文献に記載されている。

生化学実験講座６ トレーサー実験法（上）
271〜289頁、「8.オートラジオグラフイー」末吉
徹、重松昭世（1977年、(株)東京化学同人刊） また、オートラジオグラフイーは、放射性標識
を付与された生物体の組織および／または生物体
由来の物質を含む媒体における放射性標識物質の
位置情報を得るためにも利用されている。

たとえば、蛋白質、核酸などのような生物体由
来の高分子物質に放射性標識を付与し、その放射
性標識高分子物質、その誘導体、あるいはその分
解物などをゲル電気泳動などの分離操作にかけて
ゲル状支持体において分離し、そのゲル状支持体
と高感度Ｘ線フイルムとを一定時間重ね合わせる
ことにより、該フイルムを感光させ、その感光部
位から得られる該ゲル中における放射性標識物質
の位置情報を基にして、その高分子物質の分離、
同定、あるいは高分子物質の分子量、特性の評価
などを行なう方法も開発され、実際に利用されて
いる。

特に近年においては、オートラジオグラフイー
はDNAなどの核酸の塩基配列の決定にも有効に
利用されており、従つて生物体に由来する高分子
物質の構造決定において非常に有用な手段となつ
ている。

このオートラジオグラフイーを利用することに
よりDNAの塩基配列を決定する方法としては、
マキサム・ギルバート（Maxam−Gilbert）法、
およびサンガー・クールソン（Sanger−
Coulson）法が知られている。これらの方法は、
DNAが二重ラセン構造を有し、かつ、その二重
ラセンを形成する二本の鎖状分子の間の結合が、
その分子の構成単位である多数の塩基間の水素結
合に起因すること、そして、その多数の構成塩基
単位は、アデニン(A)、グアニン(G)、シトシン(C)そ
してチミン（Ｔ）の四種類の塩基のみからなり、
かつ各構成塩基単位の間の水素結合は、Ｇ−Ｃお
よびＡ−Ｔの二種類の組合わせのみにおいて実現
しているというDNAの特徴的な構造を巧妙に利
用して、その塩基配列を決定する方法である。

たとえば、マキサム・ギルバート法は次に記載
するような操作により実施する。

塩基配列を決定しようとしているDNAあるい
はDNAの分解物の鎖状分子の一方の側の端部に
燐（Ｐ）の放射性同位元素を含む基を結合させる
ことにより、その対象物を放射性標識物質とした
のち、化学的手段を利用して鎖状分子の各塩基の
間の結合を特異的に切断する。次に、この操作に
より得られるDNAあるいはDNAの分解物の多数
の切断分解物の混合物をゲル電気泳動法により分
離し、多数の切断分解物がそれぞれ帯状を形成し
て分離されたラジオクロマトグラム（ただし、視
覚的には見ることができない）を得ることができ
る。このラジオクロマトグラムと高感度Ｘ線フイ
ルムとを低温下にて長時間重ね合わせておくと、
放射性同位元素を分子中に含む切断分解物が存在
する位置に面したＸ線フイルムの部分は感光して
潜像を形成する。このようにして潜像を形成した
Ｘ線フイルムを現像することによりラジオクロマ
トグラムに対応する多数の帯状帯域を含むクロマ
トグラムがＸ線フイルム上に可視像として現われ
る。そして、この可視化されたクロマトグラムと
特異的切断手段とから、放射性同位元素が結合さ
れた鎖状分子の端部から一定の位置関係にある塩
基を順次決定することができ、このようにして対
象物のすべての塩基の配列を決定することができ
る。

なお、上記に要約したマキサム・ギルバート法
については次の文献に詳細に記載されている。

METHODS IN ENZYMOLOGY、VOL.65、
PART Ｉ（ACADEMIC PRESS、NEW YORK
LONDON TRONTO SYDNEY SAN
FRANCISICO、1980） サンガー・クールソン法もまたDNAの特徴的
な構造に着目し、DNA合成酵素、ゲル電気泳動
およびオートラジオグラフイーを利用してDNA
の塩基配列を決定する方法であり、このサンガ
ー・クールソン法および前記のマキサム・ギルバ
ート法の特徴および操作についての簡単な記述は
次の文献に見られる。

「遺伝情報を原語で読む・意表を衝いたDNA
の塩基配列解析法」三浦謹一郎、現代化学、1977
年９月号46〜54頁（(株)東京化学同人刊） これまでに述べたようにオートラジオグラフイ
ーは、生物体の組織、そして、生物体由来の物質
および組織を含む媒体などの試料に含まれている
放射性標識物質の一次元的もしくは二次元的な位
置情報を検出するために非常に有用な手段であ
り、このオートラジオグラフイーを利用すること
により、たとえば、生物体における投与物質の代
謝、吸収、排泄の経路、状態の研究、あるいは生
体高分子の構造決定などを効率良く達成すること
ができる。

しかしながら、このように有用なオートラジオ
グラフイーを実際に利用する場合には、いくつか
の問題がある。

その第一は、オートラジオグラム、または放射
性標識を付与した物質を生物体に投与した生物
体、あるいは、その生物体の組織の一部などの放
射性標識物質を含む試料における放射性物質の位
置を可視化するために、その試料と高感度Ｘ線フ
イルムなどの放射線フイルムとを一定時間重ね合
わせることによつて、該フイルムを感光（露光）
させる操作が煩雑で、かつ長時間を必要とする点
である。すなわち従来のオートラジオグラフイー
において上記の露光操作は、低温（たとえば、０
℃付近、そして核酸の塩基配列決定などにおける
ゲルクロマトグラムの露光の場合には−70〜−90
℃）で、かつ長時間（たとえば、数日間）かけて
実施されている。これは、オートラジオグラフイ
ーの測定対象となる試料は一般に高い放射性が付
与されていないため、充分な感光を得るためには
露光を長時間しなければならないこと、そして、
たとえば室温などの比較的高い温度にて試料と放
射線フイルムとを長時間重ね合わせておくと、放
射線フイルムの感光成分である銀塩が試料中の各
種の物質により化学カブリを受け、このため該フ
イルムに精度の高い感光画像が得られにくく、従
つて、そのような化学カブリを低減するために露
光操作を低温下で行なう必要があることなどの理
由による。そのような厳しい露光条件を緩和する
ために放射線フイルムの感度を更に高めることも
考えられるが、従来のオートラジオグラフイーに
おいて放射線フイルムは、既に非常に高感度にさ
れたものが用いられており、得られる画像の鮮明
さを考慮すると、放射線フイルムの飛躍的な高感
度化は困難である。

また、放射線フイルムの感光成分の銀塩は化学
的刺激のみでなく、物理的な刺激にも影響されや
すい欠点があり、これもオートラジオグラフイー
の操作を困難にし、かつその精度を低下させる原
因となる。すなわち、オートラジオグラフイーに
では一般に放射線フイルムを試料と接触した状態
として露光操作を行なう必要があるため、放射線
フイルムの移動、設置などの作業は放射線フイル
ムを裸の状態にして行なうことが多い。従つて、
そのような作業の際に、放射線フイルムが操作担
当者の手あるいは機器などに接触する機会が増加
し、その接触などに起因する物理的圧力などによ
つて放射線フイルムは物理的カブリ現象を起す傾
向があり、この点もオートラジオグラフイーの精
度を低下させる原因となる。そして、そのような
放射線フイルムの物理的カブリの発生を回避する
ためには、その取扱い作業において高度の熟練と
注意とを必要とし、オートラジオグラフイーの操
作をさらに複雑にする結果となる。

