JPH0372640B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニ
ルアラニンメチルエステル（以下、「α−APM」
と略記することがある。）またはその塩酸塩製造
方法、更に詳しくは、アミノ基をホルミル基（以
下、“For”と略記することがある。）にて保護さ
れたα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニ
ンメチルエステル、すなわち、Ｎ−ホルミル−α
−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニンメチ
ルエステル（以下、“For−α−APM”と略記す
ることがある。）よりメタノール塩酸中で効率的
かつ優先的にホルミル基を脱離し、生成したα−
APMをその塩酸塩すなわちα−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエステル塩酸塩
（以下、“α−APM・HC”と略記することが
ある。）として単離し、必要に応じて、この塩酸
塩を遊離のα−APMに変えるα−APMまたはα
−APM塩酸塩の製造法に関する。ここに、α−
APM・HCをα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
エニルアラニンメチルエステルに必要に応じて変
えることは公知の方法によるとよい。 本発明は甘味ペプチド合成に有効な手段を提供
するものであつて、For−α−APMより、For基
を脱離せしめるのに優れた効果を発揮する。ちな
みに、For−α−APMは、α−APMの合成中間
体として、Ｎ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無
水物とＬ−フエニルアラニンメチルエステルとの
縮合によつて容易に得られる（特開昭52−23001
など）。 従来、Ｎ−ホルミル基の脱離方法としては、希
塩酸を用いる方法、過酸化水素を用いる方法
（G.Losseら、Ann.Chem.，636，140（1960））、ヒ
ドラジンを用いる方法（P.Lefrancierら、Bull.
Soc.Chim.France，1965，3668）、アニリンを用
いる方法（R.Geigerら、Chem.Ber.，102，2487
（1969））、ヒドロキシルアミンを用いる方法（R.
Geiger，Chem.Ber.，101 3386（1968））、接触還
元による方法（C.Losseら、J.Prakt.Chem.，24
118（1964））などが知られている。 これらのうち、塩酸を用いる方法は操作が容易
でかつコストも低く、工業的なＮ−ホルミル基の
脱離法として優れている。希塩酸を用いる脱ホル
ミル化法で一般に用いられる方法としては、Ｎ−
ホルミルアミノ酸などの簡単な化合物にあつては
希塩酸と加熱して加水分解する酸性加水分解法
（V.du Vigneaudら、J.Biol.Chem.，98，577
（1932））が適用されるが、ペプチドにあつては、
ペプチド結合の加水分解を避けるために通常0.5
規定以下のメタノール性塩酸中で室温に48時間放
置する方法（J.C.Sheehanら、J.Am.Chem.Soc.，
80，1158（1958））が適用される。しかし、For−
α−APMのようにホルミル基にて保護されたア
ミノ基のほかに、エステル基およびカルボキシル
基をもつペプチドの場合には、酸性加水分解法で
はエステル基およびペプチド結合が加水分解を受
け、一方、酸性アルコール分解法では遊離のカル
ボキシル基がエステル化されるし、また、長時間
（48時間）かかつて加水分解（特公昭54−17727）
するのは工業的に不利である。 本発明者らは、先に以上の欠点を克服した方法
としてヒドロキシルアミン強酸塩を用いる方法
（特開昭51−68520）および含水有機溶媒中強酸を
用いる方法（特開昭52−23001）を開発したが、
ヒドロキシルアミンまたは有機溶媒を用いる点に
於いて工業的に不利であつた。そこで、有機溶媒
を用いない脱ホルミル化法として0.5〜３規定塩
酸中、70〜150℃で短時間加熱処理する方法を発
明した（特願昭56−18588）が、この方法でも、
エステル基が若干加水分解を受けることが解つた
ので充分には満足できる方法であるとはいえな
い。 そこで、本発明者らは以上の欠点を克服し、か
つ工業的に有利なＮ−ホルミル基の脱離反応を研
究した結果、For−α−APMを温度０〜40℃で
メタノールと高濃度の塩酸の混合溶媒に接触させ
てホルミル基を脱離し、生成したα−APMを順
次難溶性の塩酸塩として析出させ、反応系から除
外しつつ脱ホルミル反応を進めることにより副反
応、例えば、エステル基、ペプチド結合の加水分
解、遊離カルボキシル基のエステル化などを抑制
し、最終的に高収率でα−APMを得ることが出
来ることを見い出し、本発明を完成させるに至つ
た。 ホルミル基を保護基に用いて工業的にα−
APMを製造する場合、本発明の方法を適用する
と非常に有利である。ホルミル基を用いたAPM
