JPH04164069A - 微生物を利用した光学活性体の製造方法 - Google Patents
微生物を利用した光学活性体の製造方法Info
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- JPH04164069A JPH04164069A JP29137790A JP29137790A JPH04164069A JP H04164069 A JPH04164069 A JP H04164069A JP 29137790 A JP29137790 A JP 29137790A JP 29137790 A JP29137790 A JP 29137790A JP H04164069 A JPH04164069 A JP H04164069A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
（式中、Ｘは同−又は異なって／”％ロゲン原子又は低
級アルキル基を、Ｒは低級アルキル基を、ｍは０〜３の
整数を示す。）で表されるイソニコチン酸アニリド誘導
体を基質として、これを一般式（式中、Ａ及びＡ′は互
いに異なって水素原子または水酸基を、Ｘ、 Ｒ及びｍ
は前記と同一の意味を示す。）で表される化合物に不斉
的に合成する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属
に属する微生物を一般式（Ｉ）で表される化合物に接触
させて一般式（ＴＩ）で表される化合物に変換し、次い
でこの一般式（ＩＩ）で表される化合物を採取すること
を特徴とする一般式（ＩＩ）で表される光学活性化合物
の製造方法に関する。
級アルキル基を、Ｒは低級アルキル基を、ｍは０〜３の
整数を示す。）で表されるイソニコチン酸アニリド誘導
体を基質として、これを一般式（式中、Ａ及びＡ′は互
いに異なって水素原子または水酸基を、Ｘ、 Ｒ及びｍ
は前記と同一の意味を示す。）で表される化合物に不斉
的に合成する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属
に属する微生物を一般式（Ｉ）で表される化合物に接触
させて一般式（ＴＩ）で表される化合物に変換し、次い
でこの一般式（ＩＩ）で表される化合物を採取すること
を特徴とする一般式（ＩＩ）で表される光学活性化合物
の製造方法に関する。
更に本発明は、一般式（ｍ）
Ｒ′
（式中、Ｒ′は同−又は異なって／’％ロゲン原子、水
酸基又はアミノ基を、Ｒ′はフェニル基、ハロゲン置換
フェニル基又は低級アルキル基を、ｎは合せは、一般式
（ＩＩＩ）の化合物を還元したときに、ｏ−（の炭素原
子が不斉炭素となる組合せに限るものとする。但し、２
−アミノ−５−クロロベンゾフェノンを除く。）で表さ
れるベンゾフェノン誘導体を基質として、これを一般式
（ＩＶ）Ｘ′ ｎ Ｒ′ （式中、Ａ及びＡ′は互いに異なって水素原子又は水酸
基を、Ｘ’ 、Ｒ’及びｎは前記と同一の意味を示す。
酸基又はアミノ基を、Ｒ′はフェニル基、ハロゲン置換
フェニル基又は低級アルキル基を、ｎは合せは、一般式
（ＩＩＩ）の化合物を還元したときに、ｏ−（の炭素原
子が不斉炭素となる組合せに限るものとする。但し、２
−アミノ−５−クロロベンゾフェノンを除く。）で表さ
れるベンゾフェノン誘導体を基質として、これを一般式
（ＩＶ）Ｘ′ ｎ Ｒ′ （式中、Ａ及びＡ′は互いに異なって水素原子又は水酸
基を、Ｘ’ 、Ｒ’及びｎは前記と同一の意味を示す。
但し、２−アミノ−５−クロロベンゾヒトロールを除（
。）で表されるベンゾヒトロール誘導体に不斉的に合成
する能力を有するジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅ
ａ）属に属する微生物を一般式（ｍ）で示される化合物
に接触させて一般式（ＴＶ）で表される化合物に変換し
、次いでこの一般式（ＩＶ）で表される化合物を採取す
ることを特徴とする一般式（ＩＶ）で表される光学活性
化合物の製造方法に関するものである。
。）で表されるベンゾヒトロール誘導体に不斉的に合成
する能力を有するジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅ
ａ）属に属する微生物を一般式（ｍ）で示される化合物
に接触させて一般式（ＴＶ）で表される化合物に変換し
、次いでこの一般式（ＩＶ）で表される化合物を採取す
ることを特徴とする一般式（ＩＶ）で表される光学活性
化合物の製造方法に関するものである。
一般式（Ｖ）
＼
で示される化合物は、優れた植物生長調節作用を示し、
殊に一般式（ＩＩ）で示される光学活性体は、植物生長
調節剤とする際、活性本体として利用され得る有用な物
質である。
殊に一般式（ＩＩ）で示される光学活性体は、植物生長
調節剤とする際、活性本体として利用され得る有用な物
質である。
また、一般式（ＩＶ）で示されるベンゾヒトロール誘導
体は、光学活性を必要とする医薬、農薬（例えば、植物