またさらに、従来のオートラジオグラフイーで
は上記のように長時間の露光操作が行なわれるた
め、放射性標識物質以外に試料中に含まれる自然
放射能もまた放射線フイルムの露光に関与し、得
られる放射性標識物質の位置情報の精度を低下さ
せるとの問題がある。そのような自然放射能によ
る妨害を除くために、たとえば、対照試料を用い
た並行実験の実施、露光時間の適正化などが図ら
れているが、並行実験の実施による実験回数の増
大、好適な露光時間の決定を行なうための予備実
験の必要性などにより、その操作全体が煩雑にな
るとの欠点がある。

本発明者は、従来のオートラジオグラフイーに
附随する上記のような問題点の解決を目的として
鋭意研究を行なつた結果、感光材料として放射線
フイルムの代りに、輝尽性蛍光体を結合剤中に分
散してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シート
を用いることにより、前記の問題点の解決あるい
は欠点の低減が実現することを見出し、本発明に
到達した。

すなわち、オートラジオグラフイーにおける試
料に含まれている放射性標識物質の位置情報を得
るために用いる感光材料として、輝尽性蛍光体を
結合剤中に分散してなる蛍光体層を有する蓄積性
蛍光体シートを用いた場合、露光時間の大幅な短
縮化が実現するのみでなく、環境温度あるいはそ
の付近の温度という温度条件であつても、得られ
る試料中の放射性標識物質の位置情報の精度を低
下させることなく、露光を行なうことができるこ
とが判明した。この点は従来のおいて冷却下に実
施されていたオートラジオグラフイーにおける露
光操作を著しく簡略化するものである。また露光
時間の大幅な短縮化が実現することにより、オー
トラジオグラフイーの操作全体が短時間で効率良
く実施できることになり、この点も実用上非常に
有利となる。

さらに、オートラジオグラフイーの感光材料と
して上記の蓄積性蛍光体シートを利用することに
より、従来放射線フイルムの使用において大きな
問題となつていた化学カブリおよび物理カブリが
実質的に発生しなくなる点も、オートラジオグラ
フイーの精度の向上および作業性において非常に
有利に作用する。

また、感光材料として蓄積性蛍光体シートを使
用した場合には、試料から蓄積性蛍光体シートに
転写された放射性標識物質の位置情報を得るため
には、特に画像化する必要はなく、その蓄積性蛍
光体シートをレーザーなどの電磁波で走査するこ
とにより上記の位置情報を読み出し、その位置情
報を画像、記号あるいは数値、あるいはそれらの
組合わせなどの任意な形態に変えて取り出すこと
が可能となる。さらに、上記の位置情報を電気的
手段などを利用して更に加工することにより、所
望の各種の形態で必要な情報を入手することも可
能である。

さらにまた、試料中に含まれていた自然放射能
などに起因する精度を妨害するような影響は、蓄
積性蛍光体シートに蓄積されている位置情報を電
気的に処理することにより容易に低減あるいは消
去することも可能となる。

従つて、本発明は、生物体の組織、および、生
物体の組織および／または生物体由来の物質を含
む媒体からなる群より選ばれる試料に含まれてい
る放射性標識物質の一次元的もしくは二次元的な
位置情報を検出することからなるオートラジオグ
ラフ測定法において、該試料と、輝尽性蛍光体を
結合剤中に分散してなる蛍光体層を有する蓄積性
蛍光体シートとを一定時間重ね合わせることによ
り、該試料中の放射性標識物質から放出される放
射線エネルギーの少なくとも一部を該蛍光体シー
トに吸収させたのち、該蓄積性蛍光体シートを電
磁波により走査して、該蓄積性蛍光体シートに蓄
積されている放射線エネルギーを輝尽光として放
出させ、そしてその輝尽光を検出することによ
り、試料中の放射性標識物質の位置情報を得るこ
とからなる方法を提供するものである。

また本発明は、上記のようにして得た試料中の
放射性標識物質の位置情報を画像として得ること
からなる方法、および、記号および／または数値
で表現された情報として得ることからなる方法を
も提供するものである。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートは
放射線像変換パネルとも呼ばれるものであり、そ
の例は、たとえば、特開昭55−12145号公報など
に記載されており、一般的な構成としては既に公
知である。

すなわち、蓄積性蛍光体シートは被写体を透過
した放射線エネルギー、あるいは被検体から発せ
られた放射線エネルギーを該パネルの輝尽性蛍光
体に吸収させ、そののちに輝尽性蛍光体を可視光
線および赤外線などの電磁波（励起光）を用いて
時系列的に励起することにより、輝尽性蛍光体中
に蓄積されている放射線エネルギーを蛍光として
放出させ、この蛍光を光電的に読み取つて電気信
号を得、この電気信号を感光フイルムなどの記録
材料、CRTなどの表示装置上に可視画像として
再生するか、あるいは数値化もしくは記号化した
位置情報などとして表わすものである。

以下に、本発明のオートラジオグラフイーにお
いて好適に使用される蓄積性蛍光体シートについ
て簡単に説明する。

上記の蓄積性蛍光体シートは、基本構造とし
て、支持体と、その片面に設けられた蛍光体層と
からなるものである。ただし、この蛍光体層の支
持体とは反対側の表面（支持体に面していない側
の表面）には一般に、透明な保護膜が設けられ、
蛍光体層を化学的な変質あるいは物理的な衝撃か
ら保護している。

蛍光体層は、輝尽性蛍光体と、これを分散状態
で含有支持する結合剤とからなるものであり、こ
の輝尽性蛍光体は、放射線を吸収したのち、可視
光線および赤外線などの電磁波（励起光）の照射
を受けると発光（輝尽発光）を示す性質を有する
ものである。従つて、たとえば、放射性標識物質
を含む試料などのような被検体から発せられた放
射線は、その放射線量に比例して蓄積性蛍光体シ
ートの蛍光体層に吸収され、蓄積性蛍光体シート
上には被検体の放射線像が放射線エネルギーの蓄
積像として形成される。この蓄積像は、可視光線
および赤外線などの電磁波（励起光）で励起する
ことにより、輝尽発光（蛍光）として放射させる
ことができ、この輝尽発光を光電的に読み取つて
電気信号に変換することにより、放射線エネルギ
ーの蓄積像を可視画像、あるいは放射性（標識）
物質の位置情報を示す数値、記号などに変換する
ことが可能となる。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートの
支持体は、従来の放射線写真法における増感紙の
支持体として用いられている各種の材料から任意
に選ぶことができる。そのような材料の例として
は、セルロースアセテート、ポリエステル、ポリ
エチレンテレフタレート、ポリアミド、ポリイミ
ド、トリアセテート、ポリカーボネートなどのプ
ラスチツク物質のフイルム、アルミニウム箔、ア
ルミニウム合金箔などの金属シート、通常の紙、
バライタ紙、レジンコート紙、二酸化チタンなど
の顔料を含有するピグメント紙、ポリビニルアル
コールなどをサイジングした紙などを挙げること
ができる。ただし、蓄積性蛍光体シートの情報記
録材料としての特性および取扱いなどを考慮した
場合、本発明において特に好ましい支持体の材料
はプラスチツクフイルムである。このプラスチツ
クフイルムにはカーボンブラツクなどの光吸収性
物質が練り込まれていてもよく、あるいは二酸化
チタンなどの光反射性物質が練り込まれていても
よい。前者は高鮮鋭度タイプの蓄積性蛍光体シー
トに適した支持体であり、後者は高感度タイプの
蓄積性蛍光体シートに適した支持体である。

