JPH0320228B2 - - Google Patents
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- JPH0320228B2 JPH0320228B2 JP22068683A JP22068683A JPH0320228B2 JP H0320228 B2 JPH0320228 B2 JP H0320228B2 JP 22068683 A JP22068683 A JP 22068683A JP 22068683 A JP22068683 A JP 22068683A JP H0320228 B2 JPH0320228 B2 JP H0320228B2
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明はキヤンデイダ・ギリモンデイ属に属す
る新規な微生物に関する。 従来、脂肪酸のω−末端のみを選択的に酸化す
ることは工業的には困難とされてきた。例えば、
ラクトン系ムスク(じや香合成香料)の主成分で
あるヘキサデカノライドの製造にはω−ヒドロキ
シパルミチン酸が使用されるが、ムスクが高価で
あるのは、この前駆体たるω−ヒドロキシパルミ
チン酸の製造が困難なことに起因する。即ち、パ
ルミチン酸のω−末端を選択的に酸化してω−ヒ
ドロキシパルミチン酸とすることは、合成化学上
困難である。 一方、微生物にノルマルパラフインを資化させ
てジカルボン酸を製造する際に副産物としてω−
ヒドロキシ高級脂肪酸も得られることが報告され
ている(例えば特公昭48−26238号)このように
ω−ヒドロキシ高級脂肪酸はノルマルパラフイン
のアルカン資化性菌によるジカルボン酸への代謝
中間体であるが、その著量生産は困難とされてい
る。その理由としてはω−ヒドロキシ高級脂肪酸
の生成速度に比べて、そのジカルボン酸への転化
速度の方がずつと大きいためと推測される。 また、ω−ヒドロキシ脂肪酸と同様にラクトン
系ムスクの主成分である大環状ラクトンの有用な
中間体としてはω−ハロカルボン酸がある。ω−
ハロカルボン酸はハロゲンに官能基を導入するこ
とにより種々の誘導体にも導びくこともできる。
このω−ハロカルボン酸に関しては、アルスロバ
クター属、コリネバクテリウム属、ノカルデイア
属に属し、アルキルハライドからω−ハロカルボ
ン酸を生産する能力を有する菌を培養し、ω−ハ
ロカルボン酸を生産する方法が報告されている
(特開昭57−50893号)。 そこで、本発明者らは、斯かる現状に鑑みアル
キル(又はアレケニル)ハライドを対応するω−
ハロカルボン酸に変換する能力を有する菌を自然
界より広く検索した結果、キヤンデイダ属に属す
る微生物中に斯かる能力を有するものがあること
を見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明はキヤンデイダ属に属し、ア
ルキル(又はアレケニル)ハライドを資化してω
−ハロカルボン酸を生産する能力を有する新規な
キヤンデイダ・エスピー・KSM−B−24(微工研
寄第7309号)に関するものである。 次に、本発明者らが分離、採取した本菌株の菌
学的性質を詳述する。 (a) 細胞の大きさ:直径2.2〜2.5μ (b) 各培地における生育状態 (1) MY寒天培地: 円形の光沢のない集落を生じる。色は白色
を有する。 (2) MY液体培地: 皮膜は形成せず、中程度に混濁し沈殿を生
ずる。 (3) コーンミール寒天培地によるスライド培
養: 仮性菌糸を形成する。分生子は出芽型を有
する。 (4) 子のう胞子の形成 ゴドロコワ培地: 形成しない 麦芽抽出液寒天培地:形成しない (5) 射出胞子の形成 MY寒天平面培地:形成しない (c) 生理学的性質 (1) 生育条件: 温度 14〜47℃(最適 20〜40℃) PH 2.2〜9.6(最適 4.3〜9.0) (2) 硝酸塩の同化:同化しない (3) 脂質の分解(油脂):分解しない(リパ
ーゼ活性がない) (4) 尿素の分解:分解する (5) ゼラチンの液化:液化しない (6) 耐浸透圧(NaCl耐性):12〜13% (7) カロチノイドの生成:生成しない (8) 顕著な有機酸の生成:有機酸は生成しない (9) ビタミンの要求性:要求しない (10) 各炭素源の同化性:
