JPH02240102A - ヘパリン誘導体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は新規なヘパリン誘導体およびその製造法ならび
に腎石症の治療薬としての用途に関する。

さらに詳しくは本発明は、市販の、または精製されたま
たは低分子量のヘパリンを塩基性媒体中で、必要に応じ
て塩および（または）還元剤の存在下に加熱処理してえ
られるモディファイされた構造をもつ新しいヘパリン誘
導体に関する。

本発明はまた１９８８年６月ｌＯ日出願のイタリア特許
出願第３５０４Ａ／８８号明細書に記載されたヘパリン
誘導体を、中性または塩基性媒体中で、必要に応じて塩
および（または）還元剤の存在下に加熱してえられるモ
ディファイされた構造をもつ新しいヘパリン誘導体に関
する。

本発明はまた前記新しいヘパリン誘導体の腎石症の治療
薬としての用途に関する。

［従来の技術］ 本発明のヘパリン誘導体の物理化学的性質は、市販のヘ
パリンおよびイタリア特許出願第３５０４Ａ７８８号明
細書に記されたヘパリン誘導体の物理化学的特性と異な
っている。かつまた本発明のヘパリン誘導体は前記２種
類のヘパリン類とは異なった生物活性をもっている。と
くに、新誘導体はもはやヘパリン構造に典型的な抗凝血
活性はなく、一方それは不変あるいは増強さえされた独
自の生物活性、たとえば抗結石症活性をもち、そのこと
は本発明のヘパリン誘導体を腎石症の治療および予防薬
として適当なものにしている。ボウヤー−アール・ジー
ら（Ｂｏｖｙｅｒ　Ｒ．Ｇ．　ａｔ　ａｌ　）はクリニ
カノレ争シミ力会アクタ（ＣＩｉｎ．　Ｃｈｉ―．＾ｅ
ｔａ）　、９５巻、２３頁（　１９７９年）誌上で、実
際にヘパリンがシュウ酸カルシウム結晶の生成と凝集に
対する強力な阻止薬であると論じたが、一方バギオ・ビ
ー（Ｂａｇｇｉｏ　Ｂ．）は、ボロ一二＋　（　Ｂｏｌ
ｏｇｎａ）で１９８７年９月７〜９日のあいだ開かれた
「腎臓結石症の結晶化阻止剤とその臨床的応用」 （Ｉｎｈｌｂｌｔｏｒｓ　ｏｒ　ｃｒｙｓｔａｌｌｌｚ
ａｔｌｏｎ　Ｉｎ　ｒｅｎａｌ１１ｔｈｉａｓｉｓ　　
ａｎｄ　　ｔｈｅｉｒ　　ｃｌｉｎｉｃａｌ　　ａｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎ）に関する国際会議で、ヘパリンはシ
ュウ酸塩の尿中ヘの排泄を低下させることを示した。ヘ
パリンはそれ故、結石に対する薬剤としての可能性はあ
ったが、その抗凝血および抗血栓活性のために、腎石症
一般に、とくにシュウ酸カルシウム腎石症に対して、疑
いもなく用いられえなかった。これに反して、本発明の
新規な生成物は、もはやヘパリンの典型的な性質である
抗凝血性をもたないので、腎石症への投与に用いられう
るのである。腎石症は慢性的な病気なので、副作用のな
い高度に特異的な薬の長期間の投与を必要とする。

本発明の目的物であるヘパリン誘導体がもつ物理化学的
特性はマルジグイアン●ジエー◆エス（Ｍａｒｄｌｇｕ
ｌａｎ　Ｊ．Ｓ．　）の欧州特許公開第０１３３０７８
号明細書およびヒラノ●エス（ｌｌｌｒａｎｏＳ．）ら
のコネクティブ●ティシュ一〇リサーチ（Ｃｏｎｎ．　
Ｔｌｓｓｕ　Ｒｏｍ．）　、３巻、７３〜７９頁（　１
９７５年）に記されたものとまったく異なっている。

すなわち本発明の化合物は、平均分子量が実質的に変化
していないので、解重合していない点、および２２５　
〜２３０ｎｍでのＵＶ吸収、および１３ｃ一ＮＭＲスペ
クトルにおいて二重結合の共役に対応するピークが存在
しないことで、ウロン酸の４、５位に二重結合の欠如を
示している点である。

そのうえ本発明の化合物はサンブソン・ビー（Ｓａａｐ
ｓｏｎ　Ｐ．）およびメイヤーΦヶ−（　ＭｅｙｅｒＫ
．）のプロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンス・オブ・ジ・ユナイテッド番ステ
イッ会オブφアメリカ（ＰｒｏｃＮａｔ．　Ａｃａｄ．
　Ｓｃｌ．　ＵＳＡ．）、０８巻、２３２９〜２３３１
頁（１９７１年）によって単離された化合物の物理化学
的特性さえも示さない。すなわち、本発明においてえら
れた化合物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、グルコサミ
ンの６位の炭素原子のシグナルの位置および強度が不変
であり、かつ無水誘導体ができるとき硫酸化された６位
の炭素原子が関与するので、３，６−アンヒドログルコ
サミンができたときには変化する硫酸化された６位の炭
素原子と脱硫酸化された６位の炭素原子の強度比が不変
である。最後に本発明の目的である生成物は、イタリア
特許出願第３５０４Ａ／８８号明細書の特許請求の範囲
に記された物理化学的性質とも異なっている。たとえば
’　３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおける約５３および５４
ｐ．ｐ．ｍ．のビークを欠《点である。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明者らは鋭意研究の結果、ヘパリンを塩基性媒体中
で、必要に応じて塩および（または）還元剤の存在下に
加熱処理してえられるモディファイされた構造をもつヘ
パリンが、従来から知られているヘパリンとその特性値
および生物活性において全く異なることを見出し、発明
を完成するにいたった。

［課題を解決するための手段］ 本発明は ”　Ｃ−ＮＭＲスペクトルが、とくに１０２および９２
ｐ．ｐ．ｍ．ｆｊｌの帯域で市販のヘパリンの１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトルと異り、ほぼ１０１．３ｐ．ｐ．ｔ　
において特性シグナルを示し、水溶液の５４８ｒｖにお
ける比旋光度が＋１５°〜÷４０°であり、イオウ含量
が６〜９％であり、硫酸塩基／カルボキシル基なる比が
１．２０〜１．７０にあり、遊離アミノ基含量が約０．
４〜２．１％であることを特徴とするヘパリン誘導体、 市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリンおよ
び０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基またはア
ルカリ土類金属塩基を含み、さらに必要に応じて１規定
以下の濃度のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩
および（または）触媒量の還元剤を含む水溶液を、７５
℃と反応混合物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間
加熱し、そののち必要に応じて反応混合物をイオン交換
樹脂カラムを通すかまたは透析によって精製したのち、
ほぼ中性の状態で炭素数１〜３のアルコールを２〜４倍
量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥によって、モディ
ファイされた構造をもつ生成物を単離することを特徴と
するヘパリン誘導体の製造法、 市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリンおよ
び０．０１−１規定の濃度のアルカリ金属塩基またはア
ルカリ土類金属塩基を含み、さらに必要に応じて１規定
以下の濃度のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩
および（または）触媒量の還元剤を含む水溶液を、４０
℃と７０℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、反
応混合物をイオン交換樹脂カラムを通すかまたは透析に
よって精製後、ほ゛ぼ中性の状態で炭素数１〜３のアル
コールを２〜４倍量加えて沈殿させるか、または凍結乾
燥によって中間化合物を単離し、該中間化合物の水溶液
を７５℃と該溶液の沸点との間の温度で０．５〜２４時
間恒温加熱し、そののち必要に応じて反応混合物をイオ
ン交換樹脂カラムを通すかまたは透析によって精製した
のち、ほぼ中性の状態で炭素数１〜３のアルコールを２
〜４倍量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥によって、
モディファイされた構造をもつ生成物を単離することを
特徴とするヘパリン誘導体の製造法、 市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリンおよ
び０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基またはア
ルカリ土類金属塩基を含み、さらに必要に応じて１規定
以下の濃度のアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩
および（または）触＆Ｉ量の還元剤を含む水溶液を、４
０℃と７０℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、
反応混合物の溶液をほぼ中性のｐｔ＋とし、ついで７５
℃と反応混合物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間
恒温加熱し、そののち必要に応じて反応生成物をイオン
交換樹脂カラムを通すかまたは透析によって精製したの
ち、ほぼ中性の状態で炭素数１〜３のアルコールを２〜
４倍量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥によって、モ
ディファイされた構造をもつ生成物を単離することを特
徴とするヘパリン誘導体の製造法、および 前記ヘパリン誘導体を有効成分とする腎石症治療用医薬
組成物に関する。