公知の蓄積性蛍光体シートにおいて、支持体と
蛍光体層の結合を強化するため、あるいは蓄積性
蛍光体シートとしての感度もしくは画質を向上さ
せるために、蛍光体層が設けられる側の支持体表
面にゼラチンなどの高分子物質を塗布して接着性
付与層としたり、あるいは二酸化チタンなどの光
反射性物質からなる光反射層、もしくはカーボン
ブラツクなどの光吸収性物質からなる光吸収層を
設けることも行なわれている。本発明において用
いられる支持体についても、これらの各種の層を
設けることができ、それらの構成は所望の蓄積性
蛍光体シートの目的、用途などに応じて任意に選
択することができる。

さらに、本出願人による特願昭57−82431号明
細書に開示されているように、得られる画像の鮮
鋭度を向上させる目的で、支持体の蛍光体層側の
表面（支持体の蛍光体層側の表面に接着性付与
層、光反射層、光吸収層、あるいは金属箔などが
設けられている場合には、その表面を意味する）
には、凹凸が形成されていてもよい。

支持体の上には、前記のように蛍光体層が形成
されている。蛍光体層は、基本的には粒子状の輝
尽性蛍光体を分散状態で含有支持する結合剤から
なる層である。

輝尽性蛍光体は、先に述べたように放射線を照
射した後、励起光を照射すると輝尽発光を示す蛍
光体であるが、実用的な面からは波長が400〜
800nmの範囲にある励起光によつて300〜500nm
の波長範囲の輝尽発光を示す蛍光体であることが
望ましい。本発明において利用される蓄積性蛍光
体シートに用いられる輝尽性蛍光体の例として
は、 米国特許第3859527号明細書に記載されている
SrS：Ce、Sm、SrS：Eu、Sm、ThO₂：Er、お
よびLa₂O₂S：Eu、Smなどの組成式で表わされ
る蛍光体、 特開昭55−12142号公報に記載されている
ZnS：Cu、Pb、BaO・xAl₂O₃：Eu〔ただし、0.8
≦ｘ≦10〕、および、M²⁺O・xSiO₂：Ａ〔ただし、
M²⁺はMg、Ca、Sr、Zn、Cd、またはBaであり、
ＡはCe、Tb、Eu、Tm、Pb、Tl、Bi、または
Mnであり、ｘは、0.5≦ｘ≦2.5である〕などの
組成式で表わされる蛍光体、 特開昭55−12143号公報に記載されている
（Ba_1-x-y、Mg_x、Ca_y）FX：aEu²⁺〔ただし、Ｘ
はClおよびBrのうちの少なくとも一つであり、
ｘおよびｙは、０＜ｘ＋ｙ≦0.6、かつxy≠０で
あり、ａは、10^-6≦ａ≦５×10^-2である〕の組成
式で表わされる蛍光体、 特開昭55−12144号公報に記載されている
LnOX：xA〔ただし、LnはLa、Ｙ、Gd、および
Luのうちの少なくとも一つ、ＸはClおよびBrの
うちの少なくとも一つ、ＡはCeおよびTbのうち
の少なくとも一つ、そして、ｘは、０＜ｘ＜0.1
である〕の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭55−12145号公報に記載されている
（Ba_1-x、M〓_x）FX：yA〔ただし、M〓はMg、
Ca、Sr、Zn、およびCdのうちの少なくとも一
つ、ＸはCl、Br、およびＩのうちの少なくとも
一つ、ＡはEu、Tb、Ce、Tm、Dy、Pr、Ho、
Nd、Yb、およびErのうちの少なくとも一つ、そ
してｘは、０≦ｘ≦0.6、ｙは、０≦ｙ≦0.2であ
る〕の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭55−160078号公報に記載されているM〓
FX・xA：yLn〔ただし、M〓はBa、Ca、Sr、
Mg、Zn、およびCdのうちの少なくとも一種、Ａ
はBeO、MgO、CaO、SrO、BaO、ZnO、
Al₂O₃、Y₂O₃、La₂O₃、In₂O₃、SiO₂、TiO₂、
ZrO₂、GeO₂、SnO₂、Nb₂O₅、Ta₂O₅、および
ThO₂のうちの少なくとも一種、LnはEu、Tb、
Ce、Tm、Dy、Pr、Ho、Nd、Yb、Er、Sm、
およびGdのうちの少なくとも一種、ＸはCl、
Br、およびＩのうちの少なくとも一種であり、
ｘおよびｙはそれぞれ５×10^-5≦ｘ≦0.5、およ
び０＜ｙ≦0.2である〕の組成式で表わされる蛍
光体、 特開昭56−116777号公報に記載されている
（Ba_1-x、M〓_x）F₂・aBaX₂：yEu、zA〔ただし、
M〓はベリリウム、マグネシウム、カルシウム、
ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのうち
の少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃素
のうちの少なくとも一種、Ａはジルコニウムおよ
びスカンジウムのうちの少なくとも一種であり、
ａ、ｘ、ｙ、およびｚはそれぞれ0.5≦ａ≦1.25、
０≦ｘ≦１、10^-6≦ｙ≦２×10^-1、および０＜ｚ
≦10^-2である〕の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭57−23673号公報に記載されている
（Ba_1-x、M〓ｘ）F₂・aBaX₂：yEu、zB〔ただし、
M〓はベリリウム、マグネシウム、カルシウム、
ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのうち
の少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃素
のうちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ、お
よびｚはそれぞれ0.5≦ａ≦1.25、０≦ｘ≦１、
10^-6≦ｙ≦２×10^-1、および０＜ｚ≦５×10^-1で
ある〕の組成式で表わされる蛍光体、 特開昭57−23675号公報に記載されている
（Ba_1-x、M〓_x）F₂・aBaX₂：yEu、zA〔ただし、
M〓はベリリウム、マグネシウム、カルシウム、
ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのうち
の少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃素
のうちの少なくとも一種、Ａは砒素および硅素の
うちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ、およ
びｚはそれぞれ0.5≦ａ≦1.25、０≦ｘ≦１、10^-6
≦ｙ≦２×10^-1、および０＜ｚ≦５×10^-1であ
る〕の組成式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭56−167498号明細書に記
載されているM〓OX：xCe〔ただし、M〓はPr、
Nd、Pm、Sm、Eu、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、
Yb、およびBiからなる群より選ばれる少なくと
も一種の三価金属であり、ＸはClおよびBrのう
ちのいずれか一方あるいはその両方であり、ｘは
０＜ｘ＜0.1である〕の組成式で表わされる蛍光
体、 本出願人による特願昭57−89875号明細書に記
載されているBa_1-xM_x/2L_x/2FX：yEu²⁺〔ただし、
Ｍは、Li、Na、Ｋ、Rb、およびCsからなる群よ
り選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属を表わ
し；Ｌは、Sc、Ｙ、La、Ce、Pr、Nd、Pm、
Sm、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu、
Al、Ga、In、およびTlからなる群より選ばれる
少なくとも一種の三価金属を表わし；Ｘは、Cl、
Br、およびＩからなる群より選ばれる少なくと
も一種のハロゲンを表わし；そして、ｘは10^-2≦
ｘ≦0.5、ｙは０＜ｙ≦0.1である〕の組成式で表
わされる蛍光体、 本出願人による特願昭57−137374号明細書に記
載されているBaFX・xA：yEu²⁺〔ただし、Ｘは、
Cl、Br、およびＩからなる群より選ばれる少な
くとも一種のハロゲンであり；Ａは、テトラフル
オロホウ酸化合物の焼成物であり；そして、ｘは
10^-6≦ｘ≦0.1、ｙは０＜ｙ≦0.1である〕の組成
式で表わされる蛍光体、 本出願人による特願昭57−158048号（昭和57年
９月13日出願）明細書に記載されているBaFX・
xA：yEu²⁺〔ただし、Ｘは、Cl、Br、およびＩか
らなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン
であり；Ａは、ヘキサフルオロケイ酸、ヘキサフ
ルオロチタン酸およびヘキサフルオロジルコニウ
ム酸の一価もしくは二価金属の塩からなるヘキサ
フルオロ化合物群より選ばれる少なくとも一種の
化合物の焼成物であり；そして、ｘは10^-6≦ｘ≦
0.1、ｙは０＜ｙ≦0.1である〕の組成式で表わさ
れる蛍光体、 特開昭59−56479号公報に記載されている
BaFX・xNaX′：aEu²⁺〔ただし、ＸおよびX′は、
それぞれCl、Br、およびＩのうちの少なくとも
一種であり、ｘおよびａはそれぞれ０＜ｘ≦２、
および０＜ａ≦0.2である〕の組成式で表わされ
る蛍光体、 特開昭59−56480号公報に記載されているM〓
FX・xNaX′：yEu²⁺：zA〔ただし、M〓は、Ba、
Sr、およびCaからなる群より選ばれる少なくと
も一種のアリカリ土類金属であり；Ｘおよび
X′は、それぞれCl、Br、およびＩからなる群よ
り選ばれる少なくとも一種のハロゲンであり；Ａ
は、Ｖ、Cr、Mn、Fe、Co、およびNiより選ば
れる少なくとも一種の遷移金属であり；そして、
ｘは０＜ｘ≦２、ｙは０＜ｙ≦0.2、およびｚは
０＜ｚ≦10^-2である〕の組成式で表わされる蛍光
体、 特開昭59−75200号公報に記載されているM〓
FX・aM〓X′・bM′〓X″₂・cM〓Ｘ₃・xA：
yEu²⁺〔ただし、M〓はBa、Sr、およびCaからな
る群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類
金属であり；M〓はLi、Na、Ｋ、Rb、およびCs
からなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカ
リ金属であり；M′〓はBeおよびMgからなる群よ
り選ばれる少なくとも一種の二価金属であり；
M〓はAl、Ga、In、およびTlからなる群より選
ばれる少なくとも一種の三価金属であり；Ａは金
属酸化物であり；ＸはCl、Br、およびＩからな
る群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンであ
り；X′、X″、およびＸは、Ｆ、Cl、Br、およ
びＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハ
ロゲンであり；そして、ａは０≦ａ≦２、ｂは０
≦ｂ≦10^-2、ｃは０≦ｃ≦10^-2、かつａ＋ｂ＋ｃ
≧10^-6であり；ｘは０＜ｘ≦0.5、ｙは０＜ｙ≦
0.2である〕の組成式で表わされる蛍光体、 などを挙げることができる。

