JPH03503894A

JPH03503894A - オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート

Info

Publication number: JPH03503894A
Application number: JP1503898A
Authority: JP
Inventors: ヘクト　シドニイ　エム．
Original assignee: ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション
Priority date: 1988-03-25
Filing date: 1989-03-22
Publication date: 1991-08-29
Also published as: EP0406309A1; EP0406309A4; US5519126A; WO1989009221A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】オリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデート技術分野本発明は、ポリヌクレオチド、たとえばＤＮＡまたはＲＮＡと結合する能力のある物質に関するものである。

背景となる技術細胞膜を横切って輸送することができ、生体内の分解に対して抵抗性があり、細胞外部および細胞内部でポリヌクレオチド（ＤＮＡとＲＮＡの両方）を選択的に結合することのできる一類の化合物が要望されている。そのような化合物は、ＤＮＡまたはＲＮＡレベルで生化学的に介入することによって、病気と闘うのに有用であろう。

発明の開示したがって、細胞膜を横切って輸送することのできる一類の化合物を提供することが本発明の目的である。

生体内の分野に対して抵抗性のある一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ポリヌクレオチド標的を選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ＤＮＡ標的を選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ＲＮＡ標的を選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

生体内でポリヌクレオチド標的を選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

生体内でＤＮＡを選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

生体内でＲＮＡを選択的に強固に結合することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

生体内でＤＮＡを選択的に中和することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

生体内でＲＮＡを選択的に中和することのできる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ＤＮＡレベルで生化学的に介入することによって病気と闘うことができる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ＲＮＡレベルで生化学的に介入することによって病気と闘うことができる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

ウィルス性の病気と闘うことができる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

遺伝子に基づく病気と闘うことができる一類の化合物を提供することが本発明のもう１つの目的である。

本発明のこれらの目的および以下に与えられている本発明の説明から明らかになるその他のことが、いま驚くべきことに、式（Ｉ）のつぎの新規な類の化合物またはその塩を本発明者が発見したことにより、満足されることが発見された。

Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ：　Ｃ＋−＋ｓの飽和または不飽和アシル；Ｃ１１９のエーテル；Ｃ１−１９のアセタール＋Ｃｌ−１５の直鎮。

分岐または環状の飽和または不飽和アルキル；ホスフェート；あるいはサルフェートで、上記Ｒ１とＲ２が炭素含有基である場合は、該炭素含有基は、ハロゲン原子（すなわち、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）、１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基、ホスフェート基、サルフェート基、チオ基、各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイド、アミノ基、ニトロ基、カルボキシル基および複素環式置換基、すなわち、少なくとも１個の窒素、酸素および／または硫黄原子を含む４〜１６員環または二環式化合物からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されていてもよい。炭素含有基であるＲ１またはＲ２のいずれも、１個のカルボニル官能性によって中断されたＣ１−６のアルキル置換基またはアルデヒド基を末端としたＣ１−６のアルキル置換基で置換することができ、あるいはＲ１とＲ２のいずれの基も、それ自身、アルデヒド基を末端とすることができる。

Ｒ１およびＲ２はまた、それぞれ独立して、“古典的な”メカニズムによるＤＮＡまたはＲＮＡの結合を促進したりコントロールしたりする置換基であることができる。したがって、Ｒ’　とＲ２は、ポリアミンまたはポリピロールであることができるしくたとえば、Ｇｏｏｄｌｌｌｅｊ　１１．、　　Ｊ、Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、、　　マｏｆ、　２９．　ｐｔｌ、　　７２７−７３３　（１９８６）　；＾ｇｍｌＢ、　Ｍ盾Pｅｃ。

ａｎｄ　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、ｖｏｌ、４３．　ｐｐ、　１６７−１８１　（１９８２）；またはＦｅ１Ｈ＋ｎ。

１、Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｗ、、ｖｏｌ、２７．　　ｉｐ、　　４５Ｇ−４６５（１９８４）を見よ）、あるいは、ここで参考文献に組入れられている注記参考文献で定義されているインターカレーター（挿入基）であることができる（たとえば、Ｇ、　Ｄｏｕｇｈｅ＋４７　＆　Ｊ、Ｒ，Ｔｉ１ｂｒｏｖ、　　ｌｎｌ’ｌ　Ｊ、　　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、ｗｏｌ、Ｉ６゜ｐ、１１７９　（１９８４）を見よ）。

Ｂ１およびＢ２は、上記化合物中のいかなる他の基ＢｌまたはＢ２からも独立して、ＤＮＡまたはＲＮＡと水素結合をすることのできるアデニン、ウラシル、グアニン、シトシンまたはチミン土族のようなプリンまたはピリミジン、あるいはいずれかの他の複素環式半旗である。そのような複素環式半旗の例として、ヒポキサンチン、キサンチン、６−チオグアニン、プリン、６−チオプリン、ピリミジン、２−チオウラシル、４−チオウラシルおよびフーグスティーン型塩基対や塩基三重体だけでなく、ＲＮＡやＤＮＡの構成塩基とワトソン・クリック型塩基対を形成することができるその他の複素環が含まれる。

Ｘは、上記化合物中のいかなる他の基Ｘからも独立して、基ＮＲ’　Ｒ’または基Ｒ５である。

Ｒ３およびＲ４は、それぞれ化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、水素原子または直鎖、環状、分岐の飽和または不飽和であることができるＣ　ｌ−１６のアルキル基である。これらの基Ｒ３およびＲ４は、いずれも、置換されていないか、あるいはノ１０ゲン原子（すなわち、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）、１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基、ホスフェート基、サルフェート基、チオ基、各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイド、アミノ基、ニトロ基、カルボキシル基および複素環式置換基、すなわち、少な（とも１個の窒素、酸素および／または硫黄原子を含む４〜１６員環または二環式化合物からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されることができる。これらの基Ｒ３およびＲ４はまた、カルボニル官能性によって中断した少なくとも１つのＣ，−６アルキル基によって置換することができ、またそれらはアルデヒド官能性を末端とした少なくとも１個のＣ１−６アルキル基で置換することができ、あるいはＲ３とＲ４のいずれの基も、アルデヒド基を末端とすることができる。Ｒ３およびＲ′の例として、オクチル、デシル、ペンタデシル、１０−シクロペンチルデシル、あるいはフェニル、チオフェン、ピロール、フラン、アルデヒド、ケト、チオ、アミノまたはイミノ基あるいは二重結合を含むこれらのものの誘導体が含まれる。

Ｒ３およびＲ４はまた、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、Ｈ；Ｃｌ−＋６の直鎖、分岐または環状の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン、フェニル、チオフェン、フラン、ピロール、ケト基、アルデヒド基、チオール基、アミノ基、イミノ基、二重結合、三重結合、酸素原子および硫黄原子からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーを含むＣ１−１６の直鎖、分岐、または環状の飽和または不飽和アルキルであることができる。

Ｒ３およびＲ４は、それぞれ化合物中のいかなる他の基Ｒ３またはＲ４からも独立して、直鎖、環状、分岐、飽和または不飽和であることができ、ハロアル牛ル置換基のハロゲン原子がフッ素、塩素、臭素またはヨウ素であるＣｌ−１６のハロアルキル基、たとえばモノ、ジおよびトリクロロデシル、モノ、ジおよびトリブロモオクチルおよびモノまたはジトリヨードデシル、Ｃｌ−１６のエーテルあるいはＣｌ−１６のチオエーテルであることができる。

また、本発明の範囲内に含まれているのは、Ｒ３とＲ４がそれぞれ独立して、プローブ分子によりポリヌクレオチド結合をさらに増加したりコントロールすることのできる付録として更けられた置換基を含む基ＮＲ’　Ｒ’である。

Ｒ５は、分子中のいかなる他の基Ｒ５からも独立して、直鎖、環状、分岐、飽和または不飽和であることのできるＣ　２−２０のアルキル基である。これらの基Ｒ５のいずれの１つも、ハロゲン原子（すなわち、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）、１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基、ホスフェート基、サルフェート基、チオ基、各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイド基、アミノ基、ニトロ基、カルボキシル基および複素環式置換基、すなわち少なくとも１つの窒素、酸素および／または硫黄原子を含む４〜１６員環または二環式化合物からなる群から選ばれた少なくとも１−）のメンバーによって置換することができる。これらの基Ｒ５のいずれも、１つのカルボニル官能性によって中断したＣ　ｌ−１６のアルキル置換基によってさらに置換することができ、またそれらはアルデヒド官能性を末端としたＣ１−６のアルキル置換基で置換することができ、あるいはこれらの基Ｒ５のいずれの１つもアルデヒド官能基を末端とすることができる。加えて、Ｒ′は本文書で与えられているＲ′とＲ４の定義と一致したどのような基であることもできる。

Ｘはまた、いかなる他の基Ｘからも独立して一〇　　（Ｃ２−Ｉ６アルキル）または−Ｓ　　（Ｃ２−１６アルキル）であることができる。置換基の例として、Ｎ−オクチルチオ、Ｎ−ブチルオキシ、５−シス−オクテニルチオ、１０−フェニル−デシルオキシなどが含まれる。

本発明の化合物は、（１）いずれの１つの基ＮＲ’　Ｒ’においても、１つの基Ｒ″またはＲ４だけしか水素であることができない、およびＣＣＩ　ｓ　、−ＱＣ（ＣＨ３）２　ＣＣＩ　３、　Ｎ　ＨＣＨ２ＣＨ２Ｎ　Ｈ２、−ＮＨ，および −〇〇Ｈ２ＣＣ１５からなる群から選ばれた基であるならば、化合物は少なくとも２個の事なる基Ｘをもつという前提のもとに、上に定義されたものである。薬剤組成および本発明の化合物の使用においては、（２）は適用しない。

Ｚは分子中のいかなる他の基２からも独立して、ＨＳＯＨまたはＳＨである。ｎ、　ｍおよびｐは、それぞれ独立して、１〜２０の整数である。ｎ、　ｍおよびｐの合計は≦２０である。

図面の簡単な説明本発明とその利点の多くのより完全な認識は、つぎの詳細な説明を参照し、付随する図面と関連して考察するとき、それがよりよく理解されるようになるにつれて、得られるであろう。

第１図はジアステレオマーのジヌクレオシドｎ−オクチルホスホラミデート（１９ａ）の分離を示す。ジアステレオマーの混合物を２５×４、６ａｎのＡ１１ｆｓｃｈ　Ｃ，８カラム（ｌＤμ）に入れ、１．０ｍｌ／ｗｉｎの流速で、０．１Ｎギ酸アンモニウム中の３５％ＣＨ３０Ｎで洗浄した。カラムは２５４ｎｍで監視した。

第２図は、逆相ＨＰＬＣでのジアステレオマーのＤＭＴ　ｒ　−２２の分離を示す。ジアステレオマー混合物を２５Ｘ　１．ＯａｎのＣ１８カラム（１０μ）で分離用として分離し、ｐＨ６，９，６ｍｌ／ｗｉｎの流速で、０．０２Ｎ酢酸トリエチルアンモニウム中の３５％ＣＨｉ　ＣＮで洗浄した。

第３図は、２５℃、Ｏ，’ＯＩＭ　トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７，５）−０，０１ＭＭｇＣｊ！、中のｄ　（ＡｐＡ）（−−−−−−−−−）　、ｄＡｐ　（ＮＭｅ２）ｄＡ　（＋９ｆ）（−）およびｄ　Ａ　ｐ　（Ｎ　ＨＣａ　Ｈｌ）　ｄ　Ａ　（旦）（□）の円偏光スペクトルを与えるものである。ヌクレオチド第４図は、２５℃、Ｏ，ｆｌｌＭ　トリス−ＨＣｌ　　（ｐＨ，７，５）　−０，０１ＭＭｇＣ１２中のｄ　（Ａ　ｐ　Ａ　ｐ　Ａ）　　（−）およびｄ　（ＡＩ）（ＮＨＣ１２Ｈ２５）ＡｐＡ　（）の円偏光スペトルを与えるものである。ヌクレオチドの濃度は６　Ｘ　１０−’Ｍであった。

第５図は、ジヌクレオシドｎ−ブチルホスホラミデート１９ｃとポリ（チミジル酸）の混合外観図を与えるものである。コンプレックスは、１０ｍＭのＭｇＣＪ、を含むＰＨ７，５のＩＯｍＭ）リスーＨＣＡ’中で形成した。匹とポリ（Ｔ）の等モル原液（ヌクレオチド濃度６　ｘ　１０−’Ｍ）を種々の比率で混合し、０℃で平衡に達せしめた後、Ａ２ｂｏを記録した。

本発明を実施する最良の方式本発明のオリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートは上に与えた構造すなわち式ＣＩ）をもつ化合物である。この式において、２はＨ，ＯＨまたはＳＨである。Ｚ＝ＯＨであるとき、（１）より安定な二重体、（２）糖の縮み／立体配座の変化、（３）ある種の反応を促進してポリヌクレオチドの鎖を切断する一般塩基、および（４）他の化学基、たとえば核酸開裂物や結合佐剤を付録として付けることのできる基が得られる。しかしながらＺ−ＯＨの場合には、また、化学的および酵素的な安定性が減少する。

分子中の基Ｚは、すべて同じであるか、それぞれ独立して、Ｈ９ＯＨおよびＳＨの群から１選ぶことができる。化合物が１つまたはそれ以上の基Ｚ＝ＯＨをもち、残りの変数ＺがＨである場合には、つぎの利点を有するプローブが得られる＝（１）標的ＲＮＡまたはＤＮＡを結合したり分解することのできる構造的な佐剤の封入が促進される、（２）薬剤動力学的な挙動を高めるプローブの反転も促進される。

変数のｎ、　ｍおよびｐは、それぞれ化合物中のいかなる他の変数のｍおよびｐから独立して、変数ｎ、　ｍおよびｐの合計が２０を越えないという条件付きで、１〜２０の整数である。

より短いプローブ、すなわちｎＳｍおよびｐの合計が８〜１２の範囲に入るプローブは、標的が単鎖であり生化学的に接近が可能であったり、結合選択性が絶対的に決定的でなかったり、標的の破壊が治療上十分である多くの場合に使用することができる。これらのタイプのプローブは、たとえば抗ウイルス性の治療に用いることができる。

より大きなプローブ、すなわち変数ｎ、ｍおよびｐの合計が１２またはそれより大きいプローブは、接近／選択性の問題によるヒトのゲノム内切開の場合に必要である。

本発明の化合物は、ＤＮＡかＲＮＡの特異なセグメントとコンプレックスをつくるように設計することができる。本発明の１つの態様においては、変数Ｂ１とＢ２をアデニン、チミン（ウラシル）、グアニンおよびシトシンから選ぶことによって、ＤＮＡと選択的に結合するよう、本発明の化合物を設計することができる。

本発明は、ＤＮＡまたはＲＮＡ親和性の包括的な配列中立形を述べるものであり、また親和性を高めるために、他の結合佐剤もプローブ分子の構造内に含ませるものであることを認識しなければならない。

とくに興味があるのは、挿入剤（たとえば、エチジウム、エチジウム、プロフラビン）、溝結合剤（ジスタマイシン、ネトロブシン、ピロロベンゾジアゼピン）および静電的結合剤（スペルミン、スペルミジン、アグマチン）のような結合佐剤や、特別な水素結合性をもち、プローブ標的の相互作用の調節を可能とする変性複素環（たとえば、キサンチン、６−チオグアニン、プリン）を含むプローブである。

本発明によって提供されるオリゴヌクレオチドは、ワトソン・クリック、フーグスティーンあるいは塩基三重相互作用を経て、それらの標的と会合し、結合佐剤（ここで定義したＮ−アルキル置換基の形の）はこの親和性の固有の源を増すであろう。結合それ自体は、標的のオリゴヌクレオチドを生化学的に機能不全とするか、あるいは細胞ヌクレアーゼ（たとえば、リボヌクレアーゼＨ）による破壊に対して標的に“標識”をつける。

式（Ｉ）中の変数Ｘは、基ＮＲ’　Ｒ’または基Ｒ５である。これらの基のいずれかがアルキル基である場合は、この定義は、直鎖、環状、分岐、飽和または不飽和であることのできる単なる炭化水素基を含むことを意図している。これらの基はまた、少なくとも１個の塩素、臭素またはヨウ素原子でハロゲン化されていてもよく、また１〜１６の炭素原子を含むこの基は、酸素原子、硫黄原子またはそれらの組合せによって中断されていてもよい。

いずれかの基Ｒ３，１ｌｊ４もしくはＲ５が不飽和炭化水素である場合、これらの不飽和炭化水素にはアルケンとアルキンが含まれる。アルケンは、トランスアルケンと混合シス／トランスアルケンも用いることができるが、好ましくはシスアルケンである。

本発明の好ましい態様においては、化合物は、１個のプローブ分子中にわずかに３個のホスホラミデート基を含むだけであり、これらすべてのホスホラミデート基は同じであっても異なっていてもよい。ホスホラミデートの構造は、分子内で一様に間隔をあてけいてもよく、あるいは分子の真中とその一方の端に位置することができる。

本発明の化合物は、既知のいかなる投与経路を経ても投与することができる。たとえば、それらは、溶液にして静脈内または筋肉内に投与することができる。それらは、エロゾールまたは点滴薬として鼻腔内に投与することができ、また、たとえばリポソームまたは微小粒子あるいは座薬として担体とともに投与することができる。これらの化合物は、治療終点に達するまで、１回の投与当り５０■までの量で患者に投与する。

本発明のプローブは、病気を起す各種病原体の標的伝令ＲＮＡに使用することができる。これらの病原体は、細菌、ウィルスまたは原生動物性の感染性病原体であることができる。ウィルス性病原体にはエイズ、インフルエンザまたはヘルペスが含まれ、原生動物性病原体には、たとえば、トリパノソーマ属の毛虫やマラリアが含まれる。

本発明によって提供される化合物は、標的遺伝病にも用いることができる。それらは、このような遺伝病の原因となるＤＮＡを標的にしたり、あるいは遺伝子の発現を閉そく／規制するＤＮＡまたはＲＮＡの領域をコントロールするのに用いることができる。