［実施例］ 本発明は新規なヘパリン誘導体、それらの腎石症の治療
における治療薬としての用途、および種々の起源の市販
のヘパリンまたは精製されたヘパリンまたは低分子量の
ヘパリンを塩基性媒体中で、必要に応じ塩および（また
は）還元剤の存在下、加熱による化学的モディフィケー
シジン（　ｌｏｄｊｒ１ｅａｔｌｏｎ）による該ヘパリ
ン誘導体の製造法に関する。

これらの新規なヘパリン誘導体はまたイタリア特許出願
第３５０４＾／８８号明細書に記載されたヘパリン誘導
体を、必要に応じて塩および（または）還元剤の存在下
に加熱してうろこともできる。化学モディフィケーショ
ン反応は、市販の、または精製された、または低分子量
のヘパリンを高温下の塩基処理によってイタリア特許出
願第３５０４＾／８８号明細書に記載されたのと同様の
過程で行われる。本発明の目的の方法において、ある基
本的なパラメーター、すなわち主として温度および（ま
たは）時間が、前記のイタリア特許出願明細書に記述さ
れた方法と変えられている。より詳しくは、温度が高め
られ、および（または）時間が先行の方法にくらべて延
長せられ、その結果市販の、または精製されたまたは低
分子量のヘパリンは、同一溶媒中２つの連続反応によっ
て、すなわちまず前記イタリア特許出願明細書でクレー
ムされた生成物の１つに変形し、それからさらに化学的
モディフィケーションののち、本発明に記載される生成
物の１つとなる。

換言すれば、前記反応の特異な条件は、出発物質である
ヘパリンをイタリア特許出願第３５０４Ａ／８８号明細
書に記載された特性値をもつ中間体に変えるのみならず
、本発明に記載された物理化学的特性値をもつ最終化合
物への、この中間体のそれにつづく変化が起ることを許
す。

選ばれた特定の有効な条件次第で、中間′体は反応中多
少高濃度で、そしてまた使いうる物理化学的方法によっ
ては検出できない低濃度で存在しうる、ということは明
らかである。そのうえ温度と時間に加えて他のパラメー
ターも使用しうる。たとえば塩基の１度は、平衡をイタ
リア特許出願第３５０４Ａ７８８号明細書でクレームさ
れている化合物を生成する方向にではなく、本発明の目
的化合物を生成する方向にシフトさせることができる。

実際に、反応の平衡は明らかに反応の全てのパラメータ
に依存し、それゆえ平衡はパラメータの調整によって変
る。したがって、その決定に寄与している非常に重要な
パラメータは、第１に温度、第２に時間であるが、それ
らは操作上および例示的なものと解釈されるべきもので
あり、これらのみに限定されるものではない。

モディフィケーションの化学反応は、イタリア特許出願
第３５０４Ａ／８８号明細書に記載された方法にしたが
ってえられた化合物を出発物質として使用することによ
っても行なわれうる。

なおモディフィケーシジンの化学反応は前記生成物を単
離することなく行なわれうる。すなわちイタリア特許出
願第３５０４＾／８８に記載された方法の１つにしたが
ってえられた反応混合物について直接行なわれうる。こ
のぱあいに中間の反応混合物は新しい反応に必要な化学
媒体（ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｄｉｕｍ）を作り出しう
る化学的処理、たとえば酸、塩基あるいはイオン交換樹
脂を使ってのｐ１１の補正、透析、イオン交換樹脂また
はゲルカラムによる塩類の除去、塩類の添加またはこれ
らの組み合わせ、などを受けることができる。

かくしてえられたモディファイされたヘパリン構造をも
つ化合物は、特有の旋光度と’　３Ｃ−ＮＭＲシグナル
をもつ。それらは出発化合物のそれらとも、イタリア特
許出願第３５０４Ａ７８８号明細書にクレームされた生
成物のそれらとも異なる。とくに、それらはｌ３Ｃ−Ｎ
ＭＲのシグナルが、市販のヘパリンのそれと、１０２〜
９２ｐ．ｐ．ｍ．間の領域で全く異なっている。そこで
はアノマー炭素のピークが現われる。そのピークは前記
イタリア特許出願に記された生，成物では約５３と５４
ｐ．ｐ．ｍ．にある。そのうえ、新しい生成物は出発物
質である市販のヘパリンにくらべて約２０〜３０＠　も
低い比旋光度の価で特徴づけられる。比旋光度の減少は
前記イタリア特許出願に記載された化合物と比べたとき
は、なお大きな減少となる。というのは該出願に記され
た化合物の比旋光度は市販のヘパリンのそれよりも大き
いからである。

市販の、または低分子量のヘパリンの化学的モディフィ
ケーシジンは、水性の媒体中で塩基、好ましくはアルカ
リまたはアルカリ土類金属水酸化物の存在下、必要に応
じてアルカリまたはアルカリ土類金属塩、および（また
は）還元剤、好ましくはナトリウムボロハイドライドの
存在下に、高温および（または）長い時間でえられる。

アルカリおよびアルカリ土類塩基および塩の好ましく用
いられる金属はナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウムおよびバリウムである。

ナトリウム、カリウムおよびバリウムの水酸化物は塩基
として好ましく用いられる。

ナトリウム、カリウム、バリウム、カルシウムおよびマ
グネシウムの酢酸塩および塩化物、ならびにナトリウム
、カリウムおよびマグネシウムの硫酸塩は塩として有利
に用いられる。

市販の、または精製された、または低分子回のヘパリン
は約０．０１〜１規定のアルカリまたはアルカリ土類金
属塩基、好ましくは水酸化ナトリウムの水溶液に、必要
に応じてアルカリまたはアルカリ土類金属塩の１規定以
下の濃度および（または）触媒量の還元剤、好ましくは
ナトリウムボロハイドライド、の存在下に溶解される。

溶液は７５℃と反応混合物の沸点との間の１Ｈ度で０．
５〜２４時間恒温加熱される。反応の終点で溶液は室温
にまで冷却され、ｐｌ１を中性にされ、必要に応じて精
製処理が行なわれる。すなわちたとえばイオン交換樹脂
カラムを通すとか、透析などである。そして最後にモデ
ィファイドヘパリン生成物は、約２〜４倍、好ましくは
２．５倍量の炭素数１〜３のアルコール、たとえばエチ
ルアルコールを加えて沈殿させるか、または凍結乾燥に
よってえられる。

本発明の目的物である新規なヘパリン誘導体は、またイ
タリア特許出願第３５０４Ａ／８８号明細書にしたがっ
てえられたヘパリン誘導体またはその反応混合物を出発
物質として使用することによってもえられる。