ただし、本発明に用いられる輝尽性蛍光体は上
述の蛍光体に限られるものではなく、放射線を照
射したのちに励起光を照射した場合に、輝尽発光
を示す蛍光体であればいかなるものであつてもよ
い。

また、蛍光体層の結合剤の例としては、ゼラチ
ン等の蛋白質、デキストラン等のポリサツカライ
ド、またはアラビアゴムのような天然高分子物
質；および、ポリビニルブチラール、ポリ酢酸ビ
ニル、ニトロセルロース、エチルセルロース、塩
化ビニリデン・塩化ビニルコポリマー、ポリメチ
ルメタクリレート、塩化ビニル・酢酸ビニルコポ
リマー、ポリウレタン、セルロースアセテートブ
チレート、ポリビニルアルコール、線状ポリエス
テルなどような合成高分子物質などにより代表さ
れる結合剤を挙げることができる。このような結
合剤のなかで特に好ましいものは、ニトロセルロ
ース、線状ポリエステル、およびニトロセルロー
スと線状ポリエステルとの混合物である。

蛍光体層は、たとえば、次のような方法により
支持体上に形成することができる。

まず上記の輝尽性蛍光体粒子と結合剤とを適当
な溶剤（たとえば、低級アルコール、塩素原子含
有炭化水素、ケトン、エステル、エーテル）に加
え、これを充分に混合して、結合剤溶液中に蛍光
体粒子が均一に分散した塗布液を調製する。

塗布液における結合剤と輝尽性蛍光体粒子との
混合比は、目的とする蓄積性蛍光体シートの特
性、蛍光体粒子の種類などによつて異なるが、一
般には結合剤と蛍光体粒子との混合比は、１：１
乃至１：100（重量比）の範囲から選ばれ、そして
特に１：８乃至１：40（重量比）の範囲から選ぶ
ことが好ましい。

なお、塗布液には、該塗布液中における蛍光体
粒子の分散性を向上させるための分散剤、また、
形成後の蛍光体層中における結合剤と蛍光体粒子
との間の結合力を向上させるための可塑剤などの
種々の添加剤が混合されていてもよい。そのよう
な目的に用いられる分散剤の例としては、フタル
酸、ステアリン酸、カプロン酸、親油性界面活性
剤などを挙げることができる。そして可塑剤の例
としては、燐酸トリフエニル、燐酸トリクレジ
ル、燐酸ジフエニルなどの燐酸エステル；フタル
酸ジエチル、フタル酸ジメトキシエチルなどのフ
タル酸エステル；グリコール酸エチルフタリルエ
チル、グリコール酸ブチルフタリルブチルなどの
グリコール酸エステル；そして、トリエチレング
リコールとアジピン酸とのポリエステル、ジエチ
レングリコールとコハク酸とのポリエステルなど
のポリエチレングリコールと脂肪族二塩基酸との
ポリエステルなどを挙げることができる。

上記のようにして調製された蛍光体粒子と結合
剤とを含有する塗布液を、次に、支持体の表面に
均一に塗布することにより塗布液の塗膜を形成す
る。この塗布操作は、通常の塗布手段、たとえ
ば、ドクターブレード、ロールコーター、ナイフ
コーターなどを用いることにより行なうことがで
きる。

ついで、形成された塗膜を徐々に加熱すること
により乾燥して、支持体上への蛍光体層の形成を
完了する。蛍光体層の層厚は、目的とする蓄積性
蛍光体シートの特性、蛍光体粒子の種類、結合剤
と蛍光体粒子との混合比などによつて異なるが、
通常は20μm乃至１mmとする。ただし、この層厚
は50乃至500μmとするのが好ましい。

なお、蛍光体層は、必ずしも上記のように支持
体上に塗布液を直接塗布して形成する必要はな
く、たとえば、別に、ガラス板、金属板、プラス
チツクシートなどのシート上に塗布液を塗布し乾
燥することにより蛍光体層を形成した後、これ
を、支持体上に押圧するか、あるいは接着剤を用
いる方法などにより支持体と蛍光体層とを接合し
てもよい。

