JPH02312596A - 抗生物質４―チオウリジンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は抗菌作用および抗ガン作用を持つ抗生物質４−
チオウリジンの製造法に関する。

〔従来の技術〕

抗生物質４−チオウリジンはＥ、ｃｏｌｉ中のｔ−ＲＮ
Ａの微量構成成分（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　ｃｈｅｍ、　２４
０　、３９７５（１９６５）　　）として知られており
、これまで微生物変換（特公昭５２−１１７６あるいは
合成法ＣＪ、八ｍ。

ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　８Ｌ　１７８（１９５９）；
特開昭４ＥＩ−１４６７８）による製造法がある。

〔発明が解決しようとする課題〕

抗生物質４−チオウリジンは抗菌および抗ガン作用を有
しており、医薬品として期待されていることからよりす
ぐれた製造開発のため、本物質の新規製造法の開発が望
まれている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明はストレプトミセス属に属し、抗生物質４−チオ
ウリジン産生能を有する微生物を培地中で培養し、抗生
物質４−チオウリジンを生成蓄積せしめ得られた培養液
から抗生物質４−チオウリジンを採取することを特ａと
する抗生物質４−チオウリジンの製造法に関する。

本発明で使用されるストレプミセス属に属する抗生物質
４−チオウリジンの生産菌は昭和６３年１月長野県北安
曇野小谷村の土壌より分離したストレプトミセス・エス
ピーＮＫ　　１１０１３４５ｔｒｅ　ｔｏｍ　ｃｅｓＳ
Ｐ、　ＮＫ−１１０１３４、微工研菌寄第１０６３８号
）である。

以下ＮＫ−１１０１３４株の菌学的性状を示す。

１、形態 ＮＫ　−１１０１３４株は顕微鏡下で分校した基中菌糸
よりカギ状あるいはらせん状状の気菌糸を形成し、輪生
技、胞子のうは認められない。

成熟した胞子鎖は１０個以上の胞子の連鎖を認め胞子の
大きさは、０．５〜０．６　Ｘｏ、９〜１．２ミクロン
位で胞子の表面は平滑または粗面である。

２、各種培地における生骨状態 色の記載については（財〕日本色彩研究所の色の標準を
用いた。

（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７°Ｃ培養） うす黄茶の発育上に、白〜茶灰の気菌糸を着生し、溶解
性色素はわずかに茶色をおびる程度である。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７°Ｃ培
養） うす黄〜茶色の発育上に、白〜茶白〜 灰黒の気菌糸を着生し、溶解性色素はゎずかに黄色をお
びる程度である。

（３）スターチ・無機塩寒天培地（ｒｓｐ−培地４．２
７°Ｃ培養） うす黄の発育上に白〜灰白〜明るい茶灰の気菌糸を着生
し、熔解性色素はわずかに黄色をおびる程度である。

（４）チロシン寒天培地（ｌ５Ｐ−培地７．２７’Ｃ培
養） 黄茶の発育上に、白〜茶灰〜灰黒の気 菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（５）栄養寒天培地（２７°Ｃ培養） うす黄の発育上に、白色の気菌糸を着生し、溶解性色素
は認められない。

〔６〕イースト・麦芽寒天培地（ｌ５Ｐ−培地２．２７
°Ｃ培養） 黄茶の発育上に、白〜灰白〜明るい茶灰の気菌糸を着生
し、ゎずかに茶色をおびる程度である。

（７）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７°
Ｃ培養） 無色の発育上に白〜茶灰のところどこに水ぽい黒色（ｈ
ｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ　）の気菌糸を着生し、溶解性色
素は認められない。

（８）スターチ寒天培地（２７°Ｃ培養）うす黄茶の発
育上に白〜明るい茶灰〜茶灰の気菌糸を着生し、溶解性
色素は認められない。

（９）リンゴ酸石灰寒天培地（２７°Ｃ培養）うす黄の
発育上に、白〜灰白の気菌糸を着生し、溶解性色素は認
められない。

（１０）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０°Ｃ培養）では、黄茶の発育上
に白色の気菌糸を着生し、溶解性色素は黄色をおびる。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２４°Ｃ培養）
では、無色の発育上に、白色の気菌糸を着生し、溶解性
色素は認められない。

