JPH04159291A - 新規アントラキノン誘導体、その製造方法及び該誘導体を含有する抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アントラキノン系の新規化合物、特に抗腫瘍
性を有するアントラキノン誘導体に関するものである。

〔従来の技術及び発明が解決すべき課題〕新しい特性を
求めて、これまでに数多くの新規化合物が合成されてい
る。特に、抗腫瘍剤の分野では、とりわけ多くの新規化
合物が提案され、実用化されている。本発明は、このよ
うな技術開発の一連の流れに沿うものであり、これまで
に知られていない化合物であって、抗腫瘍活性を有する
新規化合物を提供することを目的とする。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、微生物が生産する抗腫瘍活性物質につい
て研究した結果、微生物ＢＹ−９０株が抗腫瘍活性物質
を産出することを見出し、次いで、該培養物から該生理
活性物質を分離精製し、その物理化学的性質を調べた結
果、下記一般式（Ｉ）で示される構造式を有する新規物
質であることをＨした。そこで、一般式中でＲがＯＨ基
である化合物をＢＹ９０−ＯＨと、同様にＲがＨ基であ
るものもＢＹ９０−Ｈと命名した。

（式中、Ｒは水素原子又はヒドロキシル基を示す。） 本発明はかかる新知見に基づいて完成されたものであっ
て、一般式（Ｉ）で示される新規物質ＢＹ９０−ＯＨな
らびにＢＹ９’０−Ｈ，その製造法、及びそれを有効成
分とする抗腫瘍剤を提供するものである。

ＢＹ９０−ＯＨならびにＢＹ９０−Ｈの物理化学的性質
は以下の通りである。

物理化学的性状 酢酸エチル−メタノール（１５：　１）本発明の新規化
合物ＢＹ９０−ＯＨ及びＢＹ９０−Ｈは、微生物の培養
によって製造することができるが類縁化合物の合成化学
的修飾によって製造することも、あるいは全合成化学的
に製造することもできる。

微生物の培養による場合の菌株としては、例えばストレ
プトマイセスアトラタス（Ｓｔｒｅρｔｏｍｙｃｅｓａ
ｔｒａｔｕｓ）属に属するＢＹ９０化合物生産能を有す
るものが使用される。具体的には、本発明者らの分離し
たストレプトマイセス　アトラタス株をあげることがで
きるが、その他の菌株については、抗生物質生産菌単離
の常法によって適当なものを自然界より分離することが
可能である。また、該生産菌を放射線照射その他の変異
処理に付して、目的化合物の生産能を高める余地も残さ
れている。

株 上記ＢＹ９０株は、下記の内容のものである。

１、　由来および寄託番号 ＢＹ９０株は北海道苫小牧布で採取した土壌から分離さ
れた放線菌であり、平成２年１０月３日に工業技術院微
生物工業技術研究所に寄託されてロ微工研条寄第３１２
１号′、（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−３１２１）の番号を得て
いる。

２、菌学的性状 ＢＹ９０株の菌学的性状は以下のとおりである。

１）形　態 本菌株の基中菌糸は合成寒天培地上で、しばしば分節し
て胞子鎖状を呈し、ときには分断してジグザグ状に並列
することがある。また、まれに長円形の胞子を単独また
は２〜３個を鎮状に形成することがある。気菌糸は主軸
または分枝上に、１０〜５０またはそれ以上の数からな
り、曲状からループ状または螺旋状の胞子鎖を形成する
。胞子は非運動性、長円形または円筒形で、０．６〜０
．８　Ｘ　Ｏ，８〜１．２μｍ１平滑表面である。菌核
、胞子嚢などは観察されない。細胞壁化学型はＩ型であ
る。

２）各種培地上の生育状態 培養性状を表１に示す。集落表面の菌叢色は灰色系列（
明茶味灰色）、集落の裏面色は不鮮明色（無色〜淡黄色
〜明茶味灰色〜暗茶味灰色）でｐＨ不感受性、培地中へ
の拡散性色素は茶味白色から明茶色でｐＨ不感受性であ
る。

３）生理的性質 生理的性状を表２に示す。本菌株は中温性、メラニン色
素を生成せず、スターチの分解と蛋白質（ゼラチン、カ
ゼイン、卵黄）の分解および硝酸塩の還元は共に陽性で
ある。

