JPH0218071B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチ
ル−5′βH−４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキ
サゾール−３，20−ジオンをアルトロバクタ・シ
ンプレツクス（Arthrobacter simplex）の生き
ている培地により醗酵させることを特徴とする
11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−5′βH−
１，４−プレグナジエノ（16，17−ｄ）−オキサ
ゾール−３，20−ジオンの製法に関する。

11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−5′βH−
４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキサゾール−
３，20−ジオンの微生物学的△¹−脱水素は固有
の実験で明らかなように他のステロイドと同様に
は簡単に実施することはできない。

公知のステロイド−△¹−脱水素のためのバチ
ルス・レンツス（Bacillus lentus）
ATCC13805、バチルス・スフエリクス
（Bacillus sphaericus）ATCC7054，ATCC7055
及びATCC12488のような生きている培地により
行なう前記物質の醗酵は、１つは基質の反応が殆
んど認められず、１つは基質が著しく物質代謝さ
れるので不十分にしか進行しない。

ところで、11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチ
ル−5′βH−４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキ
サゾール−３，20−ジオンの脱水素にアルトロバ
クタ・シンプレツクス種の微生物を使用する場合
にこの基質の微生物学的△¹−脱水素を良好に実
施し得ることが判明した。好適なアルトロバク
タ・シンプレツクス菌株は例えば菌株IFO
（3530）、ATCC13260、特にATCC6946である。

以前はコリネバクテリウム・シンプレツクス
（Corynebacterium simplex）と呼ばれていたア
ルトロバクタ・シンプレツクスがステロイドの△
^１−脱水素に関する作用を有することは長い間知
られている。この菌は前記の殆んどのステロイド
−△¹−脱水素体とは異なり、この菌株による反
応は前記の微生物を用いる場合より極めて迅速に
進行するのでしばしば工業的に使われているが、
アルトロバクタ・シンプレツクスは次の２つの欠
点も有している： １ しばしばこの菌は長い醗酵時間ではステロイ
ドを物質代謝し、これは所望の方法生成物の無
視し得ない収量損失を生ぜしめる。

２ しばしばこの菌は、出発ステロイド１〜３％
が培養液中に存在する場合反応を停止させる。
これは、医薬の作用物質に不可欠な純度の方法
生成物の製造を困難にし、これは度々極めて著
しい。

前記の両方の欠点は11β，21−ジヒドロキシ−
2′−メチル−5′βH−４−プレグネノ（16，17−
ｄ）−オキサゾール−３，20−ジオンの醗酵でも
認められる。

アルトロバクタ・シンプレツクスによる△¹−
脱水素を培養液１当りコバルト（）イオン
0.04ｇ〜0.12ｇの存在において実施する際にこれ
らの欠点が回避されることが判明した。前記より
低いコバルトイオン濃度では著しい効果は得られ
ず、高いコバルト（）イオン濃度では阻害的に
作用する。コバルト（）イオンを供与する好適
な薬剤は例えばCoCl₂，CoNO₃，CoSO₄又は
CoSO₄・7H₂Oのような水溶性コバルト塩であ
る。これらの塩のアニオンは、コバルト（）イ
オンが培地中で解離するので本方法の実施可能性
にとつて重要ではない。

ところで、本発明方法はアルトロバクタ・シン
プレツクス種の微生物によりステロイドを△¹−
脱水素する際に一般に適用される条件下に実施す
る。

この微生物に関して常用の培養条件下に好適な
培地中で通気下に深部培養を行なう。その後、培
地に好適な溶剤中に溶解するか又は殊に乳化形で
基質を添加しかつ最高の基質変換が達成されるま
で醗酵させる。

好適な基質溶剤は例えばメタノール、エタノー
ル、グリコールモノメチルエーテル、ジメチルホ
ルムアミド又はジメチルスルホキシドである。特
に好適な溶剤はヘキサメチルリン酸トリアミドで
ある。

培地に11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−
5′βH−４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキサゾ
ール−３，20−ジオンをヘキサメチルリン酸トリ
アミド中の２〜７重量％−溶液として添加する。
例えば、基質の乳化は、基質を超微粉砕形で又は
水と混合可能な溶剤、例えばメタノール、エタノ
ール、アセトン、グリコールモノメチルエーテ
ル、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキ
シド中に溶解して常用の乳化助剤を含有する殊に
脱灰した水中に激しい乱流下に噴射装入する。好
適な乳化助剤は例えばエチレンオキシド付加物又
はポリグリコールの脂肪酸エステルのような非イ
オン性乳化剤である。好適な乳化剤としては市販
の湿潤剤、テギン（Tegin ）、タガート
（Tagat ）、ツイーン（Tween ）及びシユパ
ン（Span ）が例として挙げられる。

