JPH0330687A - 抗腫瘍性物質 ｂｅ―１６４９３ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は医薬の分野で有用であり、さらに詳細には腫瘍
細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮する新規化合物、
その製法及びその用途並びに新規微生物ストレプトミセ
ス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．　）に
関するものである。

従来の技術 癌化学療法の分野においては、プレオマイシン（Ｂｌｅ
ｏｍｙｃｉｎ）及びアドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙ
ｃｉｎ）等の多くの微生物代謝産物を臨床的に応用する
ことが試みられ、また実際に臨床において使用されてい
る．しかしながら、様々な種類の腫瘍に対してその効果
は必ずしも充分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対
する腫瘍細胞の耐性現象が明らかにされるにつれ、その
臨床的応用性は複雑化している［第４７回日本癌学会総
会記事，１２頁〜１５頁（１９８８年）参照〕。

明が解決しようとする課題 このような状況においては、常に新規制癌物質の開発が
臨床上求められている．即ち、既存の制癌物質に対する
耐性を克服する目的であり、また既存の制癌物質が充分
に効果を発揮できない種類の癌に対して有効である物質
が求められている。

課題を解決するための手 本発明者らは、上記の課題を解決すべく、抗腫瘍性物質
について微生物代謝産物を広くスクリーニングした結果
、後記一般式で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示
すことを見い出して本発明を完成した。

で表される新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３又はそ
の薬学的に許容しうる塩、その製造法及びその用途に関
するものである．並びに、本発明はＢＥ−１６４９３を
産生ずる能力を有する新規なストレプトミセス属に属す
る微生物に関するものである。

以下に、本発明に係わる化合物について理化学的な性状
を示す。

ＢＥ−１６４９３の理化学的性状 性状；橙色アモルファス状固体若しくは結晶分子式：Ｃ
，、Ｈう．０．。

元素分析値：理論値炭素６１．９５％，水素５．４７％
実測値炭素６１．８１％、水素５．５０％融点：　１８
０−１８８℃（分解点） マススペクトル：　ＦＡＢマススペクトルを第１図に示
す．　（＋ｌｌ／ｚ　７３８，　Ｍ＋２１１）ＵＶスペ
クトル．メタノール中（３に／ｒｔｄｌ）で測定したＯ
Ｖスペクトルを第２図に示す。

ＩＲスペクトル：　ＫＢｒｉ剤法によるＩＲスペクトル
を第３図に示す。

″１１ーＮＭＲスペクトル，ｄ．ーアセトン中で測定し
た’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）を第４図
に示す。

”　Ｃ−Ｎ？ｌＲスペクトル：ｄ．−アセトン中で測定
した″Ｃ−ＮＭＲスペクトル（７５ＭＨＺ）を第５図に
示す。

溶解性：ベンゼン、ｎ−ヘキサンに溶けにくく、アルカ
リ性の水に溶け、メタノール、アセトン等の有機溶媒に
溶は易い。

酸性、中性、塩基性物質の区別：酸性物質Ｒｆ値：　０
．３６（メルク社製、キーゼルゲル６０Ｆ□。

使用，展開溶媒；クロロホルム／メタノールｌ酢酸（５
：１：０．０６）） 呈色反応二過マンガン酸カリウム反応陽性硫酸反応陽性 ＢＥ−１６４９３の生物学的活性 抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３のマウス実験腫瘍細胞に
対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
で試験を行った，　Ｐ３８８腫瘍細胞に対するｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏの抗腫瘍作用試験は．、試験化合物をまずジメ
チルスルホキシドに溶解したのち、２０％にジメチルス
ルホキシトを含む細胞培養用培地（２０％［）ＭＳＯ−
ＲＰＭ　ｌ−１６４０培地）で逐次希釈し、３ＸＩＯ’
個の腫瘍細胞を含む細胞培養用培地（仔牛血清ｌＯ％含
有ＲＰＭＩ−１６４０培地）２００４に対し２成を加え
た。３７℃で７２時間、５％ＣＯ８下で培養したのち、
コールタ−カウンターにて生存する細胞数をカウントし
、対照群と比較した。その結果、ＢＥ−１６４９３はＰ
３８８腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止作用を示し、　Ｂ
Ｅ−１６４９３の該腫瘍細胞の増殖を５０％阻止する濃
度（ＩＣ，、）はＰ３８８／Ｓ細胞に対して０．９７４
／ｒｄであり、Ｐ３８８／Ｖ細胞に対しては０．７５尾
ｌｄであった。