前者のぱあい、そのヘパリン誘導体は水、または約０．
０１〜１規定のアルカリまたはアルカリ土類金属塩基の
水溶液に、必要に応じて１規定以下の濃度のアルカリま
たはアルカリ土類金属の塩および（または）触媒量の還
元剤の存在下、溶解され、その溶液は７５℃と該溶液の
沸点との間の温度で０．５〜２４時間恒温加熱される。

後者のぱあい、前記イタリア特許出願にしたがってえら
れた反応混合物は、必要に応じてたとえば塩酸や酢酸や
ブロビオン酸のような酸を加えて溶液のｐＨが調節され
てほぼ中゛性にまでされ、あるいは塩や還元剤が存在す
るぱあいには、それらは透析や、アニオン性イオン交換
樹脂を通してからカチオン性イオン交換樹脂を通すとか
、ゲル濾過あるいはこれらの方法の２つ以上の組み合せ
で除去されるというモディファイが行なわれ、７５℃と
反応混合物の沸点との間の温度で約０，５〜２４時間恒
温加熱される。

両方のぱあいとも望まれる最終生成物は、前記のごとく
して反応の終了の時点で単離される。

本発明に記載された方法にしたがってえられたモディフ
ァイドヘパリン類は、先行技術から知られているアルカ
リ処理からえられたヘパリン類とは完全に異なった結果
である特異な物理化学的特性値を示す。

新規なヘパリン誘導体の構造の変化は出発物質のヘパリ
ンとの比較で１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの位置および強
度、電気泳動の挙動、比旋光度の低下、イオウ含口およ
び変化せず残っているカルボン酸基の量である硫酸塩基
／カルボキシル基の比の減少、ならびに遊離アミノ基の
ある量の存在からとくに示された。

新規なヘパリン誘導体の構造におけるより特徴的なモデ
ィフィケーシジンは１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルで起る大
きな変化の研究を通して示された。

これらの変化は、ある定められたスペクトル領域が参照
され、新しいピークの出現と他のピークの変化または消
滅を含んでいる。９２〜　ｌＱ２ｐ．ｐ．ｍ．の間の領
域での、イズロン酸およびグルコサミン単位の１位の炭
素に対応するシグナルの、市販のヘパリンおよびイタリ
ア特許出願第３５０４Ａ７８８号明細書に記載の生成物
に対する移動は、とくに重要である。また、前記イタリ
ア特許出願に記されたヘパリン誘導体を特徴づけている
約５３と５４９．ｐ．■．での２つのシグナルの消滅も
、特別の重要性をもっている。

とくに、市販のヘパリンと比較すると約１０１．３ｐ．
ｐ．＊．に新しいピークが存在する。新規な生成物およ
び出発化合物の’　３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの比較検討
はスペクトルのある領域は変化せずに残り、それゆえヘ
パリン構造の一定の部分は全くそディファイされないと
いうことの確証を可能にする。とくに、硫酸塩化された
、あるいは脱硫酸塩化されたグルコサミンユニットの６
位に関するシグナルは、モディファイされなかった。さ
らに、硫酸塩化されたグルコサミンユニットの２位、イ
ズロン酸のカルボキシルおよびヘパリン構造中でウロン
酸残基の平均２０％を構成しているグルクロン酸単位に
関するピークは、モディファイされた。

そのうえ、新規なモディファイされたヘパリンは酢酸バ
リウムのＱ．１モル緩衝液中ｐＨ５．８において、出発
物質とは異なった電気泳動上の挙動をすることで特徴づ
けられもする。すなわち、本発明のヘパリンは市販のヘ
パリンより高い、そして前記イタリア特許出願３５０４
Ａ７８８号明細書に書かれたモディファイされたヘパリ
ンよりは低い移動度をもっている。

本発明の新規なヘパリンは、約６〜９％の値を示すイオ
ウ含量、約１．２０〜１．７０の値である硫酸塩基／カ
ルボキシル基比、および水溶液の、５４６ｎｍの光にお
ける比旋光度が＋１０″〜＋４０゜であり、５８９ｎ−
での比旋光度が＋２０ｅ〜＋３０＠であり、遊離のアミ
ノ基の値が約０．４％と２．１％との間にあることによ
っても特徴づけられる。

化学的モディフ４ケーシジンは、生成に用いられた方法
によって種々の方法で評価される。

本発明の生成物が、市販のヘパリンからえられたもので
あるときは、出発物質のヘパリンおよび中間化合物を形
成しているところの前記イタリア特許出願第３５０４Ａ
／８８号明細書に記載されたモディファイドヘパリンの
双方に関して物理化学特性値を比較することが必要であ
る。　Ｃ−ＮＭＨのぱあい、本願明細書の実施例に引用
されたスペクトルの値の検討から、当業者にとって自明
なように、全スペクトル域で起こるすべての変化につい
て、そしてとくにアノマー炭素の１０２〜９２ｐ．ｐ．
ｍ．間について考慮することが必要である。容易さの故
に、５４６ｎ−と　５８９ｎ麿における比旋光度は反応
の進行をフォローするのに使用されうる。

実際に、異なる時間ごとに測定された比旋光度の値は用
いられた反応条件に依存する特徴ある変化を示す。一般
に、〔α〕の値は第１表に明らかに現われるように最初
は増加しついで減少する。第１表には市販のヘパリンの
１規定水酸化ナトリウム中での４％溶液について８０℃
の恒温で時間を変えて測定した５４６および５８９ｎｍ
での比旋光度の値の変化が記されている。旋光度の測定
値は、第２表、第３表から明らかなごとく本発明におけ
る化学的モデイフイケーシジンされたヘパリンとイタリ
ア特許出願第３５０４Ａ／８８号明細書に記載されたそ
れとをはっきりと区別することを可能にする。

ｒ以下余白］ 報告された値は、本発明におけるモディフィケーシジン
は低温、すなわち６０℃では長時間でもほとんど起らず
、反対に前記イタリア特許出願に記載されたモディフィ
ケーシジンは高温、すなわち９５℃では起りえないこと
を示している。

’　３Ｃ−ＮＭＲスペクトル１こお１ナる５３、５４ｐ
．ｐ．ｍ．のビークの連続した消滅と比旋光度の減少は
、本発明の目的のヘパリン誘導体がイタリア特許出願第
３５０４＾７８８号に記載されている生成物を出発物質
としてそれを単離後、または単離せず中間反応混合物の
まま、適当な化学的処理をしてうるときに考慮されうる
。前者のぱあい、約５３および５４ｐ．ｐ．ｍ．のピー
クの積分和と、グルコサミンの６位の炭素の約８２．５
と６９ｐ．ｐ．ｍ．のピークの積分和の比が考慮される
。約６２．５とＩｌｉ９ｐ．ｐ．ｍ．のピークは任意の
参照として選ばれる。というのはそれらの強度は一定で
残り、かつそれらは他のピークとは無関係のスペクトル
域にあるからである。