本発明の化合物は、遊離の形態あるいは周知の生理学的に許容される塩のどのようなものとしても存在することができる。これらの塩類には治療上一般に用いられている１価および２価のカチオン、たとえばナトリム、カリウム、カルシウム、リチウムおよびマグネシウム塩、ならびにポリアミン塩のようなアルキルアミン塩が含まれる。

本発明のオリゴヌクレオチドアルキルホスホラミデートは自動化した固相合成によってつくることができる。これらのオリゴヌクレオチドの各々に対し、逆相ｈｐｊ！ｃによってジアステレオマ一種を分離することが一般に可能である。個々の異性体はそれらの相補的ポリヌクレオチドと結合するが、いくぶん違った親和性によって結合する。

ヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデートは二、三の異なる操作によって調製できるが、好ましくはＮｅｌ１ｌｅ＋　＆　０ｇ１ｌｖｉｅ　（１９８０）の観察を利用するのが望ましく、かれらは、アルキルアミンの存在でヨウ素による中間体のジヌクレオシドトリクロロエチルホスファイトの酸化が、必要なＮ−アルキルホスホラミデート結合を確立することを立証している。図式■に示されているように、保護されたジヌクレオシド〇−メチルホスファイトをアルキルアミンで処理すると、希望する（保護された）ジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート誘導体が中程度もしくは良好な収率で得られ、容易に脱保護されて希望のジヌクレオシドＮ−ホスホラミデートを与えることができた。

オリゴヌクレオドＮ−アルキルホスホラミデートはまた、固相合成によって接近することができる。これはＭｘＨｅｕｃｃｉ　＆　ＣａｒＩＩｔｈｅｒｓ（１９８１）の方法の改変によって達せられるが、それにはＮ−アルキルホスホラミデート結合が導入されることになる共役サイクルの酸化段階において、Ｉ２−Ｈ，０を■２−アルキルアミンで置換することが含まれていた。

本発明の他の特徴は、発明の実例を与えるものでそれを制限する意図ではないつぎの例証態様の説明の過程で明らかになるであろう。以下の討論において、本発明者は、自分の新規な化合物が作用することをどのように理解したらよいかということについて、もっともらしい理論的な説明を与える。これらの説明は、本発明をどのようなふうにも制限するために与えるのではなく、単に読者の利益のために与えるものである。

下に与えられている実施例の項において、本発明者は、オリゴヌクレオチドＮ− アルキルホスホラミデートの調製について二、三の異なる方法を討議し、これらを直接比較した。保護されたヌクレオシドホスファイトを構築閉塞物として使用することを含むこれらのうちの１つは、適切なアルキルアミンの存在で、中間体のジヌクレオシドメチルホスファイトをヨウ素で酸化することを経て、必要なＮ −アルキルホスホラミデートを与えた。

この方法は、ＤＮＡの合成に用いられるものと同じ構築閉塞物を使用し、また溶液および固相法によってオリゴヌクレオチドを段階的に合成するのに用いる操作および機器と両立できることを含む若干の魅力ある特徴をもっていることが認められた。この方法を用いて、デオキシアデノシンとチミジンから誘導される若干のジ、トリおよびテトラヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートをつくった。アルキル置換基には、Ｎ、Ｎ−ジメチル、Ｎ−ブチル、Ｎ−オクチル、Ｎ−ドデシルおよびＮ−（５−アミノペンチル）を用いた。このような誘導体のアルキルホスホラミデート半農に挿入剤を導入することの可能性を立証するため、Ｔｐ　Ｔ　（２４）のアミノアルキル誘導体を用いた。

オリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートはその成分ジアステレオマーに分離し、円偏光、高界磁’Ｈ−ＮＭＲ分光法、ＦＡＢ質量分光測定法および酵素消化を含む多数の技法によって、標準のヌクレオシドおよびヌクレオチドに対し、構造的に特性評価を行った。

二、三のジおよびトリヌクレオチドアルキルホスホラミデートの物理学的特性評価により、アデニンヌクレオチド類似体は、ポリ（チミジル酸）と安定なコンプレックスを形成することが明らかになった。

これらのコンプレックスの安定性は、Ｎ−アルキルホスホラミデート置換基換基の鎖長が増すにつれて増大することが認められた。Ｎ−アルキルホスホラミデート置換基は、ある種のオリゴヌクレオチドがそれらの相補ポリヌクレオチドと結合するのを高め、ポリヌクレオチド親和性の新規な源を提供する。

本発明は、一部、新規な原理によって作用するポリヌクレオチド結合佐剤の発見によるものである。本発明者は、既知のタイプのＤＮＡ結合剤（挿入物、溝結合剤、ポリカチオン）に加えて、配列中立の様式で、良好な親和性をもって、ＤＮＡまたはＲＮＡと会合する多数の高度に親油性の天然物があることを見出した。

思うに、この親和性の源は、ＤＮＡまたはＲＮ　Ａ二重体の内部が、溶解したＤＮＡまたはＲＮＡを含む水溶液のもっとも親油的な成分である、という事実から引き出されるのであろう。そのときには、親油性分子とこのＤＮＡ水溶液の混合物は、親油性のプローブがＤＮＡのもっとも親油性の部分と会合するという結果になるものと思われる。

この原理を、ついで、タイプ■のジヌクレオチド、すなわちＬｅｔｓｉｎｇｅｒ −３ｃｈｏｔｌジヌクレオチド１の類似体の調製に拡張した。

式中Ｂ＝アデニンまたはチミン、Ｒ＝Ｃ４Ｈｓ　、Ｃｓ　Ｈ１７またはると、興味ある結果が得られた。第１表に示すように、アルキル基が存在すると、Ｔ１１（すなわち、溶融温度）値が上昇する結果となった。

Ｔｍの上昇の度合は、また、アルキル置換基の長さに比例した。ＴＩＩが上昇することの観察は、アルキル基としてよりもむしろ挿入物を含むオリゴヌクレオチドホスホラミデートに対しても行われている（Ｌｅｌｓｉｎｇｅｒ＆　５ｃｈｏ＋ｔ、　１９８１；Ａｓ５ｅｌｉｎｅ　ｅｌ　ａｌ、、１９８４；Ｈｅ１ｅｎｅ　ｅＩａｔ、。

１９８５）。これが、本発明の親油性アルキルホスホラミデート基がポリＴへのこれらのオリゴヌクレオチドの結合を促進したということを明示している。

第１表　下記化合物へのポリＴの結合０−　　　　　　　　　７−９　　　　　　３Ｏ−３６ＮＨ（ＣＨ２）　ｓ　ＣＨ３１７，１２”　　　　　４８．４２８ＮＨ（ＣＨ２）　ｎｃＨｓ　　　　　２０”　　　　　　　３０”（Ｊ）　Ｉｓ％Ｍｅ　ＯＨの存在下研究したジヌクレオチドのあるものについて、淡色効果値も第１表に示した。親和性の増加は塩基の積み重ねの増加（従って、淡色効果の増加）と相関するという挿入物で代表的に得られた結果と異なり、ジヌクレオチド旦は淡色効果％の最適値を示した。このことは、アルキル鎖がある一定の大きさを越えて伸張するにつれて、形成された二重体が親油性のアルキル基によって無秩序になることを反映している。

二重体をそれらのワトソン・クリック相補配列によって安定化するそれらの能力はさておき、本発明によって与えられるヌクレオチドホスホラミデートは、つぎのような２つの追加的な重要な特徴をもっていることが認められた。それらは驚くほど親油性で、細胞膜を横切ってそれらが輸送されることを可能にし、またそれらはホスホラミデート結合のところでの加液酸分解に対して不応性である。

変性ホスホジエステル結合を含むオリゴヌクレオチドの調製は、配列特異性の核酸プローブの源として、現在興味がもたれている（Ｍｉｌｌｅ＋　ｅｌ　ｘｌ、、１９８１；ＬｅＨｉＢｅｒ　＆　５ｃｈａＨ，１９８１；Ａｓ５ｅｌｉｎｅ　ｅｌｌｌ、、　１９８４；Ｃｈｏ　＆　０ｒｉｅｌ、　１９８５；Ｄ＋ｅ７ｅｒ＆　Ｄｅｒｖｓｎ、　１９８５；Ｔｂｕｏｎｌ　ｅｔ　＊１．。

１９Ｂ？）。ヌクレオシドホスホラマイトは、３価および５価の亜リン酸中間体を含む二、三の操作によって以前に調製されている。これらの中には、アルキルアミンの存在におけるヨウ素による中間体のヌクレオシドホスファイト（Ｎｅａｒｅｒ　＆　０ｇ１ｌｖｉｅ、　１９８０　ｓ、　ｂ）またはヌクレオシドＨ− ホスホネートジエステル（Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、　１９８６）の酸化だけでなく、トリフェニルホスフィン−ＣＣ１４の存在におけるヌクキレオシドホスフェートジエステルとアミンの縮合（＾ｐｐｅｌ、　１９７５；Ｓｆ！ｃ、　１９８３）　、アルキルアミンによるヌクレオシドホスフェートトリエステルの求核置換（Ｍｅ７ｅｒ　ｅｌ　ｓｌ、、１９７３；Ｊｗｏｄｋ＊　＆　Ｓｓ目、　１９７４；ＬｔｊｓｉＢｔｒ　ｃｔ　ｔｌ、、　１９８６）−、ホスファイトへのアルキルおよびアリールアジドの付加（Ｃｒｘｍｔｒ　ｅｌ　ｔｌ、、１９７２；ＬｅｔｓｉＢｅｒ　＆　５ｃｈｏｔｔ、１９８１）が含まれている。

溶液および固相の両方法によってオリゴヌクレオチドホスホラマイトを調製するためのこのような形質転換を説明する実験を以下に述べる。また、生成したジアステレオマーのクロマトグラフィによる分割と分析、ならびにスペクトルおよび分解法によるそれらの分析についても述べた。

一連のジアデノシンＮ−アルキルホスホラミデートとポリ（チミジル酸）との会合は、会合の化学量論の決定だけでな（、Ｔｍや淡色効果値の測定によって特性評価した。これらの測定によって、Ｎ−アルキル基がジアデノシンＮ−アルキルホスホラミデート誘導体のポリＴへの結合を促進し、その親和性はアルキル鎖長の増加とともに増すことが示された。配列特異性の核酸プローブの設計に対するこの新規な親和性の源の意味を論じている。

オリゴデオキシヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデートの調製に利用できる二、三の方法の直接比較はなされていないので、研究は二、三の有望な方法の比較から始めた。

トリフェニルホスフィン−〇〇ｉａの存在におけるヌクレオシドホスフェートジエステルとアミンの縮合（Ａｐｐｃｌ、　＋９７５）は、以前に、ヌクレオシドホスホラニリデート誘導体の調製に用いられており（Ｓｔｅｃ、　１９８３　）　、希望の生成物が中程度の収率で得られている。デオキシヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデートの合成に対するこの方法の適用は、完全に保護されたチミジリル（３′→５′）−図式Ｉ：試薬：　（ａ）Ｃ６Ｈ５ＳＨ，Ｅｌ　、Ｎ、　　ジオキサン；（ｂ）（Ｃ，Ｈ，）、Ｐ、ＣＣｌ４　；（Ｃ）ｎ−Ｃａ　Ｈ９ＮＨ２；（ｄ）ｔ−Ｃａ　　Ｈ９ＮＨ２、ＣＨｖ　　ＯＨ。

スをＣＨ，ＣＮ−ピリジン中で〜３当量のトリフェニルホスフィン−ＣＣ１４で連続的に処理し、ついで過剰のｎ−ブチルアミンで処理すると、２４％の単離収率でジヌクレオシドｎ−ブチルホスホラミデート旦が得られた。ユおよびその脱ベンゾイル誘導体まの構造は、シリカゲルＴＬＣ上のそれぞれの挙動、ならびに測定したＵＶおよび高界磁’Ｈ−ＮＭＲスペクトルと一致していた（第■表）。

第■表　ジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート１７ａ、調製法についての実験操作を見よ。

ｂ、シリカゲルＴ　Ｌ　Ｃ，５：　Ｉ　ＣＨ２ＣＩ　２　　ＣＨｉ　ＯＨで展開。

ｃ、　Ｎ、　Ｎ−ジメチルホスホラミデート誘導体。

ジヌクレオシドｎ−ブチルホスホラミデート４はまた、ＩＪａＮｅｕｃｃｉ　＆　Ｃｕｕｌｈｅｒｓ（１９８］）の方法を改変して、ポリマー支持体上で合成した（図式■）。

図式■：試薬：　（１）Ｃ６Ｈ，ＳＨ，Ｅｌ　、Ｎ、　　ジオキサン；（ｂ）（Ｃ６Ｈｓ　　）ｓ　　Ｐ、　　ＣＣ１ａ　　；　　（Ｃ）　　ｎ　　　Ｃａ　　Ｈｇ　　ＮＨ２；　　（ｄ）ｔ　　　Ｃ４Ｈ９ＮＨ２、ＣＨ３０Ｈられ、すべての点で、液相合成によって得られた生成物と同一であドで処理（２５℃、４日）することを経るヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデートの調製も研究した（図式■）。

８ａＲ，日’＝）４ｂ日＝Ｈ，日’　−ＣＩｃ　　Ｒ，日’−ａ図式■ それぞれフェニルおよび４−クロロフェニルホスファイトを含むに、５４％の収率で希望のヌクレオシドｎ−へキシルホスホラマイトｃｈｏｐ（１９ｇ１）が報告しているのと酷似した形質転換も研究した（図式■）。

Ｃ図式■ 驚くべきことではないが、この反応はきわめて容易に進行し、２５℃、２日後に６８％の単離収率で化合物１１を与えた。

アルキルアミンの存在で中間体のジヌクレオシドトリクロロエチルホスファイトをヨウ素で酸化することを含むＮｅｗｅｒ　＆　０ｇ１ｌマｉ！（１９Ｎ）の報告になる操作は、酸化が迅速で本質的に定量的であるため、とくに魅力的であるように思われ、また報告されている条件は、固相合成への適合に敏感に反応するように思われた。この操作によるＮ−アルキルホスホラミデートの生成には、もとのホスファイト置換基の１つを失うことが含まれるに違いないので、この段階が選択的に進行する度合を最初に決定しようとした。そこで、デオキシヌクレオシド３′−ホスファイト１２を調製し、乾燥したテトラヒドロフラン−ｎ−ブチルアミン中でわずかに過剰のヨウ素で処理した。

反応混合物を精密に検査すると、エチル５’　−Ｄ−（ジメトキシトリチル）チミジン−３’−（Ｎ−ｎ−ブチル）ホスホラミデート−が４５％の単離収率で得られ、きわめて少量（〈１０％）の推定０−メチル類似体１４を検出することができた（図式■）。

クレオチドＮ−アルキルホスホラミデートをうまく与えることを示唆した。さらに固相オリゴヌクレオチド合成中のホスフェートエステルにはＯ−メチルの保護がしばしば用いられているので（Ｍａｕｅｕｃｃｉ＆　Ｃａ＋ｕｌｂｅｔｓ、　１９８１）　、そのような図式で構築閉塞物として用いられる保護されたヌクレオシド３°′−（０−メチル）、Ｎ、Ｎ−ジ・ｆソプロピルアミン）−ホスホラミダイトは、ホスフェートエステルとホスホラミデート結合の両方の前駆体として、もしかすると使用できるかも知れない。

図式（ＶＩ）で概括したように、２種の異なるジヌクレオシドローメチルホスファイトを調製し、おのおのを１２の存在で二、三の異なるアルキルアミンで処理した。

図式（■）：試薬；（１）テトラゾール、　　ＣＨ）　ＣＮ　；　（ｂ）　　Ｉ　２　。

Ｒ’　　ＮＨ２，ＴＨＦ；（ｃ）　　ｔ−Ｃ４Ｈ，ＮＨ２，ＣＨ，ＯＨ，４５℃ ；結果として得られた完全保護のジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート（３，１７ａ〜１７ｆ）は、シリカゲル上のクロマトグラフィによって精製し、それぞれの収率（４８〜８７％）を第■表に示した。連続的に脱ベンゾイル化（ｔ−Ｂｕ　ＮＨ２、ＣＨ３０Ｈ）および脱トリチル化（８０％ＣＨ，Ｃ０ＯＨ水溶液）すると、上記の第■表に示すように、それぞれのジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート１９ａ〜１９ｇが単離収率５８〜Ｉｎ％で得られた。

生成物は、ＵＶおよび３６０ＭＨｘ　’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルだけでなく、シリカゲルＴＬＣと逆相ＨＰＬＣで特性評価を行つた（下記の第１表および第■表を見よ）。

ジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート１９ａ　、　１９ｂおよび子イオン（正および負イオン；グリセロールマトリックス）の出現によっても特性評価した。トリチル化し脱保護したジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート（それぞれ、１８と１９）は、逆相ＨＰＬＣ（ＣＨｌ　ＣＮ−Ｈ２０混合物）によって、はぼ同量に存在する２つの成分に分離することができた（たとえば、第１図を見よ）。それぞれの場合、構成成分の高界磁’　Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ジアステレオマーとしての定式化と一致した。ある場合には、相補単鎖核酸と会合する能力について、２つのジアステレオマーを別々に評価した（下記参照）。

オリゴデオキシヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートの労作に対するこの取組み方の適用を評価するために、固相合成によって二、三の異なるテトラヌクレオチドを調製した。これらはいずれも２つの末端の位置のうちの１つに、単一のＮ−アルキルホスホラミデート結合を含んでいた。オリゴヌクレオチドの合成は、アルキルホスホラミデート結合の導入を、共役サイクルの酸化段階で、Ｌ− Ｈ２Ｏを■２−アルキルアミン処理に置き替えることによって遂行したという点を除いて、ＭｘＮｅｕｃｃｉ　＆　Ｃｕｕｔｈｅｒｓ（１９８１）の方法によって行った。部分的な閉塞解除とカラム（ｔ−ブチルアミン−ＣＨ，ＯＨ）からの除去につづいて、トリチル化したテトラヌクレオチドを、ｃｐｓ逆相カラムで、分離用ＨＰＬ、Ｃによって精製した。

