JPH0361434B2

JPH0361434B2 -

Info

Publication number: JPH0361434B2
Application number: JP22068583A
Authority: JP
Inventors: Shigeo Inoe; Yoshiharu Kimura; Shigehito Adachi
Original assignee: Agency of Industrial Science and Technology
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 1983-11-25
Filing date: 1983-11-25
Publication date: 1991-09-19
Also published as: JPS60114195A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は酵母によりアルキル（又はアルケニ
ル）ハライドからω−ハロカルボン酸を製造する
方法に関する。従来、脂肪酸のω−末端のみを選択的に酸化す
ることは工業的には困難とされてきた。例えば、
ラクトン系ムスク（じや香合成香料）の主成分で
あるヘキサデカノライドの製造にはω−ヒドロキ
シパルミチン酸が使用されるが、ムスクが高価で
あるのは、この前駆体たるω−ヒドロキシパリミ
チン酸の製造が困難なことに起因する。即ち、パ
ルミチン酸のω−末端を選択的に酸化してω−ヒ
ドロキシパルミチン酸とすることは、合成化学上
困難である。一方、微生物にノマルパラフインを資化させて
ジカルボン酸を製造する際に副産物としてω−ヒ
ドロキシ高級脂肪酸も得られることが報告されて
いる（例えば特公昭48−26238号）このようにω
−ヒドロキシ高級脂肪酸はノルマルパラフインの
アルカン資化性菌によるジカルボン酸への代謝中
間体であるが、その著量生産は困難とされてい
る。その理由としてはω−ヒドロキシ高級脂肪酸
の生成速度に比べて、そのジカルボン酸への転化
速度の方がずつと大きいためと推測される。また、ω−ヒドロキシ脂肪酸と同様にラクトン
系ムスクの主成分である大環状ラクトンの有用な
中間体としてはω−ハロカルボン酸がある。ω−
ハロカルボン酸はハロゲンに官能基を導入するこ
とにより種々の誘導体にも導びくこともできる。
このω−ハロカルボン酸に関しては、アルスロバ
クター属、コリネバクテリウム属、ノカルデイア
属に属し、アルキルハライドからω−ハロカルボ
ン酸を生産する能力を有する菌を培養し、ω−ハ
ロカルボン酸を生産する方法が報告されている
（特開昭57−50893号）。しかしながら、酵母ではそのような能力を有す
るものは未だ知られていない。そこで、本発明者から、斯かる現状に鑑みアル
キル（又はアルケニル）ハライドを対応するω−
ハロカルボン酸に変換する能力を有する酵母を広
く検索した結果、キヤンデイダ属に属する微生物
中に斯かる能力を有するものがあることを見出
し、本発明を完成した。すなわち、本発明は炭素数６〜22のアルキル
（又はアルケニル）ハライドを添加した培地にキ
ヤンデイダ属に属するω−ハロカルボン酸生産菌
を培養して、培地中に炭素数６〜22のω−ハロカ
ルボン酸を生成蓄積せしめ、これを採取すること
を特徴とする微生物によるω−ハロカルボン酸の
製造法にある。本発明で使用される酵母はキヤンデイダ属に属
し、アルキル（又はアルケニル）ハライドのω−
末端を選択的に酸化してω−ハロカルボン酸を生
成しうるものであつて例として、キヤンデイダ・
ギリモンデイ・KSM−Ｂ−24（Candida・
guilliermondii・KSM−Ｂ−24）が挙げられる。
この菌株は本発明者らが土壌より分離したもので
あつて、微工研菌寄第7309号として工業技術院微
生物工業技術研究所に寄託されており、以下に示
す菌学的性質を有している。なお、各種炭素源の同化性についてキヤンデイ
ダ・ギリモンデイ・KSM−Ｂ−24と標準菌株を
比較した結果を第１表に示す。 (a) 細胞の大きさ：直径 2.2〜2.5μ (b) 各培地における生育状態 (1) MY寒天培地：円形の光沢のない集落を生じる。色は白色
を有する。 (2) MY液体培地：皮膚は形成せず、中程度に混濁し沈澱を生
じる。 (3) コーンミール寒天培地によるスライド培養：仮性菌糸を形成する。分生子は出芽型を有
する。 (4) 子のう胞子の形成ゴドロコワ培地：形成しない麦芽抽出液寒天培地：形成しない (5) 射出胞子の形成 MY寒天平面培地：形成しない (c) 生理学的性質 (1) 生育条件：温度 14〜47℃（最適20〜40℃） PH 2.2〜9.6（最適4.3〜9.0） (2) 硝酸塩の同化：同化しない (3) 脂質の分解（油脂）：分解しない（リパー
ゼ活性がない） (4) 尿素の分解：分解する (5) ゼラチンの液化：液化しない (6) 耐浸透圧（NaCl耐性）：12〜13％ (7) カロチノイドの生成：生成しない (8) 顕著な有機酸の生成：有機酸は生成しない (9) ビタミンの要求性：要求しない (10) 各炭素源の同化性：