る新規な微生物に関する。 従来、脂肪酸のω−末端のみを選択的に酸化す
ることは工業的には困難とされてきた。例えば、
ラクトン系ムスク(じや香合成香料)の主成分で
あるヘキサデカノライドの製造にはω−ヒドロキ
シパルミチン酸が使用されるが、ムスクが高価で
あるのは、この前駆体たるω−ヒドロキシパルミ
チン酸の製造が困難なことに起因する。即ち、パ
ルミチン酸のω−末端を選択的に酸化してω−ヒ
ドロキシパルミチン酸とすることは、合成化学上
困難である。 一方、微生物にノルマルパラフインを資化させ
てジカルボン酸を製造する際に副産物としてω−
ヒドロキシ高級脂肪酸も得られることが報告され
ている(例えば特公昭48−26238号)このように
ω−ヒドロキシ高級脂肪酸はノルマルパラフイン
のアルカン資化性菌によるジカルボン酸への代謝
中間体であるが、その著量生産は困難とされてい
る。その理由としてはω−ヒドロキシ高級脂肪酸
の生成速度に比べて、そのジカルボン酸への転化
速度の方がずつと大きいためと推測される。 また、ω−ヒドロキシ脂肪酸と同様にラクトン
系ムスクの主成分である大環状ラクトンの有用な
中間体としてはω−ハロカルボン酸がある。ω−
ハロカルボン酸はハロゲンに官能基を導入するこ
とにより種々の誘導体にも導びくこともできる。
このω−ハロカルボン酸に関しては、アルスロバ
クター属、コリネバクテリウム属、ノカルデイア
属に属し、アルキルハライドからω−ハロカルボ
ン酸を生産する能力を有する菌を培養し、ω−ハ
ロカルボン酸を生産する方法が報告されている
(特開昭57−50893号)。 そこで、本発明者らは、斯かる現状に鑑みアル
キル(又はアレケニル)ハライドを対応するω−
ハロカルボン酸に変換する能力を有する菌を自然
界より広く検索した結果、キヤンデイダ属に属す
る微生物中に斯かる能力を有するものがあること
を見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明はキヤンデイダ属に属し、ア
ルキル(又はアレケニル)ハライドを資化してω
−ハロカルボン酸を生産する能力を有する新規な
キヤンデイダ・エスピー・KSM−B−24(微工研
寄第7309号)に関するものである。 次に、本発明者らが分離、採取した本菌株の菌
学的性質を詳述する。 (a) 細胞の大きさ:直径2.2〜2.5μ (b) 各培地における生育状態 (1) MY寒天培地: 円形の光沢のない集落を生じる。色は白色
を有する。 (2) MY液体培地: 皮膜は形成せず、中程度に混濁し沈殿を生
ずる。 (3) コーンミール寒天培地によるスライド培
養: 仮性菌糸を形成する。分生子は出芽型を有
する。 (4) 子のう胞子の形成 ゴドロコワ培地: 形成しない 麦芽抽出液寒天培地:形成しない (5) 射出胞子の形成 MY寒天平面培地:形成しない (c) 生理学的性質 (1) 生育条件: 温度 14〜47℃(最適 20〜40℃) PH 2.2〜9.6(最適 4.3〜9.0) (2) 硝酸塩の同化:同化しない (3) 脂質の分解(油脂):分解しない(リパ
ーゼ活性がない) (4) 尿素の分解:分解する (5) ゼラチンの液化:液化しない (6) 耐浸透圧(NaCl耐性):12〜13% (7) カロチノイドの生成:生成しない (8) 顕著な有機酸の生成:有機酸は生成しない (9) ビタミンの要求性:要求しない (10) 各炭素源の同化性:
【表】
【表】
(11) アルブミンの分解:分解しない
(12) 窒素源の利用
バクトペプトン:利用する
硫酸アンモニウム:利用する
DL−アスパラギン:利用する
尿素:利用する
(13) デンプン類似物質の生産性:なし
(14) 採集地:土壌から分離
以上の菌学的性質を有する菌について、ロツダ
ーのザ・イースト(Lodder′s The Yeasts)第
2版(1971年)にもとづいて検索した結果、上記
酵母はキヤンデイダ・ギリモンデイに属する新菌
株と認め、キヤンデイダ・ギラモンデイ・KSM
−B−24(Candida・guilliermondii・KSM−B