最適な基質濃度、基質添加時間及び醗酵時間は
使用する微生物の種類に左右される。これらの程
度は、一般に微生物学的なステロイド変換で必要
とされるように個々の場合に当業者に周知である
ように予備実験により決定する。

次の実施例により本発明方法を詳説する。

次の実施例で使用した蛋白質水解物は羽毛粉か
ら（“Organic Synthesis”、Col.Vol.1194頁の処
方により）製造したが、加水分解を行なつた後で
アンモニアにより中和しかつ殺菌濾過した。得ら
れた濾液を更に精製することなく“蛋白質水解
物”として使用した。

例 ａ コーンスチープリカー 0.5％ グルコースモノヒドレート 0.05％ 酵母エキス 0.1％ を含有する滅菌培養液（PH7.0に調節）１を
包含する２−三角フラスコにアルトロバク
タ・シンプレツクスATCC6946の乾燥培地の懸
濁液を接種しかつ30℃で72時間180rpmで振盪
させる。

ｂ コーンスチープリカー 0.5％ グルコースモノヒドレート 0.05％ 酵母エキス 0.1％ シリコンSH ４ml プルロニツク ４ml を含有する滅菌培養液30を含む50一醗酵槽
にアルトロバクタ・シンプレツクス培養培地１
を接種しかつこの予備培地を30℃で通気（２
m³／時間）及び撹拌（220rpm）下に24時間恒
温保持する。

ｃ 融点114／118〜130℃の11β，21−ジヒドロ
キシ−2′−メチル−5′βH−４−プレグネノ
（16，17−ｄ）−オキサゾール−３，20−ジオン
15ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド300ml中
に溶解し、次いで滅菌濾過する。

ｄ CoSO₄・7H₂O12ｇ及び（NH₄）₂SO₄12ｇを
水500ml中に溶解し、PH6.5に調節しかつ滅菌す
る。

ｅ 50−醗酵槽にコーンスチープリカー 0.5％ グルコースモノヒドレート 0.05％ “蛋白質水解物” 0.3％ シリコンSH ４ml プルロニツク ４ml を含有する滅菌培養液（PH7.0に調節）30を
装入し、アルトロバクタ・シンプレツクス予備
培地３を接種しかつ通気（２m³／時間）及び
撹拌（220rpm）下に６時間30℃で恒温保持す
る。その後、培地に前記のｃ）で製造した滅菌
11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−5′βH−
４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキサゾール
−３，20−ジオン−溶液及びｄで製造した添加
物を加える。その後20時間醗酵させる。

醗酵後、塩化エチレン５で安定させた培養
液を１回当り20の塩化エチレンで３回抽出し
かつ塩化エチレン抽出物を回転式蒸発器中最高
50℃で真空下に濃縮する。次いで、精製を酸化
アルミニウムでクロマトグラフイ処理すること
により行なう。

融点210／212〜220℃の11β，21−ジヒドロ
キシ−2′−メチル−5′βH−１，４−プレグナジ
エノ（16，17−ｄ）−オキサゾール−３，20−
ジオン11.4ｇが得られる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−5′βH
   −４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキサゾール
   −３，20−ジオンをアルトロバクタ・シンプレツ
   クスの生きている培地により発酵させることを特
   徴とする11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル−
   5′βH−１，４−プレグナジエノ（16，17−ｄ）−
   オキサゾール−３，20−ジオンの製法。 ２ 発酵を倍地1l当りコバルト（）イオン0.04
   〜0.12ｇの存在において実施することを特徴とす
   る特許請求の範囲第１項記載の製法。 ３ 培地に11β，21−ジヒドロキシ−2′−メチル
   −5′βH−４−プレグネノ（16，17−ｄ）−オキサ
   ゾール−３，20−ジオンをヘキサメチルリン酸ト
   リアミド中の２〜７重量％−溶液として添加する
   特許請求の範囲第１項又は第２項記載の製法。 ４ 発酵をアルトロバクタ・シンプレツクス
   ATCC6946の生きている培地を用いて行なう特許
   請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項
   記載の製法。