生長調節剤）等の合成中間体として広く利用され得る極
めて有用な物質である。
体は、光学活性を必要とする医薬、農薬（例えば、植物
生長調節剤）等の合成中間体として広く利用され得る極
めて有用な物質である。
［従来の技術］
これまで、一般式（ＩＩ）あるいは（ＩＶ）で表される
光学活性化合物の製造方法としては、対応するラセミ化
合物から、Ｌ−酒石酸を用いて光学分割する方法が行わ
れていたが、微生物を用いた不斉合成法によりこれらの
化合物を得る製造方法は知られていない。
光学活性化合物の製造方法としては、対応するラセミ化
合物から、Ｌ−酒石酸を用いて光学分割する方法が行わ
れていたが、微生物を用いた不斉合成法によりこれらの
化合物を得る製造方法は知られていない。
［発明が解決しようとする課題］
一般式（ＩＩ）及び（ＩＶ）で示される化合物を得るた
めに、酒石酸による光学分割法を用いると、光学純度や
収率がいずれも低く、また工程数も多く、更には再結晶
を２回行なわなければならない等の煩雑な操作が必要と
なるため、設備、コスト面からみても工業的に非常に不
利であった。
めに、酒石酸による光学分割法を用いると、光学純度や
収率がいずれも低く、また工程数も多く、更には再結晶
を２回行なわなければならない等の煩雑な操作が必要と
なるため、設備、コスト面からみても工業的に非常に不
利であった。
［課題を解決するための手段］
本発明者等は、これらの事情に鑑み、一般式（ｎ）及び
（ＩＶ）で示される化合物を工業的に優れた製法で得る
べく鋭意研究を重ねた結果、一般式（Ｉ）で表される化
合物を基質として、これを一般式（ｎ）で表される化合
物に不斉的還元する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅ
ａ）属に属する微生物を一般式（Ｉ）で表される化合物
に接触させることにより、一般式（ＩＩ）で表される光
学活性化合物を、高光学純度、高収率、短工程で得られ
ることを見出した。更に、本発明者等は、一般式（ｍ）
で表される化合物を基質として、これを一般式（ＩＶ）
で表される化合物に不斉的に合成する能力を有するジュ
ードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属に属する微生物
を一般式（ＩＩＩ）で表される化合物に接触させること
により、一般式（ＩＶ）で表される化合物を、高光学純
度、高収率、短工程で得られることをも見出した。本発
明はこれらの知見に基づいて完成されたものである。
（ＩＶ）で示される化合物を工業的に優れた製法で得る
べく鋭意研究を重ねた結果、一般式（Ｉ）で表される化
合物を基質として、これを一般式（ｎ）で表される化合
物に不斉的還元する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅ
ａ）属に属する微生物を一般式（Ｉ）で表される化合物
に接触させることにより、一般式（ＩＩ）で表される光
学活性化合物を、高光学純度、高収率、短工程で得られ
ることを見出した。更に、本発明者等は、一般式（ｍ）
で表される化合物を基質として、これを一般式（ＩＶ）
で表される化合物に不斉的に合成する能力を有するジュ
ードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属に属する微生物
を一般式（ＩＩＩ）で表される化合物に接触させること
により、一般式（ＩＶ）で表される化合物を、高光学純
度、高収率、短工程で得られることをも見出した。本発
明はこれらの知見に基づいて完成されたものである。
次に本発明の内容について説明する。
一般式（ＩＩ）で表される化合物を製造する際の基質と
なる一般式（Ｉ）で示される化合物は公知の植物生長調
節剤であり、例えば特開昭５８−４７６７号、特開昭５
８−４１８６９号、特開昭５９−１２２４０２号又は特
開昭５９−１２２４６９号等に記載された方法で得るこ
とができる。
なる一般式（Ｉ）で示される化合物は公知の植物生長調
節剤であり、例えば特開昭５８−４７６７号、特開昭５
８−４１８６９号、特開昭５９−１２２４０２号又は特
開昭５９−１２２４６９号等に記載された方法で得るこ
とができる。
本発明による一般式（ＩＩ）で示される化合物の製造に
用いられる微生物は、一般式（Ｉ）で示される化合物を
不斉的に還元する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎｄ
ｌｄａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ
）属に属する微生物であり、これらの微生物のうちＣａ
ｎｄｌｄａ ｇｌｏｂｏｓａ （ＩＦｏ ０６５１）又
はＰｓｅｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ （ＩＰｏ
６６９１）が特に好ましい。
用いられる微生物は、一般式（Ｉ）で示される化合物を
不斉的に還元する能力を有するキャンディダ（Ｃａｎｄ