−24)と命名した。なお、本菌株は、微工研菌寄
第7309号として工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託されている。 分離源の土壌からの本菌株の分離はアルキル
(又はアルケニル)ハライド含有培地を用い常法
で行なつた。 本菌株の培養に使用する培地の組成は、使用す
る菌株が良好に生育し、アルキル(又はアルケニ
ル)ハライドからのω−ハロカルボン酸の生産を
順調に行なわしめるために適当な炭素源、窒素源
あるいは有機栄養源、無機塩などからなる。炭素
源としては、炭水化物(例えば、グルコース、フ
ラクトース、シユクロース、ソルビトール等)、
有機酸(例えば、クエン酸、コハク酸等)、炭水
化物(例えば、n−ドデカン、n−ヘキサデカン
等)、アルキル(又はアルケニル)ハライドなど
資化されるものならばいずれも使用できる。ま
た、窒素源あるいは有機栄養源としては、例え
ば、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモ
ニウム等の硝酸塩類、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンが挙げられる。また、無機塩としては各種
リン酸塩、硫酸マグネシウムなどが使用できる。
さらに微量の重金属塩類が使用されるが、天然物
を含む培地では必ずしも添加を必要としない。ま
た栄養要求を必要とする変異株を用いる場合に
は、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しな
ければならない。 培養は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種
し、28〜35℃で3〜5日振盪又は通気撹拌すれば
良い。PHは6.5〜8程度に調整すると良い結果が
得られる。水に難溶性の炭素源等を使用する場合
には、ポリオチエチレンソルビタン等の各種界面
活性剤を培地に添加することも可能である。 叙上の如く得られた培養物は、そのまま酵素源
として用いることもできるが、菌体を培養液より
分離する場合は、通常の固液分離手段が用いられ
る。このように分離された生菌体及びその処理物
(凍結乾燥菌体等)も酵素源として用いることが
できる。 アルキル(又はアルケニル)ハロイドを反応基
質として本菌株を上記の如く培養するω−ハロカ
ルボン酸が生産される。該基質は炭素数2〜18の
ものが特に適当である。 これらの培養液から目的物質であるω−ハロカ
ルボン酸の採取および精製は、一般の有機化合物
の採取および精製の手段に準じて行うことができ
る。たとえば培養液から菌体等を除去したろ液も
しくは培養液そのものを酸性とし、エチルエーテ
ル、酢酸エチル又はクロロホルム−メタノール混
液等の有機溶媒で抽出する。この抽出物をカラム
クロマトグラフイーあるいは再結晶などの方法を
用いてω−ハロカルボン酸を単離することができ
る。 以下、実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。 実施例 1 採取した土壌及び土壌付着の落葉落枝の小スパ
ーテル1杯分(約0.5g)を10ml滅菌水に懸濁し、
充分撹拌した後放置する。かくして得られる土壌
懸濁液上清の100倍希釈液0.1mlを下記組成のセチ
ルクロライド含有の分離用寒天培地()に直接
移し、30℃にて5日間培養する。
ーのザ・イースト(Lodder′s The Yeasts)第
2版(1971年)にもとづいて検索した結果、上記
酵母はキヤンデイダ・ギリモンデイに属する新菌
株と認め、キヤンデイダ・ギラモンデイ・KSM
−B−24(Candida・guilliermondii・KSM−B
−24)と命名した。なお、本菌株は、微工研菌寄
第7309号として工業技術院微生物工業技術研究所
に寄託されている。 分離源の土壌からの本菌株の分離はアルキル
(又はアルケニル)ハライド含有培地を用い常法
で行なつた。 本菌株の培養に使用する培地の組成は、使用す
る菌株が良好に生育し、アルキル(又はアルケニ
ル)ハライドからのω−ハロカルボン酸の生産を