ここにおいてＰ３８８／Ｓは通常のマウス白血病細胞の
一種であり、Ｐ３８８／Ｖ細胞は制癌物質ビンクリスチ
ンに対して耐性を獲得したＰ３８８白血病細胞である。

上述したように、上記式（りで表される本発明の化合物
は、マウス実験癌細胞に対し、顕著な増殖阻止作用を示
す、従って、本発明は温血補乳動物の腫瘍の治療剤とし
て有用である。

本発明はまた、本発明化合物を抗腫瘍剤とじて使用する
場合、有効量の本発明化合物単独または有効量の本発明
の化合物及び不活性且つ薬学的に許容しろる担体から成
る医薬組成物として使用される。

この医薬組成物は、本発明の化合物と不活性な薬学的担
体とを組み合わせて製造され、各種の処方で経口的、非
経口的若しくは局所的に投与される。適切な組成物の例
としては、錠剤、カプセル、丸剤、粉末、顆粒等の経口
投与用の固形組成物、溶液、サスペンション、エマルジ
ョンのような経口投与用の液体組成物を包含する。また
、使用直前に滅菌水、生理的食塩水若しくは他の注射用
滅菌溶剤に溶解しつる滅菌組成物の形で製造することも
できる。

本発明化合物の薬学的に許容しつる塩の典型例としては
、本発明の化合物に例えば水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウム若しくは炭酸水素ナトリウムのようなアルカリの
当量またはトリエチルアミン若しくは２−アミノエタノ
ールのような有機アミン類を加えることによって形成さ
れるアルカリ付加塩である。

本発明化合物の実際に好ましい投与量は、使用される化
合物の種類、配合された組成物の種類、適用頻度及び治
療すべき特定部位、宿主及び腫瘍によって変化すること
に注意すべきである。−日当りの成人−人当りの投与量
は、経口投与の場合、１０ないし５００ｍｇであり、非
経口投与、好ましくは静脈内注射の場合、１日当り１０
ないし１００ＩＩ＋ｇである。なお、投与回数は投与方
法及び症状により異なるが、１回ないし数回である。

次にＢＥ−１６４９３の製造法について説明する。

本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３の製造に使用す
る微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４
９３を産生ずるものならばいずれでも良いが、例えば以
下の菌学的性状を有する微生物を挙げることができる。

１、形態 ＢＡ１６４９３株は、顕微鏡下で余り伸長しない気菌糸
の先端より２０箇以上の胞子のほぼ直ぐな連鎖を着生し
、輪生枝状のものおよび菌糸の分断は認められない。

胞子の大きさは０．５Ｘ１．０μｍ位の円筒状で、菌核
および胞子のう等の特殊な器官は観察されない。

胞子の表面は平滑である。

２、各種寒天平板培地における培養性状各種寒天平板培
地において２８℃、２１日間培養した結果を第１表に示
す。

（以下余白） ３、生育温度（イースト・麦芽寒天培地、２１日間培養
） １２℃：生育は不良で気菌糸形成せず ２０℃：生育は良好で気菌糸形成せず ２８℃：生育は良好で気菌糸形成せず ３７℃：生育は良好で気菌糸形成せず ４５℃：生育せず ４６生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化　　　　　　　　　　　陰性（グ
ルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの
加水分解　　　　　　　　　陽性（スターチ・無機塩寒
天培地） （３）脱脂粉乳の凝固　　　　　　　　　　　陰性（ス
キムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化　　　　　　　　陰性（ス
キムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成　　　　　　　　陰性（６
）食塩耐性　　　　食塩含有量２％以下で生育（イース
ト・麦芽寒天培地） ５、炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各稲
穂を添加して、２８℃、２１日間培養した。