ｌｄａ）属又はジュードブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ
）属に属する微生物であり、これらの微生物のうちＣａ
ｎｄｌｄａ ｇｌｏｂｏｓａ （ＩＦｏ ０６５１）又
はＰｓｅｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ （ＩＰｏ
６６９１）が特に好ましい。
これらの微生物の培養には、通常これらの微生物が資化
しうる栄養源であれば何でも使用しうる。
しうる栄養源であれば何でも使用しうる。
例えばグルコース、スクロース、フルクトース等の炭水
化物、エタノール、グリセロール等のアルコール類、パ
ラフィン等の炭化水素、酢酸、プロピオン酸等の有機酸
、大豆油等の炭素源またはこれらの混合物、酵母エキス
、ペプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、硫安、
アンモニア等の含窒素無機もしくは有機栄養源、リン酸
塩、マグネシウム、鉄、マンガン、カリウム等の無機栄
養源およびビオチン、チアミン等のビタミン類を適宜配
合した通常の培地を用いることができる。特に、Ｃａｎ
ｄｉｄａ属酵母は合成培地であるツアペックドックス培
地（Ｃｚａｐｅｋ−Ｄｏｘ ａｇａｒ： ショ糖、 Ｎ
ａ Ｎ Ｏ３。
化物、エタノール、グリセロール等のアルコール類、パ
ラフィン等の炭化水素、酢酸、プロピオン酸等の有機酸
、大豆油等の炭素源またはこれらの混合物、酵母エキス
、ペプトン、肉エキス、コーンスチープリカー、硫安、
アンモニア等の含窒素無機もしくは有機栄養源、リン酸
塩、マグネシウム、鉄、マンガン、カリウム等の無機栄
養源およびビオチン、チアミン等のビタミン類を適宜配
合した通常の培地を用いることができる。特に、Ｃａｎ
ｄｉｄａ属酵母は合成培地であるツアペックドックス培
地（Ｃｚａｐｅｋ−Ｄｏｘ ａｇａｒ： ショ糖、 Ｎ
ａ Ｎ Ｏ３。
Ｋ２ＨＰＯ４１ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０，ＫＣρ。
Ｆｅ５０ ・７Ｈ２０，及び蒸留水等からなる合成培
地）において活発に不斉合成を行なうため、コスト面を
勘案すると非常に有利である。培養方法としては、ｐＨ
を６前後に調整した液体培地で好気的に、２０〜３０°
Ｃ１好ましくは２７°Ｃ前後で培養する。微生物は３０
ごとに継代したものを用いるのが好ましい。
地）において活発に不斉合成を行なうため、コスト面を
勘案すると非常に有利である。培養方法としては、ｐＨ
を６前後に調整した液体培地で好気的に、２０〜３０°
Ｃ１好ましくは２７°Ｃ前後で培養する。微生物は３０
ごとに継代したものを用いるのが好ましい。
一般式（ｎ）で示される光学活性化合物の不斉合成反応
は、基質を培地に添加してから、オートクレーブ滅菌（
１２１℃、１５分間）した後、微生物を植菌して１〜２
０日間培養するかあるいは、基質を添加せずに前培養し
、次いで基質を添加してさらに本培養を行うことにより
進行する。ここにおいて前培養は不斉合成活性が最も高
くなるまで行い、通常３〜１０日、好ましくは５〜７日
で行う。また本培養は１〜３日間が好ましい。またこの
場合、基質を加える際、必ずしも無菌的に行う必要はな
い。
は、基質を培地に添加してから、オートクレーブ滅菌（
１２１℃、１５分間）した後、微生物を植菌して１〜２
０日間培養するかあるいは、基質を添加せずに前培養し
、次いで基質を添加してさらに本培養を行うことにより
進行する。ここにおいて前培養は不斉合成活性が最も高
くなるまで行い、通常３〜１０日、好ましくは５〜７日
で行う。また本培養は１〜３日間が好ましい。またこの
場合、基質を加える際、必ずしも無菌的に行う必要はな
い。
反応によって生成した一般式（ｎ）で示される光学活性
イソニコチン酸アニリド誘導体の採取は、反応液から直
接あるいは菌体分離後、酢酸エチル、ジクロロメタン等
の溶剤で抽出し、脱水後シリカゲルクロマトグラフィー
で精製することにより高純度の目的化合物が容易に得ら
れる。また、一般式（ｎ）で得られる化合物の光学純度
は、光学活性化合物分割カラムを装着した高速液体クロ
マトグラフィーにより決定することができる。
イソニコチン酸アニリド誘導体の採取は、反応液から直
接あるいは菌体分離後、酢酸エチル、ジクロロメタン等
の溶剤で抽出し、脱水後シリカゲルクロマトグラフィー
で精製することにより高純度の目的化合物が容易に得ら
れる。また、一般式（ｎ）で得られる化合物の光学純度
は、光学活性化合物分割カラムを装着した高速液体クロ
マトグラフィーにより決定することができる。
一方、本発明による一般式（ＴＶ）で示される光学活性
化合物の製造に用いられる微生物は、一般式（ｍ）で示
される化合物を不斉的に還元する能力を有するジュード
ブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属に属する微生物であ
り、とりわけＰｓｅｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ
が好ましい。この微生物は前記したように、ＩＰ０６６
Ｈの番号で寄託されている。
化合物の製造に用いられる微生物は、一般式（ｍ）で示
される化合物を不斉的に還元する能力を有するジュード
ブレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ）属に属する微生物であ
り、とりわけＰｓｅｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ
が好ましい。この微生物は前記したように、ＩＰ０６６
Ｈの番号で寄託されている。
Ｐｓｃｕｄｏｐ ｌ ｃａ属の微生物の培養には、上述
した通常の培地を用いることができる。培養方法として
は、ｐｌ＋を６前後に調整した液体培地で好気的に、２
０〜３０℃、好ましくは２７℃前後で振とう培養を行な
う。微生物は３日ごとに継代したものを用いる。
した通常の培地を用いることができる。培養方法として
は、ｐｌ＋を６前後に調整した液体培地で好気的に、２
０〜３０℃、好ましくは２７℃前後で振とう培養を行な
う。微生物は３日ごとに継代したものを用いる。
一般式（ＴＶ）で示される化合物の不斉合成反応は、上
記の一般式（ＩＩ）で示される化合物の不斉合成反応の
場合と全く同様にして行なうことができる。
記の一般式（ＩＩ）で示される化合物の不斉合成反応の
場合と全く同様にして行なうことができる。
反応によって生成した一般式（［）で示される光学活性
ベンゾヒトロール誘導体の採取は反応液から直接あるい
は菌体分離後、酢酸エチル、ジクロロメタン等の溶剤で
抽出し、脱水後シリカゲルクロマトグラフィーで精製す
ることにより高純度の目的化合物が容易に得られる。ま
た、本発明により得られる一般式（ＩＩ）で示されるベ
ンゾヒトロール誘導体の光学純度は、光学活性体分割用
カラムを装着した高速液体クロマトグラフィーにより決
定することができる。
ベンゾヒトロール誘導体の採取は反応液から直接あるい
は菌体分離後、酢酸エチル、ジクロロメタン等の溶剤で
抽出し、脱水後シリカゲルクロマトグラフィーで精製す
ることにより高純度の目的化合物が容易に得られる。ま
た、本発明により得られる一般式（ＩＩ）で示されるベ
ンゾヒトロール誘導体の光学純度は、光学活性体分割用
カラムを装着した高速液体クロマトグラフィーにより決
定することができる。
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが
、本発明はこれらに限定されるわけではない。
、本発明はこれらに限定されるわけではない。
（一般式（Ｉｆ）で示される化合物の製造例）実施例
１ 蒸留水１ρ中にグルコース４０ｇ、ポリペプトン１０ｇ
１酵母エキス５ｇＳＫＨ２Ｐ０４５ｇ。
１ 蒸留水１ρ中にグルコース４０ｇ、ポリペプトン１０ｇ
１酵母エキス５ｇＳＫＨ２Ｐ０４５ｇ。
Ｍ ｇ Ｓ Ｏ・７ Ｈ２０２ｇを加えた液体培地２０
ｍ１に４−クロロ−２−イソプロピルカルボニルイソニ
コチン酸アニリド結晶を５ｍｇ加え、１２１℃、１５分
間でオートクレーブ滅菌した後、Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ
ｔｒｉｆｏｌｉｉを植菌し、２７℃で７日間前培養を行
った。
ｍ１に４−クロロ−２−イソプロピルカルボニルイソニ
コチン酸アニリド結晶を５ｍｇ加え、１２１℃、１５分
間でオートクレーブ滅菌した後、Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ
ｔｒｉｆｏｌｉｉを植菌し、２７℃で７日間前培養を行
った。
この培養液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マグネシウムで
乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた反応混合物をシ
リカゲルクロマトグラフィー〔溶出溶媒＝ヘキサン：酢
酸エチル（３： １）） で分ｍすることにより、４−
クロロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）
イソニコチン酸アニリド３．１ｍｇを得た。これを高速
液体クロマトグラフィ（カラム：タイセ／Ｌ４ｆ−製ｃ
ＩＩＩＲＡＬｃＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒＝ヘキサン：エタ
ノール（１９： １） 、流速：１ｍｌ／ａ＋ｉｎ）に
より分析を行うと、光学異性体が１５．３０９分と１７
．０８２分の保持時間で分離され、光学純度は９９％ｅ
、ｅ、以上であった。
乾燥し、溶媒を減圧留去した。得られた反応混合物をシ
リカゲルクロマトグラフィー〔溶出溶媒＝ヘキサン：酢
酸エチル（３： １）） で分ｍすることにより、４−
クロロ−２−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）
イソニコチン酸アニリド３．１ｍｇを得た。これを高速