製造プロセスでは、通常Ｎ−ホルミル−アスパラ
ギン酸無水物とフエニルアラニンメチルエステル
縮合させるが、この場合、目的とするα−APM
の前駆体のFor−α−APM以外にその異性体で
あるＮ−ホルミル−β−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−
フエニルアラニンメチルエステル（以下、For−
β−APMと略記することがある。）が副生する。 目的のα−APMを得るには、従来は、例えば、
For−α−APMとFor−β−APMの混合物をメ
タノールと希塩酸で処理した後、この溶媒を中和
してα−APMを得ていた。しかし、この方法で
は、反応中にα−APMの塩酸塩が析出してこな
いため、前述の副反応が起きると共に、中和後α
−APMを取り上げる際に、α−APMとβ−
APM（ここに、β−APMはβ−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエステルを略記
したもの。）は溶解度がほぼ等しいので、β−
APMとほぼ等量のα−APMが母液中に残つてし
まう。 しかるに、このような場合に、本発明の方法を
適用すれば、即ち、For−α−APMとFor−β−
APMの混合物をメタノール〜高濃度の塩酸と接
触させると、時間の経過と共にホルミル基が脱離
し、α−APMとβ−APMが、それぞれ生成する
が、α−APMは難溶生の塩酸塩となり、系外に
出てくるので、α−APMの副反応が抑制される
上、β−APMが母液に淘状され、精製効果も加
味されて、効率よく、α−APM・HCをひい
てはα−APMを得ることが出来る。なお、塩酸
に対するα−APM塩酸塩の溶解度が極めて小さ
いことについては、US Pat.No.3798207（特公昭49
−41425）参照。 本発明におけるホルミル基の脱離反応の反応条
件については、該反応を種々の条件下で検討した
結果、該反応は、用いる塩酸及びエタノールの濃
度、反応温度によつて著しく影響を受けることが
解つた。 本発明者の知見によれば、塩酸の濃度が低過ぎ
る場合には、AMP塩酸塩の沈澱が少なく、エス
テル基の加水分解などの副反応を伴つた。一方、
塩酸の濃度が高過ぎる場合には、ホルミル基と差
別されることなくペプチド結合やエステル基が速
やかに加水分解を受けた。反応温度については、
高すぎるとホルミル基と区別されることなく、エ
ステル基やペプチド結合の加水分解が起り、かつ
塩酸塩の沈澱量も少なかつた。メタノールの濃度
が低過ぎる場合には、エステル基が加水分解を受
け、濃度が高過ぎる場合には、遊離カルボキシル
基がエステル化され、かつ、塩酸塩の沈澱量も少
なかつた。反応時間が短か過ぎる場合には、ホル
ミル基の脱離が十分に行なわれなかつた。一方、
長過ぎる反応時間は、工業化の面から有利とは云
い難い。 従つて、塩酸の濃度としては、２〜12規定好ま
しくは５〜８規定、メタノール濃度としては、塩
酸に対して５〜60容量％好ましくは10〜30容量
％、反応温度としては０〜40℃、反応時間として
は１〜５日程度が脱ホルミル反応の反応条件とし
て選定された。 この様にして得られたα−APM塩酸塩は、こ
のままの形で甘味料として用いることも出来る
（特開昭49−13371）が、通常、水溶媒中で炭酸ナ
トリウムなどのアルカリで中和して遊離のペプチ
ドとして単離される。 以上の様に、本発明によれば、塩酸とメタノー
ルの様な安価な試薬だけを用い、For−α−
APMよりホルミル基を脱離し、続けてα−APM
を難溶性の塩酸塩として沈澱させ、分離すること
によりこれまで以上の単離収率で目的ペプチドを
得ることが出来るので、本発明は工業極めて有用
なα−APMまたはその塩酸塩の製造手段を提供
するものである。 以下に実施例により本発明を更に詳しく説明す
る。 実施例 １ メタノール15ml、水25ml、濃塩酸42mlの混合溶
媒にFor−α−APM 48.3ｇを加え、25℃で４日
間攪拌した。更に５℃で３時間攪拌した後、析出
しているα−APM塩酸塩２水和物の結晶を濾取
した。この結晶中のα−APM含量は35.4ｇであ
り、For−α−APMに対して80.2％であつた。 実施例 ２〜８ For−α−APM 48.3ｇを用い、実施例１と同
様の反応を行ない、結果を下表にした。 【表】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−
   フエニルアラニンメチルエステルを０〜40℃で２
   〜12規定の塩酸及び塩酸に対して５〜60容量％の
   メタノールと１〜５日間接触させてホルミル基を
   脱離し、生成するα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
   エニルアラニンメチルエステルを難溶性の塩酸塩
   として析出させ、これを単離し、必要により遊離
   のエステルに変換することを特徴とするα−Ｌ−
   アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエス
   テルまたはその塩酸塩の製法。