（１１）脱脂牛乳（３７°Ｃ培養） 無色〜うす黄の発育上には気菌糸は着生せず、溶解性色
素は認められない。

３、生理学的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地〔可溶性デンプン１．０％
、酵母エキス（大玉）０゜２％、粉末寒天（栄研）２．
０％、ｐＨ７，０）を用い５．１０．２４．２７．３２
．３７．４５°Ｃの各温度で試験の結果、５．４５°Ｃ
を除いて、そのいずれの温度でも発育したが至適温度は
２４〜３２°Ｃ付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化〔１５％単純ゼラチン（２０°Ｃ
培養）、グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２４°
Ｃ培養）〕 各培地とも２１日間の培養では液化は認められない。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機・塩寒天培
地及びスターチ寒天培地、いずれも２７°Ｃ培養） いずれの培地においても、培養後７日目頃より氷解性が
認められ、その作用は中等度である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（３７°Ｃ培養）２
１日間培養を行ったが、凝固及びペプトン化は認められ
ない。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
ブロス（ｌ５Ｐ−培地１）、ペプトン・イースト鉄寒天
培地（ＩＳＰ＝培地６）、チロンン寒天培地（ＩＳＰ−
培地７）、いずれも２７°Ｃ培養〕いずれの培地でも認
められない。

（６）炭素源の利用（ブリドハム・ゴツトリーブ寒天培
地Ｈｓｐ−培地９　）　、２７°Ｃ培養〕グルコース、
Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、ラフィノース、
イノシトール、Ｄ−ガラクトース、シュクロースを利用
し、ラムノースは利用しない。また、Ｌ−アラビノース
、Ｄ−キシロースはおそらく利用しないと思われる。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰培地２７°Ｃ
培養） 溶解性を認める。

（８）硝酸塩の還元反応〔０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水（ｌ５Ｐ−培地８〕２７°Ｃ培養〕陰性である
。

以上の性状を要約するとＮＫ　−１１０１３４株は、ス
トレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し
、細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメリン酸はＬＬ
−型である。又胞子のうを認めず、気菌糸はカギ状ある
いはらせん状を有し、輪生技は認められない。胞子の表
面は平滑あるいは粗面である。種々の培地でうす黄〜黄
茶の発育上に白〜明るい茶灰の気菌糸を着生し、溶解性
色素はわずかに黄色をおびる。メラニン様色素、蛋白分
解力、硝酸塩の還元は陰性、スターチの氷解性、リンゴ
酸石灰の熔解性は陽性である。またこの菌株の特徴は気
菌糸が水ぽい黒色（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃ）になる。

これら性状よりＮＫ　−１１０１３４株に近縁の既知菌
株をバーシーズ・マニュアル・オプ・デターミネイティ
ブ・ハタテリオロージー第８版、シャーリング及びゴツ
トリーブのＩＳＰ菌株記載より検索するとストレプトミ
セス・バイグロスコピカス（釘旦旦」且」」万−口じニ
ー一幻ｕ工ｌＯ−、ストレプトミセス・リハニーし８Ａ
工」ｕＡｍ−ｃ、６５　Ｌｉｂａｎｉ　が挙げられ、本
菌株はこれらに近縁の株と思われる。

本発明により抗生物質４−チオウリジンを製造するには
ストレプトミセス属に属し、抗生物質４−チオウリジン
を産生ずる能力を有する微生物を培地中で培養し培養物
中に抗生物質４−チオウリジンを生成蓄積せしめ、つい
でこれを採取すればよい。培養方法は原則的には放線菌
の培養方法に準するが、通常は液体培養による深部培養
法が有利である。培養に用いられる培地としては菌株Ｎ
Ｋ−１１０１３４が利用する栄養源を含有する培地であ
ればよい。栄養源としては従来から放線菌の培養に利用
されている公知のものが使用でき、例えば、炭素源とし
て、グルコース、ガラクトース、マンニトール、デキス
トリン、澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単
独または組合わせて用いることができる。無機および存
機窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、尿素、硝酸アンモニウム、硝酸ソーダ、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・
リカー、大豆油カス、オートミル、カザミノ酸、バタト
ソイトン、ソリブルベジタブルプロテインなど単独また
は組合わせて用いることができる。