液体クロマトグラフィ（カラム：タイセ／Ｌ４ｆ−製ｃ
ＩＩＩＲＡＬｃＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒＝ヘキサン：エタ
ノール（１９： １） 、流速：１ｍｌ／ａ＋ｉｎ）に
より分析を行うと、光学異性体が１５．３０９分と１７
．０８２分の保持時間で分離され、光学純度は９９％ｅ
、ｅ、以上であった。
実施例 ２
蒸留水１ρ中にシュクロース３０ ｇ −Ｋ Ｎ Ｏ３
３ｇ、に２ＨＰＯ４１ｇＳＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，５
ｇ。
３ｇ、に２ＨＰＯ４１ｇＳＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，５
ｇ。
ＫＣρ ０．５ｇ５Ｆ ｅ Ｓ ０ ・７ Ｈ２００
，（ｌｌｆを加えた液体培地２０ｍ１に４−クロロ−２
−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸アニリド結晶
を１０ｍｇ加えて、１２１℃、１５分間でオートクレー
ブ滅菌した後、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌｏｂｏｓａを植菌
し、２７℃で７日間前培養を行った。この培養液を実施
例１と同様に処理し、４−クロロ−２−（１−ヒドロキ
シ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸アニリド６．
９ｎｇを得た。・これを高速液体クロマトグラフィー〔
カラム：ダイセル社製ＣＨＩ ＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶
出溶媒＝ヘキサン：エタノール（１９：１） 、流速：
１ｍｌ／ｌｌ１ｉｎ）により分析を行うと、光学異性体
か１５．３０９分と１７．０８２分の保持時間で分離さ
れ、光学純度はり９％ｅ、ｅ、以上であった。
，（ｌｌｆを加えた液体培地２０ｍ１に４−クロロ−２
−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸アニリド結晶
を１０ｍｇ加えて、１２１℃、１５分間でオートクレー
ブ滅菌した後、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌｏｂｏｓａを植菌
し、２７℃で７日間前培養を行った。この培養液を実施
例１と同様に処理し、４−クロロ−２−（１−ヒドロキ
シ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸アニリド６．
９ｎｇを得た。・これを高速液体クロマトグラフィー〔
カラム：ダイセル社製ＣＨＩ ＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶
出溶媒＝ヘキサン：エタノール（１９：１） 、流速：
１ｍｌ／ｌｌ１ｉｎ）により分析を行うと、光学異性体
か１５．３０９分と１７．０８２分の保持時間で分離さ
れ、光学純度はり９％ｅ、ｅ、以上であった。
実施例 ３
蒸留水１Ω中にグルコース４０ｇ１ポリペプトン１０ｇ
１酵母エキス５ｇ、Ｋｎ２Ｐ０４５ｇ、Ｍｇ５Ｏ−７Ｈ
２０２ｇを加えた液体培地２０ｍ１にＰｓｅｕｄｏｐｌ
ｅａ ｔｒ１ｆｏ目ｉを植菌し、２７℃で５日間前培養
を行った。ここに基質として４−クロロ−５，６−シメ
チルー２−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸アニ
リド５ｍｇを加え、１日培養したところ培養液２０ｍ１
あたり、４−クロロ−５，６−シメチルー２− （１〜
ヒドロキシ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸アニ
リド１．８ｍｇを得た。これを実施例１と同様の条件で
高速液体クロマトグラフィーにより分析を行うと、光学
異性体が１８．８２５分と２４．５５６分の保持時間で
分離され、光学純度は９９％ｅ、ｅ、以上であった。
１酵母エキス５ｇ、Ｋｎ２Ｐ０４５ｇ、Ｍｇ５Ｏ−７Ｈ
２０２ｇを加えた液体培地２０ｍ１にＰｓｅｕｄｏｐｌ
ｅａ ｔｒ１ｆｏ目ｉを植菌し、２７℃で５日間前培養
を行った。ここに基質として４−クロロ−５，６−シメ
チルー２−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸アニ
リド５ｍｇを加え、１日培養したところ培養液２０ｍ１
あたり、４−クロロ−５，６−シメチルー２− （１〜
ヒドロキシ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸アニ
リド１．８ｍｇを得た。これを実施例１と同様の条件で
高速液体クロマトグラフィーにより分析を行うと、光学
異性体が１８．８２５分と２４．５５６分の保持時間で
分離され、光学純度は９９％ｅ、ｅ、以上であった。
実施例 ４
蒸留水１１中にシュクロース３０ｇＳＫＮＯ３３ｇ Ｓ