ｐＨ６，９で、適切な量のアセトニトリルを含む酢酸テトラエチルアンモニウムを使って溶出すると、テトラヌクレオチドＤＭＴ＋　−２２について、第２図に示したように、オリゴヌクレオチドの精製とジアステレオマーの分離が遂行できた。

ここで用いた固相合成の方法は、発生期のオリゴヌクレオチドの３′一端から進行するので、テトラヌクレオチド類似体Ｈの首尾のよい合成（図式■）は、Ｎ− アルキルホスホラミデート結合が、後に続く縮合、酸化および脱トリチル化操作の間も安定であることを立証した。これに加えて、２２の合成中、最初の縮合− 酸化サイクルの後で少量の固体支持物が取除かれ、完全な脱保護を受けた。この操作により、すべての点（’　Ｈ−ＮＭＲ，シリカゲルＴＬＣ，逆相オマー混合物を生じた。

２１ｔ＋−ｃつＨ３ユ図式■ Ｐｌおよびアルカリ性ホスファターゼ（Ｃｏｎｎｏｌ１７　Ｎ　ｉｌ、、１９８４）による各々の酵素消化を含めた。ジヌクレオシドＮ−アルキルホスホステレオマ−をヌクレアーゼＰ！で処理すると、等量のｐＴとＴを含む３種の生成物を与えた。子牛の腸のアルカリ性ホスファターゼジアステレオマー混合物を消化すると、そのそれぞれのジヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデート１９の両ジアステレオマーを生成することが認められた。テトラヌクレオチドのジアステレオマーは最近、数多くの報告が、ＤＮＡ結合（Ｌｅｌｓｉｎｇｅｒ　＆　５ｃｈｏＮ、　１９）Ｉｆ；＾５ｓｅｌｉｎｅ　ｅｌ　１１．．１９８４；Ｈｅ１ｅｎｅ　ｅｔｘｌ、、１９８５；Ｔｌ＋ｏｏｆｉｇｅｔ　ａｌ、、１９８７）、部位選択的アルキル化（Ｖｌｕｓｏｖ　ｒｔ　Ｉｌ、、ｌ９８５；Ｋｎｏｒｒｅ　ｅｌ　ｔｌ、、１９８５ｔｂ；２ｓｒ７１ｏｖｅ　ｅｌ　ａｌ、、　１９８６；Ｉｗｅｒｓｏｎ　＆　Ｄｅｒｖｘｎ、　１９８７）または開裂（Ｂｏｌｏｒｉｎ　ｅｌ　１１．、１９８４；Ｃｈｕ　＆　０＋ｇｅｌ、　１９８５；Ｄｒｅ７ｅ＋　＆　Ｄｅｒｖｘｎ、　１９８５；１４　Ｄｏｌｎ　ｅｊ　ｔｌ、、　１９８６．　Ｂｏｉｄｏｊ−Ｆｏｒｇｅｊ　ｅｌ　１１．、１９８６．１９８７）に有用な佐剤を含むように変性されたオリゴヌクレオチドの合成について述べている。

ここで述べる化学は、そのような変性されたオリゴヌクレオチドの合成に適用でき、代表的なジヌクレオシドホスホラミデートＨの調製をそれによって試みた。

図式（■）で概括したように、＋５＋２３から誘導されたジヌクレオシド０−メチルホスファイトの１２−シア図式（■）：試薬：（１）テトラゾール、ＣＨ，ＣＮ　；　（ｂ）１２　。

ＮＨ２（ＣＨ２）　、ＮＨ２、ＴＨＦ　；　（Ｃ）　６−りｏロー９−（ｐ−クロロフェノキシ）−２−メトキシアクリジン；　（ｄ）ＣＨ２（１２中２％ＣＦ、Ｃ０ＯＨテレオマーを得た。それぞれを６−クロロ−９−（ｐ−クロロフェノキシ）−２ −メトキシアクリジンで６０℃、−夜、別々に処理し、２５をつくった。脱トリチル化（ＣＨ，−ＣＩ　２中２　％ＣＦ　３　ＣＯＯＨ。

３０ｍ１ａ）に続いて、２６のジアステレオマーのそれぞれを、大容積のエーテルからのそのトリフルオロ酢酸塩の沈殿によって単離した。極性の小さい異性体と大きい異性体が、■から、それぞれ６４％、５４％の全体収率で得られた。化合物Ｕも、ｕ〜Ｕの合成と類似して、液相合成によって調製した。

個々のオリゴアデニレートＮ−アルキルホスホラミデートの紫外線淡色効果と円偏光（ＣＤ）スペクトルは、ｄ　（Ａｐ　Ａ）とｄ　（Ａｐ　Ａｐ　Ａ）に対して、塩基の積み重ねが減少していることを示した。淡色効果の大きさは、アルキルホスホトリエステルの淡色効果に関する以前の報告（Ｍｉｌｌｅｒ　ｅｌ　ｘｌ、、１９７１；Ｌｅｌｓｉｎｇｅｒ　ｅｔ　１１．。

＋９８６）と対称的に、Ｎ−アルキル基の性質によって影響されなかった（第Ｖ表）。

第Ｖ表：アデニンオリゴヌクレオチドのポリ（チミジル酸）への結合” ＮＨＣ，Ｈ，。

ｄ　（ＡｐＡ）（肛）７　　　３０’　　　　　　２０’　　　　　　１６’Ｎ　ＨＣ１２Ｈ２５１９ｅ　−ｍｏ「ｅ　ｐｏｌａｒ−３１’　　　　　２０’　　　　　　１６’ ｄｉａｔｌｅｌｅｏｍｅ＋’ ＋９ｅ　−１ｅｓｓ　ｐｏｌａｒ　　　　　−２６’　　　　　　＋９’　　　　　　＋５’ｄｉａｓｌｅｒｅｏｍｅ＋” ｄ　（ＡｐＡｐＡ）　　　　２７ｈ３６　　　２９　（０，１）　　　　　２８２９　（１，０）ｂ、ＣＨ，ＯＨを追加して加えた場合を除き、測定はすべて１０ｍＭＭｇ　ＣＩ　、を含むｐＨ７，５のｌＱｍＭ）リス−ＨＣｌ中で行った。

Ｃ１括弧中に注記した以外は、加熱と冷却はそれぞれ１．０および０．５℃／ｍｉｎの速度で行った。

ｄ、１５％ＣＨ，ＯＨ含有。

Ｃ０逆相（Ｃ，８ＨＰＬＣ；　　０．ＩＮギ酸アンモニウム中４０％ＣＨ，ＣＮで溶出）での相対リテンションで判断して。

ｈ、　　Ｃａ５ｓａｎｉ　＆　Ｂｏｌｌｕｍ（１９６９１より。

アルキル鎖長への依存性のないことはまた、ＣＤスペクトルからも明らかであった。たとえば、第３図に見られるように、１９ｃｍと匪のスペクトルは非常によく似ていた。これは、凹のスペクトルでも言えることである。これらのスペクトルの最大および最小楕円性の波長はｄ　（Ａｐ　Ａ）のそれとマツチするが、その振幅は、アルキルホスホトリエステルで見られたように（旧１１ｅｒ　ｅｌ　ａｔ、。

＋９７１）　、大きく減少したｄ　（Ａ、Ａｐ　Ａ）のＣＤスペクトルとｄ　（Ａｌｌ　　（ＮＨＣ１２Ｈ２５）Ａｐ　Ａ）との比較も行った。予想されるように、どちらのスペクトルも同じ波長で最大と最小の楕円性を示したが、ｄ　（Ａｐ　　（ＮＨＣＩ２Ｈ２５）Ａｐ　Ａ）のスペクトルでは、振幅が減少した（第４図）。ＣＤと淡色効果の結果は、いずれも、Ｎ−アルキルホスホラミデート中の隣接塩基間の相互作用の減少（Ｋｏｎｄｏ　ｅｌｉｌ、、１９７０；ＭｉｌｌｅＩＮ　ａｌ、、１９７１）と一致している。

アデニンヌクレオシドＮ−アルキルホスホラミデートのオリゴヌクレオチド結合個々のオリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートの相互作用を、吸光度混合曲線を用いて初めに研究した。これらの実験は、オリゴアデニレートＮ−アルキルホスホラミデートとポリ（チミジル酸）の間のコンプレックスの生成を容易に立証したが、オリゴアデニレートｕとポリ（ｄＡ）の間のそれは立証しなかった。

そこで前者をさらに研究した。第５図に示すように、ｐＨ７，５で１０ｍＭＭｇ　ＣＩ　２を含む］ｈＭ）リス−ＨＣｌ中で測定すると、ジンとチミン（ウラシル）ヌクレオチドのポリマーによる三重のらせん形成は、詳細に記録されているので、（Ｓｌｅｗｅｎｉ　＆　Ｆ！ｌ＠ｅｎｊｅｌｄ。

１９６４；Ｄ＊ｖｉｅｓ、１９６７；Ｔｔ！ａｖｘ　ｅｌ　１１．．１９７０；Ｍｉｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、１９７１；ＡｒｎｏＨｅｔ　ｔｌ、、１９７６；Ｍｉｌｌｅｒ　ｅｔａｌ、、１９８１；Ｌｅｌｓｉｎｇｅ＋　ｅｌ　ａｔ、。

＋！ＩＬＬＳ）　、この結果は予想外であった。試験したその他のオリゴアデニレートから誘導したホスホラミデートについても、本質的に同じ結果が得られた。

淡色効果と溶融温度の測定に多数のオリゴアデニレートＮ−アルキルホスホラミデート類似体を用いた（第■表）。相補オリゴヌクレオチドが存在するときのＴｍ値と淡色効果を同時に測定した。

１９ｅの場合には、ヌクレオチド類似体の溶解を遂行するため、１５％メタノールを含ませた。

Ｔｍ値は、形成されたオリゴヌクレオチド−ポリ（Ｔ）コンプレックスの加熱と、最初Ｔｍ以上に保持した溶液のゆるやかな冷却の両方によって測定した。表に示すように、ホスフェートエステルの代りにｎ−ブチルホスホラミデート手放を導入すると（すなわち、１９ｃ対ｄ　（Ａｐ　Ａ）　）　、％淡色効果とＴｍの本質的な増加によって判断して、ポリ（チミジル酸）への結合が変化する種が生ずる結果となった。％淡色効果とＴｍの絶対値はやや低かったが、正確に同じ効果が１５％ＣＨ，ＯＨの存在で得られた。

１９ｃのポリ（Ｔ）への結合が高められることは、ＡＪＡの未置換ホスホラミデートもポリ（Ｔ）に対する親和性が高められることを見出したＬｅｆｓｉｎｇ！ｒ　ｅｔ　ｉｔ、、　（＋９８６）の観測と一致していた。これらの研究者は、結合の増加を、非荷電のホスホラミデー１−−ＮＨ，土族による荷電反発のないこと、水性媒体中でＨ結合を形成するその能力とに帰している。

また、第７表から明らかなことは、オリゴアデニレートＮ−アルキルホスホラミデートのポリ（Ｔ）に対する親和性に及ぼすアルキル鎖長増加の影響である。ｄ　（Ａｐ　Ａ）　、１９（ユおよび１１−を直接比較すると（１５％ＣＨ，ＯＨ中で）、鎖長の増加とともにＴｍの増加することが明らかになった。これは、Ｔｍ測定のどちらの方法でもそうであった。Ｔｍの著しい増加はまた、ｄ　（Ａｐ　Ａｐ　Ａ）中のホスフェートエステルの１つをＮ−ドデシルホスホラミデートで置き換える場合にも観察された。親和性のこの増加は、ｄ　（Ａｐ　Ａ）とｄ　（Ａ９　Ａｐ　Ａ）のトリクロロエチルおよび１．１−ジメチルトリクロロエチルエステルが、著しく高められた親和性で、ポリ（Ｔ）と結合するということを見出したＬｅＨｉｎｇｅ＋　！＋　１１．、　（１９８６）の結果と完全に一致する。本研究の結果は、親油性の置換基が、より一般的に、ＤＮＡらせん構造を安定化するように作用することを示唆している。

１９ｅのジアステレオマーが、加熱で測定しても冷却で測定しても、いずれも本質的に同じＴｍを示すことは注目に値する。

ポリ（チミジル酸）の存在で行われる測定の興味ある一面には、アルキル鎖長の増加によって観測される％淡色効果の変化が含まれていた（第７表）。Ｎ−アルキルホスホラミデート置換基が導入されるにつれて％淡色効果が初めに増加するのに続いて、アルキル鎖長をそれ以上に増加すると、実際に、研究したジおよびトリヌクレオチド類似体の両方とも、測定した淡色効果が減少する結果となった。淡色効果の大きさは明らかにファクターの複雑な多様性を反映するが、観測したパターンは興味をそそる。

この％淡色効果の減少と平行して、もう１つの効果が観測された。

第７表に示されているように、研究したヌクレオチド類似体のほとんどで、加熱によって測定しても冷却によって測定しても、Ｔｍ値が本質的に同じであった。

しかしながら、研究した大部分の親油性ジおよびトリヌクレオチド誘導体については、加熱によって測定したＴｍが冷却によって測定したものよりも、−貫して数度高かった。これは、１９ｅ−の両ジアステレオマーおよびｄ　（ＡＰ　　（ＮＨＣ１２Ｈ２５）　Ａｐ　Ａ）の場合もそうであり、この効果は、加熱または冷却の速度を程よく変化させても変らなかった。これらの観測は、親油性の大きい置換基が、通常ポリヌクレオチドと会合する塩基の積み重ねを崩壊させ、構造的に変化して、形成したコンプレックスの極性のもっとも低い領域に親油性置換基を収容し、それによって、親油性基と極性の水性媒体との相互作用を避けるような二重体を形成することを示唆する。このような“乱れた”オリゴヌクレオチドコンプレックスの生成と解離の速度が比較的に遅いことは、用いた測定法により観測されるＴｍの差とよく一致した。

親油性のアルキル置換基をもっている相補オリゴヌクレオチドによってポリヌクレオチドの親和性が増加することが観測されたことにより、ポリヌクレオチドの親和性の新規な源の存在することが示唆される。これはまた、より古典的なりＮＡ結合剤をポリヌクレオチドに共有結合によってつなぎ留めるのによく用いられるアルキル基が、ポリヌクレオチド結合が高められる全体のプロセスでうまく参与することができることを示唆する。

本研究での測定が既知の形の塩基三重体（Ｓｔｅｖｅｎｓ　＆　Ｆｅ１ｓｅｎｌｅｌｄ。

１９６４；Ｄｔｖｉｅｓ、１９６７；Ｔａ！ａｖｘ、１９７０：Ｍｉｌｌｅｔ　ｅｊ　ａｌ、、ｌ９７１；Ａ＋ｎｏ＋ｌ　ｅｔａｌ、、１９７６；Ｍｉｌｌｅｔ　ｅｌ　ａｌ、、１９８１；Ｌｅｊｓｉｎｇｅ＋　ｅｌ　ａｌ、、１９８６）のオリゴヌクレオチドによって容易に行われたことに注目することは重要である。

実際に、遅μ−とポリ（Ｔ）で得られた混合概観図は、二重鎖の構造を暗示している。ここに記した親和性の新規な源は、三重鎖構造形成の可能性が存在するところで、もつとも容易に明白になるということがその場合であろう。実際に、これは、核酸構造の操作にいくらかの興味ある機会を提供するものと思われる（Ｍｏｖｅｒ　＆Ｄｅｒｖａｎ、　１９８７）。

配列特異性の核酸プローブ設計に関連して、ここに述べたオリゴヌクレオチドＮ −アルキルホスホラミデートは種々の理由で興味がある。これには、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｉｔｒｉｎｏｍヌクレアーゼＰＡで培養する際に観察されるヌクレアーゼの分解に対する抵抗性や、親油性のアルキルホスホラミデート手放の存在により、哺乳類の細胞がオリゴヌクレオチドに対して透過性になる（たとえば、Ｍｉｌｌｅｒ　ｅｊ　ａｌ、。

１９８５を見よ）という可能性が含まれる。さらに、これらのデータは、ＤＮＡの集合（Ｂｅｈ＋、　１９８６）や脂質膜内のカプセル化（ＪＢ　＆Ｇ１１ｂｅｒｌ、　１９８７）を形に表すシステムで、異常な性質を発揮するであろうことを示している。

実験操作：チミジンとテトラゾールはＡＩｄ７ｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社から入手した。

２′−デオキシアデノシンと３′−〇−ベンゾイルチミジンは、ポリ（ｄＡ）やポリ（Ｔ）と同様に、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社から購入した。

５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシアデノシンはＢａｃｈｅｍ社から入手した。無水アセトニトリルは水素化カルシウムから蒸留し、４人分子ふるい上に貯えた。無水テトラヒドロフランは、使用前に水素化リチウムアルミニウム上で１ｈ加熱還流した。オリゴヌクレオチド合成は、Ｖ７ｄａｃ　Ｔｐ−２０球状シリカゲル（Ｔｈｅ　５ｅｐａｒａｔｉｏｎｓＧｒｏｕｐ）を固体支持物として用い、手細工のポリヌクレオチド合成装置（Ｍ１口ｅｕｃｅｉ　＆　Ｃａｒｏｔｈｅｒｓ、１９８１）で行った。ヌクレアーゼＰＩ（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉＩＩｓ　ｃｉｌ＋ｉｎｕｍ；１単位が、酵母ＲＮＡ中、３７℃、１　ａｌｉｎで、１μ ｍｏｌのホスホジエステル結合の加水分解を接触する）とアルカリ性ホスファターゼ（子牛の腸＝１単位が、１ｍ１ｎ　ＳｐＨ１０，４（グリシン緩衝液）、３７℃で、１μｍｏｌのｐ−ニトロフェニルホスフェートの加水分解を接触する）はＢｏｅｈｒｉｎｇｅ＋−Ｍａｎｎｈｅｉｎ社から入手した。クロマトグラフィによる分離は、シリカゲルカラム（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０．７０〜２３０メツシユ（フラッシュクロマトグラフィでは２３０〜４００メツシユ））またはＴＬＣ’　プレート（Ｍｅ＋ｃｋｅｊカゲル６０、Ｆ−２５４，０，２または２ｍ厚）で行った。ＨＰＬＣ分析は、ＣＨ３ＣＮ−’Ｈ２０混合物（４０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＩ（６，０または０．１Ｍギ酸アンモニウム緩衝液）を用い、Ａ１１ｌｅｅｈ１０μＣ１１ｉｌカラム（２５０ｘ４．６　ｍ）で行った。分離用の単離には適切なフラクションを集めて減圧下に濃縮し、ついで水で希釈し、ＢｏｎｄＥｌｉＣ，８カートリツジ（Ａｎａ１７ｊｉｃｈｅｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ１社）上で脱塩した。