【表】 (11) アルブミンの分解：分解しない。 (12) 窒素源の利用バクトペプトン：利用する硫酸アンモニウム：利用する DL−アスパラギン：利用する尿素：利用する (13) デンプン類似物質の生産性：なし (14) 採集地：土壌から分離

【表】 (注) ±：弱い
以上の菌学的性質を有する菌について、ロツダ
ーのザ・イースト（Lodder′s The Yeasts）第
２版（1971年）にもとづいて検索した結果、上記
酵母はキヤンデイダ・ギリモンデイに属する新菌
株と認め、キヤンデイダ・ギリモンデイ・KSM
−Ｂ−24（Candida・guilliermondii・KSM−Ｂ
−24）と命名した。本発明において原料として用いるアルキル（又
はアルケニル）ハライドは、炭素数６〜22のアル
キル（又はアルケニル）クロライド又はアルキル
（又はアルケニル）ブロマイドが適当である。こ
のうち炭素数12〜18のものが特に好ましい。アル
キル（又はアルケニル）ハライドとしては、例え
ばｎ−ヘキシルクロライド、ｎ−ヘプチルクロラ
イド、ｎ−オクチルクロライド、ｎ−デシルクロ
ライド、ｎ−ウンデシルクロライド、ｎ−ドデシ
ルクロライド（ラウリルクロライド）、ｎ−テト
ラデシルクロライド（ミリスチルクロライド）、
ｎ−ペンタデシルクロライド、ｎ−ヘキサデシル
クロライド（セチルクロライド）、ｎ−オクタデ
シルクロライド、ｎ−エイコシルクロライド、ｎ
−ドコシルクロライド、ウンデセニルクロライ
ド、オクタデセニルクロライド（オレイルクロラ
イド）、及びこれらの混合物等、更にこれらに対
応するブロマイドを挙げることができる。本発明で使用する培地の組成は、使用する菌株
が良好に生育し、アルキル（又はアルケニル）ハ
ライドからのω−ハロカルボン酸の生産を順調に
行なわしめるために適当な炭素源、窒素源あるい
は有機栄養源、無機塩などからなる。炭素源とし
ては、炭水化物（例えば、グルコース、フラクト
ース、シユクロース、ソルビトール等）、有機酸
（例えば、クエン酸、コハク酸等）、炭化水素（例
えば、ｎ−ドデカン、ｎ−ヘキサデカン等）など
資化されるものならばいずれも使用できる。ま
た、窒素源あるいは有機栄養源としては、例え
ば、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモ
ニウム等の硝酸塩類、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンが挙げられる。また、無機塩としては各種
リン酸塩、硫酸マグネシウムなどが使用できる。
さらに微量の重金属塩類が使用されるが、天然物
を含む培地では必ずしも添加を必要としない。ま
た栄養要求を必要とする変異株を用いる場合に
は、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しな
ければならない。培地は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種
し、28〜35℃で３〜５日振盪又は通気撹拌すれば
良い。PHは6.5〜８程度に調整すると良い結果が
得られる。水に難溶性の炭素源等を使用する場合
には、ポリオキシエチレンソルビタン等の各種界
面活性剤を培地に添加することも可能である。これらの培養液から目的物質であるω−ハロカ
ルボン酸の採取および精製は、一般の有機化合物
の採取および精製の手段に準じて行うことができ
る。たとえば培養液から菌体等を除去したろ液も
しくは培養液そのものを酸性とし、エチルエーテ
ル、酢酸エチル又はクロロホルムーメタノール混
液等の有機溶媒で抽出する。この抽出物をカラム
クロマトグラフイーあるいは再結晶などの方法を
用いてω−ハロカルボン酸を単離することができ
る。以下、実施例により本発明を更に詳しく説明す
るが、本発明はこれらによつて限定されるもので
はない。実施例１セチルクロライド50ｇ、リン酸二アンモニウム
10ｇ、リン酸一カリウム２ｇ、硫酸マグネシウム
（７水塩）0.2ｇ、硫酸第一鉄（７水塩）0.02ｇ、
硫酸亜鉛（７水塩）0.016ｇ、硫酸マンガン（４
〜６水塩）0.016ｇ、酵母エキス２ｇを水道水に
溶かして１にし、PHを6.5に調製した。この液
体培地５mlを50ml容振盪試験管に仕込み、120℃
で15分間蒸気滅菌した後、キヤンデイダ・ギリモ
ンデイ・KSM−Ｂ−24（Candida・
guilliermondii・KSM−Ｂ−24）を一白金耳接種
し、30℃で168時間振盪培養した。培養終了後、この培養液に9N硫酸１mlを加え
PHを強酸性として、クロロホルムーメタノール
（２：１）混液20mlで抽出した。この抽出液を減
圧下濃縮した後メタノール−BF₃触媒でメチル化
し、ガスクロマトグラフイーにて生成物のω−ク
ロロパルミチン酸の定量を行なつた。その結果を
第２表に示す。なお生成物のガスーマス（GC−MS）データ
は標品のそれと一致し、ω−クロロパルミチン酸
であることが確認された。