その結果を第２表に示す。

６、細胞壁組成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸及びグリシンが検出された。

以上の菌学的諸性質により、ＢＡ１６４９３株はストレ
プトミセス属に属する放線菌であることが判明した。

したがって、本発明者らは、ＢＡ１６４９３株をストレ
プトミセス・エスピー・ＢＡ１６４９３（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓｓｐ、　ＢＡ１６４９３）と称することに
した。

なお、本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託されており、その微工研受託番号は微工研菌
寄第１０７５０号（ＦＥＲにＰ−１０７５０）である。

本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３を産生
ずる微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線等の
照射処理、例えばナイトロジェン・マスタード、アザセ
リン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ−メチル−
Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の
変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質
導入又は接合等の通常用いられる菌種変換処理方法によ
り抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３産生菌を変異させた微
生物である。

本発明のＢＥ−１６４９３を製造するにあたり、ＢＥ−
１６４９３の生産菌株ＢＡ１６４９３を栄養源含有培地
に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−１６
４９３を含む培養物が得られる。栄養源としては、放線
菌の栄ａ［として公知のものが使用できる０例えば、炭
素源としては、市販されているブドウ糖、グリセリン、
麦芽糖、デンプン、庶糖、糖蜜又はデキストリンなどが
単独又は混合物として用いられる。

窒素源としては、市販されている大豆粉、コーンステイ
ープリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、魚粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリ
ウムなどが単独又は混合物として用いられる。無機塩と
しては、市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウ
ム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム又は各種リン酸塩
などを使用することができる。その他必要に応じて、鉄
、マンガン又は亜鉛などの重金属塩を微量添加すること
もできる。また、発泡の著しい時には、消泡剤として、
例えば大豆油又は亜麻仁油等の植物油、オクタデカノー
ル等の高級アルコール類、各種シリコン化合物等を適宜
添加しても良い、これらのもの以外でも、該生産菌が利
用し、ＢＥ−１６４９３の生産に役立つものであれば、
いずれも使用することができる。

培養方法としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と
同様に行えばよく、固体培養でも液体培養でもよい、液
体培養の場合は、静置培養、撹拌培養、振盪培養または
通気培養などのいずれを実施してもよいが、特に振盪培
養または深部通気撹拌培養が好ましい、培養温度は２０
℃〜３７℃が適当であるが、２５℃〜３０℃が好ましい
。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は２
４時間〜１９２時間、好ましくは４８時間〜１２０時間
である。

培養物から目的とする本発明のＢＥ−１６４９３を採取
するには、微生物の培養物から採取するのに通常使用さ
れる分離手段が適宜利用される０本発明のＢＥ−１６４
９３は培養濾液中及び菌体中に存在するので、培養濾液
又は菌体より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオ
ン交換樹脂法または吸着若しくは分配クロマトグラフィ
ー法及びゲル濾過法等を唱独又は組合せて行うことによ
り精製できる。また高速液体クロマトグラフィーや薄層
クロマトグラフィーなども抽出精製に利用可能である。

好ましい分離−精製の例としては次の方法が挙げられる
。まず培養濾液を遠心分離し、菌体と培養上清とに分け
る。菌体をメタノールまたはアセトン等の有機溶媒で抽
出し、抽出液を減圧下に濃縮する。濃縮した溶液のｐＨ
を酸性にし、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出して減圧
下にａ縮すれば、ＢＥ−１６４９３を含む粗物質が得ら
れる。得られた粗物質について、シリカゲルのカラムグ
ロマトグラフィーなどを用いて精製を行えば、本発明の
ＢＥ−１６４９３を橙色の結晶状粉末として得る；とが
できる。

吹に実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。

しかしながら、本発明は実施例に限定されるものではな
く、実施例の修飾手段はもちろん、本発明によって明ら
かにされたＢＥ−１６４９３の性状に基づいて、公知の
手段を用いてＢＥ−１６４９３を生産、濃縮。