ＮＭＲスペクトルは、Ｖａ＋ｉａｎ　ＥＭ−３９０またはＮ１ｃｏｌｅ＋　ＮＴ −３６０分光計により得た。紫外線スペクトルは、Ｃａ＋７１５または１７分光光度計により得た。円偏光スペクトルは、Ｊｉｓｃｏ　ｌ−５００Ｃ分光計により得た。

溶融概観図は、Ｐｅ＋ｋｉｎ−Ｅ１ｍｅ＋　Ｌａｍｂｄａ　５分光光度計により得た。

５’−０−（メトキシトリチル）チミジン３’　−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−ホスホラミダイト（１５，Ｒ＝ＭＴｒ　）ＣＮ２　ＣＩ！２８　ｍｌ中に５’　−０−（ｐ−メトキシトリチル）チミジン（Ｓｃｈｍｌｌｅ＋　ｅｔａｌ、、１９６３）　７７２ｍｇ（１，５０ｍｍｏｌ）を含む溶液を、Ｎ、　Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１．７５ｍ１　（１０、Ｑｍｍｏｌ）で処理した。メチル（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロクロリダイト（４００μｌ　；２、２５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、合併した溶液を、ＣＨ２（１２１００ｍｌを加える前に、２５℃で２０ｍ１ｎ保持した。反応混合物を飽和ＮｌＨＣＯ３水溶液］　５０　ｍｌで抽出し、有機相を乾燥（Ｎａ　２　Ｓ　０４　）して濃縮した。できた泡をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィで精製（Ｈｉｌｌ　ｅｔａｌ、、１９７８）　、溶出は６：４ＣＨ２Ｃ１，− ヘキサンで行った。適切なフラクションを合併し減圧下に濃縮して目的物をガムとして得た。このものをトルエン６ｍｌに溶解し、冷（−７８℃）ヘキサン２００ｍ１に滴下すると、生成物は白色の粉末として沈殿した。これをろ過して、活性化されたヌクレオシドホスホラミダイト９フ９■（９７％）を得た。シリカゲルＴＬＣＲＩｏ、８５（酢酸エチル）。

乾燥ＣＨｓ　ＣＮ　２　ｍｌ中に５’−０−（ｐ−メトキシトリチル）チミジン３’−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト３３８ｍｇ　（０，５ｍｍｏｌ）を含む溶液を、テトラゾール１４０ｍｇ　（２，Ｑｍｍｏｌ）および３′−０−ベンゾイルチミジン（ｄ！Ｒｏｏｉｉ　ｅｔａｌ、、１９７９）　１１５ｍｇ（０，３３ｍ＋ｎｏｌ）により、Ｎ２Ｆ、　２５℃で１５ａ＋ｉｎ処理した。ヨウ素０．１Ｍを含むピリジン水溶液を添加してホスファイト中間体を酸化し、反応混合物をＣＨ２ＣＩ　２とＨ，Ｏに分配した。乾燥（Ｎｌ　２　ＳＯ４）した有機相を濃縮し、生成物をシリカゲル上、フラッシュクロマトグラフィで精製、溶出にはＣＨ２Ｃ１２と酢酸エチルの混合物を用いた。

ジヌクレオシドモノホスフェート士が無色の泡として単離されたが（〜３１０■ ）、これを直接ヌクレオシドλの調製に用いた。

１の脱メチル化は、ジオキサン４ｍｌ、トリエチルアミン２ｍｌおよびチオフェノール２ｍｌにより、２５℃で３ｈ処理して行った。反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣をヘキサンで摩砕した。残渣をシリカゲル上、フラッシュクロマトグラフィで精製、溶出には、トリエチルアミン１％を含むＣＨ２Ｃ１２とＣＨ３０Ｈの混合物を用いた。

適切なフラクションを合併して濃縮し、ついで、メタノール溶液として、Ａｍｈｅ＋１ｉｔｅ　ＩＲ−１２０カラム（ピリジニウム形）ｌｏｍｌに適用した。

メタノールによる溶出によって、ジヌクレオシドモノホスフェート上が、ピリジニウム塩として、定量的な収率で得られた。生成物は、大容量のｎ−ヘギサンーエーテルからの沈殿後、粉末として単離した。シリカゲルＴＬＣＲ１Ｏ，４８（Ｉｎ：１０：　２ＣＨ２Ｃ１２−ＣＨ，ＯＨ−トリエチルアミン）。

Ｐ−（ｎ−ブチルアミノ）、Ｐ−チオキンー５’−０−（メトキシトリチル）チミジンルー（３′→５’　）　（３’−０−ベンゾイルチミジン）■ウムンヌクレオシドモノホスフエートス６８■（〜７０ｍｍｏｌ）とトリフェニルホスフィン５２■（Ｌ　２Ｇｍｍｏｌ）の混合物を、乾燥アセトニトリルの敷部を蒸発させることを繰返して無水とした。ついで、混合物をアセトニトリル１．５ｍｌと乾燥ピリジンＱ、２ｍｌに溶解し、ＣＣＩ！４１７μ！（２７＋ｎｇ　；　０．１８ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を２５℃で４ｈ撹拌後、ｎ−ブチルアミンｌ５Ｏｔｔ　ｌ　（ＩＩＯｍｇ　；　１．５ｍｍｏｌ）で処理し、さらに３０ｍ１ｎ間、２５℃に保持した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣を分離用シリカゲルＴＬＣで精製、展開には１０：　ｌＣＨ２Ｃｌ　２−ＣＨ，ＯＨを用いた。生成物は黄色の粉末として単離した。

収率１６■（２４％）；　ｌ　Ｈ−ＮＭＲ（第■表）。

Ｐ−（ｎ−ブチルアミノ）、Ｐ−デオキシ−５’−０−（メトキシトリチル）チミジリル−（３゛→５′）チミジン（４）ジヌクレオシドモノホスフェートλ（２０■：２０μ１Ｉｌｏ１）を１＝ＩＣＨ，０Ｈ−ｔ−ブチルアミン２ｍｌに溶解した。反応混合物を４０〜４５℃に２日間保持後、減圧下に濃縮した。残渣を分離用シリカゲルＴＬＣで精製、展開には９　：　ｌＣＨ２Ｃ１２ＣＨｉ　ＯＨを用いた。

白色のガム状固体として単離した。収率１５■（８４％）；シリカゲルＴＬＣＲ，０，５０（１Ｇ・Ｉ　ＣＨ２Ｃｌ　、−ＣＨ３０Ｈ）；　’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＡ’　３　、　　（ＣＨ３）　４　Ｓ　ｉ　）δ０．８〜０．９（ｍ）、　　１．２〜１．３５（ｍ）　、　１．３２（ｓ）　、　１．８１（ｓ）　、　　２．１〜２．９（ｍ）、　３．００（ｍ）　、　　３．４〜４．３（ｍ）、　　３．７１（ｓ）　、　　４．４（ｍ）、　　４．６（＋）、　　５．０４（ｍ）　、　　６．０７（ｔｌ　。

６．３５（ｍ）　、　６．７８（ｄ）　、　　７．２〜？、４（ｍｌ、　７．５０（ｇ）および８．４６（ｂ＋　ｓ）。

固体支持物上でのＰ−（ｎ−ブチルアミノ）、Ｐ−デオキシ−５’−０−（メトキシ−トリチル）チミジリル（３′→５′）チミジル（４）の合成Ｖ７＋Ｉａｃ　ＴＦ−２０シリカゲルの試料１００■を、Ｌｌｌｅｕｃｃｉ　＆Ｃｘｒｌｈｅｎ　（１９８１）の方法により、完全保護のジヌクレオシドモノホスフェート５の〜３μｍｏｌで誘導体化した。ホスフェートエステルの脱メチル化は、誘導体化した支持物を１：２：１トリエチルアミン−ジオキサン−チオフェノールで処理することによって遂行した。

混合物を２５℃で３ｈ振とう後、ろ過し、−夜の乾燥前に、ジオキサン、ピリジン、メタノールで逐次洗浄した。

ついで、推定される６を含むシリカゲルをトリフェニルホスフィン５２ｍｇ　（０，２０ｍｍｏｌ）、　　ＣＣ１ａ　ｌ７ｕｌ　　（２７ｍｇ　；　０．１８ｍｍｏｌ）　、乾燥ピリジン８μｊｌ’　　（８■；　Ｏ，１ｍｍｏｌ）および十分な乾燥アクリロニトリルで処理し、混合物を２５℃で３ｈ振とうできるようにした。その後、混合物をｎ−ブチルアミン１００μｍ　　（７３ｍｇ　；　１．　Ｏｍａ＋ｏｌ）で処理し、さらに２ｈ、２５℃に保持した。推定されるジヌクレオシドモノホスフェートヱを１　：　Ｉ　ＣＨ３０Ｈｔ−ブチルアミン３ｍｌにより、４０℃で＋６ｈ処理した。シリカゲルをろ過し、メタノールで多数回洗浄した。

ろ液を濃縮し、残渣を分離用シリカゲルＴＬＣで精製した。生成物（２，１μｍｏｌ　　；収率〜７０％）は固体として単離した。λ　　　（ｐＨ７）ｍａ！２６８ｎｍ　０この物質は、液相合成を経て調製したジヌクレオシドモノホスフェート」と同一であることが示された（上記を参照）。

エチル５’　−０−（メトキシトリチル）チミジン３’−（Ｎ−ｎ−ヘキシル）ホスホラミデート■ 乾燥テトラヒドロフラン３ｍｌ中に５’　−０−（メトキシトリチル）チミジン（Ｓｃｈｍｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、ｌ９６３）　６１９ｍｇ（１，２０ｍｍｏｌ）を含む溶液を、２．４−ジクロロフェニルホスホロジクロリダイト（Ｔｏｌｋｍｉｌｈ、　１９５８）２２０　ｕｌ　（３４３ｍｇ　；　１．３０ｍｍｏｌ）　、乾燥ピリジン２８０μＩ（２７４■；３、５　ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン５ｍｌを含む反応容器（Ｎ２−７８℃）に滴下した。反応混合物を一７８℃でｌ０ｍ１ｎ撹拌後、無水エタノール１００μ！　（７９■；　１．７０ｍｍｏｌ）で処理し、室温まで温めた。

反応混合物をＣＨ２（１２と水に分配し、有機抽出物を乾燥（Ｎａ　２　ＳＯ４）　シて減圧下に濃縮した。

推定されるヌクレオシド８ｃを乾燥テトラヒドロフラン１５ｍ１に溶解し、Ｈ− ヘキシルアジド（Ｇｒｕｎｄｍａｎ、　１９６５）　１．５ｍｌにより、２５℃ で４日間処理した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣をｎ−ヘキサン３０ｍ１で摩砕した。粗生成物の精製は、シリカゲル上フラッシュクロマトグラフィによって遂行しく５ｔｉｌｌ　ｅｌ　ａｌ、、　１９７８）　、溶出にはＣＨ，ＣＩ、中酢酸エチルの量を順次増加させたもの、ついで１０　：　Ｉ　ＣＨ２Ｃ１２ＣＨｓ　ＯＨを用いた。エチル５′−〇へ（メトキシトリチル）チミジン３’　 −（Ｎ　−ｎ−ヘキシル）ホスホラミデート（９）は白色の粉末として単離した。収率３７３■（５４％）；シリカゲルＴＬＣＲｊＱ、４７Ｃ酢酸エチル）　、　０．５３　（Ｉｎ：　Ｉ　ＣＨ２Ｃ１２−ＣＨｓ　ＯＨ）；’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１ｓ、（ＣＨｉ）４　Ｓｉ　）δＧ、７９（ｍ、３）　、　　１．１〜１．３（ｍ、ＩＩ）　、　１．３３（ｔ、３）　、　　２．２〜２．９（ｍ、４）。

３．３３（ｂｒ　ｓ、２）、　３．６６（ｓ、３）　、　３．９４（Ｑ、２）　、　４．１８（ｍ、１）　、　５．０２（ｍ、Ｉ）　。

６．３５（ｄｄ、Ｉ）、　　６．７〜７．４（ｍ、１４）　、　７．４５（ｓ、Ｉ）および９．３５　（ｂｔ　ｓ、　り。

エチル５’　−０−（メトキシトリチル）チミジン３′−１ホスホラミダト−２ ′−Ｎ−（グリシンメチルエステル）コ（２）乾燥テトラヒドロフラン１．５ｍｌ中に５’　−０−（メトキシトリチル）−チミジン（Ｓｃｈａｌｌｅｒ　ｅｌ　ｉｆ、、１９６３）　１２９ｍｇ（０，２５ｍｍｏｌ）を含む溶液を、）　（Ｔｏｌｋｍｉｔｈ、　１９５８）　４７μ１（７３■；　０．２８ｍｍｏｌ）　、乾燥ピリジン６４μＩ　（６３■；　０．８０ｍｍｏｌ）および乾燥テトラヒドロフラン２ｍｌを含む反応容器（Ｎ、、−７８℃）に滴下した。反応混合物を一７８℃で１θｍｉｎ間撹拌後、無水エタノール２４μｌ　　（１９ｍｇ　；　０．４０ｍｍｏｌ）で処理し、ついで室温まで温めた。反応混合物をＣＨ２Ｃ１２と水に分配し、有機相を乾燥（Ｎｉ　２３０４　）　シて濃縮した。

推定されるＵを乾燥テトラヒドロフラン３ｍｌに溶解し、アジド酢酸メチル（Ｇｒｕｎｄｍａｎ、　＋９６５）　３７５　ｕ　ｌにより、２５℃で２日間処理した。

混合物を減圧下に濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製、溶出にはＣＨ３０Ｈの量を順次増加させた（１０％まで）ＣＨ２Ｃ１２を用いた。エチル５’　−０−（メチルトリチル）チミジン３゛−［ホスホラミダト−２’−Ｎ−（グリシンメチルエステル）コ０は白色の粉末として単離した。収率１１８■（６８％）；シリカゲルＴＬＣＲｊｏ、３６（酢酸エチル）、　０．５０　（１０：　ｌＣＨ２Ｃｌ２　　　ＣＨｉＯＨ）’；’Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣＩ３゜（ＣＨ３）　ａ　Ｓｉ　）δ１．１５（Ｃ３）　、　１．２８（Ｉ、３）　、　　２．０〜２．６（ｍ、２）。

３Ｊ　〜３．Ｈｍ、１０）　　、　　３．９６（Ｑ、２）　　、　　４．１７（ｍ、ｌ）　　、　　５．０９（ｍ、Ｉ）　　。

６．３６（ｄｄ、１）、　　６．７〜７．４　（ｍ、１４）、　７．４７（ｓ、Ｉ）および９．３９　（ｂｒ　ｓ、　Ｉ）。

エチル５’−１１−（ジメトキシトリチル）チミジン３’　−（Ｎ　−ｎ−ブチル）ホスホラミデート（２）乾燥テトラヒドロフラン１．８ｍｌ中に５’−０−（ジメトキシトリチル）−チミジル（Ｓｃｈｘｌｌｅｒ　ｕ　ａｌ、、１９６３）　３３ｇ＋＋＋ｇ（０，６２ｍｍｏｌ）を含む溶液を、メチルホスホロジクロリダイト（Ｍｘｒｔｉｎ　＆　Ｐｉ！ｒｏｌａｔｏ、１９５０）　５１μｌ。

（８０ｍｇ　；　０．６０ｍｍｏｌ）　、乾燥ピリジン１６０μＩ！（１５８ｍｇ　；　２．　Ｑｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン４ｍｌを含む反応容器（Ｎ２．　３０℃）に滴下した。反応混合物を一３０℃で５ｍ１ｎ撹拌後、無水エタノール１００μｌ　（７９■；　１．７０ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を０℃まで温めた後、氷水に加え、ＣＨＣＪｉの数部で抽出した。合併したＣＨＣＡ’３抽出物を乾燥（Ｎｌ　２５Ｏ４）Ｌ、濃縮した。乾燥トルエンとテトラヒドロフランの数部の共蒸発によって推定されるヌクｍｍｏｌ）を含む溶液で処理した。反応混合物を２５℃で５　ｍｉｎ撹拌した後、ＣＨＣｊｌ　３とＮａＨｓＯｉ水溶液に分配した。有機抽出物を乾燥（Ｎｌ□５０４）し、減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ　（２０−ｇカラム）によって精製、溶出には酢酸エチル中０〜２％のＣＨ，ＯＨを用いた。エチル５’　 −０−（ジメトは大容量のへキサンから沈殿させ、白色の粉末として得た。収率１９６■（４５％）；シリカゲルＴＬＣＲ１０，２６（酢酸エチル）。