前記の比の値は反応の終点でゼロになるまで反応中減少
しつづける。それの代りとしては、一定値になるまでゆ
るやかに減少しつづける比旋光度の値が考慮されうる。

というのは５８９ｎ鳳の旋光度の減少は約５３と５４ｐ
．ｐ．ｍ．のＮＭＲの減少と平行して起るからである。

本発明の目的である新規なヘパリン誘導体は、出発物質
であるヘパリンに典型的な生物活性が著しく減少すると
ともに著しい結石防止活性をもっている。結石防止の活
性度は２種類の生物学的テスト、すなわちバギオ・ビー
ら（ＢａｇｇｌｏＢ．．　ｅｔ　ａｔ．）によってラン
セット（Ｌａｎｃｅｔ）　１９８４年■号、１２〜ｌ４
頁に記された方法によって行なわれるシュウ酸のトラン
スメンブランフラックス（ｔｒａｎｓａｅｓｂｒａｎｅ
　ｆｌｕｘ）の測定、およびバギオ・ビーらのアイアー
ルシーエスやメディカルΦサイエンス（　Ｂａｇｇｌｏ
　Ｂ．　ｅｔ　ａｌ．ｅ　ＩＲＣＳ　Ｗｅｄ．Ｓｃ１．
）　、１４巻、３６８頁（１ｐＨ年）に記された膜蛋白
のリン酸化の研究、にしたがった方法で測定された。結
果は、突発性患者の結石症に由来する赤血球を使って、
シュウ酸のトランスメンプランフラックス、および膜蛋
白のリン酸化、について本発明記載の化合物によって起
こされた阻止の程度が対照に対するバーセントとして表
わされた。シュウ酸の赤血球フローは以下のようにして
測定された。すなわち夜間絶食の１２時間後にヘパリナ
イズド試験管（ｈｅｐａｒｌｎｌｚｏｄｔｅｓｔ　ｔｕ
ｂｅ）に集められた静脈血１０　ｍｌが、塩化ナトリウ
ム１５０ミリモル、ＴＲＩＳ塩酸塩２０ミリモルを含む
溶液（ｐＨ７．４）で３回洗浄された。試料はそれから
同じ溶液中５０％へマトクリット（ｈａｅｍａｔｏｃｒ
ｌｔ）に懸濁されたシュウ酸ナトリウム１０ミリモルが
加えられた。この細胞性懸濁液は室温で２時間インキユ
ベートされた。それに続くステップは４℃でおこなわれ
た。遠心分離ののち、赤血球は前記溶液中２０％へマト
クリットに懸濁され、多数のボーシａン（ｐｏｒｔｉｏ
ｎ）に分割され１４Ｃシュウ酸（　ＬＯＯＯ　−　１０
．０００ｃ．ｆｌ．ｍ．）が加えられた。ｌＯ、２０、
３０、ＢＯ、９０、１２０分および２４時間後、相当す
るボーシ日ンは遠心分離された上澄みについてβ一カウ
ンター中で１４ｃ活性が測定された。シュウ酸の交換の
フローコンスタント（Ｎｏｗ　ｃｏｎｓｔａｎｔ）は１
次関数Ｉｎ（Ａｔ−＾ｏｏ）ハＡｏ−Ａｏｏ）−一κｔ
（式中、ｔは時間、Ｋはフロ一定数、Ａは時間ｏｓｔお
よび同位体平衡時（００）のシュウ酸量を表わす）の傾
斜から評価できる。

シュウ酸の異常トランスメンブランフラックスに伴う石
灰性突発性腎石症の患者に由来する細胞骸はｍ蛋白のリ
ン酸化研究に用いられた。

細胞骸の内因性リン酸化はＸＯＯミリモルのＴＲＩ８塩
酸塩緩衝液ｐＨ７．５、塩化マグネシウム８ミリモル、
３２ｐを含むＡＴＰ　２ミリモル、約５０μｇの膜蛋白
および２．５〜ｌＯμｇ／ｍｌのヘパリン誘導体を含む
最終的に１２５μｇの媒体中で３７”Ｃで種々の時間イ
ンキニベーシジンしてえられた。

インキュベーションは２％のドデシルサルフ工一トと１
％のメルカブトエタノールを加え、１００℃で５分間煮
沸して停止させられた。そののち、２０μｇのサツ力ロ
ースの飽和溶液およびトレーサとしての１２μｐの０．
０５％ビロニンが加えられた。このように処理された蛋
白質の約２０μｇの分別量がＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ドゲル上で電気泳動にかけられた。ゲルはそののちクー
マシープル−（Ｃｏｏｍａｓｓｌｅ　Ｂｌｕｅ）によっ
て着色され、乾燥されてから２０時間オートラジオグラ
フィーにかけられた。オートラジオグラフィーのパター
ンは濃度計で読みとられ、蛋白質バンドへの３２ｐの含
量が定量された。

その他の生化学的活性はヘパリンに特有の多くのテスト
で決定された。実際、抗Ｘａファクタ、ＡＰＴＴ，出血
時間および実験的血栓症からの保護に関するテストにつ
いて行なわれた。ＡＰＴＴ活性はラリ・ユー・エムφジ
エー・およびウエイランド●ジーのルビュー●デマトロ
ジ−（　Ｌａｒｒ１ｅｕ　Ｍ．Ｊ．　ａｎｄ　Ｖｅ１１
ａｎｄ　Ｇ．．　Ｒｅｖｕｅｄ’ｌｌｅｓａｔｏｌｏｇ
ｉｏ　）　、１２巻、１９９頁（１９５７年）記載の方
法によって決定された。一方抗Ｘａ活性はイン拳イーΦ
ティーおよびウエスラー・エスのバイオケミカ命エト・
バイオフィジカ・アクタ（Ｙｌ−ｉ　　Ｅ．Ｔ．　　ａ
ｎｄ　　Ｗｅｓｓｌｅｒ　　Ｓ．．　　Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｂｌｏｐｈｙｍ．＾ｅｔａ）　２０１巻、３８７頁（
１９７０年）記載の方法にしたがって決定された。

試験されるヘパリン誘導体は絶食させたラットから採取
した血漿中に溶かされた。ひきつづいてスカラー希釈を
して試験に提供される濃度をえた。それぞれのヘパリン
誘導体についてｌＯ回の測定が両活性についてなされた
。それぞれのテストにおいてとくに有意な変化をみせた
量はｓｃｇ／ｍｌとして表わされ、各生成物について評
価された。とくに各生成物の活性度は、濃度すなわちｓ
ｃｇ／ｍ１で表わされ、それはそれぞれＡＰＴＴ時間が
２倍、抗Ｘａ値が３０％増加の濃度である。

この２つのテストの値は新しい生成物の抗凝血力の低下
を示している。

出血時間は、ラットを使ってデジャーナ●イーらのトロ
ンボシス◆へモスタシス（Ｄｅｊａｎａ　Ｅ．ａｔ　ａ
ｔ．．　Ｔｈｒｏａｂ．　Ｈａｅｓｏｓｔ．）　、４８
巻％１０ｇ頁（　１９８２年）に記載の方法にしたがっ
て行なった。

そしてその結果は、新規なヘパリンを投薬したラットの
出血時間の延長の対照ラットの出血時間の延長に対する
百分率を計算し、同じ投与量（　１　ｍｇ／　ｋｇ／　
１．ｖ．）の相当する出発原料のヘパリンを用いたラッ
トの出血時間の延長のぱあいと比較して表わした。

抗血栓症活性はレヤーズ番エスらのトロンボシス番リサ
ーチ（Ｒｅｙｏｒｓ　Ｓ．　ａｔ　ａｌ．，　Ｔｈｒｏ
ｍｂ．ＲｅＢ．）　、１８巻、６６９−６７４頁＜　１
（１８０年）記載の方法にしたがって評価された。ここ
では新しい生成物によって与えられた保護は、出発物質
によって与えられた抗血栓保護を１００としたときの百
分率として評価されている。

えられた結果は、２つのタイプのヘパリンが抗結石症活
．性においては、改善されたか実質的に同じであった。

他方市販ヘパリンに対する特定のテストによって示され
る抗凝血活性は新しいヘパリンでは実質的に認められな
かった。

前記生物学的テストの結果は各実施例のところにその物
理的特性値と共に記す。

これらの新しいヘパリン誘導体は腎異常、とくに腎石症
の治療に有用でありうる。投与の好ましいルートはヘパ
リンに典型的なルート、すなわち非経口および皮下ルー
トであり、必要により等張液にするためのある塩や保存
剤を含む無菌性の水溶液の形で投与する。

