JPH02229177A - 新規抗生物質ｍｋ１６８８物質ならびにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、エニアチン系の新規抗生物質ＭＫ１６８８物
質ならびにその製造法に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）従来
、微生物が生産する種々の抗生物質が知られており、医
薬品、動物薬、農薬等の分野で実用化されている。しか
しながら耐性菌の出現などの問題から、現在も新規な抗
生物質の出現が常に求められている。本発明は、新規な
抗生物質を提供するとともに、その製造法を確立するこ
とによって、この問題を解決しようとするものである。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、上述の期待にこたえるべく、抗菌活性を
有する物質の探索を続けたところ、フザリウム属に属す
るある菌株の培養物中に抗菌活性を有する物質が生産さ
れていることを見い出し、同物質を単離し、その物理化
学的性質を測定した結果、同物質はエニアチン系の化合
物であることがわかった。

ニアチンＡ　（ＰＩ，Ａ，Ｐｌａｔｔｎｅｒら、ヘルヘ
チカ　キミカ　アクタ（Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ，Ａｃｔａ
）、第３１巻、２１９２頁、１９４８年発行〕　；偽エ
ニアチンＡ（ｐｓｅｕｄｏ−Ｅｎｎｆａｔ　ｉｎ　　Ａ
）（Ｍ．Ｍ．Ｓｈｅｍｙａｋｉｎら、ジャーナル　オブ
シュケイ　キミイ（ｚｈ．Ｏｂｓｈｃｈ，Ｋｈｉｍ．）
、第４２巻、２３２０〜２３３４頁、１９７２年発行］
　；シクロ（Ｄ２−ヒドロキ゛シー３−メチルペンタノ
イルーＮメチル−Ｄ−バリルーＤ−２−ヒドロキシ−３
メチルペンタノイルーＮ−メチル−Ｄ−バリルＤ−２−
ヒドロキシ−３−メチルペンタノイルＮ−メチルーＤ−
パリル（Ｍ．　Ｍ，　　Ｓ　ｈ　ｅ　ｍ　ｙａｋｉｎ，
　　トエルブス　ブロシイデインダスオブ　ザ　ヨー口
ピアン　ペプチド　シンポジウム（１２ｔｈ．　Ｐｒｏ
ｃ．　Ｅｕｒ，　Ｐｅｐｔ，Ｓｙｍｐ．）、３４６　〜
３５２頁、１９７２年発行〕などが知られている。

しかし、更に検討した結果、本発明の抗生物質ＭＫ１６
８８物質は構成アミノ酸がＮ−メチルＬ−バリンである
ことがわかり、上記の公知化合物とは構成アミノ酸が異
なることから、本発明の抗生物質は新規な化合物である
ことを確定するに至り、本発明を完成した。

即ち、本発明の要旨は、下記式（Ｉ）で表される新規抗
生物質ＭＫ１６８８物質、 及びフザリウム属に属する、抗生物質ＭＫ１６８８物質
生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＫ１６８８
物質を採取することを特徴とする上記式（１）で表され
る抗生物質ＭＫ１６８８物質の製造法に存する。

以下本発明を説明するに、本発明の新規抗生物質ＭＫ１
６８Ｂ物質は、Ｎ−メチルーＬ−ハリンを構成アミノ酸
とする上記式（　Ｉ’　）で表される新規化合物である
。

本発明の抗生物質ＭＫ１６８Ｂ物質は、フザリウム属に
属する該ＭＫ１６８８物質生産菌により生産される。

かかる生産菌としては、例えば工業技術院微生物工業技
術研究所に、微工研菌寄第１０５６４号（ＦＥＲＭ　　
Ｐ−１０５６４）として寄託されているフザリウム・オ
キシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　　ｏｘ　　ｓ　　ｏ
ｒｕｍ）Ｄ３３８が挙げられる。その菌学的性質は下記
の通りである。

（１）形態学的特徴 コロニーは生育旺盛で、ＰＤＡ培地上においてフェルト
状〜線毛状となり、その表面は白色、裏面は黄味白色〜
明るい黄橙色を呈する。

基底菌糸は隔壁を有し無色で、放射状に伸長、分枝し幅
８．２μｍに至る。

気生菌糸は豊富に形成される。

フイアライドは気生菌糸上に側生または分生子柄上に形
成され、長さは３．２〜４３μｍと短かく、先端に向か
って先が細くなっており、幅は基部で１．８〜２．７μ
ｍである。