０．５０　＜２０：　ＩＣＨＣｌ３−ＣＨＩ　ＯＨ；’　Ｈ−ＮＭＲＣＣＤＣｌ　３　。

（ＣＨ３）　４Ｓ　＋　）　０．８（＋、　３）、　１．０５〜！、　２（ｍ、　ＩＱ）　、　２．１５〜２．９（ｍ、　４）。

３．３２（ｂｒ　Ｓ、２）、　３．６７１．６）　、　３．８８（ｑ、２）　、　４．１５（ｍ、Ｉ）　、　５．００（ｍ、Ｉ）　。

６．３５（ｄｄ、＋１．６．６５〜７．３　（ｍ、　１３）　、　７．４９　（ｓ、　Ｉ）および９．０３　（ｓ、　Ｉ）。

ヌクレオシドホスホラミデート１３は、８０％ＨＯＡｃ水溶液で脱保護（収率８１％）した後、Ｉ　Ｈ−ＮＭＲによってさらに特性評価した。

代表的な実験では、５′−ヒドロキシ−３′−０−ベンゾイル化ヌクレオシド＠　（Ｅｃｋｓｊｅｉｎ、　１９６）；０ｇ１ｌｖｉｅ、　１９フ３）　０．３ｍｍｏｌを、テトラゾール１．６〜２．Ｑｍｍｏｌを含む乾燥アセトニトリル１．５ｍｌ中のヌクレオシド３’　−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト（Ｆｌｉ）０．４０〜０．４５ｍｍｏ１で処理した。反応混合物を２５℃で２０〜３０ｍ１ｎ保持した後、ＣＨ２Ｃ１、と水に分配した。ＣＨ２Ｃ１２層を乾燥（Ｎｉ　２　Ｓ　０４　）　Ｌ、減圧下に濃縮した。残渣から乾燥テトラヒドロフラン数部で共蒸留させた後、できた泡を乾燥テトラヒドロフラン２ｍｌに溶解し、テトラヒドロフラン２ｍｌとアルキルアミン１ｍｌ中のヨウ素０．４０〜０．４５ｍｍｏｌで処理した。５Ｉ１１１ｎ後、反応混合物を重亜硫酸ナトリウム水溶液に注ぎ、ＣＨ２Ｃ１２の数部で抽出した。

ＣＨ２Ｃ１２抽出物は乾燥（Ｎｌ　、ＳＯ４）Ｌ、濃縮した。残渣を、ＣＨ２ＣＪ　２　　ＣＨＩ　ＯＨ混合物を用いて、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィ（Ｈｉｌｌ　ｅ＋　ａｌ、、ｌ９７８）または分離用シリカゲルＴＬＣにより精製した。

このようにして、５’−０−（メトキシトリチル）チミジン３’　−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト０．４５ｍｍｏｌ（３０４ｍｇ）と３′−〇−ベンゾイルチミジン０．３０ｍｍｏｌ　（１１４ｍｇ）から、クロマトグラフィによる精製と大容量の２＝１ヘキサン−エーテルからの沈殿の後で、Ｐ−デオキシ、Ｐ−（ｎ−オクチルアミノ）　−５’　−（０−メトキシトリチル）チミジリル（３′→５’）　（３’−０−ベンゾイルチミジン（１７ｓ）が白色の固体として得られた、収率２３７■（７６％）；シリカゲルＴＬＣＲｆｏ、３６および０．４３（酢酸エチル）、０．３２および０．３６　（１０：　Ｉ　ＣＨ２ＣＪ　２−ＣＨ３０Ｈ）　　；Ｉ　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＡ’ 　ｓ　、　　（ＣＨ３）４　ｓｉ　）δ０．８７（１）、　　１．２〜１．３（ｍ）。

１．３７（ｓ）　、　　１．５（ｍ）、　１．９２（ｓ）　、　１．９４（ｓ）　、　　２．２〜３．０（ｍ）、　　３．３〜３．６（ｍｌ、　　３．７７（ｓ）　　、　　３．７９（ｓ）　　、　　４．２〜４．４（ｍ）、　　５．１５（ｍ）　　、　　５．４７（пj　　。

５．５６（＋Ｉ）　　、　　６．３〜６．５（ｍｌ、　　６．８〜６．９（２ｄ）　　、　　７．２〜？、６（Ｉｌｌ）、　　７．５３（＄）　、　８．０（２ｄ）および８．４（ｂｒ　ｓ）　、調製したその他のジヌクレオシドホスホラミデートの収率を第１表に示した。これらの化合物の’　Ｈ−ＮＭＲも上記した（第■表）。

事実上同一収率のこれら生成物が、中間体のジヌクレオシドホスファイトの単離を省略するワンポットの操作で得られた。

ジヌクレオシドホスホラミデート（１カ脱保護の一般的操作代表的な実験では、完全保護のジヌクレオシドホスホラミデートを、１：１ｔ−ブチルアミン−メタノール１０ｍ１とともに４５〜５０℃で一夜撹拌して脱ベンゾイル化し、Ｈを得た。減圧下に溶媒を除去し、残渣を、ＣＨ２Ｃｌ１２−ＣＨ３ＯＨ混合物を用いて、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィまたは分離用シリカゲルＴＬＣにより精製した。脱トリチル化は、８０％酢酸水溶液２ｍｌにより、２５℃で１ｈ（ジメトキシトリチル誘導体）または１６ｈ（モノメトキシトリチル誘導体）処理して遂行し、脱保護のジヌクレオシドホスホラミデート１９を得た。減圧下で酢酸を除去したのに続いて、残渣をトルエンの数部とともに共蒸発し、ついで分離用シリカゲルＴＬＣで精製した（ＣＨ２Ｃ１２ＣＨｓ　ＯＨで展開）。

このようにして、Ｐ−デオキシ、Ｐ−（ｎ−オクチルアミノ）−５′−０−（メトキシトリチル）チミジリル（３′→５’）　（３’−０−ベンゾイルチミジン）　（１７ｇ）は脱保護され、分離用シリカゲルＴＬＣ（１０：　ｌＣＨ２Ｃ１２ＣＨ３０Ｈ）とジオキシサンからの親油性化の後で、Ｐ−デオキシ、Ｐ−（ｎ −オクチルアミノ）−チミジリル（３′→５′）チミジン（１９ｍ）を白色の固体として与えた。収率５３■（７７％）；シリカゲルＴＬＣＲ１Ｏ，０７（１０：　ＩＣＨ，ＣＡ’　２−ＣＨ３０Ｈ）。

０．６０（５：　　ｌＣＨ２ＣＡ’　　２　−ＣＨ３０Ｈ）　　；’　　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１ｓ　、　　（ＣＨｉ　）４　　Ｓｉ　）　　δ０．８７（１）　、　　１．３（ｍ）、　　１．５（ｍ）。

１．９０（ｓ）　　、　　１．９２（ｓ）　　、　　　２．１〜２．９（ｍｌ、　　３．６（ｍＬ　　３．８（ｍｌ。

４．０〜４．２（ｍ）、　　４．４５（ｍ）　　、　　５．０８（Ｑｌ）　　、　　６．３０（ｄｄ）、　　７．３２（ｓ）　　。

７．４１（１）および７．６８　（Ｓ）。調製したその他のジヌクレオシドホスホラミデートの収率は第１表に示した。これらの化合物のＩｌ（−ＮＭＲ値もまとめである（第■表）。

’ｒｐ　”ｒｐ　’ｒｐ　ＴホスホラミダイトＨ〜Ｈの合成Ｍａｔｌｅｕｃｅｉ　＆　Ｃｕｕｌｈｅｒｓ、、（１９８１）が述べている手細工のポリヌクレオチド合成装置により、必要なテトラチミジル化誘導体を調製した。

誘導体化したシリカゲル（７１μｍｏｌＤＭＴｒ基／ｇシリカゲル）を４００■ カラムに入れて用いた。個々の共役は、テトラヒドロフラン中の５’　−０−（ジメトキシトリチル）チミジン３’　−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト＋テトラゾールを用いて、既述（Ｍａｌｊｅｕｃｃｉ　＆　Ｃａｒｌｈｅｒｓ、　１９８１）のように行った。個々のホスファイト結合の酸化も、２：１：１テトラヒドロフラン−Ｒ２０−ルチジン中のＩ２０．ＩＭを用いて、既述のように行った。ただし、Ｎ−アルキルホスホラミデート結合の導入は、適切なヌクレオチド間結合の導入のため、２：１テトラヒドロフラン −アルキルアミン中の１２　０．］Ｍに置き換えて完遂した。

各テトラヌクレオチド合成が完成した後、完全保護のテトラヌクレオチドを含むシリカゲルを、２：１：１ジオキサン−チオフェノール−トリエチルアミン２ｍｌにより、２５℃で９０ｍ１ｎ処理した。シリカゲルをジオキサン、ＣＨ，ＯＨおよびＣＨ２Ｃｌ　２で連続的に洗浄し、その後、１：１ｔ−ブチルアミン−ＣＲ３０Ｈ２＝＋により４５℃で一夜処理してテトラヌクレオチドを支持物から加水分解し、トリチル化オリゴマーは１０μＣＩ８カラムで分離用ＨＰＬＣにより精製した。溶出には、アセトニトリル３５％（ＤＭＴｒ−２２の場合）、３８％（ＤＭＴｒ−且の場合）または５１％（ＤＭＴｒ−２１の場合）を含む酢酸エチルアンモニウム０．０４Ｍ、　ｐＨ６，９を用いた。ＨＰＬＣによる精製はまた、ジアステレオマーの分離も遂行した（リテンション時間：クレオチド調製物の概略２０％をＨＰＬＣによって精製し、収率は、いずれの場合も、個々のジアステレオマーの〜８Ａ２６０単位であった。

Ｄ　Ｍ　Ｔ　ｒ−２０〜２２の個々のジアステレオマーの脱保護は、８０％ＨＯＡｃ水溶液１ｍｌにより、２５℃で一夜行った。溶剤を減圧下に濃縮し、残渣をトルエンの敷部で共蒸発させ、エーテルで摩砕した。

精製は、Ｉｌ、０４Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ６，９中のＣＨ，ＣＮを用い、Ｃ０８逆相ＨＰＬＣによって遂行した。各テトラヌクレオチドの概略５Ａ２６ｏ単位が得られた。

Ｔｐ　’ｒｐ　”ｒｐ　ＴホスホラミダイトＨ〜Ｈの酵素消化テトラヌクレオチド２０〜２２（０，１〜０．２Ａ２６０単位スケール）の消化は、Ｐｅｎ１ｃｉｌｌｉｕ＋ｎ　ｃｉｔ＋ｉｎｉｕｍヌクレアーゼＰＩＶを６〜９単位含む０、２５Ｍ　トリス・ＨＣＩ　、　ｐ）Ｉ　７．［ｌ、　　１００μ！中で行った。消化は３７℃で４ｈ行い、反応混合物の半分ＨＰＬＣによって分析した。各反応混合物の残りの半分は子牛の腸のアルカリ性ホスファターゼ２単位と合併し、ＨＰＬＣ分析の前にさらに３０ｍ１ｎの部属を追加した。

同じようにして、Ｐ　−（ｎ−ブチルアミノ）、Ｐ−デオキシチミジリル（３゛ →５′）チミジンのジアステレオマー混合物を分析した。

６−クロロ−９−（ｐ−クロロフェノキシ）−２−メトキシアクリジン６．９− ジクロロ−２−メトキシアクリジン１．３９　ｇ　（５，Ｏｍｍｏｌｌ　　とｐ −クロロフェノール３．０　ｇ　（２３ｍｍｏｌ）からなる反応混合物を８０℃ で４ｈ加熱した。熱い反応混合物を熱いＮａ　ＯＨ水溶液に注いだ。合併した溶液を、細かい黄色の結晶性沈殿物が現れるまで撹拌した。結晶をろ過し、水で中性になるまで洗い、真空中７０℃で乾燥した。ピリジンから再結晶して、６−クロロ−９−（ｐ−クロロフェノキシ）−２−メトキシアクリジンを黄色の微結晶として得た。収率１．０６ｇ　（５７％）。

ｍｐ１５１．５〜１５３℃；λ　　ＣＣＨ、ＯＨ）　４００．３８１．３５１．３３３．３１８　ａ　ｌ（＋　ｈ）および２６２ｎｍ；’　ＨＮＭＲ（ＣＤＣＡ’　３　、　　＜ＣＨｓ　）　ａ　Ｓｉ　）δ　３．７６（Ｉ、３）、　　６．７〜６．９（ｍ、２）、　　７．１〜７．６（ｍ、５）および７．８〜Ｂ、　２　（ｍ、　３）。

Ｐ−（５−アミノペンチルアミノ）、Ｐ−デオキシ−５’−〇−（メトキシトリチル）チミジリル（３′→５’）　（３’−０−メトキシトリチルチミジン）（２ｉ）乾燥アセトニトリル２ｍｌ中の５’　−Ｄ−（メトキシトリチル）チミジン３’ 　−（０−メチル、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト（１５，Ｒ−ＭＴｒ　）を、テトラゾール１７８［（２，５ｍｍｏｌ）　と３′−メトキシトリチルチミジン（Ｏｇｉｌｖｉｅ　＆　ＬＮｓｉｎｇｅ＋、　１９６７、ＭｉＮｅｕｃｃｉ　＆Ｃａｒｏｔｈｅｒｓ、　１９８０）　２３２　ｍｇ（０，４５ｍｍａｌｌで処理した。反応混合物を２５℃に２０ｍ１ｎ保持した後、２：１テトラヒドロフラン−１，５−ジアミノペンタン３ｍｌ中のヨウ素１２５ｍｇ　（０，４９ｍｍｏｌ）で処理した。２５℃、５　ｍｉｎの後、反応混合物を減圧下に濃縮し、残渣をＣＨ，ＣＩ　２と５０％メタノール水溶液に分配した。有機相を乾燥ＣＮａ　２　Ｓ　Ｏａ　）　Ｌ％濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィ　（３０−ｇカラム）で精製、溶出にはメタノールの含有量を順次増加させたＣＨ２Ｃｌ２２を用いた。このようにして、Ｐ−（５−アミノペンチルアミノ）、Ｐ−デオキシ−５゛−θ〜（メトキシトリチル）チミジリル（３′→５’）　（３’−０−メトキシトリチルチミジン）　（２４）の各ジアステレオマーを、クロマトグラフィによる均一な形態の黄色がかった白色の粉末として得た。極性の低い異性体の収率１２５■（２４％）（シリカゲルＴＬＣＲ１０，４８（５：ＩＣＨｚＣｚｚ−ＣＨｉＯＨ））。

極性の高い異性体の収率１６６■（３１％）　　（Ｒ１Ｏ，４３）　　：　’　Ｈ−ＮＭＲ（極性の低い異性体）（ＣＤ（１’、、　　（ＣＨｉ）４Ｓｉ）δ１Ｊ８（ｓ）　、　１．７１１）　、　　１．２〜２．０（ｍ）、　　２．２〜２．８（ｍ）、　　３．２〜３．７（ｍ）。

３．７５（１）　、　３．７８（ｓｌ　、　　３４〜４．３（ｍ）、　５．０３（ｂ＋　１）、　６．１７（＋）　。

６Ｊ３（＋ｌｄ）、　６．８３（ｄｄ）、　　７．２〜７．５（ｍ）、　７．５０（ｓ）および８．３８　（ｓ）。

’　Ｈ−ＮＭＲ（極性の高い異性体）δ１．３４　（ｉ）　、　１．７７　（＋）　。

１．２〜１．　ｌｌ　（ｎ）、　　２．２〜２．９（ｍ）、　　３．３〜３．７（ｍ）、　３．７５ｆｓ）　、　３．７０ｓ）　。

３．９〜４．２（ｍ）、　５．０８（ｂ＋　１）、　６．２２（１）　、　Ｓ、３３（ｄｄ）、　　６．８〜６．９（ｍ）。

７、２〜７．４　（ｍ）　、　７．５４　（ｓ）および８．４２　（ｓ）。

ｐ　−（５−（６’−クロロ−２′−メトキシアクリジン−９′−イル）アミノペンチルアミノ）、Ｐ−デオキシーチミジリル（３′→５′）チミジン（ム）ピリジン４００μ！中の其の各ジアステレオマー１１８■（０，ｌ　Ｏｍｍｏ　ｌ）の溶液に、６−クロロ−９−（ｐ−クロロフェノキシ）−２−メトキシアクリジン１６７■（０，４５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６０℃で一夜加熱した。

それぞれの反応混合物をＣＨ３０Ｈで希釈し、ろ過して不溶物を除去し、減圧下に濃縮した。それぞれから得られた黄色の固形物を分離用シリカゲルＴＬＣで精製し、９　：　Ｉ　ＣＨ２Ｃ１２ＣＨｉ　ＯＨで展開した。個々のジアステレオマー（２５と推定される）を、別々に、ＣＨ２Ｃｌ２中の２％トリフルオロ酢酸６ｍｌで処理しく３０ｍ１ｎ。

２５℃）、ジトリチル化を遂行した。大容量のエーテルから各々を沈殿させた後、トリフルオロ酢酸塩と推定される個々のジアステレオマーを黄色の粉末として単離した。極性の低い異性体の収率６３■（６４％）；極性の高い異性体の収率５３■（５４％）；’Ｈ−ＮＭＲ（極性の低い異性体）　　（ＣＤ　ＣＩ　３　、　Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏｄ　ｂ　）δ１．２〜１．４（ｍ）、　１．７８（ｓ）　、　　２．０〜２．８（ｍ）、　３．６５（ｓ）　、　３．８４（＋）　。

３．９２（ｓ）　、　　４．０〜４．１（ｍ）、　４．２８（ｍ）　、　４．５（ｂ＋　ｓ）　、　４．９５（Ｌｌ）　。

６．２２（Ｑ、２）　、　　７．６〜７．７（ｍ）、　７．７９（ｄ、１）　、　７．８４（ｓ）および８．２３　（ｄｌ。

ｌ　Ｈ−ＮＭＲ（極性の高い異性体）６１．２〜Ｌ、Ｓ（ｍ）、　１．９０ｆｓ）　。

２．０〜２．６（ｍ）、　　３．８〜４．２（ｍＬ　３．９２（ｓ）　、　４．４（ｂ＋　ｓ）　、　４．６（ｔｕ　ｓ）　。

５．０５（ｍ）　、　６．３（ｍ）、　　７．６〜？、７（ｍ）、　７．７９（ｄ）　、　Ｌ８４（ｓ）および８、２３　（ｄ）。

ｎ−アルキルホスホラミデート２０〜２２の合成と類似して、化合物オリゴマヌクレオチドとポリ（チミジル酸）の溶液を、ヌクレオチド濃度６　Ｘ　１０−５Ｍで調製し、ＭＩ　Ｃ１２１０１１Ｍ　トリス−ＨＣｌｐＨ７，５中のヌクレオチド比１：２（ｄＡ：Ｔ）で混合した。ある場合には、オリゴヌクレオチドＮ− アルキルホスホラミデートの溶解を促進するため、１５％ＣＨＩ　ＯＨを添加した。冷却および加熱時の分光的挙動をＵＶにより２６０ｎｍで監視した。個々のオリゴヌクレオチド類似体の淡色効果は既述（ＴＩ！ＩＷＩ　ｅＩｘｌ、、１９７０；Ｍｉｌｌｅｔ　ｅｊ　ｍｌ、。