本発明の目的物であるヘパリン誘導体はまた別のルート
、好ましくはガストロレジスタント（ｇａｓｔｒｏｒｏ
ｓｌｓｔａｎｔ）医薬組成物として投与されうる。

本発明のヘパリンの投与量は症状などに応じて医師の決
定にゆだねるべきであるが、通常成人１日あたり非経口
（静脈、筋肉内〉で５０ｍｇ（ｌバイアル）前後、経口
で１日あたり　２　０　０　ｍｇ前後である。

本発明のヘパリン誘導体の急性毒性値ＬＤｓｏはつぎの
とおりである。

ラットについて　ｌｖ　（静脈）　　　７１０Ｂ／ｋｇ
１ｌ（筋肉内＞　　２８０Ｂ／ｋｇ ｓｃ（皮下）　　　４２０ｉｇ／ｋｇ ｏｓ　（経口）　　　１０００■ｇ／ｋｇ以上大につい
て　　　ｌｖ　　　　　　　ｓｏｏｍｇ／ｋｇ以上ｓｅ
　　　　　　　　３００ｍｇ／ｋｇ以上市販のヘパリン
または市販のヘパリンナトリウムを処理精製したヘパリ
ンまたは低分子量のヘパリン、すなわち当業者に既知の
方法で解重合してえられた低分子量のヘパリンが本発明
の目的のモディファイドヘパリンをうるのに用いられる
。用いられたヘパリンの精製と解重合はこのあと、実施
例の前に記す。しかしそれによって限定されるものでは
ない。硫酸塩基とカルボキシル基との比の測定は電位差
滴定で行なわれた。イオウの百分率の測定は電位差滴定
とシ工−二−ゲル（Ｓｃｈｏθロｉｇｏｒ）法の両者に
よって行ｌ３ なった。　Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、バリアン（Ｖａｒ
１ａｎ）ＣＦＴ−７５スベクト口メーターを用い、７５
、４７Ｍｌｌｚで、０２０を溶媒に、３−トリメチルシ
リルプロパンスルホン酸ナトリウムを内部標準として測
定した。

以下に本発明で用いた出発物質としてのヘパリンの製法
およびその特性値を示す。

｛１｝ヘパリンナトリウムＡＬＰＡ　８７−８１５０ｇ
の市販ヘパリンナトリウムは４　０　０　０　ｍｌの水
に溶解され、その水溶液は２２２．４ｇの酢酸カルシウ
ム１水塩を含む４　０　０　０　ｍｌの水、１１４ｍｌ
の酢酸および１２００ｍｌのエチルアルコールからなる
溶液の中に温度を８〜１０℃に保ち３０分かけて注がれ
た。えられた懸濁物は１５時間ののち５℃で濾過され、
濾岐は２　０　０　０　Ｅｌｌｌのエチルアルコールが
加えられ、５℃で３時間静置されそののち沈殿が濾取さ
れた。沈殿物はつぎに４００ｍｌの水に溶かされ、溶液
は１規定の水酸化ナトリウムでｐｌ１７．０にされ、そ
ののち２００ｍｌのナトリウム型イオン交換樹脂ダウｚ
ツクス（Ｄｏｖｅｘ）　５０Ｘ８と　１　４　０　ｍｌ
の水で２０分間処理された。溶液と樹脂は同じ樹脂ｌＢ
Ｏｍｌが詰められたクロマトグラフカラム（直径４１、
高さ１３ｃｍ）に移された。溶液を通し蒸留水で溶液全
量が８　０　０　ｇｎｌになるまで溶出した。

該溶液に２４ｇの酢酸ナトリウム３水塩および２０００
ｍｌのエチルアルコールが加えられた。沈殿は濾別、真
空乾燥され、３８．５ｇの精製ヘパリンナトリウム、Ａ
ＬＰＡ　８７−８１かえられた。このものの諸特性値は
下記のとおりである。

’Ｃ−ＮＭＲスベクトノレ（ＬＰ．Ｉ．）　１１７．３
；　　１０４．７；１０２．０　．９９．５　；　８０
．１　．７Ｌ８　．７２．４　；　７２．０　；６９．
１　；　　８０．７ 分子量範囲７５００〜２３００Ｇダルトン、平均分子量
１４０００ダルトン ｓ　−　ｔｏ．ｅ％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　２．２０遊離アミノ
基−　　０．０％ ＾ＰＴＴ＝　　１．７μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　２０．６μｇ／ｍｌ 出血時間の延長〉２００％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　ｉ
．ｖ．）シュウ酸のトランスメンブランフラックス−　
７３．５％（濃度−ｌＩ１００　ｕ　ｇ／ｍｌ　）膜蛋
白のリン酸化阻止−２４％（濃度一ｌＯμｇ／ｍｌ）（
２）市販ヘパリンナトリウムＡＬＦＡ　８Ｂ−２４７１
３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ａ．）　１７７．３
；　　１７７．１；１０４．７　，　　１０２．０　；
　９９．８　；　７９．２　；　　７ｇ．９　；　７８
．７　；７２．５　；　７１．９　；　（１９．２　；
　（１２．８　；　８１．０　．６０．７　．（ｉ０．
３分子量範囲８５００〜２３０００ダルトン、平均分子
量１７７０Ｇダルトン Ｓ■１０．９％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　２．１３｝市販ヘパ
リンナトリウムＡＬＰＡ　８７−１２０１３Ｃ−ＮＭＲ
スベクトノレ（ｐ．ｐ．ｍ．）　１７７．３　；　　１
０４．７　；１０２．１　．　９９．５　；　７ｇ．７
　．　７２．５　．　７２．０　．　６９．２　．Ｂ２
．７　．　６０．８ 分子量範囲７０００〜２３０００ダルトン、平均分子量
１７０００ダルトン Ｓ　−　１１．４％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　２．３５４Ｂ ５４Ｂ 遊離アミノ基−　０．２７％ ＡＰＴＴ−　　０．７μｇ　／　ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　３０．３μｇ／ｍｌ 出血時間の延長〉２００％（　１　−ｇ／　ｋｇ，　Ｉ
．ｖ．）シュウ酸のトランスメンブランフラックスー６
９．２％（濃度−１００μｇ／ｍｌ）膜蛋白のリン酸化
阻止−２６％（濃度一ｌＯμｇ／ｍｌ）遊離アミノ基−
　０、４％ ＡＰＴＴ＝　　Ｌ４ｕ　ｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　２８．４μｇ／ｍｌ 出血時間の延長＞　　２００％　（　１　ｍｇ／　ｋｇ
，　ｌ．ｖ．）シュウ酸のトランスメンブランフラック
ス−　ｅｔ．ｏ％（濃度−１００　ｕ　ｇ／ｍｌ　）膜
蛋白のリン酸化阻止−２３％（濃度−ｌロμｇ／ｍｌ）
（４）市販ヘパリンナトリウムＡＬＰＡ　８７−１［１
３’Ｃ−Ｎｌ４Ｒスペクトル（ｐ．１）．＠．）　１７
７．８．　　ｔｏａ．ｇ：１０２．０　；　　９９．５
　．　　７Ｂ．Ｂ　．７２．４　；　　７２．０　．Ｂ
９．２　；８２．７　．　８０．８ 分子量範囲７０００〜２３０００ダルトン、平均分子量
１７７０Ｇダルトン Ｓ　−　１１．０％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　２．０遊離アミノ基
−　０．Ｂ％ ＾ＰＴＴ−　　２．１μｇ　／　ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　２３．ａｕ　ｇ／ｍｌ 出血時間の延長〉２００％（　１　ｕ／ｋｇ，　ｉ．ｖ
．）シュウ酸のトランスメンブランフラツクス−　７９
．２％（濃度一ｔｏａ　ｕ　ｇ／ｍｌ　）膜蛋白のリン
酸化阻止−２０％（濃度−１０μｇ／ｍｌ）（５）低分
子量のヘパリンナトリウムＬＭＩＩＩ　ＡＬＰ＾低分子
量のヘパリンナトリウムＬＭＶ　ＡＬＰＡ＆？−１９８
は、国際特許公開明細書第Ｎｏ　Ｈ／００７２９号に記
載された方法にしたがって、第２銅イオンの存在のもと
に過酸化水素による解重合によってえられた。