順調に行なわしめるために適当な炭素源、窒素源
あるいは有機栄養源、無機塩などからなる。炭素
源としては、炭水化物(例えば、グルコース、フ
ラクトース、シユクロース、ソルビトール等)、
有機酸(例えば、クエン酸、コハク酸等)、炭水
化物(例えば、n−ドデカン、n−ヘキサデカン
等)、アルキル(又はアルケニル)ハライドなど
資化されるものならばいずれも使用できる。ま
た、窒素源あるいは有機栄養源としては、例え
ば、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモ
ニウム等の硝酸塩類、酵母エキス、肉エキス、ペ
プトンが挙げられる。また、無機塩としては各種
リン酸塩、硫酸マグネシウムなどが使用できる。
さらに微量の重金属塩類が使用されるが、天然物
を含む培地では必ずしも添加を必要としない。ま
た栄養要求を必要とする変異株を用いる場合に
は、その栄養要求を満たす物質を培地に添加しな
ければならない。 培養は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種
し、28〜35℃で3〜5日振盪又は通気撹拌すれば
良い。PHは6.5〜8程度に調整すると良い結果が
得られる。水に難溶性の炭素源等を使用する場合
には、ポリオチエチレンソルビタン等の各種界面
活性剤を培地に添加することも可能である。 叙上の如く得られた培養物は、そのまま酵素源
として用いることもできるが、菌体を培養液より
分離する場合は、通常の固液分離手段が用いられ
る。このように分離された生菌体及びその処理物
(凍結乾燥菌体等)も酵素源として用いることが
できる。 アルキル(又はアルケニル)ハロイドを反応基
質として本菌株を上記の如く培養するω−ハロカ
ルボン酸が生産される。該基質は炭素数2〜18の
ものが特に適当である。 これらの培養液から目的物質であるω−ハロカ
ルボン酸の採取および精製は、一般の有機化合物
の採取および精製の手段に準じて行うことができ
る。たとえば培養液から菌体等を除去したろ液も
しくは培養液そのものを酸性とし、エチルエーテ
ル、酢酸エチル又はクロロホルム−メタノール混
液等の有機溶媒で抽出する。この抽出物をカラム
クロマトグラフイーあるいは再結晶などの方法を
用いてω−ハロカルボン酸を単離することができ
る。 以下、実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。 実施例 1 採取した土壌及び土壌付着の落葉落枝の小スパ
ーテル1杯分(約0.5g)を10ml滅菌水に懸濁し、
充分撹拌した後放置する。かくして得られる土壌
懸濁液上清の100倍希釈液0.1mlを下記組成のセチ
ルクロライド含有の分離用寒天培地()に直接
移し、30℃にて5日間培養する。
【表】
【表】
上記分離用寒天培地(I)の調製法は、FeSO4・
7H2O成分のみろ過滅菌しておき、これを予めオ
ートクレープ滅菌して60℃付近に冷却しておいた
培地成分に添加後、ダイナミツクシエーカーで充
分撹拌、乳化させた後、滅菌シヤーレに分注する
ものである。 上記培養により発生するコロニーの一白金耳を
滅菌水で100倍希釈し、この希釈液0.1mlを下述の
分離用寒天培地()に移し、30℃にて3日間培
養する。生じた複数のコロニーが相互間に相異し
ないことを肉眼及び顕微鏡的に確認する。なお、
分離用寒天培地()は、分離用寒天培地()
の組成よりセチルクロライドとポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウリン酸エステルを除いた寒
天培地の底にセチルクロライドを含浸させたろ紙
を敷いてセチルクロライドを供給させたものであ
る。 上記コロニーのうち10個のコロニーをそれぞれ
分離用寒天培地()と同組成の斜面寒天培地に
接種し、30℃で3日間培養し、10本の斜面倍地上
の菌株が肉眼及び顕微鏡的に同一菌株であること
を確認し、また、これら10菌株の各培地上の性状
及び生理学的性質が同一であることを確認した。
上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性質は前