分生子は大分生子と小分生子の２つの型を有し、分生子
形成様式はフイアロ型である。

大分生子は多分技の分生子柄上に形成され、その形態は
、膜が薄く平滑な新月型で両端が尖っており、無色であ
る。

また該大分生子は通常３〜５隔壁（まれに６〜７隔壁）
でその基部にはくちばし状のフソトセルを有する。

上記大分生子の大きさは、３隔壁分生子で３５〜６０μ
ｍＸ４〜５．６μｍ、５隔壁分生子で５１．６〜５７μ
ｍ　Ｘ　４〜５．６μｍ、６〜７隔壁分生子で５４〜７
３μｍ×４〜５．６μｍである。

小分生子は菌糸から側生じた分生子柄上に生し、その形
態は膜が薄く無色で平滑な円筒形〜楕円形である。

また該小分生子は１〜２個の細胞から成り、その大きさ
は７．６〜２７μｍ×２〜４μｍである。

尚、完全世代は観察されなかった。

（２）生理的状質 ■最適生育条件 ■生育の範囲 ｐｕ　：　ｐＨ　２〜９　　（ＬＣＡ液体培地中で２週
間培養） 温度＝１０゜Ｃ〜３０゜ｃ　（ＰＤＡ培地上で２週間培
養） ？３）分類学的考察 ■属レヘルの同定 本菌株（Ｄ３３８）は１）フイアロ型分生子形成様式を
持つ、２）大分生子は新月型で隔壁を有し、基部には明
瞭なフントセル（Ｆ（，■ｔ　Ｃｅｌｌ）を有する。

上記菌学的性状を有する不完全糸状菌綱Ｄ｛ｙｐｈｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）の属について、Ｈ，Ｌ，Ｂａｒｎｅｔｔ
．とＢ．Ｂ．Ｈｕｎｔｅｒの“イラストレイテッド　シ
エネラ　オブ　インパーフェクト　フンギ（Ｉｌｌｕｓ
ｔｒａｔｅｄ　　ｇｅｎｅｒａ　　ｏｆ　　Ｉｍｐｅｒ
ｆｅｃｔ　　Ｆｕｎｇｉ）”記載の検索表に従って検索
した結果、本菌株（Ｄ　３　３．８　）はフザリウム属
に帰属することが判明した。

■種レベルの同定 本菌株（Ｄ３３８）は１）大分生子と小分生子を持つ、
２）小分生子は単純なフイアライト型の分生子柄上に生
じ、その分生子柄は短い、３）小分生子は連鎖状には形
成されない、４）小分生子は円筒形〜長楕円形である。

Ｂｏｏｔｈ　（１９７１）の“ザ　ジェヌスフザリウム
（Ｔｈｅ　　ｇｅｎｕｓ　　Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、１〜
２３７頁゛′の記載によれば、フザリウム属菌には４７
種が知られている。

本菌株（Ｄ３３８）の形態学的性状と上記文献記載の４
７菌種のものを対比したところ本菌株の性状は上記文献
に記載してあるフザリウム・オキシスボルムの性状とほ
とんど合致した。その中で近縁種のフザリウム・ソラニ
イ　（Ｆ，ｓｏｌａｎｉ）とは小分生子柄の長さの相違
によって識別された。従って本菌株（Ｄ３３８）はフザ
リウム・オキシスポルム（Ｆ．ｏｘｙｓ　　ｏｒｕｍ）
と同定された。

一般に、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ属）菌は他の
菌類の場合にみられるようにその性状が変化しやすいが
、本発明においては、例えば、Ｄ３３８株の、またはこ
の株に由来する突然変異株（自然発生または誘発性）で
あっても、或いはその形質接合体または遺伝子組換え体
であっても、新規構成物質ＭＫ１６８８物質の生産能を
有するものはすべて本発明の方法に使用することができ
る。

本発明においては、前記の菌を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としてはグ
ルコース、水アメ、デキストリン、シュクロース、デン
プン、糖蜜、動・植物油等を使用できる。また窒素源と
して大豆粉、小麦胚芽、コーンスティーブ・リカー、綿
実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用できる。その他必要に
応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ
ウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸及びその他のイオ
ンを生成することのできる無機塩類を添加することは有
効である。また菌の生育を助け抗生物質ＭＫ１６８８物
質の生産を促進するような有機及び無機物を適当に添加
することができる。

培養法としては、好気的条件下での培養法、特ｑ に深部培養法が最も通している。培養に適当な温度は１
０〜３０℃であるが多くの場合、２０〜２７℃付近で培
養する。抗生物質ＭＫ　１　６　８　８物質の生産は培
地や培養条件により異なるが、振とう培養、タンク培養
とも通常３〜１０日の間でその蓄積が最高に達する。培
養物中のＭＫ１６８８物質の蓄積量が最高になった時に
培養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