４）炭素源の利用性 炭素源の同化を表２に示す。診断部のうちＬ−アラビノ
ース、１−イノシトール、Ｄ−マンニットを利用しない
。

５）分類上の位置（同定） 本菌株の形態的性状と細胞壁化学型から、本菌株は「ス
トレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属」　
（以後Ｓ属と略）に位置される。上述の諸性状に基づき
「バージエイ氏細菌系統分類便覧・４巻」のＳ属に関す
るウィリアム等（Ｗｉｌｌｉ−ａｍｓ、　ｅｔ　ａｌ、
）の記載表によって検索し、近縁種た。同種の標準菌株
ＩＦＯ３８９７と本菌株について、ウィリアム等の方法
に従い、形態的性状、培養性状、生理生化学的性状など
８４項目について比較検討した。その結果、本菌株は■
基中菌糸が分節・分断すること。■Ｓ、ムリヌｘ　（Ｓ
ｌｍｕｒｉｎｕｓ）に対して抗菌作用がないこと、この
２項目だけがＳ、アトラタスと異なり、他の８２項目は
一致していた。即ち、本菌株の性状は旦、アトラタスの
性状と９７．６％の一致を示した。よって、本菌株はＳ
属の１種ストレプトマイセス　アトラタス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｍｙｃｅｓ　ａｔｒａｔｕｓ）に所属する１菌株であ
ると同定した。

表　　２ 生育温度範囲　　　　　　　　　　１０〜４０℃メラニ
ン色素の生成 チロシン寒天　　　　　　　　　＝（桃色）ペプトン・
イースト・鉄寒天　　− トリプトン・イースト・ブロス　− スターチの加水分解　　　　　　　　二ゼラチンの液化
　　　　　　　　　　卆脱脂牛乳のペプトン化　　　　
　　　−脱脂牛乳の凝固　　　　　　　　　　＋硝酸塩
の還元　　　　　　　　　　　十炭素源の同化 Ｄ−グルコース　　　　　　　　　＋ Ｌ−アラビノール　　　　　　　− Ｄ−キシロース　　　　　　　　＋ Ｄ−フラクトース　　　　　　　＋ シュクロース　　　　　　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　　　＋ ｌ−イノシトール　　　　　　　− Ｄ−マンニット　　　　　　　　　− ＋：あり、−：なし 培養／ＢＹ９０の生産 化合物ＢＹ９０は、ストレプトマイセス　アトラタス属
に属するＢＹ９０生産菌を適当な培地で好気的に培養し
、その培養物から目的物を採取することによって製造す
ることができる。

培地は、ＢＹ９０生産菌が利用しつる任意の栄養源を含
有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源と
してグルコース、シュークロース、マルトース、可溶性
でんぷん、グリセリンおよび油脂類などが使用でき、窒
素源として大豆粉、魚粉、綿実粕、乾燥酵母、酵母エキ
スおよび肉エキスおよびコーンステイープリカーなどの
有機物ならびにアンモニウム塩または硝酸塩、たとえば
硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモニ
ウムなどの無機物が利用できる。また、必要に応じて、
炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、燐酸
塩、重金属塩など無機塩類を添加することができる。発
酵中の発泡を抑制するために、常法に従って適当な消泡
剤、例えばシリコーン油を添加することもできる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
方法と同じく、好気的液体培養法が最も適している。培
養温度は１０〜４０℃が適当であるが、２５〜３０℃が
好ましい。この方法でＢＹ９０の生産量は、振盪培養、
通気撹拌培養ともに培養３日間で最高に達する。

このようにしてＢＹ９０の蓄積された培養物が得られる
。培養物では、ＢＹ９０は、その一部は培養濾液中に存
在するが、その大部分は菌体中に存在する。

このような培養物からＢＹ９０を採取するには、合目的
的な任意の方法が利用可能である。そのひとつの方法は
抽出の原理に基づくものであって、具体的には、培養濾
液中のＢＹ９０についてはこれを水不混和性のＢＹ９０
用溶媒（前記参照）、例えばクロロホルム、などで抽出
する方法、あるいは菌体内のＢＹ９０については濾過、
遠心分離などで得た菌体集体をメタノール、エタノール
、アセトンなどで処理して回収する方法等がある。

菌体を分離せずに培養物そのままを上記の抽出操作に付
すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配法も抽出
の範鴫に入れることができる。