述した通りである。 上記試験の結果、各10本の培養菌はすべて自然
界より純粋に分離された単一菌株であることが判
る。 次いで、上記で純粋培養された斜面培地上の菌
株より一白金耳を滅菌した10%グリセリン水溶液
(2ml)の入つた凍結保存用バイアルに懸濁し、−
80℃にて凍結保存する。かくして3ケ月凍結保存
後、迅速に解凍し得られる懸濁液の一白金耳を普
通寒天培地に蘇生後、前記と同条件下に各培地上
での性状及び生理学的性質を調べた結果、凍結前
とは変化が認められなかつた。 また、上記凍結及び解凍を1ケ月毎に5度繰り
返した菌株について同様に、各培地上での性状及
び生理学的性質を調べた結果変化は認められなか
つた。 次いで、本菌株を利用してω−ハロカルボン酸
を製造した例を参考例として挙げる。 参考例 1 セチルクロライド50g、リン酸二アンモニウム
10g、リン酸一カリウム2g、硫酸マグネシウム
(7水塩)0.2g、硫酸第一鉄(7水塩)0.02g、
硫酸亜鉛(7水塩)0.016g、硫酸マンガン(4
〜6水塩)0.016g、酵母エキス2gを水道水に
溶かして1にし、PHを6.5に調製した。この液
体培地を5ml容振盪試験管に仕込み、120℃で15
分間蒸気滅菌した後、キヤンデイダ・ギリモンデ
イ・KSM−B−24(Candida・gulliermondii・
KSM−B−24)を一白金耳接種し、30℃で168時
間振盪培養した。 培養終了後、この培養液に9N硫酸1mlを加え
PHを強酸性として、クロロホルム−メタノール
(2:1)混液20mlで抽出した。この抽出液を滅
圧下濃縮した後メタノール−BF3触媒でメチル化
し、ガスクロマトグラフイーにて生成物のω−ク
ロロパルミチン酸の定量を行なつた。その結果を
第1表に示す。 なお生成物のガス−マス(GC−MS)データ
は標品のそれと一致し、ω−クロロパルミチン酸
であることが確認された。
7H2O成分のみろ過滅菌しておき、これを予めオ
ートクレープ滅菌して60℃付近に冷却しておいた
培地成分に添加後、ダイナミツクシエーカーで充
分撹拌、乳化させた後、滅菌シヤーレに分注する
ものである。 上記培養により発生するコロニーの一白金耳を
滅菌水で100倍希釈し、この希釈液0.1mlを下述の
分離用寒天培地()に移し、30℃にて3日間培
養する。生じた複数のコロニーが相互間に相異し
ないことを肉眼及び顕微鏡的に確認する。なお、
分離用寒天培地()は、分離用寒天培地()
の組成よりセチルクロライドとポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウリン酸エステルを除いた寒
天培地の底にセチルクロライドを含浸させたろ紙
を敷いてセチルクロライドを供給させたものであ
る。 上記コロニーのうち10個のコロニーをそれぞれ
分離用寒天培地()と同組成の斜面寒天培地に
接種し、30℃で3日間培養し、10本の斜面倍地上
の菌株が肉眼及び顕微鏡的に同一菌株であること
を確認し、また、これら10菌株の各培地上の性状
及び生理学的性質が同一であることを確認した。
上記菌株の各培地上の性状及び生理学的性質は前
述した通りである。 上記試験の結果、各10本の培養菌はすべて自然
界より純粋に分離された単一菌株であることが判
る。 次いで、上記で純粋培養された斜面培地上の菌
株より一白金耳を滅菌した10%グリセリン水溶液
(2ml)の入つた凍結保存用バイアルに懸濁し、−
80℃にて凍結保存する。かくして3ケ月凍結保存
後、迅速に解凍し得られる懸濁液の一白金耳を普
通寒天培地に蘇生後、前記と同条件下に各培地上
での性状及び生理学的性質を調べた結果、凍結前
とは変化が認められなかつた。 また、上記凍結及び解凍を1ケ月毎に5度繰り
返した菌株について同様に、各培地上での性状及
び生理学的性質を調べた結果変化は認められなか
つた。 次いで、本菌株を利用してω−ハロカルボン酸
を製造した例を参考例として挙げる。 参考例 1 セチルクロライド50g、リン酸二アンモニウム
10g、リン酸一カリウム2g、硫酸マグネシウム
(7水塩)0.2g、硫酸第一鉄(7水塩)0.02g、
硫酸亜鉛(7水塩)0.016g、硫酸マンガン(4
〜6水塩)0.016g、酵母エキス2gを水道水に