’　３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）　１７７
．７３　　；１０４．８７　　，　　１０２．０　．　
９９．Ｂ　，　８０．２　．　７ｇ．０　．　７２．４
　．７１．９　．　６９．２　；　６２．７　：　６０
．６分子量−４４００ダルトン Ｓ一１１．６０％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　２，３ｌ２０℃ ［α］　　　−＋４７°　（濃度−１％（水溶液））５
４Ｂ 【α］２０℃一十４３゜　（濃度−１％（水溶液））遊
離アミノ基−　０．０％ ＡＰＴＴ−　　８．５μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　ｎｏ．ｅｕ　ｇ／ｍｌ 実施例１ １．８ｇのＡＬＦＡ　８７−８１ヘパリンが水酸化ナト
リウム０．４ｇ（０．２２５規定）、酢酸ナトリウム２
．３ｇ（０．６２５規定）およびナトリウムボロハイド
ライドＬｏｎｇを含む水溶液４５ｍｌに加えられた。

えられた水溶液は９５℃で３．５時間恒温加熱されたの
ち室温に冷却され、氷酢酸で中和され２，５倍量のエタ
ノールが加えられた。沈殿はフィルター上に集められ、
２％（重量／体ｖｉ）の酢酸ナトリウムを含むエタノー
ルー水（８：ｌ）混合物溶液、つぎにエタノールー水（
８：ｌ）混合物で洗浄後乾燥された。本発明の生成物１
．７７ｇかえられた。その’Ｃ−ＮＯＲスペクトルおよ
びその他の特性値はつぎのとおりである。

’　３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（９，９．ｍ．）　１７７
．７　；　　１０４．０　；１Ｇ１．８　；　　１０１
．３　．　　１００．３　．　９Ｂ。２　；　８０．７
　．　７ｇ．９　．７４．５　；　７３．７　．　７２
．８　．　７１．４　，　８１１．９　．　Ｂ２．７　
，　６１．４　．６０．７ 分子量範囲７７００〜２３０００ダルトン、平均分子量
１８７ＧＯダルトン Ｓ−７．３５％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　１．５０５４Ｂ 遊＠　ＮＨ２−　　１．２２％ ＡＰＴＴ−　　１２４．０μｇ　／　ｍｌ抗Ｘ　ａ　−
　４１．２μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−１９％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　１．
ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −ｉｏ％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　ｌ．ｖ．）シュウ酸
のトランスメンブランフラックス−　８１．０％（′ａ
度−１００　ｕ　ｇ／ｍｌ　）１１ｆｆｌ白のリン酸化
阻止−２０％（ａ度−１０μｇ／ｍｌ）実施例２ ３０ｇのＡＬＰ八８８−２４７ヘパリンが水酸化ナトリ
ウム（８．７５ｇ　：　　０．２２５規定）とボロハイ
ドライド（２００ｍｇ）を含む水溶液に加えられた。

溶液は９０℃で４時間恒温加熱され、酢酸で中和され、
流水で一晩そののち蒸留水で６時間透析された。透析物
から凍結乾燥によって２０．４ｇの本発明の生成物かえ
られた。このものは下記の特性値を示す。

１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）　！７７，
８　；　　１０４．７　；１０１．９　．　　ＬＤｌ．
４　；　Ｈ．４　，　＆０．８　．　７９．Ｂ　．　７
９．３　，７９．０　．　７４．０　．　７３．５　．
　７２．８　．　７１．８　．　Ｂ９．０　．　（ｉ２
．７　；８１．３　．　８１．１　．　６０．８分子量
範囲７０００〜２２０００ダルトン、平均分子口ｔｃｇ
ｏｏダルトン Ｓ−７．７％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　１．３０遊離アミノ
基−　１．２０％ ＡＰＴＴ＝　ＩＩ３．７μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　−　４４．７μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−４６％（　１　ｍｇ／　ｋｇＳｉ．ｖ
．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −７０％　（　１　ｍｇ／　ｋｇｓ　　　ｌ．ｖ．）シ
ュウ酸のトランスメンブランフラックス−　７４．４％
（′ａ度−１００　μｇ／ｍｌ）膜蛋白のリン酸化阻止
−２８％（！１度−１０μｇ／ｍｌ）実施例３ ３０ｇのＡＬＦ八８７−１２０ヘパリンが水酸化ナトリ
ウム（８．７５ｇ　；　　０．２２５規定）を含む７５
０ｍｌの水溶液に加えられた。溶液は９０℃で４時間恒
温加熱され、そののち酢酸で中和され、流水で２４時間
ついで蒸留水で６時間透析された。透析物は凍結乾燥さ
れ、２８．２ｇの本発明の生成物かえられた。その特性
値は以下のとおりである。

’Ｃ−ＮＭＲスペクトル（Ｌｐ．ｍ．）　１７７．７　
；　　１０４．７　；１０１．９　，　　１０１．４　
．　８０．６　．　７９．８　．　７９．０　．　７４
．８　．７３．４　．　７２．８　．　７ｔ．８　．　
７１．３　，　Ｂ９．０　．　Ｂ２．７　．　Ｂｌ．３
　．８ｌ．０ 分子量範囲７０００〜２２０００ダルトン、平均分子量
１８７００ダルトン Ｓ−７．７％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　１．３８［α］２０
℃一十３２゜　（ａ度−１％（水溶液））［α］２０″
Ｃ−　＋　３０゜　（濃度−１％（水溶液））遊離アミ
ノ基−　１．３０％ ＡＰＴＴ＝　　１Ｂ．９μ　ｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　４４．８μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−５７％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　１．
ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −　３７．５％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　　１．ｖ．）
シュウ酸のトランスメンブランフラツクス−　８５．２
％　（　ａ　Ｋ　−　１００　ｕ　ｇ／ｍｌ　）膜蛋白
のリン酸化阻止−２１％（Ｑ度一ｌＯμＨ／ｍｌ）実施
例４ ｌｅｇのＡＬＰＡ　８７−１１３３ヘパリンが水酸化ナ
トリウム（２．２５ｇ，　　０．２２５規定）、酢酸ナ
トリウム（１２．８ｇ　；　　◎．Ｂ２５規定）および
ナトリウムボロノ〜イドライド５０膳ｇを含む２　５　
０　ｍｌの水溶液に加′えられた。

溶液は９０℃で４時間恒温加熱され、そののち室温に冷
却され、酢酸水溶液で中和されたのち、流水で２４時間
それから蒸留水で６時間透析された。透析物は凍結乾燥
され、７．８ｇの本発明の生成物かえられた。その特性
値は下記のとおりである。