蛍光体層の上には前記のように保護膜が設けら
れていることが好ましい。この保護膜は、たとえ
ば、酢酸セルロース、ニトロセルロースなどの透
明なセルロース誘導体；ポリメチルメタクリレー
ト、ポリビニルブチラール、ポリビニルホルマー
ル、ポリカーボネート、ポリ酢酸ビニル・酢酸ビ
ニルコポリマー、ポリエチレテレフタレート、ポ
リエチレン、ポリ塩化ビニリデン、ポリアミドな
どの透明な合成高分子物質から形成されるもので
ある。保護膜の膜厚は、通常0.1乃至100μm、好
ましくは0.3乃至50μmとされる。

本発明は、オートラジオグラフイーにおいて、
以上に記載したような構成を有する蓄積性蛍光体
シートを、従来の放射線フイルムからなる感光材
料の代りに使用するものであり、その露光操作
は、放射性標識物質を含む試料と蓄積性蛍光体シ
ートとを一定時間重ね合わせて露光操作を実施す
ることにより、その試料中の放射性標識物質から
放出される放射線の少なくとも一部を該蛍光体シ
ートに吸収させて実施する。

本発明のオートラジオグラフイーに用いられる
放射性標識物質は、測定対象の試料に適当な方法
で放射性元素を保持させることによつて得られ
る。

本発明に用いられる放射性元素は放射線（α
線、β線、γ線、中性子線、Ｘ線など）を放射す
るものであれば、どのような核種であつてもよい
が、代表的なものとしては、 ³²P、 ¹⁴C、 ³⁵S、
³H、 ¹²⁵Iなどがある。

本発明のオートラジオグラフ測定方法において
測定の対象となる試料は、前述のように、生物体
の組織、および、生物体の組織および／または生
物体由来の物質を含む媒体からなる群より選ばれ
る試料であり、それらの試料に含まれている放射
性標識物質の位置情報を上記のような蛍光体シー
トを介して得ることがその目的となる。

本発明は、そのなかでも、生物体の組織およ
び／または生物体由来の物質を含む媒体を測定対
象の試料とした場合に有用である。

さらに、本発明は、放射性標識物質が分離展開
された支持体であり、かつ、放射性標識物質が、
放射性標識が付与される生体高分子物質、その誘
導体もしくはそれらの分解物である場合に特に有
用である。ここで生体高分子物質の例としては、
蛋白質、核酸、それらの誘導体、それらの分解物
のような高分子物質を挙げることができる。そし
て、たとえば、これらの生体高分子物質の全体的
な、あるいは部分的な分子構造あるいはそれらの
基本単位構成などの解析に本発明は有効に利用す
ることができる。

また、放射性標識物質を支持体を用いて分離展
開するための方法としては、たとえば、ゲル状支
持体（形状は層状、柱状など任意）、アセテート
膜などのポリマー成形体、あるいは濾紙などの各
種の支持体を用いる電気泳動、そしてシリカゲル
などの支持体を用いる薄層クロマトグラフイが、
その代表的方法として挙げられるが、分離展開方
法はこれらの方法に限定されるものではない。

また、放射性標識物質が分離展開された支持体
は、そのまま、あるいは乾燥処理、分離展開物の
固定処理などの任意の処理を行なつたのちに蓄積
性蛍光体シートと重ね合わされ、これによりその
露光操作が実施される。

上記のいわゆる露光操作において、上記の試料
と蓄積性蛍光体シートを重ね合わせた状態は、通
常は試料と蓄積性蛍光体シートを密着させること
により実現するが、必ずしもそれらを密着する必
要はなく、それらが近接した状態で配置されてい
れば良い。

また、いわゆる露光時間は、試料に含まれる放
射性標識物質の放射能の強さ、該物質の濃度、密
度など、蓄積性蛍光体シートの感度、試料と蓄積
性蛍光体シートとの位置関係などにより変動する
が、露光操作は一定時間、たとえば、数秒程度以
上は必要とする。ただし、本発明に従つて感光材
料として蓄積性蛍光体シートを用いた場合には、
従来の放射線フイルムを使用する場合に必要な露
光時間に比較して、その露光時間は大幅に短縮さ
れる。また、露光により試料から蓄積性蛍光体シ
ートに転写蓄積された試料中の放射性標識物質の
位置情報を読み出す操作において、該蛍光体シー
トに蓄積されているエネルギーの強さ、分布、所
望の情報などに応じて各種の電気的処理を施すこ
とにより、得られる位置情報の状態を変えること
が可能であるため、露光操作時における露光時間
の厳密な制御は特に必要とはしない。

また、露光操作を実施する温度は特に制限はな
いが、本発明の蓄積性蛍光体シートを利用したオ
ートラジオグラフイーは、特に10〜35℃などの環
境温度にて実施することが可能である。ただし、
従来のオートラジオグラフイーにおいて利用され
ている低温（たとえば、５℃付近、あるいはそれ
以下の温度）において露光操作を行なつてもよ
い。

次に本発明において蓄積性蛍光体シートに転写
蓄積された試料中の放射性標識物質の位置情報を
読み出すための方法について、添付図面の第１図
に示した読出装置（あるいは読取装置）の例を参
照しながら略述する。

第１図は、蓄積性蛍光体シート（以下において
は、蛍光体シートと略記することもある）１に蓄
積記録されている放射性標識物質の一次元もしく
は二次元的な位置情報を仮に読み出すための先読
み用読出部２と、放射性標識物質の位置情報を出
力するために蛍光体シート１に蓄積記録されてい
る放射線画像を読み出す機能を有する本読み用読
出部３から構成される読出装置の例の概略図を示
している。

先読み用読出部２においては次のような先読み
操作が行なわれる。

レーザー光源４から発生したレーザー光５はフ
イルター６を通過することにより、このレーザー
光５による励起に応じて蛍光体シート１から発生
する輝尽発光の波長領域に該当する波長領域の部
分がカツトされる。次いでレーザー光は、ガルバ
ノミラー等の光偏向器７により偏向処理され、平
面反射鏡８により反射されたのち蛍光体シート１
上に一次元的に偏向して入射する。ここで用いる
レーザー光源４は、そのレーザー光５の波長領域
が、蛍光体シート１から発する輝尽発光の主要波
長領域と重複しないように選択される。

蛍光体シート１は、上記の偏向レーザー光の照
射下において、矢印９の方向に移送される。従つ
て、蛍光体シート１の全面にわたつて偏向レーザ
ー光が照射されるようになる。なお、レーザー光
源４の出力、レーザー光５のビーム径、レーザー
光５の走査速度、蛍光体シート１の移送速度につ
いては、先読み操作のレーザー光５のエネルギー
が本読み操作に用いられるエネルギーよりも小さ
くなるように調整される。

蛍光体シート１は、上記のようなレーザー光の
照射を受けると、蓄積記録されている放射線エネ
ルギーに比例する光量の輝尽発光を示し、この光
は先読み用導光性シート１０に入射する。この導
光性シート１０はその入射面が直線状で、蛍光体
シート１上の走査線に対向するように近接して配
置されており、その射出面は円環を形成し、フオ
トマルなどの光検出器１１の受光面に連絡してい
る。この導光性シート１０は、たとえばアクリル
系合成樹脂などの透明な熱可塑性樹脂シートを加
工してつくられたもので、入射面より入射した光
がその内部において全反射しながら射出面へ伝達
されるように構成されている。蛍光体シート１か
らの輝尽発光はこの導光性シート１０内を導かれ
て射出面に到達し、その射出面から射出されて光
検出器１１に受光される。