溶かして1にし、PHを6.5に調製した。この液
体培地を5ml容振盪試験管に仕込み、120℃で15
分間蒸気滅菌した後、キヤンデイダ・ギリモンデ
イ・KSM−B−24(Candida・gulliermondii・
KSM−B−24)を一白金耳接種し、30℃で168時
間振盪培養した。 培養終了後、この培養液に9N硫酸1mlを加え
PHを強酸性として、クロロホルム−メタノール
(2:1)混液20mlで抽出した。この抽出液を滅
圧下濃縮した後メタノール−BF3触媒でメチル化
し、ガスクロマトグラフイーにて生成物のω−ク
ロロパルミチン酸の定量を行なつた。その結果を
第1表に示す。 なお生成物のガス−マス(GC−MS)データ
は標品のそれと一致し、ω−クロロパルミチン酸
であることが確認された。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 以下の性質を有する微工研菌寄第7309号とし
て寄託された新規なキヤンデイダ・ギリモンデ
イ・KSM−B−24株。 (a) 細胞の大きさ:直径2.2〜2.5μ (b) 各培地における生育状態 (1) MY寒天培地: 円形の光沢のない集落を生じる。色は白色
を有する。 (2) MY液体培地: 皮膜は形成せず、中程度に混濁し沈殿を生
ずる。 (3) コーンミール寒天培地によるスライド培
養: 仮性菌糸を形成する。分生子は出芽型を有
する。 (4) 子のう胞子の形成 ゴドロコワ培地:形成しない 麦芽抽出液寒天培地:形成しない (5) 射出胞子の形成 MY寒天平面培地:形成しない (c) 生理学的性質 (1) 生育条件: 温度 14〜47℃(最適20〜40℃) PH 2.2〜9.6(最適4.3〜9.0) (2) 硝酸塩の同化:同化しない (3) 脂質の分解(油脂):分解しない(リパー
ゼ活性がない) (4) 尿素の分解:分解する (5) ゼラチンの液化:液化しない (6) 耐浸透圧(NaCl耐性):12〜13% (7) カロチノイドの生成:生成しない (8) 顕著な有機酸の生成:有機酸は生成しない (9) ビタミンの要求性:要求しない (10) 各炭素源の同化性: 【表】 【表】 (11) アルブミンの分解:分解しない (12) 窒素源の利用 バクトペプトン:利用する 硫酸アンモニウム:利用する DL−アスパラギン:利用する 尿素:利用する (13) デンプン類似物質の生産性:なし
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22068683A JPS60114185A (ja) | 1983-11-25 | 1983-11-25 | 新規微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22068683A JPS60114185A (ja) | 1983-11-25 | 1983-11-25 | 新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60114185A JPS60114185A (ja) | 1985-06-20 |
| JPH0320228B2 true JPH0320228B2 (ja) | 1991-03-18 |
Family
ID=16754885
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22068683A Granted JPS60114185A (ja) | 1983-11-25 | 1983-11-25 | 新規微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60114185A (ja) |
-
1983
- 1983-11-25 JP JP22068683A patent/JPS60114185A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60114185A (ja) | 1985-06-20 |
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