【表】実施例２セチルクロライド50ｇ、リン酸二アンモニウム
10ｇ、リン酸一カリウム２ｇ、硫酸マグネシウム
（７水塩）0.2ｇ、ポリペプトン１ｇ、酵母エキス
0.5ｇを水道水１に溶かし、PHを6.5に調製し
た。この液体培地50mlを500ml容振盪フラスコに
仕込み、120℃で15分間蒸気滅菌した後、キヤン
デイダ・ギリモンデイ・KSM−Ｂ−24
（Candida・guilliermondii・KSM−Ｂ−24）を
一白金耳接種し、30℃で168時間振盪培養した。培養終了後、この培養液に9N硫酸10mlを加え
PHを強酸性として、クロロホルムーメタノール
（２：１）混液200mlで抽出した。この抽出液を減
圧下濃縮した後メタノール−BF₃触媒でメチル化
し、ガスクロマトグラフイーにて生成物のω−ク
ロロパルミチン酸の定量を行なつた。その結果、
培養液１当り16mgのω−クロロパルミチン酸が
得られることがわかつた。なお生成物のガスーマ
ス（GC−MS）データは標品のそれと一致し、
ω−クロロパルミチン酸であることが確認され
た。実施例３反応基質としてセチルクロライドの代わりに第
３表に示す各種炭素源を用い、菌株としてキヤン
デイダ・ギリモンデイ・KSM−Ｂ−24
（Candida・guilliermondii・KSM−Ｂ−24）を
実施例１と同様の条件で培養を行なつた。その結
果を第３表に示す。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】

１炭素数６〜22のアルキル（又はアルケニル）
ハライドを添加した培地にキヤンデイダ属に属す
るω−ハロカルボン酸生産菌を培養して、培地中
に炭素数６〜22のω−ハロカルボン酸を生成蓄積
せしめ、これを採取することを特徴とする微生物
によるω−ハロカルボン酸の製造法。