なお、導光性シートの好ましい形状、材質等は
特開昭55−87970号公報、同56−11397号公報等に
開示がある。

光検出器１１の受光面には、輝尽発光の波長領
域の光のみを透過し、励起光（レーザー光）の波
長領域の光をカツトするフイルターが貼着され、
輝尽発光のみを検出しうるようにされている。光
検出器１１により検出された輝尽発光は電気信号
に変換され、さらに増幅器１２により増幅され出
力される。増幅器１２から出力された蓄積記録情
報は、本読み用読出部３の制御回路１３に入力さ
れる。制御回路１３は、得られた蓄積記録情報に
応じて、濃度およびコントラストが最も均一でか
つ観察読影性能の優れた画像が得られるように、
増幅率設定値ａ、収録スケールフアクターｂ、お
よび、再生画像処理条件設定値ｃを出力する。

以上のようにして先読み操作が終了した蛍光体
シート１は本読み用読出部３へ移送される。

本読み用読出部３においては次のような本読み
操作が行なわれる。

本読み用レーザー光源１４から発せられたレー
ザー光１５は、前述のフイルター６と同様な機能
を有するフイルター１６を通過したのちビーム・
エクスパンダー１７によりビーム径の大きさが厳
密に調整される。次いでレーザー光は、ガルバノ
ミラー等の光偏向器１８により偏向処理され、平
面反射鏡１９により反射されたのち蛍光体シート
１上に一次元的に偏向して入射する。なお、光偏
向器１８と平面反射鏡１９との間にはfθレンズ２
０が配置され、蛍光体シート１の上を偏向レーザ
ー光が走査した場合に、常に均一なビーム速度を
維持するようにされている。

蛍光体シート１は、上記の偏向レーザー光の照
射下において、矢印２１の方向に移送される。従
つて、先読み操作におけると同様に蛍光体シート
１の全面にわたつて偏向レーザー光が照射される
ようになる。

蛍光体シート１は、上記のようにしてレーザー
光の照射を受けると、先読み操作におけると同様
に、蓄積記録されている放射線エネルギーに比例
する光量の輝尽発光を発し、この光は本読み用導
光性シート２２に入射する。この本読み用導光性
シート２２は先読み用導光性シート１０と同様の
材質、構造を有しており、本読み用導光性シート
２２の内部を全反射を繰返しつつ導かれた輝尽発
光はその射出面から射出されて、光検出器２３に
受光される。なお、光検出器２３の受光面には輝
尽発光の波長領域のみを選択的に透過するフイル
ターが貼着され、光検出器２３が輝尽発光のみを
検出するようにされている。

光検出器２３により検出された輝尽発光は電気
信号に変換され、前記の増幅率設定値ａに従つて
感度設定された増幅器２４において適正レベルの
電気信号に増幅されたのち、Ａ／Ｄ変換器２５に
入力される。Ａ／Ｄ変換器２５は、収録スケール
フアクター設定値ｂに従い信号変動器に適したス
ケールフアクターでデジタル信号に変換され、信
号処理回路２６に入力される。信号処理回路２６
では、再生画像処理条件設定値ｃに基づいて、濃
度およびコントラストが適正で観察読影性能の優
れた可視画像が得られるように信号処理が行なわ
れ、次いで必要により磁気テープなどの保存手段
を介して、記録装置（図示なし）へ伝送される。

記録装置としては、たとえば、感光材料上をレ
ーザー光等で走査して光学的に記録するもの、
CRT等に電子的に表示するもの、CRT等に表示
された放射線画像をビデオ・プリンター等に記録
するもの、熱線を用いて感熱記録材料上に記録す
るものなど種々の原理に基づいた記録装置を用い
ることができる。

ただし、記録装置は上記のように可視画像化す
るものに限られるものではなく、前述したように
試料中の放射性標識物質の一次元的もしくは二次
元的な位置情報を、たとえば数字化もしくは記号
化するなどして記録することもできる。

なお、本発明における蓄積性蛍光体シートに転
写蓄積された試料中の放射性標識物質の位置情報
を読み出すための方法について、上記においては
先読み操作と本読み操作とからなる読出し操作を
説明したが、本発明において利用することができ
る読出し操作は、上記の例に限られるものではな
い。たとえば、試料中の放射性物質の含有量およ
び、その試料についての蓄積性蛍光体シートの露
光時間が予めわかつていれば、上記の例において
先読み操作を省略することもできる。

また、本発明における蓄積性蛍光体シートに転
写蓄積された試料中の放射性標識物質の位置情報
を読み出すための方法としては、上記に例示した
以外の適当な方法を利用することも当然可能であ
る。

なお、本発明において試料中の放射性標識物質
の「位置情報」とは、試料中における放射性標識
物質もしくはその集合体の位置を中心とした各種
の情報、たとえば、試料中に存在する放射性物質
の集合体の存在位置と形状、その位置における放
射性物質の濃度、分布などからなる情報の一つも
しくは任意の組合わせとして得られる各種の情報
を意味する。

次に本発明の実施態様を、前述のマキサム・ギ
ルバート法を利用したDNAの塩基配列決定法の
操作を例にして記載する。なお、以下の実施例お
よび比較例において用いたDNA〔大腸菌プラスミ
ドDNA（pBR322）〕は既にその塩基配列が解明
されており、得られたクロマトグラムの評価およ
び分析は、それらの既知データを基礎にして実施
した。

また、以下の実施例において使用した蓄積性蛍
光体シートは下記の方法により調製したものであ
る。

輝尽性のユーロピウム賦活弗化臭化バリウム蛍
光体（BaFBr：Eu）の粒子と線状ポリエステル
樹脂との混合物にメチルエチルケトンを添加し、
さらに硝化度11.5％のニトロセルロースを添加し
て蛍光体粒子を分散状態で含有する分散液を調製
する。次に、この分散液に燐酸トリクレジル、ｎ
−ブタノール、そしてメチルエチルケトンを添加
したのち、プロペラミキサーを用いて充分に撹拌
混合して、蛍光体粒子が均一に分散し、かつ粘度
が25〜35PS（25℃）の塗布液を調製する。

次に、ガラス板上に水平に置いたカーボンブラ
ツク練り込みポリエチレンテレフタレートシート
（支持体、厚み：250μm）の上に塗布液をドクタ
ーブレードを用いて均一に塗布する。そして塗布
後に、塗膜が形成された支持体を乾燥器内に入
れ、この乾燥器内部の温度を25℃から100℃に
徐々に上昇させて、塗膜の乾燥を行なつた。この
ようにして、支持体上に層厚が300μmの蛍光体層
を形成する。

そして、この蛍光体層の上に、透明なポリエチ
レンテレフタレートフイルム（厚み：12μm）の
片面にポリエステル系接着剤を付与したのち、接
着剤層側を下に向けて置いて接着することによ
り、保護膜を形成し、支持体、蛍光体層、および
保護膜から構成された蓄積性蛍光体シートを調製
する。

実施例 １ (1) 塩基配列決定の対象となるDNAの分離およ
び放射性標識化 常法により大腸菌プラスミドDNA
（pBR322）を制限酵素Hind−により切断し
たのち、5′−末端を³²Pで標識して、二本鎖
DNA（ ³²P標識物）1μgを得た。