本発明において、ＭＫ１６８８物質の培養物からの採取
に当たっては、その性状を利用した通常の分離手段、例
えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着または分配
力ラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、・沈澱法等を
単独でまたは適宜組み合わせて抽出精製することができ
る。例えば、ＭＫ１６８Ｂ物質は、培養菌体中からはア
セトン水またはメタノールー水で抽出される。また、培
養液中に蓄積されたＭＫ１６８８物質は水と混ざらない
有機溶剤、例えば、ブタノール、酢酸エチル等で抽出す
ればＭＫ１６８８物質は有機溶剤層に抽出される。ＭＫ
１６８８物質をさらに精製するには、シリカゲル（ワコ
ーゲルＣ−２００、和光純薬工業社製等）、アルミナ等
の吸着剤やセファデックスＬＨ−２０　　（ファルマシ
ア社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うとよい。

かくして得られる前記式（ｒ）で表される本発明の抗生
物質ＭＫ１６８Ｂ物質は、下記表１に示すように、ダラ
ム陽性菌に対して抗菌活性を有する。

１５％、サングレイン０．２５％、綿実粕０．５％、Ｆ
ｅＳＯａ　　Ｈ　７ＨｚＯ　　Ｏ．　Ｏ　Ｏ　Ｏ　５％
、ＮｉＣ１ｚ　　・６８ｚＯ　　Ｏ．００００５％、Ｃ
ＯＣｌ２　・６Ｈ２０　　０．　０　０　０　０　５％
およびＣａＣＯｚ　０．　１％を含有する主醗酵培地（
ｐ｝ｌ　６．　０　）を調製し、その８　０　ｍ　ｊ＋
を５　０　０ｍＡ三角フラスコ１００本に分注し、１２
１℃において２０分間高圧滅菌する。この主醗酵培地に
前記種培養液を４　ｍ　Ｒずつ接種し、２６゜Ｃにおい
て６日間、２１０回転にて振とう培養する。得られた培
養を遠心分離して、培養上清液４℃と培養菌体を得た。

■　培養物の精製 上記■で得られた菌体約５００ｇ　（湿重量）に、５０
％アセトンー水（４β）を加え、３０分間撹拌した後、
菌体を濾別し、減圧下アセトンを留去して菌体抽出液（
２．０β）を得た。この菌体抽出液と上記■で得た培養
上清（４Ｅ）を混合し、この混合液より酢酸エチル（６
ｌ）で有効成分の抽出操作を行い、溶媒層を濃縮乾固し
た。得られた油状物質を、予めクロロホルムーメタノー
ル（２０：１）で充填したシリカゲル力ラム（ワコーゲ
また、本発明の抗生物質ＭＫ１６８８物質は、ｊｃｌ：
ＩＣＬマウス（体重２５ｇの雄を３匹使用）への腹腔内
投与による急性毒性試験を行ったが、１００ｍｇ／ｋｇ
の投与量で死亡例はなかった。

以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明の要旨を超えない限り、本発明は、以下の実施
例に限定されるものではない。

実施例１ ■　培養 コーンスターチ３．０％、大豆粉３．５％、大豆油０．
２％、小麦胚芽１，５％、ＫＪＰＯｔ０．　２％、Ｃａ
ＣＯ３０．５％を含有する種培地（ｐＨ　６．　０　）
を４．　Ｏ　ｍ　Ｑずつ２　０　０ｍＡの三角フラスコ
１０本に分注して、１２１℃、２０分間高圧滅菌した。

次いで、フザリウム・オキシスボルムＤ３３８（微工研
菌寄第１０５６４号〉を１白金耳ずつ植菌し、２６℃で
３日間、２１０回転にて振とう培養した。

別に、水アメ２．０％、大豆粉１．０％、大豆油０．ル
Ｃ−２００、１　０　０　ｇ）の上端に付し、ク四ロホ
ルムーメタノール（２０：１）で展開して溶出液を１５
ｇずつ分画した。活性画分（ｌｋｌ２５１４３）を濃縮
乾固すると７　９　６ｍｇの油状物質つ が得られた。この油状物質をセフプデソクスＬ　Ｈｊノ ２０　（８７０ｍｎ）カラム（Φ３　５　ｍｍ　ｘ　ｌ
　ｍ，９Ｑｃｍの高さまでセファデソクスＬＨ−２０を
詰めた）の上端に付し、メタノールで展開して溶出液を
１０ｇずつ分画した。活性画分（ＩＩｋｌ２１２Ｂ）を
濃縮乾固すると３　８　７ｍｇのＭＫ１６８８物質が得
られた。