１９８１）のように測定した。モル消衰係数は、ポリ（Ｔ）に対しては８．５２ｘｌＯ’　（２６４ｎｍ）　、ポリ（ｄＡ）に対しては９．３９ｘ　ＩＱ’　（２Ｓ７ｎｍ）を用いた。

」ジしＱ泣Ａｃｈｅｓｏｎ、　　Ｒ，Ｍ、　　（１９７３）　　”Ｔｈｅ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　ｏｆ　　ＨｅセｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ：　　　Ａｃｒｉｄｉｎｅｓ’、　　工ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ　　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ。

工ｎｃ−，Ｎｅｗ　ｙｏｒｌｃＦ　Ｐ、１１３゜Ａｇｒｉｓ、　Ｃ，Ｔｉ−、Ｂｌａｋｅｒ　Ｋ、　Ｒ−、Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｐ、Ｓ−、Ｒｅｄｄｙ、　Ｍ、　ｐ。

ａｎｄ　Ｔｓ’ｏｒ　Ｐ、　Ｏ，Ｐ、　（１９８６）　製ａり児抑上シ】２５，６２６Ｂ。

Ａｌｂｅｒセ、Ａ、ａｎｄ　　Ｒｉｔｃｈｉｅｒ　　Ｂ−（１９４３）　　Ｊ、Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、、　　４５８゜Ａｐｐｅｌ、Ｒ，（１９７５）Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ、Ｉｎｔ、Ｅｄ、Ｅｎｇｌ、１４，８０１−Ａｒｎｏ七ｔｔ　　Ｓ、ｒ　　Ｂｏｎｄ、　　ｐ、　　Ｊ、ｔ　　Ｓｅｌｓｉｎｇ、　　Ｅ、ｔ　　＆　　Ｓｍ３ｔｈｔ　　Ｐ、　　Ｊ、　@Ｃ。

（１９７６）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、３，２４５９−２４７０゜ＡＳＳｅｌｌｎｅ、Ｕ−ｔ　Ｔｏｕｌｍｅ、　Ｆ、ｔ　Ｔｈｕｏｎｇ、　Ｎ、　Ｔ−ｔ　Ｄｅ３−ａＶＵｅｔ　Ｍ、ｔＭａｎ七ｅｎａｙ−Ｇａｒｅｓヒｉｅｒ、　　Ｔ、、　　＆　　Ｈｅ１ｅｎｅ、　　ｃ、　　（１９８４）　　ＥＭＥＯＪ。

３．７９５−８００゜Ａｓ５ｅｌｉｎｅ、　Ｕ−ｒ、Ｔｏｌｍｅ、　Ｆ−ｔ　Ｔｈｕｏｎｇ、　Ｎ、Ｔ、ｔ　ｏｅｌａｖｕｅ＃　Ｍ、。

Ｂａｋｅｒ、Ｂ、Ｆ−ａｎｄ　Ｄｅｒｖａｎ、Ｐ、Ｂ、（１９８５）Ｊ−Ａｍ− Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ。

１０７．８２６６゜Ｂａｊｗａ、　　Ｇ、　　Ｓ、、　　＆　　Ｂｅｎ七ｒｕｄｅ、　　ｗ、　　ｓ、　　（１９７８）　　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅ虹ｔ、、４２１−４２４゜Ｂａｒｎｅｓ、Ｄ、Ｍ、（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３６，１４２３Ｂａｒｒ、　Ｐ、　Ｊ、、　Ｐｏｗｅｒ、　Ｍ、　Ｄ、、　Ｌｅｅ−Ｎｇ、　Ｃ，−Ｔ、、　Ｇｉｂｓｏｎ、　Ｈ，Ｌ。

ａｎｄ　Ｌｕｃｉｗｔ　Ｐ、Ａ、　（１９８７）　Ｂｉｏ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏ　　　５．４８６゜Ｂａｒｒｅ−５ｚｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ’、、　Ｃｈｅｒｆｎａｎｎ＋　Ｊ−Ｃ０ｔ　Ｒｅ”ｆｔ　Ｆ、ｔ　Ｎｕｑｅｙｒｅｔに、　　Ｔ＋、　　Ｃｈａｍａｒｅｌ＝、　　Ｓ、、　　Ｇｒｕｅｓセ、　　Ｊｒ、、　　Ｄａｕｇｕｅセ、　Ｃ０゜ＡＸｌｅｒ−Ｂｌｌｎｒ　　Ｃ，ｔ　ｖｅｚｉｎｅｔ−Ｂｒｕｎ、Ｐ、ｔ　　ＲＯｕＺＩＯｕ）５　　Ｃ，ｔＲｏｚｅｎｂａｕｍ、　Ｗ、　ａｎｄ　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　　（１９８３）　５ｃｉｅｎｃｅ２２０．８６８＋Ｂｅｈｒ、　　Ｊ、−Ｐ、　（１９８６）　　？ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅヒｔ、　　２７．　５８６１−５８６４゜ａｌａｉｃｅ、に、Ｒ，、Ｍｕｒａｋａｍｉ、Ａ、、ａｎｄ　Ｍｉｌｌｅｒ、Ｐ、Ｓ、（１９８５ａ）製Ｐ空児叫亙見ヱ２４．６１３２゜Ｂｌａｋｅ、　　Ｋ、　　Ｒ，、Ｍｕｒａｋａｍｉ、　　Ａ、、　　Ｓｐｉヒｚ、　　Ｓ、　　Ａ、、　　Ｇｌａｖｅ、　　Ｓ、　　Ａ、。

Ｒｅｄｄｙ、　Ｍ、　Ｐ、ｔ　ＴＳ’ｏｔ　Ｐ、　Ｏ，Ｐ、　ａｎｄ　Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｐ、　Ｓ。

（１９８５ｂ）７２４．６１３９゜Ｂｏｉｄｏｔ−Ｆｏｒｇｅヒｔ　　Ｍ−ｔ　　ＴｈｕＯｎｑｔ　　Ｎ−Ｔ−ｔ　　ＣｈａＳＳｉｑｎＯＩｔ　　Ｍ−ｒ　　＆Ｔｉｅｌｅｎｅ、Ｃ，（１９８６）Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｓｅｒ、３　：１０２，７５−８０゜ＢｏＬｄｅセーＦｏｒｇｅヒｙ　　Ｍ−１ｃｈａｓｓｉｇｎｏｘ、　　Ｍ−、ＦｒａｎＣＯＩＳｒ　　Ｊ、　　Ｃ−ｔＨｅｌｅｎｅ、Ｃ，、Ｌｅ　Ｄｏａｎ、？、、Ｐｅｒｒｏｕａｕｌｔ、Ｌ、、Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ、Ｔ、、＆　Ｔｈｕｏｎｇ、Ｎ、Ｔ、（１９８７）Ｒｅｃ、Ｔｒａｖ。

Ｃｈｉｍ−Ｐａ　　５−Ｂａｓ、１０６，１８９゜Ｂｏｕｔｏｒｉｎ、　Ａ−、Ｖｌａｓｓｏｖ、　Ｖ＋Ｖ、、　’Ｋｏｙａｋｏｖ、　Ｓ＋Ａ、、　Ｋｕｔｉａｖｉｎ。

工、Ｖ、、＆　Ｐｏｄｙｍｉｎｏｙｉｎ、Ｍ、Ａ、（１９Ｂ４）ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ−１７２゜４３−４６゜ＢｏｉｄｏセーＦｏｒｇｅｔ、　　Ｍ、＋　　Ｔｈｕｏｎｇ、　　Ｎ、　　Ｔ＋、　　Ｃｈａｓｓｉｇｎｏｌ、　　Ｍ、。

Ｈｅ１ｅｎｅ、Ｃ，（１９８６）Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｓｅｒ　３，３０２，７５゜Ｃａ５ｓａｎｉ、　Ｇ、　Ｒ，＆　Ｂｏｌｌｕｍｒ　Ｆ、　Ｊ、　　（１９６９）　製夕更と叫逼４１８゜３９２８−３９３６゜ＣａＺｅｎａＶｅｅ　　Ｃ−ｒ−ＬＯｒｆｆｊｌｕｙ　　Ｎ−ｔ　　Ｔｏｕｌｍｅ、Ｊ−Ｊ−ａｎｄ　Ｆ！ｅｌｅｎｅｒ　ｃ。

（１９８６）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ　６８，１０６３゜Ｃｅｃｈ、Ｔ、Ｒ，ａｎｄ　Ｂａ５ｓ、Ｂ、Ｌ＋　（１９８６）Ａｎｎｕ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｃｈｅｍ。

５５．５９９゜Ｃｈａｎｄｒａ、　Ａｓ、Ｇｅｒｂｅｒ、　Ｔ、　ａｎｄ　Ｃｈａｎｄｒａ、　Ｐ、　（１９８６）　ＦＥＢ！辷Ｌｅ七七、　　１９７．　８４゜Ｃｈｅｎｑｙ　Ｙ−、ＤｕｔＳＣｋｌｆｆＩａｎｙ　Ｇ−Ｅ−ｔ　Ｂａ５ｔＯＷ、に−、Ｆ−ｔＳａｒｎｇａｄｈａｒａｎ、　Ｍ、　Ｇ、、　ａｎｄ　Ｔｉｎｇ、　Ｒ，Ｙ、　Ｃ，（１９８７）　Ｊ。

Ｃｈｕ、　Ｃ，Ｆ、、　＆　Ｏｒｇｅｌ、　ｒ、、　Ｅ、　　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８２，９６３−９６７゜Ｃｈｕ、Ｂ−Ｃ，、Ｗａｈｌ、Ｇ、Ｍ、、Ｏｒｇｅｌ、Ｌ、Ｅ、（１９８３）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、１１，６５１３゜Ｃｈｕ、Ｃ，Ｐ、ａｎｄ　Ｏｒｇｅｌ、Ｌ、Ｅ、（１９８５）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ−Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８２，９６ＬＣａｎｎｅｒ、ａ、Ｊ−ｔ　ＲｅｙｅＳｔ　Ａ−Ａ、１　Ｍｏｒｉｎ、Ｃｅ、工ｔａｋｕｒａ、に＋ｔＴｅｐｌｉＩ−ｚ、　Ｒ，Ｌ、　ａｎｄ　Ｗａｌｌａｃｅ、　Ｒ＋Ｂ、　（１９８３）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ−Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８０，２７８−Ｃｏｎｎｏｌｌｙ、　　Ｂ、　　Ａ、、　　Ｐｏセ仁ｅｒ、　　Ｂ、　　Ｖ、　　Ｌ、、　　Ｅｃｋｓセｅｌｎ、　Ｆ−ｔＰｉｎｇｏｕｄ、　　Ａ、、　　＆　　Ｇｒｏセｊａｈｎ、　　Ｌ、ｔ　　（１９８４）　　７２３．３４４３−３４５３゜Ｃｒａｍｅｒ、　　Ｆ、、　　Ｆｒｅｉｓセ、　　Ｗ＋、　　５ｃｈａセｔｋａ、　　Ｋ、、　　＆　　Ｊａｓ七ｏｒｆｆ、　　Ｂ。

（１９７２）Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、１０５，９９１−９９９゜ｏａｖｉｅｓ、ｏ＋　Ｒ，（１９６７）Ａｎｎｕ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、３６ｔ　　３２１−３６４゜Ｄａｙ七ｏｎ、　Ａ、　Ｌ、、　５ｏｄｒｏｓｋｉ、　Ｊ、　Ｇ、、　Ｒｏｓｅｎ、Ｃ，Ａ、ｒ　Ｇｏｈ、　Ｗ。

Ｃ，ａｎｄ　　Ｈａｓｅｌヒｉｎｅ、　　Ｗ、　　Ａ、　（１９８６）　　Ｃｅ１ｌ　　４４．　９４１゜ｄｅ　ＲＯＯ３３−ｔ　Ｊ−Ｆ−Ｍ−ｔ　Ｊｒ、、Ｗｉｌｌ’１ｅ−ＨａＺｅｌｅｑｅｒｒ　Ｇ、ｔ　ＶａｎＤｅｕｒｓｅｎ、Ｐ、Ｅｔ、、５ｅｒｄｉｊｎ、Ｊ、、＆　ｖａｎ　Ｂｏｏｍ、Ｊ、Ｈ。

（１９７９）Ｒｅｃ、Ｔｒａｖ、Ｃｈｉｍ、Ｐａ　５−Ｂａｓ　９８，５３７− ５４８゜Ｄｏａｎ、Ｔ、！、＋、、Ｐｅｒｒｏｕａｕｌｔ、Ｌ、、Ｈｅ１ｅｎｅ、Ｃ，、Ｃｈａｓｓｉｇｎｏｌ。

Ｍ、、　ａｎｄ　Ｔｈｕｏｎｇ、　Ｎ、　Ｔ、　　（１９８６）　現旦空児匝！竺工２５ｒ　６７３６゜Ｄｒｅｙｅｒ、Ｇ、　Ｂ、　＆　Ｄｅ、ｒｖａｎ、　Ｐ、　Ｂ、　　（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ１＝１．　Ａｃａｄ、−９ｃｉ、ＵＳＡ　８２，９６８−９７２゜Ｄｒｅｙｅｒ、　Ｇ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｄｅｒｖａｎ、　Ｐ−Ｂ、（１９８５）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、５ｃｉ−、ＵＳＫＢ２，９６８゜Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ｆ、（１９６７）Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、１００，２２２Ｂ−２２３５゜Ｅｄｗａｒｄｓ、Ｍ、Ｌ、、Ｂａｍｂｕｒｙ、Ｒ，Ｅ、ａｎｄ　Ｒｉｔｔｅｒ、Ｈ，Ｗ、（１９７５）Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、１８，６３７゜Ｆａｒｍｅｒｌｅ！、Ｗ−Ｇ−ｔ　ＬＯｅｂｔ　Ｄ−Ｄ−ｐ　Ｃａ５ａＶａｎｔｔ　Ｎ−Ｃ−ｔＨｕｔｃｆｉｉｓｏｎ、Ｃ，Ａ＋＋　　Ｘエエ、Ｅｄｇｅｌｌ、Ｍ、Ｌ　ａｎｄ　Ｓｗａｎｓ七ｒｏｍ。

Ｒ，（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３６ｔ　　３０５゜ｒｘｓｈｅｒ、　Ａ− Ｇ−ｒ　Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、　Ｍ−Ｂ−ｔ　ＪＯ９ｅｐｈ５ｔ　Ｓ−Ｆ、ｔ　ＨａｒｐｅｒｔＭ、　Ｅ、　Ｍａｒｓｅｌｌｅ、Ｌ＋Ｍ、ｔ　Ｒｅｙｅｓｔ　Ｇ、ｔ　ａｏｎｄａ、　Ｍ、　Ａ、ｒＡｌｄｏｖｉｎｉ、Ａ、、Ｄｅｂｏｕｋ、Ｃ，、Ｇａ１ｌｏ、Ｒ，Ｃ，ａｎｄ　Ｗｏｎｇ−Ｓｔａａｌ、　Ｆ、　　（１９８６）　Ｎａｔｕｒｅ　３２０．３６７゜Ｐｒｏｅｈｌｅｒ、　　Ｂ、　　Ｃ，（１９８６）　　Ｔｅヒｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅセｔ、　　２７．　５５７５−５５７８゜Ｇｒｕｎｄｍａｎｒ　　Ｃ，（１９６５）　　ｉｎ　　Ｈｏｕｂｅｎ− Ｗｅｙｌ、　　Ｍｅｔ：ｈｏｄｅｎ　　ｄｅｒＯｒｇａｎｉｓｃｈｅｒＣｈｅｍｘｅ　（Ｍｕｌｌｅｒ、　Ｅ−ｔ　ｚａ、）、　Ｖｏｌ、　ＸＶｙ　３ｔ　ｐ７９２−７９６．　３ｒｄ　　Ｅｄ、、　　Ｇ、　　Ｔｈｉｅｍｅ　　Ｖｅｒｌａｇ、　　Ｓセｕｔｔｇａｒセ。

Ｈｅｃｈｔ、　Ｓ、　ＰＬ　　（１９８６）　Ａｃｃｏｕｎ七ｓ　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｓ＋１９．３８３゜Ｈｅ１ｅｎｅ、　Ｃ，、Ｍｏｎｔｅｎａｙ−Ｇａｒｅｓ虹ｔｅｒ、　Ｔ、、　５ａｉｓｏｎ、　Ｔ−。

’ｒａｋａｓｕｇｉ、　Ｍ、、　ＴＯｕｌｍｅｔ　Ｊ、Ｊ−ｙ　Ａ！５ｓｅ１．３−ｎｅｔ　Ｕ−ｔＬａｎｃｅｌｏｔ、　Ｇ＋、　Ｍａｕｒｉｚｏｔ、　Ｊ、　Ｃ−Ｔｏｕｌｍｅ、　Ｆ、　ａｎｄＴｈｕｏｎｇｙ　Ｎ、　Ｔ、　　（１９８５）　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ　６７、７７７゜Ｈｅ１ｅｎｅ、　　Ｃｅ、　　Ｍｏｎｔｅｎａｙ−Ｇａｒｅｓｔｉｅｒ、　　Ｔ、、　　５ａｉｓｏｎ、　　Ｔ、。