別に調製した5mMの塩化マグネシウムおよ
び1mMのジチオスレイトールを含む20mMの
トリス〔トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン〕・塩酸緩衝液（PH7.4）20μに上記の二
本鎖DNA1μgと制限酵素Hae−約１単位を
加え、37℃にて１時間の特異的分解反応を行な
い、上記断片の分解生成物を含む分解混合物溶
液を得た。

上記の分解混合物溶液を試料として、８％ポ
リアクリルアミド（架橋剤率：３％）のスラブ
ゲル（1.5mm×200mm×200mm）を用い、かつ
1mMのEDTAを含む50mMのトリス・ホウ酸
緩衝液（PH8.3）を電極液として、電圧500Vに
て電気泳動操作を実施した。試料に予め加えて
おいたマーカー色素がゲルの下端部に到達した
時点にて泳動を停止させ、座標軸の原点となる
位置に ³²P含有インクで印を付けた。

上記のゲルと蓄積性蛍光体シートとを重ね合
わせて、室温（約25℃）にて１分間保持して露
光操作を行なつたのち、その蓄積性蛍光体シー
トを第１図に示すような読出装置に導入し、
³²P含有インクで印を付けた位置を座標軸の原
点として、 ³²P標識断片の分解生成物の泳動位
置を示す位置情報を読出した。次いで、この位
置情報に従い、 ³²P標識を有する分解生成物を
含むゲル部分を薄いカミソリを用いて切出し
て、これを試験管に移した。

なお、確認のために、上記の一部切出し操作
を行なつた残りのゲルを同様にして蓄積性蛍光
体シートと重ね合わせたのち、読出装置にて
³²P標識を有する分解生成物の残存の有無を調
べたところ、 ³²P標識を有する分解生成物の全
量が取り去られていることがわかつた。すなわ
ち、上記の蓄積性蛍光体シートを介して得た
³²P標識を有する分解生成物の位置情報は精度
の高いものであることが確認された。

(2) 分離した ³²P標識DNA断片の特異的分解 上記の(1)において取出したゲルを常法に従つて
抽出処理して ³²P標識DNA断片を分離させた。
得られた ³²P標識DNA断片のカウント数は約１
×10⁶cpmであつた。

抽出液を減圧下にて濃縮してその全量を約20μ
とし、この濃縮液を四本のエツペンドルフ社
（西独）製のミクロチユーブに分割した。それぞ
れの濃縮液を試料として、マキサム・ギルバート
法に従う分解反応により、構成塩基の間を特異的
に切断した。

特異的切断のための分解方法は、切断が、 １） グアニン(G) ２） グアニン(G)＋アデニン(A) ３） チミン（Ｔ）＋シトシン(C) ４） シトシン(C) の位置にて選択的に行なわれるような条件を選ん
だ。

たとえば、上記１）のグアニン(G)の位置におけ
る選択的切断反応は、常法に従つて、次のように
して行なつたものであり、２）、３）および４）
についても同様に常法に従つて行なつた。

試料（抽出物の濃縮液）5μを、1mMの
EDTAを含む50mMのカコジル酸ナトリウム水溶
液200μに加え、０℃に冷却した。これにジメ
チル硫酸1μを加えて20℃に加温し、15分間反
応させた。この反応液に、０℃に冷却しておいた
1.5M硫酸ナトリウム、1Mメルカプトエタノー
ル、およびtRNA100μg／ｍを含む水性液50μ
とエタノール750μを加えて充分に混合した
のち、−70℃にて５分間冷却した。

上記の冷却液を12000Gの遠心分離操作にかけ
て上澄み液を除去し、沈澱物に、０℃に冷却した
0.3M酢酸ナトリウム水溶液250μを加えてDNA
およびtRNAを溶解させた。次いで、この溶液に
約750μのエタノールを加えて同様の遠心分離
操作を行ない、上澄み液を除去することにより
DNAおよびtRNAを洗浄した。続いて、1mの
エタノールを用いて同様の洗浄操作を再度行なつ
た。

得られた沈澱物を数分間減圧下にて乾燥したの
ち、これに、新たに蒸留したピペリジンの1M水
溶液100μを加え、90℃で30分間反応させた。
反応液を凍結乾燥してピペリジンを除去してか
ら、10μの水を用いる凍結乾燥による洗浄操作
を二回行なつた。

80％ホルムアミド、10mMの水酸化ナトリウ
ム、1mMのEDTA、そしてBPB（ブロムフエノ
ールブルー：マーカー色素）からなる水性液10μ
に、上記にて得られた凍結乾燥物（DNA断片
の分解物）を溶解し、90℃で数分間加熱したの
ち、氷水で冷却して電気泳動用試料を調製した。

(3) 電気泳動用ゲルの調製 アクリルアミド10.69g、Ｎ，N′−メチレンビ
スアクリルアミド0.56g、尿素37.8g、および
20mMのEDTAを含む1.0Mトリス・ホウ酸緩
衝液（PH8.3）9mを蒸留水に溶解して全量を
90mとしたゲル液を得た。このゲル液に窒素
ガスを吹込んで酸素を除いたのち、これに10％
過硫酸アンモニウム水溶液600μと触媒の
TEMED（テトラメチルエチレンジアミン）25μ
を加えた。このようにして処理したゲル液
を、充分に洗浄した二枚の厚さ３mmのガラス板
から形成したモールド（0.5mm×300mm×400mm）
の中に注入し、さらに上記のゲル液の上端部
に、四個のスロツト（各、0.5mm×15mm×20mm）
形成用のスロツトフオーマーを挿入したのち、
一夜放置してゲル化させて目的の四個のスロツ
トを有する電気泳動用ゲルを調製した。

(4) 電気泳動操作 スロツトを形成したゲルを電気泳動装置に装
着し、1000V／40cmにて約180分間のプレラン
（予備泳動操作）を行なつた後、第１スロツト
に１）−(G)特異的分解物、第２スロツトに２）−
（Ｇ＋Ａ）特異的分解物、第３スロツトに３）−
（Ｔ＋Ｃ）特異的分解物、そして第４スロツト
に４）−(C)特異的分解物を、それぞれの ³²Pの
カウント数が約２×10⁵cpmとなるように導入
した。

次に同様に、1000V／40cmにて試料の電気泳
動を行なつた。この電気泳動は、マーカー色素
がゲルの下端部に到達するまで継続したのち停
止した。次いで一方のガラス板を除去し、ゲル
を10％酢酸中で２回洗浄した。ゲルを濾紙の上
に移し、その状態で減圧下にて加熱乾燥した。

(5) 露光操作 上記において得られた乾燥ゲルと蓄積性蛍光
体シートとを重ね合わせてカセツト内に収納
し、室温（約20℃）にて、40分間露光したの
ち、第１図に示した読出装置に装填して、蛍光
体シートに転写蓄積されたゲル上における放射
性標識物質の位置を示す四列のクロマトグラム
を読出し、次いでその情報をデジタル情報とし
て記憶させた。

上記のデジタル情報に基づいてクロマトグラ
ムの可視画像を得たところ鮮明な画像が得られ
た。そして、このクロマトグラムを既知の大腸
菌プラスミドDNA（pBR322）のクロマトグラ
ムと照合したところ、充分な一致が見られた。