尚、各工程での抗菌活性の測定は、被検菌としてハシル
ス　サブテイリス（Ｂ．ｓｕｂｔ　ｉ　ｌ　ｉｓ）ＡＴ
ＣＣ　　６６３３を使用して行った。

かくして得られたＭＫ１６８８物質の理化学的性質は次
の通りであった。

（１）色および形状：無色粉末 １２）分子式：　Ｃ　３ｂ　Ｈ　ｂ　３　Ｎ　３０，（
３）元素分析値：Ｃ　　６３．０２　　　Ｈ　　９．５
８Ｎ６．０８ （４）マススペクトル（Ｅｌ−ＭＳ）：ｍ／ｚ６８１（
Ｍ１　） （５》融点：吸湿性のため明確な融点を示さない。

（７）紫外部吸収スペクトル：末端吸収（８）赤外部吸
収スペクトル （ＫＢｒ　　ｃｍ−’）：３４３０，２９５０，２９３
０　　２８６０．１７３５．１６６’０，１４６０，１
４１５，１３７５，［２９５，１１９０．１１２５，１
１００．１０４０，１０１０．８７’Ｏ，．７７０ （９）’ＨＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤ３　
０Ｄ） δ（ｐｐｍ）：０．９２　（３Ｈ，ｄ，６．５Ｈｚ），
０．９５　（３Ｈ．ｔ，７．４Ｈｚ），０．９９　＜３
Ｈ，ｄ，６．７Ｈｚ），１．０　７　（３Ｈ，　　ｄ，
　　６．７Ｈｚ）　．１．２　３　（Ｉ　Ｈ，　ｍ） １．４　７　（Ｉ　Ｈ，　ｍ）　， １．９　６　　（Ｌ　Ｈ，　　ｍ）　　，２．２８　　
（ＩＨ．　　ｄ　　　ｓｅｐｔｅｔ　，　　１　０．　
０　，　　６．　７　Ｈ　ｚ　）３．１５　　（３Ｈ，
　　ｓ）， ４．７６　　（ＩＨ，　　ｄ，　　１０．ＯＨ２），５
．３８　　（ＬＨ，　　ｄ，　　６．５Ｈｚ）　　。

Ｑ（ＩＩ　’　３Ｃ　　Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（１００
ＭＨｚ，Ｃ　Ｄ３　０　Ｄ） δ　（ｐｐｍ）　　：１２．５　　　Ｑ．　　１５．９
　　　ｑ，　　２０．９　　　ｑ．　　２１．３　　　
ｑ，　　２７．２　　　ｔ，　　３０．１ｄ，　　３３
．７　　　ｑ．　　３Ｂ．５　　　ｄ，　　６４．５　
　　ｄ７６．Ｏ　　　ｄ．　　１７２．４１　　　ｓ，
　　１７２．４４ＳＯ Ｑｌｌ溶解性：メタノール、クロロホルム、酢酸エチル
、アセトンに溶け、水に溶けない。

αク　塩基性、酸性、中性の区別：中性物質上記理化学
的性質及び下記参考例ｌの結果から、得られたＭＫ−１
６８８物質は前記式（Ｉ）で表わされる構造であること
が確認された。

ｌ８ 参考例Ｉ ＭＫ１６８８物質（５　０ｍｇ）を６Ｎ　　ＨＣＩ（３
ｍｌ）に溶解し、１１’０℃で１６時間加熱還流した。

反応液は冷却後、濃縮乾固した。得られた油状物質は５
　ｍ　ｉｔの水に溶解し、ＩＮ　　ＮａＯＨでｐＨ４．
０に調製した後ダウエソクス５０Ｗｘ２（Ｈ”″）（ダ
ウケミカル社製、５　ｍ　ｌ　）カラムに通過させた。

通過液と水洗液（１　０ｍｌ）を混合し、濃縮乾固して
粗物質を得た。この粗物質は、水を展開溶媒とするセフ
ァデックスＧ−１０（ファルマシア社製、４　４　０ｍ
ｍ！）のカラムクロマトグラフィーを行い、溶出液を５
ｇずつ分画した。

１−ブタノールーメタノールー水（４　：　１　：　２
）を展開溶媒とするシリカゲル薄層クロマトグラフィー
上でＲｆ値０．５１に検出される物質を含む両分（Ｎｌ
３０−３５）を濃縮乾固すると２−ヒドロキシ−３−メ
チルペンタン酸（２０．２ｍｇ）が得られた。