培養物からＢＹ９０を採取する他のひとつの方法は吸着
の原理に基づくものであって、既に液状となっているＢ
Ｙ９０含有物、たとえば培養濾液あるいは上記のように
して抽出操作を行うことによって得られる抽出液、を対
象として、適当な吸着剤、たとえばシリカゲル、活性炭
、「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ　　（三菱化成社製）など
を用いて目的のＢＹ９０を吸着させ、その後、適当な溶
液にて溶離させることによってＢＹ９０を得ることがで
きる。このようにして得られたＢＹ９０溶液を減圧濃縮
乾固すれば、ＢＹ９０粗標品が得られる。

このようにして得られるＢＹ９０の粗標品をさらに精製
するためには、上記の抽出法および吸着法にゲル濾過法
、高速液体クロマトグラフィーなどを必要に応じて組合
せて必要回数行えばよい。

たとえば、シリカゲルなどの吸着剤、「セファデックス
ＬＨ−２０４（ファルマシア社製）などのゲル濾過剤を
用いたカラムクロマトグラフィー、”　Ｙ　Ｍ　Ｃパッ
ク」　（山村科学社製）などを用いた高速液体クロマト
グラフィーおよび向流分配法を適宜組合せて実施するこ
とができる。具体的には、たとえば、ＢＹ９０粗標品を
「セファデックスＬＨ−２０」カラムに付し、クロロホ
ルム−メタノール（１：１）混合液で活性画分を溶出さ
せ、濃縮乾固するとＢＹ９０の純品が得られる。

用途 本発明による化合物ＢＹ９０は、抗腫瘍活性を有する。

生物活性 ＢＹ９０は腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制活性を示した
。たとえばマウスＰ３８８白血病細胞を２Ｘ１０’個／
ｍｌとなるように１０％熱非働化仔牛血清を含むＲＰＭ
１１６４０培地に浮遊させ、種々の濃度のＢＹ９０−Ｏ
ＨおよびＢＹ９０−Ｈとともに３７℃で３日間培養した
後のＩＣ５０値は、それぞれ４．５および９，８μｇ／
ｒｎＩであった。

このように、本発明の化合物は、動物の腫瘍に対して抗
腫瘍性を示すことが明らかにされた。

したがって、本発明化合物は抗腫瘍剤もしくは腫瘍治療
剤として使用することができる。

抗腫瘍剤としての本発明化合物は合目的的な任意の投与
経路で、また採用投与経路によって決まる剤型で投与す
ることができる。薬剤としては、製薬上許容される担体
あるいは希釈剤で希釈された形態が普通である。

抗腫瘍剤として本発明化合物の実際に投与する場合には
、これらを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注
射する方法が代表的なもののひとつとして挙げられる。

具体的には、動物の場合には腹腔的注射、皮下注射、静
脈または動脈への血管内注射および注射による局所投与
などの方法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内
注射または注射による局所投与などの方法がある。

本発明化合物の投与量は、動物試験の結果および種々の
状況を勘案して、連続的または間欠的に投与したときに
総投与量が一定量を越えないように定められる。具体的
な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況、
たとえば年齢、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することは言うまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記指針のもととして専門医の
適量決定試験によって決定されなければならない。具体
的には、成人１日あたり０．１〜１ｇ程度である。

実験例 実施例 １）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して調製したものである。

可溶性でんぷん　　　　　　　１０ｇ ポリペプトン　　　　　　　　１０ｇ 廃糖蜜　　　　　　　　　　　１０ｇ 肉エキス　　　　　　　　　　１０ｇ 上記培地１００ｍ１を５００ｍ１の三角フラスコへ分注
し、殺菌後、ストレプトマイセス　アトラタスをスラン
トより１白金耳接種し、２７℃にて４日間振盪培養した
ものを種母とした。

２）培　養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して調製したものである。

グリセリン　　　　　　　　　８ｇ 可溶性でんぷん　　　　　　　　８ｇ 大豆粉　　　　　　　　　　　　３ｇ 魚粉　　　　　　　　　　　　　８ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　　　２ｇ 上記培地を１００ｍ１ずつ５００ｍ１三角フラスコに分
注殺菌したものへ、上記種母２ｍｌを添加し、２７℃に
て３日間、振盪培養を行った。

３）ＢＹ９０の採取 上記の条件で培養後、培養液（１０リツトル）を８００
０ｒｐｍで遠心分離し、菌体を５リツトルのア七トンで
抽出した。これを０．５リツトルに減圧濃縮後、０．５
リツトルの水と１．０リツトルの酢酸エチルを加え、酢
酸エチル抽出を行った。酢酸エチル抽出液を濃縮乾固し
て少量の酢酸エチルに再溶解後、シリカゲル（和光純薬
製ワコーゲルＣ−２００）のカラム（５ｃｍφ×５０ｃ
ｍ）に吸着させ酢酸エチルで洗浄後、酢酸エチル：メタ
ノール（１５：　１）で溶出した。