Ｋ２ ＨＰ ０４１ ｇ、ＭｇＳＯ４φ７Ｈ２００，５
ｇ−ＫＣｌ） ０．５ｇ 、 Ｆ ｅ Ｓ Ｏ・７
Ｈ２００，Ｏｌｇを加えた液体培地２０ｍ１にＣａｎｄ
ｉｄａ ｇｌｏｂｏｓａを植菌し、２７℃で５日間前培
養を行った。ここに基質として４−クロロ−５，６−シ
メチルー２−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸ア
ニリド５ ｍｇを加え、１日培養したところ培養液２０
ｍ１あたり、４−クロロ−５，６−シメチルー２− （
１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸
アニリド０．９ｍｇを得た。これを実施例１と同様の条
件で高速液体クロマトグラフィーにより分析を行うと、
光学異性体が１８．８２５分と２４．５５８分の保持時
間？−＋→鮒六れ、光学純度は９９％ｅ、ｅ、以上であ
った〇（一般式（ｒＶ）で示される化合物の製造例）実
施例 ５ 蒸留水１ρ中にグルコース４０ｇ１ポリペプトン１０ｇ
１酵母エキス５ ｇ １Ｋ Ｈ２Ｐ Ｏ４５ｇ １Ｍｇ
５Ｏ−７７Ｈ２Ｏ２を加えた液体培地２０ｍ１にＰｓｅ
ｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉを植菌し、２７℃で
５日間前培養を行なった。これに、２−クロロフェニル
−４′−クロロフェニルケトン１０ｍｇを加え、更に１
日培養した。この培養液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マ
グネシウムで乾燥した後溶媒を減圧下留去した。得られ
た反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶
媒＝ヘキサン：酢酸エチル（３：１））で分離すること
により、２−クロルフェニル−４′−クロルフェニル−
メタノールが培養液２０ｍ１当り ９ 、５ ｍｇ得ら
れた。これを高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダ
イセル社製ＣＩＩＩＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒＝ヘ
キサン：エタノール（１９：１） 、流速：１ｍｌ／分
）により分析を行なうと、光学異性体が８．５分と１６
，９分の保持時間で分離され、光学純度は後者が６７．
８％ｅ、Ｑ、であった。
Ｋ２ ＨＰ ０４１ ｇ、ＭｇＳＯ４φ７Ｈ２００，５
ｇ−ＫＣｌ） ０．５ｇ 、 Ｆ ｅ Ｓ Ｏ・７
Ｈ２００，Ｏｌｇを加えた液体培地２０ｍ１にＣａｎｄ
ｉｄａ ｇｌｏｂｏｓａを植菌し、２７℃で５日間前培
養を行った。ここに基質として４−クロロ−５，６−シ
メチルー２−イソプロピルカルボニルイソニコチン酸ア
ニリド５ ｍｇを加え、１日培養したところ培養液２０
ｍ１あたり、４−クロロ−５，６−シメチルー２− （
１−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）イソニコチン酸
アニリド０．９ｍｇを得た。これを実施例１と同様の条
件で高速液体クロマトグラフィーにより分析を行うと、
光学異性体が１８．８２５分と２４．５５８分の保持時
間？−＋→鮒六れ、光学純度は９９％ｅ、ｅ、以上であ
った〇（一般式（ｒＶ）で示される化合物の製造例）実
施例 ５ 蒸留水１ρ中にグルコース４０ｇ１ポリペプトン１０ｇ
１酵母エキス５ ｇ １Ｋ Ｈ２Ｐ Ｏ４５ｇ １Ｍｇ
５Ｏ−７７Ｈ２Ｏ２を加えた液体培地２０ｍ１にＰｓｅ
ｕｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉを植菌し、２７℃で
５日間前培養を行なった。これに、２−クロロフェニル
−４′−クロロフェニルケトン１０ｍｇを加え、更に１
日培養した。この培養液を酢酸エチルで抽出し、硫酸マ
グネシウムで乾燥した後溶媒を減圧下留去した。得られ
た反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶
媒＝ヘキサン：酢酸エチル（３：１））で分離すること
により、２−クロルフェニル−４′−クロルフェニル−
メタノールが培養液２０ｍ１当り ９ 、５ ｍｇ得ら
れた。これを高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダ
イセル社製ＣＩＩＩＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒＝ヘ
キサン：エタノール（１９：１） 、流速：１ｍｌ／分
）により分析を行なうと、光学異性体が８．５分と１６
，９分の保持時間で分離され、光学純度は後者が６７．
８％ｅ、Ｑ、であった。
実施例 ６
実施例５の２−クロロフェニル−４′−クロロフェニル
ケトンの代わりに、基質として２−ヒドロキシベンゾフ
ェノンを５ｍｇ用いて、同様に反応させたところ、培養
液２０ｍ１当り、２−ヒドロキシベンゾヒドロールを４