ダウエックス５０Ｗｘ２（Ｈ′″）カラムに吸着した成
分は０．５Ｎ　　ＨＣＩで溶出し、濃縮乾固して粗物質
を得た。この粗物質は、水を展開溶媒とするセファデソ
クスＧ　−　１　０　（４　４　０ｍｌ！）のカラムク
ロマトグラフィーを行った後、分取用ＴＬＣ（メルク社
製、Ａｒｔ．５７４４、展開溶媒：１−ブタノールーメ
タノールー水、４　：　１　：　２）　）で精製してニ
ンヒドリン陽性の粗粉末を得た。この粗粉末は再び水を
展開溶媒とするセファデソクＧ　　１　０　　（’４４
０ｍｍ２）　（７１カラムクロマトクラフィーを行い、
ニンヒドリン陽性画分を濃縮乾固してＮ−メチルーＬ−
バリン（１１．９ｍｇ）を得た。

これらの結果から、ＭＫ１６８８物質は、２一ヒドロキ
シ−３−メチルベンタン酸とＮ−メチルＬ−バリンを構
成成分とすることが分った。

〈２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸〉マススペク
トル（Ｅｌ−ＭＳ）：ｍｌｚ　　１３２（Ｍ４） ’Ｈ　　ＮＭＲスペクトル（　４　０　０　Ｍ　Ｈ　ｚ
　，　Ｄ　ｚＯ）δ　（１）Ｉ）ｍ）　　：　０．’８
　６　　（３Ｈ，　　ｄ，　　？．ＯＨ２’）　，０．
９２　（３Ｈ，ｔ，７；４Ｈｚ），１．３　１　　（Ｉ
Ｈ．ｄｄｑ．１４．０．７．　０　Ｈ　ｚ　） （ＬＨ，　　ｄｄｑ，　　１４．０． ７．０Ｈｚ）， （ＩＨ，　　ｄｄｄｑ，　　７．０， ７．０，　　３．３Ｈｚ）， （ＩＨ，　　ｄ，　　３．３ＨＺ）　　。

（１　０　０ＭＨｚ，Ｄｚ　　Ｏ） ｑ．　　１３．６　　　ｑ．２６． ｄ，　　７３．５　　　ｄ，　　１７８．７．４， １．４４ ７．４， １．８６ ７，０， ４．３０ １３Ｃ　　ＮＭＲスペクトル δ（ｐ　ｐｍ）　　：　１　１．７ １ｔ，３８．６ ９　　Ｓ６ 〈Ｎ−メチルーし−バリン〉 マススペクトル（Ｅ　Ｉ　−ＭＳ） （Ｍ＋） 比旋光度：　〔α）．＝＋２６．９ ６Ｎ　　ＨＣＩ） ：ｍ／ｚ　　　１３１ ６（ｃｏ．７ ＮＭＲスペクトル （ｐ　ｐｍ）　　：　１．０　１ １．０４ ２．２３ ｔ， （４　０　０　ＭＨ　ｚ　，　　Ｄｚ　　Ｏ）（３Ｈ，
　　ｄ，　　７．０Ｈｚ）， （３Ｈ，　　ｄ．　　７．０Ｈｚ） （ＩＨ．　　ｄ　　　ｓｅｐｔｅ ４．　５　，　　７．　０　Ｈ　ｚ　）２．７　　１　
　（３Ｈ，　　ｓ）　　，３．４７　　（ＬＨ，　　ｄ
，　　４．５Ｈｚ）　　。

Ｉ３Ｃ　　ＮＭＲスペクトル（１　０　０ＭＨｚ，Ｄ２
　０）δ　（ｐｐｍ）　　：１８．Ｏ　　　ｑ，　　１
８．５　　　ｑ．　　２９．８　　　ｄ，　　３３．３
　　　ｑ，　　７０．Ｏ　　　ｄ．　　１７３．（発明
の効果） 本発明の新規抗生物質ＭＫ１６８Ｂ物質は、ダラム陽性
菌に対して抗菌活性を有するので、抗菌剤としての有用
性が期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＭＫ１６８８物質の臭化カリウム錠での赤外
部吸収スペクトルを示す図である。 第２図は、ＭＫ　１　６　８　８物質の重メタノール溶
液中での４００ＭＨｚ　　’Ｈ　　ＮＭＲスペクトルを
示す図である。 第３図は、ＭＫ１６８Ｂ物質の重メタノール溶液中での
１　０　０ＭＨｚ　　１３Ｃ　　ＮＭＲスペクトルを示
す図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式（ I ）で表される新規抗生物質ＭＫ１６
   ８８物質 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ）
2. （２）フザリウム属に属する、抗生物質ＭＫ１６８８物
   質生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＫ１６８
   ８物質を採取することを特徴とする請求項１記載の抗生
   物質ＭＫ１６８８物質の製造法。