ｌ３Ｃ−ＮＩ４Ｒスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）　１７フ
．フ；　　１０４．８　；１０１．９　；　　１０１．
４　；　９ｇ．ｅ　．　９ｇ．４　．　８０．３　．　
７９．１１　．７９．４　．　７９．０　．　７３．８
　．　７２．９　．　（ｆ９．１　．　０２．Ｇ　．　
Ｇｌ．３　．ＢＯ．８ 分子量範囲８０００〜２２５００ダルトン、平均分子瓜
１Ｂ８Ｇ◎ダルトン Ｓ−７４％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　１．３５遊離アミノ
基−　２．０１％ ＡＰＴＴ＝　８０．　ｌ　ｕ　ｇ／ｍｌ抗Ｘ　ａ　＝　
８２．０μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−１８％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　１．
ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −　　１２．５％　　（　　１　　−ｇ／　　ｋｇ，　
　　　１．ｖ．）シュウ酸のトランスメンブランフラッ
クスー０２．８％（濃度−１００μｇ／ｍｌ）Ｉｍｌ蛋
白のリン酸化阻止−１９％（ａ度一ｌＯμｇ／ｔｎｌ）
実施例５ ４ｇの水酸化ナ１・リウム（０．２２５規定）　、２３
ｇの酢酸ナトリウム（０．１３２５規定）、１００ｍｇ
のナトリウムボロハイドライド、および１８ｇのＡＬ［
’Ａ８７−１［１３ヘパリンを含む水溶液４５０ｍｌが
６０℃で３．５時間恒温加熱された。溶液の半分が、室
温まで冷却後氷酢酸で中和され２．５倍量のエタノール
に注がれた。沈殿物は濾取され、エタノール：水−８：
ｌの混合物で洗浄後乾燥された。イタリア特許出願第３
５０４Ａ７１１８号明ｍ’ｉａに記載されたヘパリン誘
導体と同様の生成物８ｇかえられた。その特性値を以下
に示す。

１３Ｃ−ＮＭＲスベクトノレ（凱ｐ．ｍ．）　１７７．
３　；　　１０４．３　；１０１．９　．９９．５　．
９８．４　．９７．２　．９Ｇ，８　．７９．８　．７
９．２　．７ｇ．８　．７２．２　．７１．９　．７１
．３　．８８．９　．６２．８　．Ｃ１０．（１　；　
（１０．３　，５４．２　；　５３．２Ｓ−８．２５％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−　１．６８遊離アミノ
基−　０．８７％ 前記生成物は１　５　０　ｍｌの蒸留水に溶かされ、７
５℃で２４時間恒温加熱された。室温に冷却されたのち
溶液は中和され、３ｇの酢酸ナトリウムが加えられ２．
５倍量のエタノール中に注がれた。

えられた沈殿物はエタノール：水−６：ｌの混合物で洗
浄後乾燥された。６．８ｇの本発明の生成物かえられた
。その特性値を以下に記す。

’　３Ｃ−ＩＪＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）　１７
７．２　；　　１０４．８　；１０１．９　．　　１０
１．３　；　８０．８　；　８０．５　；　７９．５　
．　７ｇ．９　，７４．（ｉ　；　７３．８　；　７３
．０　．　７１．１１　；　７１．１３　．　８９．０
　．　８３．２　，８１．４　．８０．８ 分子量範囲７７００〜２２５００ダルトン、平均分子量
１８７００ダルトン Ｓ−６．３０％ 硫酸塩２！／カルボキシル基の比−　１．３３５４ら 遊離アミノ基１　１．５％ ＡＰＴＴ−　　１１１．９μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　−　５５．５μＨ／ｍｌ 出血時間の延長−１０％　（　１　ｍｇ　／　ｋｇｓ　
ｉ．ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −　　１２．５％　　（　　１　　ｍｇ／　　ｋｇ，　
　　　１．Ｖ．）シュウ酸のトランスメンブランフラツ
クス−６８．１％　（　７Ｉａ度−　１００　ｕ　ｇ／
ｍｌ　）膜蛋白のリン酸化阻止−３２％（濃度−ＩＯμ
ｇ／ｍｌ）実施例６ 実施例５における溶液の残りの半分は氷酢酸で中和され
たのち７５℃で２４時間恒温加熱された。

室温に冷却後溶液はゆっくりと２．５倍量のエタノール
中に注がれた。沈澱物が濾取され、エタノール：水−６
：１の混合液で洗浄され乾燥された。７．２ｇの生成物
かえられた。その特性値を以下に記す。

１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）１７７．３
　　；　１０４．８　　；１０１．８；１０１．３　．
　８０．８．　８０．５．　７９．５．　７４．Ｑ．７
３．８　；　７３．０　；　７１．８　：　７１．（１
　；　８８．９　；　０３．１　；　Ｂｌ．４　；６０
．８ 分子量範囲７０００〜２１００Ｇダルトン、平均分子量
１Ｂ２００ダルトン Ｓ−０．３２％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−１．３Ｇ２０℃ ［α１　　　−＋２０’（濃度−１％（水溶液）遊離ア
ミノ基−１．４９％ ＡＰＴＴ−　１０１．３μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　＝　５３．９μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−１８％　（　１　ａｇ／　ｋｇｓ　　
ｉ．ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 一２０％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　　１．ｖ．）シュウ
酸のトランスメンブランフラックス−　７８．３％（濃
度−１００μｇ／ｍｌ）膜蛋白のリン酸化阻止−２８％
（濃度−１０μｇ／ｍｌ）実施例７ １２ｇ　（７）低分子量ヘパリンＬＭＷ　ＡＬＰＡ８７
−１９８が、水酸化ナトリウム（１２ｇ’　；　１規定
）、酢酸ナトリウム（　１５ｇ　；　０．８２５規定）
およびボロハイドライド６０■ｇを含む水溶液３００　
ｍｌに加えられた。

溶液は６０℃で４時間恒温加熱されたのち室温に冷却さ
れ、中和され、２４時間流水でそののち６時間蒸溜水で
透析された。溶液はそののち凍結乾燥され、ｌｏｇの生
成物かえられた。該生成物はイタリア特許出願第３５０
４Ａ／８１１号明細書でえられるものと同様で、下記の
特性値をもっていた。

ｌ３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ｐ．ｐ．ｍ．）１７７．３
　　，　１０４．８　　．１Ｇ１．９　，　１００．３
　．　Ｈ．５．　８０．１　．　７９．４．　７２．７
　．？！．９　，６９．０　．６２．７　．６Ｇ．６　
．５４．３　．５３．２Ｓ−８．２５％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比一１．５３５４［ｉ ２０℃ ［α］　　　−＋５５＠（ａ度−１％（水溶液））遊離
アミノ基一０．３％ ５ｇの該生成物が１００ｍｌの蒸溜水に溶かされた。こ
の水溶液は７５℃で２４時間恒温加熱されてから室温に
冷却され、中和され凍結乾燥され３．２ｇの本発明の生
成物を生じた。その特性値は以下のとおりである。

”　Ｃ−ＮＭＲスベクトノレ（ｐ．ｐ．ｍ．）１７７．
６　　；　ｌ０４．Ｑ　　；１０１．８　　，　１０１
．３　　．　８０．７．　７８．９．　７４．４．　１
３．６．７２．７　；　７１．３　．　８９．１　．　
０２．７　；　Ｂｌ．３　，　６０．８平均分子量４２
００ダルトン Ｓ−（ｉ８０％ 硫酸塩基／カルボキシル基の比−■．５２２０℃ ［α］　　　−＋１９＠（濃度−１％（水溶液））５４
Ｂ ２０℃ 〔α］　　　−＋１８°　（ａ度−１％（水溶液））遊
離アミノ基−０．４％ ＡＰＴＴ−　７１．２μｇ／ｍｌ 抗Ｘ　ａ　−　７１．２μｇ／ｍｌ 出血時間の延長−２０％（　１　ｍｇ／　ｋｇ，　　Ｉ
．ｖ．）血栓症防止の出発物質に対する割合 −２０％（　ｌ　ａｇ　／　ｋｇ，　　Ｉ　．ｖ．）シ
ュウ酸のトランスメンブランフラックス−　ＢＩｌ．９
％（１１度−１００　ｕ　ｇ／ｍｌ　）膜蛋白のリン酸
化阻止−２０％（濃度−１０μｇ／ｍｌ）実施例から、
本発明のヘパリン誘導体は出発物質として用いたヘパリ
ンにくらべて分子量は実質的に変らないが、諸特性値か
ら構造の異なるものであることがわかる。なお生理作用
としては出発物質にくらべて、結石症に対しては、すぐ
れるか同等の効果をもつが、ＡＰＴＴ活性、抗Ｘａ因子
、出血時間、抗血栓作用の値から、従来ヘパリンの特徴
とされていた抗血栓作用は極めて低いことが分る。