Ｔａｋａｓｕｇｉ、Ｍ−ｔ　　Ｔｏｕｌｍｅ、Ｊ−Ｊ−ｔ　　ＡＢＳｅＬＬｎｅｔ　　口＋。

ＬａｎＣｅ１Ｏｔ、　ｃ、、　　Ｍａｕｒｉｚｏセ＃　　Ｊ−Ｃ−ｔ　　’ｒｏｕ１ｍｅ、　　Ｆ−ｔ　　＆Ｔｆｉｕｏｎｇ、　Ｎ−Ｔ、　　（１９８５）　ＢｉｏｃＭｍｉｅ　６７Ｆ　７７７−７８３゜Ｈｅｒ七ｚｂｅｒｇ、　　Ｒ−Ｐ、　　ａｎｄ　　Ｄｅｒｖａｎ、　　Ｐ、　　Ｂ、　　（１９８２）　　Ｊ、　　Ａｍ、　　Ｃｈｅｍ。

５ｏｃ−１０４，３１３゜工しａｋｕｒａ、　Ｋ、、　ａｎｄ　Ｒｉｇｇｓ、　Ａ、　Ｄ、　　（１９８０）　５ｃｉｅｎｃｅ　２０９．１４０１−Ｉｖｅｘｓｏｎ、　Ｂ−Ｌ、Ｉ　＆　Ｄｅｒｖａｎ、　Ｐ、　Ｂ−（１９８７）　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、１０９，１２４１−１２４３゜ｒｖｅｒｓｏｎ、　Ｂ−Ｌ、　ａｎｄ　Ｄｅｒｖａｎ、　Ｐ、　Ｂ、　　（１９８７）　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、１０９，１２４１゜工ｚａｎセ、　　Ｊ、　　Ｇ、　　ａｎｄ　　Ｗｅｉｎセｒａｕｂ、　　ｆｔ、　　（１９８４）　　Ｃｅ１ｌ　　３６．　１００７゜Ｊａｙ、　　Ｄ、　　Ｇ、、　　＆−Ｇｉｌｈｅｒｔ、　　Ｗ、　　（１９８７）　　Ｐｒｏｃ＋　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　８４，１９７Ｂ（９８０゜Ｊｕｏｄｋａ、　　Ｂ、　　Ａ、　　＆　　Ｓｍｒｔ、　　Ｊ、　　（１９７４）　　Ｃｏ１１ｅｃセ、　　Ｃｚｅｃｈ、　　Ｃｈｅｍ。

Ｃｏｍｍｕｎ、３９，９６３−９６８゜Ｋｅｈｒｍａｎｎ、　　Ｐ−ａｎｄ　　Ｐｒｕｎｌｅｒ、　Ｐ、　　（１９２４）　　ｌ１ｅｌｖ、　　ＣＩ’ｌ１ｍ、　　Ａｃｔａ−７，４７２゜Ｋｎｉｇｈ七ｅ　　Ｄ−ｔ　　Ｍ−ｙ　　Ｆｌｏｍｅｒｆｅｌセ、　Ｆ、　　Ａ、　　ａｎｄ　　Ｇｈｒａｙｅｂ、　　Ｊ。

（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３６，８３７゜Ｘｎｏｒｒｅ、　　Ｄ、　　Ｇ、、　　Ｖｌａｓｓｏｖ、　　Ｖ＋　Ｖ、、　　Ｚａｒｙセｏｖａ、　　Ｖ、　　Ｆ、、　　ｔｔＫａｒｐｏＶａｌ　　Ｇ−Ｇ、　　（１９８５ａｌ　　Ａｄｖ、　　Ｅｎｚ　　　ｅ　　Ｒｅ　　ｕｌａヒｉｏｎ　　２４ｔ２７７−２９９゜ＫｎＯｒｒｅ、ｏ、　ａ、、　＆　ＶｌａｓｓＯＶ、　ｖ、ｖ、　　（１９ｓｓｂ）　Ｐｒｏ　、　ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ　Ｒｅｓ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、３２，２９１−３２０゜Ｋｎｏｒｒｅ、　　Ｄ−Ｇ−ｔ　　Ｖｌａｓｓｏｖ、　　ｖ、　　Ｖ、ｔ　　ｚａｒｙセｏｖａ、　　Ｖ、　　Ｆ、　　ａｎｄＫａｒｐｏｖａ、　　Ｇ＋　Ｇ、　　（１９８５ａ）　　Ａｄｖ、　　Ｅｎｚｖｍｅ　　Ｒｅ　　ｕｌａ仁ｉｏｎ　　２４゜２７７゜Ｋｎｏｒｒｅ、　Ｄ、　Ｇ、　ａｎｄ　Ｖｌａｓｓｏｖ、　Ｖ、　Ｖ、　　（１９８５ｂ）　Ｐｒｏ　、　ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ　Ｒｅｓ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ＋　３２ｔ　　２９１＋Ｋｏｎｄｏ、　Ｎ、　Ｓ、Ｆ　Ｈｏｌｍｅｓ、　Ｈ，Ｍ −Ｌ　Ｓｔｅｍｐｅｌ、　Ｌ−Ｍ、　＆　ＴＳ’Ｏ，Ｐ。

０、　Ｐ、　　ｆ１９７０）　魅ｚ虫四と±Δ９．３４７９−３４９８゜Ｌａａｅｒｏｕセｅｔ　Ｋ、　Ｒ，ａｎｄ　Ｒａｕヒｈ、　Ａ、　Ｍ、　　（１９８６）　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３５，３４１７゜Ｌａｎｃｅｌｏセ、　　Ｇ、　　ａｎｄ　　Ｔｈｕｏｎｇ、　　Ｎ、　　？、　　（１９８６１旦＄　　２５ｔ５３５７゜Ｌａｒｄｅｒ、Ｂ−Ａ、、Ｐｕｒｉｆｏｙｚ　Ｄ、Ｊ、Ｍ、、Ｐｏｗｅｌｌ、に、Ｌ　　ａｎｄＤａｒｂｙ、　Ｇ、　（１９８７）　Ｎａｔｕｒｅ　３２７．　 ’７１６゜Ｌａｕｒｅｎｃｅ＋　Ｊ、ｔ　５ａｕｎｄｅｒｓｒ　Ａ、　ａｎｄ　Ｋｕｌｋｏｓｋｙ、　Ｊ、　　（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ　　２：］５，１５０１゜Ｌｅ　ＤＯａｎｔ　Ｔ、ｒ　ＰｅｒｒＯｕａｕｌｔｔ　Ｌ−＃　Ｈｅ１ｅｎｅ、　Ｃ−ｔ　Ｃｈａｓｓｉｇｎｏｌ。

Ｍ、、　＆　Ｔｈｕｏｎｇ、　Ｎ、　Ｔ、　（１９８６）　＄　２５．６７３６ −６７３９゜Ｌｅセｓｉｎｇｅｒ、　　Ｒ，Ｌ、ｔ　　＆　　５ｃｈｏ七七、　　Ｍ、　　Ｅ、　　（１９８１）　　Ｊ、　　Ａｍ、　　Ｃｈｅｍ。

ジと巨１０３．７’３９４−７３９６゜Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒｒ　Ｒ，＝Ｌ、、　ＢａＣ１’ｌｒ　ｓ、　Ａ、ｌ　＆　Ｅａｄｉｅ、　Ｊ、　Ｓ、　　（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１４，３４８７−３４９９＋ＬｅｔＳＬｎ９ｅｒ、Ｒ−Ｌ、ａｎｄ　５ｃｈｏヒｔ、　Ｍ＋　Ｅ、　　（１９８１）　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ。

Ａ、、　Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ、　Ｊ、　Ｍ、　ａｎｄ　０ｓｈｉｒｏ、　Ｌ、　Ｓ、　（１９Ｂ４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　　２２５．　８４０．　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−Ｍａｒｔｉｎ、　　Ｄ、　　Ｒ，、＆　　Ｐｉｚｚｏｌａ仁ｏ、　　Ｐ、　　Ｊ、　　（１９５０）　　Ｊ、　　Ａｍ、　　Ｃｈｅｍ。

Ｍａ七ｔｅｕｃｃｉ、　　Ｍ、　　Ｄ、、　　＆　　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、　　Ｍ、　　Ｈｏ　（１９８０）　　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅヒｔ、　　２１．　３２４３−３２４６゜Ｍａセｔｅｕｃｃｉ、　　Ｍ、　　Ｄ、　　＆　　Ｃａｒｔｈｅｒｓ＋　　Ｍ、　　Ｈ，（１９８１）　　、ｆｆ−Ａｍ、　　Ｃｈｅｍ。

５ｏｃ−１０３，３１８５−３１，９１゜ル５ｔｔｅｕｃｃｉ、Ｍ、Ｄ、ａｎｄ　Ｃａｒｕｔ、ｈｅｒｓ、Ｍ、Ｈ，（１９８０）Ｔｅ七ｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、２１，３２４３゜ＭａＸａｌ　　Ａ、　　Ｍ、　　ａｎｄ　　Ｇ１１ｂｅｒｔ＋　　Ｗ、　　（１９８０）　　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　Ｅｎｚ　　　ｏｌ＋６５．４９９゜Ｍｅｙｅｒ、　Ｊｒ、、　Ｒ，Ｂ＋、　Ｓｌ’ｌＬ！ｆｌｌａｎｒ　ｏ、　Ａ、、　＆　Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｐ、　Ｋ。

（１９７３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ−，２６９−２７２−Ｍｅｖａｒｅｃｈ、　Ｍ、、　Ｎｏｙｅｓ、　Ｂ、　Ｅ、　ａｎｄ　Ａｇａｒｗａｌ、　Ｋ−Ｌ、　　（１９７９）　Ｊ−Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２５４，７４７２゜Ｍｉｌｌｅｒ、Ｐ、Ｓ、ｒ　Ａｑｒｉｓ、Ｃ，ａ、ｌ　Ａｕｒｅｌｉａｎ、Ｌ＋＋　　Ｂｌａｋｅｔ　　Ｋ。

Ｒ，ｔ　Ｍｕｒａｋａｍｉ、Ａ、＃　Ｒｅｄｄｙ、Ｍ、ｐ、ｌ　　５ｐｉｔ、ｚ、Ｓ、　Ａ＋ｔ　＆Ｔｓ’ｏ、Ｐ、Ｏ，Ｐ、（１９８５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ　６Ｌ　　７６９−７７６＋Ｍｉｌｌｅｒ、Ｐ−Ｓ、、Ｆａｎｑｔ　　Ｋ、Ｎ、ｔ　Ｋｏｎｄｏ、Ｎ、Ｓ、、＆　Ｔｓ’ｏ、Ｐ、Ｏ。

Ｐ、（１９７１）Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、９３，６６５７−６６６５−Ｍｌｌｌｅｒ、Ｐ−Ｓ−ｔ　ＭＣＰａｒｌａｎｄｔ　Ｋ−Ｂ−ｔ　Ｊａｙａｒａ貼ｎｔ　　Ｋ−ｙ　　＆　ＴＳ’ＯｔＰ、　Ｏ＋Ｐ、　　（１９８１）製Ｂ竺児叫互竺ヱ２０．１８７４−１８８０゜Ｍｉｌｌｅｒ、ｐ、Ｓ、ｒ　Ａｇｒｉｓｒ　Ｃ，Ｈ，ｔ　Ａｕｒｅｌｉａｎ、Ｌｌ、Ｂｌａｋｅ、Ｋ。

１、Ｍｕｒａｋａｍｉ、Ａ、＃　Ｒｅｄｄｙｔ　Ｍ、Ｐ、、５ｐｉｔｚ、Ｓ、Ａ、ａｎｄＴｓ’ｏ、Ｐ、Ｏ，Ｐ、（１９８５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ　６７．７６９゜Ｍｉ１１＠ｒｅ　Ｐ−Ｓ−ｒ　ＡｑｒｉＳ、Ｃ−Ｈ−ｔ　Ｂｌａｎｄｚｎ、Ｍ−ｔ　Ｍｕｒａｋａｍｉ、Ａ−ｒＲｅｄｄｙ、　　Ｐ、　　Ｍ、、　　Ｓｐｉ七ｚ、　　Ｓ＋　Ａ　　ａｎｄ　　Ｔｓ’ｏ　　Ｐ、　　Ｏ，Ｐ、　　（１９８３ａ）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１１．５１８９Ｍ１１１ｅｒｔ　　Ｐ、Ｓ−ｔ　ＡｑｄＳ、ｃ、Ｈ−ｔ　ＭｕｒａｋａｍＬｔ　Ａ−ｐ　Ｒｅｄｄ ’ｆｔ　Ｐ。

ｓ、、　　Ｓｐｉ七ｚ、　　Ｓ、　　Ａ　　ａｎｄ　　Ｔｓ’ｏ、　　Ｐ、　　Ｏ，Ｐ、、　　１１９Ｂ３ｂ）　　Ｎｕｃｌｅｉｃ６５０゜Ｍｕｒａｋａｍｉｒ　Ａ＋ｙ　　Ｂｌａｋｅ、に、Ｒ，ａｎｄ　Ｍｉｌｌｅｒ、Ｐ、Ｓ、（１９８５）２７２２゜Ｎｅｍｅｒ、　　Ｍ、　　Ｊ＋、　　＆　　０ｇ１ｌｖｉｅ、　　Ｋ、　　Ｋ、　　（１９８０）　　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　ＬｅｔｔB ２１．４１４９−４１５２゜Ｎｏｙｅｓ、　　ｓ、　　Ｅ、ｔ　　ＭｅＶａｒｅＣｈｔ　　Ｍ−ｔ　　Ｓ七ｅｌｎｌ　　Ｒ−ｔ　　ａｎｄ　　Ａｇａｒｗａｌ、　　Ｋ。

Ｌ、（１９７９）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７６．１７７０゜０ｇ１ｌｖｉｅ、　　Ｋ、　　Ｋ、、　　＆　　Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ、　　Ｒ，Ｌ、　　（１９６７）　　Ｊ、　　ｏｒ　、　Ｃｈｅｍ。

３２．２３６５−２３６６゜０ｇ１ｌｖｉｅ、に、に−（１９７３）Ｃａｎ　Ｊ、Ｃｈｅｍ、５１，３７９９ −３８０７Ｐａｙｎｅ、Ｒ，Ｃ，、Ｎ１ｃｈｏｌｓ、Ｂ、Ｐ、ａｎｄ　Ｈｅｃｈｔ、Ｓ、Ｍ、（１９８７）慰仝主肝シ広■２６．３１９７゜Ｐｅａ七ｔｉｅ、　　Ｄ、　　Ａ＋　（１９７９）　　ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　５ｃｉ−ＵＳＡ　　７６゜１７６０゜Ｐｅａヒセｉｅ、　　Ｄ、　　Ａ、　　ａｎｄ　　Ｇ１１ｂｅｒｔ、　　Ｗ、　　（１９８０）　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　ＡｃａｄB Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７７、　４６７り。

Ｐｅａセｔｉｅ、　　Ｄ、　　Ａ＋　ａｎｄ　　Ｈｅｒｒ、　　Ｗ、　　（１９８１）　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　７８，２２７３゜ｐｅａｔヒｉｅ、　　Ｄ−Ａ、、　　Ｄｏｕセ１１ｗａｉヒｅ、　　Ｓ、、　　Ｇａｒｒｅｔｔ、　　Ｒ，Ａ、　　ａｎｄＮｏｌｌｅｒ、Ｈ，Ｆ、（１９８１）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ　ＵＳＡ　７８゜３３ＬＰｅａｔＬｅｔｔ　　Ｄ、　Ａ−（１９８３）　　ｉｎ：　　　Ｔｅｃｈｎｔｑｕｅｓ　　ｉｎ　　ｔｈｅ　　ＬｚｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、　　Ｂ５０９．　　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　　５ｃｉｅｎセ１ｆｉｃ　　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ工ｒｅｌａｎｄ　　Ｌヒｄ、、　　ｐｉ−ｆｆ。

Ｐｅｓセｋａ、　　Ｓ、ｔ　　Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ、　　Ｂ、　　Ｌ、、　　Ｊｕｎｇ、　　Ｖ、ｔ　　Ｈｏｔｔａ＋　　Ｋ、、　　ａｎｄＰｅｓｔｋａ＋　　Ｒ，Ｋ、、（１９８４）　　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ−Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　８Ｌ７５２５゜ＰＯｐＯＶ　Ｉ　Ｃｔ　Ｍ　−ｙ　　Ｓ　ａ　ｒ　ｎ９ａ　ｄ　ｈａ　ｒ　ａ　ｎ　ｔ　Ｍ　、Ｇ　−ｔ　Ｒｅａ　ｄ　ｐ　　Ｅ　−ｔ　　＝@ｎ　ｄ　Ｇａ　１１０　ｒＲ，Ｃ０（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２２４，４９７゜Ｐｒａｍａｎｉｋ、　ｐ、　ａｎｄ　Ｋａｎ、　Ｌ、　　（１９８７）　７２６．３８０７゜Ｒｏｒｄｏｒｆ、　Ｂ−Ｆ、　ａｎｄ　ＫｅａｒｎＳ、Ｄ、Ｆ−［１９７６）　黒９匹出口＝！ｌ５ｔ１４９１゜ＲＯ５ｅｎｂｅｒ９＃　Ｕ−Ｂ、、　Ｐｒｅｉｓｓ、　Ａ、、　５ｅｉｆｅｒｔｒ　ｌｉｅ、、　Ｊａｃｋｌｅ、　Ｌ。

ａｎｄ　ＫｎｉｐｐＨＬ　ｏ、　Ｃ，（１９８５）　Ｎａｔｕｒｅ　３１３．７０３゜５ＣｈａＩＸｅｒｔ　５１−ｔ　ＷｅｘＩＴｌａｎｎ、Ｇ−／　　ＬｅｒＣｈｔ　Ｂ、／　　＆３ｈＯｒａｎａｐ　Ｈ−Ｇ。

（１９６３）Ｊ、Ａｍ−Ｃｈｅｒｏ、Ｓｏｃ、８５，３８２１−３８２７゜５ｃｈｕｌセｚ、　　Ｐ、　　Ｓ、　　ａｎｄ　　Ｄｅｒｖａｎ、　　Ｐ、　　Ｂ、　　（１９８３ａ）　　Ｐｒ０ｃ、　　Ｎａｔｌ。