抽出、１製する方法すべてを包括する。

基層Ｍ 斜面寒天培地に培養した放線菌ＢＡ１６４９３をグリセ
リン２％、麦芽糖蜜１％、肉エキス０．２％、綿実粉０
．５％、酵母エキス０．１％、小麦胚芽０．５％、硫酸
マグネシウム０．２％、塩化ナトリウム０．２％、炭酸
カルシウム０．２％、リン酸−カリウム０．１％、硫酸
アンモニウム０．１％、硫酸第一鉄０．００１％、硫酸
亜鉛Ｏ刀Ｏ１％からなる培地（ｐＨ６，７）１１０成を
含む５００−容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で
７２時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した
。二の培養液を１−ずつ、上記の培地をｌｌｏｍｌ含む
５００威容の三角フラスコ９本に接種し、２８℃で１２
０時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。

培養液（約ＩＱ）を濾過法によって濾過し、得られた菌
体を５００−の脱イオン水で洗浄した後、菌体にメタノ
ールＩＱを加え室温で１時間撹拌した。濾過法によって
メタノール抽出液を得、このメタノール抽出液を約３０
０ｄにまで濃縮した。得られた濃縮液を酢酸エチルＩＱ
を用いて抽出し、酢酸エチル抽出液を得た。

一方、濾過法によって得られた培養濾液９００ｄのｐ）
Ｉを２Ｎ塩酸で約２，５とし、酢酸エチル３Ｑを用いて
抽出し、先に抽出した菌体からの酢酸エチル抽出液と合
わせ、無水硫酸ナトリウムを添加し一晩放置後、減圧下
にｔＩＡ縮し、残渣を少量のｎ−ヘキサンで洗って、Ｂ
Ｅ−１６４９３２，６ｇを含む和物質を得た。得られた
和物質をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（３Ｘ
３０ｃｍ）にかけ、クロロホルムメタノール（１０：　
ｌ　）の混合溶液で展開した後、クロロホルム−メタノ
ール−酢酸（ｔｏ：　１　：０．１）の混合溶媒で溶出
を行ない、ＢＥ−１６４９３を含む画分を減圧下にｆＡ
縮して９５０Ｉｌ１ｇの残渣を得た。シリカゲルのカラ
ムクロマトグラフィー（３Ｘ３０ａｎ）を再度行い、ク
ロロホルム−メタノール−酢酸（２０：　ｌ　：０．１
）の混合溶媒を用いて溶出し、ＢＥ−１６４９３を含む
画分を減圧下ｉ、［１１スルニドｉ：Ｊ：　）Ｊ、ＢＥ
−１６４９３８６０ｍｇ　ヲＭ１色結晶状粉末として得
た。

Ｘ更左塾愚 本発明に記載するＢＥ−１６４９３は、既存の制癌剤に
耐性を有する腫瘍細胞に対しても該制癌剤に耐性を獲得
していない細胞と同程度の増殖阻止効果を有することか
ら、医薬の分野で癌の治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＢＥ−１６４９３のＦＡＢ−マススペクトル
の図である。第２図は、メタノール中におけるＢＥ１６
４９３の紫外部及び可視部の吸収スペクトルの図である
。第３図は、ＢＥ−１６４９３のにＢｒ錠剤法による赤
外吸収スペクトルの図である。第４図は、ＢＥ−１６４
９３のｄ、−アセトン中における３００ＭＨｚ　’１１
−ＮＭＲスペクトルの図である。第５図は、ＢＥ−１６
４９３のｄ、−アセトン中における７５ＭＨｚ　”Ｃ−
ＮＭＲスペクトルの図である。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３又はその薬学
   的に許容しうる塩。
2. （２）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３又はその薬学
   的に許容しうる塩を有効成分とする抗腫瘍剤。
3. （３）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３又はその薬学
   的に許容しうる塩の製造に際し、抗腫瘍性物質ＢＥ−１
   ６４９３を産生する微生物又はその変異株を培養して抗
   腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３を蓄積させ、採取すること
   を特徴とする製法。
4. （４）ストレプトミセス・エスピーＢＡ１６４９３（Ｓ
   ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＢＡ１６４９３）株又は
   その変異株を培養することを特徴とする第３請求項記載
   の製法。
5. （５）抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３を産生する能力を
   有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
   属に属する微生物又はその変異株。
6. （６）抗腫瘍性物質ＢＥ−１６４９３を産生する能力を
   有する微生物がストレプトミセス・エスピーＢＡ１６４
   ９３であることを特徴とする第５請求項記載の微生物又
   はその変異株。