．５ｍｇ得た。これを高速液体クロマトグラフィー（カ
ラム：ダイセル社製ＣＩＩＩＩンＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶
出溶媒−ヘキサン：エタノール（１０；１）、流速：１
ｍｌ／分）により分析を行なうと、光学異性体が１１，
２分と１３．０分の保持時間で分離され、光学純度は前
者が９９％ｅ、ｅ、であった。
ケトンの代わりに、基質として２−ヒドロキシベンゾフ
ェノンを５ｍｇ用いて、同様に反応させたところ、培養
液２０ｍ１当り、２−ヒドロキシベンゾヒドロールを４
．５ｍｇ得た。これを高速液体クロマトグラフィー（カ
ラム：ダイセル社製ＣＩＩＩＩンＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶
出溶媒−ヘキサン：エタノール（１０；１）、流速：１
ｍｌ／分）により分析を行なうと、光学異性体が１１，
２分と１３．０分の保持時間で分離され、光学純度は前
者が９９％ｅ、ｅ、であった。
実施例 ７
実施ｆｆ＋Ｊ ５の２−クロロフェニル−４′−クロロ
フェニルケトンの代わりに、基質として２−ヒドロキシ
−５−クロロベンゾフェノンを５ｍｇ用いて、同様に反
応させたところ、培養液２０ｍ１当り、２−ヒドロキシ
−５−クロロベンゾヒトロールを４．９Ｉｌ１ｇ得た。
フェニルケトンの代わりに、基質として２−ヒドロキシ
−５−クロロベンゾフェノンを５ｍｇ用いて、同様に反
応させたところ、培養液２０ｍ１当り、２−ヒドロキシ
−５−クロロベンゾヒトロールを４．９Ｉｌ１ｇ得た。
これを高速液体クロマ！・グラフィー（カラム；ダイセ
ル社製ＣＩＩＩＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒−へキサ
ン：エタノール＋ｉｏ： １１ 、流速：１ｍｌ／分）
により分析を行なうと、光学異性体が１２．７分と１３
．６分の保持時間で分離され、光学純度は前者が９９％
ｅ、ｅ、であった。
ル社製ＣＩＩＩＲＡＬＣＥＬ−ＯＤ、溶出溶媒−へキサ
ン：エタノール＋ｉｏ： １１ 、流速：１ｍｌ／分）
により分析を行なうと、光学異性体が１２．７分と１３
．６分の保持時間で分離され、光学純度は前者が９９％
ｅ、ｅ、であった。
実施例 ８
実施例５の２−クロロフェニル−４′−クロロフェニル
ケトンの代わりに、基質として２−イソプロピルカルボ
ニル−５−タロロアニリンを５ｍｇ用いて、同様に反応
させたところ、培養液２０ｍ１当り、２− （１−ヒド
ロキシ−２−メチルプロピル）−５−クロロフェニルを
０．３ａ＋ｇ得た。これを高速液体クロマトグラフィー
（カラム：ダイセル社製Ｃ）ｌ ｌ ＲＡＬＣＥＬ−Ｏ
Ｄ、溶出溶媒＝ヘキサン：イソプロパツール（１０：１
）、流速：１ｍｌ／分）により分析を行なうと、光学異
性体が１３．０分と１４．６分の保持時間で分離され、
光学純度は前者が９９％ｅ、ｅ。
ケトンの代わりに、基質として２−イソプロピルカルボ
ニル−５−タロロアニリンを５ｍｇ用いて、同様に反応
させたところ、培養液２０ｍ１当り、２− （１−ヒド
ロキシ−２−メチルプロピル）−５−クロロフェニルを
０．３ａ＋ｇ得た。これを高速液体クロマトグラフィー
（カラム：ダイセル社製Ｃ）ｌ ｌ ＲＡＬＣＥＬ−Ｏ
Ｄ、溶出溶媒＝ヘキサン：イソプロパツール（１０：１
）、流速：１ｍｌ／分）により分析を行なうと、光学異
性体が１３．０分と１４．６分の保持時間で分離され、
光学純度は前者が９９％ｅ、ｅ。
であった。
［発明の効果］
本発明によれば、植物生長調節剤として有用な一般式（
ＩＩ）で示される光学活性イソニコチン酸アニリド誘導
体及び医薬、農薬（例えば、植物生長調節剤）等の合成
中間体として広く利用し得る一般式（ＴＶ）で示される
光学活性ベンゾヒトロール誘導体を、極めて高光学純度
かつ高収率に製造でき、その上工程数も少ないことから
、工業的に優れた光学活性体の製造が可能となった。
ＩＩ）で示される光学活性イソニコチン酸アニリド誘導
体及び医薬、農薬（例えば、植物生長調節剤）等の合成
中間体として広く利用し得る一般式（ＴＶ）で示される
光学活性ベンゾヒトロール誘導体を、極めて高光学純度
かつ高収率に製造でき、その上工程数も少ないことから
、工業的に優れた光学活性体の製造が可能となった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｘは同一又は異なってハロゲン原子又は低級ア
ルキル基を、Ｒは低級アルキル基を、ｍは０〜３の整数
を示す。）で表されるイソニコチン酸アニリド誘導体を
基質として、これを一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ａ及びＡ′は互いに異なって水素原子または水
酸基を、Ｘ、Ｒ及びｍは前記と同一の意味を示す。）で
表される化合物に不斉的に合成する能力を有するキャン
ディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属又はシュードプレア（Ｐｓ