５ｃｈｕｌｔｚ、Ｐ、Ｓ、ａｎｄ　Ｄｅｒｖａｎ、Ｐ、Ｂ、（１９８３ｂ）Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、１０５，７７４８゜５ｃｈｏｆｉｅｌｄ、Ｐ、ａｎｄ　Ｚａｍｅｃｎｉｋ、Ｐ、Ｃ，（１９６８）Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、　ＡＣＣセミ　１５５．　４１０゜５ＯｄｒＯ５ｋ３−ｔ　Ｊ −ｔ　ＧＯｈｔ　Ｗ、Ｃ０ｔ　Ｒｏｓｅｎ、Ｃ−ｔ　ｏａｙｔｏｎ、　Ａ＋。

５Ｉ−ｅｃ、　　Ｗ、　　Ｊ、　　（１９８３）　　Ａｃｅ、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｒｅｓ、　　１６．　４１１−４１７゜Ｓ七ｅｐｈｅｎｓｏｎ、　　Ｍ、　　Ｌ、　　ａｎｄ　　Ｚａｍｅｃｎｉｋ、　　Ｐ、　　Ｃ，（１９７８）　　Ｐｒｏｃ、−２９３−３１４゜Ｓ七ｉｌｌ、　　Ｗ、　　Ｃ−、Ｋａｈｎ、　　Ｍ、ｔ　　＆　　Ｍｉｔｒａ、　　Ａ、　　（１９７Ｂ）　　ｌニー９三ニユーＣｈｅｍ、４３，２９２３−２９２５゜Ｓｗａｎ、Ｇ−Ａ、ａｎｄ　Ｆｅ１ｔｏｎ、Ｄ、Ｇ、　　工、［１９Ｓ７ａ）”Ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｓ七ｒｙｏｆ　Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：　　Ｐｈｅｎａｚｉｎｅｓ”。

工ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ　　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　　Ｉｎｃ、、　　Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、　　ｐ、　　ユ９゜Ｓｗａｎ、　Ｇ、　Ａ、　ａｎｄ　Ｆｅ１ｔｏｎｒ　Ｄ、　Ｇ、　Ｉ−（１９５７ｂ）　Ｉｂ１ｄ−、ｐ−６７゜６日。

Ｔａｎｅｓｅ、　Ｎｅｔ　５ｏｄｒｏｓｋｉ、Ｊ−、ＨａｓｅＬ仁ｉｎｅ、　　Ｗ−Ａ、　　ａｎｄ　　Ｇｏｆｆ、　　Ｓ−Ｐ、（１９８６）Ｊ＋Ｖｉｖｏ１．５９，７４３゜Ｔａｚａｗａ、　　工＋、Ｔａｚａｗａ、Ｓ−ｔ　Ｓｔｅｍｐｅｌ、Ｌ、Ｍ、、＆　Ｔｓ’ｏ、Ｐ、Ｏ。

Ｐ、　　（１９７０）　呂ｚ也４遵虫肛９．３４９９−３５１４゜Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ、　　Ｅ、　　ａｎｄ　　Ｅａｓｅｌセｉｎｅ、　　Ｗ、　　（１９８６）　　Ｎａｔｕｒｅ　　３２１゜！（ｅｌｅｎｅｔｃ、　　（１９８７）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ＋ＵＳＡ　８４゜Ｔｏｌｋｍｉｔｈ、　Ｈ，［１９５８）　Ｊ、　Ｏｒ　、　Ｃｈｅｍ、　２３．１６８２−１６８４゜Ｔｏｕ１ｍｅ’、Ｊ−Ｊ−Ｆ　Ｋｒ１ＳＣ１１ｒ　Ｈ−Ｍ−Ｆ　ＬＯｒｅａｕｔ　Ｎ−ｔ　Ｔｈｕｏｎｇ、Ｎ−Ｔ、、　　＆　　Ｈｅ１ｅｎｅ、　　Ｃ，、（１９８６）　　１ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ−Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ８３、工２２７−１２３１゜Ｖｌａｓｇｏｖ、Ｖ、Ｖ−１Ｇａ１ｄａｌＴＬａｋＯＶ＠　　Ｓ−Ａ−ｔ　ＧＱｒｎｔ　　Ｖ−Ｖ−ｔＧｒａｃｈｅｖ、　　Ｓ、　　Ａ、　　（１９８ｓｂ）　　ＦＥＢＳ　　Ｌｅセｔ　　１Ｂ２．、　４１５゜ｖｌａｓｓｏｖ、ｖ、ｖ、、ＧＯｄＯＶｌｋＯ％Ｆｒ　Ａ−Ａ−ｔ　Ｋｏｂｅｔｚ、Ｎ−Ｄ−ｔ　Ｒｙｔｅ。

Ａ−Ｓ−＃　ＹｕｒＣｈｅｎｋＯｔ　Ｌｌ−Ｖ−ａｎｄ　Ｂｕｋｒｉｎｓｋａｙａ、　Ａ−Ｇ−（１９８５ａ）　　Ａｄｖ、　　Ｅｎｚ　　ｍｅ　　Ｒｅ　　ｕｌａｔｉｏｎ　　２４．　３０１−３２０゜Ｗａｌｌａｃｅ、　Ｒ，Ｂ、１Ｓｈａｆｆｅｒ、　Ｊ、、　Ｍｕｒｐｈｙ、Ｒ＋Ｆ、ｔ　Ｂｏｎｎｅｒ、　Ｊ、ｒＨ１ｒＯ３ｅｒ　Ｔ　、ａｎｄ　工ｔａｋｕｒａ、に、（１９７９）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓ−６，３５４３゜Ｗｅｌ”ｎｅｒｌ　　ｃ、、　　ＫｒｅｂＳｔ　　Ｂ、ｔ　　Ｋｅｉｔｈ、　　ｃ、　　ａｎｄ　　Ｄｉｒｈｅｉｍｅｒ、　　ｃ＋（１９７６）Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、Ａｃｔａ　４３２，１６１゜Ｗｉｎ七ｅｒｍｅｙｅｒ、　　Ｗ、　　ａｎｄ　　Ｚａｃｈａｕ、　　Ｈ，Ｇ、　（１９７３）　　Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｅｉｏ　　ｈ　　ｓ、Ａｃｔａ　　２９９，８２゜Ｙｏｕｎｇｑｕｉｓセ、　　Ｒ，Ｓ、　　ａｎｄ　　Ｄｅｒｖａｎ、　　ｐ、　　Ｂ、　　（１９８５）　　Ｊ、　　Ａｍ、　　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、１０７，５５２ＬＺａｍｅｃｎｉｋ、　Ｐ、　Ｃ，ａｎｄ　Ｓ七ｅｐｈｅｎｓｏｎ、　Ｍ、　Ｌ、　　（１９７８）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａ七１．　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７５．　２８０゜Ｚａｒｙｔｏｖａ、　　Ｖ、　　Ｆ、、　　Ｋｕセｙａｖｉｎ、　　工３．．　　Ｓｉｌ’ｎ１ｋｏｖ、　　Ｖ、　　Ｎ、。

５ｈｉｓｈｋｉｎ、　ｃ＋ｖ、　　（１９８６）　魅ｚ匹Ｌ」曳撫１２．９１１ −９２０゜Ｚａｒｙ七ｏｖａ、　　Ｖ、　　Ｆ、、　　Ｋｕセｙａｖｉｎ、　　工、　　Ｖ、、　　Ｓｉｌ’ｎ１ｋｏｖ、　　Ｖ、　　Ｎ、　　ａｎｄＳｈｉｓｈｋｉｎ、Ｇ、Ｖ、（１９８６）Ｂｉｏｏｒ　、Ｋｈｉｍ、１２，９１１−上の教えに照して、明らかに本発明の多くの修正や変更が可能である。したがって、添付した特許請求の範囲内で、本発明はここで特定的に述べた以外にも実施することができるということを理解すべきである。

第１図峙関Ｃυ 第２Ｂ分間（号ジ１１ＩＳ　　図０２０　４０　６０　　８０　　１０Ｑｔ４ｑ図二皮長　（ｎｒｎジ第５図ユ皮大　（ｎｍ）補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成２年９月２５日

Claims

【特許請求の範囲】

１．次式の化合物、 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中：Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ；Ｃ１−１５のアシル；Ｃ１−１５のエーテル；Ｃ１−１５のアセタール；Ｃ１−１５の直鎖，分岐また＼は環状の飽和または不飽和アルキル；ホスフエート；サルフエート；ポリアミン；ポリピロール；または挿入物；あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ１− １５のアシル；Ｃ１−１５のアセタール、およびＣ１−１５の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和アルキル基からなる群から選ばれた半旗であり、これらすべての基は、ハロゲン原子、１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，少なくとも１つの窒素，酸素または硫黄原子を含む４〜１６員環および二環式化合物、カルボキシル官能によって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒド官能を末端としたＣ１−６のアルキルからなる群から選ばれた少なくとも１つのメンパーによって置換されているものとし；Ｂ１およびＢ２は、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ＤＮＡまたはＲＮＡと水素結合することのできるプリン塩基，ピリミジン塩基またはその他の複素環であり；Ｘは、上記化合物中のいかなる他の基Ｘからも独立して、基ＮＲ３Ｒ４または基Ｒ５であり、ここで：Ｒ３およびＲ４は、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、Ｈ；Ｃ１−１５−アルキル−ＣＨＯ；Ｃ１−１６の直鎖，環状または分岐の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基、各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒドを末端としたＣ１−６のアルキル，フエニルおよびイミノ基からなる群から選ぼれた少なくとも１つのメンパーによって置換されたＣ１−１６の直鎖，環状または分岐の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカブタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒドを末端としたＣ１−６のアルキル，フェニルおよびイミノ基からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されたＣ１−１５−アルキル−ＣＨＯ；−Ｏ−（Ｃ２−６アルキル）または−Ｓ−（Ｃ２−６アルキル）であり；Ｒ５は、上記化合物中のいかなる他の基Ｒ５からも独立して、基Ｒ３またはＲ４であり；Ｚは、上記化合物中のいかなる他の基Ｚからも独立して、Ｈ，ＯＨまたはＳＨであり；ｎ，ｍおよびｐは、それぞれ独立して、１〜２０の整数で、ｎ，ｍおよびｐの合計は≦２０であり；そして、前提として、（１）いずれの１つの基ＮＲ３Ｒ４においても、１つの基Ｒ３またはＲ４だけしか水素であることができない、（２）上記化合物中の１つのＸが、−ＯＣＨ２ＣＣｌ３，−ＯＣ（ＣＨ３，）２ＣＣｌ３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２および−ＮＨ２からなる群から選ばれた１つのメンバーであるときは、該化合物は少なくとも２個の異なる基Ｘを有するものとする。
２．Ｂ１またはＢ２が、上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ヒポキサンチン，キサンチン，６−チオグアニン，プリン，６−チオプリン，ピリニジン，２−チオウラシルおよび４−チオウラシルからなる群から選ばれた１つのメンバーである請求項１の化合物。
３．Ｒ３またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、オクチル，デシル，ペンタデシルまたは１０−シクロペンチルデシルである請求項１の化合物。
４．Ｒ３またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、Ｃ１−１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和ハロアルキル，Ｃ１−１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和エーテル，あるいはＣ１− １６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和チオエーテルである請求項１の化合物。
５．ＸがＲ５，である請求項１の化合物。
６．ＸがＮＲ３Ｒ４である請求項１の化合物。
７．薬剤的に受入れられる賦形剤または担体と共同して、次式の化合物からなる薬剤組成物： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中：Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ；Ｃ１−１５のアシル；Ｃ１−１５のエーテル，Ｃ１−１５のアセタール；Ｃ１−１５の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和アルキル；ホスフエート；サルフエート；ポリアミン；ポリピロール；または挿入物；あるいは、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、Ｃ１−１５のアシル；Ｃ１−１５のアセタール、およびＣ１−１５の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和アルキル基からなる群から選ばれた半旗であり、これらすべての基は、ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカブタン基，ホスフエート基，サルフエート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，少なくとも１つの窒素，酸素または硫黄原子を含む４〜１６員環および二環式化合物，カルボキシル官能によつて中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒド官能を末端としたＣ１−６のアルキルからなる群から選ぼれた少なくとも１つのメンバーによつて置換されているものとし；Ｂ１およびＢ２は、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ＤＮＡまたはＲＮＡと水素結合することのできるブリン塩基，ピリミジン塩基またはその他の複素環であり；Ｘは、上記化合物中のいかなる他の基Ｘからも独立して、基ＮＲ３Ｒ４または基Ｒ５であり、ここで：Ｒ３およびＲ４は、それぞれ上記化合物中のいかなる他の基Ｒ３またはＲ４からも独立して、Ｈ；Ｃ１−１５−アルキル−ＣＨＯ；Ｃ１−１６の直鎖，環状または分岐の砲和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，フェニルおよびイミノ基からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されたＣ１−１６の直鎖，環状または分岐の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒドを末端としたＣ１−６のアルキル，フェニルおよびイミノ基からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されたＣ１−１５−アルキル−ＣＨＯ；−Ｏ−（Ｃ２−６アルキル）または−Ｓ−（Ｃ２−６アルキル）であり；Ｒ３は、上記化合物中のいかなる他の基Ｒ５からも独立して基Ｒ３またはＲ４であり；Ｚは、上記化合物中のいかなる他の基Ｚからも独立して、Ｈ，ＯＨまたはＳＨであり；ｎ，ｍおよびｐは、それぞれ独立して１〜２０の整数で、ｎ，ｍおよびｐの合計は≦２０であり；そして、前提として、いずれの１つの基ＮＲ３Ｒ４においても、１つの基Ｒ３またはＲ４だけしか水素であることができないものとする。
８．Ｂ１またはＢ２が、上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ヒポキサンチン，キサンチン，６−チオグアニン，プリン，６−チオプリン，ピリニジン，２−チオウラシルおよび４−チオウラシルからなる群から選ばれた１つのメンバーである請求項７の組成物。
９．Ｒ３またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、オクチル，デシル，ペンタデシルまたは１０−シクロペンチルデシルである請求項７の組成物。
１０．Ｒ３またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、Ｃ１−１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和ハロアルキル，Ｃ１−１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和エーテル，あるいはＣ１ −１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和チオエーテルである請求項７の組成物。
１１．ＸがＲ５である請求項７の組成物。
１２．ＸがＮＲ３Ｒ４である請求項７の組成物。
１３．次式の化合物を患者に投与することからなる該疾病患者の治療方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中：Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ；Ｃ１−１５のアシル；Ｃ１−１５のエーテル；Ｃ１−１５のアセタール；Ｃ１−１５の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和アルキル；ホスフェート；サルフェート；ポリアミン；ポリピロール：または挿入物；あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｃ１−１５のアシル；Ｃ１−１５のアセタール，およびＣ１−１５の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和アルキル基からなる群から選ばれた半旗であり、これらの基は、ハロゲン原子，スルフォ基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，少なくとも１つの窒素，酸素または硫黄原子を含む４〜１６員環および二環式化合物、カルボキシル官能によって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒド官能を末端としたＣ１−６のアルキルからなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されているものとし；Ｂ１およびＢ２は、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ＤＮＡまたはＲＮＡと水素結合をすることのできるプリン塩基，ピリミジン塩基またはその他の複素環であり；Ｘは、上記化合物中のいかなる他の基Ｘからも独立して、基ＮＲ３Ｒ４または基Ｒ５であり、ここで：Ｒ３およびＲ４は、それぞれ上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲからも独立して、Ｈ；Ｃ１−１５−アルキル−ＣＨＯ；Ｃ１−１６の直鎖，環状または分岐の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒドを末端としたＣ１−６のアルキル，フェニルおよびイミノ基からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンパーによって置換されたＣ１−１６の直鎖，環状または分岐の飽和または不飽和アルキル；ハロゲン原子，１〜５個の炭素原子を含むメルカプタン基，ホスフェート基，サルフェート基，チオ基，各アルキル基が独立して１〜５個の炭素原子を含むジアルキルサルファイト基，アミノ基，ニトロ基，カルボキシル基，複素環基，カルボニルによって中断されたＣ１−６のアルキル，アルデヒドを末端としたＣ１−６のアルキル，フェニルおよびイミノ基からなる群から選ばれた少なくとも１つのメンバーによって置換されたＣＩ−１５−アルキル−ＣＨＯ；−Ｏ−（Ｃ２−６アルキル）または−Ｓ−（Ｃ２−６アルキル）であり；Ｒ５は、上記化合物中のいかなる他の基Ｒ５からも独立して、基Ｒ３またはＲ４であり；Ｚは、上記化合物のいかなる他の基Ｚからも独立して、Ｈ，ＯＨまたはＳＨであり；ｎ，ｍおよびｐは、それぞれ独立して、１〜２０の整数で、ｎ，ｍおよびｐの合計は≦２０であり；そして、前提として、いずれの１つの基ＮＲ３Ｒ４においても、１つの基Ｒ３またはＲ４だけしか水素であることができないものとする。
１４．Ｂ１またはＢ２が、上記化合物中のいかなる他のＢ１またはＢ２からも独立して、ヒポキサンチン，キサンチン，６−チオグアニン，プリン，６−チオプリン，ピリニジン，２−チオウラシルおよび４−チオウラシルからなる群から選ばれた１つのメンパーである請求項１３の方法。
１５．Ｒ３，またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、オクチル，デシル，ペンタデシルまたは１０−シクロペンチルデシルである請求項１３の化合物。
１６．Ｒ３またはＲ４が、上記化合物中のいかなる他のＲ３またはＲ４からも独立して、Ｃ１−１６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和ハロアルキル，ＣＩ−１６直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和エーテル、あるいはＣ１− １６の直鎖，分岐または環状の飽和または不飽和チオエーテルである請求項１３の方法。
１７．ＸがＲ５である請求項１３の方法。
１８．ＸがＮＲ３Ｒ４である請求項１３の方法。オリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデート抄録ＲＮＡおよびＤＮＡレベルの生化学的介入によって、病気と関うのに有用なオリゴヌクレオチドＮ−アルキルホスホラミデートを開示している。代理人弁理士箕浦清発明の詳細な説明