その他必要に応じて食塩、硫酸マグネシウム、硫酸銅、
硫酸亜鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウム、燐酸塩など
の無機塩を加えることができるほか、木閑の生育や、抗
生物質４−チオウリジンの生産を促進する有機物、例え
ば核酸類、アミノ酸、ビタミン類や無機物を適当に添加
することができる。

培養温度は２５°Ｃ〜３０°Ｃ，ｐＨは中性ないし微酸
性で培養を行うことが望ましい。液体培養では通常３〜
６日間培養を行うと、抗生物質４−チオウリジンが培養
液中に蓄積される。培養液中の生成量が最大に達したと
きに培養を停止し、菌体を濾別して得られる培養液中よ
り目的物を精製単離する。

培養濾液から本物質の精製単離には吸着樹脂あるいは活
性炭による吸脱着法、セファデックスＲ類、シリカゲル
のカラムクロマトグラフィーなどの方法を適当に組合わ
せて用いることができる。以下に本発明の実施例を示す
が、これは単なる１例示であって何等本発明を限定する
ものでなく、種々の変法が可能である。

実施例 ロータリー型振盪機用５００ｄ容三角フラスコに溶性澱
粉２％、グルコース０．５％、ペプトン０．５％、酵母
エキス０．５％、大豆粉０，５％、燐酸第２カリウム０
．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％、炭酸カルシウ
ム０．２％の培地（ｐｆ１７．２　）　１００　ｍｌを
分注し、１２０　°Ｃｌ２Ｏ分間オートクレーブ滅菌し
た。これにＮＫ−１１０１３４株（微工研菌寄第１０６
３８号）の１白金耳を接種し２８°Ｃ１１９２回転／分
、２日間振盪した。これとは別にロータリー型振盪機用
５００ｉ！容三角フラスコにグリセリン４％、ポリペプ
トン０．５％、酵母エキス０．３％、肉エキス０．５％
、塩化ナトリウム０．３％、硫酸マグネシウム０．０５
％の培地（ｐＨ７，０）１００　ｍｌを分注し、１２０
°Ｃｌ２Ｏ分間オートクレーブ滅菌したフラスコに前記
培養液２　ｍｆｌを移植し、２８°Ｃ，１９２回転／分
の条件下で５日間振盪培養した。培養液を濾過し濾液１
０βを得た。

ダイアイオンＩｌ！−２０■（三菱化成工業に、に、）
１００ｍｆｌに吸着させ５０％アセトン水２．ＯＮで溶
出した。活性区分を集め、減圧下で濃縮し、黒褐色固形
物８．３ｇを得た。メタノール１５０ｍＲで処理し黒褐
色オイル６．６ｇも得た。これをシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（シリカゲル４００ｇ、展開溶解剤クロ
ロホルス／メタノール＝４）を行った。活性区分を集め
、減圧濃縮し、黄色オイル３５０ｍｇを得た。５ｅｐｈ
ａｄｅｘ　ＬＨ−２０９００ｍｌカラムに吸着させメタ
ノールで溶出した。活性区分を集め減圧濃縮し、黄色オ
イル１００ｍｇを得、エーテルより黄色粉末状として口
集した。本物質はＦＤ−ＭＳにおいてＭ’　２６０であ
り、Ｕν、　ＩＩ−ＨＭＲ、ｌ″Ｃ−ＮＨＲにおいて標
品である４−チオウリジン（アルドリッチ製）と全く一
致することが確認された。

〔効果〕

本発明により、直接醗酵で４−チオウリジンを得ること
ができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ストレプトミセス属に属し、抗生物質４−チオウリジン
   産生能を有する微生物を培地中で培養して抗生物質４−
   チオウリジンを生成せしめ、得られた培養液から抗生物
   質４−チオウリジンを採取することを特徴とする抗生物
   質４−チオウリジンの製造法