この活性画分を濃縮乾固してＢＹ９０の粗粉末を得た。

この粗粉末を少量のクロロホルムーメタノールーアンモ
ニア（２００：１０：１）の混液に溶かし、再度シリカ
ゲルカラム（３ａｍφ×２０ｃｍ）に吸着させクロロホ
ルム−メタノール−アンモニア（２００：１０：ｌ）で
展開した。活性フラクションを濃縮乾固しメタノールに
再溶解して同溶媒にてトヨパールＨＷ　−４０のゲル濾
過（３ｃｍφＸ２０ｃｍ）を行った。

ふたたび活性フラクションを濃縮乾固し、今度はメルク
社製シリカゲル６０　Ｆ　２５−を使用しプレパラティ
ブＴＬＣを酢酸エチル−メタノール（１５：　１）の条
件で行つところ、Ｒｆ値０．６０付近にＢＹ９０−ＯＨ
が、０．５４付近ＢＹ９０−Ｈが活性のあるスポットと
して検出された。それぞれのスポットをかきとり、メタ
ノールで溶出後、溶出液を濃縮乾固した。さらにそれぞ
れのスポット抽出物に対しセファデックス−ＬＨ−２０
によるゲル濾過（３ａｍφＸ２０ｃｍ）をクロロホルム
メタノール（１：　１）の条件で行ったところ、ＢＹ９
０−ＯＨ純品１０■とＢＹ９０−Ｈの純品２ｍｇが黄色
粉末として得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、メタノール中（実線）及び０．０１規定水酸
化す）　＋Ｊウムーメタノール中（破線）でのＢＹ９０
−ＯＨの紫外吸収スペクトルを模写したものである。 第２図は、メタノール中でのＢＹ９０−Ｈの紫外吸収ス
ペクトルを模写したものである。 第３図は、ＢＹ９０＝ＯＨのＫＢｒディスク法による赤
外吸収スペクトルを模写したものである。 第４図は、ＢＹ９０−ＨのＫＢｒディスク法による赤外
吸収スペクトルを模写したものである。 第５図は、ＢＹ９０−ＯＨの重メタノール中における４
００メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写し
たものである。 第６図は、ＢＹ９０−Ｈの重メタノール中における４０
０メガヘルツプロトン核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。 第７図は、ＢＹ９０−ＯＨの重メタノール中における１
００メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写し
たものである。 第８図は、ＢＹ９０−Ｈの重メタノール中における１０
０メガヘルツ炭素１３核磁気共鳴スペクトルを模写した
ものである。 第６図 手続補正書 ３．１０．２８− 平成　　年　　月　　日 ｌ、事件の表示　　　平成２年特許願第２８５７０６号
３、補正をする者 事件との関係　　出願人 名　称　　　ハウス食品工業株式会社 ４、代理人 ５、補正命令の日付　　　自　　　　発１、　特許請求
の範囲を別紙のように訂正する。 ２、　明細書第４頁の式（１）を次のように訂正する。 「 特許請求の範囲 （１）　　下記一般式（Ｉ）て表わされるアントラキノ
ン誘導体 ’ＯＨ （式中、Ｒは水素原子又はヒドロキシル基を示す。） （２）請求項（１）記載の一般式（ｒ）で表わされるア
ントラキノン誘導体を有効成分とする抗腫瘍剤。 （３）ストレプトマイセス属に属し、請求項（１）記載
の一般式（１）で表わされるアントラキノン誘導体の生
産能を有する菌株を好気的に培養し、その培養物から該
アントラキノン誘導体を得ることを特徴とする請求項（
１）記載の一般式（Ｉ）で表わされるアントラキノン誘
導体の製造方法。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式（ I ）で表わされるアントラキノン
   誘導体。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ I ） （式中、Ｒは水素原子又はヒドロキシル基を示す。）
2. （２）請求項（１）記載の一般式（ I ）で表わされる
   アントラキノン誘導体を有効成分とする抗腫瘍剤。
3. （３）ストレプトマイセス属に属し、請求項（１）記載
   の一般式（ I ）で表わされるアントラキノン誘導体の
   生産能を有する菌株を好気的に培養し、その培養物から
   該アントラキノン誘導体を得ることを特徴とする請求項
   （１）記載の一般式（ I ）で表わされるアントラキノ
   ン誘導体の製造方法。