ｅｕｄｏｐｌｅａ）属に属する微生物を一般式（ I ）
で表される化合物に接触させて一般式（II）で表される
化合物に変換し、次いでこの一般式（II）で表される化
合物を採取することを特徴とする一般式（II）で表され
る光学活性化合物の製造方法。 ２、一般式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｘ′は同一又は異なってハロゲン原子、水酸基
又はアミノ基を、Ｒ′はフェニル基、ハロゲン置換フェ
ニル基又は低級アルキル基を、ｎは１〜３の整数を示し
、基▲数式、化学式、表等があります▼と基Ｒ′との組
合せは、一般式（III）の化合物を還元したときに、▲
数式、化学式、表等があります▼の炭素原子が不斉炭素
となる組合せに限るものとする。但し、２−アミノ−５
−クロロベンゾフェノンを除く。）で表されるベンゾフ
ェノン誘導体を基質として、これを一般式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中、Ａ及びＡ′は互いに異なって水素原子又は水酸
基を、Ｘ′、Ｒ′及びｎは前記と同一の意味を示す。但
し、２−アミノ−５−クロロベンゾヒドロールを除く。 ）で表されるベンゾヒドロール誘導体に不斉的に合成す
る能力を有するシュードプレア（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅａ
）属に属する微生物を一般（IV）で表される化合物に変
換し、次いでこの一般式（IV）で表される化合物を採取
することを特徴とする一般式（IV）で表される光学活性
化合物の製造方法。 ３、微生物がキャンディダ・グロボーサ（Ｃａｎｄｉｄ
ａｇｌｏｂｏｓａ、ＩＦＯ０６５１）である請求項１記
載の製造方法。 ４、微生物がシュードプレア・トリフォリィ（Ｐｓｅｕ
ｄｏｐｌｅａ ｔｒｉｆｏｌｉｉ、ＩＦＯ６６９１）で
ある請求項１又は２記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29137790A JP2977885B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 微生物を利用した光学活性体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29137790A JP2977885B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 微生物を利用した光学活性体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04164069A true JPH04164069A (ja) | 1992-06-09 |
| JP2977885B2 JP2977885B2 (ja) | 1999-11-15 |
Family
ID=17768132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29137790A Expired - Lifetime JP2977885B2 (ja) | 1990-10-29 | 1990-10-29 | 微生物を利用した光学活性体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2977885B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001005996A1 (en) * | 1999-07-21 | 2001-01-25 | Kaneka Corporation | Process for producing optically active pyridineethanol derivatives |
-
1990
- 1990-10-29 JP JP29137790A patent/JP2977885B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001005996A1 (en) * | 1999-07-21 | 2001-01-25 | Kaneka Corporation | Process for producing optically active pyridineethanol derivatives |
| US7329518B2 (en) | 1999-07-21 | 2008-02-12 | Kaneka Corporation | Enzyme for producing optically active pyridineethanol derivatives |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2977885B2 (ja) | 1999-11-15 |
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