別に、第２スロツトおよび第３スロツトから
のそれぞれのクロマトグラムを座標軸とし同様
な読出し操作を実施し、コンピユーター処理に
より次のような比較対照を行なうことにより目
的のDNAの塩基配列を決定した。

第２スロツトの（Ｇ＋Ａ）特異的分解物のク
ロマトグラムと第１スロツトの(G)特異的分解物
のクロマトグラムとを比較させることにより座
標軸の原点を基準としたＧとＡの位置をそれぞ
れ決定する。

次に、第３スロツトの（Ｔ＋Ｃ）特異的分解
物のクロマトグラムと第４スロツトの(C)特異的
分解物のクロマトグラムとを比較させることに
より座標軸の原点を基準としたＴとＣの位置を
それぞれ決定する。そして、これらを座標軸の
原点から遠い順に並べることによりDNAの塩
基配列を得る。

以上に記載したコンピユーター処理により決
定された塩基配列は、調査対象とした大腸菌プ
ラスミドDNA（pBR322）の既知の塩基配列と
一致した。

上記の結果から、蓄積性蛍光体シートを用い
て室温で短時間の露光操作を行なうことによ
り、マキサム・ギルバート法に基づくDNAの
塩基配列決定法を実施することは充分可能であ
ることが確認された。

比較例 １ 実施例１の「(5)露光操作」に記載した電気泳動
操作を実施したのちの乾燥ゲルによる蓄積性蛍光
体シートの露光操作を、蛍光体シートの代りにＸ
線フイルム（RXタイプ：富士写真フイルム(株)
製）と蛍光増感紙（ライトニングプラス：米国デ
ユポン社製）とを組合わせて使用し、通常のＸ線
フイルム用カセツテに収納して実施例１と同一の
条件（室温、40分間露光）にて露光操作を行なつ
た。次いで、Ｘ線フイルムを現像したが、判読可
能なクロマトグラムを得ることができなかつた。

次に上記の露光操作を、通常のマキサム・ギル
バート法に準じて−80℃にて1000分間実施したの
ち、同様にＸ線フイルムを現像したところ、実施
例１にて可視画像として得られたクロマトグラム
と同程度の鮮明度を有するクロマトグラムを得る
ことができた。ここで得られたクロマトグラム
は、実施例１において可視画像として得られたク
ロマトグラムと一致した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明において蓄積性蛍光体シート
に転写蓄積された試料中の放射性標識物質の位置
情報を読み出すための読出装置（あるいは読取装
置）の例を示すものである。 １：蓄積性蛍光体シート、２：先読み用読出
部、３：本読み用読出部、４：レーザー光源、
５：レーザー光、６：フイルター、７：光偏向
器、８：平面反射鏡、９：移送方向、１０：先読
み用導光性シート、１１：光検出器、１２：増幅
器、１３：制御回路、１４：レーザー光源、１
５：レーザー光、１６：フイルター、１７：ビー
ム・エクスパンダー、１８：光偏向器、１９：平
面反射鏡、２０：fθレンズ、２１：移送方向、２
２：本読み用導光性シート、２３：光検出器、２
４：増幅器、２５：Ａ／Ｄ変換器、２６：信号処
理回路。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 生物体の組織、および、生物体の組織およ
   び／または生物体由来の物質を含む媒体からなる
   群より選ばれる試料に含まれている放射性標識物
   質の一次元的もしくは二次元的な位置情報を検出
   することからなるオートラジオグラフ測定法にお
   いて、該試料と、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散
   してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シートと
   を一定時間重ね合わせることにより、該試料中の
   放射性標識物質から放出される放射線エネルギー
   の少なくとも一部を該蛍光体シートに吸収させた
   のち、該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査
   して、該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放
   射線エネルギーを輝尽光として放出させ、そして
   その輝尽光を検出することにより試料中の放射性
   標識物質の位置情報を得ることからなる方法。 ２ 放射性標識物質を含む試料が、放射性標識を
   付与された生物体の組織および／または生物体由
   来の物質を含む媒体であることを特徴とする特許
   請求の範囲第１項記載のオートラジオグラフ測定
   法。 ３ 媒体が、放射性標識物質が分離展開された支
   持体であり、かつ、放射性標識物質が、放射性標
   識が付与された生体高分子物質、その誘導体もし
   くはそれらの分解物であることを特徴とする特許
   請求の範囲第２項記載のオートラジオグラフ測定
   法。 ４ 支持体が、電気泳動により生体高分子物質が
   分離展開された支持体であることを特徴とする特
   許請求の範囲第３項記載のオートラジオグラフ測
   定法。 ５ 生体高分子物質が、核酸、その誘導体もしく
   はそれらの分解物であることを特徴とする特許請
   求の範囲第４項記載のオートラジオグラフ測定
   法。 ６ (1) 放射性標識が付与されているDNA切断
   物もしくはDNA分解物からなる混合物を支持
   体上で電気泳動させて得た支持体と、輝尽性蛍
   光体を結合剤中に分散してなる蛍光体層を有す
   る蓄積性蛍光体シートとを一定時間重ね合わせ
   ることにより、該DNA切断物もしくはDNA分
   解物中の放射性標識から放出される放射線エネ
   ルギーの少なくとも一部を該蛍光体シートに吸
   収させる工程；そして (2) 該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査し
   て、該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放
   射線エネルギーを輝尽光として放出させ、そし
   てこの輝尽光を検出することにより支持体上の
   DNA切断物もしくはDNA分解物の位置情報を
   検出する工程； を含むことを特徴とする特許請求の範囲第５項記
   載のオートラジオグラフ測定法。 ７ 蓄積性蛍光体シートが、支持体、輝尽性蛍光
   体を結合剤中に分散してなる蛍光体層、そして保
   護膜を含むものであることを特徴とする特許請求
   の範囲第１乃至６項のいずれかの項記載のオート
   ラジオグラフ測定法。 ８ 生物体の組織、および、生物体の組織およ
   び／または生物体由来の物質を含む媒体からなる
   群より選ばれる試料に含まれている放射性標識物
   質の一次元的もしくは二次元的な位置情報を検出
   することからなるオートラジオグラフ測定法にお
   いて、該試料と、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散
   してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シートと
   を一定時間重ね合わせることにより、該試料中の
   放射性標識物質から放出される放射線エネルギー
   の少なくとも一部を該蛍光体シートに吸収させた
   のち、該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査
   して、該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放
   射線エネルギーを輝尽光として放出させ、その輝
   尽光を検出することにより、試料中の放射性標識
   物質の位置情報を得、そしてその位置情報を画像
   化することからなる方法。 ９ 生物体の組織、および、生物体の組織およ
   び／または生物体由来の物質を含む媒体からなる
   群より選ばれる試料に含まれている放射性標識物
   質の一次元的もしくは二次元的な位置情報を検出
   することからなるオートラジオグラフ測定法にお
   いて、該試料と、輝尽性蛍光体を結合剤中に分散
   してなる蛍光体層を有する蓄積性蛍光体シートと
   を一定時間重ね合わせることにより、該試料中の
   放射性標識物質から放出される放射線エネルギー
   の少なくとも一部を該蛍光体シートに吸収させた
   のち、該蓄積性蛍光体シートを電磁波により走査
   して、該蓄積性蛍光体シートに蓄積されている放
   射線エネルギーを輝尽光として放出させ、その輝
   尽光を検出することにより、試料中の放射性標識
   物質の位置情報を得、そしてその位置情報を記号
   および／または数値で表現することからなる方
   法。