実施例８ ［非経口または皮下に用いるバイアル］ヘパリン誘導体
　　　　　　　　　　５０鳳ｇ塩化ナトリウムＦ．υ．
　　　　　　　　　１８ｍｇ非経口注射用滅菌水Ｐ．Ｕ
．　　　　　　　２（０１（Ｆ．υ．はＰａｒｓａｃｏ
ｐｏｏａ　Ｕｆｆｉｃｉａｌｅの略称、すなわちイタリ
ア薬局方のことである。） 実施例９ ［ガストロレジスタントカプセル］ ヘパリン誘導体　　　　　　　　　　ｌ◎θｍｇラウリ
ルザルコシンナトリウム塩　１８．５Ｂシリカゲル　　
　　　　　　　　　　ｌｏａｇトリグリセライド　　　
　　　　　　６００ｍｇガストロレジスタント軟ゼラチ
ンカプセルとしては下記の組成のものを用いた。

ゼラチンＰ．Ｕ．　　　　　　　　　　　　　２２４ｍ
ｇグリセローノレＦ．υ．　　　　　　　　　　　８４
ｓｇエチルｐ−オキシベンゾエー ナトリウム塩　Ｅ２１５ ト １　鳳ｇ の患者への治療薬として効果的かつ脊用なものである。

ブロピルｐ−オキシベンゾエー ナトリウム塩　Ｅ２１７ ト ０．５ｍｇ 二酸化チタン　Ｅｌ７１ 赤色酸化鉄　Ｅ１７２ ヒドロキシブ口ピルメチル セルロース （１．７ｍｇ 一に １４．５麿ｇ ボリエチレングリコーノレ８０００　　　　３．２Ｂタ
ルク　　　　　　　　　　　　　　ｌ．３ｍｇヒド口キ
シブ口ビルメチル セルロースフタレート　　　　　７９．５■ｇアノレフ
ァ壷ワッセノレマン● エッセービφア アセチル化モノグリセライド類　　　８Ｂガストロレジ
スタンスのテストは米国薬局方ＸＸＩ　，　１２４３頁
記載の腸溶錠剤のテスト法によった。

［発明の効果］

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが、とくに１０２お
   よび９２ｐ．ｐ．ｍ．間の帯域で市販のヘパリンの＾１
   ＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトルと異り、ほぼ１０１．３ｐ．
   ｐ．ｍ．において特性シグナルを示し、水溶液の５４６
   ｎｍにおける比旋光度が＋１５°〜＋４０°であり、イ
   オウ含量が６〜９％であり、硫酸塩基／カルボキシル基
   なる比が１．２０〜１．７０にあり、遊離アミノ基含量
   が０．４〜２．１％であることを特徴とするヘパリン誘
   導体。 ２　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、７５℃と反応
   混合物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、
   そののちほぼ中性の状態で、炭素数１〜３のアルコール
   を２〜４倍量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥によっ
   て、モディファイされた構造をもつ生成物を単離するこ
   とを特徴とする請求項１記載のヘパリン誘導体の製造法
   。 ３　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、７５℃と反応
   混合物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、
   そののち反応混合物をイオン交換樹脂カラムを通すかま
   たは透析によって精製し、ほぼ中性の状態で炭素数１〜
   ３のアルコールを２〜４倍量加えて沈殿させるかまたは
   凍結乾燥によって、モディファイされた構造をもつ生成
   物を単離することを特徴とする請求項１記載のヘパリン
   誘導体の製造法。 ４　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、４０℃と７０
   ℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、反応混合物
   をイオン交換樹脂カラムを通すかまたは透析によって精
   製後、ほぼ中性のｐＨで炭素数１〜３のアルコールを２
   〜４倍量加えて沈殿させるか、または凍結乾燥によって
   中間化合物を単離し、該中間化合物の水溶液を７５℃と
   該溶液の沸点との間の温度で０．５〜２４時間恒温加熱
   し、そののちほぼ中性の状態で、炭素数１〜３のアルコ
   ールを２〜４倍量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥に
   よって、モディファイされた構造をもつ精製物を単離す
   ることを特徴とする請求項１記載のヘパリン誘導体の製
   造法。 ５　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、４０℃と７０
   ℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、反応混合物
   をイオン交換樹脂カラムを通すかまたは透析によって精
   製後、ほぼ中性のｐＨで炭素数１〜３のアルコールを２
   〜４倍量加えて沈殿させるか、または凍結乾燥によって
   中間化合物を単離し、該中間化合物の水溶液を７５℃と
   該溶液の沸点との間の温度で０．５〜２４時間恒温加熱
   し、そののち反応混合物をイオン交換樹脂カラムを通す
   かまたは透析によって精製し、ほぼ中性の状態で炭素数
   １〜３のアルコールを２〜４倍量加えて沈殿させるかま
   たは凍結乾燥によって、モディファイされた構造をもつ
   生成物を単離することを特徴とする請求項１記載のヘパ
   リン誘導体の製造法。 ６　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、４０℃と７０
   ℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、反応混合物
   の溶液をほぼ中性のｐＨとし、ついで７５℃と反応混合
   物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間恒温加熱し、
   そののちほぼ中性の状態で、炭素数１〜３のアルコール
   を２〜４倍量加えて沈殿させるかまたは凍結乾燥によっ
   て、モディファイされた構造をもつ生成物を単離するこ
   とを特徴とする請求項１記載のヘパリン誘導体の製造法
   。 ７　市販の、または精製済のまたは低分子量のヘパリン
   および０．０１〜１規定の濃度のアルカリ金属塩基また
   はアルカリ土類金属塩基を含む水溶液を、４０℃と７０
   ℃との間の温度で０．５〜２４時間加熱し、反応混合物
   の溶液をほぼ中性のｐＨとし、ついで７５℃と反応混合
   物の沸点との間の温度で０．５〜２４時間恒温加熱し、
   そののち反応生成物をイオン交換樹脂カラムを通すかま
   たは透析によって精製し、ほぼ中性の状態で炭素数１〜
   ３のアルコールを２〜４倍量加えて沈殿させるかまたは
   凍結乾燥によって、モディファイされた構造をもつ生成
   物を単離することを特徴とする請求項１記載のヘパリン
   誘導体の製造法。 ８　アルカリ金属塩基またはアルカリ土類金属塩基に加
   えて、１規定以下の濃度のアルカリ金属塩もしくはアル
   カリ土類金属塩、および（または）触媒量の還元剤を存
   在させて加熱を行なう請求項２、３、４、５、６または
   ７記載の製造法。 ９　塩基が水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび水
   酸化バリウムの群から選ばれたものであり、目的とする
   生成物をエチルアルコールを２．５倍量使って沈殿させ
   る請求項２、３、４、５、６、７または８記載の製造法
   。 １０塩がナトリウム、カリウム、バリウム、カルシウム
   、またはマグネシウムの酢酸塩もしくは塩化物、または
   ナトリウム、カリウム、マグネシウムの硫酸塩であり、
   還元剤がナトリウムボロハイドライドである請求項８記
   載の製造法。 １１　請求項１記載の化合物を有効成分とする腎石症治
   療用医薬組成物。